CN115895965A

CN115895965A - 一种戊糖片球菌acx 0452及其复配抑菌剂在抑制食源性致病菌中的应用

Info

Publication number: CN115895965A
Application number: CN202211518937.9A
Authority: CN
Inventors: 索标; 艾志录; 冻梓杰; 黄忠民; 王晓杰; 周伟涛
Original assignee: Henan Agricultural University
Current assignee: Henan Agricultural University
Priority date: 2022-11-30
Filing date: 2022-11-30
Publication date: 2023-04-04

Abstract

本发明属于乳酸菌新应用技术领域，尤其涉及一种戊糖片球菌ACX 0452及其复配抑菌剂在抑制食源性致病菌中的应用。所述戊糖片球菌ACX 0452的分类名为Pediococcus pentosaceus ACX 0452，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 20221551，保藏时间为2022年10月10日，地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号。本发明利用上述菌株制备的复配抑菌剂，对食品中的金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌和鼠伤寒沙门氏菌均有较好的抑制作用，有效延长食品的保质期，同时为食品行业提供一种全新且更加安全可靠的绿色抗菌剂，减少了食品行业对化学合成抑菌剂的依赖。

Description

一种戊糖片球菌ACX 0452及其复配抑菌剂在抑制食源性致病菌中的应用

技术领域

本发明属于乳酸菌新应用技术领域，涉及一种戊糖片球菌，尤其涉及一种戊糖片球菌ACX 0452及其复配抑菌剂在抑制食源性致病菌中的应用。

背景技术

食源性致病菌是导致人体感染食源性疾病、食物中毒的最主要原因。据WHO的统计，全球由食源性致病菌引起的患者中，70％是由不同致病性微生物污染食物和饮水造成。近年来，全球食源性疾病的病发率逐年升高，造成的危害日益加重，已成为威胁食品安全的最大问题。常见的食源性致病菌主要包括蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌、产气荚膜梭菌等。在食品加工和储存过程中，这些食源性致病菌通过诱发食品腐败引起人体食物中毒或感染食源性疾病。因此，食源性致病菌潜在的食品安全隐患不容忽视。

目前，防治食源性疾病的主要方法是使用抗生素及化学制剂，但由于长期滥用现已造成耐药性细菌产生及抗生素残留等一系列问题，对食品安全造成了重大影响。因此，研发绿色无污染且抑菌效果好的新型抑菌剂已成为目前食源性疾病防治行业的研究热点。公开号为CN107751197A 提供的一种以天然植物源化合物肉桂醛、丁香酚和麝香草酚作为原料的植物源抑菌剂，虽然实现了环境友好无污染，但并未说明能达到怎样的抑菌效果；而公开号为CN113558070A 的专利提供的一种绒毛栓菌发酵液乙酸乙酯提取物，仅对金黄色葡萄球菌具有较好的抑菌效果。因此，开发一种不仅绿色无污染而且抑菌范围广、抑菌效果好的抑菌剂，对于进一步保证食品质量、延长食品保质期具有十分重要的意义。

发明内容

针对背景技术所述的技术问题，本发明提出一种戊糖片球菌ACX 0452及其复配抑菌剂在抑制食源性致病菌中的应用，该复配抑菌剂能有效抑制米面制品中多种食源性致病菌的生长，且不含任何化学防腐剂，对人体无毒无害，实际添加量较为灵活。

为了达到上述目的，本发明公开了一种戊糖片球菌ACX 0452，其分类名为 Pediococcus pentosaceus ACX 0452，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 20221551，保藏时间为2022年10月10日，地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号。

本发明还公开了包含所述戊糖片球菌ACX 0452的复配抑菌剂的制备方法，步骤为：将戊糖片球菌ACX 0452按MRS液体培养基体积2%的接种量接种于MRS液体培养基培养，然后离心，收集沉淀，经真空冷冻干燥及磨粉，得到戊糖片球菌ACX 0452冻干粉，再将戊糖片球菌ACX 0452冻干粉与乳清发酵粉以2-3:1-2的质量比混合，即得复配抑菌剂。

优选地，所述戊糖片球菌ACX 0452冻干粉与乳清发酵粉混合的质量比为2:1。

本发明还包括上述方法制备的包含戊糖片球菌ACX 0452的复配抑菌剂，以及该复配抑菌剂在抑制食品中的食源性致病菌中的应用。

优选地，所述食源性致病菌为金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌或产气荚膜梭菌中的一种或多种；所述食品为米面制品；所述复配抑菌剂在米面制品中的添加量不低于米面制品总质量的0.5％，添加方法为在米面制品配料时溶于水或其它液体后与面粉搅拌均匀，或直接加入到面粉中搅拌均匀。

更为优选地，所述食源性致病菌为金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌或鼠伤寒沙门氏菌中的一种或多种。

本发明的有益效果：

1、本发明提供的复配抑菌剂，其原料乳清发酵粉源于食品有益菌的发酵物，原料戊糖片球菌ACX 0452冻干粉由戊糖片球菌ACX 0452真空冷冻干燥制得，组成简单，对食品中关键食源性致病菌金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌和鼠伤寒沙门氏菌的生长均有较好的抑制作用，有效延长食品的保质期，同时为食品行业提供一种全新且更加安全可靠的绿色抗菌剂，有效减少食品行业对化学合成抑菌剂的依赖。

2、当按照2:1的质量比混合戊糖片球菌ACX 0452冻干粉和乳清发酵粉制备复配抑菌剂，并将该复配抑菌剂以0.5%的质量比添加到米面制品中时，对金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的抑制效果最好，此时抑菌率为99.3％，具有非常明显的抑菌效果。

3、相对于现有抑菌技术，本发明的复配抑菌剂不属于食品添加剂，且原料组成简单、对人体无任何危害，因此实际应用时无限量要求，使用灵活，且对金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌和鼠伤寒沙门氏菌三种食源性致病菌均有抑制作用，抑菌性能优良，无毒无害，可有效替代化学合成抑菌剂，具有社会效益和经济效益。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明实施例2中戊糖片球菌ACX 0452的生长情况及产酸能力曲线图。

图2为本发明实施例7中不同添加量的复配抑菌剂分别对金黄色葡萄球菌(a)和蜡样芽孢杆菌(b)的抑制效果。

图3为本发明实施例8中不同配比复配抑菌剂分别对金黄色葡萄球菌(a)和蜡样芽孢杆菌(b)的抑制效果。

图4为本发明对比例中复配抑菌剂、乳清发酵粉和戊糖片球菌ACX 0452冻干粉分别对金黄色葡萄球菌(a)和蜡样芽孢杆菌(b)的抑菌效果。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明的实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

本发明的实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

本发明的实施例中所用的金黄色葡萄球菌为 Staphylococcus aureus ATCC 8095购置于美国典型菌种保藏中心、蜡样芽孢杆菌为 Bacillus cereus CMCC(B) 63303购置于中国医学细菌菌种保藏管理中心、鼠伤寒沙门氏菌为 Salmonellaenterica TyphimuriumATCC 14028购置于美国典型菌种保藏中心。

本发明的实施例中所用的培养基及配方如下：

LB液体培养基：胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g、蒸馏水1L。

MRS液体培养基：蛋白胨10g、牛肉粉5g、葡萄糖20g、酵母粉4g、乙酸钠5g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.2g、柠檬酸三铵2g、硫酸锰0.05g、吐温80 1ml、蒸馏水1L。

MRS固体培养基：蛋白胨10g、牛肉粉5g、葡萄糖20g、酵母粉4g、乙酸钠5g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.2g、柠檬酸三铵2g、硫酸锰0.05g、吐温80 1ml、琼脂粉15g、蒸馏水1L。

Baird-Parker琼脂: 胰蛋白胨10g、牛肉膏5g、酵母膏1g、丙酮酸钠10g、甘氨酸12g、氯化锂5g、琼脂20g、亚碲酸钾卵黄增菌液50mL/L、蒸馏水1L。

MYP甘露醇卵黄多粘菌素琼脂：蛋白胨10g、牛肉膏粉1g、氯化钠10g、甘露醇10g、琼脂13g、酚红0.026g、多粘菌素B 100000 IU、50%卵黄液 50mL、蒸馏水950mL。

XLD木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂：酵母膏3g、L-赖氨酸5g、乳糖7.5g、蔗糖7.5g、木糖3.5g、氯化钠5g、硫代硫酸钠6.8g、柠檬酸铁铵0.8g、脱氧胆酸钠2.5g、酚红0.08g、琼脂13.5g、蒸馏水1L。

TSA胰蛋白胨大豆琼脂：胰蛋白胨15.0g、氯化钠5.0g、植物蛋白胨5.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1L。

上述培养基配制时所用的实验器具及配制好的培养基均经过121°C湿热灭菌15min，XLD木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂配制好后需煮沸1min。

本发明的实施例中所用的乳清发酵粉来源于上海奕农生物科技有限公司。

菌株的活化与处理：

取-70°C甘油管保存的戊糖片球菌ACX 0452按2% (v/v)的接种量接种于MRS液体培养基中，37°C恒温静置培养24h后，备用。

取-70°C甘油管保存的金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌和沙门氏菌按1% (v/v)的接种量接种于LB液体培养基中，37°C恒温摇床培养12h后备用。

实施例1：戊糖片球菌ACX 0452的分离纯化及鉴定

(1)菌株的分离与纯化

准确称取由河南商丘地区获得的老酵头5g，加入45mL无菌生理盐水，制备混悬液；将混悬液进行梯度稀释，再将不同浓度梯度的混悬液分别涂布于含1.5% CaCO₃的MRS固体培养基中，37℃条件下厌氧培养48h；待菌落长出后，挑选出单个菌落于MRS固体培养基上并进行3次划线纯化，挑取碳酸钙溶解圈最大的菌落于MRS肉汤培养基(即MRS液体培养基)中培养18h并保存其菌种。

(2)菌株ACX 0452的鉴定

选取上述在MRS肉汤培养基中培养18h到稳定期的菌液，按照细菌基因组DNA提取试剂盒说明书提取本菌株DNA，使用细菌16S rRNA通用引物(27F-1492R)进行基因扩增。其中，引物27F:5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’，引物1492R:5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’ ，两种引物均由尚亚生物技术有限公司合成。所得的PCR产物送交浙江尚亚生物技术有限公司进行测序，然后将测序结果用BLAST与GenBank数据库中已知菌株进行同源性比对，发现该菌株与数据库中的戊糖片球菌 P. pentosaceus ATCC 33316 的16S rRNA同源性达到99%，表明该菌株为戊糖片球菌，命名为ACX 0452。

实施例2：戊糖片球菌ACX 0452的生长情况及产酸能力

将戊糖片球菌ACX 0452的-70℃甘油贮存液以MRS液体培养基体积2%的接种量接种于MRS液体培养基中，37℃恒温静置培养24h，每隔2h 测其OD600值与pH值，并采用Excel2019进行数据统计、采用Origin 2019软件对数据进行统计分析及绘图，得到戊糖片球菌ACX 0452的生长情况及产酸能力曲线图，如图1所示。由图1可知，随着培养时间的增加，戊糖片球菌ACX 0452的数量逐渐增加并在4h左右开始进入对数生长期，培养15h后达到稳定期，生长减缓。而在戊糖片球菌ACX 0452的生长迟滞期和对数生长期，培养基中的pH值一直在下降，从6.14下降到4.10，并在15h后趋于稳定，证明该菌株有较强且稳定的产酸能力。

实施例3：包含戊糖片球菌ACX 0452的复配抑菌剂的制备

将戊糖片球菌ACX 0452以MRS液体培养基体积2%的接种量接种于MRS液体培养基中静置培养18h，然后将其发酵液分装，在4℃条件下以7500 r/min离心10min，弃其上清液得到菌泥，加入无菌生理盐水混匀后离心清洗一次；将清洗后的菌泥平铺于一次性无菌培养皿中，厚度约为0.5cm，在-40℃下预冻12h；将预冻后的菌泥置于20-30Pa真空干燥机内冷冻干燥12h后取出，最后将其倒在研钵中研磨成粉，得到戊糖片球菌ACX 0452冻干粉，真空密封包装后置于4℃保藏。

将上述戊糖片球菌ACX 0452冻干粉按总质量67%的质量比与乳清发酵粉混合均匀，即得到包含戊糖片球菌ACX 0452的复配抑菌剂。

实施例4：复配抑菌剂原材料抑菌效果的测定

首先，配制金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌和鼠伤寒沙门氏菌所需的相应固体培养基(分别为Baird-Parker琼脂、MYP甘露醇卵黄多粘菌素琼脂和XLD木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂)，高温高压蒸汽灭菌后倾入12-15mL于培养皿上，冷凝，再分别吸取1×10⁶CFU/mL金黄色葡萄球菌菌悬液100μL于Baird-Parker琼脂、吸取1×10⁶CFU/mL蜡样芽孢杆菌菌悬液100μL于 MYP甘露醇卵黄多粘菌素琼脂上、吸取1×10⁶CFU/mL鼠伤寒沙门氏菌菌悬液100μL于XLD木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂上，并涂布均匀，进行三种致病菌的选择性分离培养，备用。其次，取直径6mm的打孔器于上述三种致病菌的分离培养基上打孔，再在孔中分别滴加100μL、50mg/mL的乳清发酵粉溶液、戊糖片球菌ACX 0452冻干粉溶液和山梨酸钾溶液(阳性对照)，并加入100μL无菌水作为空白对照组。每皿打2-3个孔，每组至少重复3次。然后将培养皿置于4℃培养箱中静置3-4h，待孔内溶液被培养基吸收后，将培养皿倒置于生化培养箱中在37℃下恒温培养24h，用游标卡尺十字交叉法量取抑菌圈直径，测量结果如表1所示。

表1 不同抑菌物质的抑菌圈直径

从表1中可知，乳清发酵粉和戊糖片球菌ACX 0452冻干粉对金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌和鼠伤寒沙门氏菌均有明显的抑制作用，虽然乳清发酵粉和戊糖片球菌ACX 0452冻干粉抗菌范围较广，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有作用，但是，乳清发酵粉和戊糖片球菌ACX 0452冻干粉的抑菌效果与化学防腐剂(山梨酸钾)相比仍较弱。

实施例5：原料比例不同的复配抑菌剂的抑菌效果

将戊糖片球菌ACX 0452冻干粉和乳清发酵粉按1:1、1:2、1:3、2:1和3:1的质量比混合制备复配抑菌剂，将不同配比的抑菌剂用无菌水溶解，使复配抑菌剂的终浓度均为50mg/mL，按照实施例4中的打孔法，测试由不同比例的原料复配制得的复配抑菌剂对金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌和鼠伤寒沙门氏菌的抑菌效果，结果如表2所示。

表2 乳清发酵粉和戊糖片球菌ACX 0452冻干粉以不同比例复配后的抑菌效果

由表2可知，以1-3:1的质量比称取戊糖片球菌ACX 0452冻干粉和乳清发酵粉进行复配制备抑菌剂时，50mg/mL的复配抑菌剂的抑菌活性与50mg/mL的山梨酸钾的抑菌活性(见表1)相比，基本相同。随着戊糖片球菌ACX 0452冻干粉所占比例的增大，复配抑菌剂的抑菌效果逐渐增强，但在戊糖片球菌戊糖片球菌ACX 0452与乳清发酵粉的质量比为2:1时抑菌效果最为明显。

与实施例4中的原材料戊糖片球菌ACX 0452冻干粉和乳清发酵粉相比，由戊糖片球菌ACX 0452冻干粉和乳清发酵粉混合制备的复配抑菌剂对金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌和鼠伤寒沙门氏菌的抑制作用明显增强；当戊糖片球菌ACX 0452冻干粉与乳清发酵粉的质量比为2:1时，复配抑菌剂的抑菌效果最好，而且，此时复配抑菌剂对上述三种致病菌的抑菌效果与阳性对照山梨酸钾较为接近，可基本达到化学防腐剂的抑菌效果。综合上述实验结果，当复配抑菌剂中戊糖片球菌ACX 0452冻干粉的质量比为50-75％、乳清发酵粉的质量比为25-50％，即戊糖片球菌ACX 0452冻干粉与乳清发酵粉的质量比为2-3:1-2时，其抑菌效果较好。

实施例6：最小抑菌浓度(MIC)的测定

最小抑菌浓度采用二分法肉汤稀释法。用无菌水分别将戊糖片球菌ACX 0452冻干粉、乳清发酵粉和复配抑菌剂(其中，戊糖片球菌ACX 0452冻干粉与乳清发酵粉的质量比为2:1)溶解为10mg/mL的菌液，作为三种不同的抑菌剂，备用。将金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌和鼠伤寒沙门氏菌分别接种于LB液体培养基，于37℃、180r/min条件下培养至对数期(OD_600nm＝0.6)，然后将上述戊糖片球菌ACX 0452冻干粉、乳清发酵粉和复配抑菌剂的10mg/mL菌液分别用LB液体培养基稀释至不同质量浓度(5000μg/mL、2500μg/mL、1250μg/mL、625μg/mL、313μg/mL、156μg/mL和78μg/mL)，将100μL对数期菌液与100μL不同质量浓度的不同抑菌剂溶液于96孔板内混合均匀后，37℃恒温培养12h，通过酶标仪测定菌液OD_600nm值，以无明显菌体生长(未检测到OD_600nm明显增加)所对应的终质量浓度为最小抑菌浓度(MIC)。并以山梨酸钾作为阳性对照，以不添加抑菌剂的LB培养基为空白对照。

表3 不同抑菌剂的最小抑菌浓度

注：—表示未能检测到最小抑菌浓度。

由表3可知，戊糖片球菌ACX 0452冻干粉与乳清发酵粉的质量比为2:1的复配抑菌剂对于金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的最小抑菌浓度均与化学防腐剂山梨酸钾相当，对于鼠伤寒沙门氏菌的最小抑菌浓度比山梨酸钾更低。

实施例7：不同添加量的复配抑菌剂对金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的抑制

本实施例以汤圆制作中不添加馅料的糯米面团为应用对象，并按戊糖片球菌ACX0452冻干粉与乳清发酵粉的质量比为1:1配制复配抑菌剂，通过糯米面团的储藏期实验来验证该复配抑菌剂的抑菌效果。具体步骤如下：

以分别含有质量分数为0.25%、0.5%和1%的复配抑菌剂的糯米面团作为处理组，以不添加复配抑菌剂的糯米面团为对照组。制作糯米面团的原材料均预先经紫外线灭菌20min处理，以保证无菌。

分别将上述不同质量分数的复配抑菌剂加入适量无菌水中混匀，然后和紫外杀菌处理过的糯米粉揉制均匀，制成约5g的糯米面团，分装在无菌均质袋中。随后，将金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的稳定期菌悬液分别用生理盐水稀释至10⁴CFU/mL，用移液器各吸取100μL均匀涂抹至5g糯米面团的表面并密封无菌袋，整个操作均在净化工作台进行。然后，将接种后的糯米面团于25℃恒温培养箱中贮藏，每12h取出一个样品，将45mL、0.85%生理盐水加入均质袋中，用均质机均匀拍打2min，静置10-15min后取上清液进行不同浓度梯度稀释，吸取100μL在Baird-Parker琼脂基础和MYP甘露醇卵黄多粘菌素琼脂基础上进行涂布至干燥，至少三个平行，之后放置于37℃恒温培养箱中培养24h，然后测定其致病菌数量并记录。

结果如图2-a所示，在25℃恒温储藏时，添加了质量分数为0.5%的复配抑菌剂的处理组中的金黄色葡萄球菌，较对照组中黄色葡萄球菌的浓度降低了约2₁₀CFU/g；如图2-b所示，在25℃恒温储藏时，添加了质量分数为0.5%的复配抑菌剂的处理组中的蜡样芽孢杆菌，较对照组中蜡样芽孢杆菌的浓度降低了约1.8₁₀CFU/g。综合图2-a与图2-b可知，添加了0.5%的质量分数的复配抑菌剂的处理组，其金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的菌落数较对照组均降低了2个数量级左右，抑菌率达到99%左右，抑菌效果较明显，且随着添加量的增大，复配抑菌剂的抑菌效果并无明显增强。

实施例8：原料比例不同的复配抑菌剂对金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的抑制

以汤圆制作中不添加馅料的糯米面团为应用对象，通过糯米面团的储藏期实验来验证复配抑菌剂的抑菌效果。具体步骤如下：

以添加了质量分数为0.5%的复配抑菌剂的糯米面团作为处理组，各处理组添加的复配抑菌剂中乳清发酵粉与戊糖片球菌ACX 0452冻干粉的质量比分别为3:1、2:1、1:1、1:2和1:3；以不添加抑菌剂的糯米面团作为对照组。细菌接种及计数的步骤均同实施例7。

所得结果如图3所示，25℃恒温储藏72h后，处理组中，当复配抑菌剂中乳清发酵粉与戊糖片球菌ACX 0452冻干粉的质量比为1:2时，对金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的抑制效果均最明显，且较对照组中黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的菌落数降低了3个数量级左右，经重复验证试验，测得该处理组中复配抑菌剂的抑菌率可达到99.3%。

综合图2与图3结论得知，复配抑菌剂的添加量为0.5%(质量分数)且复配抑菌剂中乳清发酵粉与戊糖片球菌ACX 0452冻干粉的质量比为1:2时，相较于对照组，黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的菌落数均降低了至少2个log值，可见该原料配比及添加量的复配抑菌剂，对黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的生长均能产生明显的抑制作用。

对比例：本发明复配抑菌剂、乳清发酵粉和戊糖片球菌ACX 0452冻干粉的抑菌效果对比

以汤圆制作中不添加馅料的糯米面团为应用对象，通过糯米面团的储藏期实验来验证本发明复配抑菌剂、乳清发酵粉和戊糖片球菌ACX 0452冻干粉的抑菌效果。具体步骤如下：

以添加了质量分数为0.5%的复配抑菌剂(其中，乳清发酵粉与戊糖片球菌ACX0452冻干粉的质量比为1:2)、质量分数为0.5%的戊糖片球菌冻干粉和质量分数为0.5%的乳清发酵粉的糯米面团作为处理组；以不添加复配抑菌剂、戊糖片球菌冻干粉及乳清发酵粉的糯米面团作为对照组。细菌接种及计数步骤均同实施例7。

所得结果如图4所示，添加了质量分数为0.5%的复配抑菌剂的处理组在25℃下能显著抑制金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的生长，且相较于添加同等质量的戊糖片球菌ACX 0452冻干粉和乳清发酵粉，抑菌效果更加显著。在过夜培养(12h)后，添加同等质量的复配抑菌剂处理组中，两种致病菌的浓度均为其他两各处理组的1/3-1/4，表明在此温度下，该复配抑菌剂的抑菌效果是两种单独的原料组分的3-4倍。

综合分析实施例8和本对比例的结果可知，当复配抑菌剂的添加量为0.5%质量分数且其中乳清发酵粉与戊糖片球菌ACX 0452冻干粉的质量比为1:2时，该复配抑菌剂对金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的抑菌率为99.3%，明显高于其原料单独作抑菌剂使用时的抑菌率，即乳清发酵粉与戊糖片球菌ACX 0452冻干粉的复配对抑制金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌这两种食源性致病菌具有增效作用。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1. 一种戊糖片球菌ACX 0452，其特征在于：所述戊糖片球菌ACX 0452的分类名为Pediococcus pentosaceus ACX 0452，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 20221551，保藏时间为2022年10月10日，地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号。

2. 包含权利要求1所述戊糖片球菌ACX 0452的复配抑菌剂的制备方法，其特征在于，步骤为：将所述戊糖片球菌ACX 0452接种于MRS液体培养基培养，然后离心，收集沉淀，经真空冷冻干燥及磨粉，得到戊糖片球菌ACX 0452冻干粉，再将戊糖片球菌ACX 0452冻干粉与乳清发酵粉混合，即得复配抑菌剂。

3. 根据权利要求2所述的包含戊糖片球菌ACX 0452的复配抑菌剂的制备方法，其特征在于：所述戊糖片球菌ACX 0452的接种量为MRS液体培养基体积的2%；所述戊糖片球菌ACX0452冻干粉与乳清发酵粉混合的质量比为2-3:1-2。

4. 根据权利要求3所述的包含戊糖片球菌ACX 0452的复配抑菌剂的制备方法，其特征在于：所述戊糖片球菌ACX 0452冻干粉与乳清发酵粉混合的质量比为2:1。

5. 权利要求2-4任一项所述的方法制备的包含戊糖片球菌ACX 0452的复配抑菌剂。

6.权利要求5所述的复配抑菌剂在抑制食品中的食源性致病菌中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述食源性致病菌为金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌或产气荚膜梭菌中的一种或多种。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述食源性致病菌为金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌或鼠伤寒沙门氏菌中的一种或多种。

9.根据权利要求6-8任一项所述的应用，其特征在于：所述食品为米面制品。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述复配抑菌剂在米面制品中的添加量不低于米面制品总质量的0.5％。