CN115813928B - 一种精氨酸甲基转移酶prmt1抑制剂及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种精氨酸甲基转移酶PRMT1抑制剂及其应用。本发明对PRMT1的抑制具有有效性和特异性，对肠腺癌、食管癌、肺腺癌、前列腺癌、肝癌、卵巢癌等多种来源肿瘤细胞具有广泛且良好的体内和体外的抗增殖能力，且在体内对正常细胞的杀伤较低，具备良好的体内安全性。

Description

一种精氨酸甲基转移酶PRMT1抑制剂及其应用

技术领域

本发明属于抗肿瘤增殖技术领域，具体涉及一种精氨酸甲基转移酶PRMT1抑制剂及其应用。

背景技术

PRMT1是蛋白质中催化aDMA的主要酶，其主要偏向于甲基化RGG/RG基序上的精氨酸。PRMT1主要是通过调控不同的甲基化底物参与不同的生物学进程，从而实现多种多样的功能。

在乳腺癌细胞系和乳腺肿瘤样本中，与乳腺癌密切相关的蛋白BRCA1(Breastcancer type 1susceptibility protein)被鉴定并且证明能被PRMT1甲基化(PLoS One，2010.5(6)：p.e11379.)。BRCA1作为肿瘤抑制蛋白，参与细胞周期调控、DNA损伤修复和染色质重塑等多种生物学进程。PRMT1介导的BRCA1蛋白上的精氨酸甲基化可改变BRCA1结合到特定的基因启动子元件上，从而导致细胞基因组不稳定。此外，PRMT1还可甲基化DNA损伤修复通路中的关键蛋白MRE11(Meiotic recombination 11)和53BP1(TP53-binding protein1)。PRMT1介导的MRE11的甲基化调节了其在双链DNA上的外切酶活性，该活性是DNA损伤修复的检查点所必需的(Genes Dev，2005.19(6)：p.671-6.)。同样，参与DNA损伤修复途径的53BP1也能被PRMT1甲基化，它的甲基化被证明是53BP1行使正常功能所必要的，将53BP1蛋白上受PRMT1甲基化的精氨酸突变后，降低了其与单链或双链DNA的结合，阻止了DNA修复机制的招募。同样，通过用甲基转移酶抑制剂处理细胞来抑制53BP1甲基化，破坏53BP1对受损DNA的定位，能形成较少的γH2AX焦点(Cell Cycle，2005.4(12)：p.1834-41.)。综上所诉，PRMT1活性的失调可能导致DNA损伤的积累，而DNA损伤的积累是肿瘤发生的一个公认的诱因，因此也从侧面证实PRMT1对于癌症的发生发展至关重要。

除了DNA损伤修复的功能，PRMT1也参与到细胞信号转导的过程。例如，在雌激素信号转导中，PRMT1介导的雌激素受体ERα(Estrogen receptor)第260位精氨酸残基的甲基化促进ERα/Src/PI3K复合物的形成，这是进一步激活Akt通路的关键步骤(Mol Cell，2008.31(2)：p.212-21.)(Steroids，2010.75(8-9)：p.560-4.)。值得注意的是，该通路在侵袭性乳腺肿瘤中被异常激活，且该复合物中成员的高水平表达是预后不良的显著标记物，与无病生存期降低相关，这一点也证实了ERα高水平的甲基化可触发异常细胞增殖(EMBO MolMed，2012.4(11)：p.1200-13.)。此外，PRMT1还被证明通过其他机制调节Akt(RAC-alphaserine/threonine-protein kinase)介导的信号传导，诱导细胞凋亡。其中一个例子是通过甲基化FOXO1(Forkhead box O1)上的第248和252位精氨酸残基，该甲基化修饰抑制Akt识别FOXO1，从而阻止其在相邻的S253残基上的被Akt修饰的磷酸化(Mol Cell，2008.32(2)：p.221-31.)。最终导致FOXO1保留在细胞核中，免受蛋白酶体降解，从而增加其对靶基因的转录活性。同样，PRMT1结合并甲基化BCL-2蛋白上细胞死亡拮抗剂(BAD)结构域的第94和96位精氨酸残基，抑制Akt在S99残基上的磷酸化，进而阻止14-3-3蛋白的结合，导致细胞凋亡(ProcNatlAcad SciUS A，2011.108(15)：p.6085-90.)。PRMT1还通过甲基化轴蛋白的R378残基来调控Wnt信号通路，轴蛋白是Wnt通路的负调控因子(Oncogene，2011.30(20)：p.2379-89.)。轴蛋白的甲基化增强了其与糖原合成酶激酶3β的相互作用，导致其降解减少。由于Wnt通路的异常调控是许多不同癌症的驱动因素，从而说明PRMT1的异常表达与肿瘤发生有关。

PRMT1在乳腺癌(Tumour Biol 32(3)：575-582.)、结肠癌(Br J Cancer 99(12)：2094-2099.)、肺癌(Oncotarget 8(46)：80278-80285.)、前列腺癌(Oncol Rep 38(2)：1115-1123.)中高表达，并且通过甲基化作用影响急性淋巴细胞性白血病(J HematolOncol 5：42.)、肺癌(J Biol Chem 290(21)：13479-13489.)、乳腺癌(Breast Cancer 25(1)：74-80.)、结肠癌(J Clin Invest 125(12)：4529-4543.)细胞的生长、增殖和侵袭能力。

以上可知，PRMT1具备广泛的促癌功能与差异表达的特点，且其因作为酶蛋白而具备活性方便干预的特点，使其成为优异的潜在抗肿瘤药物靶标之一。

发明内容

本发明目的在于提供一种精氨酸甲基转移酶PRMT1抑制剂。

本发明的另一目的在于提供上述精氨酸甲基转移酶PRMT1抑制剂的应用。

本发明的技术方案如下：

一种精氨酸甲基转移酶PRMT1抑制剂，其结构式为

在本发明的一个优选实施方案中，其结构式为

上述精氨酸甲基转移酶PRMT1抑制剂在制备抗肿瘤细胞增殖药物中的应用。

在本发明的一个优选实施方案中，所述肿瘤细胞来自于肠腺癌、食管癌、肺腺癌、前列腺癌、肝癌和卵巢癌。

一种抗肿瘤细胞增殖组合物，其有效成分包括上述精氨酸甲基转移酶PRMT1抑制剂。

在本发明的一个优选实施方案中，其有效成分为上述精氨酸甲基转移酶PRMT1抑制剂。

在本发明的一个优选实施方案中，所述肿瘤细胞来自于肠腺癌、食管癌、肺腺癌、前列腺癌、肝癌和卵巢癌。

本发明的有益效果是：

1、本发明对PRMT1的抑制具有有效性和特异性。

2、本发明对肠腺癌、食管癌、肺腺癌、前列腺癌、肝癌、卵巢癌等多种来源肿瘤细胞具有广泛且良好的体内和体外的抗增殖能力，且在体内对正常细胞的杀伤较低，具备良好的体内安全性。

附图说明

图1为本发明实施例3中的PRMT1体外甲基转移酶活性结果图。

图2为本发明实施例3中的ZBD-138对PRMT1-9的甲基转移酶活性的抑制效果图。

图3为本发明实施例4中的ZBD-138对PRMT1的体外抑制的IC₅₀测定结果图。

图4为本发明实施例4中的ZBD-138与PRMT1的体外结合能力测定结果图。

图5为本发明实施例5中的ZBD-138的EC₅₀的测定结果图。

图6为本发明实施例6中的MCF7细胞的裸鼠成瘤实验结果图。

图7为本发明实施例6中的MDA-MB-231细胞的裸鼠成瘤实验结果图。

图8为本发明实施例7中各四氢吲哚并[2，1-h]蝶啶-6-酮类化合物的PRMT1体外甲基转移酶活性结果图。

图9为本发明实施例8中各四氢吲哚并[2，1-h]蝶啶-6-酮类化合物的细胞毒性实验结果图。

具体实施方式

以下通过具体实施方式结合附图对本发明的技术方案进行进一步的说明和描述。

本发明涉及的精氨酸甲基转移酶PRMT1抑制剂为四氢吲哚并[2，1-h]蝶啶-6-酮类化合物，其结构式如下表所示：

上表中各四氢吲哚并[2，1-h]蝶啶-6-酮类化合物的合成方法WO 2019126696 A1

实施例1 ZBD138的合成

本发明的精氨酸甲基转移酶PRMT1抑制剂的合成路线均参考WO 2019126696 A1公开的技术方案进行，以I-4(ZBD138))为例，具体如下：

主要原料如下表所示：

具体步骤如下：

(1)化合物2的合成：将化合物1(1142.0mg，7.00mmol)分散于甲醇中(18.0mL)，然后反应体系置于冰水浴中，在搅拌下逐滴滴加浓硫酸(0.6mL)。滴加结束后，将反应液转移至65℃油浴搅拌过夜。通过液相-质谱联用仪器(LC-MS)监测反应，反应结束后，乙酸乙酯稀释、饱和碳酸氢钠溶液中和，水相进一步用乙酸乙酯萃取，合并有机相经无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩有机相，可得化合物2粗品(1159.0mg)，无需纯化用于下一步反应。MS(ESI)m/z：178.1[M]⁺。

(2)化合物4的合成：将化合物3(1203.7mg，6.21mmol)分散于12.0mL异丙醇中，然后反应体系置于冰水浴中，在搅拌下逐滴滴加化合物2(1000.0mg，5.64mmol)和DIEA(1.679mL，10.16mmol)的异丙醇(15.0mL)混合溶液。反应体系自然升温，在室温下搅拌过夜，通过LC-MS监测反应。反应结束后，加乙酸乙酯稀释、饱和碳酸氢钠溶液洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩有机相，由硅胶柱层析进行纯化，可得化合物4(1423.0mg)。MS(ESI)m/z：335.1[M]⁺。

(3)化合物5的合成：将化合物4(1150.0mg，3.44mmol)、铁粉(1154.0mg，20.61mmol)分散于冰醋酸(34.0mL)中，然后反应体系置于50℃油浴搅拌16h，通过LC-MS监测反应，反应结束后，用磁力转子吸附剩余铁粉，浓缩反应体系至固体，加CH₃OH 30.0mL、H₂O180.0mL打浆30min，抽滤、水洗固体，干燥后可得化合物5粗品(1012.0mg)，无需纯化用于下一步反应。MS(ESI)m/z：273.1[M]⁺。

(4)ZBD138的合成：将化合物5粗品(290.0mg，1.06mmol)、化合物6(163.4mg，0.85mmol)、催化剂Pd2(dba)₃(58.6mg，0.06mmol)、膦配体X-Phos(45.8mg，0.10mmol)及K₂CO₃(366.8mg，2.66mmol)分散于1，4-dioxane中10.6mL，N₂保护反应体系，于110℃油浴中反应4h。通过LC-MS监测反应，反应结束后，加乙酸乙酯稀释，依此用饱和食盐水、水进行洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩有机相，由硅胶柱层析进行纯化可得化合物ZBD138(196.8mg，0.46mmol)。¹H-NMR(600MHz，DMSO-d₆)：δ10.51(s，1H)，8.94(s，1H)，8.31(d，J＝8.0Hz，1H)，7.72(s，1H)，7.50(d，J＝8.6Hz，2H)，7.29(d，J＝7.3Hz，1H)，7.20(t，J＝7.7Hz，1H)，7.00(t，J＝7.4Hz，1H)，6.89(d，J＝9.0Hz，2H)，4.96(t，J＝10.7Hz，1H)，4.66(d，J＝4.2Hz，1H)，3.59(dp，J＝8.8，4.3Hz，1H)，3.44(dd，J＝11.3，5.6Hz，2H)，3.31(d，J＝11.9Hz，2H)，2.80-2.70(m，2H)，1.83(dd，J＝12.5，4.3Hz，2H)，1.50(ddt，J＝13.1，9.4，5.0Hz，2H)；¹³C-NMR(150MHz，DMSO-d₆)：δ164.46，155.76，148.08，146.11，142.65，140.09，132.79，129.65，127.38，124.93，122.61，120.40，116.35，115.07，113.79，66.11，60.24，47.53，34.06，30.66；MS(ESI)m/z：429.2[M]⁺。

实施例2PRMT1的原核表达载体构建与纯化

(1)在UCSC Genome Browser网站，根据GRCh38/hg38基因组查找人源基因PRMT1，根据NCBI的参考序列NM_001536的mRNA转录本，确定其编码PRMT1蛋白(1-371氨基酸)全长序列，其编码蛋白的DNA序列如下：

(2)将以上编码人源PRMT1蛋白(1-371氨基酸残基)的DNA序列利用PCR从人源cDNA文库中特异性地扩增出来。引物的5’和3’端分别带有BamH1和Xhol酶切位点，具体的PCR引物序列如下：

F：5’-cgggatccatggcggcagccgaggccgc-3’(SEQ ID NO.02)

R：5’-ccgctcgagtcagcgcatccggtagtcgg-3’(SEQ ID NO.03)

具体的PCR扩增的体系和方法如下：

PCR体系：

试剂	体积
		5×PrimeSTAR Buffer(Mg2+plus)(Takara)	5μL
dNTP Mixture(Takara)	2μL
		primer F(10mM)	0.5μL
primer R(10mM)	0.5μL
		cDNA	200ng
PrimeSTAR HS DNA Polymerase(2.5U/μL)(Takara)	0.5μL

补加水至总体积为25μL。

PCR的程序如下：

1)98℃ 5min，2)98℃ 10s，3)56℃ 30s，4)72℃ 1min，2)-4)循环30次，5)72℃10min，6)4℃保存。

PCR程序结束后，PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳分离，在紫外下找到PCR产物片段大小约为1.2kb的片段，切胶，回收。最后回收的DNA片段用20μL双蒸水洗脱，用于后续的分子克隆的连接反应。

(3)使用T4连接酶将步骤(2)获得的PCR产物连接进入双酶切好的pET-28A载体，获得可以在大肠杆菌中大量表达His标签的PRMT1全长蛋白的质粒pET-28A-PRMT1。具体的实验方法如下：

A、酶切反应：

酶切反应7h充分后，跑DNA胶，在紫外下找到酶切好的载体片段，切胶，回收，最后回收的DNA片段用20μL超纯水洗脱，做为载体，用于后续的连接反应。

B、连接反应：

试剂	加入量
		10×Buffer(TAKARA)	1μL
PCR产物DNA	4μL
		酶切的载体DNA	4μL

先测量插入片段和酶切过的线性化载体的浓度，按照摩尔比5∶1的比例，加入反应体系中，再依次加入10×T4 DNA连接酶缓冲液和T4 DNA连接酶。在25℃连接4h以上。连接完成后，将连接产物加入适量感受态中，转化。

(5)将原核表达质粒pET-28A-PRMT1转化进入大肠杆菌E.coli.的BL21Rosetta^TM菌株(Novagen)感受态细胞中。His标签的PRMT1蛋白纯化根据HisPur^TM Ni-NTA Resin(Thermo)产品说明书。具体的细菌转化与纯化方法如下：

1)转化

①0.5μL质粒pET-28A-PRMT1转入50μL Rosetta中，冰浴30min。

②42℃水浴热激60s。

③迅速冰浴5min。

④在预热的带有卡那霉素抗性的LB固体培养基平板上划线。

⑤倒置于37℃恒温箱培养过夜。

2)诱导

①小量培养。向50mL离心管中加入20mL LB液体培养基再加入终浓度为1mM的卡那霉素，挑取一个单克隆转接至50mL离心管，于摇床中以220rpm，37℃震荡培养8h。

②扩大培养。向2L的锥形瓶中加入1L LB液体培养基再加入终浓度为1mM的卡那霉素，将20mL菌液转接至1L LB液体培养基中，继续于摇床中以220rpm，37℃震荡培养3-4h至0D值为0.7-0.8，然后加入终浓度为1mM的IPTG，于摇床中以100rpm，25℃震荡培养过夜(12h)。

3)纯化

将含有目的蛋白片段的pET-28A重组质粒转化入大肠杆菌BL21感受态细胞中，具体步骤见上文。转化产物涂布于卡那霉素抗性平板，倒置培养过夜。次日，挑取单个克隆，培养于5mL含有卡那霉素抗性的LB培养基中，放于37℃恒温摇床以250rpm的转速培养6-10h。6-10h后，将5mL菌液加入200mL含有卡那霉素抗性的LB培养基中，放于37℃恒温摇床以250rpm的转速培养至OD600达到0.8-1.0范围内。加入200μL 1M IPTG，放于25℃低温摇床以150rpm的转速培养过夜。

次日，8000rpm低温离心10min，收集细菌沉淀。沉淀中加入10mL裂解液(50mMNaH₂PO₄，300mM NaCl，10mM imidazole，pH 8.0)，同时加入EDTA-free的蛋白酶抑制剂。涡旋混匀后，冰上静置15min。加入10mg溶菌酶至终浓度为1mg/mL，充分混匀，冰上静置30min，期间隔几分钟颠倒混匀一次。裂解期间，准备要用的Ni-NTA beads。取100μLNi-NTA beads悬液，离心去除储存液。再用1mL裂解液润洗2-3次，放于冰上待用。菌液裂解完成后，超声进一步破碎菌体。超声时，用大探头，50％功率，破碎10s，停10s为一个循环，超20个循环。超声结束后，将细菌裂解液转移至高速离心管中，用12000rpm的转速离心60-90min，弃沉淀，上清倒入干净的离心管中，加入之前准备好的Ni-NTA beads。4℃旋转孵育2-4h，使目的蛋白充分结合Ni-NTA beads。孵育结束后，将液体倒入分离管中，用100-200mL wash buffer(50mMNaH₂PO₄，300mM NaCl，250mM imidazole，pH 8.0)润洗beads，以充分洗去杂蛋白。4mL洗脱液分四次加入柱中，洗脱蛋白，收集在蛋白低吸附的管中，即His-PRMT1蛋白。

实施例3建立体外定量测定PRMT1体外甲基转移酶活性的方法

开展体外甲基转移酶的酶促反应：将PRMT蛋白与已知的组蛋白底物短肽混合，以SAM为甲基化供体，在37℃恒温反应1-2h。当甲基转移酶的酶促反应结束后，加入MTase-GloTM Reagent将SAH转换为ADP，再加入MTase-GloTM Detection Solution将ADP转化为ATP，再通过一对萤光素酶反应检测ATP。发光信号可通过具有检测发光功能的读板仪检测，然后使用SAH标准曲线与SAH浓度进行关联，发光信号的半衰期大于4h。更长的半衰期使检测时仪器无需配置进样器，并且可以进行批量检测，结果如图1所示。图中横坐标代表PRMT1的浓度(ng/μL)，纵坐标为荧光检测强度。

本实施例从原核细胞HEK293中纯化出带有FLAG标签的PRMT1-9蛋白，使用H4(1-18)的短肽(SGRGKGGKGLGKGGAKRH，SEQ ID NO.04)作为底物测定了10μM和100μM的ZBD-138对PRMT1-9甲基转移酶活性的抑制效果，结果图2所示，图中横坐标代表不同PRMT的实验组，纵坐标为抑制率((对照组荧光检测强度-实验组荧光检测强度)/对照组荧光检测强度)×100％)。

实施例4测定ZBD138对PRMT1酶的IC50值

本实施例将ZBD138溶解初始浓度为10mM，-20℃保存。将1μL的10mM ZBD138以2倍的梯度用超纯水进行稀释，20个梯度(从100μM到10pM)，每个反应加1μL在PCR管中，以加入1μL超纯水的作为对照样品。随后，加入2μL实施例2制得的His-PRMT1蛋白，移液枪吹吸混合。常温静置15min，使小分子化合物与目的蛋白充分地结合。随后，加入1μL的H4(1-18)短肽，4μL的5×甲基化酶缓冲液母液的预混液，2μL的10×MTase-Glo^TM Reagent和甲基供体SAM混合，在37℃培养箱孵育反应1h。反应产物中加入20μL的2×MTase-Glo^TM DetectionSolution，在37℃培养箱孵育反应0.5h。最终用荧光检测甲基化效率。不同浓度化合物处理后测定的PRMT1活性数据导入Prism7软件，根据拟合的剂量反应曲线，确定抑制PRMT1活性一半时所需的化合物浓度，即IC₅₀值，结果图如3所示，ZBD-138化合物对PRMT1甲基转移酶的IC₅₀为270nM，表明其对PRMT1的甲基转移酶活性的有效抑制作用。接下来，本实施例利用BIACORE和体外热力学迁移实验证明ZBD-138与PRMT1的结合能力，结果如图4所示。BIACORE实验中，本实施例将分离纯化好的His-PRMT1蛋白与芯片偶联，实验时将不同浓度梯度的抑制剂作为流动相，流过偶联有His-PRMT1蛋白的芯片，抑制剂与PRMT1蛋白结合，则可以改变入射光的角度，最终确定其与蛋白的结合常数。体外热力学迁移实验则是将ZBD138与PRMT1蛋白反应后，经过温度梯度处理，若ZBD138与PRMT1蛋白结合，则增强PRMT1蛋白的热稳定性，最终检测未发生变性的PRMT1蛋白含量，确定ZBD138与PRMT1蛋白结合。

实施例5测定ZBD138对肿瘤细胞增殖的EC₅₀值

本实施例将细胞接种于96孔板，于5％二氧化碳培养箱培养过夜后，加药梯度稀释后处理细胞7d时间。使用CellTiter 96 Aqueous细胞增殖测定试剂盒(MTS，Promega)测定细胞活力。根据说明书，具体说，本实施例将20μL的CellTiter 96 Aqueous试剂加入到100μL的培养基中，在5％CO₂气氛下于37℃孵育1h。在Spark分光光度计(Tecan)上在490nm的波长处测定细胞活力。不同浓度化合物处理后测定的细胞活性数据导入Prism7软件，根据拟合的剂量反应曲线，确定抑制癌细胞活性一半时所需的化合物浓度，即EC₅₀值。

本实施例评估了ZBD-138对17种肿瘤细胞系的杀伤能力。结果如图5所示，ZBD-138的半数最大有效浓度(EC₅₀)为0.009至25.41μM。同时，相较于癌细胞，ZBD-138对正常乳腺细胞系MCF10A的细胞毒性较小，表明ZBD-138对肿瘤细胞具有有效性与选择性杀伤的能力。

实施例6裸鼠移植瘤模型

裸鼠移植瘤模型实验经过厦门大学实验动物管理伦理委员会审查和批准，在厦门大学实验动物中心开展。其中，实验所用的雌性的BALB/cnu/nu小鼠为4-6周龄，采购自北京维通利华实验动物技术有限公司，饲养于无病原菌条件的实验室。具体实验如下：将500万左右的MCF7或者MDA-MB-231肿瘤细胞经胰酶消化成单细胞悬液，悬浮在PBS中，注射于小鼠背部单侧皮下位置。当肿瘤大小达到约100mm³时，将小鼠随机分为两组，分别注射溶剂对照和ZBD-138。ZBD-138按指定剂量每天腹膜内注射给药。随后，每天用游标卡尺测量肿瘤长和宽，计算肿瘤体积(为长度×宽度²×0.52)。同时，每天测量小鼠体重。小鼠体重与主要脏器，拍照并称重以评估ZBD-138的体内有效性和安全性，结果如图6(MCF7移植瘤实验)和图7(MDA-MB-231移植瘤实验)所示。

实施例7

本实施例对四氢吲哚并[2，1-h]蝶啶-6-酮类化合物I-1至I-21均进行了PRMT1体外甲基转移酶活性测试和细胞毒性测试，结果如图8和图9所示。图8中的横坐标代表不同化合物，纵坐标为荧光检测强度。NC为不加酶的反应体系，其余组均加有PRMT1蛋白。由图8可知，DMSO组相较于NC组，荧光强度显著增加，说明PRMT1蛋白具有较好的酶活性。若加药组的相较于DMSO组荧光强度降低，则说明改化合物具有抑制效果。图9为细胞增殖实验，检测抑制剂对于细胞生长速率的影响。图9中横坐标代表不同抑制剂的实验组，纵坐标为抑制率((对照组荧光检测强度-实验组荧光检测强度)/对照组荧光检测强度)×100％)。MS023为已知的PRMT1的抑制剂。

以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。

Claims (3)

1.一种精氨酸甲基转移酶PRMT1抑制剂，其特征在于：其结构式为

2.权利要求1所述的精氨酸甲基转移酶PRMT1抑制剂在制备抗肿瘤细胞增殖药物中的应用，其特征在于：所述肿瘤细胞来自于乳腺癌。

3.一种抗肿瘤细胞增殖组合物，其特征在于：其有效成分为权利要求1所述的精氨酸甲基转移酶PRMT1抑制剂，该肿瘤细胞来自于乳腺癌。