CN115792003B - 一种测定甲基胍和胍基琥珀酸含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种测定甲基胍和胍基琥珀酸含量的方法，步骤一：配制系统适用性溶液；步骤二：配制甲基胍对照品溶液：精密称取甲基胍对照品适量，用流动相稀释制成每1ml中含甲基胍20μg的溶液；步骤三：配制2‑胍基琥珀酸对照品溶液：精密称取2‑胍基琥珀酸对照品适量，用流动相稀释制成每1ml中含2‑胍基琥珀酸8μg的溶液；本发明采用C18固相萃取柱对腹膜透析废液进行前处理，有效去除腹膜透析废液中的其他杂质，从而准确测定腹膜透析废液中的甲基胍和2‑胍基琥珀酸；通过高效液相色谱法对腹膜透析废液中的甲基胍和2‑胍基琥珀酸进行检测，从而有效监测腹膜透析病人的具体身体状况，为腹膜透析病人的后期治疗提供指导意义。
Description
技术领域
本发明属于腹膜透析技术领域，具体涉及一种测定甲基胍和胍基琥珀酸含量的方法。
背景技术
腹膜透析就是利用腹透液和患者自身的腹膜进行血液清洁，清除体内代谢产物、毒性物质及纠正水、电解质平衡紊乱；在人体腹膜腔中植入一根通向体外腹部的管路，通过管路将新鲜的腹透液注入到腹膜腔中，腹透液滞留在腹膜腔内，患者血液内的毒素和液体通过腹膜过滤到腹透液中；含有毒素的腹透液在留腹几小时后通过管路排出人体。
在腹膜透析病人体液中，作为蛋白质代谢产物的各种胍类化合物含量会增多，其中重点关注的是甲基胍，其次是胍基琥珀酸。因此，通过测定腹膜透析废液中甲基胍和胍基琥珀酸的含量，可以更加清楚掌握腹膜透析病人的身体状况，对腹膜透析病人的后期治疗有一定指导意义。为此本发明提出了一种能够简便、快捷、准确检测甲基胍和胍基琥珀酸的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种测定甲基胍和胍基琥珀酸含量的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种测定甲基胍和胍基琥珀酸含量的方法，具体步骤如下：步骤一：配制系统适用性溶液：分别精密称取甲基胍对照品和2-胍基琥珀酸对照品各适量，用流动相稀释制成每1ml中含甲基胍5μg和2-胍基琥珀酸200μg的溶液；
步骤二：配制甲基胍对照品溶液：精密称取甲基胍对照品适量，用流动相稀释制成每1ml中含甲基胍20μg的溶液；
步骤三：配制2-胍基琥珀酸对照品溶液：精密称取2-胍基琥珀酸对照品适量，用流动相稀释制成每1ml中含2-胍基琥珀酸8μg的溶液；
步骤四：配制供试品溶液：精密量取腹膜透析废液1ml，采用经水、50%甲醇、甲醇活化后的C18固相萃取柱，用流动相进行洗脱至10ml，混匀，用0.45μm的针头过滤器进行过滤，即得；
步骤五：高效液相色谱法测定：精密量取上述溶液各20μl，分别注入液相色谱仪中，记录色谱图。
优选的，所述步骤五中色谱条件为：色谱柱：ChromCore HILIC-Amide柱：4.6mm×250mm，5μm；柱温：25℃；流动相：0.1mol/L乙酸钠溶液-乙腈，体积比为10:90；流速：0.5ml/min；检测波长：235nm；进样量：20μl。
优选的，所述乙酸钠溶液需要使用冰醋酸调pH值至5.2。
优选的，所述步骤四中，C18固相萃取柱在使用前需要进行活化处理。
优选的，所述步骤一、步骤二、步骤三以及步骤四制备好的溶液需要分别室温环境下密封保存。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明可以将腹膜透析患者体内中主要胍类化合物（甲基胍和2-胍基琥珀酸）很好的分离；采用C18固相萃取柱对腹膜透析废液进行前处理，可以有效的去处腹膜透析废液中的其他杂质，从而准确测定腹膜透析废液中的甲基胍和2-胍基琥珀酸；通过高效液相色谱法对腹膜透析废液中的甲基胍和2-胍基琥珀酸进行检测，从而有效监测腹膜透析病人的具体身体状况，为腹膜透析病人的后期治疗提供指导意义。
附图说明
图1为甲基胍的全波长吸收图。
图2为2-胍基琥珀酸的全波长吸收图。
图3为流动相色谱图。
图4为甲基胍对照品溶液定位色谱图。
图5为2-胍基琥珀酸对照品溶液定位色谱图。
图6为系统适用性溶液色谱图。
图7为腹膜透析废液色谱图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1至图7，本发明提供一种技术方案：一种测定甲基胍和胍基琥珀酸含量的方法，具体步骤如下：步骤一：配制系统适用性溶液：分别精密称取甲基胍对照品和2-胍基琥珀酸对照品各适量，用流动相稀释制成每1ml中含甲基胍5μg和2-胍基琥珀酸200μg的溶液；
步骤二：配制甲基胍对照品溶液：精密称取甲基胍对照品适量，用流动相稀释制成每1ml中含甲基胍20μg的溶液；
步骤三：配制2-胍基琥珀酸对照品溶液：精密称取2-胍基琥珀酸对照品适量，用流动相稀释制成每1ml中含2-胍基琥珀酸8μg的溶液；
步骤四：配制供试品溶液：精密量取腹膜透析废液1ml，采用经水、50%甲醇、甲醇活化后的C18固相萃取柱，用流动相进行洗脱至10ml，混匀，用0.45μm的针头过滤器进行过滤，即得；
步骤五：高效液相色谱法测定：精密量取上述溶液各20μl，分别注入液相色谱仪中，记录色谱图；本实施例中，优选的，所述步骤五中色谱条件为：色谱柱：ChromCoreHILIC-Amide柱：4.6mm×250mm，5μm；柱温：25℃；流动相：0.1mol/L乙酸钠溶液-乙腈，体积比为10:90；流速：0.5ml/min；检测波长：235nm；进样量：20μl；本实施例中，优选的，所述乙酸钠溶液需要使用冰醋酸调pH值至5.2。
本实施例中，优选的，所述步骤四中，C18固相萃取柱在使用前需要进行活化处理；本实施例中，优选的，所述步骤一、步骤二、步骤三以及步骤四制备好的溶液需要分别室温环境下密封保存。
对本实例的方法进行方法学验证：
1.专属性：
取流动相、甲基胍对照品溶液、2-胍基琥珀酸对照品溶液和系统适用性溶液进行测定，结果见表1。
由表1实验结果可知：流动相不干扰甲基胍和2-胍基琥珀酸检测；系统适用性溶液中甲基胍对照品和2-胍基琥珀酸峰之间的分离度为6.84，能完全分离，该方法专属性良好。
2.检测限：以信噪比3:1为标准，测得甲基胍的检测限为0.001μg/ml；测得2-胍基琥珀酸的检测限为0.02μg/ml。
3.定量限：以信噪比10:1为标准，测得甲基胍的定量限为0.004μg/ml；测得2-胍基琥珀酸的定量限为0.05μg/ml。
由检测限和定量限结果可知：该方法能非常灵敏的检测甲基胍和2-胍基琥珀酸。
4.系统适用性：分别平行配制6份相同浓度的甲基胍对照品溶液和2-胍基琥珀酸对照品溶液进行测定，结果见表2。
由表2实验结果可知：平行配制6份相同浓度的甲基胍对照品溶液和2-胍基琥珀酸对照品溶液，其保留时间和峰面积的RSD均小于1.0%，该方法系统适用性良好。
5.重复性：平行配制6份供试品溶液进行测定，结果见表3。
由表3实验结果可知：平行测定6份供试品溶液，甲基胍和2-胍基琥珀酸峰面积的RSD均小于2.0%，该方法重复性良好。
6.溶液稳定性：分别取甲基胍对照品溶液、2-胍基琥珀酸对照品溶液和供试品溶液，室温放置，分别于0h、6h、12h和24h进行测定，计算甲基胍和2-胍基琥珀酸峰面积的RSD，结果见表4。
由表4实验结果可知：甲基胍对照品溶液、2-胍基琥珀酸对照品溶液和供试品溶液在室温下放置24h，甲基胍和2-胍基琥珀酸峰面积的RSD均小于2.0%，说明在24小时内甲基胍对照品溶液、2-胍基琥珀酸对照品溶液和供试品溶液稳定性良好。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (3)
1.一种测定甲基胍和胍基琥珀酸含量的方法，其特征在于：具体步骤如下：步骤一：配制系统适用性溶液：分别精密称取甲基胍对照品和2-胍基琥珀酸对照品各适量，用流动相稀释制成每1ml中含甲基胍5μg和2-胍基琥珀酸200μg的溶液；
步骤二：配制甲基胍对照品溶液：精密称取甲基胍对照品适量，用流动相稀释制成每1ml中含甲基胍20μg的溶液；
步骤三：配制2-胍基琥珀酸对照品溶液：精密称取2-胍基琥珀酸对照品适量，用流动相稀释制成每1ml中含2-胍基琥珀酸8μg的溶液；
步骤四：配制供试品溶液：精密量取腹膜透析废液1ml，采用经水、50％甲醇、甲醇活化后的C18固相萃取柱，用流动相进行洗脱至10ml，混匀，用0.45μm的针头过滤器进行过滤，即得；
步骤五：高效液相色谱法测定：精密量取上述溶液各20μl，分别注入液相色谱仪中，记录色谱图；
所述步骤五中色谱条件为：色谱柱：ChromCore HILIC-Amide柱：4.6mm×250mm，5μm；柱温：25℃；流动相：0.1mol/L乙酸钠溶液-乙腈，体积比为10:90；流速：0.5ml/min；检测波长：235nm；进样量：20μl；所述乙酸钠溶液需要使用冰醋酸调pH值至5.2。
2.根据权利要求1所述的一种测定甲基胍和胍基琥珀酸含量的方法，其特征在于：所述步骤四中，C18固相萃取柱在使用前需要进行活化处理。
3.根据权利要求1所述的一种测定甲基胍和胍基琥珀酸含量的方法，其特征在于：所述步骤一、步骤二、步骤三以及步骤四制备好的溶液需要分别在室温环境下密封保存。
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