CN115777695B - 适用于脑脊液细胞形态学检查的复合保存液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于临床医学技术领域，公开了适用于脑脊液细胞形态学检查的复合保存液及其制备方法，含有营养液、固定液以及保护液，营养液中包括枸橼酸钠，葡萄糖，腺嘌呤，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，NaCl和白蛋白；固定液中包括醇类物质，醛类物质和枸橼酸，保护液中包括明胶溶液，海藻糖，生物防腐剂，维生素C和甘露醇。本发明的复合保存液可用于保存和储存脑脊液细胞，能够很好的保护脑脊液细胞的形态和结构特征，填补了现有技术中脑脊液细胞形态保护的空白，继而为脑脊液形态学检查提供技术保证。
Description
技术领域
本发明是适用于脑脊液细胞形态学检查的复合保存液及其制备方法，具体涉及一种能够延长体外脑脊液细胞寿命并保证其形态和结构稳定的复合保存液，以及该复合保存液的制备方法，属于临床医学技术领域。
背景技术
脑脊液细胞形态学检查是用显微镜观察脑脊液中细胞形态的一种检查方法，在临床应用中，可为神经系统疾病的诊断提供帮助，并且在鉴别诊断、病情监测、疗效评价及预后判断方面带来极大的便利，特别是脑脊液细胞通过染色，可以了解脑脊液细胞的种类，以最直观的方式，提供脑脊液是否有异常或异常的类型，以及是否有肿瘤细胞及病原性微生物存在的依据，并给临床医生提供治疗依据。但现有情况是，脑脊液细胞形态学检查存在一个致命的缺陷，即细胞离体后，由于胞内自溶酶等作用，细胞会很快退化，形态不完整。因此，在临床检验操作规程中，要求脑脊液检查在收到标本后应立即送检，一般不超过1小时。
目前，由于部分医院检测能力的不足，需要将样本送到上级医院或第三方实验室进行检测，这就需要对脑脊液样本做较长时间的保存和长途运输。有研究显示：标本采集2小时后，嗜中性粒细胞已减少约50%，因此，研究一种细胞保存液，使细胞离体后能够保持细胞的完整性，为细胞形态学检测提供技术支持显得极为必要。
现有技术中，公开号为CN109644985A的发明专利公开了一种细胞保存液及其应用，其中细胞保存液的组分包括：pH为7.5～8.0的0.03～0.07M Tris缓冲液45-55%（v/v）、95～97%乙醇45～55%（v/v）、钙盐8～12%（w/w）和镁盐8～12%（w/w），能够避免核酸物质的丢失和提高保持细胞形态的稳定性。该专利虽然公开了细胞保存液可用于脑脊液的保存，但其仅仅记载了细胞保存液在25℃下分别保存细胞中HPV病毒核酸和宫颈细胞形态的稳定性，有效保存时间分别可达到45天和50天，然而对于脑脊液细胞的保存稳定性还有待验证。
除此之外，公开号为CN111944877A的发明专利还公开了一种脑脊液中微生物核酸新型保存液，该保存液的pH为7～8，其组分包括：5～20mmol/L的核酸酶抑制剂（乙二胺四乙酸或乙二醇四乙酸），15～30mmol/L的盐酸胍缓冲溶液，15～25mmol/L的蛋白变性抑制剂（十二烷基磺酸钠）、5～10mmol/L的柠檬酸三钠、20～30mmol/L的抑菌剂（乙醇或山梨酸钾）、5～10mmol/L的稳定剂（甘氨酸和/或乙酸钠）以及5～10％的异丙醇。该专利记载的保存液对保存的患者的脑脊液的Ct值比较稳定，保存0～48h差别不大，但该专利也仅仅记载了对脑脊液细胞中核酸稳定性的保护，对于脑脊液细胞的形态和结构特征的保存效果并不明确。
发明内容
本发明的目的是提供适用于脑脊液细胞形态学检查的复合保存液，该复合保存液中采用特定配方组成的营养液、固定液和细胞保护液，能够有效延长体外细胞寿命，并且很好的保护了脑脊液细胞的形态和结构特征，填补了现有技术中脑脊液细胞形态保护的空白，为脑脊液形态学检查提供了技术保证。为此，本发明还提供了该复合保存液的制备方法。
需要说明的是，本发明记载的固定液配方，采用醇类物质、醛类物质和枸橼酸等组合而成，通过配方及比例的合理优化，还可以单独应用在肺泡灌洗液，胸腹水，关节液等脱落细胞的保护和储存中，实现细胞的固定，使细胞形态及结构保持不变的状态下，细胞膜保持微通透性，使营养物质及染料能透过膜，进入胞内，维持细胞的代谢，也能让细胞着色。
本发明通过下述技术方案实现：适用于脑脊液细胞形态学检查的复合保存液，含有营养液、固定液以及保护液，
所述营养液中包括以下浓度的组分：枸橼酸钠0.5～4.97g/L、葡萄糖2.01～7.21g/L、腺嘌呤0.01～0.14g/L、磷酸二氢钠0.45～0.94g /L、磷酸氢二钠4.0～8.2g/L、NaCl 2.36～4.978g /L和白蛋白0.3～0.8g/L；
所述固定液中包括以下浓度的组分：醇类物质6.75～8.64毫升%、醛类物质0.1～0.75毫升%和枸橼酸10～26g%；
所述保护液中包括以下浓度的组分：明胶溶液3～8毫升%、海藻糖0.01～0.1g/L、生物防腐剂0.1～0.2g/L、维生素C 0.1～0.2g/L和甘露醇2～4g/L。
所述复合保存液的pH为7.0～7.5。
所述复合保存液的渗透压为280～320mOsm/L。
所述固定液中，醇类物质选自丙醇、异丙醇、苯甲醇、乙二醇中的至少一种。
所述固定液中，醛类物质选自乙醛、丙烯醛、乙二醛中的至少一种。
所述保护液中，生物防腐剂选自卡松、醋酸洗必泰、度米芬、磷酸三钠中的至少一种。
适用于脑脊液细胞形态学检查的复合保存液的制备方法，按上述配方比例分别配制营养液、固定液及保护液，将营养液加入离子交换水中溶解后，再依次加入固定液和保护液，溶解后用0.2um滤膜的超滤装置过滤，再调整pH和渗透压，即得所述复合保存液。
本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：
（1）本发明在营养液的配方中，通过各组分配方及比例的配合，独创性的模拟细胞生存的微环境，为活细胞提供所必需的电解质、缓冲液、葡萄糖以及蛋白组分，通过提供细胞生存适宜的pH，渗透压及活细胞必须的营养成分，尽可能的在体外延长细胞的寿命，保持细胞形态及结构的完整性。
（2）本发明在固定液的配方中，采用醇类、醛类等物质，组成复合固定剂配方，通过各组分配方及比例的合理搭配，可以实现对细胞的微固定，使细胞形态及结构保持不变的状态下，细胞膜保持微通透性，使营养物质及染料能透过膜，进入胞内，维持细胞的代谢，也能让细胞着色。
（3）本发明在保护液的配方中，首次采用明胶作为脑脊液细胞的特殊保护剂加入，在保护白细胞形态方面起到重要作用，明胶属于天然蛋白质，具有复杂的分子结构，经实验证明：在4℃条件下，明胶可以将白细胞互相隔离，减少聚集，达到保护白细胞的效果。
（4）本发明在保护液的配方中，开创性地加入海藻糖作为特殊保护剂，在保护细胞形态方面起到重要作用，海藻糖是一种非特异性天然保护剂，能在细胞表面形成独特的保护膜，具有保护生物组织，细胞和生物大分子的作用，可以在高温，高寒，特别是在较长时间内保证细胞的完整性。
（5）本发明在保护液的配方中，通过甘露醇的加入而对细胞膜具有保护作用，实际工作中，还可以应用到干细胞的保存；维生素C具有抗氧化效果；生物防腐剂能够抑制微生物繁殖生长，尤其是卡松，作为新一代生物防腐剂，在与其它防腐剂组合时能够长效杀灭各种细菌、病毒及真菌，是国际上公认的安全、高效的广谱防腐剂。
（6）本发明专利不采用有毒且化学性质不稳定的三聚甲醛等物质，不涉及昂贵仪器及程序复杂的冷冻干燥的方法，采用整合模式，多种方法优势互补的技术去保持细胞形态，达到了脑脊液细胞的较长时间保存的目的，为脑脊液细胞形态学检查提供了技术保证。
（7）本发明的固定液经合理调整配方和比例后，还可单独应用在肺泡灌洗液、胸腹水、关节液等脱落细胞的保护与存储，可以单独实现对细胞的固定。
（8）本发明可以在保存过程中，独创性的采用专用密封圈密封试管及环形密封圈作为端面密封，可以最大程度隔绝空气，阻止空气中氧对细胞的氧化作用。
（9）本发明采用4℃低温保存脑脊液细胞，能够最大限度降低细胞代谢，延长细胞寿命，保持细胞形态特征。
综上所述，本发明提供了一种采用新型配方（即：营养液、固定液和保护液）整合的复合保护液，可用于延长体外脑脊液细胞寿命及其形态和结构的保护，解决了目前脑脊液细胞形态学检查面临的困境，实现4℃下脑脊液细胞的保存时间延长至72h，为脑脊液细胞检测带来技术保证。
附图说明
图1为实验组A保存24h的细胞形态图。
图2为实验组A保存48h的细胞形态图。
图3为实验组A保存72h的细胞形态图。
图4为实验组B保存8h的细胞形态图。
图5为实验组C保存8h的细胞形态图。
图6为采用复合保存液Ⅰ对不同批次样品保存72h的细胞形态图（一）。
图7为采用复合保存液Ⅰ对不同批次样品保存72h的细胞形态图（二）。
图8为实验组A保存72h（加入2%冰醋酸）的细胞形态图（粒细胞）。
图9为实验组A保存72h（加入2%冰醋酸）的细胞形态图（淋巴细胞）。
图10为实验组A保存8h的细胞染色图。
图11为实验组A保存7天的细胞染色图。
图12为采用对比例1的保存液Ⅰ保存脑脊液样品8h的细胞形态图。
图13为采用对比例2的保存液Ⅱ保存脑脊液样品8h的细胞形态图。
图14为采用对比例3的保存液Ⅲ保存脑脊液样品8h的细胞形态图。
实施方式
下面将本发明的发明目的、技术方案和有益效果作进一步详细的说明。
应该指出的是，以下详细说明都是示例性的，旨在对所要求的本发明提供进一步的说明，除非另有说明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
本发明旨在提供一种脑脊液细胞形态学检查的复合保存液，为解决目前脑脊液细胞形态学检查面临的困境，即活细胞离体后，样本久置导致细胞破坏而影响细胞形态学检查，为此，本发明提供了一种新型配方的复合保存液，该复合保存液主要由三种配方物质组成，一种是营养液，可为脑脊液细胞生存提供所必须的微环境，通过特定的配方及比例可创造活细胞生存外环境，提供必须的营养物质，以及适宜的pH及渗透压，使细胞处于可供生长状态，尽可能延长细胞生存期，从而保证脑脊液细胞形态及结构完整。一种是固定液，采用复合固定剂对细胞进行微固定，使细胞膜处于微封闭状态，可使胞外物质（营养物质，染料等）能透过膜孔进入胞内，供细胞新陈代谢及受色，同时，特定的配方组合，还可使细胞形态更接近生活状态，并终止内源性分解酶对细胞的溶解。一种是保护液，采用特殊保护剂（明胶和海藻糖）对细胞提供保护，甘露醇、海藻糖和明胶均对细胞有保护作用，维生素C具有抗氧化效果，生物防腐剂（卡松）能够抑制微生物繁殖生长。为此，本发明通过上述三种配方物质的合理搭配和比例控制，即可实现脑脊液细胞在体外的长时间保存，并能够有效保证细胞形态及结构的稳定。
进一步的，在本发明中，营养液中包括以下质量浓度的组分：枸橼酸钠：0.5～4.97g/L，葡萄糖：2.01～7.21g/L，腺嘌呤：0.01～0.14g/L，磷酸二氢钠：0.45～0.94g/L，磷酸氢二钠：4.0～8.2g/L，NaCl：2.36～4.978g/L，白蛋白：0.3～0.8g/L。固定液中包括以下体积（质量）百分浓度的组分：醇类物质：6.75～8.64毫升%，醛类物质：0.1～0.75毫升%，枸橼酸：10～26g%。保护液中包括以下质量浓度（体积百分浓度）的组分：明胶溶液3～8毫升%，海藻糖：0.01～0.1g/L，生物防腐剂：0.1～0.2g/L，维生素C：0.1～0.2g/L，甘露醇：2～4g/L。
在一个具体的实施例中，醇类物质可选择丙醇、异丙醇、苯甲醇、乙二醇或它们的任意组合；醛类物质可选择乙醛、丙烯醛、乙二醛或它们的任意组合；生物防腐剂可选择卡松（异噻唑啉酮类化合物）、醋酸洗必泰（1,1'-己基双[5-(对氯苯基)双胍]二醋酸盐）、度米芬（十二烷基-二甲基-2-苯氧基-乙基溴化铵）、磷酸三钠或它们的任意组合。
在一个具体的实施例中，可将复合保存液在4℃下保存和储存脑脊液细胞，可延长保存时间至72h。在另一个具体的实施例中，可将保护液单独使用，例如在对其配方进一步优化和调整后，可用于肺泡灌洗液、胸腹水、关节液等脱落细胞的保护和储存。
在制备复合保存液时，按上述配方比例分别配制营养液、固定液及保护液后，然后选择适当比例的营养液、固定液及保护液，例如在一个具体的实施例中，控制营养液、固定液和保护液的体积比为10∶0.05∶1，将营养液加入离子交换水中溶解后，启动搅拌装置，充分搅拌直至完全溶解后，再加入固定液，充分搅拌并混合均匀后，再加入固定液，搅拌至完全溶解后，加入离子交换水定容到所需容积，再次搅拌混匀后经超滤装置过滤（0.2um滤膜），采用无机盐缓冲液（NaH2PO4/Na2HPO4）调整保存液的pH值在7.0～7.5，同时调整渗透压在 280～320mOsm/L后，即得复合保存液，分装保存。所有工艺流程无需加热。经测试：复合保存液在室温条件下，经过长达一年的实验验证，能够稳定保存12个月。
下面以几个典型实施例来列举说明本发明的具体实施方式，当然，本发明的保护范围并不局限于以下实施例。本实施例所用试剂原料均为市售产品，例如：
海藻糖：CAS编号99-20-7，广州昊成化工有限公司；
明胶：CAS编号9000-80-7，山东恒源康生物科技有限公司；
维生素C：CAS编号50-81-7，成都科龙化工试剂厂；
白蛋白：CAS编号9048-46-8，成都科龙化工试剂厂。
实施例1：复合保存液Ⅰ
营养液：枸橼酸钠2.85g/L，葡萄糖7.21g/L，腺嘌呤0.08g/L，磷酸二氢钠0.55g/L，磷酸氢二钠4.0g/L，NaCl 3.88g /L，白蛋白0.5g/L。
固定液：异丙醇7.55毫升%，乙醛0.45毫升%，枸橼酸15g%。
保护液：明胶溶液3毫升%，海藻糖0.1g/L，卡松0.15g/L，维生素C 0.12g/L，甘露醇3g/L。
按本发明前述方法进行配制，配制完成后，调整pH为7.0，渗透压为320mOsm/L，即得复合保存液Ⅰ。
实施例2：复合保存液Ⅱ
营养液：枸橼酸钠1.59g/L，葡萄糖5.25g/L，腺嘌呤0.01g/L，磷酸二氢钠0.45g/L，磷酸氢二钠8.2g/L，NaCl 4.978g/L；白蛋白0.3g/L。
固定液：丙醇6.75毫升%，乙醛0.50毫升%，丙烯醛0.25毫升%，枸橼酸26g%。
保护液：明胶溶液8毫升%，海藻糖0.01g/L，卡松0.1g/L，磷酸三钠0.1g/L，维生素C0.1g/L，甘露醇4g/L。
按本发明前述方法进行配制，配制完成后，调整pH7.4，渗透压为280mOsm/L，即得复合保存液Ⅱ。
实施例3：复合保存液Ⅲ
营养液：枸橼酸钠3.42g/L，葡萄糖7.21g/L，腺嘌呤0.14g/L，磷酸二氢钠0.94g/L，磷酸氢二钠4.0g/L，NaCl 2.36g/L，白蛋白0.8g/L。
固定液：丙醇6.39毫升%，乙二醇2.25毫升%，丙烯醛0.1毫升%，枸橼酸10g%。
保护液：明胶溶液6毫升%，海藻糖0.05g/L，卡松0.1g/L，维生素C 0.2g/L，甘露醇2g/L。
按本发明前述方法进行配制，配制完成后，调整pH为7.5，渗透压为300mOsm/L，即得复合保存液Ⅲ。
实施例4：复合保存液Ⅳ
营养液：枸橼酸钠4.36g/L，葡萄糖5.25g/L，腺嘌呤0.01g/L，磷酸二氢钠0.45g/L，磷酸氢二钠8.2g/L，NaCl 4.978g/L；白蛋白0.3g/L。
固定液：丙醇6.75毫升%，乙醛0.50毫升%，丙烯醛0.25毫升%，枸橼酸26g%。
保护液：明胶溶液8毫升%，海藻糖0.01g/L，卡松0.1g/L，磷酸三钠0.1g/L，维生素C0.1g/L，甘露醇4g/L。
按本发明前述方法进行配制，配制完成后，调整pH7.4，渗透压为280mOsm/L，即得复合保存液Ⅳ。
实施例5：复合保存液Ⅴ
营养液：枸橼酸钠2.82g/L，葡萄糖5.20g/L，腺嘌呤0.10g/L，磷酸二氢钠0.65g/L，磷酸氢二钠6.4g/L，NaCl3.72g/L，白蛋白0.58g/L。
固定液：丙醇6.88毫升%，乙醛0.36毫升%，枸橼酸12g%。
保护液：明胶溶液5.5毫升%，海藻糖0.02g/L，卡松0.15g/L，维生素C0.18g/L，甘露醇3g/L。
按本发明前述方法进行配制，配制完成后，调整pH为7.2，渗透压为290mOsm/L，即得复合保存液Ⅴ。
实施例6：复合保存液Ⅵ
营养液：枸橼酸钠0.5g/L，葡萄糖6.47g/L，腺嘌呤0.01g/L，磷酸二氢钠0.80g/L，磷酸氢二钠6.2g/L，NaCl 4.56g/L，白蛋白0.8g/L。
固定液：乙二醇7.65毫升%，乙醛0.05毫升%，丙烯醛0.1毫升%，枸橼酸23g%。
保护液：明胶溶液5毫升%，海藻糖0.08g/L，卡松0.1g/L，醋酸洗必泰0.1g/L，维生素C 0.1g/L，甘露醇3.2g/L。
按本发明前述方法进行配制，配制完成后，调整pH为7.4，渗透压为295mOsm/L，即得复合保存液Ⅵ。
实施例7：复合保存液Ⅶ
营养液：枸橼酸钠4.97g/L，葡萄糖5.02g/L，腺嘌呤0.12g/L，磷酸二氢钠0.65g/L，磷酸氢二钠6.0g/L，NaCl 2.64g/L，白蛋白0.47g/L。
固定液：异丙醇7.23毫升%，乙醛0.61毫升%，枸橼酸14g%。
保护液：明胶溶液5.25毫升%，海藻糖0.1g/L，卡松0.1g/L，度米芬0.05g/L，维生素C 0.11g/L，甘露醇3.2g/L。
按本发明前述方法进行配制，配制完成后，调整pH为7.5，渗透压为300mOsm/L，即得复合保存液Ⅶ。
实施例8：复合保存液Ⅷ
营养液：枸橼酸钠3.56g/L，葡萄糖2.58g/L，腺嘌呤0.14g/L，磷酸二氢钠0.68g/L，磷酸氢二钠5.6g/L，NaCl 2.36g/L，白蛋白0.8g/L。
固定液：丙醇5.25毫升%，异丙醇2.08毫升%，乙醛0.05毫升%，丙烯醛0.05毫升%，枸橼酸13g%。
保护液：明胶溶液8毫升%，海藻糖0.01g/L，卡松0.12g/L，维生素C 0.18g/L，甘露醇2.36g/L。
按本发明前述方法进行配制，配制完成后，调整pH为7.4，渗透压为285mOsm/L，即得复合保存液Ⅷ。
实施例
实验样本：临床不同个体血样脑脊液。
对照样本：对照管1（生理盐水），对照管2（仅含营养成分）。
取3只塑料试管，分别编号A，B，C，在A组中加入复合保存液（任意选取实施例1中的复合保存液Ⅰ）0.2ml，即为实验组A；在B组中加入0.2ml生理盐水，即为实验组B（生理盐水对照组）；在C组中加入实施例1的营养液0.2ml，即为实验组C（营养物质对照组）。
按1∶9的体积比加入血样脑脊液样本，立即混匀并旋紧密封试管盖，置4℃下，观察不同时间段红细胞及白细胞形态的保存状态。
观察手段及指标：目测，上清液颜色及单克隆血红蛋白胶体金试剂；显微镜高倍镜下直接观察细胞形态的完整性及细胞着色情况，观察红细胞有无体积长大及锯齿状，白细胞有无体积改变及退化，核溶解。
实验效果：
实验组A（即采用实施例1的复合保存液Ⅰ）对脑脊液红细胞及白细胞有非常好的保护作用，不同时间段（24h、48h和72h）的细胞形态完好，细胞可以单一且均匀分布地在视野中，保持了样品采集时细胞的原始形态：红细胞淡黄色，呈圆盘状，双凹状态。白细胞体积较红细胞略大，灰白色，圆形，有较强折光性，具体参见图1、图2和图3所示。
实验组B（生理盐水对照组）对实验样品保存8h时，可见出现大量锯齿状红细胞（约80%成熟红细胞呈锯齿状），具体参见图4所示。
实验组C（营养物质对照组）对实验样品保存8h时，可见10%左右红细胞呈锯齿状及椭圆形红细胞，具体参见图5所示。
进一步的，采用实验组A对不同批次实验样本（脑脊液）进行保存，保存72h，不同批次细胞仍然绝大多数细胞保持原始状态，具体参见图6和图7所示。
将实验组A保存72h，采用2%冰醋酸加入实验组A的试管中，轻轻混匀，使红细胞几秒内绝大部分红细胞完全溶解（白细胞计数时，需要破坏红细胞，去除干扰），可见单个核细胞（粒细胞）胞膜完整，椭圆形，核清晰可见，具体参见图8所示。另外，可见单个核细胞（淋巴细胞）胞膜完整，椭圆形，核清晰可见，具体参见图9所示。
将实验组A保存8h，做瑞吉染色，可见红细胞及淋巴细胞均能着色，具体参见图10所示。将实验组A保存7天，可见红细胞大小不均，但红细胞及白细胞仍能通过瑞吉染色，使细胞核着色，具体参见图11所示。
由此可见，采用本发明所述复合保存液对脑脊液细胞进行保存时，在4℃下保存72h，能够有效保持细胞（红细胞及白细胞）的形态和结构，适用于脑脊液细胞形态学检查，在4℃下保存7天，白细胞均能通过染色使细胞核着色，为脑脊液细胞检测带来技术保证。
对比例1：保存液Ⅰ
本对比例仅采用营养液（枸橼酸钠2.85g/L，葡萄糖7.21g/L，腺嘌呤0.08g/L，磷酸二氢钠0.55g/L，磷酸氢二钠4.0g/L，NaCl 3.88g/L，白蛋白0.5g/L，与实施例1的营养液相同）作为保存液Ⅰ，其pH和渗透压调整略有区别，pH值为7.4，渗透压为302mOsm/L。
对比例2：保存液Ⅱ
本对比例仅采用固定液（异丙醇8.55毫升%，乙醛2.75毫升%，枸橼酸18g%）作为保存液Ⅱ，其pH和渗透压调整略有区别，pH为7.2，渗透压为315mOsm/L。
对比例3：保存液Ⅲ
本对比例仅采用营养液和固定液（枸橼酸钠2.85g/L，葡萄糖7.21g/L，腺嘌呤0.08g/L，磷酸二氢钠0.55g/L，磷酸氢二钠4.0g/L，NaCl 3.88g/L，白蛋白0.5g/L，异丙醇7.55毫升%，乙醛0.45毫升%，枸橼酸15g%，与实施例1的营养液和固定液相同，但不添加保护液）作为保存液Ⅲ，其pH和渗透压调整略有区别，pH为7.25，渗透压为310mOsm/L。
分别取适量的实施例1的复合保存液Ⅰ、对比例1的保存液Ⅰ、对比例2的保存液Ⅱ和对比例3的保存液Ⅲ加入实验样品（血样脑脊液样本）中，依次观察加入实施例1的复合保存液Ⅰ的实验样品在4℃下保存24h、48h以及72h的细胞形态和结构，以及分别加入对比例1的保存液Ⅰ、对比例2的保存液Ⅱ和对比例3的保存液Ⅲ的实验样品在4℃下保存8h的细胞形态和结构。
实验结果参见下表1所示。
表1 脑脊液样品保存的细胞形态对照表
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化，均落入本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.适用于脑脊液细胞形态学检查的复合保存液，其特征在于：所述复合保存液含有营养液、固定液以及保护液，其pH为7.0，渗透压为320mOsm/L，
所述营养液为以下浓度的组分：枸橼酸钠2.85g/L，葡萄糖7.21g/L，腺嘌呤0.08g/L，磷酸二氢钠0.55g/L，磷酸氢二钠4.0g/L，NaCl 3.88g/L，白蛋白0.5g/L；
所述固定液为以下浓度的组分：异丙醇7.55%（v/v），乙醛0.45%（v/v），枸橼酸15wt%；
所述保护液为以下浓度的组分：明胶溶液3%（v/v），海藻糖0.1g/L，卡松0.15g/L，维生素C 0.12g/L，甘露醇3g/L。
2.适用于脑脊液细胞形态学检查的复合保存液的制备方法，其特征在于：按权利要求1的配方比例分别配制营养液、固定液及保护液，将营养液加入离子交换水中溶解后，再依次加入固定液和保护液，溶解后用0.2um滤膜的超滤装置过滤，再调整pH和渗透压，即得所述复合保存液。
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