CN115747037A - 核酸分析卡及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种核酸分析卡及其使用方法，核酸分析卡包括主体、扣盖和相变材料，主体形成有检测通道，检测通道包括依次连通的试剂区、相变区和反应区，试剂区内设置有冻干球，冻干球包括扩增检测试剂，主体开设有加样口，加样口与试剂区相连通；扣盖用于打开或关闭加样口；相变材料设置于相变区内，相变材料受热熔化后形成液封。本发明通过在相变区内设置相变材料，相变材料受热熔化后形成液封以对反应区进行密封，相比于固体形态的石蜡阀密封更为可靠，并在反应结束后随温度降低重新固化以封闭反应液，避免了反应液的损耗和与环境的交叉污染，尤其是气溶胶污染，提升测试结果的可靠性。

Description

核酸分析卡及其使用方法

技术领域

本发明涉及核酸分析领域，具体涉及一种核酸分析卡及其使用方法。

背景技术

目前，为了提升核酸分析效率，并降低核酸分析设备的复杂度，出现了多种卡片式的核酸分析耗材。现有技术中，为了避免高温及升降温引起的反应液损失需要对反应区进行密封，通过设置固体形态的石蜡阀以隔断流道密封反应区，但是固体形态的石蜡阀易出现气孔或固化不良等情况造成密封失效。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种核酸分析卡及其使用方法，以解决固体形态的石蜡阀易造成密封失效的问题。

为实现上述目的，本发明提出的核酸分析卡包括主体、扣盖和相变材料，所述主体形成有检测通道，所述检测通道包括依次连通的试剂区、相变区和反应区，所述试剂区内设置有冻干球，所述冻干球包括扩增检测试剂，所述主体开设有加样口，所述加样口与所述试剂区相连通；所述扣盖用于打开或关闭所述加样口；所述相变材料设置于所述相变区内，所述相变材料受热熔化后形成液封。

可选地，所述扣盖包括相连接盖体和裙边，所述裙边沿所述盖体的径向延伸，所述盖体用于打开或关闭所述加样口，所述裙边用于与所述主体抵接。

可选地，所述主体包括加样部，所述加样部开设有所述加样口，所述裙边用于与所述加样部抵接，且所述加样部朝远离所述检测通道的方向凸出以使所述裙边与所述加样部之间形成有安装间隙。

可选地，所述主体形成有止挡面，所述止挡面倾斜设置，所述止挡面用于止挡所述冻干球进入所述相变区。

可选地，所述主体形成有安装槽，所述相变材料设置于所述安装槽内。

可选地，所述主体包括相连接的壳体和封合膜，所述封合膜与所述壳体配合以形成所述检测通道，所述壳体开设有所述加样口，所述封合膜用于与加热模块连接，所述封合膜的厚度为0.05mm~0.2mm。

可选地，所述相变材料为48号、50号、52号、54号、56号、58号、60号、62号、64号固体石蜡中的一种或几种的组合，所述固体石蜡为医药用级全精炼石蜡。

可选地，所述相变材料为二十一烷、二十二烷、二十三烷、二十四烷、二十五烷、二十六烷、二十七烷、二十八烷、二十九烷、三十烷中的一种或几种的组合，且所述相变材料的纯度大于或等于95%。

可选地，所述检测通道的数量为多个，多个所述检测通道间隔设置，所述扣盖和所述相变材料的数量为多个，所述扣盖与所述检测通道的数量一致且一一对应设置，所述相变材料与所述检测通道的数量一致且一一对应设置。

另外，本发明还提供一种核酸分析卡的使用方法，所述核酸分析卡包括如上所述的核酸分析卡，所述使用方法包括：

向加样口滴加待测样本；

调整核酸分析卡方向至试剂区朝下，晃动核酸分析卡以使冻干球复溶形成反应液；

调整核酸分析卡方向至试剂区朝上，甩动核酸分析卡以使所有反应液落至反应区；

加热核酸分析卡使相变材料熔化并流动至反应区中反应液的上层形成液封；

在预设温度范围内，静置预设时长，反应液在预设时长内完成扩增；

当静置时长达到预设时长时，停止加热；

当相变材料重新凝固时，根据反应区中的光信号变化，获得核酸分析结果。

本发明技术方案中检测通道包括自上至下依次连通的试剂区、相变区和反应区。扣盖用于打开或关闭加样口，扣盖打开加样口，待测样本从加样口进入试剂区。扣盖关闭加样口，以使检测通道关闭进行充分反应，避免反应液从加样口漏出。冻干球设置于试剂区内，冻干球包括扩增检测试剂，冻干相比于烘干，冻干试剂复溶和混合效率更高，且适合全组分冻干。试剂区用于预存和复溶冻干球，待测样本加入试剂区后，晃动核酸分析卡会复溶全组分的核酸分析冻干球形成反应液，然后反应液经过相变区进入反应区。相变材料受热熔化后形成液封以对反应区进行密封，相比于固体形态的石蜡阀密封更为可靠，并在反应结束后随温度降低重新固化以封闭反应液，提升测试结果的可靠性。本发明通过在相变区内设置相变材料，相变材料受热熔化后形成液封以对反应区进行密封，相比于固体形态的石蜡阀密封更为可靠，并在反应结束后随温度降低重新固化以封闭反应液，避免了反应液的损耗和与环境的交叉污染，尤其是气溶胶污染，提升测试结果的可靠性。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图示出的结构获得其他的附图。

图1为本发明一实施例核酸分析卡的立体结构示意图；

图2为本发明一实施例核酸分析卡的分解结构示意图；

图3为本发明一实施例核酸分析卡的剖面示意图；

图4为本发明一实施例核酸分析卡多个检测通道的结构示意图；

图5为本发明一实施例使用方法的流程示意图。

附图标号说明：

标号	名称	标号	名称
				100	核酸分析卡	16	加样部
10	主体	17	安装间隙
				11	检测通道	18	止挡面
111	试剂区	19	安装槽
				112	相变区	20	扣盖
113	反应区	21	盖体
				12	冻干球	22	裙边
13	加样口	30	相变材料
				14	壳体	40	把手
15	封合膜

本发明目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

需要说明，本发明实施例中所有方向性指示（诸如上、下、左、右、前、后……）仅用于解释在某一特定姿态（如附图所示）下各部件之间的相对位置关系、运动情况等，如果该特定姿态发生改变时，则该方向性指示也相应地随之改变。

另外，在本发明中如涉及“第一”、“第二”等的描述仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示其相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是至少两个，例如两个，三个等，除非另有明确具体的限定。

在本发明中，除非另有明确的规定和限定，术语“连接”、“固定”等应做广义理解，例如，“固定”可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或成一体；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系，除非另有明确的限定。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。

另外，本发明各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本发明要求的保护范围之内。

本发明中对“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”等方位的描述以图1所示的方位为基准，仅用于解释在图1所示姿态下各部件之间的相对位置关系，如果该特定姿态发生改变时，则该方向性指示也相应地随之改变。

本发明提供一种核酸分析卡100。

在一实施例中，如图1至图5所示，核酸分析卡100包括主体10、扣盖20和相变材料30，主体10形成有检测通道11，检测通道11包括依次连通的试剂区111、相变区112和反应区113，试剂区111内设置有冻干球12，冻干球12包括扩增检测试剂，主体10开设有加样口13，加样口13与试剂区111相连通；扣盖20用于打开或关闭加样口13；相变材料30设置于相变区112内，相变材料30受热熔化后形成液封。

检测通道11包括自上至下依次连通的试剂区111、相变区112和反应区113。扣盖20用于打开或关闭加样口13，扣盖20打开加样口13，待测样本从加样口13进入试剂区111。扣盖20关闭加样口13，以使检测通道11关闭进行充分反应，避免反应液从加样口13漏出。冻干球12设置于试剂区111内，冻干球12包括扩增检测试剂，冻干相比于烘干，冻干试剂复溶和混合效率更高，且适合全组分冻干。试剂区111用于预存和复溶冻干球12，待测样本加入试剂区111后，晃动核酸分析卡100会复溶全组分的核酸分析冻干球12形成反应液，然后反应液经过相变区112进入反应区113。相变材料30受热熔化后形成液封以对反应区113进行密封，相比于固体形态的石蜡阀密封更为可靠，并在反应结束后随温度降低重新固化以封闭反应液，提升测试结果的可靠性。

本发明通过在相变区112内设置相变材料30，相变材料30受热熔化后形成液封以对反应区113进行密封，相比于固体形态的石蜡阀密封更为可靠，并在反应结束后随温度降低重新固化以封闭反应液，避免了反应液的损耗和与环境的交叉污染，尤其是气溶胶污染，提升测试结果的可靠性。

主体10和扣盖20的材料为聚丙烯、聚碳酸酯、聚甲基丙烯酸甲酯和聚苯乙烯中的一种或几种的组合，具有耐化学性、耐热性、电绝缘性、高强度机械性能和良好的高耐磨加工性能等，使得核酸分析卡100的结构更加可靠，密封性更好，避免反应液漏出。

主体10和扣盖20使用上述材料通过注塑、模塑、机加工和3D打印等工艺中的一种或几种的组合加工成型。使得生产速度快、效率高、产品尺寸准确且产品更新方便。

加样口13的最小孔径范围为3mm~7mm，最大孔径范围为3.2mm~7.5mm。试剂区111的容积为30微升到200微升，冻干球12的直径范围为1mm~5mm，易于稳定量产的冻干球12直径往往在2mm以上，冻干粉末难以实现均匀分装，基于反应区113形状进行原位冻干则存在成本极高的问题。

扩增检测试剂使用PCR、RT-PCR、LAMP、RT-LAMP、RPA、RT-RPA、TMA、NASBA、HAD、NEAR、RCA、SDA、ERA、RAA、MIRA中的一种，以提升检测效果和可靠性。

扩增检测试剂中包括染料，染料为自发光荧光染料、嵌合型荧光染料和pH指示剂中的一种，以便于观察检测结果。

自发光荧光染料为羟基茶酚蓝（HNB）和钙黄绿素（Calcein）中的一种，嵌合型荧光染料为SYBR Green Ⅰ、Eva Green和Syto 82中的一种，pH指示剂为酚红（phenol red）、甲酚红（cresol red）、中性红（neutral red）和甲酚紫（cresol purple）中的一种，以便于观察检测结果。

使用自发光荧光染料时，核酸分析可通过肉眼直接观察反应液的颜色变化实现可视化检测，同时也可通过光学检测模块分析反应区113光信号的变化自动完成。相变区112的容积为8微升到50微升，位于加样口13与反应区113之间，与封合膜15的最小距离为0.3毫米~0.7毫米。

相变区112中预存有常温条件下为固体的相变材料30，相变材料30的体积为3微升到30微升，以提高测试结果的可靠性。

相变材料30的预存方式为：以固体状态分装后冷却并固化保留在相变区112，或以热熔液体状态下滴加并冷却和固化保留在相变区112。

在一实施例中，请结合参照图1至图3，扣盖20包括相连接盖体21和裙边22，裙边22沿盖体21的径向延伸，盖体21用于打开或关闭加样口13，裙边22用于与主体10抵接。

扣盖20通过设置盖体21实现打开或关闭加样口13，盖体21伸入加样口13实现关闭加样口13，盖体21脱离加样口13实现打开加样口13。盖体21的边缘与裙边22连接，且裙边22沿盖体21的径向延伸，裙边22用于与主体10抵接，通过设置裙边22进行止挡和限位，避免盖体21过度伸入加样口13导致盖体21掉入试剂区111无法取出，同时，也避免晃动核酸分析卡100时盖体21脱离主体10导致加样口13打开及反应液漏出。

在一实施例中，请结合参照图1至图3，主体10包括加样部16，加样部16开设有加样口13，裙边22用于与加样部16抵接，且加样部16朝远离检测通道11的方向凸出以使裙边22与加样部16之间形成有安装间隙17。

主体10通过设置加样部16实现开设加样口13，以及与裙边22抵接。加样部16朝远离检测通道11的方向凸出，使得裙边22与加样部16之间形成有安装间隙17，通过设置安装间隙17，方便操作人员抓握住裙边22以使扣盖20脱离加样口13，从而实现打开加样口13进行加样，使得核酸分析卡100的使用更加方便。

在一实施例中，请结合参照图1至图3，主体10形成有止挡面18，止挡面18倾斜设置，止挡面18用于止挡冻干球12进入相变区112。

止挡面18自上至下朝靠近检测通道11的方向倾斜，止挡面18用于止挡冻干球12，试剂区111比相变区112和反应区113的容积大，通过设置止挡面18避免冻干球12在复溶前进入相变区112和反应区113导致冻干球12不可靠的复溶，不可靠的复溶即冻干球12没有和待测样品充分接触导致部分或整个冻干球12维持固体形态而无法有效的参与后续的反应，通过设置止挡面18使得冻干球12能够在试剂区111内进行可靠地复溶。

在一实施例中，请结合参照图1至图3，主体10形成有安装槽19，相变材料30设置于安装槽19内。

安装槽19用于安装相变材料30，相变材料30的预存方式为：以固体状态分装后冷却并固化保留在相变区112，或以热熔液体状态下滴加并冷却和固化保留在相变区112。并且，安装槽19对相变材料30具有限位作用，相变材料30以固体状态保留在安装槽19内，安装槽19的槽壁对相变材料30进行限位，避免相变材料30晃动。

在一实施例中，请结合参照图1至图3，主体10包括相连接的壳体14和封合膜15，封合膜15与壳体14配合以形成检测通道11，壳体14开设有加样口13，封合膜15用于与加热模块连接，封合膜15的厚度为0.05mm~0.2mm。

主体10通过封合膜15与壳体14配合实现形成检测通道11，通过设置壳体14实现开设加样口13，封合膜15用于与加热模块连接，通过设置封合膜15方便相变材料30受热熔化后形成液封。并且，封合膜15的厚度为0.05mm~0.2mm，使得封合膜15在保证主体10密封性的同时传热效果更好。

封合膜15为单面胶膜、压敏膜和热封膜中的一种，厚度为0.05mm~0.2mm，使用冷压或热压的方式与壳体14封接。

使用热封膜作为封合膜15时，封合膜15的材料与主体10材料相同。

使用热封膜作为封合膜15时，在壳体14与热封膜封接过程中，需保持热封膜朝上的方向，直至熔化的相变材料再次冷却固化。

在一实施例中，请结合参照图1至图3，相变材料30为48号、50号、52号、54号、56号、58号、60号、62号、64号固体石蜡中的一种或几种的组合，固体石蜡为医药用级全精炼石蜡。

固体石蜡按熔点，一般每隔2℃，分成不同的品种，如52号、54号、56号、58号等牌号，相变材料30采用熔点略低于反应启动温度的固体石蜡，并且，固体石蜡性质比较稳定，不易与扩增检测试剂和待测样品产生化学反应。固体石蜡为医药用级全精炼石蜡，使用高纯度的固体石蜡，提高液封效果和可靠性。

在一实施例中，请结合参照图1至图3，相变材料30为二十一烷、二十二烷、二十三烷、二十四烷、二十五烷、二十六烷、二十七烷、二十八烷、二十九烷、三十烷的一种或几种的组合，且相变材料30的的纯度大于或等于95%。

上述烷烃的化学性质稳定，不易与扩增检测试剂和待测样品产生化学反应。并且上述烷烃的纯度大于或等于95%，使用高纯度的烷烃，在保证不干扰反应结果的同时，实现了反应过程中可靠的液封和反应结束后有效的密封。

具体地，相变材料30为二十一烷、二十二烷、二十三烷、二十四烷中的一种或几种的组合，且相变材料30的的纯度大于或等于99%。进一步限定烷烃的纯度，提高液封效果。

在一实施例中，请结合参照图4，检测通道11的数量为多个，多个检测通道11间隔设置，扣盖20和相变材料30的数量为多个，扣盖20与检测通道11的数量一致且一一对应设置，相变材料30与检测通道11的数量一致且一一对应设置。

多个检测通道11沿左右方向间隔设置，扣盖20与检测通道11的数量一致且一一对应设置，扣盖20用于打开或关闭加样口13。相变材料30与检测通道11的数量一致且一一对应设置，相变材料30受热熔化后形成液封。通过设置检测通道11的数量为多个，使得可以实现同时检测多个待测样品，提高检测效率。

在一实施例中，请结合参照图1至图3，主体10靠近试剂区111的一端连接有把手40，方便将核酸分析卡100向下插进加热模块，同时，也方便向上拔出核酸分析卡100。

另外，请结合参照图5，本发明还提供一种核酸分析卡100的使用方法，核酸分析卡100包括如上所述的核酸分析卡100，使用方法包括：

步骤S10，向加样口13滴加待测样本；

扣盖20脱离加样口13，以使加样口13打开，使用移液器、定量吸管或其他容器吸取固定体积的待测样本，向加样口13滴加待测样本，扣盖20卡入加样口13以关闭加样口13。

步骤S20，调整核酸分析卡100方向至试剂区111朝下，晃动核酸分析卡100以使冻干球12复溶形成反应液；

试剂区111比相变区112和反应区113的容积大，核酸分析卡100试剂区111朝下，晃动核酸分析卡100使得冻干球12能够在试剂区111内进行可靠地复溶，避免冻干球12进入相变区112和反应区113导致冻干球12不可靠的复溶，不可靠的复溶即冻干球12没有和待测样品充分接触导致部分或整个冻干球12维持固体形态而无法有效的参与后续的反应。

步骤S30，调整核酸分析卡100方向至试剂区111朝上，甩动核酸分析卡100以使所有反应液落至反应区113；

所有反应液落至反应区113，方便操作人员观察反应区113中的光信号，以及方便相变材料30形成液封。

步骤S40，加热核酸分析卡100使相变材料30熔化并流动至反应区113中试剂的上层形成液封；

通过加热模块进行加热，使得相变材料30熔化，从固体状态变为液体状态，然后相变材料30因重力和密度刘东志反应区113中反应液的上层，形成液封，以对反应区113进行密封，相比于固体形态的石蜡阀密封更为可靠。

步骤S50，在预设温度范围内，静置预设时长，反应液在预设时长内完成扩增；

在预设温度范围内，预设温度范围可根据实际的反应需求进行灵活调整，本发明对预设温度范围不作限制。液封使得核酸分析卡100适用于恒温扩增和变温扩增，而固体石蜡阀仅适用于恒温扩增，因此，使用液封也使得本申请中的核酸分析卡100使用更加方便。

静置预设时长，预设时长根据实际的反应需求灵活调整，本发明对预设时长不作限制。反应液在预设时长内完成扩增。

步骤S60，当静置时长达到预设时长时，停止加热；

当静置时长达到预设时长时，停止加热，相变材料30随温度降低重新固化以封闭反应液，使得反应液停留在反应区113，方便操作人员观察反应区113中的光信号。

步骤S70，当相变材料重新凝固时，根据反应区113中的光信号变化，获得核酸分析结果。

该核酸分析卡100具体结构参照上述实施例，由于使用方法采用了上述实施例的全部技术方案，因此至少具有上述实施例的技术方案所带来的所有有益效果，在此不再一一赘述。

实施例1 单通道核酸分析卡100

本实施案例中的参数：核酸分析卡100包括主体10和扣盖20，主体10包括壳体14和封合膜15；加样口13的最小孔径和最大孔径分别为5.2mm和5.4mm，加样口13与封合膜15的最小距离为5mm；试剂区111的容积为75μl，冻干球12的直径为4mm；相变区112的容积为30μl，与封合膜15的最小距离为0.6mm；相变材料30为52号医用石蜡，体积为16μl；反应区113的容积为60μl，其底面到封合膜15的距离为1mm，其底面的厚度为1mm；主体10和扣盖20使用白色PP材料，封合3使用0.08mm厚度的透明PP热封膜。

基于上述参数进行单通道的核酸分析卡100的制备，包括如下步骤：

1）注塑加工主体10和扣盖20，并进行清洗和高压灭菌；

2）制备石蜡颗粒，并分装至主体10的相变区112；

3）将主体10整体预热至70℃，石蜡完全液化，然后使用薄膜热压设备将热封膜封合至主体10上，传送至冷却区；

4）石蜡冷却并固化在相变区112后，在25%湿度的洁净环境下通过加样口13向试剂区111分装冻干球12，最后扣回扣盖20以封闭加样口13，常温或低温保存。

实施例2 使用4通道核酸分析卡100配合RT-LAMP & HNB试剂检测样本中的新冠病毒、流感病毒和呼吸道合胞病毒

本实施案例中的参数：核酸分析卡100包括主体10和扣盖20，主体10包括壳体14和封合膜15；主体10包括4个加样口13和4个检测通道11，相邻两个检测通道11之间中心线的间距为9mm；加样口13的最小孔径和最大孔径分别为5.2mm和5.6mm，加样口13与封合膜15的最小距离为0.6mm；试剂区111的容积为75μl，冻干球12的直径为4mm；相变区112的容积为30μl，封合膜15的最小距离为0.6mm；相变材料30为52号医用石蜡，体积为16μl；反应区113的容积为60μl，其底面到封合膜15的距离为1mm，其底面厚度为0.8mm；主体10和扣盖20使用白色PP材料，封合膜15使用0.08mm厚度的透明PP热封膜。

冻干球12中试剂组成包括引物、HNB、dNTP、BST DNA/RNA聚合酶、氯化镁和其他缓存试剂，其中，四个检测通道11中的引物探针分别对应人类细胞Actin基因、新冠病毒N基因、流感病毒M基因和呼吸道合胞病毒F基因。

分析卡的制备流程同实施例1。

基于上述参数对待测样本进行新冠病毒、流感病毒和呼吸道合胞病毒的检测，包括如下步骤：

1）使用样本释放剂处理采样后的咽拭子，并开启扣盖20使加样口13开放；

2）使用50μl定量吸管吸取待测样本，并通过加样口13加入试剂区111，重复加样4次完成4个检测通道11的加样，然后将扣盖20扣回以封闭加样口13；

3）倒放核酸分析卡100使试剂区111朝下，晃动核酸分析卡100促进冻干试剂复溶，再翻转核酸分析卡100使试剂区111朝上，甩动核酸分析卡100使所有试剂落至反应区113的底部，此时反应液的颜色为淡紫色；

4）将核酸分析卡100插入65℃加热模块中，倒计时30分钟后取出；

5）肉眼观察各反应区113的颜色变化情况，例如，从左至右颜色分别为天蓝色、淡紫色、天蓝色、淡紫色，对应的检测结果为：样本采集与反应有效，检测出流感病毒阳性，未检测出新冠病毒和呼吸道合胞病毒。

实施例3使用4通道核酸分析卡100配合RT-LAMP & SYBR Green Ⅰ试剂检测样本中的新冠病毒、流感病毒和呼吸道合胞病毒

本实施案例中的参数：核酸分析卡100包括主体10和扣盖20，主体10包括壳体14和封合膜15；主体10包括4个加样口13和4个检测通道11，相邻两个检测通道11之间中心线的间距为9mm；加样口13的最小孔径和最大孔径分别为5.2mm和5.6mm，与封合膜15的最小距离为0.6mm；试剂区111容积为75μl，冻干球12的直径为4mm；相变区112的容积为30μl，到封合膜15的最小距离为0.6mm；相变材料30为99%纯度的正二十四烷，体积为16μl；反应区113的容积为60μl，其底面到封合膜15的距离为1mm，其底面厚度为0.8mm；主体10和扣盖20使用透明PP材料，封合膜15使用0.08mm厚度的透明PP热封膜。

冻干球12中试剂组成包括引物、SYBR Green Ⅰ、dNTP、BST DNA/RNA聚合酶、氯化镁和其他缓存试剂，其中，四个检测通道11中的引物探针分别对应人类细胞Actin基因、新冠病毒N基因、流感病毒M基因和呼吸道合胞病毒F基因。

分析卡的制备流程同实施例1。

基于上述参数对待测样本进行新冠病毒、流感病毒和呼吸道合胞病毒的检测，包括如下步骤：

1）使用样本释放剂处理采样后的咽拭子，并开启扣盖20使加样口13开放；

2）使用50μl定量吸管吸取样本，并通过加样口13加入试剂区111，重复加样4次完成4个通道的加样，然后将扣盖20扣回封闭加样口13；

3）倒放核酸分析卡100使试剂区111朝下，晃动核酸分析卡100促进冻干试剂复溶，再翻转核酸分析卡100使试剂区111朝上，甩动核酸分析卡100使所有试剂落至反应区113底部；

4）将核酸分析卡100插入65℃加热模块中，倒计时30分钟后取出；

5）使用紫外光源照射核酸分析卡100反应区113，观察各反应区113的是否出现绿色荧光，从左至右颜色分别为无色、绿色、无色、无色，对应的检测结果为：样本采集与反应有效，检测出新冠病毒阳性，未检测出流感病毒和呼吸道合胞病毒。

以上仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是在本发明的构思下，利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构变换，或直接/间接运用在其他相关的技术领域均包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (10)

1.一种核酸分析卡，其特征在于，所述核酸分析卡包括：

主体，所述主体形成有检测通道，所述检测通道包括依次连通的试剂区、相变区和反应区，所述试剂区内设置有冻干球，所述冻干球包括扩增检测试剂，所述主体开设有加样口，所述加样口与所述试剂区相连通；

扣盖，所述扣盖用于打开或关闭所述加样口；

相变材料，所述相变材料设置于所述相变区内，所述相变材料受热熔化后形成液封。

2.如权利要求1所述的核酸分析卡，其特征在于，所述扣盖包括相连接盖体和裙边，所述裙边沿所述盖体的径向延伸，所述盖体用于打开或关闭所述加样口，所述裙边用于与所述主体抵接。

3.如权利要求2所述的核酸分析卡，其特征在于，所述主体包括加样部，所述加样部开设有所述加样口，所述裙边用于与所述加样部抵接，且所述加样部朝远离所述检测通道的方向凸出以使所述裙边与所述加样部之间形成有安装间隙。

4.如权利要求1所述的核酸分析卡，其特征在于，所述主体形成有止挡面，所述止挡面倾斜设置，所述止挡面用于止挡所述冻干球进入所述相变区。

5.如权利要求1所述的核酸分析卡，其特征在于，所述主体形成有安装槽，所述相变材料设置于所述安装槽内。

6.如权利要求1所述的核酸分析卡，其特征在于，所述主体包括相连接的壳体和封合膜，所述封合膜与所述壳体配合以形成所述检测通道，所述壳体开设有所述加样口，所述封合膜用于与加热模块连接，所述封合膜的厚度为0.05mm~0.2mm。

7.如权利要求1至6中任意一项所述的核酸分析卡，其特征在于，所述相变材料为48号、50号、52号、54号、56号、58号、60号、62号、64号固体石蜡中的一种或几种的组合，所述固体石蜡为医药用级全精炼石蜡。

8.如权利要求1至6中任意一项所述的核酸分析卡，其特征在于，所述相变材料为二十一烷、二十二烷、二十三烷、二十四烷、二十五烷、二十六烷、二十七烷、二十八烷、二十九烷、三十烷中的一种或几种的组合，且所述相变材料的纯度大于或等于95%。

9.如权利要求1至6中任意一项所述的核酸分析卡，其特征在于，所述检测通道的数量为多个，多个所述检测通道间隔设置，所述扣盖和所述相变材料的数量为多个，所述扣盖与所述检测通道的数量一致且一一对应设置，所述相变材料与所述检测通道的数量一致且一一对应设置。

10.一种核酸分析卡的使用方法，其特征在于，所述核酸分析卡包括权利要求1至9中任意一项所述的核酸分析卡，所述使用方法包括：

向加样口滴加待测样本；

调整核酸分析卡方向至试剂区朝下，晃动核酸分析卡以使冻干球复溶形成反应液；

调整核酸分析卡方向至试剂区朝上，甩动核酸分析卡以使所有反应液落至反应区；

加热核酸分析卡使相变材料熔化并流动至反应区中反应液的上层形成液封；

在预设温度范围内，静置预设时长，反应液在预设时长内完成扩增；

当静置时长达到预设时长时，停止加热；

当相变材料重新凝固时，根据反应区中的光信号变化，获得核酸分析结果。

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