CN115605512A

CN115605512A - 用于调节δ链介导的免疫的材料和方法

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Publication number: CN115605512A
Application number: CN202180034713.8A
Authority: CN
Inventors: R·加内桑; I·S·格雷瓦尔; S·辛格
Original assignee: Janssen Biotech Inc
Current assignee: Janssen Biotech Inc
Priority date: 2020-03-13
Filing date: 2021-03-12
Publication date: 2023-01-13
Also published as: AU2021234327A1; KR20220154190A; US20210284730A1; CA3175134A1; EP4118121A4; WO2021183845A1; EP4118121A1; TW202144416A; IL296358A; UY39127A; JP2023518189A

Abstract

本发明描述了抗TRDV2多特异性抗体或其抗原结合片段。本发明还描述了编码该抗体的核酸、包含该抗体的组合物、产生该抗体的方法以及使用该抗体治疗或预防疾病的方法。

Description

用于调节δ链介导的免疫的材料和方法

相关申请的交叉引用

本申请要求于2020年3月13日提交的美国序列号62/989,111的优先权的权益，其内容全文以引用方式并入本文。

技术领域

本发明尤其涉及T细胞受体(TCR)重定向技术，诸如靶向T细胞受体δ可变区2(TRDV2)分子的重定向技术。在某些方面，本文提供了结合TRDV2的分子，诸如单克隆TRDV2多特异性抗体或其表位结合片段，包括双特异性抗体、编码所述抗体的核酸和表达载体、含有所述载体的重组细胞和包含所述抗体的组合物。还提供了制备结合TRDV2的分子，诸如抗体的方法，以及使用所述抗体调节对癌细胞的免疫应答的方法。

以电子方式提交的参考序列表

本申请包含序列表，该序列表作为ASCII格式的序列表经由EFS-Web以电子方式提交，文件名为“14620-109-228_SL”并且创建日期为2021年3月8日，并且大小为22,942字节。经由EFS-Web提交的该序列表是本说明书的一部分并且全文以引用方式并入本文。

背景技术

T细胞是最丰富的(占血液淋巴细胞的约75％)和有效的免疫杀伤细胞。效应T细胞在抗癌免疫应答中的作用得到了体外研究的有力支持，并且观察到CD8+T细胞在几种类型的癌症中的高浸润与有利的临床预后相关。目前在临床试验中探索了用于将T细胞重定向以裂解癌细胞的几种不同策略，但是全部有重大局限或副作用。本领域仍然需要改进的T细胞重定向分子和方法。

发明内容

在一个方面，本文提供了结合TRDV2的分子，诸如双特异性抗体，该双特异性抗体包含：(a)与TRDV2抗原结合的第一结合结构域，和(b)与癌细胞的表面上的抗原结合的第二结合结构域。

在一些实施方案中，第一结合结构域包含：(i)VH，该VH包含具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3；和(ii)VL，该VL包含具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VL CDR1、具有SEQID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VLCDR3。在一些实施方案中，第一结合结构域包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，其中第一结合结构域包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，其中第一结合结构域包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VH和具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL。

在一些实施方案中，TRDV2存在于γδT细胞的表面上。在一些实施方案中，TRDV2存在于γδT细胞的表面上，并且在癌细胞的表面上表达的抗原是癌抗原。在一些实施方案中，当双特异性抗体与γδT细胞的表面上的TRDV2和癌细胞的表面上的抗原结合时，癌细胞被杀死。

在一些实施方案中，第一结合结构域是人源化的，第二结合结构域是人源化的，或者第一结合结构域和第二结合结构域两者都是人源化的。

在一些实施方案中，该双特异性抗体是IgG抗体。在一些实施方案中，IgG抗体是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4抗体。

在一些实施方案中，该双特异性抗体在体外以小于约500pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该双特异性抗体在体外以小于约300pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该双特异性抗体在体外以小于约160pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，用γδT效应细胞和表达癌抗原的靶细胞的混合物评估EC₅₀。在一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约0.01:1至约5:1。在一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约0.1:1至约2:1。在一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约1:1。

在一些实施方案中，该双特异性抗体是多价的。在一些实施方案中，该双特异性抗体能够结合至少三个抗原。在一些实施方案中，该双特异性抗体能够结合至少五个抗原。

在另一方面，提供了一种双特异性抗体，该双特异性抗体包含：能够结合γδT细胞的表面上的TRDV2的第一构件；和能够结合癌抗原的第二构件。在一些实施方案中，癌抗原位于癌细胞的表面上。

在另一方面，提供了编码本文提供的双特异性抗体的核酸。在一些实施方案中，还提供了包含该核酸的载体。在一些实施方案中，还提供了包含该载体的宿主细胞。在一些实施方案中，还提供了一种包括该载体和该载体的包装的试剂盒。

在另一方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物包含本文提供的双特异性抗体和药学上可接受的载剂。在一些实施方案中，提供了一种产生该药物组合物的方法。在一些实施方案中，该方法包括将双特异性抗体与药学上可接受的载剂组合以获得药物组合物。

在另一方面，提供了一种用于制备与多于一个靶分子结合的抗体的方法，该分子包括：用于执行获得能够与γδT细胞上的TRDV2抗原结合的结合结构域的功能的步骤；用于执行获得能够与癌细胞的表面上的抗原结合的结合结构域的功能的步骤；以及用于执行提供能够与γδT细胞上的TRDV2抗原和癌细胞的表面上的抗原结合的抗体的功能的步骤。在一些实施方案中，用于执行获得能够与癌细胞的表面上的抗原结合的结合结构域的功能的步骤重复n次，并且该方法还包括用于执行提供能够与γδT细胞上的TRDV2抗原和n个靶分子结合的结合结构域的功能的n个步骤，其中n为至少2。

在另一方面，提供了将表达TRDV2的γδT细胞引导到癌细胞的方法，该方法包括使γδT细胞与本文提供的双特异性抗体接触，其中该接触将γδT细胞引导到癌细胞。

在另一方面，本文提供了一种抑制在细胞表面上表达癌抗原的癌细胞的生长或增殖的方法，该方法包括使癌细胞与本文提供的双特异性抗体接触，其中使癌细胞与药物组合物接触抑制癌细胞的生长或增殖。在一些实施方案中，癌细胞在表达TRDV2的γδT细胞的存在下，同时与该双特异性抗体接触。

在另一方面，提供了用于消除受试者的癌细胞或治疗癌症的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的本文提供的双特异性抗体。在一些实施方案中，受试者是有需要的受试者。在一些实施方案中，受试者是人。

在另一方面，提供了活化表达TRDV2的γδT细胞的方法，该方法包括使γδT细胞与本文提供的双特异性抗体接触。在一些实施方案中，与表达TRDV2的对照γδT细胞相比，该接触导致CD69、CD25和/或颗粒酶B表达增加。

在一些实施方案中，癌细胞的表面上的抗原是肿瘤特异性抗原、肿瘤相关抗原或新抗原。

在一些实施方案中，癌细胞是肾上腺癌、肛门癌、阑尾癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、食道癌、胆囊癌、妊娠滋养细胞癌、头颈癌、霍奇金淋巴瘤、肠癌、肾癌、白血病、肝癌、肺癌、黑色素瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤、神经内分泌肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、鼻窦癌、皮肤癌、软组织肉瘤、脊椎癌、胃癌、睾丸癌、喉癌、甲状腺癌、子宫癌、子宫内膜癌、阴道癌或外阴癌。

在一些实施方案中，癌症是肾上腺癌、肛门癌、阑尾癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、食道癌、胆囊癌、妊娠滋养细胞癌、头颈癌、霍奇金淋巴瘤、肠癌、肾癌、白血病、肝癌、肺癌、黑色素瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤、神经内分泌肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、鼻窦癌、皮肤癌、软组织肉瘤、脊椎癌、胃癌、睾丸癌、喉癌、甲状腺癌、子宫癌、子宫内膜癌、阴道癌或外阴癌。

在一些实施方案中，肾上腺癌是肾上腺皮质癌(ACC)、副肾皮质癌、嗜铬细胞瘤或神经母细胞瘤。

在一些实施方案中，肛门癌是鳞状细胞癌、一穴肛原癌、腺癌、基底细胞癌或黑色素瘤。

在一些实施方案中，阑尾癌是神经内分泌肿瘤(NET)、粘液腺癌、杯状细胞类癌、肠型腺癌或印戒细胞腺癌。

在一些实施方案中，胆管癌是肝外胆管癌、腺癌、肝门部胆管癌、肝门周围胆管癌、远端胆管癌或肝内胆管癌。

在一些实施方案中，膀胱癌是移行细胞癌(TCC)、乳头状癌、扁平癌、鳞状细胞癌、腺癌、小细胞癌或肉瘤。

在一些实施方案中，骨癌是原发性骨癌、肉瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、肉瘤、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、骨巨细胞瘤、脊索瘤或转移性骨癌。

在一些实施方案中，脑癌是星形细胞瘤、脑干胶质瘤、胶质母细胞瘤、脑膜瘤、室管膜瘤、少突神经胶质瘤、混合胶质瘤、垂体腺癌、垂体腺瘤、颅咽管瘤、生殖细胞肿瘤、松果体区肿瘤、髓母细胞瘤或原发性CNS淋巴瘤。

在一些实施方案中，乳腺癌是乳腺腺癌、浸润性乳腺癌、非浸润性乳腺癌、乳腺肉瘤、化生性癌、腺样囊性癌、叶状肿瘤、血管肉瘤、HER2阳性乳腺癌、三阴性乳腺癌或炎性乳腺癌。

在一些实施方案中，宫颈癌是鳞状细胞癌或腺癌。

在一些实施方案中，结直肠癌是结直肠腺癌、原发性结直肠淋巴瘤、胃肠道间质瘤、平滑肌肉瘤、类癌瘤、粘液腺癌、印戒细胞腺癌、胃肠道类癌瘤或黑色素瘤。

在一些实施方案中，食道癌是腺癌或鳞状细胞癌。

在一些实施方案中，胆囊癌是腺癌、乳头状腺癌、腺鳞癌、鳞状细胞癌、小细胞癌或肉瘤。

在一些实施方案中，妊娠滋养细胞疾病(GTD)是葡萄胎、妊娠滋养细胞肿瘤(GTN)、绒毛膜癌、胎盘部位滋养细胞肿瘤(PSTT)或上皮样滋养细胞肿瘤(ETT)。

在一些实施方案中，头颈癌是喉癌、鼻咽癌、下咽癌、鼻腔癌、鼻窦癌、唾液腺癌、口腔癌、口咽癌或扁桃体癌。

在一些实施方案中，霍奇金淋巴瘤是经典霍奇金淋巴瘤、结节硬化型、混合细胞型、富于淋巴细胞型、淋巴细胞消减型或结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤(NLPHL)。

在一些实施方案中，肠癌是小肠癌(small intestine cancer)、小肠癌(smallbowel cancer)、腺癌、肉瘤、胃肠道间质瘤、类癌瘤或淋巴瘤。

在一些实施方案中，肾癌是肾细胞癌(RCC)、透明细胞RCC、乳头状RCC、嫌色细胞RCC、集合管RCC、未分类RCC、移行细胞癌、尿路上皮癌、肾盂癌或肾肉瘤。

在一些实施方案中，白血病是急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、毛细胞白血病(HCL)或骨髓增生异常综合征(MDS)。在一个具体的实施方案中，白血病是AML。

在一些实施方案中，肝癌是肝细胞癌(HCC)、纤维板层样HCC、胆管癌、血管肉瘤或肝转移。

在一些实施方案中，肺癌是小细胞肺癌、小细胞癌、组合小细胞癌、非小细胞肺癌、肺腺癌、鳞状细胞肺癌、大细胞未分化癌、肺结节、转移性肺癌、腺鳞癌、大细胞神经内分泌癌、唾液腺型肺癌、肺类癌、间皮瘤、肺肉瘤样癌或恶性颗粒细胞肺肿瘤。

在一些实施方案中，黑色素瘤是浅表扩散性黑色素瘤、结节性黑色素瘤、肢端雀斑样痣性黑色素瘤、恶性雀斑样痣性黑色素瘤、无色素性黑色素瘤、促纤维增生性黑色素瘤、眼球黑色素瘤或转移性黑色素瘤。

在一些实施方案中，间皮瘤是胸膜间皮瘤、腹膜间皮瘤、心包间皮瘤或睾丸间皮瘤。

在一些实施方案中，多发性骨髓瘤是活动性骨髓瘤或冒烟型骨髓瘤。

在一些实施方案中，神经内分泌肿瘤是胃肠道神经内分泌肿瘤、胰腺神经内分泌肿瘤或肺神经内分泌肿瘤。

在一些实施方案中，非霍奇金淋巴瘤是间变性大细胞淋巴瘤、淋巴母细胞淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、小细胞淋巴细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、前体T淋巴母细胞性白血病/淋巴瘤、急性淋巴细胞白血病(ALL)、成人T细胞淋巴瘤/白血病(ATLL)、毛细胞白血病、B细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、原发性中枢神经系统(CNS)淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)、边缘区淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤、淋巴结边缘区B细胞淋巴瘤、脾边缘区B细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、B细胞非霍奇金淋巴瘤、T细胞非霍奇金淋巴瘤、自然杀伤细胞淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、阿斯伯格综合症、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL)、间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、全身性ALCL、肠病型T细胞淋巴瘤(EATL)或肝脾γ/δT细胞淋巴瘤。

在一些实施方案中，口腔癌是鳞状细胞癌、疣状癌、小唾液腺癌、淋巴瘤、良性口腔肿瘤、嗜酸性肉芽肿、纤维瘤、颗粒细胞瘤、角化棘皮瘤、平滑肌瘤、骨软骨瘤、脂肪瘤、神经鞘瘤、神经纤维瘤、乳头状瘤、尖锐湿疣、疣状黄瘤、化脓性肉芽肿、横纹肌瘤、牙源性肿瘤、白斑、红斑、鳞状细胞唇癌、基底细胞唇癌、口腔癌、牙龈癌或舌癌。

在一些实施方案中，卵巢癌是卵巢上皮癌、粘液性上皮卵巢癌、子宫内膜样上皮卵巢癌、透明细胞上皮卵巢癌、未分化上皮卵巢癌、卵巢低恶性潜能肿瘤、原发性腹膜癌、输卵管癌、生殖细胞瘤、畸胎瘤、无性细胞瘤、卵巢生殖细胞癌、内胚窦瘤、性索-间质瘤、性索-性腺间质瘤、卵巢间质肿瘤、粒层细胞瘤、颗粒-卵泡膜细胞瘤、Sertoli-Leydig细胞瘤、卵巢肉瘤、卵巢癌肉瘤、卵巢腺肉瘤、卵巢平滑肌肉瘤、卵巢纤维肉瘤、库肯勃瘤或卵巢囊肿。

在一些实施方案中，胰腺癌是胰腺外泌腺癌、胰腺内分泌腺癌或胰腺腺癌、胰岛细胞瘤或神经内分泌肿瘤。

在一些实施方案中，前列腺癌是前列腺腺癌、前列腺肉瘤、移行细胞癌、小细胞癌或神经内分泌肿瘤。

在一些实施方案中，鼻窦癌是鳞状细胞癌、粘膜细胞癌、腺样囊性细胞癌、腺泡细胞癌、鼻窦未分化癌、鼻腔癌、副鼻窦癌、上颌窦癌、筛窦癌或鼻咽癌。

在一些实施方案中，皮肤癌是基底细胞癌、鳞状细胞癌、黑色素瘤、Merkel细胞癌、卡波西肉瘤(KS)、光化性角化病、皮肤淋巴瘤或角化棘皮瘤。

在一些实施方案中，软组织癌是血管肉瘤、皮肤纤维肉瘤、上皮样肉瘤、尤因肉瘤、纤维肉瘤、胃肠道间质瘤(GIST)、卡波西肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、去分化脂肪肉瘤(DL)、粘液样/圆形细胞脂肪肉瘤(MRCL)、高分化脂肪肉瘤(WDL)、恶性纤维组织细胞瘤、神经纤维肉瘤、横纹肌肉瘤(RMS)或滑膜肉瘤。

在一些实施方案中，脊椎癌是脊椎转移瘤。

在一些实施方案中，胃癌是胃腺癌、胃淋巴瘤、胃肠道间质瘤、类癌瘤、胃类癌瘤、I型ECL细胞类癌、II型ECL细胞类癌或III型ECL细胞类癌。

在一些实施方案中，睾丸癌是精原细胞瘤、非精原细胞瘤、胚胎癌、卵黄囊癌、绒毛膜癌、畸胎瘤、性腺间质瘤、睾丸间质细胞瘤或睾丸支持细胞瘤。

在一些实施方案中，喉癌是鳞状细胞癌、腺癌、肉瘤、喉癌、咽癌、鼻咽癌、口咽癌、下咽癌、喉癌、喉鳞状细胞癌、喉腺癌、淋巴上皮瘤、梭形细胞癌、疣状癌、未分化癌或淋巴结癌。

在一些实施方案中，甲状腺癌是乳头状癌、滤泡状癌、Hürthle细胞癌、甲状腺髓样癌或未分化癌。

在一些实施方案中，子宫癌是子宫内膜癌、子宫内膜腺癌、子宫内膜样癌、浆液性腺癌、腺鳞癌、子宫癌肉瘤、子宫肉瘤、子宫平滑肌肉瘤、子宫内膜间质肉瘤或未分化肉瘤。

在一些实施方案中，阴道癌是鳞状细胞癌、腺癌、黑色素瘤或肉瘤。

在一些实施方案中，外阴癌是鳞状细胞癌或腺癌。

在一些实施方案中，该癌抗原是血管生成素、BCMA、CD19、CD20、CD22、CD25(IL2-R)、CD30、CD33、CD37、CD38、CD52、CD56、CD123(IL-3R)、cMET、DLL/Notch、EGFR、EpCAM、FGF、FGF-R、GD2、HER2、间皮素、粘连蛋白-4、PDGFRα、RANKL、SLAMF7、TROP2、VEGF或VEGF-R。

在一些实施方案中，癌抗原是CEA、未成熟的层粘连蛋白受体、TAG-72、HPV E6、HPVE7、BING-4、钙活化的氯化物通道2、细胞周期素-B1、9D7、EpCAM、EphA3、Her2/neu、端粒酶、间皮素、SAP-1、surviving、BAGE家族抗原、CAGE家族抗原、GAGE家族抗原、MAGE家族抗原、SAGE家族抗原、XAGE家族抗原、NY-ESO-1/LAGE-1、PRAME、SSX-2、Melan-A、MART-1、Gp100、pmel17、酪氨酸酶、TRP-1、TRP-2、P.多肽、MC1R、前列腺特异性抗原、β-连环蛋白、BRCA1、BRCA2、CDK4、CML66、纤连蛋白、MART-2、p53、Ras、TGF-βRII或MUC1。

在另一方面，本文提供了分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，该分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段包含：

a.第一重链(HC1)；

b.第二重链(HC2)；

c.第一轻链(LC1)；和

d.第二轻链(LC2)，

其中HC1与LC1缔合并且HC2与LC2缔合，并且其中HC1包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2和HCDR3，所述重链互补决定区分别包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQID NO:3的氨基酸序列，并且LC1包含轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，所述轻链互补决定区分别包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的氨基酸序列，以形成第一抗原的结合位点，并且其中HC2和LC2形成第二抗原的结合位点。

在一个实施方案中，分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段包含：HC1，所述HC1包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列；和LC1，所述LC1包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段包含：HC1，所述HC1包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；和LC1，所述LC1包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，第一抗原的结合位点与γδT细胞上TRDV2的结合。

在另一个实施方案中，第二抗原的结合位点与存在于癌细胞的表面上的癌抗原结合。

在另一个实施方案中，该双特异性抗体与存在于γδT细胞的表面上的TRDV2的结合以及与存在于癌细胞的表面上的癌抗原的结合导致该癌细胞的杀伤。

在另一个实施方案中，TRDV2双特异性抗体包含人源化HC1和人源化LC1。

在另一个实施方案中，TRDV2抗体的HC2和LC2与CD33结合。在某些实施方案中，TRDV2抗体的HC2和LC2与CD33的C2结构域结合。在某些实施方案中，TRDV2抗体的HC2和LC2与CD33的V结构域结合。

在另一个实施方案中，双特异性抗体或其抗原结合片段是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。

在一个具体的实施方案中，双特异性抗体或其抗原结合片段是IgG4同种型。

在另一个实施方案中，TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段在体外以小于约500pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

在另一个实施方案中，TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段在体外以小于约300pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

在另一个实施方案中，TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段在体外以小于约160pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

在一个实施方案中，用γδT效应细胞和Kasumi3 AML靶细胞的混合物评估EC₅₀。

在另一个实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约0.01:1至约5:1。

在再另一个实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约0.1:1至约2:1。

在一个具体的实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约1:1。

在另一个实施方案中，TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段是多价的。

在另一个实施方案中，TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段能够结合至少三个抗原。

在另一个实施方案中，TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段能够结合至少五个抗原。

还提供了一种分离的γδT细胞双特异性抗体或其抗原结合片段，该分离的γδT细胞双特异性抗体或其抗原结合片段包含：

a.HC1；

b.HC2；

c.LC1；和

d.LC2，

其中HC1与LC1缔合，并且HC2与LC2缔合，

其中HC1和LC1形成γδT细胞上的用于第一抗原的结合位点，并且

其中HC2和LC2形成用于第二抗原的结合位点。

本文还提供了一种双特异性抗体，该双特异性抗体包含：能够特异性结合T细胞受体γ链的第一构件；和能够特异性结合不是T细胞受体γ链的靶分子的第二构件。

还提供了用于制备能够与多于一个靶分子特异性结合的分子的方法，该分子包括：用于执行获得能够与T细胞受体γ链结合的寡肽或多肽的功能的步骤；用于执行获得能够与靶标结合的寡肽或多肽的功能的步骤；以及用于执行提供能够与T细胞受体γ链和靶分子特异性结合的分子的功能的步骤。

在一个实施方案中，该方法中用于执行获得能够与靶标结合的寡肽或多肽的功能的步骤重复n次，并且该方法还包括用于执行提供能够与T细胞受体γ链和n个靶分子特异性结合的分子的功能的n个步骤，其中n为至少2。

在另一个方面，本文提供了分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其包含：

a.HC1；

b.HC2；

c.LC1；和

d.LC2，

其中HC1与LC1缔合并且HC2与LC2缔合，并且其中HC1包含分别包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且LC1包含分别包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3，以形成特异性结合Vδ2的第一抗原的结合位点，并且其中HC2包含分别包含SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且LC2包含分别包含SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14的氨基酸序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3，以形成特异性结合CD33的第二抗原的结合位点。

在某些实施方案中，形成特异性结合CD33的C2结构域的第二抗原的结合位点。在其他实施方案中，形成特异性结合CD33的V结构域的第二抗原的结合位点。

在一个实施方案中，分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或抗原结合片段包含：HC1，所述HC1包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列；和LC1，所述LC1包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或抗原结合片段包含：HC1，所述HC1包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；和LC1，所述LC1包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或抗原结合片段包含：HC2，所述HC2包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列；和LC2，所述LC2包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或抗原结合片段包含：HC2，所述HC2包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；和LC2，所述LC2包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，TRDV2位于γδT细胞的表面上。

在另一个实施方案中，CD33位于肿瘤细胞或CD34+干细胞的表面上。

在另一个实施方案中，该双特异性抗体与存在于γδT细胞的表面上的TRDV2的结合以及与癌细胞的表面上的CD33的结合导致该癌细胞的杀伤。

在另一个实施方案中，分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段包含人源化HC1和人源化LC1。

在另一个实施方案中，分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或抗原结合片段包含人源化HC2和人源化LC2。

在另一个实施方案中，分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。在一个具体的实施方案中，该双特异性抗体是IgG4同种型。

在另一个实施方案中，分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段在体外以小于约500pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

在另一个实施方案中，分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段在体外以小于约300pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

在另一个实施方案中，分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段在体外以小于约160pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

还提供了制备本文提供的分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或抗原结合片段的方法，该方法包括在产生该双特异性抗体或其抗原结合片段的条件下培养包含编码该抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段的核酸的细胞，并且回收该双特异性抗体或其抗原结合片段。

在另一方面，本文提供了分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原表位结合片段，其中该分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原表位结合片段包含用于第一抗原的结合位点和用于第二抗原的结合位点，其中用于该第一抗原的该结合位点结合γδT细胞上的TRDV2表位，并且用于该第二抗原的该结合位点结合靶细胞的表面上的该第二抗原的表位，并且该γδT细胞上的该TRDV2表位的结合和该靶细胞上的该第二抗原表位的结合导致该靶细胞的杀伤。

在一个实施方案中，TRDV2双特异性抗体或抗原结合片段包含：

a.HC1；

b.HC2；

c.LC1；和

d.LC2，

其中HC1与LC1缔合并且HC2与LC2缔合，并且其中HC1包含分别包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID No:3的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且LC1包含分别包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3，以形成第一抗原的结合位点，并且其中HC2和LC2形成第二抗原表位的结合位点。

在另一个实施方案中，TRDV2双特异性抗体或抗原结合片段包含：HC1，所述HC1包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列；和LC1，所述LC1包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，TRDV2双特异性抗体或抗原结合片段包含：HC1，所述HC1包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；和LC1，所述LC1包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，TRDV2双特异性抗体或抗原结合片段包含人源化HC1和人源化LC。

在另一个实施方案中，TRDV2双特异性抗体或抗原结合片段与CD33表位结合。

在某些实施方案中，TRDV2双特异性抗体或抗原结合片段与CD33 C2结构域表位结合。在其他实施方案中，TRDV2双特异性抗体或抗原结合片段与CD33 V结构域表位结合。

在另一个实施方案中，TRDV2双特异性抗体或抗原结合片段包含：HC2，所述HC2包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列；和LC2，所述LC2包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，TRDV2双特异性抗体或抗原结合片段包含：HC2，所述HC2包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；和LC2，所述LC2包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。在一个具体的实施方案中，双特异性抗体或其抗原结合片段是IgG4同种型。

在另一个实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约0.01:1至约5:1。在另一个实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约0.1:1至约2:1。在一个具体的实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约1:1。

还提供了分离的γδT细胞双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该分离的γδT细胞双特异性抗体或其抗原结合片段包括用于第一抗原表位的结合位点和用于第二抗原表位的结合位点，其中用于该第一抗原表位的该结合位点结合γδT细胞上的第一抗原，并且用于该第二抗原表位的该结合位点结合靶细胞的表面上的该第二抗原表位，并且该γδT细胞上的该第一抗原表位的结合和该靶细胞上的该第二抗原表位的结合导致该靶细胞的杀伤。

在另一方面，本文提供了分离的编码TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段的核酸，该分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段包含：

a.HC1；

b.HC2；

c.LC1；和

d.LC2，

其中HC1与LC1缔合并且HC2与LC2缔合，并且其中HC1包含分别包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID No:3的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且LC1包含分别包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3，以形成第一抗原的结合位点，并且其中HC2和LC2形成第二抗原的结合位点。

在一个实施方案中，该分离的核酸编码TRDV2双特异性抗体，该双特异性抗体包含：HC1，该HC1包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列；和LC1，该LC1包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，该分离的核酸编码TRDV2双特异性抗体，该双特异性抗体包含：HC1，所述HC1包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；和LC1，所述LC1包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，该分离的核酸编码TRDV2双特异性抗体，该双特异性抗体包含与γδT细胞上的TRDV2结合的第一抗原的结合位点。

在另一个实施方案中，该分离的核酸编码TRDV2双特异性抗体，该双特异性抗体包含与癌细胞的表面上存在的癌抗原结合的第二抗原的结合位点。

在另一个实施方案中，该分离的核酸编码TRDV2双特异性抗体，其中该双特异性抗体与存在于γδT细胞的表面上的TRDV2的结合以及与存在于癌细胞的表面上的癌抗原的结合导致该癌细胞的杀伤。

在另一个实施方案中，该分离的核酸编码TRDV2双特异性抗体，其中HC1和LC1是人源化的。

在另一个实施方案中，该分离的核酸编码TRDV2双特异性抗体，其中HC2和LC2与CD33结合。在某些实施方案中，HC2和LC2与CD33 C2结构域表位结合。在某些实施方案中，HC2和LC2与CD33 V结构域表位结合。

在另一个实施方案中，该分离的核酸编码TRDV2双特异性抗体，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。

在另一个实施方案中，该分离的核酸编码TRDV2双特异性抗体，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段在体外以小于约500pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

在另一个实施方案中，该分离的核酸编码TRDV2双特异性抗体，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段在体外以小于约300pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

在另一个实施方案中，该分离的核酸编码TRDV2双特异性抗体，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段在体外以小于约160pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

在另一个实施方案中，该分离的核酸编码TRDV2双特异性抗体，其中用γδT效应细胞和Kasumi3 AML靶细胞的混合物评估EC₅₀。

在另一个实施方案中，该分离的核酸编码TRDV2双特异性抗体，其中效应细胞与靶细胞的比率为约0.01:1至约5:1。在一个实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约0.1:1至约2:1。在再另一个实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约1:1。

在另一个实施方案中，该分离的核酸编码TRDV2双特异性抗体，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段是多价的。

在另一个实施方案中，该分离的核酸编码TRDV2双特异性抗体，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段能够结合至少三个抗原。

在另一个实施方案中，该分离的核酸编码TRDV2双特异性抗体，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段能够结合至少五个抗原。

还提供了包含本文提供的分离的核酸的载体。

还提供了包含本文提供的载体的宿主细胞。

还提供了包含本文提供的载体及其包装的试剂盒。

在另一方面，本文提供了包含分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段及药学上可接受的载剂的药物组合物，该分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段包含：

a.HC1；

b.HC2；

c.LC1；和

d.LC2，

在一个实施方案中，该药物组合物包含双特异性抗体，该双特异性抗体包含：HC1，该HC1包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列；和LC1，该LC1包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，该药物组合物包含双特异性抗体，该双特异性抗体包含：HC1，所述HC1包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；和LC1，所述LC1包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，该药物组合物包含双特异性抗体，该双特异性抗体包含与γδT细胞上的TRDV2结合的第一抗原的结合位点。

在另一个实施方案中，该药物组合物包含双特异性抗体，其中第二抗原的结合位点与癌细胞的表面上存在的癌抗原结合。

在另一个实施方案中，该药物组合物包含双特异性抗体，其中该双特异性抗体与存在于γδT细胞的表面上的TRDV2的结合以及与存在于癌细胞的表面上的癌抗原的结合导致该癌细胞的杀伤。

在另一个实施方案中，该药物组合物包含双特异性抗体，其中HC1和LC1是人源化的。

在另一个实施方案中，该药物组合物包含双特异性抗体，其中HC2和LC2与CD33结合。在某些实施方案中，该药物组合物包含双特异性抗体，其中HC2和LC2与CD33 C2结构域表位结合。在其他实施方案中，该药物组合物包含双特异性抗体，其中HC2和LC2与CD33 V结构域表位结合。

在另一个实施方案中，该药物组合物包含双特异性抗体，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。

还提供了向癌细胞引导表达Vδ2的γδT细胞的方法，该方法包括使表达Vδ2的γδT细胞与本文提供的药物组合物接触，其中将表达Vδ2的γδT细胞与药物组合物接触向癌细胞引导表达Vδ2的γδT细胞。

还提供了抑制在细胞表面上表达癌抗原的癌细胞的生长或增殖的方法，该方法包括使癌细胞与本文提供的药物组合物接触，其中使癌细胞与药物组合物接触抑制癌细胞的生长或增殖。

在一个实施方案中，该癌细胞在存在表达Vδ2的γδT细胞的同时与抗TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段接触。

还提供了用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，该方法包括：

a.鉴定需要癌症治疗的受试者；以及

b.向有需要的受试者施用本文提供的药物组合物，

其中向该有需要的受试者施用该药物组合物治疗该受试者的癌症。

还提供了活化表达Vδ2的γδT细胞的方法，该方法包括使表达Vδ2的γδT细胞与本文提供的药物组合物接触，其中使表达Vδ2的γδT细胞与该药物组合物接触导致与表达Vδ2的对照γδT细胞相比CD69、CD25和/或颗粒酶B表达增加。

还提供了产生本文提供的药物组合物的方法，该方法包括将该双特异性抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的载剂组合以获得该药物组合物。

附图说明

结合附图进行阅读时，能够更好地理解前述发明内容和以下对本专利申请的具体实施方案的详细说明。但是，应当理解，本专利申请不限于附图中示出的精确实施方案。

图1示出了展示示例性的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体结合以将γδT细胞募集到CD33+的癌细胞并诱导癌细胞死亡的示意图。

图2示出了通过SDS-PAGE评估(还原和非还原凝胶)时VG56双特异性抗体的完整性。

图3示出了展示唑来膦酸选择性地从全外周血单核细胞(PBMC)扩增Vγ9Vδ2细胞的图。

图4示出了抗CD33抗体(克隆C33B904)与MOLM-13肿瘤细胞系的结合，如通过FACS测量的。对于MOLM-13的EC₅₀(高受体密度)为134.3nM。

图5示出了抗CD33抗体(克隆C33B904)与Kasumi-1肿瘤细胞系的结合，如通过FACS测量的。对于Kasumi-1的EC₅₀(中等密度)为82.2nM。

图6示出了抗CD33抗体(克隆C33B904)与OCI-AML-3肿瘤细胞系的结合，如通过FACS测量的。对于OCI-AML-3的EC₅₀(低表面密度)为16.4nM。

图7示出了Vδ2xCD33双特异性抗体介导的对Kasumi-3细胞的基于全PBMC的细胞毒性，E:T比率为1:1。对于Vδ2xCD33(VG56)的EC₅₀值为92.8pM。

图8示出了展示在1:1的效应细胞与靶细胞比率下抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体介导的γδT细胞对表达CD33的Kasumi-3细胞的细胞毒性的图。效应细胞是从PBMC中分离的富集γδT细胞。

图9示出了展示在1:1的效应细胞与靶细胞比率下抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体介导的γδT细胞对表达CD33的Kasumi-3细胞的细胞毒性的图。效应细胞是从PBMC中分离的富集γδT细胞。

具体实施方式

T细胞是最丰富的(占血液淋巴细胞的约75％)和有效的免疫杀伤细胞。效应T细胞在抗癌免疫应答中的作用得到了体外研究的有力支持，并且观察到CD8+T细胞在几种类型的癌症中的高浸润与有利的临床预后相关。

最近，已经做出了实质性进展以利用T细胞的治疗潜力治疗癌症。目前在临床试验中探索重定向T细胞以裂解癌细胞的两种不同策略：1)通过使用与癌细胞结合的抗体片段，离体用嵌合抗原受体(CAR)工程改造的供体T细胞，和2)由一条臂和第二臂组成的重组双特异性蛋白治疗剂，一条臂与T细胞上的CD3结合，而第二臂与癌症相关抗原结合。关注后者，双特异性蛋白允许T细胞与癌细胞有效接合。这导致由癌症结合的双特异性分子诱导的CD3辅助受体刺激，其引发MHC非依赖性多克隆T细胞活化和有效的癌细胞裂解。这种方法绕过一些癌症特异性耐受性机制，并允许募集的T细胞杀伤癌细胞。

实际上，CD3双特异性蛋白中的一种，博纳吐单抗(blinatumomab)，一种CD3/CD19双特异性T细胞接合剂(BiTE)已经被FDA批准用于治疗难治性B急性淋巴细胞白血病(ALL)。尽管BiTE类似分子如何工作的作用机制仍未完全了解，但确实提供了双特异性试剂可以诱导两个细胞之间的人工裂解突触形成的证据，这模拟了T细胞对癌细胞天然存在的裂解介导的杀伤。用嵌合抗原受体(CAR)T细胞和博纳吐单抗进行的临床前实验已经验证了该概念并且为这种方法提供了有力的基本原理，并且临床试验现在已经提供了在人类患者中的概念验证(POC)。由于这种方法的临床成功，CD3引导的双特异性抗体的领域正快速发展，并且多种抗体形式正用于生成靶向大量癌抗原的治疗剂。一些形式保持减轻用博纳吐单抗所看到的关键问题的希望，例如，博纳吐单抗从循环中快速清除并且在4周治疗循环期间需要连续静脉输注。为更长的血清半衰期设计了新的形式，从而避免连续输注。

由于T细胞介导的应答极其有效，因此可以通过诱导细胞因子风暴或将T细胞引导到表达低水平靶抗原的健康组织而产生严重的副作用。目前在临床试验中的大多数CD3双特异性蛋白是靶向受体，其中表达限于造血谱系(CD19、CD20、CD123等)或高度特异性癌抗原，诸如CEA、PSMA和MHCI-gp100。因此，基于CD3的重定向的适用性可限于具有癌症特异性的抗原或血液学癌症，从而阻碍了对许多实体癌类型的应用。另外，用目前可用的技术进行的CD3引导的T细胞重定向由于各种原因在实体癌中尚未显示出很多功效(例如，募集所有类型的CD3+T细胞，包括未成熟的、CD4+、Treg、pan CD8(无CTL)、耗竭T细胞，可能导致低效的癌症去除；早期T细胞活化，可能导致窄的治疗指数；未达最佳的T细胞活化；T细胞耗竭或T细胞活化诱导的死亡；诱导可以限制最佳给药水平的细胞因子释放综合征；抑制癌细胞凋亡；抗癌适应性免疫应答的更少激活；与其他免疫疗法组合的能力有限，等等)。

尽管经由CD3重定向T细胞是有吸引力的，但是因为产生了绕过经典抗原特异性T细胞应答的多克隆细胞毒性应答，所以产生了两个关键问题：1)CD3+T细胞可以不加区别地受到刺激，包括各种免疫调节和免疫阻抑T细胞，所述免疫调节和免疫阻抑T细胞被描述为在免疫逃避中发挥积极的作用，以及2)可以通过诱导细胞因子风暴而引起可导致严重副作用的Pan T细胞活化。因此，经由CD3重定向可能潜在地产生未达最佳的功效和窄治疗指数。为了减轻CD3重定向局限中的一些局限，必须寻求将T细胞重定向到癌细胞的替代性策略。一种方法是选择仅能够裂解癌细胞而不是不加区别地刺激和募集pan-T细胞的细胞毒性细胞(亚群)的重定向。

募集T细胞的另一种方式是靶向T细胞的特定亚群。最近，γδT细胞在癌症免疫疗法领域中提供了极大的兴趣。这些因其先天性免疫而众所周知的非常规T细胞，仅代表一小部分的外周CD3+T细胞(1％-5％)，但构成上皮组织中T细胞的主要亚群(20％-50％)。

循环γδT细胞主要表达Vγ9(TRGV9)和Vδ2(TRDV2)链的异二聚体，而组织γδT细胞优先表达与不同Vγ链缔合的Vδ1链。

在人类中，γδT细胞赋有有效的抗癌功能(高细胞毒性和干扰素γ分泌)。而且，γδT细胞能够进行吞噬，一种先天髓系细胞先前独有的功能，并且表现为αβT细胞的有效抗原呈递细胞并且诱导适应性免疫应答。已经证实γδT细胞会浸润癌症，但其存在的临床相关性仍受争论。迄今为止，所有研究努力已经集中于Vγ9Vδ2T细胞，并且主要旨在活化体内或离体的γδT细胞进行过继转移。尽管临床研究尚不丰富，但初步数据突出了考虑γδT细胞亚群在基于T细胞的免疫疗法中的重要性。

因此，在这样的背景下，寻求有助于克服基于CD3的重定向的局限，避免T细胞的泛活化并且通过选择性募集γδT细胞而诱导有效的癌症裂解的方法。具体地，以双特异性抗体疗法为中心的策略，其中一条臂与癌症相关抗原结合而另一条臂与γδT细胞表达的TRDV2受体结合以募集并激活γδT细胞，可以通过在癌症治疗中具有与真实的细胞毒性T细胞上的抗原和癌细胞上表达的抗原结合的双特异性抗体来解决这种未满足的医疗需求。

背景以及说明书全篇中引用或描述了各种出版物、文章和专利；这些参考文献中的每一者全文均以引用方式并入本文。本说明书中包括的对文件、行为、材料、装置、文章等的讨论旨在为本发明提供上下文。此类讨论并不是承认这些事项中的任一事项或全部事项均相对于所公开或受权利要求书保护的任何发明形成现有技术的一部分。

除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同。否则，本文所用的某些术语具有本说明书中所述的含义。

应该注意的是，除非上下文清楚地指明，否则如本文和所附权利要求中所用的单数形式“一个/一种”和“所述/该”包括复数引用物。

除非另有说明，否则任何数值，例如本文所述的浓度或浓度范围，应理解为在所有情况下均由术语“约”修饰。因此，数值通常包括所述值的±10％。例如，1mg/mL的浓度包括0.9mg/mL至1.1mg/mL。同样，1％至10％(w/v)的浓度范围包括0.9％(w/v)至11％(w/v)。除非上下文另有明确指示，否则如本文所用，使用的数值范围明确地包括所有可能的子范围、该范围之内的所有单个数值，包括此类范围之内的整数和该范围之内的分数。

除非另有说明，否则在一系列元素之前的术语“至少”应理解为指代系列中的每个元素。本领域的技术人员将会认识到、或仅使用常规实验就能够确定本文所述发明的具体实施方案的多种等同物。此类等同物旨在由本发明所涵盖。

如本文所用，术语“包含”、“包括”、“具有”或“含有”或其任何其他变型应被理解为是指包括指明的整数或整数组，但不排除任何其他整数或整数组，并且旨在是非排他性的或开放式的。例如，包含元素列表的组合物、混合物、过程、方法、制品或设备不一定仅限于那些元素，而是可以包括这些组合物、混合物、过程、方法、制品或设备未明确列出或固有的其他元素。此外，除非明确地指明相反，否则“或”是指包括性的或而不是指排他性的或。例如，条件A或B由以下任一项满足：A为真(或存在)而B为假(或不存在)，A为假(或不存在)而B为真(或存在)，以及A和B两者为真(或存在)。

如本文所用，多个列举的要素之间的连接术语“和/或”被理解为包含单个选项和组合选项两者。例如，在两个要素由“和/或”连接的情况下，第一种选项是指在没有第二个要素的情况下适用第一个要素。第二种选项是指在没有第一个要素的情况下适用第二个要素。第三种选项是指适合一起使用第一要素和第二要素。这些选项中的任一种均被理解为落在含义内，并且因此满足如本文所用的术语“和/或”的要求。多于一种选项的并行适用性也被理解为落在含义内，并且因此满足术语“和/或”的要求。

如本文所用，在说明书和权利要求书中通篇使用的术语“由……组成”表示包括任何列举的整数或整数组，但不能将附加的整数或整数组添加到指定的方法、结构或组成中。

如本文所用，在说明书和权利要求书中通篇使用的术语“基本上由……组成”表示包括任何列举的整数或整数组，并且任选地包括不会实质上改变指定方法、结构或组成的基本或新型特性的任何列举的整数或整数组。参见M.P.E.P.§2111.03。

如本文所用，“受试者”是指任何动物，诸如哺乳动物，诸如人。如本文所用，术语“哺乳动物”涵盖任何哺乳动物。哺乳动物的示例包括但不限于奶牛、马、绵羊、猪、猫、狗、小鼠、大鼠、兔子、豚鼠、猴子、人等。在一个具体的实施方案中，哺乳动物是人。

还应当理解，当提及优选发明的部件的尺寸或特性时，本文使用的“约”、“大约”、“大致”、“基本上”和类似的术语表示所描述的尺寸/特性不是严格的边界或参数，并且不排除在功能上相同或相似的微小变化，如本领域普通技术人员所理解的。至少，包括数值参数的这种参考将包括使用本领域已接受的数学和工业原理(例如，舍入、测量或其他系统误差、制造公差等)的变化，不会改变最低有效数字。

在两条或更多条核酸或多肽序列(例如，抗TRDV2/抗癌相关抗原双特异性抗体和编码它们的多核苷酸、抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体和编码它们的多核苷酸、TRDV2多肽和编码它们的TRDV2多核苷酸、CD33多肽和编码它们的CD33多核苷酸)的上下文中，术语“相同”或百分比“同一性”是指当进行比较和比对以获得最大对应时，相同的或者具有相同的氨基酸残基或核苷酸的指定百分比的两条或更多条序列或子序列，如使用以下序列比较算法之一或通过目视检查所测量的。

对于序列比对，通常将一个序列作为参考序列，将测试序列与其进行对比。当使用序列比对算法时，将测试序列和参考序列输入计算机中，指定子序列坐标(如果必要的话)，并指定序列算法的程序参数。然后，序列比较算法基于指定的程序参数来计算对于测试序列相对于参考序列的序列同一性百分比。

用于比较的序列的最佳比对可例如通过Smith&Waterman的局部同源性算法进行(Adv.Appl.Math.第2卷：第482页，1981年)，通过使用Needleman&Wunsch的同源比对算法进行，J Mol.Biol.第48卷：第443页，1970年)，通过搜索Pearson&Lipman的相似性方法进行(Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 85：2444(1988))，通过这些算法(GAP，BESTFIT，FASTA和TFASTA，在威斯康星州遗传学软件包，遗传学计算小组，威斯康辛州，麦迪逊，科学街区575号(575Science Dr.,Madison,WI)计算机化实施，或通过目测(大体参见，《分子生物学实验室指南》(Current Protocols in Molecular Biology)，F.M.Ausubel等人编辑，《实验室指南》，格林尼出版协会和约翰威利父子公司的合资企业(1995年增补版)(Ausubel))。

适用于确定序列同一性百分比和序列相似性的算法的示例为BLAST和BLAST 2.0算法，其分别在Altschul等人，(1990)J.Mol.Biol.第215卷，第403-410页和Altschul等人(1997)Nucleic Acids Res.25:3389-3402中有所描述。用于执行BLAST分析的软件可通过国家生物技术信息中心公开获得。该算法涉及首先通过识别查询序列中长度为W的短字词来识别高评分序列对(HSP)，当与数据库序列中相同长度的字词比对时，该短字词匹配或满足一些正值阈值分数T。T被称为邻近字词分数阈值(Altschul等人，出处同上)。这些初始邻近字词命中充当用于发起搜索以找到包含它们的较长HSP的种子。然后将字词命中沿每个序列在两个方向上延伸，只要可增加累积的比对分数。

对于核苷酸序列，使用参数M(一对匹配残基的奖励分数；始终>0)和N(错配残基的处罚分数；始终<0)计算累积分数。对于氨基酸序列，评分矩阵用于计算累积分数。字词命中在每个方向上的延伸在以下情况下停止：累积比对分数从其最大实现值下降数量X；累积分数由于一个或多个负分数残基比对的累积而变为零或更低；或到达任一序列的末端。BLAST算法参数W、T和X确定比对的灵敏度和速度。BLASTN程序(用于核苷酸序列)默认使用字长(W)11、期望值(E)10、M＝5、N＝-4以及两条链的比较。对于氨基酸序列，BLASTP程序默认使用字长(W)3、期望值(E)10以及BLOSUM62评分矩阵(参见Henikoff和Henikoff，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:10915(1989))。

除了计算序列同一性百分比之外，BLAST算法还对两条序列之间的相似性进行统计分析(参见例如Karlin和Altschul，Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA90:5873-5787(1993))。BLAST算法提供的一种相似性量度是最小总和概率(P(N))，其提供了两条核苷酸或氨基酸序列之间偶然发生匹配的概率的指示。例如，如果在测试核酸与参考核酸的比较中最小总和概率小于约0.1，诸如小于约0.01，或小于约0.001，则认为核酸类似于参考序列。

两个核酸序列或多肽基本上相同的另一个指示是由第一核酸编码的多肽与由第二核酸编码的多肽免疫地交叉反应，如下所述。因此，多肽通常与第二多肽基本上相同，例如，其中两个肽仅通过保守置换而不同。两个核酸序列基本上相同的另一个指示是，两个分子在严格条件下彼此杂交。

如本文所用，同义地称为“核酸分子”、“核苷酸”或“核酸”的术语“多核苷酸”是指任何多核糖核苷酸或多脱氧核糖核苷酸，其可为未修饰的RNA或DNA或者修饰的RNA或DNA。“多核苷酸”包括但不限于单链和双链的DNA、为单链区和双链区的混合物的DNA、单链和双链的RNA以及为单链区和双链区的混合物的RNA、包含可为单链或更典型地为双链或者为单链区和双链区的混合物的DNA和RNA的杂合分子。此外，“多核苷酸”是指包含RNA或DNA或RNA和DNA两者的三链区。术语多核苷酸还包括含有一个或多个修饰的碱基的DNA或RNA，以及具有出于稳定性或其他原因而被修饰的主链的DNA或RNA。“修饰的”碱基包括例如三苯甲基化的碱基和稀有碱基诸如肌苷。可以对DNA和RNA进行多种修饰；因此，“多核苷酸”包括通常天然存在的多核苷酸的化学修饰、酶修饰或代谢修饰形式，以及病毒和细胞特有的DNA和RNA的化学形式。“多核苷酸”也包括相对短的核酸链，通常被称为寡核苷酸。

如本文所用，术语“载体”是复制子，其中可以可操作地插入另一核酸区段以引起该区段的复制或表达。

如本文所用，术语“宿主细胞”是指包含本文提供的核酸分子的细胞。“宿主细胞”可为任何类型的细胞，例如，原代细胞、培养中的细胞或来自细胞系的细胞。在一个实施方案中，“宿主细胞”是用本文提供的核酸分子转染的细胞。在另一个实施方案中，“宿主细胞”是此类经转染细胞的后代或潜在后代。细胞的后代可以或不可与亲本细胞相同，例如，由于可在后代中发生的突变或环境影响或者由于核酸分子整合到宿主细胞基因组中。

如本文所用，术语“表达”是指基因产物的生物合成。该术语涵盖基因到RNA的转录。该术语还涵盖RNA到一个或多个多肽的翻译，并且还涵盖所有天然存在的转录后和翻译后修饰。表达的双特异性抗体可处于宿主细胞的细胞质内，处于胞外环境诸如细胞培养物的生长培养基中，或锚定至细胞膜。

如本文所用，术语“肽”、“多肽”或“蛋白质”可指由氨基酸组成的分子，并且可被本领域的技术人员识别为蛋白质。本文使用氨基酸残基的常规单字母或三字母代码。术语“肽”、“多肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用，指任何长度的氨基酸的聚合物。该聚合物可为直链或支链的，其可包含经修饰的氨基酸，并且其可夹杂有非氨基酸。该术语还涵盖已被天然修饰或通过干预修饰的氨基酸聚合物；天然修饰或干预修饰为例如二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作或修饰，诸如与标记组分缀合。该定义还包括例如含有一种或多种氨基酸类似物(包括例如非天然氨基酸等)以及本领域已知的其他修饰的多肽。

本文所述的肽序列根据通常的惯例书写，其中肽的N端区在左侧，并且C端区在右侧。虽然氨基酸的同分异构形式是已知的，但除非另外明确指明，它是所表示的氨基酸的L形式。

抗体

在某些方面，本文提供了分离的抗TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段、编码所述抗体的核酸和表达载体、含有所述载体的重组细胞，以及包含所述抗体的组合物。

在某些实施方案中，提供了分离的抗TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段、编码所述抗体的核酸和表达载体、含有所述载体的重组细胞，以及包含所述特异性抗体的组合物。还提供了制备这些抗体的方法，以及使用这些抗体治疗疾病的方法。本文公开的抗体具有一种或多种期望的功能特性，包括但不限于与TRDV2的高亲和力结合或对TRDV2的高特异性。在某些实施方案中，本文公开的抗体在单独或与其他疗法组合施用给受试者时具有治疗或预防疾病或病症的能力。在某些实施方案中，TRDV2抗体包含TRDV2抗原结合片段。在一些实施方案中，TRDV2抗体由TRDV2抗原结合片段组成。在其他实施方案中，TRDV2抗体是多特异性TRDV2抗体。在其他实施方案中，多特异性TRDV2抗体是双特异性TRDV2抗体。虽然本文例示了TRDV2抗体，但是应当理解，也考虑了与TRDV2结合的其他分子。此类分子包括其他替代结合剂，包括本文提供的抗体和其他抗体结合片段的等同物。另外，虽然本文例示了TRDV2双特异性抗体，但是应当理解，也考虑了其他TRDV2多特异性抗体。在某些实施方案中，TRDV2双特异性抗体包括在TRDV2多特异性抗体中。在某些实施方案中，TRDV2多特异性抗体是TRDV2双特异性抗体。

在其他方面，本文提供了分离的抗TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段、编码所述抗体的核酸和表达载体、含有所述载体的重组细胞，以及包含所述双特异性抗体的组合物。还提供了制备这些抗体的方法，以及使用这些抗体治疗包括癌症的疾病的方法。本文公开的抗体具有一种或多种期望的功能特性。在一些实施方案中，本文提供的双特异性抗体与TRDV2具有高亲和力结合。在一些实施方案中，本文提供的双特异性抗体对第二靶标抗原具有高亲和力结合。在一些实施方案中，本文提供的双特异性抗体对TRDV2具有高特异性。在一些实施方案中，本文提供的双特异性抗体对第二靶标抗原具有高特异性。在一些实施方案中，本文提供的双特异性抗体在单独施用时具有治疗或预防疾病或病症的能力。在一些实施方案中，本文提供的双特异性抗体在与其他疗法组合施用时具有治疗或预防疾病或病症的能力。在一个具体的实施方案中，该多特异性抗体是双特异性抗体。在一些实施方案中，TRDV2抗体包含其抗原结合片段。

如本文所用，术语“抗体”广义地使用，并且包括免疫球蛋白或抗体分子，包括人抗体、人源化抗体、复合抗体和嵌合抗体以及单克隆或多克隆抗体片段。一般来讲，抗体是蛋白质或肽链，其对于特定抗原表现出结合特异性。抗体结构是众所周知的。根据重链恒定结构域氨基酸序列，可将免疫球蛋白指定为五大类(即IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)。IgA和IgG进一步亚分类为同种型IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。因此，本文提供的抗体可为五种主要种类或对应的亚类中的任一种。在具体的实施方案中，本文提供的抗体是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。基于其恒定结构域的氨基酸序列，可将脊椎物种的抗体轻链指定为两种完全不同的类型即κ和λ中的一种。因此，本文提供的抗体可包含κ或λ轻链恒定结构域。根据具体实施方案，本文提供的抗体包括来自小鼠抗体或人抗体的重链恒定区和/或轻链恒定区。

除了重链和轻链恒定结构域之外，抗体还含有由轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)组成的抗原结合区，其中每个可变区含有三个结构域(即互补决定区1(CDR1)、CDR2和CDR3)。“CDR”是指免疫球蛋白(Ig或抗体)VHβ-片框架的非框架区内的三个高变区(HCDR1、HCDR2或HCDR3)中的一个高变区，或抗体VLβ-片框架的非框架区内的三个高变区(LCDR1、LCDR2或LCDR3)中的一个高变区。因此，CDR是散布在框架区序列内的可变区序列。CDR区是本领域技术人员熟知的并且已由例如Kabat定义为抗体可变(V)结构域内的最超变区(Kabat等人，J.Biol.Chem.第252卷：第6609-6616页，1977年；Kabat，Adv.蛋白质Chem.第32卷：第1-75页(1978年))。Chothia在结构上也将CDR区序列定义为那些不属于保守β-折叠框架的残基，因此能够适应不同的构象(Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.第196卷：第901-917页(1987年))。两种术语都是本领域公认的。CDR区序列也由AbM、Contact和IMGT定义。示例性CDR区序列在本文中例如在序列表和以下实施例中提供的表中示出。规范抗体可变区内CDR的位置已经通过比较许多结构来确定(Al-Lazikani等人，J.Mol.Biol.第273卷：第927-948页(1997年)；Morea等人，Methods，第20卷：第267-279页，2000年)。因为不同抗体中高变区内的残基数量不同，所以相对于规范位置的另外的残基通常在规范可变区编号方案中的残基编号旁边用a、b、c等编号(Al-Lazikani等人，出处同上，1997年)。这种命名对本领域技术人员来说同样是熟知的。

轻链可变区CDR1结构域在本文中可互换地称为LCDR1或VL CDR1。轻链可变区CDR2结构域在本文中可互换地称为LCDR2或VL CDR2。轻链可变区CDR3结构域在本文中可互换地称为LCDR3或VL CDR3。重链可变区CDR1结构域在本文中可互换地称为HCDR1或VH CDR1。重链可变区CDR2结构域在本文中可互换地称为HCDR2或VH CDR2。重链可变区CDR1结构域在本文中可互换地称为HCDR3或VH CDR3。

当本文使用时，术语“高变区”(诸如VH或VL)当在本文中使用时是指抗体可变区中序列高变和/或形成结构上限定的环的区。通常，抗体包含六个高变区；VH中三个(HCDR1、HCDR2、HCDR3)并且VL中三个(LCDR1、LCDR2、LCDR3)。许多高变区描述正在使用中并且包含在本文中。“Kabat”CDR基于序列可变性并且是最常用的(参见例如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,MD.1991年)。“Chothia”相反是指结构环的位置(参见例如，Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.第196卷：第901-917页(1987年))。当使用Kabat编号惯例编号时，Chothia CDR-HCDR1环的末端在H32和H34之间变化，这取决于环的长度(这是因为Kabat编号方案将插入置在H35A和H35B处；如果35A和35B都不存在，则环在32处结束；如果仅存在35A，则环在33处结束；如果35A和35B都存在，则环在34处结束)。“AbM”高变区代表Kabat CDR和Chothia结构环之间的折衷，并被Oxford Molecular的AbM抗体建模软件使用(参见例如Martin，“Antibody Engineering”，第2卷，第3章，Springer Verlag)。“Contact”高变区是基于对可获得的复杂晶体结构的分析。

最近，通用编号系统已经开发出来并被广泛采用，即ImMunoGeneTics(IMGT)Information

(Lafranc等人，Dev.Comp.Immunol.第27卷第1期：第55-77页，2003年)。IMGT是专门研究人和其他脊椎动物的免疫球蛋白(IG)、T细胞受体(TR)和主要组织相容性复合物(MHC)的整合信息系统。在本文中，CDR根据氨基酸序列以及轻链或重链内的位置两者来引用。由于CDR在免疫球蛋白可变结构域结构内的“位置”在物种之间是保守的，并且存在于称为环的结构中，因此通过使用根据结构特征比对可变结构域序列的编号系统，CDR和构架残基容易鉴定。该信息可用于将来自一个物种的免疫球蛋白的CDR残基移植和替换到通常来自人抗体的受体框架中。Honegger和Plückthun开发了一个另外的编号系统(AHon)，J.Mol.Biol.第309卷：第657-670页，2001年。编号系统之间的对应关系，包括例如Kabat编号和IMGT唯一编号系统，为本领域技术人员所熟知(参见例如Kabat，出处同上；Chothia和Lesk，出处同上；Martin，出处同上；Lefranc等人，出处同上)。本文所示的示例性系统结合了Kabat和Chothia。

	示例性	IMGT	Kabat	AbM	Chothia	Contact
							V<sub>H</sub> CDR1	26-35	27-38	31-35	26-35	26-32	30-35
V<sub>H</sub> CDR2	50-65	56-65	50-65	50-58	53-55	47-58
							V<sub>H</sub> CDR3	95-102	105-117	95-102	95-102	96-101	93-101
V<sub>L</sub> CDR1	24-34	27-38	24-34	24-34	26-32	30-36
							V<sub>L</sub> CDR2	50-56	56-65	50-56	50-56	50-52	46-55
V<sub>L</sub> CDR3	89-97	105-117	89-97	89-97	91-96	89-96

高变区可包括如下“扩展高变区”：VL中的24-36或24-34(LCDR1)、46-56或50-56(LCDR2)和89-97或89-96(LCDR3)，以及VH中的26-35或26-35A(HCDR1)、50-65或49-65(HCDR2)和93-102、94-102或95-102(HCDR3)。本文提供了反映上述编号方案中的每一种的CDR序列，包括在序列表中。

术语“恒定区”或“恒定结构域”是指轻链和重链的羧基末端部分，其不直接参与抗体与抗原的结合，但表现出各种效应子功能，诸如与Fc受体的相互作用。这些术语是指免疫球蛋白分子的相对于免疫球蛋白的其他部分(包含抗原结合位点的可变区)具有更保守的氨基酸序列的部分。恒定区可包含重链的CH1、CH2和CH3区和轻链的CL区。

术语“框架”或“FR”残基是侧接CDR的那些可变区残基。FR残基存在于例如嵌合的、人源化的、人的结构域抗体、双价抗体、线性抗体和双特异性抗体中。FR残基是除高变区残基或CDR残基之外的那些可变结构域残基。

如本文所用，术语“分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，与TRDV2特异性结合的分离的抗体基本上不含不与Vδ2结合的抗体；与第二靶标(例如，CD33)特异性结合的分离的抗体基本上不含不与第二靶标(例如，CD33)结合的抗体)。另外，分离的抗体可基本上不含其他细胞物质和/或化学物质。

如本文所用，术语“单克隆抗体”是指从一组基本上均质的抗体获得的抗体，即，除了可能以少量存在的可能天然存在的突变之外，构成该组的各个抗体是相同的。本文提供的单克隆抗体可以通过杂交瘤方法、噬菌体展示技术、单淋巴细胞基因克隆技术或通过重组DNA方法制备。例如，单克隆抗体可以由包括获自转基因非人动物诸如转基因小鼠或大鼠的B细胞的杂交瘤产生，转基因非人动物具有包含人重链转基因和轻链转基因的基因组。

如本文所用，术语“抗原结合片段”是指抗体片段，诸如像，双抗体、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv片段、二硫键稳定Fv片段(dsFv)、(dsFv)₂、双特异性dsFv(dsFv-dsFv’)、二硫键稳定双抗体(ds双抗体)、单链抗体分子(scFv)、单结构域抗体(sdAb)、scFv二聚体(二价双价抗体)、由包含一个或多个CDR的抗体的一部分形成的多特异性抗体、骆驼化单结构域抗体、纳米抗体、结构域抗体、二价结构域抗体或与抗原结合但不包含完整抗体结构的任何其他抗体片段。抗原结合片段能够结合至与亲本抗体或亲本抗体片段结合的抗原相同的抗原。根据具体实施方案，抗原结合片段包含轻链可变区、轻链恒定区和重链的Fd区段。根据其他具体实施方案，抗原结合片段包含Fab和F(ab’)。

如本文所用，术语“单链抗体”是指本领域中的常规单链抗体，其包含通过约15个至约20个氨基酸的短肽连接的重链可变区和轻链可变区。如本文所用，术语“单域抗体”是指本领域中的常规单域抗体，这种单域抗体包含重链可变区和重链恒定区或者仅包含重链可变区。

如本文所用，术语“人抗体”是指由人产生的抗体或具有与使用本领域已知的任何技术制备的人产生的抗体对应的氨基酸序列的抗体。人抗体的该定义包括完整或全长抗体、其片段以及/或者包含至少一种人重链多肽和/或轻链多肽的抗体。

如本文所用，术语“人源化抗体”是指被修饰成提高与人抗体的序列同源性的非人抗体，使得抗体的抗原结合特性得以保留，但其在人体内的抗原性下降。

如本文所用，术语“嵌合抗体”是指免疫球蛋白分子的氨基酸序列来源于两个或更多个物种的抗体。轻链和重链两者的可变区经常对应于来源于一个哺乳动物物种(例如，小鼠、大鼠、兔等)的具有期望的特异性、亲和力和能力的抗体的可变区，而恒定区对应于来源于另一个哺乳动物物种(例如，人)的抗体中的序列，以便避免在那个物种中引出免疫应答。

如本文所用，术语“多特异性抗体”是指包含多个免疫球蛋白可变结构域序列的抗体，其中该多个免疫球蛋白可变结构域序列中的第一免疫球蛋白可变结构域序列对第一表位具有结合特异性，并且该多个免疫球蛋白可变结构域序列中的第二免疫球蛋白可变结构域序列对第二表位具有结合特异性。在一个实施方案中，第一表位和第二表位不重叠或基本上不重叠。在一个实施方案中，第一表位和第二表位在不同抗原例如不同蛋白质(或多聚体蛋白质的不同亚基)上。在一个实施方案中，多特异性抗体包含第三、第四或第五免疫球蛋白可变域。在一个实施方案中，多特异性抗体是双特异性抗体分子、三特异性抗体分子或四特异性抗体分子。

如本文所用，术语“双特异性抗体”是指结合不超过两个表位或两个抗原的多特异性抗体。双特异性抗体的特征在于对第一表位(例如，TRDV2抗原上的表位)具有结合特异性的第一免疫球蛋白可变结构域序列和对第二表位具有结合特异性的第二免疫球蛋白可变结构域序列。在一个实施方案中，第一表位和第二表位在不同抗原例如不同蛋白质(或多聚体蛋白质的不同亚基)上。在一个实施方案中，双特异性抗体包含对第一表位具有结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列以及对第二表位具有结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列。在一个实施方案中，双特异性抗体包含对第一表位具有结合特异性的半抗体或其片段以及对第二表位具有结合特异性的半抗体或其片段。在一个实施方案中，双特异性抗体包含对第一表位具有结合特异性的scFv或其片段以及对第二表位具有结合特异性的scFv或其片段。在一个实施方案中，第一表位位于TRDV2上，并且第二表位位于CD33上。

如本文所用，术语“半抗体”是指与一条免疫球蛋白轻链缔合的一条免疫球蛋白重链。示例性半抗体以SEQ ID NO:17示出。本领域的技术人员将容易理解，半抗体可以涵盖其片段并且还可以具有由单个可变结构域组成的抗原结合结构域，例如来源于骆驼科。

如本文所用，术语“TRDV2”是指当在γδT细胞的表面上表达时能够形成T细胞受体的多肽。表达TRDV2的γδT细胞是最早在人胎儿中发育的T细胞之一，并且是健康成人外周血细胞中的主要γδT细胞亚群。术语“TRDV2”包括由细胞(包括T细胞)天然表达或者能够在用编码所述多肽的基因或cDNA转染的细胞上表达的任何TRDV2变体、同种型和物种同源物。在具体的实施方案中，TRDV2是人TRDV2。示例性人TRDV2氨基酸序列由GenBank登录号NG_001332.3提供。

术语“CD33”是指67kD的单通跨膜糖蛋白，并且是唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素(Siglecs)家族的成员。虽然其确切的生物学功能尚不清楚，但在正常个体中，其主要被认为是髓细胞样分化抗原，在髓细胞样祖细胞、中性粒细胞和巨噬细胞中表达较低，而在循环的单核细胞和树突状细胞中高度表达。已在85％至90％的患有急性髓性白血病(AML)的患者的母细胞和白血病干细胞中检测到CD33。除非另外指明，否则术语“CD33”包括由细胞天然表达或者能够在用编码那些多肽的基因或cDNA转染的细胞上表达的任何CD33变体、同种型和物种同源物，“CD33”是人CD33。人CD33氨基酸序列由GenBank登录号BC028152.1提供。

如本文所用，“与TRDV2特异性结合”的抗体是指以1×10^-7M或更小诸如1×10^-8M或更小、5×10^-9M或更小、1×10^-9M或更小、5×10^-10M或更小、或者1×10^-10M或更小的KD与TRDV2诸如人TRDV2结合的抗体。

如本文所用，“与第二靶抗原特异性结合”的抗体是指以1×10^-7M或更小诸如1×10^-8M或更小、5×10^-9M或更小、1×10^-9M或更小、5×10^-10M或更小、或者1×10^-10M或更小的KD与第二靶抗原结合的抗体。

如本文所用，“与肿瘤相关抗原特异性结合”的抗原结合结构域或抗原结合片段是指以1×10^-7M或更小，诸如1×10^-8M或更小、5×10^-9M或更小、1×10^-9M或更小、5×10^-10M或更小、或者1×10^-10M或更小的KD结合肿瘤相关抗原的抗原结合结构域或抗原结合片段。

如本文所用，“与CD33特异性结合”的抗体是指以1×10^-7M或更小诸如1×10^-8M或更小、5×10^-9M或更小、1×10^-9M或更小、5×10^-10M或更小、或者1×10^-10M或更小的KD与CD33诸如人CD33结合的抗体。在某些实施方案中，抗体特异性结合CD33的C2结构域。在其他实施方案中，抗体特异性结合CD33的V结构域。

术语“KD”是指从Kd对Ka的比(即，Kd/Ka)获得并且表示为摩尔浓度(M)的解离常数。根据本公开，抗体的KD值可以使用本领域中的方法确定。例如，抗体的KD可通过使用表面等离振子共振，诸如通过使用生物传感器系统(例如

系统)，或者通过使用生物层干涉测量技术(诸如Octet RED96系统)来确定。抗体KD的值越小，抗体与靶抗原结合的亲和力越高。

在一个方面，本文提供了与TRDV2结合的抗体。在一些实施方案中，该抗体包含重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区。在一些实施方案中，TRDV2抗体不是单结构域抗体或纳米抗体。在一些实施方案中，TRDV2抗体是人源化抗体。

在某些实施方案中，本文提供了TRDV2抗体，该抗体包含本文所述的抗体中的任一者的VH区、VL区、VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3。在一些实施方案中，本文提供了TRDV2抗体，该抗体包含本文所述的抗体中的任一者的VH区。在一些实施方案中，本文提供了TRDV2抗体，该抗体包含本文所述的抗体中的任一者的VL区。在一些实施方案中，本文提供了TRDV2抗体，该抗体包含本文所述的抗体中的任一者的VH区和本文所述的抗体中的任一者的VL区。在一些实施方案中，本文提供了TRDV2抗体，该抗体包含本文所述的抗体中的任一者的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在一些实施方案中，本文提供了TRDV2抗体，该抗体包含本文所述的抗体中的任一者的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在一些实施方案中，本文提供了TRDV2抗体，该抗体包含本文所述的抗体中的任一者的VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3；和本文所述的抗体中的任一者的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在序列表以及表1和表2中提供了本文提供的TRDV2抗体的代表性VH和VL氨基酸序列，包括VH CDR1、VHCDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3氨基酸序列。

在一些实施方案中，TRDV2抗体是本文提供的多特异性TRDV2抗体。在一些实施方案中，多特异性TRDV2抗体是双特异性TRDV2抗体。在一个实施方案中，多特异性TRDV2抗体包含：(a)与TRDV2结合的第一结合结构域，和(b)与不是TRDV2的第二靶标结合的第二结合结构域。

在某些实施方案中，与TRDV2结合的第一结合结构域包含本文所述的TRDV2抗体中的任一者的VH区、VL区、VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3。在一些实施方案中，与TRDV2结合的第一结合结构域包含本文所述的TRDV2抗体中的任一者的VH区。在一些实施方案中，与TRDV2结合的第一结合结构域包含本文所述的TRDV2抗体中的任一者的VL区。在一些实施方案中，与TRDV2结合的第一结合结构域包含本文所述的TRDV2抗体中的任一者的VH区和VL区。在一些实施方案中，与TRDV2结合的第一结合结构域包含本文所述的TRDV2抗体中的任一者的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在一些实施方案中，与TRDV2结合的第一结合结构域包含本文所述的TRDV2抗体中的任一者的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3。在一些实施方案中，与TRDV2结合的第一结合结构域包含本文所述的TRDV2抗体中的任一者的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在序列表以及表1和表2中提供了本文提供的TRDV2抗体的代表性VH和VL氨基酸序列，包括VH CDR1、VH CDR2、VHCDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3氨基酸序列。

在一些实施方案中，第二靶标是CD33。在一些实施方案中，结合CD33的第二结合结构域具有本文提供的CD33抗体的VH区、VL区、VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3。在一些实施方案中，结合CD33的第二结合结构域具有本文提供的CD33抗体的VH区。在一些实施方案中，结合CD33的第二结合结构域具有本文提供的CD33抗体的VL区。在一些实施方案中，结合CD33的第二结合结构域具有本文提供的CD33抗体的VH区和VL区。在一些实施方案中，结合CD33的第二结合结构域具有本文提供的CD33抗体的VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3。在一些实施方案中，结合CD33的第二结合结构域具有本文提供的CD33抗体的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在一些实施方案中，结合CD33的第二结合结构域具有本文提供的CD33抗体的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在序列表以及表3和表4中提供了本文提供的TRDV2抗体的代表性VH和VL氨基酸序列，包括VH CDR1、VHCDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3氨基酸序列。

在一些实施方案中，该抗体特异性结合TRDV2。在其他实施方案中，TRDV2存在于T细胞的表面上。

在一些实施方案中，TRDV2抗体是嵌合的。在一些实施方案中，TRDV2抗体是人的。在一些实施方案中，TRDV2抗体是人源化的。在某些实施方案中，TRDV2是分离的TRDV2抗体。在某些实施方案中，提供了是完整的抗体的TRDV2抗体。

在一些实施方案中，TRDV2抗体是IgG抗体。在一些实施方案中，TRDV2抗体是IgG1抗体。在一些实施方案中，TRDV2抗体是IgG2抗体。在一些实施方案中，TRDV2抗体是IgG3抗体。在一些实施方案中，TRDV2抗体是IgG4抗体。在一些实施方案中，TRDV2抗体包含κ轻链。在一些实施方案中，TRDV2抗体包含λ轻链。在一些实施方案中，TRDV2抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，TRDV2抗体是多价的。在一些实施方案中，TRDV2抗体能够结合至少三个抗原。在一些实施方案中，TRDV2抗体能够结合至少四个抗原。在一些实施方案中，TRDV2抗体能够结合至少五个抗原。在一些实施方案中，TRDV2抗体是多特异性抗体。在一些实施方案中，TRDV2抗体是双特异性抗体。在一些实施方案中，TRDV2抗体是三特异性抗体。在一些实施方案中，TRDV2抗体是四特异性抗体。

在其他实施方案中，提供的是TRDV2抗体是TRDV2抗体的抗原结合片段。在一些实施方案中，TRDV2抗体的抗原结合片段是功能性片段。在一些实施方案中，TRDV2抗原结合片段是嵌合的。在一些实施方案中，TRDV2抗原结合片段是人的。在一些实施方案中，TRDV2抗原结合片段是人源化的。在某些实施方案中，TRDV2抗原结合片段是分离的TRDV2抗原结合片段。

在一些实施方案中，抗原结合片段是双价抗体。在一些实施方案中，抗原结合片段是Fab。在一些实施方案中，抗原结合片段是Fab’。在一些实施方案中，抗原结合片段是F(ab’)₂。在一些实施方案中，抗原结合片段是Fv片段。在一些实施方案中，抗原结合片段是二硫键稳定的Fv片段(dsFv)。在一些实施方案中，抗原结合片段是(dsFv)₂。在一些实施方案中，抗原结合片段是双特异性dsFv(dsFv-dsFv’)。在一些实施方案中，抗原结合片段是二硫键稳定的双价抗体(ds双价抗体)。在一些实施方案中，抗原结合片段是单链抗体分子(scFv)。在一些实施方案中，抗原结合片段是单结构域抗体(sdAb)。在一些实施方案中，抗原结合片段是scFv二聚体(二价双价抗体)。在一些实施方案中，抗原结合片段是由包含一个或多个CDR的抗体的一部分形成的多特异性抗体。在一些实施方案中，抗原结合片段是骆驼化单结构域抗体。在一些实施方案中，抗原结合片段是纳米抗体。在一些实施方案中，抗原结合片段是结构域抗体。在一些实施方案中，抗原结合片段是二价结构域抗体。在一些实施方案中，抗原结合片段是与抗原结合但不包含完整抗体结构的抗体片段。

在一些实施方案中，TRDV2抗体是多特异性抗体。在其他实施方案中，TRDV2抗体是双特异性抗体。在某些实施方案中，多特异性抗体包含本文提供的TRDV2抗体的抗原结合片段。在其他实施方案中，双特异性抗体包含本文提供的TRDV2抗体的抗原结合片段。在一些实施方案中，TRDV2抗体是激动性抗体。在某些实施方案中，TRDV2抗体使T细胞活化。在其他实施方案中，TRDV2抗体是拮抗性抗体。在某些实施方案中，TRDV2抗体使T细胞失活。在一些实施方案中，TRDV2抗体阻断了T细胞的活化。在一些实施方案中，TRDV2抗体调节T细胞的活性。在一些实施方案中，TRDV2抗体既不活化也不灭活γδT细胞的活性。在一个具体的实施方案中，T细胞是γδT细胞。

在具体的实施方案中，γδT细胞是人γδT细胞。在具体的实施方案中，提供了双特异性抗体，该双特异性抗体包含本文提供的TRDV2抗体，呈杵臼结构形式。在一些实施方案中，本文提供的TRDV2抗体可包含在双特异性抗体中。在一些实施方案中，本文提供的TRDV2双特异性抗体可包含在多特异性抗体中。在某些实施方案中，本文提供的双特异性抗体包含：第一结合结构域，该第一结合结构域包含与第一TRDV2表位结合的本文提供的TRDV2抗体；和第二结合结构域，该第二结合结构域包含与第二TRDV2表位结合的本文提供的TRDV2抗体，其中第一TRDV2表位和第二TRDV2表位不同。在一个具体的实施方案中，本文提供的TRDV2抗体或其抗原结合片段与TRDV2特异性结合。在某些实施方案中，本文提供的TRDV2抗体或其抗原结合片段不结合Vδ2的表位。

在一些实施方案中，VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3序列根据Kabat编号系统。在一些实施方案中，VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3序列根据Chothia编号系统。在一些实施方案中，VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VLCDR1、VL CDR2和VL CDR3序列根据示例性编号系统。在一些实施方案中，VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3序列根据Contact编号系统。在一些实施方案中，VHCDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3序列根据IMGT编号系统。在一些实施方案中，VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3序列根据AbM编号系统。本文提供了某些抗体实施方案的6个CDR(VH CDR1-3和VL CDR1-3)的示例性组。设想了其他CDR组并且在本文提供的抗体实施方案的范围内。

在一些实施方案中，TRDV2抗体是多特异性抗体。在其他实施方案中，TRDV2抗体是双特异性抗体。在某些实施方案中，多特异性抗体包含本文提供的TRDV2抗体的抗原结合片段。在一些实施方案中，多特异性抗体包含与第一TRDV2表位结合的第一结合结构域和与第二TRDV2表位结合的第二结构域，其中第一TRDV2表位和第二TRDV2表位不同。在某些实施方案中，多特异性抗体还包含与不是TRDV2的靶标结合的第三结合结构域。在一些实施方案中，多特异性抗体包含重链可变区和轻链可变区。在一些实施方案中，第一结合结构域包含重链可变区和轻链可变区。在一些实施方案中，第二结合结构域包含重链可变区和轻链可变区。在一些实施方案中，第一结合结构域包含重链可变区和轻链可变区，并且第二结合结构域包含重链可变区和轻链可变区。在一些实施方案中，TRDV2抗体的第一结合结构域不是单结构域抗体或纳米抗体。在一些实施方案中，TRDV2抗体的第二结合结构域不是单结构域抗体或纳米抗体。

根据一个具体方面，本文提供了分离的TRDV2抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)HC1；(b)HC2；(c)LC1；和(d)LC2。HC1可以与LC1缔合，并且HC2可以与LC2缔合。HC1可以包含分别包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且LC1可以包含分别包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ IDNO:6的氨基酸序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3。HC1和LC1形成第一抗原的结合位点，并且HC2和LC2形成第二抗原的结合位点。第一抗原的结合位点可以例如结合γδT细胞上的TRDV2。

本文还提供了抗TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其包含抗TRDV2抗体或其抗原结合片段以及与第二靶抗原结合的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，抗TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段包含：(a)HC1；(b)HC2；(c)LC1；和(d)LC2，其中HC1与LC1缔合，并且HC2与LC2缔合。HC1可以例如包含分别包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQID NO:3的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且LC1可以例如包含分别包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3，以形成特异性结合TRDV2的第一抗原结合位点。HC2可以例如包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且LC2可以例如包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，以形成特异性结合第二靶抗原的第二靶抗原结合位点。在某些实施方案中，TRDV2位于γδT细胞的表面上。在某些实施方案中，第二靶标抗原位于第二靶细胞的表面上。在一些实施方案中，TRDV2双特异性抗体与存在于γδT细胞的表面上的TRDV2结合以及与存在于第二靶细胞的表面上的第二靶抗原结合可例如导致杀伤第二细胞。

在某些实施方案中，抗TRDV2抗体或其抗原结合片段与位于TRDV2上的第一表位和癌细胞的第二表位结合。

在一些实施方案中，本文提供了双特异性抗体，该双特异性抗体包含：(a)与TRDV2抗原结合的第一结合结构域，和(b)与癌细胞抗原结合的第二结合结构域。在一些实施方案中，本文提供了双特异性抗体，该双特异性抗体包含：(a)与TRDV2抗原特异性结合的第一结合结构域，和(b)与癌细胞抗原特异性结合的第二结合结构域。

在一些实施方案中，本文提供了双特异性抗体，该双特异性抗体包含：(a)与TRDV2抗原上的第一表位结合的第一结合结构域，和(b)与癌细胞抗原上的第二表位结合的第二结合结构域。在一些实施方案中，本文提供了双特异性抗体，该双特异性抗体包含：(a)与TRDV2抗原上的第一表位特异性结合的第一结合结构域，和(b)与癌细胞抗原上的第二表位特异性结合的第二结合结构域。

在一个本文提供的双特异性抗体的实施方案中，第一表位位于TRDV2上并且第二表位位于癌细胞的表面上。在一些实施方案中，第二表位位于癌细胞抗原上。在一个本文提供的双特异性抗体的实施方案中，第一表位位于TRDV2上并且第二表位位于肿瘤上。在一个本文提供的双特异性抗体的实施方案中，第一表位位于TRDV2上并且第二表位位于肿瘤特异性抗原上。在一个本文提供的双特异性抗体的实施方案中，第一表位位于TRDV2上并且第二表位位于肿瘤相关抗原上。在一个本文提供的双特异性抗体的实施方案中，第一表位位于TRDV2上并且第二表位位于新抗原上。

在一些实施方案中，癌细胞是肾上腺癌、肛门癌、阑尾癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、食道癌、胆囊癌、妊娠滋养细胞癌、头颈癌、霍奇金淋巴瘤、肠癌、肾癌、白血病、肝癌、肺癌、黑色素瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤、神经内分泌肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、鼻窦癌、皮肤癌、软组织肉瘤、脊椎癌、胃癌、睾丸癌、喉癌、甲状腺癌、子宫癌、子宫内膜癌、阴道癌或外阴癌。在一些实施方案中，癌症是肾上腺癌、肛门癌、阑尾癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、食道癌、胆囊癌、妊娠滋养细胞癌、头颈癌、霍奇金淋巴瘤、肠癌、肾癌、白血病、肝癌、肺癌、黑色素瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤、神经内分泌肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、鼻窦癌、皮肤癌、软组织肉瘤、脊椎癌、胃癌、睾丸癌、喉癌、甲状腺癌、子宫癌、子宫内膜癌、阴道癌或外阴癌。在一些实施方案中，癌症是肾上腺癌。在一些实施方案中，癌症是肛门癌。在一些实施方案中，癌症是阑尾癌。在一些实施方案中，癌症是胆管癌。在一些实施方案中，癌症是膀胱癌。在一些实施方案中，癌症是骨癌。在一些实施方案中，癌症是脑癌。在一些实施方案中，癌症是乳腺癌。在一些实施方案中，癌症是宫颈癌。在一些实施方案中，癌症是结直肠癌。在一些实施方案中，癌症是食道癌。在一些实施方案中，癌症是胆囊癌。在一些实施方案中，癌症是妊娠滋养细胞癌。在一些实施方案中，癌症是头颈癌。在一些实施方案中，癌症是霍奇金淋巴瘤。在一些实施方案中，癌症是肠癌。在一些实施方案中，癌症是肾癌。在一些实施方案中，癌症是白血病。在一些实施方案中，癌症是肝癌。在一些实施方案中，癌症是肺癌。在一些实施方案中，癌症是黑色素瘤。在一些实施方案中，癌症是间皮瘤。在一些实施方案中，癌症是多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，癌症是神经内分泌肿瘤。在一些实施方案中，该癌症为非霍奇金淋巴瘤。在一些实施方案中，癌症是口腔癌。在一些实施方案中，癌症是卵巢癌。在一些实施方案中，癌症是胰腺癌。在一些实施方案中，癌症是前列腺癌。在一些实施方案中，癌症是鼻窦癌。在一些实施方案中，癌症是皮肤癌。在一些实施方案中，癌症是软组织肉瘤、脊椎癌。在一些实施方案中，癌症是胃癌。在一些实施方案中，癌症是睾丸癌。在一些实施方案中，癌症是喉癌。在一些实施方案中，癌症是甲状腺癌。在一些实施方案中，癌症是子宫癌、子宫内膜癌。在一些实施方案中，癌症是阴道癌。在一些实施方案中，癌症是外阴癌。

在一些实施方案中，宫颈癌是鳞状细胞癌或腺癌。

在一些实施方案中，食道癌是腺癌或鳞状细胞癌。

在一个具体的实施方案中，癌症是多发性骨髓瘤(MM)。在另一具体的实施方案中，癌症是慢性淋巴细胞白血病。在其他实施方案中，癌症是急性B淋巴细胞白血病。在其他实施方案中，癌症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)。在一些实施方案中，癌症是非霍奇金淋巴瘤。在一些实施方案中，口腔癌是鳞状细胞癌、疣状癌、小唾液腺癌、淋巴瘤、良性口腔肿瘤、嗜酸性肉芽肿、纤维瘤、颗粒细胞瘤、角化棘皮瘤、平滑肌瘤、骨软骨瘤、脂肪瘤、神经鞘瘤、神经纤维瘤、乳头状瘤、尖锐湿疣、疣状黄瘤、化脓性肉芽肿、横纹肌瘤、牙源性肿瘤、白斑、红斑、鳞状细胞唇癌、基底细胞唇癌、口腔癌、牙龈癌或舌癌。

在一些实施方案中，脊椎癌是脊椎转移瘤。

在一些实施方案中，外阴癌是鳞状细胞癌或腺癌。

在一个实施方案中，癌症是实体癌。在一个实施方案中，癌症是实体瘤。在一个实施方案中，癌症是液体癌。在一个实施方案中，癌症是液体瘤。在一些实施方案中，癌症是血液恶性肿瘤。在某些实施方案中，癌症是良性的。在一些实施方案中，癌症是恶性的。在一些实施方案中，癌症是转移性的。

在一些实施方案中，第二表位位于癌症抗原上。

在一些实施方案中，癌抗原是血管生成素、BCMA、CD19、CD20、CD22、CD25(IL2-R)、CD30、CD33、CD37、CD38、CD52、CD56、CD123(IL-3R)、cMET、DLL/Notch、EGFR、EpCAM、FGF、FGF-R、GD2、HER2、间皮素、粘连蛋白-4、前列腺酸性磷酸酶(PAP)、PDGFRα、前列腺特异性抗原(PSA)、PSA3、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、RANKL、SLAMF7、STEAP1、T细胞受体γ交替阅读框蛋白(TARP)、TROP2、VEGF或VEGF-R。在一些实施方案中，癌抗原是血管生成素。在一些实施方案中，癌抗原是BCMA。在一些实施方案中，癌抗原是CD19。在一些实施方案中，癌抗原是CD20。在一些实施方案中，癌抗原是CD22。在一些实施方案中，癌抗原是CD25(IL2-R)。在一些实施方案中，癌抗原是CD30。在一些实施方案中，癌抗原是CD33。在一些实施方案中，癌抗原是CD37。在一些实施方案中，癌抗原是CD38。在一些实施方案中，癌抗原是CD52。在一些实施方案中，癌抗原是CD56。在一些实施方案中，癌抗原是CD123(IL-3R)。在一些实施方案中，癌抗原是cMET。在一些实施方案中，癌抗原是DLL/Notch。在一些实施方案中，癌抗原是EGFR。在一些实施方案中，癌抗原是EpCAM。在一些实施方案中，癌抗原是FGF。在一些实施方案中，癌抗原是FGF-R。在一些实施方案中，癌症抗原是GD2。在一些实施方案中，癌抗原是HER2。在一些实施方案中，癌抗原是间皮素。在一些实施方案中，癌抗原是粘连蛋白-4。在一些实施方案中，癌抗原是PAP。在一些实施方案中，癌抗原是PDGFRα。在一些实施方案中，癌抗原是PSA。在一些实施方案中，癌抗原是PSA3。在一些实施方案中，癌抗原是PSCA。在一些实施方案中，癌抗原是PSMA。在一些实施方案中，癌抗原是RANKL。在一些实施方案中，癌抗原是SLAMF7。在一些实施方案中，癌抗原是STEAP1。在一些实施方案中，癌抗原是TARP。在一些实施方案中，癌抗原是TROP2。在一些实施方案中，癌抗原是VEGF。在一些实施方案中，癌抗原是VEGF-R。

在一些实施方案中，癌抗原是CEA、未成熟的层粘连蛋白受体、TAG-72、HPV E6、HPVE7、BING-4、钙活化的氯化物通道2、细胞周期素-B1、9D7、EpCAM、EphA3、Her2/neu、端粒酶、间皮素、SAP-1、surviving、BAGE家族抗原、CAGE家族抗原、GAGE家族抗原、MAGE家族抗原、SAGE家族抗原、XAGE家族抗原、NY-ESO-1/LAGE-1、PRAME、SSX-2、Melan-A、MART-1、Gp100、pmel17、酪氨酸酶、TRP-1、TRP-2、P.多肽、MC1R、前列腺特异性抗原、β-连环蛋白、BRCA1、BRCA2、CDK4、CML66、纤连蛋白、MART-2、p53、Ras、TGF-βRII或MUC1。在一些实施方案中，癌抗原是CEA。在一些实施方案中，癌抗原是未成熟的层粘连蛋白受体。在一些实施方案中，癌抗原是TAG-72。在一些实施方案中，癌抗原是HPV E6。在一些实施方案中，癌抗原是HPV E7。在一些实施方案中，癌抗原是BING-4。在一些实施方案中，癌抗原是钙活化的氯化物通道2。在一些实施方案中，癌抗原是细胞周期素-B1。在一些实施方案中，癌抗原是9D7。在一些实施方案中，癌抗原是EpCAM。在一些实施方案中，癌抗原是EphA3。在一些实施方案中，癌抗原是Her2/neu。在一些实施方案中，癌抗原是端粒酶。在一些实施方案中，癌抗原是间皮素。在一些实施方案中，癌抗原是SAP-1。在一些实施方案中，癌抗原是surviving。在一些实施方案中，癌抗原是BAGE家族抗原。在一些实施方案中，癌抗原是CAGE家族抗原。在一些实施方案中，癌抗原是GAGE家族抗原。在一些实施方案中，癌抗原是MAGE家族抗原。在一些实施方案中，癌抗原是SAGE家族抗原。在一些实施方案中，癌抗原是XAGE家族抗原。在一些实施方案中，癌抗原是NY-ESO-1/LAGE-1。在一些实施方案中，癌抗原是PRAME。在一些实施方案中，癌抗原是SSX-2。在一些实施方案中，癌抗原是Melan-A。在一些实施方案中，癌症抗原是MART-1。在一些实施方案中，癌抗原是Gp100。在一些实施方案中，癌抗原是pmel17。在一些实施方案中，癌抗原是酪氨酸酶。在一些实施方案中，癌抗原是TRP-1。在一些实施方案中，癌抗原是TRP-2。在一些实施方案中，靶抗原是P.多肽。在一些实施方案中，癌抗原是MC1R。在一些实施方案中，癌症抗原是前列腺特异性抗原。在一些实施方案中，癌症抗原是β-连环蛋白。在一些实施方案中，癌抗原是BRCA1。在一些实施方案中，癌抗原是BRCA2。在一些实施方案中，癌抗原是CDK4。在一些实施方案中，癌抗原是CML66。在一些实施方案中，癌抗原是纤连蛋白。在一些实施方案中，癌抗原是MART-2。在一些实施方案中，癌抗原是p53。在一些实施方案中，癌抗原是Ras。在一些实施方案中，癌抗原是TGF-βRII。在一些实施方案中，癌抗原是MUC1。

TRDV2双特异性抗体与存在于γδT细胞的表面上的TRDV2结合以及与存在于癌细胞的表面上的肿瘤相关抗原结合可例如导致杀伤癌细胞。

在一个本文提供的双特异性抗体的实施方案中，第一表位位于TRDV2上并且第二表位位于CD33上。在某些实施方案中，第二表位包括CD33的C2结构域中的表位。在其他实施方案中，第二表位包括CD33的V结构域中的表位。在某些实施方案中，第二表位由CD33的C2结构域中的表位组成。在其他实施方案中，第二表位由CD33的V结构域中的表位组成。

在一个本文提供的双特异性抗体的实施方案中，第一表位位于TRDV2上，并且第二表位位于PD-1、PD-L1、CTLA-4、EGFR、HER-2、CD19、CD20、CD3和/或其他癌症相关的免疫抑制因子或表面抗原上。

本文还提供了抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其包含抗TRDV2抗体或其抗原结合片段以及抗CD33抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段包含：(a)HC1；(b)HC2；(c)LC1；和(d)LC2，其中HC1与LC1缔合，并且HC2与LC2缔合。HC1可以例如包含分别包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且LC1可以例如包含分别包含SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3，以形成特异性结合TRDV2的第一抗原结合位点。HC2可以例如包含分别包含SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且LC2可以例如包含分别包含SEQID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14的氨基酸序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3，以形成特异性结合CD33的第二抗原结合位点。在某些实施方案中，TRDV2位于γδT细胞的表面上。在某些实施方案中，CD33位于癌细胞(例如白血病细胞)的表面上。

在某些实施方案中，本文提供了抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其包含抗TRDV2抗体或其抗原结合片段以及抗CD33 C2结构域抗体或其抗原结合片段。在其他实施方案中，本文提供了抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其包含抗TRDV2抗体或其抗原结合片段以及抗CD33 V结构域抗体或其抗原结合片段。

例如，第二抗原的结合位点可以例如结合存在于癌细胞的表面上的癌抗原。TRDV2双特异性抗体与存在于γδT细胞的表面上的TRDV2结合以及与存在于癌细胞的表面上的肿瘤相关抗原结合可例如导致杀死癌细胞。

CD33的表达趋向于限于造血细胞，但在正常造血干细胞上不存在，这表明CD33限于AML的靶细胞。

CD33的结构由介导唾液酸结合的氨基末端V-set Ig样结构域(由CD33的外显子2编码)和其细胞外部分中的C2-set Ig样结构域(由外显子3和4编码)组成(Laszlo等人，2016年)。CD33 RNA的另选剪接可导致在细胞表面上表达的较短同种型，该较短同种型缺少V-set但保留C2-set Ig样结构域(Laszlo、Estey和Walter，2014年；Laszlo等人，2016年)。该剪接过程的生物相关性在很大程度上是未知的，直至最近的研究显示，单核苷酸多态性(SNP)rs12459419存在于50％的AML群体中并导致CD33的外显子2的跳越缺失导致了CD33的V结构域的缺失(Lamba等人，2017年)。

可用于本文提供的TRDV2多特异性抗体的另外的CD33抗体包括AMG330和AMG673(Amgen；Friedrich等人，2014年)、AMV564(Amphivena；美国专利号9,803,029)、IMGN779(Immunogen；美国专利号9,359,442)、BI836858(Boehringer Ingelheim；Vasu等人，2016年)、Actimab(Actinium Pharma)、吉妥珠单抗(Godwin、Gale和Walter，2017年)以及SGN33A(Seattle Genetics)。在本文提供的多特异性TRDV2抗体的一些实施方案中，结合CD33的第二结合结构域包含AMG330的VH CDR1-3和VL CDR1-3。在本文提供的多特异性TRDV2抗体的一些实施方案中，结合CD33的第二结合结构域包含AMG673的VH CDR1-3和VL CDR1-3。在本文提供的多特异性TRDV2抗体的一些实施方案中，结合CD33的第二结合结构域包含AMV564的VH CDR1-3和VL CDR1-3。在本文提供的多特异性TRDV2抗体的一些实施方案中，结合CD33的第二结合结构域包含IMGN779的VH CDR1-3和VL CDR1-3。在本文提供的多特异性TRDV2抗体的一些实施方案中，结合CD33的第二结合结构域包含BI836858的VH CDR1-3和VL CDR1-3。在本文提供的多特异性TRDV2抗体的一些实施方案中，结合CD33的第二结合结构域包含Actimab的VH CDR1-3和VL CDR1-3。在本文提供的多特异性TRDV2抗体的一些实施方案中，结合CD33的第二结合结构域包含吉妥珠单抗的VH CDR1-3和VL CDR1-3。在本文提供的多特异性TRDV2抗体的一些实施方案中，结合CD33的第二结合结构域包含SGN33A的VH CDR1-3和VL CDR1-3。

TRDV2xCD33多特异性抗体可包含第一结合结构域，该第一结合结构域包含本文提供的任何TRDV2抗体。TRDV2xCD33多特异性抗体还可包含第二结合结构域，该第二结合结构域包含任何CD33抗体，包含本文提供的任何CD33抗体。

在一些实施方案中，本文提供的双特异性抗体是经由受控Fab臂交换得到的双价抗体、交叉体或双特异性抗体，如本文所述的那些。

在一些实施方案中，双特异性抗体包括具有互补CH3结构域以强制发生异源二聚化的IgG样分子；重组IgG样双靶向分子，其中该分子的两侧各自含有至少两种不同抗体的Fab片段的一部分或Fab片段；IgG融合分子，其中全长IgG抗体与额外的Fab片段或Fab片段的部分融合；Fc融合分子，其中单链Fv分子或稳定的双体抗体与重链恒定结构域、Fc区或其部分融合；Fab融合分子，其中不同的Fab片段融合在一起；基于ScFv和双体抗体的重链抗体(例如结构域抗体、纳米抗体)，其中不同的单链Fv分子或不同的双体抗体或不同的重链抗体(例如结构域抗体、纳米抗体)彼此融合或与另一蛋白质或载剂分子融合。

在一些实施方案中，具有互补CH3结构域分子的IgG样分子包括Triomab/Quadroma(Trion Pharma/Fresenius Biotech)、杵臼结构(Knobs-into-Holes)抗体(Genentech)、CrossMAbs(Roche)和静电配对体(electrostatically-matched)(Amgen)、LUZ-Y(Genentech)、链交换工程化结构域体(Strand Exchange Engineered Domain body)(SEEDbody)(EMD Serono)、Biclonic(Merus)和DuoBody(Genmab A/S)。

在一些实施方案中，重组IgG样双靶向分子包括双重靶向(DT)-Ig(GSK/Domantis)、二合一抗体(Genentech)、交联Mabs(Karmanos Cancer Center)、mAb2(F-Star)和CovX体(CovX/Pfizer)。

在一些实施方案中，IgG融合分子包括双重可变结构域(DVD)-Ig(Abbott)、IgG样双特异性抗体(InnClone/Eli Lilly)、Ts2Ab(MedImmune/AZ)和BsAb(Zymogenetics)、HERCULES(Biogen Idec)以及TvAb(Roche)。

在一些实施方案中，Fc融合分子可包括ScFv/Fc融合体(Academic Institution)、SCORPION(Emergent BioSolutions/Trubion,Zymogenetics/BMS)、双亲和性重靶向技术(Fc-DART)(MacroGenics)和双(ScFv)₂-Fab(National Research Center for AntibodyMedicine--China)。

在一些实施方案中，Fab融合双特异性抗体包括F(ab)₂(Medarex/AMGEN)、Dual-Action或Bis-Fab(Genentech)、Dock-and-Lock(DNL)(ImmunoMedics)、二价双特异性抗体(Biotecnol)和Fab-Fv(UCB-Celltech)。基于ScFv的、基于双价抗体的结构域抗体包括但不限于双特异性T细胞衔接器(BiTE)(Micromet)、串联双价抗体(Tandab)(Affimed)、双亲和重靶向技术(DART)(MacroGenics)、单链双价抗体(Academic)、TCR样抗体(AIT，ReceptorLogics)、人血清白蛋白ScFv融合体(Merrimack)和COMBODY(Epigen Biotech)、双重靶向纳米抗体(Ablynx)、双重靶向仅重链结构域抗体。

本文提供的全长双特异性抗体可例如使用两个单特异性二价抗体之间的Fab臂交换(或半分子交换)通过下列方式生成：在每个半分子中的重链CH3交界处引入置换以促成两个在体外无细胞环境中或使用共表达而具有不同特异性的抗体半分子的异源二聚体形成。Fab臂交换反应是二硫键异构化反应和CH3结构域解离-缔合的结果。亲本单特异性抗体的铰链区中的重链二硫键减少。亲本单特异性抗体之一的所得游离半胱氨酸与第二亲本单特异性抗体分子的半胱氨酸残基形成重链间二硫键，同时亲本抗体的CH3结构域通过解离-缔合而释放和重新形成。可以对Fab臂的CH3结构域进行工程改造，以促成异源二聚化而非同源二聚化。所得产物是具有两个Fab臂或半分子的双特异性抗体，这两个Fab臂或半分子各自结合不同的表位，即TRDV2上的表位和第二靶标抗原(例如，不是TRDV2)上的表位。制备多特异性抗体的其他方法是已知的和考虑的。

如本文所用，“同源二聚化”是指具有相同CH3氨基酸序列的两条重链的相互作用。如本文所用，“同源二聚体”是指具有含有相同CH3氨基酸序列的两条重链的抗体。

如本文所用，“异源二聚化”是指具有不同CH3氨基酸序列的两条重链的相互作用。如本文所用，“异源二聚体”是指具有含有不同CH3氨基酸序列的两条重链的抗体。

正如在别处提及的，在一些实施方案中，双特异性抗体包括诸如Triomab/Quadroma(Trion Pharma/Fresenius Biotech)、杵臼结构(Genentech)、CrossMAbs(Roche)和静电配对体(Chugai,Amgen,NovoNordisk,Oncomed)、LUZ-Y(Genentech)、链交换工程结构域体(SEEDbody)(EMD Serono)、Biclonic(Merus)和DuoBody(Genmab A/S)的设计。

在一些实施方案中，本文提供的TRDV2多特异性抗体是杵臼结构形式。在一些实施方案中，本文提供的TRDV2多特异性抗体是DuoBody形式。

Triomab quadroma技术可用于产生本文提供的全长双特异性抗体。Triomab技术促进两个亲本嵌合抗体之间的Fab臂交换，一个亲本mAb具有IgG2a，并且第二亲本mAb具有大鼠IgG2b恒定区，从而产生嵌合双特异性抗体。

“杵臼结构”策略(参见例如PCT公布WO2006/028936)可用于生成全长双特异性抗体。简而言之，在人IgG中形成CH3结构域的交界的选定氨基酸可在影响CH3结构域相互作用的位置处突变，从而促进异源二聚体形成。将具有小侧链(杵)的氨基酸引入特异性地结合第一抗原的抗体的重链中，并将具有大侧链(杵)的氨基酸引入特异性地结合第二抗原的抗体的重链中。在两种抗体共表达后，由于具有“臼”的重链与具有“杵”的重链的优先相互作用而形成异源二聚体。形成杵臼结构的示例性CH3置换对(表示为第一重链的第一CH3结构域中的修饰位置/第二重链的第二CH3结构域中的修饰位置)是：T366Y/F405A、T366W/F405W、F405W/Y407A、T394W/Y407T、T394S/Y407A、T366W/T394S、F405W/T394S和T366W/T366S_L368A_Y407V。

CrossMAb技术可用于产生本文提供的全长双特异性抗体。除利用“杵臼结构”策略促进Fab壁交换之外，CrossMAb在半臂之一中具有交换的CH1结构域和CL结构域，以确保所得的双特异性抗体正确的轻链配对(参见例如美国专利号8,242,247)。

可使用其他交换策略如下产生本文提供的全长双特异性抗体：在双特异性抗体的一个或两个臂中，在重链与轻链之间或重链之内交换可变结构域或恒定结构域、或这两种结构域。这些交换包括例如VH-CH1与VL-CL、VH与VL、CH3与CL以及CH3与CH1，如在国际专利公布WO2009/080254、WO2009/080251、WO2009/018386和WO2009/080252中有所描述。

还可使用其他策略，诸如通过在一个CH3表面置换带正电荷的残基并在第二CH3表面置换带负电荷的残基使用静电相互作用促进重链异源二聚化，如美国专利公布号US2010/0015133；美国专利公布号US2009/0182127；美国专利公布号US2010/028637；或美国专利公布号US2011/0123532中所述。在其他策略中，可通过下面的置换(表示为第一重链的第一CH3结构域中的修饰位置/第二重链的第二CH3结构域中的修饰位置)促进异源二聚化：L351Y_F405AY407V/T394W、T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V、T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V、L351Y_Y407A/T366A_K409F、L351Y_Y407A/T366V K409F Y407A/T366A_K409F或T350V_L351Y_F405A Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W，如美国专利公布US2012/0149876或美国专利公布号US2013/0195849中所述。

LUZ-Y技术可用于产生本文提供的双特异性抗体。在该技术中，将亮氨酸拉链加入CH3结构域的C末端，以驱动由亲本mAb装配异源二聚体，该亲本mAb经后纯化移除，如在Wranik等人，2012年，J Biol Chem，第287卷第52期，第42221-42229页中所述。

SEEDbody技术可用于产生本文提供的双特异性抗体。SEEDbodies在其恒定结构域中具有所选择的经IgA残基取代的IgG残基，以促进异源二聚化，如在美国专利号US20070287170中有所描述。

除上述方法之外，本文提供的双特异性抗体还可在体外无细胞环境中通过下列方式生成：在两种单特异性同源二聚抗体的CH3区中引入非对称突变，并且在还原条件下由两种亲本单特异性同源二聚抗体形成双特异性异源二聚抗体，从而根据国际专利公布号WO2011/131746中描述的方法进行二硫键异构化。在所述方法中，将第一单特异性二价抗体和第二单特异性二价抗体工程化为在CH3结构域处具有促进异源二聚体稳定性的某些置换；将这些抗体在足以使铰链区中的半胱氨酸发生二硫键异构化的还原条件下一起温育；从而通过Fab臂交换产生双特异性抗体。温育条件可以任选地恢复到非还原条件。可使用的示例性还原剂为2-巯基乙胺(2-MEA)、二硫苏糖醇(DTT)、二硫赤藓糖醇(DTE)、谷胱甘肽、三(2-羧乙基)膦(TCEP)、L-半胱氨酸和β-巯基乙醇，诸如选自由2-巯基乙胺、二硫苏糖醇和三(2-羧乙基)膦组成的组的还原剂。例如，可使用如下条件：在至少25mM 2-MEA的存在下或在至少0.5mM二硫苏糖醇的存在下，在5至8的pH下，例如在7.0的pH下或在7.4的pH下，在至少20℃的温度下，温育至少90分钟。

在一些实施方案中，TRDV2存在于γδT细胞的表面上。在一些实施方案中，TRDV2存在于γδT细胞的表面上，并且在癌细胞的表面上表达的抗原是癌抗原。在一些实施方案中，当双特异性抗体与γδT细胞的表面上的TRDV2和癌细胞的表面上的抗原结合时，癌细胞被杀死。在一些实施方案中，该双特异性抗体在体外以小于约500pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该双特异性抗体在体外以小于约300pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，该双特异性抗体在体外以小于约160pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，用γδT效应细胞和表达癌抗原的靶细胞的混合物评估EC₅₀。在一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约0.01:1至约5:1。在一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约0.1:1至约2:1。在一些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率为约1:1。

在某些实施方案中，抗TRDV2抗体或其抗原结合片段包含分别具有SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3；并且抗CD33抗体或其抗原结合片段包含分别具有SEQ ID NO:9、10、11、12、13和14的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。

在具体的实施方案中，本文提供的抗体包含接头。在具体的实施方案中，该接头为肽接头。在一些实施方案中，该接头包含天然存在的氨基酸。可以被包含到接头中的示例性氨基酸为Gly、Ser、Pro、Thr、Glu、Lys、Arg、Ile、Leu、His和The。在一些实施方案中，该接头的长度足以使VH和VL以相对于彼此形成正确构象，从而使得它们保持期望的活性(诸如与靶标(例如，TRDV2)结合)的方式连接。

在某些实施方案中，接头的长度为约5个至50个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为约10个至40个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为约10个至35个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为约10个至30个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为约10个至25个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为约10个至20个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为约15个至20个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为6个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为7个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为8个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为9个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为10个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为11个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为12个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为13个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为14个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为15个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为16个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为17个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为18个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为19个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为20个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为21个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为22个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为23个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为24个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为25个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为26个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为27个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为28个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为29个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为30个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为31个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为32个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为33个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为34个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为35个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为36个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为37个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为38个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为39个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为40个氨基酸。可以使用的示例性接头为富含Gly的接头、含有Gly和Ser的接头、含有Gly和Ala的接头、含有Ala和Ser的接头，以及其他柔性接头。

本文鉴定的VH结构域和VL结构域中的任何结构域(例如，与TRDV2结合的那些结构域)可被工程化成scFv形式。在一些实施方案中，scFv形式处于VH-接头-VL取向。在其他实施方案中，scFv形式处于VL-接头-VH取向。本文鉴定的VH结构域和VL结构域中的任何结构域也可用于产生sc(Fv)2结构。在一些实施方案中，sc(Fv)2结构为VH-接头-VL-接头-VL-接头-VH。在一些实施方案中，sc(Fv)2结构为VH-接头-VL-接头-VH-接头-VL。在一些实施方案中，sc(Fv)2结构为VH-接头-VH-接头-VL-接头-VH。在一些实施方案中，sc(Fv)2结构为VL-接头-VH-接头-VH-接头-VL。在一些实施方案中，sc(Fv)2结构为VL-接头-VH-接头-VL-接头-VH。在一些实施方案中，sc(Fv)2结构为VL-接头-VL-接头-VH-接头-VH。在一些实施方案中，scFv从N末端到C末端包含VH、第一接头(L1)和VL(VH-L1-VL)。在其他实施方案中，scFv从N末端到C末端包含VL、L1和VH(VL-L1-VH)。在某些实施方案中，本文提供的抗体包含两个接头。在其他实施方案中，本文提供的抗体包含三个接头。在又一些实施方案中，本文提供的抗体包含四个或更多个接头。在某些实施方案中，抗体是其抗原结合片段。

根据另一个具体方面，本文提供了诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段。该双特异抗体或其抗原结合片段可例如在体外诱导ADCC。

在某些实施方案中，当在体外以1:1的效应细胞与靶细胞的比率评估时，该双特异性抗体或其抗原结合片段在体外以小于约160pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。在一个此类实施方案中，双特异性抗体是分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，当用γδT效应细胞和Kasumi3 AML靶细胞的混合物进行体外评估时，其表现出小于约160pM的EC₅₀，其中此类细胞以约1:1的效应细胞与靶细胞的比率存在，并且该双特异性抗体或其抗原结合片段以约30ng/mL的浓度存在。

在另一个实施方案中，该双特异性抗体是分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其包含(a)HC1；(b)HC2；(c)LC1；和(d)LC2，其中HC1与LC1缔合并且HC2与LC2缔合，并且其中HC1包含分别包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且LC1包含分别包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3，以形成特异性结合TRDV2的第一抗原结合位点，并且其中HC2包含分别包含SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且LC2包含分别包含SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14的氨基酸序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3，以形成特异性结合CD33的第二抗原结合位点，其中抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，当用γδT效应细胞和Kasumi3AML靶细胞的混合物在体外评估时，表现出小于约160pM的EC₅₀，其中此类细胞以约1:1的效应细胞与靶细胞的比率存在，并且该双特异性抗体或其抗原结合片段以约30ng/mL的浓度存在。

在某些实施方案中，第二抗原结合位点特异性结合CD33的C2结构域。在其他实施方案中，第二抗原结合位点特异性结合CD33的V结构域。

在某些实施方案中，EC₅₀小于约1000pM、小于约900pM、小于约800pM、小于约700pM、小于约600pM、小于约500pM、小于约400pM、小于约300pM、小于约200pM、小于约190pM、小于约180pM、小于约170pM、小于约160pM、小于约150pM、小于约140pM、小于约130pM、小于约120pM、小于约110pM、小于约100pM、小于约90pM、小于约80pM、小于约70pM、小于约60pM、小于约50pM、小于约40pM、小于约30pM、小于约20pM或小于约10pM。

在某些实施方案中，效应细胞与靶细胞的比率可以例如为0.01:1、0.02:1、0.03:1、0.04:1、0.05:1、0.06:1、0.07:1、0.08:1、0.09:1、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1或10:1。

在某些实施方案中，双特异性抗体或其抗原结合片段的浓度为约0.000005ng/mL、约0.00005ng/mL、约0.0005ng/mL、约0.005ng/mL、约0.01ng/mL、约0.02ng/mL、约0.03ng/mL、约0.04ng/mL、约0.05ng/mL、约0.06ng/mL、约0.07ng/mL、约0.08ng/mL、约0.09ng/mL、约0.1ng/mL、约0.5ng/mL、约1.0ng/mL、约10ng/mL、约20ng/mL、约30ng/mL、约40ng/mL、约50ng/mL、约60ng/mL、约70ng/mL、约80ng/mL、约90ng/mL、约100ng/mL或约1000ng/mL。

在本文所述的一些实施方案中，本文提供的抗TRDV2双特异性抗体的免疫效应子特性可通过本领域技术人员已知的技术经由Fc修饰得到增强或沉默。例如，Fc效应子功能诸如C1q结合、补体依赖性细胞毒性(CDC)、ADCC、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCP)、细胞表面受体(例如B细胞受体；BCR)的下调等，可通过修饰促成这些活性的Fc中的残基来提供和/或控制。

“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”是指细胞介导的反应，在该反应中，表达Fc受体(FcR)的非特异性细胞毒性细胞(例如自然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)识别靶细胞上的结合抗体并随后致使靶细胞裂解。

抗体诱导ADCC的能力可以通过工程改造其寡糖成分来增强。人IgG1或IgG3在Asn297处被熟知的双分枝G0、G0F、G1、G1F、G2或G2F形式的大多数聚糖N-糖基化。未工程化的CHO细胞所产生的抗体通常具有约至少85％的聚糖岩藻糖含量。从连接到Fc区的双分枝复合物型低聚糖去除核心岩藻糖，经由改善的FcγRIIIa结合来增强抗体的ADCC，而不会改变抗原结合或CDC活性。此类抗体可以使用所报告的用于引起具有双分枝复合物型Fc低聚糖的相对较高去岩藻糖基化抗体的成功表达的不同方法实现，这些方法诸如控制培养物渗透压(Konno等人，Cytotechnology，第64卷，第249-265页，2012年)，应用变体CHO细胞系Lec13作为宿主细胞系(Shields等人，J Biol Chem，第277卷，第26733-26740页，2002年)，应用变体CHO细胞系EB66作为宿主细胞系(Olivier等人，MAbs，2(4),2010；Epub ahead ofprint；PMID:20562582)，应用大鼠杂交瘤细胞系YB2/0作为宿主细胞系(Shinkawa等人，JBiol Chem，第278卷，第3466-3473页，2003年)，引入特异性针对α-1,6-岩藻糖基转移酶(FUT8)基因的小干扰RNA(Mori等人，Biotechnol Bioeng，第88卷，第901-908页，2004年)，或共表达β-1,4-N-乙酰葡糖胺基转移酶III和高尔基体α-甘露糖苷酶II或有效的α-甘露糖苷酶I抑制剂、几夫碱(Ferrara等人，J Biol Chem，第281卷，第5032-5036页，2006年；Ferrara等人，Biotechnol Bioeng，第93卷，第851-861页，2006年；Xhou等人，BiotechnolBioeng，第99卷，第652-665页，2008年)。

在本文所述的一些实施方案中，也可通过抗体Fc中的某些置换来增强由本文提供的抗TRDV2双特异性抗体引发的ADCC。示例性置换为例如在氨基酸位置256、290、298、312、356、330、333、334、360、378或430(根据EU索引对残基进行编号)处的置换，如美国专利6,737,056中有所描述。

根据另一个具体方面，本文提供了一种分离的抗TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中所述抗TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段是嵌合的。

根据另一个具体方面，本文提供了一种分离的抗TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中所述抗TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段是人或人源化的。

在一些实施方案中，第一结合结构域是人的。在一些实施方案中，第二结合结构域是人的。在一些实施方案中，第一结合结构域和第二结合结构域两者均是人的。在一些实施方案中，第一结合结构域是人源化的。在一些实施方案中，第二结合结构域是人源化的。在其他实施方案中，第一结合结构域和第二结合结构域两者均是人源化的。在其他实施方案中，第一结合结构域是人的而第二结合结构域是人源化的。在其他实施方案中，第一结合结构域是人源化的而第二结合结构域是人的。

在一些实施方案中，该双特异性抗体是IgG抗体。在一些实施方案中，IgG抗体是IgG1抗体。在一些实施方案中，IgG抗体是IgG2抗体。在一些实施方案中，IgG抗体是IgG3抗体。在一些实施方案中，IgG抗体是IgG4抗体。在一些实施方案中，TRDV2抗体是TRDV2抗原结合片段。

在某些实施方案中，本文提供的双特异性抗体是多特异性抗体的一部分。在一些实施方案中，该多特异性抗体包含与TRDV2抗原结合的第一结合结构域。在一些实施方案中，该多特异性抗体包含与TRDV2抗原结合的第一结合结构域和与第二靶抗原结合的第二结合结构域，如本文所提供的。在某些实施方案中，该多特异性抗体与TRDV2抗原、第二靶抗原和一种或多种另外的抗原结合。在本文提供的各种抗体的一些实施方案中，抗体与给定抗原的表位结合。

在一个方面，提供了多特异性抗体，该多特异性抗体包含：(a)与TRDV2结合的第一结合结构域，和(b)与癌细胞的表面上的抗原结合的第二结合结构域。在一些实施方案中，多特异性抗体是双特异性抗体。

在一些实施方案中，第一结合结构域包含：VH，该VH包含分别具有VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，这些VH CDR属于具有SEQ IDNO:7的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，第一结合结构域包含VL，该VL包含分别具有VLCDR1、VL CDR2和VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，这些VL CDR属于具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，第一结合结构域包含：(i)VH，该VH包含分别具有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，这些VH CDR属于具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VH；和(ii)VL，该VL包含分别具有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，这些VL CDR属于具有SEQID NO:8的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，第一结合结构域的VH CDR1、VH CDR2、VHCDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3氨基酸序列根据Kabat编号系统。在一些实施方案中，第一结合结构域的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3氨基酸序列根据Chothia编号系统。在一些实施方案中，第一结合结构域的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VLCDR1、VL CDR2和VL CDR3氨基酸序列根据AbM编号系统。在一些实施方案中，第一结合结构域的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3氨基酸序列根据Contact编号系统。在一些实施方案中，第一结合结构域的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3氨基酸序列根据IMGT编号系统。在一些实施方案中，第一结合结构域的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3氨基酸序列根据示例性编号系统。

在一些实施方案中，第一结合结构域包含：VH，该VH包含具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3。在一些实施方案中，第一结合结构域包含：VL，该VL包含具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VL CDR1、具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VH CDR3。在一些实施方案中，第一结合结构域包含：(i)VH，该VH包含具有SEQID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ IDNO:3的氨基酸序列的VH CDR3；和(ii)VL，该VL包含具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VLCDR1、具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VLCDR3。

在一些实施方案中，第一结合结构域包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，第一结合结构域包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，第一结合结构域包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VH和具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL。

在一些实施方案中，第一结合结构域与TRDV2特异性结合。在一些实施方案中，第一结合结构域结合TRDV2抗原。在一些实施方案中，第一结合结构域结合TRDV2表位。在一些实施方案中，第一结合结构域的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3形成TRDV2的抗原的结合位点。在一些实施方案中，第一结合结构域的VH CDR1、VH CDR2、VHCDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3形成TRDV2的表位的结合位点。

在一些实施方案中，TRDV2存在于T细胞的表面上。

在一些实施方案中，癌细胞的表面上的抗原是血管生成素、BCMA、CD19、CD20、CD22、CD25(IL2-R)、CD30、CD33、CD37、CD38、CD52、CD56、CD123(IL-3R)、cMET、DLL/Notch、EGFR、EpCAM、FGF、FGF-R、GD2、HER2、间皮素、粘连蛋白-4、PAP、PDGFRα、PSA、PSA3、PSMA、RANKL、SLAMF7、STEAP1、TARP、TROP2、VEGF或VEGF-R。

在一些实施方案中，癌细胞的表面上的抗原是CEA、未成熟的层粘连蛋白受体、TAG-72、HPV E6、HPV E7、BING-4、钙活化的氯化物通道2、细胞周期素-B1、9D7、EpCAM、EphA3、Her2/neu、端粒酶、间皮素、SAP-1、surviving、BAGE家族抗原、CAGE家族抗原、GAGE家族抗原、MAGE家族抗原、SAGE家族抗原、XAGE家族抗原、NY-ESO-1/LAGE-1、PRAME、SSX-2、Melan-A、MART-1、Gp100、pmel17、酪氨酸酶、TRP-1、TRP-2、P.多肽、MC1R、前列腺特异性抗原、β-连环蛋白或BRCA1。

在一些实施方案中，癌细胞的表面上的抗原是CD33。

在一些实施方案中，第二结合结构域包含：VH，该VH包含分别具有VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，这些VH CDR属于具有SEQ IDNO:15的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，第二结合结构域包含VL，该VL包含分别具有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，这些VL CDR属于具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，第二结合结构域包含：(i)VH，该VH包含分别具有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，这些VH CDR属于具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH；和(ii)VL，该VL包含分别具有VLCDR1、VL CDR2和VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，这些VL CDR属于具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，第二结合结构域的VH CDR1、VHCDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3氨基酸序列根据Kabat编号系统。在一些实施方案中，第二结合结构域的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3氨基酸序列根据Chothia编号系统。在一些实施方案中，第二结合结构域的VH CDR1、VH CDR2、VHCDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3氨基酸序列根据AbM编号系统。在一些实施方案中，第二结合结构域的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3氨基酸序列根据Contact编号系统。在一些实施方案中，第二结合结构域的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VLCDR1、VL CDR2和VL CDR3氨基酸序列根据IMGT编号系统。在一些实施方案中，第二结合结构域的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3氨基酸序列根据示例性编号系统。

在一些实施方案中，第二结合结构域包含：VH，该VH包含具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3。在一些实施方案中，第二结合结构域包含：VL，该VL包含具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VL CDR1、具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VH CDR3。在一些实施方案中，第二结合结构域包含：(i)VH，该VH包含具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3；和(ii)VL，该VL包含具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VL CDR1、具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。

在一些实施方案中，第二结合结构域包含具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，第二结合结构域包含具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，第二结合结构域包含具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH和具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL。

在一些实施方案中，第二结合结构域的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3形成CD33的抗原的结合位点。在一些实施方案中，第一结合结构域的VHCDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3形成CD33的表位。

在一些实施方案中，第二结合结构域与癌细胞的表面上的抗原特异性结合。

在一些实施方案中，第一结合结构域是多价的，第二结合结构域是多价的，或者其中第一结合结构域和第二结合结构域两者都是多价的。在一些实施方案中，第一结合结构域是多价的。在一些实施方案中，第二结合结构域是多价的。在一些实施方案中，第一结合结构域和第二结合结构域两者均是多价的。

在一些实施方案中，第一结合结构域能够结合至少两个抗原，或者其中第二结合结构域能够结合至少两个抗原。在一些实施方案中，第一结合结构域能够结合至少两个抗原。在一些实施方案中，第二结合结构域能够结合至少两个抗原。在一些实施方案中，第一结合结构域能够结合至少三个抗原，或者其中第二结合结构域能够结合至少三个抗原。在一些实施方案中，第一结合结构域能够结合至少三个抗原。在一些实施方案中，第二结合结构域能够结合至少三个抗原。在一些实施方案中，第一结合结构域能够结合至少四个抗原，或者其中第二结合结构域能够结合至少四个抗原。在一些实施方案中，第一结合结构域能够结合至少四个抗原。在一些实施方案中，第二结合结构域能够结合至少四个抗原。在一些实施方案中，第一结合结构域能够结合至少五个抗原，或者其中第二结合结构域能够结合至少五个抗原。在一些实施方案中，第一结合结构域能够结合至少五个抗原。在一些实施方案中，第二结合结构域能够结合至少五个抗原。

在一些实施方案中，多特异性抗体是双特异性抗体。在一些实施方案中，多特异性抗体是三特异性抗体。在一些实施方案中，多特异性抗体是四特异性抗体。

在一些实施方案中，抗体是人源化抗体。在一些实施方案中，抗体是IgG抗体。在一些实施方案中，IgG抗体是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。在一些实施方案中，抗体包含κ轻链。在一些实施方案中，抗体包含λ轻链。在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。

在另一方面，提供了一种多特异性抗体，该多特异性抗体包含：能够结合T细胞的表面上的TRDV2的第一构件；和能够结合癌抗原的第二构件。在某些实施方案中，T细胞是γδT细胞。在一些实施方案中，癌抗原位于癌细胞的表面上。在一些实施方案中，多特异性抗体是双特异性抗体。

在另一个总的方面，本文提供了分离的核酸，该核酸编码本文提供的单克隆抗体或其抗原结合片段。在另一个总的方面，本文提供了分离的核酸，该核酸编码双特异性抗体或其抗原结合片段。本领域的技术人员将理解，可以改变(例如置换、缺失、插入等)蛋白质的编码序列而不改变蛋白质的氨基酸序列。因此，本领域的技术人员将理解，可以变更编码本文提供的单克隆抗体和/或双特异性抗体的核酸序列，而不改变蛋白质的氨基酸序列。

在另一个总的方面，本文提供了包含编码单克隆抗体或其抗原结合片段的分离的核酸的载体。在另一个总的方面，本文提供了包含编码双特异性抗体或其抗原结合片段的分离的核酸的载体。根据本公开，可使用本领域的技术人员已知的任何载体，诸如质粒、粘端质粒、噬菌体载体或病毒载体。在一些实施方案中，载体是重组表达载体，诸如质粒。载体可包括建立表达载体的常规功能的任何元件，例如启动子、核糖体结合元件、终止子、增强子、选择标记和复制起点。启动子可为组成型、诱导型或阻抑型启动子。能够向细胞递送核酸的多种表达载体在本领域中是已知的，并且在本文可用于在细胞中产生抗体或其抗原结合片段。常规克隆技术或人工基因合成可以用于根据本文提供的实施方案生成重组表达载体。根据本公开，此类技术是本领域技术人员所熟知的。

在另一个总的方面，本文提供了包含编码本文提供的单克隆抗体和/或双特异性抗体或其抗原结合片段的分离的核酸的宿主细胞。鉴于本公开，本领域的技术人员已知的任何宿主细胞都可以用于重组表达本文提供的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，宿主细胞是大肠杆菌TG1或BL21细胞(用于表达例如scFv或Fab抗体)、CHO-DG44或CHO-K1细胞或HEK293细胞(用于表达例如全长IgG抗体)。根据具体实施方案，通过常规方法诸如化学转染、热休克或电穿孔将重组表达载体转化到宿主细胞中，其中将该重组表达载体稳定整合到宿主细胞基因组中，使得重组核酸有效表达。

在另一方面，提供了编码本文提供的多特异性TRDV2抗体的核酸。在另一方面，提供了载体，该载体包含编码本文提供的多特异性TRDV2抗体的核酸。在另一方面，提供了包含载体的宿主细胞，该载体包含编码本文提供的多特异性TRDV2抗体的核酸。在另一方面，提供了试剂盒，该试剂盒包括包含编码本文提供的多特异性TRDV2抗体的核酸的载体和用于该载体的包装。

在另一方面，本文提供了药物组合物，该药物组合物包括本文提供的多特异性TRDV2抗体和药学上可接受的载剂。

在另一方面，提供了产生包含本文提供的多特异性TRDV2抗体的药物组合物的方法，该方法包括将多特异性抗体与药学上可接受的载剂组合以获得该药物组合物。

在另一个总的方面，本文提供了产生本文所公开的双特异性抗体或其抗原结合片段的方法。所述方法包括在产生本文所公开的双特异性抗体或其抗原结合片段的条件下培养包含编码双特异性抗体或其抗原结合片段的核酸的细胞，以及从该细胞或细胞培养物(例如，从上清液)回收抗体或其抗原结合片段。可从细胞收获表达的抗体或其抗原结合片段并且根据本领域已知以及如本文所述的常规技术进行纯化。

药物组合物

在另一个总的方面，本文提供了药物组合物，该药物组合物包含分离的双特异性抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载剂。如本文所用，术语“药物组合物”意指包含本文提供的抗体和药学上可接受的载剂的产品。本文提供的抗体和包含这些抗体的组合物也可用于制造本文提到的治疗应用的药物。

如本文所用，术语“载剂”是指任何赋形剂、稀释剂、填充剂、盐、缓冲剂、稳定剂、增溶剂、油、类脂、含脂质囊泡、微球体、脂质体包囊、或本领域公知的用于在药物制剂中使用的其他材料。应当理解，载剂、赋形剂或稀释剂的特征将取决于具体应用的施用途径。如本文所用，术语“药学上可接受的载剂”是指不干扰本文提供的组合物的效果或本文提供的组合物的生物活性的非毒性材料。鉴于本公开，根据具体实施方案，适用于抗体药物组合物的任何药学上可接受的载剂均可用于本文。

药物活性成分与药学上可接受的载剂的制剂为本领域中已知的，例如，“Remington:The Science and Practice of Pharmacy”(例如，第21版(2005年)以及任何后续版本)。附加成分的非限制性示例包括：缓冲剂、稀释剂、溶剂、张度调节剂、防腐剂、稳定剂和螯合剂。一种或多种药学上可接受的载剂可用于配制本文提供的药物组合物。

在一个实施方案中，该药物组合物为液体制剂。示例性的液体制剂为水性制剂，即包含水的制剂。液体制剂可包含溶液、悬浮液、乳液、微乳液、凝胶等等。水性制剂通常包含至少50％w/w的水，或至少60％w/w、70％w/w、75％w/w、80％w/w、85％w/w、90％w/w或至少95％w/w的水。

在一个实施方案中，药物组合物可被配制为可例如经由注射装置(例如，注射器或输液泵)注射的注射剂。注射可以例如皮下、肌内、腹膜内、玻璃体内或静脉内递送。

在另一个实施方案中，药物组合物为固体制剂，例如冷冻干燥或喷雾干燥的组合物，其可按原样使用，或在使用前由医师或患者添加溶剂和/或稀释剂。固体剂型可包括片剂，诸如压片和/或包衣片，以及胶囊剂(例如，硬明胶胶囊或软明胶胶囊)。药物组合物也可为例如用于重构的小药囊、糖衣丸、粉末、颗粒剂、锭剂或粉末的形式。

剂型可以是速释型，在这种情况下它们可包含水溶性或水分散性载剂，或者它们可被延迟释放、缓释或改变释放，在这种情况下它们可包含在胃肠道中或在皮下调节剂型的溶解速率的水不溶性聚合物。

在其他实施方案中，药物组合物可以鼻内、颊内或舌下递送。

水性制剂中的pH可介于pH 3和pH 10之间。在一个实施方案中，制剂的pH为约7.0至约9.5。在另一个实施方案中，制剂的pH为约3.0至约7.0。

在另一个实施方案中，药物组合物包含缓冲剂。缓冲剂的非限制性示例包括：精氨酸、天冬氨酸、二羟乙基甘氨酸、柠檬酸盐、磷酸氢二钠、富马酸、甘氨酸、双甘氨肽、组氨酸、赖氨酸、马来酸、苹果酸、乙酸钠、碳酸钠、磷酸二氢钠、磷酸钠、琥珀酸盐、酒石酸、三嗪和三(羟甲基)氨基甲烷、以及它们的混合物。缓冲剂可单独存在或在聚集体中以约0.01mg/mL至约50mg/mL，例如约0.1mg/mL至约20mg/mL的浓度存在。包含这些特定缓冲剂中的每一种缓冲剂的药物组合物构成另选实施方案。

在另一个实施方案中，药物组合物包含防腐剂。防腐剂的非限制性示例包括：苄索氯铵、苯甲酸、苄醇、溴代硝基丙二醇、4-羟基苯甲酸丁酯、氯丁醇、氯甲酚、氯己啶、氯苯甘油醚、邻甲酚、间甲酚、对甲酚、4-羟基苯甲酸乙酯、咪脲、4-羟基苯甲酸甲酯、苯酚、2-苯氧基乙醇、2-苯基乙醇、4-羟基苯甲酸丙酯、脱氢乙酸钠、硫柳汞以及它们的混合物。防腐剂可单独存在或在聚集体中以约0.01mg/mL至约50mg/mL，例如约0.1mg/mL至约20mg/mL的浓度存在。包含这些特定防腐剂中的每一种防腐剂的药物组合物构成另选实施方案。

在另一个实施方案中，药物组合物包含等渗剂。该实施方案的非限制性示例包括盐(诸如氯化钠)、氨基酸(诸如甘氨酸、组氨酸、精氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸和苏氨酸)、糖醇(诸如甘油、1,2-丙二醇、丙二醇)、1,3-丙二醇和1,3-丁二醇)、聚乙二醇(例如，PEG400)以及它们的混合物。等渗剂的另一个示例包括糖。糖的非限制性示例可包括单糖、二糖或多糖，或水溶性葡聚糖，包括例如果糖、葡萄糖、甘露糖、山梨糖、木糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、葡聚糖、支链淀粉、糊精、环糊精、α和β-HPCD、可溶性淀粉、羟乙基淀粉或羧甲基纤维素钠。等渗剂的另一个示例是糖醇，其中术语“糖醇”被定义为具有至少一个-OH基团的C(4-8)烃。糖醇的非限制性示例包括甘露糖醇、山梨醇、肌醇、半乳糖醇、己六醇、木糖醇和阿拉伯糖醇。等渗剂可单独存在或在聚集体中以约0.01mg/mL至约50mg/mL，例如约0.1mg/mL至约20mg/mL的浓度存在。包含这些特定等渗剂中的每一种等渗剂的药物组合物构成另选实施方案。

在另一个实施方案中，药物组合物包含螯合剂。螯合剂的非限制性示例包括柠檬酸、天冬氨酸、乙二胺四乙酸(EDTA)的盐、以及它们的混合物。螯合剂可单独存在或在聚集体中以约0.01mg/mL至约50mg/mL，例如约0.1mg/mL至约20mg/mL的浓度存在。包含这些特定螯合剂中的每一种螯合剂的药物组合物构成另选实施方案。

在另一个实施方案中，药物组合物包含稳定剂。稳定剂的非限制性示例包括一种或多种聚集抑制剂、一种或多种氧化抑制剂、一种或多种表面活性剂和/或一种或多种蛋白酶抑制剂。

在另一个实施方案中，药物组合物包含稳定剂，其中所述稳定剂为羧基/羟基纤维素及其衍生物(诸如HPC、HPC-SL、HPC-L和HPMC)、环糊精、2-甲硫基乙醇、聚乙二醇(诸如PEG3350)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮、盐(诸如氯化钠)、含硫的物质(诸如单硫代甘油)或巯基乙酸。稳定剂可单独存在或在聚集体中以约0.01mg/mL至约50mg/mL，例如约0.1mg/mL至约20mg/mL的浓度存在。包含这些特定稳定剂中的每一种稳定剂的药物组合物构成另选实施方案。

在另外的实施方案中，药物组合物包含一种或多种表面活性剂，诸如一种表面活性剂、至少一种表面活性剂或两种不同的表面活性剂。术语“表面活性剂”是指任何由水溶性部分(亲水性)和脂溶性和部分(亲脂性)组成的分子或离子。例如，表面活性剂可选自由阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂和/或两性离子表面活性剂组成的组。表面活性剂可单独存在或在聚集体中以约0.1mg/mL至约20mg/mL的浓度存在。包含这些特定表面活性剂中的每一种表面活性剂的药物组合物构成另选实施方案。

在另一个实施方案中，药物组合物包含一种或多种蛋白酶抑制剂，诸如例如EDTA和/或苯甲脒盐酸盐(HCl)。蛋白酶抑制剂可单独存在或在聚集体中以约0.1mg/mL至约20mg/mL的浓度存在。包含这些特定蛋白酶抑制剂中的每一种蛋白酶抑制剂的药物组合物构成另选实施方案。

在另一个总的方面，本文提供了产生包含本文提供的双特异性抗体或其抗原结合片段的药物组合物的方法，该方法包括将双特异性抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的载剂组合以获得药物组合物。

替代结合剂

虽然本文例示了TRDV2抗体，但是应当理解，也考虑了与TRDV2结合的其他分子(TRDV2分子)。此类TRDV2分子包括替代结合剂，包括本文提供的抗体的等同物。在一些实施方案中，本公开的TRDV2分子包含非免疫球蛋白结合剂。在一些实施方案中，第一结合结构域包含非免疫球蛋白结合剂。在一些实施方案中，第二结合结构域包含非免疫球蛋白结合剂。

在某些实施方案中，此类非免疫球蛋白结合剂可结合本文例示的相同靶标。例如，在一些实施方案中，非免疫球蛋白结合剂可结合到与本文公开的抗体相同的表位。在一些实施方案中，非免疫球蛋白结合剂被鉴定为在竞争性结合测定中置换本公开的抗体或被本公开的抗体置换的试剂。这些替代结合剂可包括例如本领域已知的任何工程化蛋白质支架。此类支架包括例如基于脂质运载蛋白支架的抗运载蛋白，脂质运载蛋白支架是一种蛋白质结构，其特征在于支持形成配体结合位点的四个高变环的刚性β-桶。新的结合特异性可通过环区中的靶向随机诱变并结合功能展示和指导选择来工程化(参见，例如，Skerra，2008年，FEBS J.，第275卷：第2677-2683页)。其他合适的支架可包括，例如，基于人纤连蛋白III的第十个胞外结构域的adnectin或单体(参见，例如，Koide和Koide，2007年，MethodsMol.Biol.第352卷：第95-109页)；基于葡萄球菌蛋白A的Z结构域的亲和体(参见，例如，Nygren等人，2008年，FEBS J.，第275卷：第2668-2676页)；基于锚蛋白重复蛋白的DARPin(参见，例如，Stumpp等人，2008年，Drug.Discov.Today，第13卷：第695-701页)；基于人Fyn蛋白激酶的SH3结构域的fynomer(参见，例如，Grabulovski等人，2007年，J.Biol.Chem.第282卷：第3196-3204页)；基于来自嗜酸硫化叶菌(Sulfolobus acidolarius)的Sac7d的affitin(参见，例如，Krehenbrink等人，2008年，J.Mol.Biol.第383卷：第1058-1068页)；基于人y-B-晶状体蛋白的affilin(参见，例如，Ebersbach等人，2007年，J.Mol.Biol.第372卷：第172-185页)；基于膜受体蛋白的A结构域的高亲和性多聚体(参见，例如，Silverman等人，2005年，Biotechnol.第23卷：第1556-1561页)；富含半胱氨酸的打结素肽(参见，例如，Kolmar，2008年，FEBS J.，第275卷：第2684-2690页)；和工程化的Kunitz型抑制剂(参见，例如，Nixon和Wood，2006年，Curr.Opin.Drug.Discov.偏差第9卷：第261-268页)。有关综述，参见例如，Gebauer和Skerra，2009年，Curr.Opin.Chem.Biol.第13卷：第245-255页。

使用方法

还提供了靶向癌细胞的表面上的抗原的方法，该方法包括将该癌细胞暴露于本文提供的抗TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段。还提供了靶向癌细胞的表面上的抗原的方法，该方法包括将该癌细胞暴露于包含本文提供的抗TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段的药物组合物。

结合TRDV2或癌抗原的双特异性抗体及其抗原结合片段的功能活性可以通过本领域已知的和如本文所述的方法来表征。用于表征结合TRDV2或癌抗原的抗体及其抗原结合片段的方法包括但不限于亲和力和特异性测定，包括Biacore、ELISA和OCTETRED分析；通过FACS检测抗体与癌细胞的结合的结合测定；检测抗体与γδT细胞上的TRDV2的结合的结合测定。根据具体的实施方案，用于表征结合TRDV2或癌抗原的抗体及其抗原结合片段的方法包括以下所述的那些。

在一个方面，提供了将表达TRDV2的γδT细胞引导到癌细胞的方法，该方法包括使γδT细胞与本文提供的多特异性TRDV2抗体接触，其中该接触将γδT细胞引导到癌细胞。在另一方面，提供了一种抑制在细胞表面上表达癌抗原的癌细胞的生长或增殖的方法，该方法包括使癌细胞与本文提供的多特异性TRDV2抗体接触，其中使癌细胞与药物组合物接触抑制癌细胞的生长或增殖。在一些实施方案中，癌细胞在表达TRDV2的γδT细胞的存在下，同时与该多特异性抗体接触。

在一个方面，提供了用于消除受试者中的癌细胞的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的本文提供的多特异性TRDV2抗体。在另一方面，提供了用于治疗受试者的癌症的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的本文提供的多特异性TRDV2抗体。在一些实施方案中，受试者是有需要的受试者。在一些实施方案中，受试者是人。

在一个方面，提供了活化表达TRDV2的γδT细胞的方法，该方法包括使γδT细胞与本文提供的多特异性TRDV2抗体接触。在一些实施方案中，与表达TRDV2的对照γδT细胞相比，该接触导致CD69、CD25和/或颗粒酶B表达增加。

还提供了一种将表达Vδ2的γδT细胞引导到癌细胞的方法。所述方法可以包括使表达Vδ2的γδT细胞与本文提供的抗TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段接触，其中所述抗TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段将表达Vδ2的γδT细胞引导到癌症。还提供了将表达TRDV2的γδT细胞引导到癌细胞的方法，该方法包括使γδT细胞与本文提供的双特异性抗体接触，其中该接触将γδT细胞引导到癌细胞。

还提供了用于抑制癌细胞的生长或增殖的方法。所述方法可以包括使表达Vδ2的γδT细胞与本文提供的抗TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段接触，其中使癌细胞与抗TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段组合物接触抑制癌细胞的生长或增殖。还提供了一种抑制在细胞表面上表达癌抗原的癌细胞的生长或增殖的方法，该方法包括使癌细胞与本文提供的双特异性抗体接触，其中使癌细胞与药物组合物接触抑制癌细胞的生长或增殖。在一些实施方案中，癌细胞在表达TRDV2的γδT细胞的存在下，同时与该双特异性抗体接触。

在另一个总的方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，该方法包括向该受试者施用特异性结合TRDV2和癌细胞的表面上存在的癌抗原的分离的双特异性抗体或其抗原结合片段，或本文所公开的药物组合物。在一些实施方案中，提供了用于消除受试者中表达癌抗原的癌细胞的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的本文提供的双特异性抗体。在另一方面，提供了用于治疗受试者的全部或部分地由表达癌抗原的癌细胞引起的疾病的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的本文提供的双特异性抗体。在一些实施方案中，受试者是有需要的受试者。在一些实施方案中，受试者是人。在一些实施方案中，该疾病为癌症。在具体的实施方案中，双特异性抗体结合TRDV2和癌抗原。在某些实施例中，癌症是表达CD33的癌症。

在一些实施方案中，宫颈癌是鳞状细胞癌或腺癌。

在一些实施方案中，食道癌是腺癌或鳞状细胞癌。

在一些实施方案中，白血病是急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、毛细胞白血病(HCL)或骨髓增生异常综合征(MDS)。

在一些实施方案中，脊椎癌是脊椎转移瘤。

在一些实施方案中，外阴癌是鳞状细胞癌或腺癌。

在一些实施方案中，该癌抗原是血管生成素、BCMA、CD19、CD20、CD22、CD25(IL2-R)、CD30、CD33、CD37、CD38、CD52、CD56、CD123(IL-3R)、cMET、DLL/Notch、EGFR、EpCAM、FGF、FGF-R、GD2、HER2、间皮素、粘连蛋白-4、PDGFRα、RANKL、SLAMF7、TROP2、VEGF或VEGF-R。在一些实施方案中，该癌抗原是CEA、不成熟的层粘连蛋白受体、TAG-72、HPV E6、HPV E7、BING-4、钙活化的氯化物通道2、细胞周期素-B1、9D7、EpCAM、EphA3、Her2/neu、端粒酶、间皮素、SAP-1、存活蛋白、BAGE家族抗原、CAGE家族抗原、GAGE家族抗原、MAGE家族抗原、SAGE家族抗原、XAGE家族抗原、NY-ESO-1/LAGE-1、PRAME、SSX-2、Melan-A、MART-1、Gp100、pmel17、酪氨酸酶、TRP-1、TRP-2、P.多肽、MC1R、前列腺特异性抗原、β-连环蛋白、BRCA1、BRCA2、CDK4、CML66、纤连蛋白、MART-2、p53、Ras、TGF-βRII或MUC1。

在另一个总的方面，本文提供了靶向癌细胞的表面上的CD33的方法，该方法包括将该癌细胞暴露于本文提供的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段或药物组合物。

在某些实施方案中，靶向CD33的C2结构域。在其他实施方案中，靶向CD33的V结构域。

与TRDV2和/或CD33结合的双特异性抗体及其抗原结合片段的功能活性可以通过本领域已知的和如本文所述的方法来表征。用于表征与TRDV2和/或CD33结合的抗体及其抗原结合片段的方法包括但不限于亲和力和特异性测定，包括Biacore、ELISA和OCTETRED分析；通过FACS检测抗体与癌细胞上的CD33的结合的结合测定；检测抗体与γδT细胞上的TRDV2的结合的结合测定。根据具体的实施方案，用于表征与TRDV2和/或CD33结合的抗体及其抗原结合片段的方法包括以下所述的那些。

在另一个总的方面，本文提供了一种将表达Vδ2的γδT细胞引导到癌细胞的方法。所述方法包括使表达Vδ2的γδT细胞与抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段接触，其中所述抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段将表达Vδ2的γδT细胞引导到在其表面上具有CD33的癌细胞。

在另一个总的方面，本文提供了用于抑制癌细胞的生长或增殖的方法。所述方法包括使表达Vδ2的γδT细胞与抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段接触，其中使癌细胞与抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段组合物接触抑制癌细胞的生长或增殖。

在另一个总的方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，该方法包括向该受试者施用特异性结合TRDV2和肿瘤细胞的表面上存在的肿瘤相关抗原(例如，CD33)的分离的双特异性抗体或其抗原结合片段，或本文所公开的药物组合物。癌症可以是例如表达CD33的癌症。癌症可以是例如表达CD33的癌症。癌症可以是例如血液学癌症。血液学癌症可以是例如白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。白血病可以是急性髓性白血病(AML)或急性淋巴细胞白血病(ALL)。

根据具体实施方案，提供了用于治疗癌症的组合物。对于癌症治疗，组合物可与另一种治疗联合使用，包括但不限于化学疗法、抗CD20mAb、抗TIM-3mAb、抗CTLA-4抗体、抗PD-L1抗体、抗PD-1抗体、PD-1/PD-L1疗法、IDO、抗OX40抗体、抗GITR抗体、抗CD40抗体、抗CD38抗体、细胞因子、溶瘤病毒、TLR激动剂、STING激动剂、其他免疫肿瘤学药物、抗血管生成剂、放射疗法、抗体-药物缀合物(ADC)、靶向疗法或其他抗癌药物。

还提供了活化表达TRDV2的γδT细胞的方法，该方法包括使γδT细胞与本文提供的抗TRDV2双特异性抗体接触。在一些实施方案中，与表达TRDV2的对照γδT细胞相比，该接触导致CD69、CD25和/或颗粒酶B表达增加。

在本文提供的方法的各种实施方案中，双特异性抗体特异性结合TRDV2和CD33的C2结构域。在本文提供的方法的其他各种实施方案中，双特异性抗体特异性结合TRDV2和CD33的V结构域。

根据某些实施方案，药物组合物包含有效量的本文提供的抗TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段。

如本文所用，术语“有效量”是指在受试者中引起期望的生物学或药物学应答的活性成分或组分的量。

根据具体实施方案，有效量是指足以实现以下作用中的一者、两者、三者、四者或更多者的治疗量：(i)减小或改善所治疗疾病、障碍或病症或与之相关联的症状的严重性；(ii)减少所治疗疾病、障碍或病症或与之相关联的症状的持续时间；(iii)预防所治疗疾病、障碍或病症或与之相关联的症状发展；(iv)引起所治疗疾病、障碍或病症或与之相关联的症状消退；(v)预防所治疗疾病、障碍或病症或与之相关联的症状发展或发作；(vi)预防所治疗疾病、障碍或病症或与之相关联的症状复发；(vii)减少患有所治疗疾病、障碍或病症或与之相关联的症状的受试者的住院治疗；(viii)减少患有所治疗疾病、障碍或病症或与之相关联的症状的受试者的住院时间；(ix)提高患有所治疗疾病、障碍或病症或与之相关联的症状的受试者的存活；(xi)抑制或减少受试者中所治疗疾病、障碍或病症或与之相关联的症状；和/或(xii)增强或改善另一种疗法的预防或治疗效果。

有效量或剂量可根据各种因素，诸如所治疗疾病、障碍或病症、施用方式、目标位点、受试者的生理状态(包括例如年龄、体重、健康)、受试者是人还是动物、施用的其他药物，以及治疗是预防性的还是治疗性的而变化。最佳地滴定治疗剂量以优化安全性和功效。

根据特定实施方案，本文所述的组合物被配制成适于施用于受试者的预期途径。例如，本文所述组合物可被配制成适于静脉内、皮下或肌内注射施用。

如本文所用，术语“处理”和“治疗”(“treat”、“treating”和“treatment”)均旨在是指与癌症有关的至少一种可测量物理参数的改善或逆转，其不一定是受试者中可识别的，但能够在受试者中识别。术语“处理”和“治疗”也可指导致消退，预防发展，或至少延缓疾病、障碍或病症的发展。在特定实施方案中，“处理”和“治疗”是指减轻、预防发展或发作，或缩短与疾病、障碍或病症(诸如肿瘤或癌症)相关的一种或多种症状的持续时间。在特定实施方案中，“处理”和“治疗”是指预防疾病、障碍或病症的复发。在特定实施方案中，“处理”和“治疗”是指患有疾病、障碍或病症的受试者的存活提高。在特定实施方案中，“处理”和“治疗”是指受试者中疾病、障碍或病症的消除。

在一些实施方案中，本文提供的抗TRDV2双特异性抗体与补充疗法组合使用。

如本文所用，在将两种或更多种疗法施用于受试者的上下文中，术语“联合”是指使用多于一种疗法。术语“联合”的使用并不限制疗法施用于受试者的次序。例如，第一疗法(例如，本文所述的组合物)可在第二疗法施用于受试者之前(例如，5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、16小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周以前)，与此同时，或之后(例如，5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、16小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周以后)施用。

本文提供的TRDV2抗体也可用作检测表达TRDV2的细胞的试剂。因此，在另一方面，提供了检测表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括使细胞与本文提供的TRDV2抗体接触。在某些实施方案中，该细胞在细胞群中。在某些实施方案中，检测通过ELISA进行。在一些实施方案中，检测通过FACS分析进行。还提供了包含本文提供的TRDV2抗体和使用说明书的试剂盒。

富集和检测方法

在一个方面，本文提供的TRDV2抗体用作检测表达TRDV2的细胞的试剂。因此，在其他方法中，提供了检测表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括使细胞与本文提供的TRDV2抗体接触。在某些实施方案中，检测通过ELISA进行。在一些实施方案中，检测通过FACS分析进行。还提供了包含本文提供的TRDV2抗体和使用说明书的试剂盒。

可使用已知技术诸如珠、微流体、固体载体、柱等来完成富集、分离、隔离、纯化、分选、选择、捕获或检测或它们的任何组合。例如，当与本文提供的TRDV2抗体结合时，可使用已知方法分离或可视化TRDV2细胞。

本文提供的TRDV2抗体或多特异性TRDV2抗体可用于选择性富集、分离、隔离、纯化、分选、选择、捕获或检测表达TRDV2的细胞。本文提供的TRDV2抗体或多特异性TRDV2抗体可以双特异性形式使用，例如含有特异性结合TRDV2的第一抗原结合结构域和特异性结合第二靶标的第二抗原结合结构域。在其他实施方案中，本文提供的多特异性TRDV2抗体可以进一步掺入第三抗原结合结构域的形式使用，该第三抗原结合结构域特异性结合第三抗原(例如，在三特异性抗体处)。在其他实施方案中，本文提供的多特异性TRDV2抗体可以进一步掺入第四抗原结合结构域的形式使用，该第四抗原结合结构域特异性结合第四抗原。(例如，作为四特异性抗体)。

在一个方面，本文提供了富集表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：提供包括表达TRDV2的细胞的样品；使该样品与本文提供的TRDV2抗体接触；以及富集与TRDV2抗体结合的表达TRDV2的细胞。在一个方面，本文提供了分离表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：提供包括表达TRDV2的细胞的样品；使该样品与本文提供的TRDV2抗体接触；以及分离与TRDV2抗体结合的表达TRDV2的细胞。在一个方面，本文提供了隔离表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：提供包括表达TRDV2的细胞的样品；使该样品与本文提供的TRDV2抗体接触；以及隔离与TRDV2抗体结合的表达TRDV2的细胞。在一个方面，本文提供了纯化表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：提供包括表达TRDV2的细胞的样品；使该样品与本文提供的TRDV2抗体接触；以及纯化与TRDV2抗体结合的表达TRDV2的细胞。在一个方面，本文提供了分选表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：提供包括表达TRDV2的细胞的样品；使该样品与本文提供的TRDV2抗体接触；以及分选与TRDV2抗体结合的表达TRDV2的细胞。在一个方面，本文提供了选择表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：提供包括表达TRDV2的细胞的样品；使该样品与本文提供的TRDV2抗体接触；以及选择与TRDV2抗体结合的表达TRDV2的细胞。在一个方面，本文提供了捕获表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：提供包括表达TRDV2的细胞的样品；使该样品与本文提供的TRDV2抗体接触；以及捕获与TRDV2抗体结合的表达TRDV2的细胞。在一个方面，本文提供了检测表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：提供包括表达TRDV2的细胞的样品；使该样品与本文提供的TRDV2抗体接触；以及检测与TRDV2抗体结合的表达TRDV2的细胞。

在一个方面，本文提供了富集表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：使表达TRDV2的细胞与本文提供的TRDV2抗体接触；以及富集与TRDV2抗体结合的表达TRDV2的细胞。在一个方面，本文提供了分离表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：使表达TRDV2的细胞与本文提供的TRDV2抗体接触；以及分离与TRDV2抗体结合的表达TRDV2的细胞。在一个方面，本文提供了隔离表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：使表达TRDV2的细胞与本文提供的TRDV2抗体接触；以及隔离与TRDV2抗体结合的表达TRDV2的细胞。在一个方面，本文提供了纯化表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：使表达TRDV2的细胞与本文提供的TRDV2抗体接触；以及纯化与TRDV2抗体结合的表达TRDV2的细胞。在一个方面，本文提供了分选表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：使表达TRDV2的细胞与本文提供的TRDV2抗体接触；以及分选与TRDV2抗体结合的表达TRDV2的细胞。在一个方面，本文提供了选择表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：使表达TRDV2的细胞与本文提供的TRDV2抗体接触；以及选择与TRDV2抗体结合的表达TRDV2的细胞。在一个方面，本文提供了捕获表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：使表达TRDV2的细胞与本文提供的TRDV2抗体接触；以及捕获与TRDV2抗体结合的表达TRDV2的细胞。在一个方面，本文提供了检测表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：使表达TRDV2的细胞与本文提供的TRDV2抗体接触；以及检测与TRDV2抗体结合的表达TRDV2的细胞。

在一个方面，本文提供了富集表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：使表达TRDV2的细胞与本文提供的TRDV2抗体接触；以及基于表达TRDV2的细胞与TRDV2抗体的结合来富集表达TRDV2的细胞。在一个方面，本文提供了分离表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：使表达TRDV2的细胞与本文提供的TRDV2抗体接触；以及基于表达TRDV2的细胞与TRDV2抗体的结合来分离表达TRDV2的细胞。在一个方面，本文提供了隔离表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：使表达TRDV2的细胞与本文提供的TRDV2抗体接触；以及基于表达TRDV2的细胞与TRDV2抗体的结合来隔离表达TRDV2的细胞。在一个方面，本文提供了纯化表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：使表达TRDV2的细胞与本文提供的TRDV2抗体接触；以及基于表达TRDV2的细胞与TRDV2抗体的结合来纯化表达TRDV2的细胞。在一个方面，本文提供了分选表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：使表达TRDV2的细胞与本文提供的TRDV2抗体接触；以及基于表达TRDV2的细胞与TRDV2抗体的结合来分选表达TRDV2的细胞。在一个方面，本文提供了选择表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：使表达TRDV2的细胞与本文提供的TRDV2抗体接触；以及基于表达TRDV2的细胞与TRDV2抗体的结合来选择表达TRDV2的细胞。在一个方面，本文提供了捕获表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：使表达TRDV2的细胞与本文提供的TRDV2抗体接触；以及基于表达TRDV2的细胞与TRDV2抗体的结合来捕获表达TRDV2的细胞。在一个方面，本文提供了检测表达TRDV2的细胞的方法，该方法包括：使表达TRDV2的细胞与本文提供的TRDV2抗体接触；以及基于表达TRDV2的细胞与TRDV2抗体的结合来检测表达TRDV2的细胞。

在方法的某些实施方案中，表达TRDV2的细胞是T细胞。在方法的一些实施方案中，表达TRDV2的细胞在细胞群中。在方法的一些实施方案中，表达TRDV2的细胞在淋巴细胞群中。在方法的一些实施方案中，表达TRDV2的细胞在T细胞群中。在方法的一些实施方案中，表达TRDV2的细胞作为细胞群提供。在方法的一些实施方案中，表达TRDV2的细胞作为淋巴细胞群提供。在方法的一些实施方案中，表达TRDV2的细胞作为T细胞群提供。在方法的一些实施方案中，表达TRDV2的细胞作为包含细胞群的样品提供。在方法的一些实施方案中，表达TRDV2的细胞作为包含淋巴细胞群的样品提供。在方法的一些实施方案中，表达TRDV2的细胞作为包含T细胞群的样品提供。在方法的一些实施方案中，样品是血液样品。在方法的一些实施方案中，样品是组织样品。在方法的一些实施方案中，样品是组织培养样品。

在方法的一些实施方案中，TRDV2抗体是本文提供的多特异性TRDV2抗体。在方法的一些实施方案中，TRDV2抗体是本文提供的双特异性TRDV2抗体。在方法的一些实施方案中，TRDV2抗体是本文提供的三特异性TRDV2抗体。在方法的一些实施方案中，TRDV2抗体是本文提供的四特异性TRDV2抗体。在某些实施方案中，TRDV2抗体与TRDV2特异性结合。在一个实施方案中，多特异性TRDV2抗体包含：(a)结合TRDV2的第一结合结构域，以及(b)结合第二靶标的第二结合结构域。在一个实施方案中，多特异性TRDV2抗体包含：(a)结合TRDV2的第一结合结构域，(b)结合第二靶标的第二结合结构域，以及(c)结合第三靶标的第三结合结构域。在一个实施方案中，多特异性TRDV2抗体包含：(a)结合TRDV2的第一结合结构域，(b)结合第二靶标的第二结合结构域，(c)结合第三靶标的第三结合结构域，以及(d)结合第四靶标的第四结合结构域。在一个实施方案中，多特异性TRDV2抗体包含：(a)特异性结合TRDV2的第一结合结构域，以及(b)特异性结合第二靶标的第二结合结构域。在一个实施方案中，多特异性TRDV2抗体包含：(a)特异性结合TRDV2的第一结合结构域，(b)特异性结合第二靶标的第二结合结构域，以及(c)特异性结合第三靶标的第三结合结构域。在一个实施方案中，多特异性TRDV2抗体包含：(a)特异性结合TRDV2的第一结合结构域，(b)特异性结合第二靶标的第二结合结构域，(c)特异性结合第三靶标的第三结合结构域，以及(d)特异性结合第四靶标的第四结合结构域。

在方法的一些实施方案中，TRDV2抗体是多特异性TRDV2抗体，其中第二靶标是CD123。在方法的一些实施方案中，TRDV2抗体是多特异性TRDV2抗体，其中第二靶标是CD33。在方法的一些实施方案中，TRDV2抗体是多特异性TRDV2抗体，其中第二靶标是TRBC1。在方法的一些实施方案中，TRDV2抗体是多特异性TRDV2抗体，其中第二靶标是BCMA。在方法的一些实施方案中，TRDV2抗体是多特异性TRDV2抗体，其中第二靶标是PSMA。

在本文提供的方法的具体实施方案中，该方法使用多标记物检测。在一些实施方案中，多标记物检测使用本文提供的多特异性TRDV2抗体。在一些实施方案中，多标记物检测使用本文提供的双特异性TRDV2抗体。在一些实施方案中，多标记物检测使用本文提供的三特异性TRDV2抗体。在一些实施方案中，多标记物检测使用本文提供的四特异性TRDV2抗体。

在本文提供的方法的某些实施方案中，这些方法作为T细胞制造过程中的步骤包括在内。在某些实施方案中，细胞是CAR-T细胞。在本文提供的方法的某些实施方案中，这些方法作为T细胞修饰过程中的步骤包括在内。

在本文提供的方法的某些实施方案中，这些方法作为诊断方法中的步骤包括在内。在本文提供的方法的某些实施方案中，这些方法作为定量表达TRDV2的T细胞的方法中的步骤包括在内。

在本文提供的方法的某些实施方案中，该方法还包括扩增富集的、分离的、隔离的、纯化的、分选的、选择的、捕获的或检测到的表达TRDV2的细胞。在某些实施方案中，扩增在体外进行。在某些实施方案中，扩增在体内进行。在本文提供的方法的某些实施方案中，该方法还包括培养富集的、分离的、隔离的、纯化的、分选的、选择的、捕获的或检测到的表达TRDV2的细胞。在某些实施方案中，培养在体外进行。在某些实施方案中，培养在体内进行。在本文提供的方法的某些实施方案中，该方法还包括定量富集的、分离的、隔离的、纯化的、分选的、选择的、捕获的或检测到的表达TRDV2的细胞。

实施方案

本文提供了以下非限制性实施方案。

在一组实施方案中，提供了：

1.一种双特异性抗体，该双特异性抗体包含：

(a)第一结合结构域，该第一结合结构域与TRDV2抗原结合，和

(b)第二结合结构域，该第二结合结构域与癌细胞的表面上的抗原结合。

2.根据实施方案1所述的双特异性抗体，其中该第一结合结构域包含：

(i)VH，该VH包含具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3；和

(ii)VL，该VL包含具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VL CDR1、具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3。

3.根据实施方案2所述的双特异性抗体，其中第一结合结构域包含具有SEQ IDNO:7的氨基酸序列的VH。

4.根据实施方案2所述的双特异性抗体，其中第一结合结构域包含具有SEQ IDNO:8的氨基酸序列的VL。

5.根据实施方案2所述的双特异性抗体，其中第一结合结构域包含具有SEQ IDNO:7的氨基酸序列的VH和具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL。

6.根据实施方案1至5中任一项所述的双特异性抗体，其中癌细胞的表面上的抗原是肿瘤特异性抗原、肿瘤相关抗原或新抗原。

7.根据实施方案1至6中任一项所述的双特异性抗体，其中癌细胞是肾上腺癌、肛门癌、阑尾癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、食道癌、胆囊癌、妊娠滋养细胞癌、头颈癌、霍奇金淋巴瘤、肠癌、肾癌、白血病、肝癌、肺癌、黑色素瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤、神经内分泌肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、鼻窦癌、皮肤癌、软组织肉瘤、脊椎癌、胃癌、睾丸癌、喉癌、甲状腺癌、子宫癌、子宫内膜癌、阴道癌或外阴癌的细胞。

8.根据实施方案1至7中任一项所述的双特异性抗体，其中

(i)肾上腺癌是肾上腺皮质癌(ACC)、副肾皮质癌、嗜铬细胞瘤或神经母细胞瘤；

(ii)肛门癌是鳞状细胞癌、一穴肛原癌、腺癌、基底细胞癌或黑色素瘤；

(iii)阑尾癌是神经内分泌肿瘤(NET)、粘液腺癌、杯状细胞类癌、肠型腺癌或印戒细胞腺癌；

(iv)胆管癌是肝外胆管癌、腺癌、肝门部胆管癌、肝门周围胆管癌、远端胆管癌或肝内胆管癌；

(v)膀胱癌是移行细胞癌(TCC)、乳头状癌、扁平癌、鳞状细胞癌、腺癌、小细胞癌或肉瘤；

(vi)骨癌是原发性骨癌、肉瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、肉瘤、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、骨巨细胞瘤、脊索瘤或转移性骨癌；

(vii)脑癌是星形细胞瘤、脑干胶质瘤、胶质母细胞瘤、脑膜瘤、室管膜瘤、少突神经胶质瘤、混合胶质瘤、垂体腺癌、垂体腺瘤、颅咽管瘤、生殖细胞肿瘤、松果体区肿瘤、髓母细胞瘤或原发性CNS淋巴瘤；

(viii)乳腺癌是乳腺腺癌、浸润性乳腺癌、非浸润性乳腺癌、乳腺肉瘤、化生性癌、腺样囊性癌、叶状肿瘤、血管肉瘤、HER2阳性乳腺癌、三阴性乳腺癌或炎性乳腺癌；

(ix)宫颈癌是鳞状细胞癌或腺癌；

(x)结直肠癌是结直肠腺癌、原发性结直肠淋巴瘤、胃肠道间质瘤、平滑肌肉瘤、类癌瘤、粘液腺癌、印戒细胞腺癌、胃肠道类癌瘤或黑色素瘤；

(xi)食道癌是腺癌或鳞状细胞癌；

(xii)胆囊癌是腺癌、乳头状腺癌、腺鳞癌、鳞状细胞癌、小细胞癌或肉瘤；

(xiii)妊娠滋养细胞疾病(GTD)是葡萄胎、妊娠滋养细胞肿瘤(GTN)、绒毛膜癌、胎盘部位滋养细胞肿瘤(PSTT)或上皮样滋养细胞肿瘤(ETT)；

(xiv)头颈癌是喉癌、鼻咽癌、下咽癌、鼻腔癌、副鼻窦癌、唾液腺癌、口腔癌、口咽癌或扁桃体癌；

(xv)霍奇金淋巴瘤是经典霍奇金淋巴瘤、结节硬化型、混合细胞型、富于淋巴细胞型、淋巴细胞消减型或结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤(NLPHL)；

(xvi)肠癌是小肠癌(small intestine cancer)、小肠癌(small bowel cancer)、腺癌、肉瘤、胃肠道间质瘤、类癌瘤或淋巴瘤；

(xvii)肾癌是肾细胞癌(RCC)、透明细胞RCC、乳头状RCC、嫌色细胞RCC、集合管RCC、未分类RCC、移行细胞癌、尿路上皮癌、肾盂癌或肾肉瘤；

(xviii)白血病是急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、毛细胞白血病(HCL)或骨髓增生异常综合征(MDS)；

(xix)肝癌是肝细胞癌(HCC)、纤维板层样HCC、胆管癌、血管肉瘤或肝转移；

(xx)肺癌是小细胞肺癌、小细胞癌、组合小细胞癌、非小细胞肺癌、肺腺癌、鳞状细胞肺癌、大细胞未分化癌、肺结节、转移性肺癌、腺鳞癌、大细胞神经内分泌癌、唾液腺型肺癌、肺类癌、间皮瘤、肺肉瘤样癌或恶性颗粒细胞肺肿瘤；

(xxi)黑色素瘤是浅表扩散性黑色素瘤、结节性黑色素瘤、肢端雀斑样痣性黑色素瘤、恶性雀斑样痣性黑色素瘤、无色素性黑色素瘤、促纤维增生性黑色素瘤、眼球黑色素瘤或转移性黑色素瘤；

(xxii)间皮瘤是胸膜间皮瘤、腹膜间皮瘤、心包间皮瘤或睾丸间皮瘤；

(xxiii)多发性骨髓瘤是活动性骨髓瘤或冒烟型骨髓瘤；

(xxiv)神经内分泌肿瘤是胃肠道神经内分泌肿瘤、胰腺神经内分泌肿瘤或肺神经内分泌肿瘤；

(xxv)非霍奇金淋巴瘤是间变性大细胞淋巴瘤、淋巴母细胞淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、小细胞淋巴细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、前体T淋巴母细胞性白血病/淋巴瘤、急性淋巴细胞白血病(ALL)、成人T细胞淋巴瘤/白血病(ATLL)、毛细胞白血病、B细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、原发性中枢神经系统(CNS)淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)、边缘区淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤、淋巴结边缘区B细胞淋巴瘤、脾边缘区B细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、B细胞非霍奇金淋巴瘤、T细胞非霍奇金淋巴瘤、自然杀伤细胞淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、阿斯伯格综合症、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL)、间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、全身性ALCL、肠病型T细胞淋巴瘤(EATL)或肝脾γ/δT细胞淋巴瘤；

(xxvi)口腔癌是鳞状细胞癌、疣状癌、小唾液腺癌、淋巴瘤、良性口腔肿瘤、嗜酸性肉芽肿、纤维瘤、颗粒细胞瘤、角化棘皮瘤、平滑肌瘤、骨软骨瘤、脂肪瘤、神经鞘瘤、神经纤维瘤、乳头状瘤、尖锐湿疣、疣状黄瘤、化脓性肉芽肿、横纹肌瘤、牙源性肿瘤、白斑、红斑、鳞状细胞唇癌、基底细胞唇癌、口腔癌、牙龈癌或舌癌；

(xxvii)卵巢癌是卵巢上皮癌、粘液性上皮卵巢癌、子宫内膜样上皮卵巢癌、透明细胞上皮卵巢癌、未分化上皮卵巢癌、卵巢低恶性潜能肿瘤、原发性腹膜癌、输卵管癌、生殖细胞瘤、畸胎瘤、无性细胞瘤、卵巢生殖细胞癌、内胚窦瘤、性索-间质瘤、性索-性腺间质瘤、卵巢间质肿瘤、粒层细胞瘤、颗粒-卵泡膜细胞瘤、Sertoli-Leydig细胞瘤、卵巢肉瘤、卵巢癌肉瘤、卵巢腺肉瘤、卵巢平滑肌肉瘤、卵巢纤维肉瘤、库肯勃瘤或卵巢囊肿；

(xxviii)胰腺癌是胰腺外泌腺癌、胰腺内分泌腺癌或胰腺腺癌、胰岛细胞瘤或神经内分泌肿瘤；

(xxix)前列腺癌是前列腺腺癌、前列腺肉瘤、移行细胞癌、小细胞癌或神经内分泌肿瘤；

(xxx)鼻窦癌是鳞状细胞癌、粘膜细胞癌、腺样囊性细胞癌、腺泡细胞癌、鼻窦未分化癌、鼻腔癌、副鼻窦癌、上颌窦癌、筛窦癌或鼻咽癌；

(xxxi)皮肤癌是基底细胞癌、鳞状细胞癌、黑色素瘤、Merkel细胞癌、卡波西肉瘤(KS)、光化性角化病、皮肤淋巴瘤或角化棘皮瘤；

(xxxii)软组织癌是血管肉瘤、皮肤纤维肉瘤、上皮样肉瘤、尤因肉瘤、纤维肉瘤、胃肠道间质瘤(GIST)、卡波西肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、去分化脂肪肉瘤(DL)、粘液样/圆形细胞脂肪肉瘤(MRCL)、高分化脂肪肉瘤(WDL)、恶性纤维组织细胞瘤、神经纤维肉瘤、横纹肌肉瘤(RMS)或滑膜肉瘤；

(xxxiii)脊椎癌是脊椎转移瘤；

(xxxiv)胃癌是胃腺癌、胃淋巴瘤、胃肠道间质瘤、类癌瘤、胃类癌瘤、I型ECL细胞类癌、II型ECL细胞类癌或III型ECL细胞类癌；

(xxxv)睾丸癌是精原细胞瘤、非精原细胞瘤、胚胎癌、卵黄囊癌、绒毛膜癌、畸胎瘤、性腺间质瘤、睾丸间质细胞瘤或睾丸支持细胞瘤；

(xxxiv)喉癌是鳞状细胞癌、腺癌、肉瘤、喉癌、咽癌、鼻咽癌、口咽癌、下咽癌、喉癌、喉鳞状细胞癌、喉腺癌、淋巴上皮瘤、梭形细胞癌、疣状癌、未分化癌或淋巴结癌；

(xxxv)甲状腺癌是乳头状癌、滤泡状癌、Hürthle细胞癌、甲状腺髓样癌或未分化癌；

(xxxvi)子宫癌是子宫内膜癌、子宫内膜腺癌、子宫内膜样癌、浆液性腺癌、腺鳞癌、子宫癌肉瘤、子宫肉瘤、子宫平滑肌肉瘤、子宫内膜间质肉瘤或未分化肉瘤；

(xxxvii)阴道癌是鳞状细胞癌、腺癌、黑色素瘤或肉瘤；或者

(xxxviii)外阴癌是鳞状细胞癌或腺癌。

9.根据实施方案1至8中任一项所述的双特异性抗体，其中该癌抗原是血管生成素、BCMA、CD19、CD20、CD22、CD25(IL2-R)、CD30、CD33、CD37、CD38、CD52、CD56、CD123(IL-3R)、cMET、DLL/Notch、EGFR、EpCAM、FGF、FGF-R、GD2、HER2、间皮素、粘连蛋白-4、PDGFRα、RANKL、SLAMF7、TROP2、VEGF、VEGF-R。

10.根据实施方案1至8中任一项所述的双特异性抗体，其中该癌抗原是CEA、未成熟的层粘连蛋白受体、TAG-72、HPV E6、HPV E7、BING-4、钙活化的氯化物通道2、细胞周期素-B1、9D7、EpCAM、EphA3、Her2/neu、端粒酶、间皮素、SAP-1、存活、BAGE家族抗原、CAGE家族抗原、GAGE家族抗原、MAGE家族抗原、SAGE家族抗原、XAGE家族抗原、NY-ESO-1/LAGE-1、PRAME、SSX-2、Melan-A、MART-1、Gp100、pmel17、酪氨酸酶、TRP-1、TRP-2、P.多肽、MC1R、前列腺特异性抗原、β-连环蛋白、BRCA1、BRCA2、CDK4、CML66、纤连蛋白、MART-2、p53、Ras、TGF-βRII或MUC1抗原。

11.根据实施方案1至10中任一项所述的双特异性抗体，其中TRDV2存在于γδT细胞的表面上。

12.根据实施方案1至10中任一项所述的双特异性抗体，其中TRDV2存在于γδT细胞的表面上，并且在癌细胞的表面上表达的抗原是癌抗原。

13.根据实施方案12所述的双特异性抗体，其中当该双特异性抗体结合γδT细胞的表面上的TRDV2和癌细胞的表面上的抗原时，癌细胞被杀死。

14.根据实施方案1至13中任一项所述的双特异性抗体，其中第一结合结构域是人源化的，第二结合结构域是人源化的，或者第一结合结构域和第二结合结构域两者均是人源化的。

15.根据实施方案1至14中任一项所述的双特异性抗体，其中该双特异性抗体是IgG抗体。

16.根据实施方案15所述的双特异性抗体，其中该IgG抗体是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4抗体。

17.根据实施方案12至16中任一项所述的双特异性抗体，其中该双特异性抗体在体外以小于约500pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

18.根据实施方案17所述的双特异性抗体，其中该双特异性抗体在体外以小于约300pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

19.根据实施方案18所述的双特异性抗体，其中该双特异性抗体在体外以小于约160pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

20.根据实施方案17至19中任一项所述的双特异性抗体，其中用γδT效应细胞和表达癌抗原的靶细胞的混合物评估EC₅₀。

21.根据实施方案20所述的双特异性抗体，其中效应细胞与靶细胞的比率为约0.01:1至约5:1。

22.根据实施方案21所述的双特异性抗体，其中效应细胞与靶细胞的比率为约0.1:1至约2:1。

23.根据实施方案22所述的双特异性抗体，其中效应细胞与靶细胞的比率为约1:1。

24.根据实施方案1至23中任一项所述的双特异性抗体，其中该双特异性抗体是多价的。

25.根据实施方案24所述的双特异性抗体，其中该双特异性抗体能够结合至少三个抗原。

26.根据实施方案25所述的双特异性抗体，其中该双特异性抗体能够结合至少五个抗原。

27.一种双特异性抗体，该双特异性抗体包含：能够结合γδT细胞的表面上的TRDV2的第一构件；和能够结合癌抗原的第二构件。

28.根据实施方案27所述的双特异性抗体，其中该癌抗原在癌细胞的表面上。

29.一种核酸，该核酸编码根据实施方案1至28中任一项所述的双特异性抗体。

30.一种载体，该载体包含根据实施方案29所述的核酸。

31.一种宿主细胞，该宿主细胞包含根据实施方案30所述的载体。

32.一种试剂盒，该试剂盒包括根据实施方案30所述的载体及其包装。

33.一种药物组合物，该药物组合物包含根据实施方案1至28中任一项所述的双特异性抗体和药学上可接受的载剂。

34.一种产生根据实施方案33所述的药物组合物的方法，该方法包括将该双特异性抗体与药学上可接受的载剂组合以获得该药物组合物。

35.一种用于制备与多于一个靶分子结合的抗体的方法，该分子包括：用于执行获得能够与γδT细胞上的TRDV2抗原结合的结合结构域的功能的步骤；用于执行获得能够与癌细胞的表面上的抗原结合的结合结构域的功能的步骤；以及用于执行提供能够与γδT细胞上的TRDV2抗原和癌细胞的表面上的抗原结合的抗体的功能的步骤。

36.根据实施方案35所述的方法，其中用于执行获得能够与癌细胞的表面上的抗原结合的结合结构域的功能的步骤重复n次，并且该方法还包括用于执行提供能够与γδT细胞上的TRDV2抗原和n个靶分子结合的结合结构域的功能的n个步骤，其中n为至少2。

37.一种将表达TRDV2的γδT细胞引导到癌细胞的方法，该方法包括使该γδT细胞与根据实施方案1至28中任一项所述的双特异性抗体接触，其中该接触将该γδT细胞引导到该癌细胞。

38.一种抑制在细胞表面上表达癌抗原的癌细胞的生长或增殖的方法，该方法包括使该癌细胞与根据实施方案1至28中任一项所述的双特异性抗体接触，其中使该癌细胞与该药物组合物接触抑制该癌细胞的生长或增殖。

39.根据实施方案38所述的方法，其中该癌细胞在表达TRDV2的γδT细胞的存在下，同时与该双特异性抗体接触。

40.一种用于消除受试者的癌细胞或治疗其癌症的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的根据实施方案1至28中任一项所述的双特异性抗体。

41.根据实施方案40所述的方法，其中该受试者是有需要的受试者。

42.根据实施方案40或41所述的方法，其中该受试者是人。

43.一种激活表达TRDV2的γδT细胞的方法，该方法包括使该γδT细胞与根据实施方案1至28中任一项所述的双特异性抗体接触。

44.根据实施方案43所述的方法，其中与表达TRDV2的对照γδT细胞相比，该接触导致CD69、CD25和/或颗粒酶B表达增加。

45.根据实施方案38或39所述的方法，其中

(i)该癌细胞是肾上腺癌、肛门癌、阑尾癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、食道癌、胆囊癌、妊娠滋养细胞癌、头颈癌、霍奇金淋巴瘤、肠癌、肾癌、白血病、肝癌、肺癌、黑色素瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤、神经内分泌肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、鼻窦癌、皮肤癌、软组织肉瘤、脊椎癌、胃癌、睾丸癌、喉癌、甲状腺癌、子宫癌、子宫内膜癌、阴道癌或外阴癌的细胞；

(ii)该癌抗原是血管生成素、BCMA、CD19、CD20、CD22、CD25(IL2-R)、CD30、CD33、CD37、CD38、CD52、CD56、CD123(IL-3R)、cMET、DLL/Notch、EGFR、EpCAM、FGF、FGF-R、GD2、HER2、间皮素、粘连蛋白-4、PDGFRα、RANKL、SLAMF7、TROP2、VEGF或VEGF-R；并且/或者

(iii)该癌抗原是CEA、未成熟的层粘连蛋白受体、TAG-72、HPV E6、HPV E7、BING-4、钙活化的氯化物通道2、细胞周期素-B1、9D7、EpCAM、EphA3、Her2/neu、端粒酶、间皮素、SAP-1、surviving、BAGE家族抗原、CAGE家族抗原、GAGE家族抗原、MAGE家族抗原、SAGE家族抗原、XAGE家族抗原、NY-ESO-1/LAGE-1、PRAME、SSX-2、Melan-A、MART-1、Gp100、pmel17、酪氨酸酶、TRP-1、TRP-2、P.多肽、MC1R、前列腺特异性抗原、β-连环蛋白或BRCA1。

46.根据实施方案40至44中任一项所述的方法，其中癌是肾上腺癌、肛门癌、阑尾癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、食道癌、胆囊癌、妊娠滋养细胞癌、头颈癌、霍奇金淋巴瘤、肠癌、肾癌、白血病、肝癌、肺癌、黑色素瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤、神经内分泌肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、鼻窦癌、皮肤癌、软组织肉瘤、脊椎癌、胃癌、睾丸癌、喉癌、甲状腺癌、子宫癌、子宫内膜癌、阴道癌或外阴癌。

47.一种分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，该分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段包含：

a.第一重链(HC1)；

b.第二重链(HC2)；

c.第一轻链(LC1)；和

d.第二轻链(LC2)，

48.根据实施方案47所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中HC1包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，并且LC1包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。

49.根据实施方案48所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中HC1包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，并且LC1包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。

50.根据实施方案47至49中任一项所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中用于第一抗原的结合位点与γδT细胞上的TRDV2结合。

51.根据实施方案47至50中任一项所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中用于第二抗原的结合位点与存在于癌细胞的表面上的癌抗原结合。

52.根据实施方案51所述的分离的TRDV2双特异性抗体或抗原结合片段，其中该双特异性抗体与存在于γδT细胞的表面上的TRDV2的结合以及与存在于癌细胞的表面上的癌抗原的结合导致该癌细胞的杀伤。

53.根据实施方案47至52中任一项所述的分离的TRDV2双特异性抗体或抗原结合片段，其中HC1和LC1是人源化的。

54.根据实施方案47至53中任一项所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中HC2和LC2与CD33结合。

55.根据实施方案47至54中任一项所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。

56.根据实施方案47至55中任一项所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段为IgG4同种型。

57.根据实施方案47至56中任一项所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段在体外以小于约500pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

58.根据实施方案57所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段在体外以小于约300pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

59.根据实施方案57所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段在体外以小于约160pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

60.根据实施方案57至59中任一项所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中用γδT效应细胞和Kasumi3 AML靶细胞的混合物评估EC₅₀。

61.根据实施方案60所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中效应细胞与靶细胞的比率为约0.01:1至约5:1。

62.根据实施方案61所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中效应细胞与靶细胞的比率为约0.1:1至约2:1。

63.根据实施方案62所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中效应细胞与靶细胞的比率为约1:1。

64.根据实施方案47至63中任一项所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段是多价的。

65.根据实施方案64所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段能够结合至少三个抗原。

66.根据实施方案64所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段能够结合至少五个抗原。

67.一种分离的γδT细胞双特异性抗体或其抗原结合片段，该分离的γδT细胞双特异性抗体或其抗原结合片段包含：

a.HC1；

b.HC2；

c.LC1；和

d.LC2，

其中HC1与LC1缔合，并且HC2与LC2缔合，

其中HC2和LC2形成用于第二抗原的结合位点。

68.一种双特异性抗体，该双特异性抗体包含：能够特异性结合T细胞受体γ链的第一构件；和能够特异性结合不是T细胞受体γ链的靶分子的第二构件。

69.一种用于制备能够与多于一个靶分子特异性结合的分子的方法，该分子包括：用于执行获得能够与T细胞受体γ链结合的寡肽或多肽的功能的步骤；用于执行获得能够与靶标结合的寡肽或多肽的功能的步骤；以及用于执行提供能够与T细胞受体γ链和靶分子特异性结合的分子的功能的步骤。

70.根据实施方案69所述的方法，其中用于执行获得能够与靶标结合的寡肽或多肽的功能的步骤重复n次，并且该方法还包括用于执行提供能够与T细胞受体γ链和n个靶分子特异性结合的分子的功能的n个步骤，其中n为至少2。

71.一种分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其包含：

a.HC1；

b.HC2；

c.LC1；和

d.LC2，

其中HC1与LC1缔合并且HC2与LC2缔合，并且其中HC1包含分别包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID No:3的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且LC1包含分别包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3，以形成特异性结合Vδ2的第一抗原结合位点；并且

其中HC2包含分别包含SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且LC2包含分别包含SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14的氨基酸序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3，以形成特异性结合CD33的第二抗原结合位点。

72.根据实施方案71所述的分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其中HC1包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，并且LC1包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。

73.根据实施方案72所述的分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其中HC1包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，并且LC1包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。

74.根据实施方案71至73中任一项所述的分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其中HC2包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，并且LC2包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。

75.根据实施方案74所述的分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其中HC2包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，并且LC2包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列。

76.根据实施方案71至75中任一项所述的分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其中TRDV2位于γδT细胞的表面上。

77.根据实施方案73至76中任一项所述的分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其中CD33位于肿瘤细胞或CD34+干细胞的表面上。

78.根据实施方案71至77中任一项所述的分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该双特异性抗体与存在于γδT细胞的表面上的TRDV2的结合以及与存在于癌细胞的表面上的CD33的结合导致该癌细胞的杀伤。

79.根据实施方案71至78中任一项所述的分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其中HC1和LC1是人源化的。

80.根据实施方案71至79中任一项所述的分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其中HC2和LC2是人源化的。

81.根据实施方案71至80中任一项所述的分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。

82.根据实施方案71至81中任一项所述的分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段为IgG4同种型。

83.根据实施方案71至82中任一项所述的分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段在体外以小于约500pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

84.根据实施方案83所述的分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段在体外以小于约300pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

85.根据实施方案83所述的分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段在体外以小于约160pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

86.根据实施方案83至85中任一项所述的分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其中用γδT效应细胞和Kasumi3 AML靶细胞的混合物评估EC₅₀。

87.根据实施方案86所述的分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其中效应细胞与靶细胞的比率为约0.01:1至约5:1。

88.根据实施方案87所述的分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其中效应细胞与靶细胞的比率为约0.1:1至约2:1。

89.根据实施方案88所述的分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段，其中效应细胞与靶细胞的比率为约1:1。

90.一种制备根据实施方案71至89中任一项所述的分离的抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段的方法，该方法包括在产生该双特异性抗体或其抗原结合片段的条件下培养包含编码该抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体或其抗原结合片段的核酸的细胞，以及回收该双特异性抗体或其抗原结合片段。

91.一种分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原表位结合片段，其中该分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原表位结合片段包括用于第一抗原的结合位点和用于第二抗原的结合位点，其中用于该第一抗原的该结合位点结合γδT细胞上的TRDV2表位，并且用于该第二抗原的该结合位点结合靶细胞的表面上的该第二抗原的表位，并且该γδT细胞上的该TRDV2表位的结合和该靶细胞上的该第二抗原表位的结合导致该靶细胞的杀伤。

92.一种分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段包含：

a.HC1；

b.HC2；

c.LC1；和

d.LC2，

其中HC1与LC1缔合，并且HC2与LC2缔合，并且

其中HC1包含分别包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID No:3的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且LC1包含分别包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3，以形成第一抗原的结合位点，并且其中HC2和LC2形成第二抗原表位的结合位点。

93.根据实施方案92所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中HC1包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，并且LC1包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。

94.根据实施方案93所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中HC1包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，并且LC1包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。

95.根据实施方案92至94中任一项所述的分离的TRDV2双特异性抗体或抗原结合片段，其中HC1和LC1是人源化的。

96.根据实施方案92至95中任一项所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中HC2和LC2与CD33表位结合。

97.根据实施方案96所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中HC2包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，并且LC2包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。

98.根据实施方案97所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中HC2包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，并且LC2包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列。

99.根据实施方案91至98中任一项所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。

100.根据实施方案91至99中任一项所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段为IgG4同种型。

101.根据实施方案91至100中任一项所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段在体外以小于约500pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

102.根据实施方案101所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段在体外以小于约300pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

103.根据实施方案102所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段在体外以小于约160pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

104.根据实施方案101至103中任一项所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中用γδT效应细胞和Kasumi3 AML靶细胞的混合物评估EC₅₀。

105.根据实施方案104所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中效应细胞与靶细胞的比率为约0.01:1至约5:1。

106.根据实施方案105所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中效应细胞与靶细胞的比率为约0.1:1至约2:1。

107.根据实施方案106所述的分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，其中效应细胞与靶细胞的比率为约1:1。

108.一种分离的γδT细胞双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该分离的γδT细胞双特异性抗体或其抗原结合片段包括用于第一抗原表位的结合位点和用于第二抗原表位的结合位点，其中用于该第一抗原表位的该结合位点结合γδT细胞上的第一抗原，并且用于该第二抗原表位的该结合位点结合靶细胞的表面上的该第二抗原表位，并且该γδT细胞上的该第一抗原表位的结合和该靶细胞上的该第二抗原表位的结合导致该靶细胞的杀伤。

109.一种分离的编码TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段的核酸，该分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段包含：

a.HC1；

b.HC2；

c.LC1；和

d.LC2，

其中HC1与LC1缔合，并且HC2与LC2缔合，并且

其中HC1包含分别包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID No:3的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且LC1包含分别包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3，以形成第一抗原的结合位点，并且其中HC2和LC2形成第二抗原的结合位点。

110.根据实施方案109所述的分离的核酸，其中HC1包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，并且LC1包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。

111.根据实施方案110所述的分离的核酸，其中HC1包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，并且LC1包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。

112.根据实施方案109至111中任一项所述的分离的核酸，其中用于第一抗原的结合位点与γδT细胞上的TRDV2结合。

113.根据实施方案109至112中任一项所述的分离的核酸，其中用于第二抗原的结合位点与存在于癌细胞的表面上的癌抗原结合。

114.根据实施方案113所述的分离的核酸，其中该双特异性抗体与存在于γδT细胞的表面上的TRDV2的结合以及与存在于癌细胞的表面上的癌抗原的结合导致该癌细胞的杀伤。

115.根据实施方案109至114中任一项所述的分离的核酸，其中HC1和LC1是人源化的。

116.根据实施方案109至115中任一项所述的分离的核酸，其中HC2和LC2与CD33结合。

117.根据实施方案109至116中任一项所述的分离的核酸，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。

118.根据实施方案109至117中任一项所述的分离的核酸，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段为IgG4同种型。

119.根据实施方案109至118中任一项所述的分离的核酸，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段在体外以小于约500pM的EC50诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

120.根据实施方案119所述的分离的核酸，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段在体外以小于约300pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

121.根据实施方案119所述的分离的核酸，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段在体外以小于约160pM的EC₅₀诱导癌细胞的γδT细胞依赖性细胞毒性。

122.根据实施方案119至121中任一项所述的分离的核酸，其中用γδT效应细胞和Kasumi3 AML靶细胞的混合物评估EC₅₀。

123.根据实施方案122所述的分离的核酸，其中效应细胞与靶细胞的比率为约0.01:1至约5:1。

124.根据实施方案123所述的分离的核酸，其中效应细胞与靶细胞的比率为约0.1:1至约2:1。

125.根据实施方案124所述的分离的核酸，其中效应细胞与靶细胞的比率为约1:1。

126.根据实施方案109至125中任一项所述的分离的核酸，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段是多价的。

127.根据实施方案126所述的分离的核酸，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段能够结合至少三个抗原。

128.根据实施方案126所述的分离的核酸，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段能够结合至少五个抗原。

129.一种载体，该载体包含根据实施方案109至128中任一项所述的分离的核酸。

130.一种宿主细胞，该宿主细胞包含根据实施方案129所述的载体。

131.一种试剂盒，该试剂盒包括根据实施方案129所述的载体及其包装。

132.一种药物组合物，该药物组合物包含分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段，该分离的TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段包含：

a.HC1；

b.HC2；

c.LC1；和

d.LC2，

其中HC1与LC1缔合并且HC2与LC2缔合，并且其中HC1包含分别包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID No:3的氨基酸序列的HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且LC1包含分别包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR1、LCDR2和LCDR3，以形成第一抗原的结合位点，并且

其中HC2和LC2形成第二抗原的结合位点，

以及药学上可接受的载剂。

133.根据实施方案132所述的药物组合物，其中HC1包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，并且LC1包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。

134.根据实施方案133所述的药物组合物，其中HC1包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，并且LC1包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。

135.根据实施方案132至134中任一项所述的药物组合物，其中该用于第一抗原的结合位点与γδT细胞上的TRDV2结合。

136.根据实施方案132至135中任一项所述的药物组合物，其中用于第二抗原的结合位点与存在于癌细胞的表面上的癌抗原结合。

137.根据实施方案136所述的药物组合物，其中该双特异性抗体与存在于γδT细胞的表面上的TRDV2的结合以及与存在于癌细胞的表面上的癌抗原的结合导致该癌细胞的杀伤。

138.根据实施方案132至137中任一项所述的药物组合物，其中HC1和LC1是人源化的。

139.根据实施方案132至138中任一项所述的药物组合物，其中HC2和LC2与CD33结合。

140.根据实施方案132至139中任一项所述的药物组合物，其中该双特异性抗体或其抗原结合片段为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。

141.一种向癌细胞引导表达Vδ2的γδT细胞的方法，该方法包括使表达Vδ2的γδT细胞与根据实施方案132至140中任一项所述的药物组合物接触，其中使表达Vδ2的γδT细胞与药物组合物接触向癌细胞引导表达Vδ2的γδT细胞。

142.一种抑制在细胞表面上表达癌抗原的癌细胞的生长或增殖的方法，该方法包括使该癌细胞与根据实施方案132至140中任一项所述的药物组合物接触，其中使该癌细胞与该药物组合物接触抑制该癌细胞的生长或增殖。

143.根据实施方案142所述的方法，其中该癌细胞在存在表达Vδ2的γδT细胞的同时与抗TRDV2双特异性抗体或其抗原结合片段接触。

144.一种用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，该方法包括：

a.鉴定需要癌症治疗的受试者；以及

b.向该有需要的受试者施用根据实施方案132至140中任一项所述的药物组合物，

145.一种活化表达Vδ2的γδT细胞的方法，该方法包括使表达Vδ2的γδT细胞与根据实施方案132至140中任一项所述的药物组合物接触，其中使表达Vδ2的γδT细胞与该药物组合物接触导致与表达Vδ2的对照γδT细胞相比CD69、CD25和/或颗粒酶B表达增加。

146.一种产生根据实施方案132至140中任一项所述的药物组合物的方法，该方法包括将该双特异性抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的载剂组合以获得该药物组合物。

在本文的实施例中提供了与TRDV2和CD33结合的示例性多特异性(双特异性)抗体。这些实施例说明了可有效地靶向受试者中的多种细胞和组织的示例性双特异性抗体。

在一些实施方案中，本文提供了双特异性抗体，该双特异性抗体包含：(a)与TRDV2抗原结合的第一结合结构域，和(b)与第二靶抗原结合的第二结合结构域。在一些实施方案中，本文提供了双特异性抗体，该双特异性抗体包含：(a)与TRDV2抗原特异性结合的第一结合结构域，和(b)与第二靶抗原特异性结合的第二结合结构域。在一些实施方案中，本文提供了双特异性抗体，该双特异性抗体包含：(a)与TRDV2抗原上的第一表位结合的第一结合结构域，和(b)与第二靶抗原上的第二表位结合的第二结合结构域。在一些实施方案中，本文提供了双特异性抗体，该双特异性抗体包含：(a)与TRDV2抗原上的第一表位特异性结合的第一结合结构域，和(b)与第二靶抗原上的第二表位特异性结合的第二结合结构域。在某些实施方案中，第二靶抗原是CD33。

与TRDV2结合的示例性结合剂以及与CD33结合的示例性结合剂在本文其他地方提供，例如在实施例以及表1.1、表1.2以及表1-表8中提供。

本文描述了本发明的特定实施方案。在阅读前述描述后，所公开的实施方案的变型对于本领域的技术人员来说可能变得显而易见，并且预期那些技术人员可适当地采用此类变型。因此，本发明旨在以不同于本文具体描述的方式实践，并且本发明包括在适用法律允许的情况下在所附权利要求中记载的主题的所有修改和等同物。此外，除非本文另有说明或以其他方式与上下文明显矛盾，否则在其所有可能变型中的上述元素的任何组合均涵盖于本发明中。已描述了本发明的多个实施方案。然而，应当理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可进行各种修改。因此，实施例部分中的描述旨在说明而非限制权利要求书中描述的本发明的范围。

实施例

实施例1：结合γδT细胞的双特异性抗体的产生

1.1：结合γδT细胞抗原的MAB的产生

对γδT细胞具有特异性的抗原或抗原部分用于免疫动物(例如，小鼠或兔)。为了产生γδT细胞单克隆抗体，从免疫动物的全血中分离外周血单核细胞，并培养抗原特异性B细胞。通过B细胞培养上清液的抗原结合ELISA筛选来鉴定分泌用于γδT细胞抗原的反应性抗体的B细胞。用γδT细胞抗原包被高结合ELISA板过夜。封闭ELISA板，并将稀释的B细胞培养上清液加入板中。将板在室温下孵育，孵育后，将特异性识别γδT细胞抗原抗体的第二抗体加入板中，以确定γδT细胞抗原抗体是否与γδT细胞抗原结合。通过底物在第二抗体上的反应来确定抗体的结合。

在鉴定能够结合γδT细胞抗原的单克隆抗体之后，对γδT细胞抗体的重链和轻链的可变区进行测序。创建用于表达γδT细胞抗体的重链和轻链的构建体。将构建体转染到宿主细胞中以表达重链和轻链，并且从上清液中分离出γδT细胞抗体。

1.2：γδT细胞双特异性抗体的产生

能够结合感兴趣的靶细胞上的靶抗原的γδT细胞单克隆抗体和第二单克隆抗体的可变区序列用于产生双特异性抗体，该双特异性抗体将针对靶细胞的γδT细胞重定向杀伤进行测试。感兴趣的靶抗原可选自但不限于Zhang等人，Nucleic Acids Research，第47卷第D1期：第D721-D728页，2019年中所述的抗原。γδT细胞双特异性抗体以杵臼结构的形式作为全长抗体产生，得到人IgG4，如前所述(Atwell等人，J.Mol.Biol.第270卷：第26-35页，1997年)。使用基于克隆技术的标准PCR限制性酶将编码可变区的核酸序列亚克隆到含有IgG4表达盒恒定区的定制哺乳动物表达载体中。通过在中国仓鼠卵巢细胞系中瞬时转染来表达这些双特异性抗体。这些抗体最初通过MAB SELECT SURE蛋白质A柱(GEhealthcare，Piscataway，New Jersey)来纯化(Brown、Bottomley等人，Biochem SocTrans.，1998年8月，第26卷第3期，第S249页)。用pH 7.2的磷酸盐缓冲盐水(PBS)来平衡柱，并且以2mL/min的流速将发酵上清液上样。上样后，将柱用PBS(4倍柱体积(CV))洗涤，然后在pH 3.5的30mM乙酸钠中洗脱。将含有蛋白质峰的级分合并在一起，并且通过添加1％的3M乙酸钠(pH 9.0)中和至pH 5.0，该蛋白质峰通过Akta Explorer(GE healthcare)中280nm处的吸光度进行监测。作为精制步骤，在制备型尺寸排阻色谱(SEC)上使用SUPERDEX 200柱(GE healthcare)将抗体纯化。通过内毒素测量和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳在还原条件和非还原条件下评估样本的完整性。确定最终蛋白质浓度。

1.3：抗TRDV2双特异性抗体的产生

能够结合感兴趣的靶细胞上的靶抗原的抗TRDV2单克隆抗体和第二单克隆抗体的可变区序列用于产生双特异性抗体，该双特异性抗体将针对靶细胞的γδT细胞重定向杀伤进行测试。感兴趣的靶抗原可选自但不限于Zhang等人，Nucleic Acids Research，第47卷第D1期：第D721-D728页，2019年中所述的抗原。抗TRDV2双特异性抗体以杵臼结构的形式作为全长抗体产生，得到人IgG1，如前所述(Atwell等人，J.Mol.Biol.第270卷：第26-35页，1997年)。使用基于克隆技术的标准PCR限制性酶将编码可变区的核酸序列亚克隆到含有IgG1表达盒恒定区的定制哺乳动物表达载体中。通过在中国仓鼠卵巢细胞系中瞬时转染来表达这些双特异性抗体。这些抗体最初通过Mab Select SuRe蛋白质A柱(GE healthcare，Piscataway，New Jersey)来纯化(Brown、Bottomley等人，Biochem Soc Trans.，1998年8月，第26卷第3期，第S249页)。用pH 7.2的磷酸盐缓冲盐水(PBS)来平衡柱，并且以2mL/min的流速将发酵上清液上样。上样后，将柱用PBS(4倍柱体积(CV))洗涤，然后在pH 3.5的30mM乙酸钠中洗脱。将含有蛋白质峰的级分合并在一起，并且通过添加1％的3M乙酸钠(pH 9.0)中和至pH 5.0，该蛋白质峰通过Akta Explorer(GE healthcare)中280nm处的吸光度进行监测。作为精制步骤，在制备型尺寸排阻色谱(SEC)上使用SUPERDEX 200柱(GEhealthcare)将抗体纯化。通过内毒素测量和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳在还原条件和非还原条件下评估样本的完整性。确定最终蛋白质浓度。

实施例2—结合TRDV2和癌抗原的双特异性抗体

实施例2.1-2.4所基于的前提是主要表达TRDV2链和Vδ2链的异源二聚体的γδT细胞表现出有效的抗肿瘤功能。这些细胞表达TCR-TRDV2，并且这些细胞中的大多数(如果不是全部)表现出肿瘤靶细胞的有效细胞毒性。然后使用双特异性抗体来利用这种能力，该双特异性抗体被构建成使得一条臂与TRDV2结构结合，而另一条臂与由肿瘤细胞表达的肿瘤相关抗原结合。因此，该双特异性抗体将效应细胞和靶细胞桥接在一起，从而导致肿瘤细胞杀伤。这种作用机制在图1中概述的示意图中描述。

随后的实施例可以被分成以下类别：(1)产生并表征能够与γδT细胞上表达的TRDV2臂和癌细胞上的癌抗原(例如，CD33)结合的双特异性抗体(实施例2.1、2.2和2.3)；以及(2)由体外扩增的γδT细胞进行的双特异性抗体启动的靶细胞杀伤的证据(实施例2.4)。

实施例2.1：抗TRDV2 MAB的产生

小鼠IgG1抗人T细胞受体TRDV2克隆B6是商业来源的。样品制备和LC/MSMS分析由Lake Pharma.(San Carlos,CA)进行。将样品还原并烷基化，分成七份等分试样，用胰蛋白酶/LysC、胰凝乳蛋白酶、LysC、胃蛋白酶和AspN、弹性蛋白酶和蛋白酶K酶进行蛋白水解消化。使用ZIPTIP C18移液管末端将所得的肽脱盐，并且使用反相层析在线分离。在ThermoQ-EXACTIVE质谱仪上使用HCD碎片化进行质谱分析。使用PEAKS软件，通过将从头序列标签与基于IMGT的抗体序列数据库进行匹配，来分析MS数据集。使用从头鉴定的肽的重叠群序列组装来指定序列中的空位。通过检查MS/MS谱确认所有的CDR和超突变。

所获得的序列在表1和表2中示出。

表1：抗TRDV2 mAb的CDR序列。

表2：抗TRDV2 mAb的重链序列和轻链序列。

实施例2.2：抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体的制备

B6(抗TRDV2)和C33B904(抗CD33抗体)的可变区序列(表3中的HCDR和LCDR，表4中的HC和LC)用于产生双特异性抗体，该双特异性抗体将针对急性髓性白血病(AML)细胞的T细胞重定向杀伤进行测试。双特异性抗体：VG56(抗TRDV2×CD33)和VG53(抗TRDV2×Null)以杵臼结构的形式作为全长抗体产生，得到人IgG1，如前所述(Atwell等人，J.Mol.Biol.第270卷：第26-35页，1997年)。使用基于标准PCR限制性酶的克隆技术将编码可变区的核酸序列亚克隆到含有人IgG1表达盒恒定区的定制哺乳动物表达载体中，并对其进行序列验证。通过在中国仓鼠卵巢细胞系中瞬时转染来表达所述双特异性抗体。这些抗体最初通过MabSelect SuRe蛋白质A柱(GE healthcare，Piscataway，New Jersey)来纯化(Brown、Bottomley等人，Biochem Soc Trans.，第26卷第3期，第S249页，1998年)。用pH 7.2的磷酸盐缓冲盐水(PBS)来平衡柱，并且以2mL/min的流速将发酵上清液上样。上样后，将柱用PBS(4倍柱体积(CV))洗涤，然后在pH 3.5的30mM乙酸钠中洗脱。将含有蛋白质峰的级分合并在一起，并且通过添加1％的3M乙酸钠(pH 9.0)中和至pH 5.0，所述蛋白质峰通过AktaExplorer(GE healthcare)中280nm处的吸光度进行监测。作为精制步骤，在制备型尺寸排阻色谱(SEC)上使用SUPERDEX 200柱(GE healthcare)将所述抗体纯化。通过内毒素测量和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳在还原条件和非还原条件下评估样本的完整性。图2中示出了VG56的代表性凝胶。抗TRDV2/抗CD33的最终蛋白质浓度为1.0mg/mL，并且抗TRDV2/Null的最终蛋白质浓度为1.0mg/mL。基于这些蛋白质浓度，抗TRDV2/抗CD33和抗TRDV2/Null的最终EU水平<3.0EU/mg。

表3：抗CD33 mAb的CDR序列。

表4：抗CD33 mAb的重链序列和轻链序列。

表5：在CHO细胞中表达的半抗体的序列。

实施例2.3：Vδ2+(γδ)T细胞和PANT细胞的表征

唑来膦酸选择性地从全PBMC扩增Vδ2⁺γδT细胞。将PBMC使用EasySep^TM人γδT细胞分离试剂盒(Stem cell Technologies；Vancouver,CA)根据制造商说明书从新鲜的全PBMC中分离。将分离的PBMC在RPMI-10(补充有10％ FBS、1x Pen/Strep的RPMI)培养基中培养14天，其中将重组人IL-2(rhIL-2)培养至1000IU/mL的最终浓度，将重组人IL-15(rhIL-15)培养至10ng/mL的最终浓度，并将唑来膦酸培养至5μM的最终浓度。

代表性点图中的数字示出了在用唑来膦酸+IL-2+IL-15培养的总PBMC中的Vδ2⁺和Vδ2^-TCRγδT细胞的频率(平均值±SEM)(右图)。表示的数据是来自单个实验的五个供体(n＝5)的平均值(±SEM)(图3)。

实施例2.4：使用KASUMI-3细胞和人γδT细胞评估抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体的结合和细胞毒性特性

通过FACS测量抗CD33克隆C33B904与一组CD33+细胞系的结合。计算MOLM-13(图4)、Kasumi-1(图5)和OCI-AML-3(图6)的EC50和EC90。

图7示出了抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体在体外介导γδT细胞(来自全PBMC)对表达CD33的MOLM-13细胞的细胞毒性。从用唑来膦酸+IL-2+IL-15培养12天的健康供体衍生的PBMC(效应细胞)在各种浓度的双特异性抗体的存在下，与CFSE标记的MOLM-13细胞(靶标)以1:1的E:T比共培养24小时。剂量反应曲线示出了抗TRDV2/抗CD33和抗TRDV2/抗NULL双特异性抗体介导的γδT细胞对表达CD33的kasumi-3细胞的细胞毒性呈剂量依赖关系(图7)。此处表示的细胞毒性值通过减去不存在双特异性抗体时观察到的基础细胞毒性值得出。如方法中所述计算EC50值。此处所示的代表性数据来自单个实验。

图8至图9示出了抗TRDV2/抗CD33双特异性抗体在体外介导γδT细胞对表达CD33的Kasumi-3细胞的细胞毒性。从用唑来膦酸+IL-2+IL-15培养14天的PBMC分离的富集的γδT细胞(效应细胞)在各种浓度的双特异性抗体的存在下，与CFSE标记的Kasumi-3细胞(靶标)以1:1的E:T比率共培养24小时。剂量反应曲线示出了抗TRDV2/抗CD33和抗TRDV2/抗NULL双特异性抗体介导的γδT细胞对表达CD33的Kasumi-3细胞的细胞毒性在1:1(图8至图9)的E:T比率下呈剂量依赖关系。此处表示的细胞毒性值通过减去不存在双特异性抗体时观察到的基础细胞毒性值得出。如方法中所述计算EC₅₀值。此处所示的代表性数据来自单个实验。

实施例3—结合TRDV2和癌细胞抗原的双特异性抗体

实施例3.1—结合TRDV2和癌细胞抗原的双特异性抗体的制备

能够结合感兴趣的T细胞上的抗原的抗TRDV2单克隆抗体和第二单克隆抗体的可变区序列用于产生双特异性抗体，该双特异性抗体将针对靶T细胞的γδT细胞重定向杀伤进行测试。

示例性TRDV2 VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3序列提供于表1中；并且示例性VH结构域和VL结构域序列提供于表2中。然而，任何TRDV2抗体可用于制备双特异性抗体。

结合T细胞抗原的第二单克隆抗体是结合癌抗原的抗体，如本文其他地方提供的。除了CD33以外，示例性的癌抗原包括但不限于：血管生成素、BCMA、CD19、CD20、CD22、CD25(IL2-R)、CD30、CD37、CD38、CD52、CD56、CD123(IL-3R)、cMET、DLL/Notch、EGFR、EpCAM、FGF、FGF-R、GD2、HER2、间皮素、粘连蛋白-4、PDGFRα、RANKL、SLAMF7、TROP2、VEGF或VEGF-R。在一些实施方案中，该癌抗原是CEA、不成熟的层粘连蛋白受体、TAG-72、HPV E6、HPV E7、BING-4、钙活化的氯化物通道2、细胞周期素-B1、9D7、EpCAM、EphA3、Her2/neu、端粒酶、间皮素、SAP-1、存活蛋白、BAGE家族抗原、CAGE家族抗原、GAGE家族抗原、MAGE家族抗原、SAGE家族抗原、XAGE家族抗原、NY-ESO-1/LAGE-1、PRAME、SSX-2、Melan-A、MART-1、Gp100、pmel17、酪氨酸酶、TRP-1、TRP-2、P.多肽、MC1R、前列腺特异性抗原、β-连环蛋白、BRCA1、BRCA2、CDK4、CML66、纤连蛋白、MART-2、p53、Ras、TGF-βRII或MUC1。

抗TRDV2双特异性抗体以杵臼结构的形式作为全长抗体产生，得到人IgG1，如前所述(Atwell等人，J.Mol.Biol.第270卷：第26-35页(1997年))。

使用基于克隆技术的标准PCR限制性酶将编码可变区的核酸序列亚克隆到含有IgG1表达盒恒定区的定制哺乳动物表达载体中。

通过在CHO细胞系中瞬时转染来表达该双特异性抗体。这些抗体最初通过MABSELECT SURE蛋白质A柱(GE healthcare，Piscataway，New Jersey)来纯化(Brown、Bottomley等人，Biochem Soc Trans.，1998年8月，第26卷第3期，第S249页)。用pH 7.2的PBS来平衡柱，并且以2mL/min的流速将发酵上清液上样。上样后，将柱用PBS(4倍柱体积(CV))洗涤，然后在pH 3.5的30mM乙酸钠中洗脱。将含有蛋白质峰的级分合并在一起，并且通过添加1％的3M乙酸钠(pH 9.0)中和至pH5.0，该蛋白质峰通过Akta Explorer(GEhealthcare)中280nm处的吸光度进行监测。作为精制步骤，在制备型尺寸排阻色谱(SEC)上使用SUPERDEX 200柱(GE healthcare)将抗体纯化。通过内毒素测量和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳在还原条件和非还原条件下评估样本的完整性。确定最终蛋白质浓度。

实施例3.2—结合TRDV2和癌抗原的双特异性抗体的评估和结合

将在体外确定双特异性抗体与Vδ2+γδT细胞和表达T细胞抗原的靶细胞的结合以及由此产生的细胞毒性的评估。

从用唑来膦酸、IL-2和IL-15培养12天的PBMC分离的富集的γδT细胞(效应细胞)在各种浓度的双特异性抗体的存在下，与CFSE标记的表达T细胞抗原的细胞(靶标)以1:1、5:1和10:1的E:T比共培养24小时。抗TRDV2/抗Null双特异性抗体将用作对照。通过减去不存在双特异性抗体时观察到的基础细胞毒性值来确定细胞毒性值。计算剂量反应曲线以确定双特异性抗体介导的γδT细胞针对表达T细胞抗原的靶细胞出现细胞毒性是否在1:1、5:1和10:1的E:T比下呈剂量依赖关系。

此外，通过在37℃下，在各种浓度的抗TRDV2/抗T细胞抗原双特异性抗体的存在下将新鲜的全PBMC与表达T细胞抗原的靶细胞共培养72小时来评估Vδ2+γδT细胞的选择性活化。作为阳性和阴性对照，在37℃下，将共培养的细胞用抗CD3/抗T细胞抗原和抗TRDV2/抗NULL双特异性抗体刺激72小时。确定对CD69、CD25表面表达和细胞内颗粒酶B表达呈阳性的Vδ2⁺、Vδ2^-δγδT细胞和非γδT细胞的频率。

*****

本领域的技术人员应当理解，在不脱离本发明的广义的发明构思的情况下，可对上述实施方案作出修改。因此，应当理解，本发明不局限于所公开的特定实施方案，但本发明旨在涵盖在本发明实质和范围内的修改，如本说明书所定义。

序列表

<110> Janssen Biotech, Inc.

Rajkumar Ganesan

Iqbal S. Grewal

Sanjaya Singh

<120> 用于调节δ链介导的免疫的材料和方法

<130> 14620-109-228/JBI6271WOPCT1

<140>

<141>

<150> US 62/989,111

<151> 2020-03-13

<160> 20

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗体B6的抗TRDV2 mAb的HCDR1序列

<400> 1

Glu Asn Pro Met His

1 5

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗体B6的抗TRDV2 mAb的HCDR2序列

<400> 2

Ile Ile Tyr Thr Asp Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Glu Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 3

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗体B6的抗TRDV2 mAb的HCDR3序列

<400> 3

Glu Gly Gly Ser His Trp Tyr Leu Asp Val

1 5 10

<210> 4

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗体B6的抗TRDV2 mAb的LCDR1序列

<400> 4

Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Lys Tyr Gly Ile Ser Phe Met Asn

1 5 10 15

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗体B6的抗TRDV2 mAb的LCDR2序列

<400> 5

Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗体B6的抗TRDV2 mAb的LCDR3序列

<400> 6

Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Arg Thr

1 5

<210> 7

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗体B6的抗TRDV2 mAb的重链序列

<400> 7

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Glu Asn

20 25 30

Pro Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Phe Lys Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Tyr Thr Asp Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Glu Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Tyr Ile Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Val Arg Glu Gly Gly Ser His Trp Tyr Leu Asp Val Trp Gly Thr Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 8

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗体B6的抗TRDV2 mAb的轻链序列

<400> 8

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Lys Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His

65 70 75 80

Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys

85 90 95

Glu Val Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 9

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗体C33B904的抗CD33 mAb的HCDR1序列

<400> 9

Asp Tyr Ala Met His

1 5

<210> 10

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗体C33B904的抗CD33 mAb的HCDR2序列

<400> 10

Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Ser Ile Val Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 11

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗体C33B904的抗CD33 mAb的HCDR3序列

<400> 11

Asp Ser Pro Tyr Gly Asp Phe Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 12

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗体C33B904的抗CD33 mAb的LCDR1序列

<400> 12

Lys Ser Ser Gln Thr Val Phe Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 13

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗体C33B904的抗CD33 mAb的LCDR2序列

<400> 13

Trp Ala Ser Thr Arg Lys Ser

1 5

<210> 14

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗体C33B904的抗CD33 mAb的LCDR3序列

<400> 14

Gln His Tyr Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 15

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗体C33B904的抗CD33 mAb的重链序列

<400> 15

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Ser Ile Val Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Ser Pro Tyr Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 16

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗体C33B904的抗CD33 mAb的轻链序列

<400> 16

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Thr Val Phe Tyr Ser

20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Ser Thr Arg Lys Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Val Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His

85 90 95

Tyr Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 17

<211> 237

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 在CHO细胞中表达的抗TRDV2（轻链）序列

<400> 17

Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser

1 5 10 15

Ile Gln Ala Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val

20 25 30

Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val

35 40 45

Asp Lys Tyr Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly

50 55 60

Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly

65 70 75 80

Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu

85 90 95

Asn Ile His Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Gln

100 105 110

Gln Ser Lys Glu Val Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu

115 120 125

Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser

130 135 140

Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn

145 150 155 160

Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala

165 170 175

Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys

180 185 190

Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp

195 200 205

Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu

210 215 220

Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

225 230 235

<210> 18

<211> 468

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 在CHO细胞中表达的抗TRDV2（“臼”臂）序列

<400> 18

Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser

1 5 10 15

Ile Gln Ala Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe

35 40 45

Thr Glu Asn Pro Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Phe

50 55 60

Lys Trp Met Gly Ile Ile Tyr Thr Asp Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala

65 70 75 80

Ala Glu Phe Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Tyr Ile Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr

100 105 110

Tyr Phe Cys Val Arg Glu Gly Gly Ser His Trp Tyr Leu Asp Val Trp

115 120 125

Gly Thr Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

130 135 140

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr

145 150 155 160

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

165 170 175

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

180 185 190

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

195 200 205

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn

210 215 220

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser

225 230 235 240

Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala

245 250 255

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

260 265 270

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

275 280 285

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

290 295 300

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

305 310 315 320

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

325 330 335

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

340 345 350

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

355 360 365

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

370 375 380

Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

385 390 395 400

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

405 410 415

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr

420 425 430

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

435 440 445

Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

450 455 460

Ser Pro Gly Lys

465

<210> 19

<211> 503

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 在CHO细胞中表达的抗CD33 scFv（“杵”臂）序列

<400> 19

Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser

1 5 10 15

Ile Gln Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val

20 25 30

Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Thr Val

35 40 45

Phe Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys

50 55 60

Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Ser Thr Arg Lys

65 70 75 80

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

85 90 95

Thr Leu Thr Val Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Gln His Tyr Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys

115 120 125

Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser

130 135 140

Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly

145 150 155 160

Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala

165 170 175

Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala

180 185 190

Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly

195 200 205

Ser Ile Val Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg

210 215 220

Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala

225 230 235 240

Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Ser Pro Tyr Gly Asp

245 250 255

Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu

260 265 270

Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

275 280 285

Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

290 295 300

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

305 310 315 320

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

325 330 335

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

340 345 350

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

355 360 365

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

370 375 380

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

385 390 395 400

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

405 410 415

Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

420 425 430

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

435 440 445

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

450 455 460

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

465 470 475 480

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

485 490 495

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

500

<210> 20

<211> 502

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 在CHO细胞中表达的抗RSV scFv（“杵”臂）序列

<400> 20

Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser

1 5 10 15

Ile Gln Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val

20 25 30

Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val

35 40 45

Asp Tyr Asn Gly Ile Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly

50 55 60

Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Pro Glu Ser Gly

65 70 75 80

Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu

85 90 95

Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln

100 105 110

Gln Ile Ile Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu

115 120 125

Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser

130 135 140

Lys Ser Thr Gly Gly Ser Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr

145 150 155 160

Leu Val Lys Pro Thr Gln Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly

165 170 175

Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro

180 185 190

Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp

195 200 205

Lys Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp

210 215 220

Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val

225 230 235 240

Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Leu Tyr Gly Phe Thr Tyr Gly

245 250 255

Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Pro

260 265 270

Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

275 280 285

Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

290 295 300

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

305 310 315 320

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

325 330 335

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

340 345 350

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

355 360 365

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

370 375 380

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

385 390 395 400

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

405 410 415

Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

420 425 430

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

435 440 445

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

450 455 460

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

465 470 475 480

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

485 490 495

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

500

Claims

1. 一种多特异性抗体，所述多特异性抗体包含：

(a) 第一结合结构域，所述第一结合结构域与T细胞受体δ可变区2（TRDV2）结合，和

(b) 第二结合结构域，所述第二结合结构域与癌细胞的表面上的抗原结合。

2. 根据权利要求1所述的多特异性抗体，其中所述第一结合结构域包含：

(i) VH，所述VH包含分别具有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3，所述VH CDR属于具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VH；和

(ii) VL，所述VL包含分别具有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，所述VL CDR属于具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL。

3.根据权利要求2所述的多特异性抗体，其中

(i) 所述第一结合结构域的所述VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3氨基酸序列根据Kabat编号系统；

(ii) 所述第一结合结构域的所述VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3氨基酸序列根据Chothia编号系统；

(iii) 所述第一结合结构域的所述VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3氨基酸序列根据AbM编号系统；

(iv) 所述第一结合结构域的所述VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3氨基酸序列根据Contact编号系统；

(v) 所述第一结合结构域的所述VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3氨基酸序列根据IMGT编号系统；或者

(vi) 所述第一结合结构域的所述VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3氨基酸序列根据示例性编号系统。

4. 根据权利要求1所述的多特异性抗体，其中所述第一结合结构域包含：

(i) VH，所述VH包含具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3；和

(ii) VL，所述VL包含具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VL CDR1、具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3。

5.根据权利要求2所述的多特异性抗体，其中

(i) 所述第一结合结构域包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VH；

(ii) 所述第一结合结构域包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL；或者

(iii) 所述第一结合结构域包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VH和具有SEQ IDNO:8的氨基酸序列的VL。

6. 根据权利要求1至5中任一项所述的多特异性抗体，其中所述第一结合结构域的所述VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3形成用于所述TRDV2的抗原或所述TRDV2的表位的结合位点。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的多特异性抗体，其中所述TRDV2存在于T细胞的表面上。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的多特异性抗体，其中所述癌细胞是肾上腺癌、肛门癌、阑尾癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、食道癌、胆囊癌、妊娠滋养细胞癌、头颈癌、霍奇金淋巴瘤、肠癌、肾癌、白血病、肝癌、肺癌、黑色素瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤、神经内分泌肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、鼻窦癌、皮肤癌、软组织肉瘤、脊椎癌、胃癌、睾丸癌、喉癌、甲状腺癌、子宫癌、子宫内膜癌、阴道癌或外阴癌的细胞。

9. 根据权利要求1至8中任一项所述的多特异性抗体，其中所述癌细胞的所述表面上的所述抗原是血管生成素、BCMA、CD19、CD20、CD22、CD25（IL2-R）、CD30、CD33、CD37、CD38、CD52、CD56、CD123（IL-3R）、cMET、DLL/Notch、EGFR、EpCAM、FGF、FGF-R、GD2、HER2、间皮素、粘连蛋白-4、PAP、PDGFRα、PSA、PSA3、PSMA、RANKL、SLAMF7、STEAP1、TARP、TROP2、VEGF、VEGF-R、CEA、不成熟的层粘连蛋白受体、TAG-72、HPV E6、HPV E7、BING-4、钙活化的氯化物通道2、细胞周期素-B1、9D7、EpCAM、EphA3、Her2/neu、端粒酶、间皮素、SAP-1、存活蛋白、BAGE家族抗原、CAGE家族抗原、GAGE家族抗原、MAGE家族抗原、SAGE家族抗原、XAGE家族抗原、NY-ESO-1/LAGE-1、PRAME、SSX-2、Melan-A、MART-1、Gp100、pmel17、酪氨酸酶、TRP-1、TRP-2、P.多肽、MC1R、前列腺特异性抗原、β-连环蛋白或BRCA1。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的多特异性抗体，其中所述癌细胞的所述表面上的所述抗原是CD33。

11. 根据权利要求10所述的多特异性抗体，其中所述第二结合结构域包含：

(i) VH，所述VH包含分别具有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3，所述VH CDR属于具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH；和

(ii) VL，所述VL包含分别具有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，所述VL CDR属于具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL。

12.根据权利要求11所述的多特异性抗体，其中

(i) 所述第二结合结构域的所述VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3氨基酸序列根据Kabat编号系统；

(ii) 所述第二结合结构域的所述VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3氨基酸序列根据Chothia编号系统；

(iii) 所述第二结合结构域的所述VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3氨基酸序列根据AbM编号系统；

(iv) 所述第二结合结构域的所述VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3氨基酸序列根据Contact编号系统；

(v) 所述第二结合结构域的所述VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3氨基酸序列根据IMGT编号系统；或者

(vi) 所述第二结合结构域的所述VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3氨基酸序列根据示例性编号系统。

13. 根据权利要求10所述的多特异性抗体，其中所述第二结合结构域包含：

(i) VH，所述VH包含具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3；和

(ii) VL，所述VL包含具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VL CDR1、具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。

14.根据权利要求13所述的多特异性抗体，其中

(i) 所述第二结合结构域包含具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH；

(ii) 所述第二结合结构域包含具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL；或者

(iii) 所述第二结合结构域包含具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH和具有SEQ IDNO:16的氨基酸序列的VL。

15. 根据权利要求10至14中任一项所述的多特异性抗体，其中所述第二结合结构域的所述VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3形成用于所述CD33的抗原或所述CD33的表位的结合位点。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的多特异性抗体，其中

(i) 所述第一结合结构域是多价的，所述第二结合结构域是多价的，或者其中所述第一结合结构域和所述第二结合结构域两者都是多价的；

(ii) 所述第一结合结构域能够结合至少三个抗原，或者其中所述第二结合结构域能够结合至少三个抗原；

(iii) 所述第一结合结构域能够结合至少四个抗原，或者其中所述第二结合结构域能够结合至少四个抗原；或者

(iv) 所述第一结合结构域能够结合至少五个抗原，或者其中所述第二结合结构域能够结合至少五个抗原。

17. 根据权利要求1至16中任一项所述的多特异性抗体，其中所述多特异性抗体是双特异性抗体、三特异性抗体或四特异性抗体。

18.根据权利要求1至17中任一项所述的多特异性抗体，其中所述抗体

(i) 是人源化抗体，

(ii) 是IgG抗体，任选地其中所述IgG抗体是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体，

(iii) 包含κ轻链或λ轻链，或者

(iv) 是单克隆抗体。

19. 一种多特异性抗体，所述多特异性抗体包含：能够结合γδ T细胞的表面上的TRDV2的第一构件；和能够结合癌抗原的第二构件。

20.一种核酸，所述核酸编码根据权利要求1至19中任一项所述的多特异性抗体。

21.一种载体，所述载体包含根据权利要求20所述的核酸。

22.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含根据权利要求21所述的载体。

23.一种试剂盒，所述试剂盒包括根据权利要求13所述的载体及其包装。

24.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至19中任一项所述的多特异性抗体和药学上可接受的载剂。

25. 一种用于制备与多于一个靶分子结合的抗体的方法，所述分子包括：用于执行获得能够与γδ T细胞上的TRDV2抗原结合的结合结构域的功能的步骤；用于执行获得能够与癌细胞的表面上的抗原结合的结合结构域的功能的步骤；以及用于执行提供能够与γδ T细胞上的TRDV2抗原和癌细胞的表面上的抗原结合的抗体的功能的步骤。

26. 根据权利要求25所述的方法，其中用于执行获得能够与癌细胞的表面上的抗原结合的结合结构域的功能的所述步骤重复n次，并且所述方法还包括用于执行提供能够与γδT细胞上的TRDV2抗原和n个靶分子结合的结合结构域的功能的n个步骤，其中n为至少2。

27. 一种将表达TRDV2的γδ T细胞引导到癌细胞的方法，所述方法包括使所述γδ T细胞与根据权利要求1至19中任一项所述的多特异性抗体接触，其中所述接触将所述γδ T细胞引导到所述癌细胞。

28.一种抑制在细胞表面上表达癌抗原的癌细胞的生长或增殖的方法，所述方法包括使所述癌细胞与根据权利要求1至19中任一项所述的多特异性抗体接触，其中使所述癌细胞与所述药物组合物接触抑制所述癌细胞的生长或增殖。

29. 根据权利要求28所述的方法，其中所述癌细胞在表达TRDV2的γδ T细胞的存在下，同时与所述多特异性抗体接触。

30.一种用于消除受试者的癌细胞的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至19中任一项所述的多特异性抗体。

31.一种用于治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至19中任一项所述的多特异性抗体。

32.根据权利要求30或31所述的方法，其中所述受试者是有需要的受试者。

33. 一种激活表达TRDV2的γδ T细胞的方法，所述方法包括使所述γδ T细胞与根据权利要求1至19中任一项所述的多特异性抗体接触。