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CN115487337B - 一种皮肤修复用敷料贴及其制备方法 - Google Patents

一种皮肤修复用敷料贴及其制备方法 Download PDF

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CN115487337B CN202211167786.7A CN202211167786A CN115487337B CN 115487337 B CN115487337 B CN 115487337B CN 202211167786 A CN202211167786 A CN 202211167786A CN 115487337 B CN115487337 B CN 115487337B
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Abstract

本发明涉及一种皮肤修复用敷料贴及其制备方法。所述皮肤修复用敷料贴包括内层和外层；所述内层由壳聚糖、纤维素和聚乳酸‑羟基乙酸共聚物经冷冻干燥制成，所述壳聚糖共价负载有抗生素脂质体；所述外层由聚乳酸‑羟基乙酸共聚物经静电纺丝制成。本发明中的皮肤修复用敷料贴具有透性气好、具有一定的保湿性以及吸湿性，且抗菌以及促进伤口愈合的效果好，并且能够使得药物缓释，不会存在药物前期突释而导致产生生物毒性影响细胞的生长的问题。

Description

一种皮肤修复用敷料贴及其制备方法
技术领域
本发明属于生物医用敷料产品技术领域，尤其涉及一种皮肤修复用敷料贴及其制备方法。
背景技术
皮肤是人体分布最广的器官，是保护人体的第一道防线，在维持内环境稳态和防止微生物感染方面至关重要。皮肤易受外界因素，如烧伤或疾病等的损害而导致损伤。皮肤损伤通常直接暴露于周围环境，容易导致创面水分缺失、电解质紊乱、蛋白质丢失、细菌感染等生理障碍问题。一般来说，小面积的皮肤损伤机体会自我修复并容易治疗，但是大面积的皮肤损伤若不加以治疗则难以愈合，会因感染等影响愈合，严重者甚至会危及生命。
目前临床上的治疗方案一般使用药膏和敷料，传统的伤口敷料例如绷带、纱布等，由于其特别高的吸水性、以及高的水蒸气透过率，导致伤口严重脱水，使伤口环境不利于细胞的增殖，同时还会导致细菌的滋生。
伤口敷料作为组织工程支架的一种，可以通过结构设计或装载特定药物实现伤口修复功能。制备敷料的主要材料一般有壳聚糖、藻酸盐或胶原蛋白等等，这些材料被制成薄膜型、海绵状或者凝胶状。一个优良的皮肤创伤修复敷料需要具有一些特殊的性能来实现伤口的快速愈合。比如，敷料需要具有良好的透气性，良好的透气性可以有助于创面位置的新生细胞、肉芽组织和血管的长入；同时，也需要具有良好的隔离细菌的性质，敷料的一个重要的作用就是替代皮肤，使得创面不直接暴露于外界环境中，避免外界环境中病原体对创面的入侵和感染；敷料也需要具有一定的保湿性，湿润的环境能够保证创面较为柔软，不易开裂和隆起；敷料也应具有一定的吸湿性，这样从创面渗透出来的组织液可以被敷料快速吸收，防止水分的流失。
PLGA(聚乳酸-羟基乙酸共聚物)材料是乳酸和羟基乙酸随机聚合而成，可以在体内降解，具有非常优良的生物相容性，因此近些年来被创伤修复领域重点关注和研究使用；壳聚糖是一种从甲壳动物和真菌细胞壁等提取的天然氨基多糖，具有良好的生物相容性、生物降解性和广谱抗菌性，研究表明其对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌和白色念珠菌有抑菌效果，而且安全无毒，在很多领域都备受关注，如生物医药、环保、纺织、组织工程、食品及化妆品等领域，此外，研究表明，壳聚糖具有良好的止血性能和促进伤口愈合的能力。目前，市面上已有多种以壳聚糖为原料的伤口敷料商品。然而，目前以PLGA材料或者壳聚糖为原料的敷料产品的透气性、保湿性、吸湿性、抗菌或者促进伤口愈合等方面的性能有待进一步提高。
此外，现有的伤口敷料对于药物的负载通常为物理吸附，这使得敷料无法控制药物的释放时间，无法精确地掌控敷料的有效时间，从而减缓了伤口愈合时间，另一方面药物的前期突释也会产生生物毒性，从而影响细胞的生长情况。
综上，非常有必要提供一种皮肤修复用敷料贴及其制备方法。
发明内容
为了解决现有技术中存在的一个或者多个技术问题，本发明提供了一种皮肤修复用敷料贴及其制备方法。
本发明在第一方面提供了一种皮肤修复用敷料贴，所述皮肤修复用敷料贴包括内层和外层；所述内层由壳聚糖、纤维素和聚乳酸-羟基乙酸共聚物经冷冻干燥制成，所述壳聚糖共价负载有抗生素脂质体；所述外层由聚乳酸-羟基乙酸共聚物经静电纺丝制成。
优选地，所述抗生素脂质体中含有马来酰亚胺基团，所述壳聚糖为巯基化壳聚糖，通过巯基化壳聚糖中含有的巯基与所述抗生素脂质体中含有马来酰亚胺基团之间的反应，使抗生素脂质体共价负载在壳聚糖上；优选的是，使巯基化壳聚糖中含有的巯基与所述抗生素脂质体中含有的马来酰亚胺基团按照摩尔比为1：(0.8～1.2)进行反应。
优选地，所述纤维素为细菌纤维素；所述抗生素脂质体中含有的抗生素为氨基糖苷类、β-内酰胺类、糖肽类、喹诺酮类、磺胺类和四环素类抗生素中的一种或多种，优选为庆大霉素、万古霉素或盐酸四环素；在所述内层和/或所述外层中，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物中含有的乳酸与羟基乙酸的嵌段比为50:50；和/或在所述内层中，所述共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖、所述纤维素与所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物的质量比为(0.08～0.6)：(2.5～3.5)：7。
本发明在第二方面提供了本发明在第一方面所述的皮肤修复用敷料贴的制备方法，所述方法包括如下步骤：
(1)将聚乳酸-羟基乙酸共聚物配制成电纺液进行静电纺丝，得到膜状材料；
(2)配制共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液、纤维素溶液以及聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液；
(3)将所述共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液、纤维素溶液与聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液混合均匀，得到混合物，然后将所述混合物进行流延与预冷冻，得到复合物，最后在所述复合物上覆盖步骤(1)得到的膜状材料并经冷冻干燥，制得皮肤修复用敷料贴。
优选地，在进行步骤(2)之前，还包括共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖的制备，所述制备为：将壳聚糖进行巯基化，得到巯基化壳聚糖，然后使得巯基化壳聚糖与含有马来酰亚胺基团的抗生素脂质体进行反应，得到共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖。
优选地，所述壳聚糖的巯基化为：用磷酸缓冲盐溶液将壳聚糖、2-亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐、4-二甲氨基吡啶与二硫代苏糖醇混合均匀，得到混合液，然后将所述混合液在30～40℃反应2.5～4h，得到巯基化壳聚糖，优选的是，将所述混合液在37℃反应3h，得到所述巯基化壳聚糖；优选的是，所述磷酸缓冲盐溶液的浓度为0.08～0.15mM优选为0.1mM，pH为4～8更优选为7；优选的是，所述混合液中含有的2-亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐的浓度为15～25mM，含有的4-二甲氨基吡啶的浓度为15～25mM，含有的二硫代苏糖醇的浓度为15～25mM；优选的是，在将壳聚糖进行巯基化时，使所述壳聚糖上含有的氨基与所述二硫代苏糖醇的摩尔比为1：(0.8～1.5)更优选为1：(1～1.5)。
优选地，所述抗生素脂质体为庆大霉素脂质体，所述庆大霉素脂质体的制备为：用乙醇将含有马来酰亚胺基团的脂质体溶解，得到脂质体溶液，用4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸缓冲溶液将庆大霉素溶解，得到庆大霉素溶液，将脂质体溶液和庆大霉素溶液混合均匀后，在50～70℃通过多孔聚碳酸酯膜挤压，得到庆大霉素脂质体；优选的是，所述脂质体包含1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱、胆固醇、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[马来酰亚胺(聚乙二醇)-2000]和L-α-磷脂酰乙醇胺，更优选的是，所述脂质体还包含3,3'-二-N-十八烷基氧代羰花青高氯酸盐；优选的是，所述脂质体溶液中含有的脂质体的浓度为12～18mM优选为15mM；优选的是，所述脂质体溶液与所述庆大霉素溶液按照体积比为(3.5～4.5)：(5.5～6.5)优选为4:6混合均匀。
优选地，所述电纺液以六氟异丙醇为溶剂，所述电纺液的浓度为15～25w/v％优选为20w/v％；在进行静电纺丝时，所述电纺液的流速为0.8～1.5mL/h优选为1mL/h，接收距离为15～25cm优选为20cm，高压直流电源的电压为18～36kV优选为20kV；和/或所述接收器的转速为100～200r/min优选为150r/min，所述接收器为圆柱形接收器，所述圆柱形接收器的直径为6～10cm。
优选地，所述共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液以醋酸溶液为溶剂，优选的是，所述醋酸溶液为质量分数为0.8～1.2％的醋酸水溶液；所述共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液的质量浓度为0.8～1.2％；所述纤维素溶液以水为溶剂，优选的是，所述纤维素溶液的质量浓度为0.8～1.2％；所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液以六氟异丙醇为溶剂，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液的浓度为15～25w/v％优选为20w/v％；和/或所述预冷冻的温度为-15～-30℃优选为-20℃，所述预冷冻的时间为20～40min优选为30min。
优选地，所述纤维素溶液中含有的纤维素为细菌纤维素，所述纤维素溶液的配制为：将细菌纤维素置于质量浓度为0.8～1.2％的氢氧化钠溶液中浸泡18～36h，然后用水冲洗至pH为6.8～7.2，烘干后再置于水中通过高速分散均质机分散均匀，得到纤维素溶液，优选的是，在15000～30000r/min更优选为20000r/min的转速下分散均匀，优选的是，所述分散的时间为5～15min更优选为10min。
本发明与现有技术相比至少具有如下有益效果：
(1)本发明中的所述皮肤修复用敷料贴包括内层和外层；所述外层为聚乳酸-羟基乙酸共聚物层，仿天然细胞外基质设计，具有疏水和透气的功能，所述内层由壳聚糖、纤维素和聚乳酸-羟基乙酸共聚物经冷冻干燥制成，仿引导组织再生膜设计，具有一定的保湿性和吸湿性，一定的湿润环境能够保证创面较为柔软，不易开裂和隆起，敷料具有一定的吸湿性，这样从创面渗透出来的组织液可以被敷料快速吸收，可以防止水分的流失；并且本发明中的壳聚糖共价负载有抗生素脂质体，能够使得药物缓释抗菌，不会存在药物前期突释而导致产生生物毒性影响细胞的生长的问题，可以有效提高敷料的抗菌活性以及提高敷料促进创面愈合的效果。
(2)本发明中的皮肤修复用敷料贴对于细菌的生长和繁殖具有很好的抑制作用，对刺激成纤维细胞生长因子家族(FGFs)、表皮生长因子(EGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)等的分泌，刺激肉芽组织生成和组织血管化等具有很好的促进作用，本发明中的皮肤修复用敷料贴具有透性气好、具有一定的保湿性以及吸湿性，且抗菌以及促进伤口愈合的效果好等优势。
附图说明
图1是本发明实施例1中的共价负载有抗生素(庆大霉素)脂质体的壳聚糖的荧光共聚焦显微镜图。
图2是本发明实施例1制备的皮肤修复用敷料贴药物缓释结果图。
图3是本发明对比例2中的含有庆大霉素脂质体的壳聚糖的荧光共聚焦显微镜图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明在第一方面提供了一种皮肤修复用敷料贴，所述皮肤修复用敷料贴包括内层和外层；所述内层由壳聚糖、纤维素和聚乳酸-羟基乙酸共聚物经冷冻干燥制成，所述壳聚糖共价负载有抗生素脂质体；所述外层由聚乳酸-羟基乙酸共聚物经静电纺丝制成；本发明对所述抗生素脂质体的负载量不做具体的限定，根据实际需要确定即可；在本发明中，也将所述内层记作壳聚糖/纤维素/聚乳酸-羟基乙酸共聚物/抗生素层，也将所述外层记作聚乳酸-羟基乙酸共聚物层；在本发明中，所述内层和所述外层是相对而言，在使用时，所述皮肤修复用敷料贴的内层为靠近皮肤的一层，与皮肤相接触，所述外层为远离所述皮肤的一层；在本发明中，所述内层的厚度例如可以为0.2～1.5mm，所述外层的厚度例如可以为0.1～0.2mm。
本发明中的所述皮肤修复用敷料贴包括内层和外层；所述内层由壳聚糖、纤维素和聚乳酸-羟基乙酸共聚物经冷冻干燥制成，所述内层中还包含有聚乳酸-羟基乙酸共聚物，能够有效起到支架作用，避免单一的壳聚糖成分存在的韧性差等问题；在本发明中，所述内层能够使得敷料贴具有一定的保湿性和吸湿性，一定的湿润环境能够保证创面较为柔软，不易开裂和隆起，敷料具有一定的吸湿性，这样从创面渗透出来的组织液可以被敷料快速吸收，可以防止水分的流失；本发明中的壳聚糖的表面共价负载有抗生素脂质体，能够使得药物缓释，不会存在药物前期突释而导致产生生物毒性影响细胞的生长的问题，可以有效提高敷料的抗菌活性以及提高敷料促进创面愈合的效果；本发明中的外层由聚乳酸-羟基乙酸共聚物经静电纺丝制成，仿天然细胞外基质设计，具有疏水以及透气性好的优势，并且作为内层的保护层能够起到支架作用；本发明中的皮肤修复用敷料贴对于细菌的生长和繁殖具有很好的抑制作用，对刺激成纤维细胞生长因子家族(FGFs)、表皮生长因子(EGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)等的分泌，刺激肉芽组织生成和组织血管化等具有很好的促进作用，本发明中的皮肤修复用敷料贴具有透性气好、具有一定的保湿性以及吸湿性，且抗菌以及促进伤口愈合的效果好等优势。
根据一些优选的实施方式，所述抗生素脂质体中含有马来酰亚胺基团，所述壳聚糖为巯基化壳聚糖，通过巯基化壳聚糖中含有的巯基与所述抗生素脂质体中含有马来酰亚胺基团之间的反应，使抗生素脂质体共价负载在壳聚糖上，即使得抗生素脂质体共价负载在壳聚糖的表面；在本发明中，优选为通过巯基化壳聚糖中含有的巯基与所述抗生素脂质体中含有马来酰亚胺基团之间的反应，使抗生素脂质体共价负载在壳聚糖的表面，即通过巯基基团与马来酰亚胺基团的反应共价固定负载抗生素脂质体(例如庆大霉素脂质体)，相比通过物理吸附的方式将抗生素脂质体负载的方式，能够更好地使得药物缓释，可以使得皮肤修复用敷料贴在24h内持续释放，在32h达到稳定状态，不会存在药物前期突释而导致产生生物毒性影响细胞的生长的问题，可以有效提高敷料的抗菌活性以及提高敷料促进创面愈合的效果。
根据一些优选的实施方式，使巯基化壳聚糖中含有的巯基与所述抗生素脂质体中含有的马来酰亚胺基团按照摩尔比为1：(0.8～1.2)进行反应。
根据一些优选的实施方式，所述纤维素为细菌纤维素(BC纤维素)，在本发明中，优选为所述纤维素为细菌纤维素，本发明发现，细菌纤维素能够参与细胞外基质合成，对刺激成纤维细胞生长因子家族(FGFs)、表皮生长因子(EGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)等的分泌，刺激肉芽组织生成和组织血管化等具有很好的促进作用。
根据一些优选的实施方式，所述抗生素脂质体中含有的抗生素为氨基糖苷类、β-内酰胺类、糖肽类、喹诺酮类、磺胺类和四环素类抗生素中的一种或多种，优选为庆大霉素、万古霉素或盐酸四环素。
根据一些优选的实施方式，在所述内层和/或所述外层中，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物中含有的乳酸与羟基乙酸的嵌段比为50:50；本发明对所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)没有特别的要求，采用市面上可以直接购买的产品即可，更优选的是，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物中含有的乳酸与羟基乙酸的嵌段比为50:50，本发明发现，当所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物中含有的乳酸与羟基乙酸的嵌段比为50:50时降解最快，降解速度为1-2个月，而降解速度较慢的材料则不太适合作为创伤修复敷料随同伤口的愈合而降解，往往会形成异物阻碍伤口的愈合。
根据一些优选的实施方式，在所述内层中，所述共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖、所述纤维素与所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物的质量比为(0.08～0.6)：(2.5～3.5)：7更优选为(0.1～0.5)：3：7(例如0.1:3:7、0.2:3:7、0.3:3:7、0.4:3:7或0.5:3:7)，如此更有利于保证所述皮肤修复用敷料贴的机械性能更好、透气性更好且具有更合适的保湿性以及吸湿性以及使其抗菌以及促进伤口愈合的效果更好。
本发明在第二方面提供了本发明在第一方面所述的皮肤修复用敷料贴的制备方法，所述方法包括如下步骤：
(1)将聚乳酸-羟基乙酸共聚物配制成电纺液进行静电纺丝，得到膜状材料；
(2)配制共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液、纤维素溶液以及聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液；
(3)将所述共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液、纤维素溶液与聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液混合均匀，得到混合物，然后将所述混合物进行流延与预冷冻，得到复合物，最后在所述复合物上覆盖步骤(1)得到的膜状材料并经冷冻干燥，制得皮肤修复用敷料贴；本发明对所述流延的工艺条件不做具体限定，采用常规操作流延均匀即可；本发明对所述冷冻干燥的条件不做具体限定，采用常规的冷冻干燥条件即可。
根据一些具体的实施方式，所述冷冻干燥包括预冻阶段、第一升华阶段、第二升华阶段和降温阶段，各个阶段的工艺条件如下：
预冻阶段：目标温度为-12～-8℃，速率为3～4.0℃/min，恒温时长为280～320min；
第一升华阶段：抽真空，掺气90～110Pa，目标温度为-4～-2℃，速率为0.6～0.8℃/min，恒温时长为1300～1340min；
第二升华阶段，抽真空，掺气90～110Pa，包括五个升温阶梯，分别为：
-1～1℃，速率为0.2～0.3℃/min，恒温时长为110～130min；
8～12℃，速率为1.0～1.2℃/min，恒温时长为110～130min；
18～22℃，速率为1.0～1.2℃/min，恒温时长为110～130min；
28～32℃，速率为1.0～1.2℃/min，恒温时长为110～130min；
38～42℃，速率为1.0～1.2℃/min，恒温时长：每隔10分钟进行终点判断，至终点判断合格为止；终点判断为≤0.9Pa/10min；
降温阶段：降至室温，速率为1.4～1.6℃/min。
根据一些优选的实施方式，在进行步骤(2)之前，还包括共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖的制备，所述制备为：将壳聚糖进行巯基化，得到巯基化壳聚糖，然后使得巯基化壳聚糖与含有马来酰亚胺基团的抗生素脂质体进行反应，得到共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖；在本发明中，在使得巯基化壳聚糖与含有马来酰亚胺基团的抗生素脂质体进行反应时，对所述反应的条件没有特别的要求，例如以浓度为0.1mM、pH为7的磷酸缓冲盐溶液(PBS缓冲液)为溶剂，在室温下20～30℃反应2～4h，然后用磷酸缓冲盐溶液(pH＝7)洗涤5次，每次1min，洗涤过程中例如可以用玻璃棒轻轻搅拌，最后经干燥，得到共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖，所述干燥例如可以是在鼓风干燥箱37±2℃干燥8h。
根据一些优选的实施方式，所述壳聚糖的巯基化为：用磷酸缓冲盐溶液将壳聚糖、2-亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐、4-二甲氨基吡啶与二硫代苏糖醇混合均匀，得到混合液，然后将所述混合液在30～40℃反应2.5～4h，得到巯基化壳聚糖，优选的是，将所述混合液在37℃反应3h，得到所述巯基化壳聚糖；本发明对所述壳聚糖的来源不做具体的限定，采用市面上可以直接购买的产品即可；优选的是，所述磷酸缓冲盐溶液(即PBS缓冲液)的浓度为0.08～0.15mM优选为0.1mM，pH为4～8更优选为7；在本发明中，所述磷酸缓冲盐溶液的浓度，指的是含有的磷酸根离子的浓度；在本发明中，优选为采用的磷酸缓冲盐溶液(PBS缓冲液)的pH为4～8，更优选为7，如此可以使得巯基接入率更高；优选的是，所述混合液中含有的2-亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐的浓度为15～25mM，含有的4-二甲氨基吡啶的浓度为15～25mM，含有的二硫代苏糖醇的浓度为15～25mM；优选的是，在将壳聚糖进行巯基化时，使所述壳聚糖上含有的氨基与所述二硫代苏糖醇的摩尔比为1：(0.8～1.5)，更优选为1：(1～1.5)。
根据一些具体的实施方式，所述壳聚糖的巯基化为：用浓度为0.1mM、pH为4～8的磷酸缓冲盐溶液将壳聚糖(CS：分子量416kDa，脱乙酰度88％)、2-亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐、4-二甲氨基吡啶(催化剂)与二硫代苏糖醇(DTT)混合均匀，得到混合液，然后将所述混合液在37℃反应3h，得到所述巯基化壳聚糖；所述混合液中含有的2-亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐的浓度为20mM，含有的4-二甲氨基吡啶的浓度为20mM，含有的二硫代苏糖醇的浓度为20mM；在将壳聚糖进行巯基化时，使所述壳聚糖上含有的氨基与所述二硫代苏糖醇的摩尔比为1：(0.8～1.5)。
根据一些优选的实施方式，所述抗生素脂质体为庆大霉素脂质体，所述庆大霉素脂质体的制备为：用乙醇将含有马来酰亚胺基团的脂质体溶解，得到脂质体溶液，用4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸缓冲溶液将庆大霉素溶解，得到庆大霉素溶液，将脂质体溶液和庆大霉素溶液混合均匀后，在50～70℃通过多孔聚碳酸酯膜挤压，得到庆大霉素脂质体；在本发明中，所述4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸缓冲溶液为市面上可以直接购买的产品，比如50mM HEPES缓冲液(pH＝7.4)；在本发明中，所述庆大霉素溶液中含有的庆大霉素的浓度例如可以是30～50mg/mL。
根据一些优选的实施方式，所述脂质体包含1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱、胆固醇、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[马来酰亚胺(聚乙二醇)-2000](铵盐)和L-α-磷脂酰乙醇胺，更优选的是，所述脂质体还包含3,3'-二-N-十八烷基氧代羰花青高氯酸盐；本发明对所述脂质体所包含的各物质组分的配比不做具体限定，采用常规配比即可；在本发明中，优选为所述脂质体还包含3,3'-二-N-十八烷基氧代羰花青高氯酸盐，这样在巯基化壳聚糖上的巯基与马来酰亚胺基团进行特异性反应形成共价S-C键时，可以同时将3,3'-二-N-十八烷基氧代羰花青高氯酸盐共价结合到壳聚糖表面的SH基团上，这样可以便于通过荧光共聚焦显微镜分析，观察庆大霉素脂质体在壳聚糖表面的空间分布的均匀性；如图1显示：庆大霉素脂质体在壳聚糖表面的空间分布是均匀的，并且庆大霉素被成功包裹在脂质体中。
根据一些优选的实施方式，所述脂质体溶液中含有的脂质体的浓度为12～18mM优选为15mM；在本发明中，单位“mM”指的是“mmol/L”；优选的是，所述脂质体溶液与所述庆大霉素溶液按照体积比为(3.5～4.5)：(5.5～6.5)优选为4:6混合均匀。
根据一些具体的实施方式，所述庆大霉素脂质体的制备为：将脂质体1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱、胆固醇、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[马来酰亚胺(聚乙二醇)-2000](铵盐)(DSPE-PEG-Mal)、L-α-磷脂酰乙醇胺和3,3'-二-N-十八烷基氧代羰花青高氯酸盐(绿色荧光)溶解在盛有乙醇的圆底烧瓶中混合均匀，总脂质体的浓度为15mM，庆大霉素溶解在4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸缓冲溶液中，在快速搅拌下，将一定体积的脂质体的乙醇溶液(脂质体溶液)加入到庆大霉素溶液中，二者的体积比为40％：60％，在高于脂质体的转变温度(Tc＝41℃)60℃条件下，通过固定在两个注射器之间的多孔聚碳酸酯膜(100nm)来回推动溶液20次，经多孔聚碳酸酯膜挤压，形成单层脂质体(庆大霉素脂质体)。
根据一些优选的实施方式，所述电纺液以六氟异丙醇为溶剂，所述电纺液的浓度为15～25w/v％优选为20w/v％；在进行静电纺丝时，所述电纺液的流速为0.8～1.5mL/h优选为1mL/h，接收距离为15～25cm优选为20cm，高压直流电源的电压为18～36kV优选为20kV；和/或所述接收器的转速为100～200r/min优选为150r/min，所述接收器为圆柱形接收器，所述圆柱形接收器的直径为6～10cm；本发明中，多个技术特征之间出现的“和/或”，表示的是这些技术特征之间均是以“和/或”的关系连接，表示可以是这些技术特征中的任意一个，或者是这些技术特征中任意两个或者多个的组合。
根据一些具体的实施方式，步骤(1)为：
(a)将2g聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)溶于10mL六氟异丙醇中，充分搅拌均匀后得到浓度为20w/v％的PLGA溶液(电纺液)，采用的PLGA的Mw＝20万，LA/GA＝50:50；在本发明中，单位“w/v％”表示的是“g/100mL”；
(b)通过调节纺丝室的加湿器和抽湿器控制纺丝室的湿度维持在40-50％，调节空调维持纺丝室内温度在25℃左右；将微型注射泵置于接收器(圆柱形接收器)的一侧，同时将接收器和高压电源与地线相连；
(c)将配制好的电纺液装入10mL注射器中，连接21G不锈钢针头，将连接高压直流电源的夹头与注射器的针头相连。设置流速为1mL/h，固定在微型注射泵上，注射器内径为14.90mm，电压20kV，接收距离为20cm，接收器的转速为150r/min，接收器包覆有铝箔，接收器的直径6-10cm，电纺结束后沿轴心方向划开，得到膜状材料。
根据一些优选的实施方式，所述共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液以醋酸溶液为溶剂，优选的是，所述醋酸溶液为质量分数(质量浓度)为0.8～1.2％更优选为1％的醋酸水溶液；所述共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液的质量浓度为0.8～1.2％优选为1％，即含有共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖的质量浓度为0.8～1.2％；所述纤维素溶液以水为溶剂，优选的是，所述纤维素溶液的质量浓度为0.8～1.2％，即含有纤维素的质量浓度为0.8～1.2％；所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液以六氟异丙醇为溶剂，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液的浓度为15～25w/v％优选为20w/v％，即含有聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液的浓度为15～25w/v％；和/或所述预冷冻的温度为-15～-30℃优选为-20℃，所述预冷冻的时间为20～40min优选为30min。
根据一些优选的实施方式，所述纤维素溶液中含有的纤维素为细菌纤维素，所述纤维素溶液的配制为：将细菌纤维素置于质量浓度为0.8～1.2％的氢氧化钠溶液(氢氧化钠水溶液)中浸泡18～36h优选为24h，然后用水冲洗至pH为6.8～7.2，烘干后再置于水中通过高速分散均质机分散均匀，得到纤维素溶液，优选的是，在15000～30000r/min更优选为20000r/min的转速下分散均匀，优选的是，所述分散的时间为5～15min更优选为10min；本发明对所述细菌纤维素的来源没有特别的要求，采用市面上可以直接购买的产品即可。
根据一些具体的实施方式，所述纤维素溶液的配制为：将细菌纤维素BC加入质量分数为1％的NaOH水溶液中浸泡24h后，放在滤网上用超纯水冲洗，反复冲洗至pH值中性，烘干备用；称取2g的氢氧化钠溶液浸泡处理后的BC，加入超纯水至200g，利用高速分散均质机以20000r/min的速度均质分散10min，得到质量分数为1％的纤维素溶液。
根据一些具体的实施方式，所述共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液的配制为：称取共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖1g，加入到99g质量分数为1％的醋酸水溶液中，放置在磁力搅拌器上搅拌60min，得到质量浓度为1％的所述负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液。
根据一些具体的实施方式，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液的配制为：将2gPLGA溶于10mL六氟异丙醇中，充分搅拌均匀后得到浓度为20w/v％的聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液，采用的PLGA的Mw＝20万，LA/GA＝50:50。
根据一些具体的实施方式，将配制好的聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液、纤维素溶液、负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液，按一定比例进行混合(含有的聚乳酸-羟基乙酸共聚物、纤维素以及共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖的质量比为7:3:0.1、7:3:0.2或7:3:0.5等)，用磁力搅拌器搅拌1h后，使其混合均匀，放入合适的平板模具中，使其流延均匀，放入-20℃冰箱预冻30min，使复合物形成冰水复合状态，将步骤(1)制备好的膜状材料紧密的覆于其上，转移至冷冻干燥机中并进行冷冻干燥。
下文将通过举例的方式对本发明进行进一步的说明，但是本发明的保护范围不限于这些实施例。
实施例1
①巯基化壳聚糖的制备：用浓度为0.1mM、pH为7的磷酸缓冲盐溶液将壳聚糖(CS：分子量416kDa，脱乙酰度88％)、2-亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐、4-二甲氨基吡啶(催化剂)与二硫代苏糖醇(DTT)混合均匀，得到混合液，然后将所述混合液在37℃反应3h，得到巯基化壳聚糖；所述混合液中含有的2-亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐的浓度为20mM，含有的4-二甲氨基吡啶的浓度为20mM，含有的二硫代苏糖醇的浓度为20mM；在将壳聚糖进行巯基化时，所述壳聚糖的用量为使得所述壳聚糖上含有的氨基与所述二硫代苏糖醇的摩尔比为1:1。
②庆大霉素脂质体的制备：将脂质体1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱、胆固醇、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[马来酰亚胺(聚乙二醇)-2000](铵盐)、L-α-磷脂酰乙醇胺和3,3'-二-N-十八烷基氧代羰花青高氯酸盐(绿色荧光)按照摩尔比为1:1:1:1:1溶解在盛有乙醇的圆底烧瓶中混合均匀，含有的脂质体的总浓度为15mM，庆大霉素溶解在4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸缓冲溶液(50mM HEPES缓冲液(pH＝7.4))中，得到庆大霉素溶液(庆大霉素溶液中含有庆大霉素的浓度为40mg/mL)，在快速搅拌下，将脂质体溶液加入到庆大霉素溶液中，二者的体积比为40％：60％，在60℃条件下，通过固定在两个注射器之间的多孔聚碳酸酯膜(100nm)来回推动溶液20次，经多孔聚碳酸酯膜挤压，形成单层脂质体(庆大霉素脂质体)。
③共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖的制备：往步骤①得到的巯基化壳聚糖中加入步骤②得到的庆大霉素脂质体进行反应，得到共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖；所述巯基化壳聚糖与所述庆大霉素脂质体的用量为使巯基化壳聚糖中含有的巯基与所述抗生素脂质体中含有的马来酰亚胺基团的摩尔比为1:1；所述巯基化壳聚糖与所述庆大霉素脂质体的反应以浓度0.1mM、pH为7的磷酸缓冲盐溶液为溶剂，在室温25℃反应2h，然后用磷酸缓冲盐溶液(pH＝7)洗涤5次，每次1min，洗涤过程中用玻璃棒轻轻搅拌，最后经干燥，得到共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖；本实施例中的共价负载有抗生素(庆大霉素)脂质体的壳聚糖的荧光共聚焦显微镜图，如图1所示；图1显示：庆大霉素脂质体在壳聚糖表面的空间分布是均匀的，并且庆大霉素被成功包裹在脂质体中。
④静电纺丝制备膜状材料(皮肤修复用敷料贴的外层)
(a)将2g PLGA溶于10mL六氟异丙醇中，充分搅拌均匀后得到浓度为20w/v％的PLGA溶液(电纺液)，采用的PLGA的Mw＝20万，LA/GA＝50:50；
(b)通过调节纺丝室的加湿器和抽湿器控制纺丝室的湿度维持在45％，调节空调维持纺丝室内温度在25℃左右；将微型注射泵置于接收器(圆柱形接收器)的一侧，同时将接收器和高压电源与地线相连；
(c)将配制好的电纺液装入10mL注射器中，连接21G不锈钢针头，将连接高压直流电源的夹头与注射器的针头相连；设置流速为1mL/h，固定在微型注射泵上，注射器内径为14.90mm，电压20kV，接收距离为20cm，接收器的转速为150r/min，接收器包覆有铝箔，接收器的直径8cm，电纺结束后沿轴心方向划开，得到膜状材料。
⑤所述共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液的配制为：称取共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖加入到质量分数为1％的醋酸水溶液中，放置在磁力搅拌器上搅拌60min，得到质量浓度为1％的所述共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液；所述纤维素溶液的配制为：将细菌纤维素BC加入质量分数为1％的NaOH水溶液中浸泡24h后，放在滤网上用超纯水冲洗，反复冲洗至pH值中性，烘干备用；称取氢氧化钠溶液浸泡处理后的BC，加入超纯水，利用高速分散均质机以20000r/min的速度均质分散10min，得到质量分数为1％的纤维素溶液；所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液的配制为：将PLGA溶于六氟异丙醇中，充分搅拌均匀后得到浓度为20w/v％的聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液，采用的PLGA的Mw＝20万，LA/GA＝50:50。
⑥将步骤⑤中配制好的聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液、纤维素溶液、共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液，按照含有的聚乳酸-羟基乙酸共聚物、细菌纤维素以及共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖的质量比为7:3:0.2进行混合，用磁力搅拌器搅拌1h后，使其混合均匀，放入平板模具中，使其流延均匀，放入-20℃冰箱预冻30min，将步骤④制备好的膜状材料紧密的覆于其上，转移至冷冻干燥机中并进行冷冻干燥，得到所述皮肤修复用敷料贴；其中，所述冷冻干燥包括预冻阶段、第一升华阶段、第二升华阶段和降温阶段，各个阶段的工艺条件如下：
预冻阶段：目标温度为-10℃，速率为3.5℃/min，恒温时长为300min；
第一升华阶段：抽真空，掺气100Pa，目标温度为-3℃，速率为0.7℃/min，恒温时长为1300min；
第二升华阶段，抽真空，掺气100Pa，包括五个升温阶梯，分别为：
0℃，速率为0.2℃/min，恒温时长为120min；
10℃，速率为1.0℃/min，恒温时长为120min；
20℃，速率为1.0℃/min，恒温时长为120min；
30℃，速率为1.0℃/min，恒温时长为120min；
40℃，速率为1.0℃/min，恒温时长：每隔10分钟进行终点判断，至终点判断合格为止；终点判断为≤0.9Pa/10min；
降温阶段：降至室温，速率为1.5℃/min。
实施例2
实施例2与实施例1基本相同，不同之处在于：
在步骤⑥中，将步骤⑤中配制好的聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液、纤维素溶液、共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液，按照含有的聚乳酸-羟基乙酸共聚物、细菌纤维素以及共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖的质量比为7:3:0.1进行混合。
实施例3
实施例3与实施例1基本相同，不同之处在于：
在步骤⑥中，将步骤⑤中配制好的聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液、纤维素溶液、共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液，按照含有的聚乳酸-羟基乙酸共聚物、细菌纤维素以及共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖的质量比为7:3:0.5进行混合。
实施例4
实施例4与实施例1基本相同，不同之处在于：
在步骤⑥中，将步骤⑤中配制好的聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液、纤维素溶液、共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液，按照含有的聚乳酸-羟基乙酸共聚物、细菌纤维素以及共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖的质量比为7:2:0.08进行混合。
实施例5
实施例5与实施例1基本相同，不同之处在于：
在步骤⑥中，将步骤⑤中配制好的聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液、纤维素溶液、共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液，按照含有的聚乳酸-羟基乙酸共聚物、细菌纤维素以及共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖的质量比为7:4:0.7进行混合。
对比例1
对比例1与实施例1基本相同，不同之处在于：
⑤所述共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液的配制为：称取共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖，加入到1％的醋酸水溶液中，放置在磁力搅拌器上搅拌60min，得到质量浓度为1％的所述共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液；所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液的配制为：将PLGA溶于六氟异丙醇中，充分搅拌均匀后得到浓度为20w/v％的聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液，采用的PLGA的Mw＝20万，LA/GA＝50:50。
⑥将步骤⑤中配制好的聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液、共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液，按照含有的聚乳酸-羟基乙酸共聚物与共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖的质量比为7:0.2进行混合，用磁力搅拌器搅拌1h后，使其混合均匀，放入平板模具中，使其流延均匀，放入-20℃冰箱预冻30min，将步骤④制备好的膜状材料紧密的覆于其上，转移至冷冻干燥机中并进行冷冻干燥，得到所述皮肤修复用敷料贴；冷冻干燥的条件与实施例1相同。
对比例2
①庆大霉素脂质体的制备：将脂质体1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱、胆固醇、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[马来酰亚胺(聚乙二醇)-2000](铵盐)、L-α-磷脂酰乙醇胺和3,3'-二-N-十八烷基氧代羰花青高氯酸盐(绿色荧光)按照摩尔比为1:1:1:1:1溶解在盛有乙醇的圆底烧瓶中混合均匀，含有的脂质体的总浓度为15mM，庆大霉素溶解在4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸缓冲溶液(50mM HEPES缓冲液(pH＝7.4))中，得到庆大霉素溶液(庆大霉素溶液中含有庆大霉素的浓度为40mg/mL)，在快速搅拌下，将脂质体溶液加入到庆大霉素溶液中，二者的体积比为40％：60％，在60℃条件下，通过固定在两个注射器之间的多孔聚碳酸酯膜(100nm)来回推动溶液20次，经多孔聚碳酸酯膜挤压，形成单层脂质体(庆大霉素脂质体)。
②静电纺丝制备膜状材料(皮肤修复用敷料贴的外层)
(a)将2g PLGA溶于10mL六氟异丙醇中，充分搅拌均匀后得到浓度为20w/v％的PLGA溶液(电纺液)，采用的PLGA的Mw＝20万，LA/GA＝50:50；
(b)通过调节纺丝室的加湿器和抽湿器控制纺丝室的湿度维持在45％，调节空调维持纺丝室内温度在25℃左右；将微型注射泵置于接收器(圆柱形接收器)的一侧，同时将接收器和高压电源与地线相连；
(c)将配制好的电纺液装入10mL注射器中，连接21G不锈钢针头，将连接高压直流电源的夹头与注射器的针头相连；设置流速为1mL/h，固定在微型注射泵上，注射器内径为14.90mm，电压20kV，接收距离为20cm，接收器的转速为150r/min，接收器包覆有铝箔，接收器的直径8cm，电纺结束后沿轴心方向划开，得到膜状材料。
③含有庆大霉素脂质体的壳聚糖溶液的配制为：取壳聚糖(CS：分子量416kDa，脱乙酰度88％)加入到质量分数为1％的醋酸水溶液中，放置在磁力搅拌器上搅拌60min，得到质量浓度为1％的壳聚糖溶液；然后往所述壳聚糖溶液中加入步骤①得到的庆大霉素脂质体(庆大霉素脂质体的用量为所述壳聚糖溶液中含有的壳聚糖质量的10％)并混合均匀，得到含有庆大霉素脂质体的壳聚糖溶液；所述纤维素溶液的配制为：将细菌纤维素BC加入质量分数为1％的NaOH水溶液中浸泡24h后，放在滤网上用超纯水冲洗，反复冲洗至pH值中性，烘干备用；称取氢氧化钠溶液浸泡处理后的BC，加入超纯水，利用高速分散均质机以20000r/min的速度均质分散10min，得到质量分数为1％的纤维素溶液；所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液的配制为：将PLGA溶于六氟异丙醇中，充分搅拌均匀后得到浓度为20w/v％的聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液，采用的PLGA的Mw＝20万，LA/GA＝50:50。
④将步骤③中配制好的聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液、纤维素溶液、含有庆大霉素脂质体的壳聚糖溶液，按照含有的聚乳酸-羟基乙酸共聚物、细菌纤维素以及壳聚糖的质量比为7:3:0.2进行混合，用磁力搅拌器搅拌1h后，使其混合均匀，放入平板模具中，使其流延均匀，放入-20℃冰箱预冻30min，将步骤②制备好的膜状材料紧密的覆于其上，转移至冷冻干燥机中并进行冷冻干燥，得到所述皮肤修复用敷料贴；冷冻干燥的条件与实施例1相同。
本对比例中的含有庆大霉素脂质体的壳聚糖的荧光共聚焦显微镜图如图3所示，从图3可以看出，庆大霉素脂质体与壳聚糖表面空间分布是不均匀的，由于敷料贴是内层表面与皮肤接触，这会导致制得的皮肤修复用敷料贴有的地方负载了庆大霉素脂质体，而有的地方没有负载庆大霉素脂质体，从而影响敷料贴的抗菌效果、抗菌稳定性等性能。
对比例3
①静电纺丝制备膜状材料(皮肤修复用敷料贴的外层)
(a)将2g PLGA溶于10mL六氟异丙醇中，充分搅拌均匀后得到浓度为20w/v％的PLGA溶液(电纺液)，采用的PLGA的Mw＝20万，LA/GA＝50:50；
(b)通过调节纺丝室的加湿器和抽湿器控制纺丝室的湿度维持在45％，调节空调维持纺丝室内温度在25℃左右；将微型注射泵置于接收器(圆柱形接收器)的一侧，同时将接收器和高压电源与地线相连；
(c)将配制好的电纺液装入10mL注射器中，连接21G不锈钢针头，将连接高压直流电源的夹头与注射器的针头相连；设置流速为1mL/h，固定在微型注射泵上，注射器内径为14.90mm，电压20kV，接收距离为20cm，接收器的转速为150r/min，接收器包覆有铝箔，接收器的直径8cm，电纺结束后沿轴心方向划开，得到膜状材料。
②含有庆大霉素的壳聚糖溶液的配制为：取壳聚糖(CS：分子量416kDa，脱乙酰度88％)加入到质量分数为1％的醋酸水溶液中，放置在磁力搅拌器上搅拌60min，得到质量浓度为1％的壳聚糖溶液；然后往所述壳聚糖溶液中加入庆大霉素(庆大霉素的用量为所述壳聚糖溶液中含有的壳聚糖质量的10％)并混合均匀，得到含有庆大霉素的壳聚糖溶液；所述纤维素溶液的配制为：将细菌纤维素BC加入质量分数为1％的NaOH水溶液中浸泡24h后，放在滤网上用超纯水冲洗，反复冲洗至pH值中性，烘干备用；称取氢氧化钠溶液浸泡处理后的BC，加入超纯水，利用高速分散均质机以20000r/min的速度均质分散10min，得到质量分数为1％的纤维素溶液；所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液的配制为：将PLGA溶于六氟异丙醇中，充分搅拌均匀后得到浓度为20w/v％的聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液，采用的PLGA的Mw＝20万，LA/GA＝50:50。
③将步骤②中配制好的聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液、纤维素溶液、含有庆大霉素的壳聚糖溶液，按照含有的聚乳酸-羟基乙酸共聚物、细菌纤维素以及壳聚糖的质量比为7:3:0.2进行混合，用磁力搅拌器搅拌1h后，使其混合均匀，放入平板模具中，使其流延均匀，放入-20℃冰箱预冻30min，将步骤①制备好的膜状材料紧密的覆于其上，转移至冷冻干燥机中并进行冷冻干燥，得到所述皮肤修复用敷料贴；冷冻干燥的条件与实施例1相同。
对比例4
①制备聚乙烯醇/壳聚糖纳米纤维膜：将0.3g壳聚糖溶于10mL 1％乙酸溶液中，将1g聚乙烯醇溶于10mL超纯水中，搅拌至完全溶解，取壳聚糖溶液和聚乙烯醇溶液按照体积比20:80混合，得到质量分数为8.6％的聚乙烯醇/壳聚糖纺丝溶液。将纺丝溶液转移至静电纺丝设备的10mL注射器内，在注射器前端加上内径为1mm的不锈钢针头，控制电压为15kV，纺丝速度为0.1mL/h，接收距离为10cm条件下进行纺丝，铝箔接收聚乙烯醇/壳聚糖纳米纤维膜。
②改性聚乙烯醇/壳聚糖纳米纤维膜：在浓度为50％戊二醛蒸汽中室温交联4h，在50℃真空干燥箱中干燥72h，切成小块。
③制备聚乙烯醇/壳聚糖纳米短纤维：称取2g聚乙烯醇/壳聚糖纳米纤维加至100mL体积分数为25％叔丁醇溶液中，然后在切割速度为8Krpm条件下高速分散切割20min，得到浓度为20mg/mL聚乙烯醇/壳聚糖纳米短纤维的均质液。
④制备混合的均质化溶液：将50mg盐酸四环素加至聚乙烯醇/壳聚糖纳米短纤维的均质液中并搅拌均匀。
⑤制备三维多级网孔材料：将混合均匀的均质液迅速转移至密封容器内，迅速置于-80℃下冷冻4h，然后冷冻真空干燥24h，取出，在90℃恒温条件下加热2h，最后真空干燥12h，得到具有三维多级网孔结构的抗菌吸湿层。
⑥制备聚乳酸/聚己内酯纳米纤维膜：取1g聚乳酸和4g聚己内酯分别溶于20mL六氟异丙醇中，搅拌至完全溶解，然后按照体积比80:20混合聚乳酸溶液和聚己内酯溶液，配成质量分数为10％聚乳酸/聚己内酯纺丝溶液。将纺丝溶液转移至静电纺丝设备的15mL注射器内，在注射器前端加上内径为0.6mm的不锈钢针头，控制电压为14kV，纺丝速度为0.5mL/h，接收距离为15cm条件下，在具有三维多级网孔结构的抗菌吸湿层上进行静电纺丝，得到聚乳酸/聚己内酯纳米纤维保护层，得到3D纳米纤维复合医用敷料。
皮肤修复用敷料贴抗菌活性检测(抑菌圈法)：抗菌活性测试在营养琼脂(NA)培养基中进行，将样品切成直径6mm的圆片状。灭菌后，将圆片分别置于含有约106CFU/mL的大肠杆菌、金色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的琼脂平板上，于37±1℃孵育24h，测量了圆片周围形成的抑菌圈的边缘距大小，单位为mm；空白组为未放置圆片，直接将含有约106CFU/mL的大肠杆菌、金色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的琼脂平板于37±1℃孵育24h，结果如表1所示；在本发明中，该边缘距大小指的是形成的抑菌圈的半径与圆片的半径之差。
表1：实施例1～5以及对比例1～2中的敷料贴的抗菌圈的边缘距大小结果。
敷料贴愈合性能检测：
1.试验材料：实施例1-5及对比例1-4制备的皮肤修复用敷料贴。
2.试验方法：将新生儿皮肤的成纤维细胞作为培养细胞在质量分数10％新生牛血清的DMEM高糖培养液，体积分数5％CO2、37℃条件下进行培养24h，然后分别接种到底层铺设有一层实施例1～5以及对比例1～4中对应的敷料贴，含质量分数0.5％新生牛血清的DMEM高糖培养液中再培养48h；作为空白对照组(空白组)则是再接种到没有铺设有任何敷料贴的含有质量分数0.5％新生牛血清的DMEM高糖培养液中进行培养48h，表2中的增殖率为相对空白组的增殖率。用常规细胞计数方法进行计数，增殖效果如表2所示。
吸湿性能以及保湿性能检测
1.试验材料：实施例1-5及对比例1-4制备的敷料贴。
2.试验方法：测定实施例1-5和对比例1-4敷料贴的吸水倍率、保液能力，具体如下：
①吸水倍率：在不锈钢容器中放入约10mL的生理盐水(0.9％氯化钠)，将试验材料切成4cm×4cm的试验片，密封于容器内保存8小时，放入容器前的试验片重量为ml(g)，8小时后取出的试验片重量为m2(g)，吸水倍率Q＝(m2-m1)/ml；
②保液能力：在不锈钢容器中放入L1(mL)的生理盐水(0.9％氯化钠)，将试验材料切成7cm×10cm×0.1cm的试验片，密封于容器内保存8小时，取出试验片后，测量剩余生理盐水的量L2(mL)，保液能力＝(L2-L1)/(7×10×0.1)×103(L/m3)，结果如表2所示；表2中，符号“-”表示未对该性能指标进行测试。
表2：实施例1～5以及对比例1～4制备的敷料贴的性能。
药物缓释性能测试：
将面积为1cm×1cm的敷料贴浸入盛有4mL PBS缓冲液(pH＝7.4)的试管中，将试管置于37℃恒温摇床中，摇床振荡频率60次/min，在特定时间点提取400μL液体，对庆大霉素含量进行分析，每次取液后补充400μL新鲜PBS缓冲液，使释放介质的总体积保持在4mL。将400μL提取液、350μL异丙醇和250μL邻苯二醛标准溶液加入离心管中，并在室温下培养30min，然后用高效液相色谱法—紫外检测器在332nm左右处测量吸光度，实施例1以及对比例3对应的结果如表3所示。
由表3的结果可知，本发明制得的皮肤修复用敷料贴在24h内持续释放，在32h达到稳定状态；对比例3中的敷料贴药物前期突释，会产生一定的生物毒性，从而影响细胞的生长情况。
本发明未详细说明部分为本领域技术人员公知技术。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (34)

1.一种皮肤修复用敷料贴，其特征在于：
所述皮肤修复用敷料贴包括内层和外层；
所述内层由壳聚糖、纤维素和聚乳酸-羟基乙酸共聚物经冷冻干燥制成，所述壳聚糖共价负载有抗生素脂质体；所述抗生素脂质体中含有马来酰亚胺基团，所述壳聚糖为巯基化壳聚糖，通过巯基化壳聚糖中含有的巯基与所述抗生素脂质体中含有马来酰亚胺基团之间的反应，使抗生素脂质体共价负载在壳聚糖上；所述纤维素为细菌纤维素；在所述内层中，所述共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖、所述纤维素与所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物的质量比为（0.1~0.6）：（2.5~3.5）：7；
所述外层由聚乳酸-羟基乙酸共聚物经静电纺丝制成；在所述内层和所述外层中，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物中含有的乳酸与羟基乙酸的嵌段比为50:50；
所述皮肤修复用敷料贴的制备包括如下步骤：
（1）将聚乳酸-羟基乙酸共聚物配制成电纺液进行静电纺丝，得到膜状材料；
（2）配制共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液、纤维素溶液以及聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液；所述纤维素溶液中含有的纤维素为细菌纤维素；
（3）将所述共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液、纤维素溶液与聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液混合均匀，得到混合物，然后将所述混合物进行流延与预冷冻，得到复合物，最后在所述复合物上覆盖步骤（1）得到的膜状材料并经冷冻干燥，制得皮肤修复用敷料贴；所述预冷冻的温度为-15~-30℃，所述预冷冻的时间为20~40min。
2.根据权利要求1所述的皮肤修复用敷料贴，其特征在于：
使巯基化壳聚糖中含有的巯基与所述抗生素脂质体中含有的马来酰亚胺基团按照摩尔比为1：（0.8~1.2）进行反应。
3.根据权利要求1所述的皮肤修复用敷料贴，其特征在于：
所述抗生素脂质体中含有的抗生素为氨基糖苷类、β-内酰胺类、糖肽类、喹诺酮类、磺胺类和四环素类抗生素中的一种或多种。
4.根据权利要求3所述的皮肤修复用敷料贴，其特征在于：
所述抗生素脂质体中含有的抗生素为庆大霉素、万古霉素或盐酸四环素。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的皮肤修复用敷料贴的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
（1）将聚乳酸-羟基乙酸共聚物配制成电纺液进行静电纺丝，得到膜状材料；
（2）配制共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液、纤维素溶液以及聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液；所述纤维素溶液中含有的纤维素为细菌纤维素；
（3）将所述共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液、纤维素溶液与聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液混合均匀，得到混合物，然后将所述混合物进行流延与预冷冻，得到复合物，最后在所述复合物上覆盖步骤（1）得到的膜状材料并经冷冻干燥，制得皮肤修复用敷料贴；所述预冷冻的温度为-15~-30℃，所述预冷冻的时间为20~40min。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：
在进行步骤（2）之前，还包括共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖的制备，所述制备为：将壳聚糖进行巯基化，得到巯基化壳聚糖，然后使得巯基化壳聚糖与含有马来酰亚胺基团的抗生素脂质体进行反应，得到共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：
所述壳聚糖的巯基化为：用磷酸缓冲盐溶液将壳聚糖、2-亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐、4-二甲氨基吡啶与二硫代苏糖醇混合均匀，得到混合液，然后将所述混合液在30~40℃反应2.5~4h，得到巯基化壳聚糖。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：
将所述混合液在37℃反应3h，得到所述巯基化壳聚糖。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：
所述磷酸缓冲盐溶液的浓度为0.08~0.15mM，pH为4~8。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于：
所述磷酸缓冲盐溶液的浓度为0.1mM，pH为7。
11.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：
所述混合液中含有的2-亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐的浓度为15~25mM，含有的4-二甲氨基吡啶的浓度为15~25mM，含有的二硫代苏糖醇的浓度为15~25mM。
12.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：
在将壳聚糖进行巯基化时，使所述壳聚糖上含有的氨基与所述二硫代苏糖醇的摩尔比为1：（0.8~1.5）。
13.根据权利要求12所述的制备方法，其特征在于：
在将壳聚糖进行巯基化时，使所述壳聚糖上含有的氨基与所述二硫代苏糖醇的摩尔比为1：（1~1.5）。
14.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：
所述抗生素脂质体为庆大霉素脂质体，所述庆大霉素脂质体的制备为：
用乙醇将含有马来酰亚胺基团的脂质体溶解，得到脂质体溶液，用4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸缓冲溶液将庆大霉素溶解，得到庆大霉素溶液，将脂质体溶液和庆大霉素溶液混合均匀后，在50~70℃通过多孔聚碳酸酯膜挤压，得到庆大霉素脂质体。
15.根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于：
所述脂质体包含1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱、胆固醇、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[马来酰亚胺(聚乙二醇)-2000]和L-α-磷脂酰乙醇胺。
16.根据权利要求15所述的制备方法，其特征在于：
所述脂质体还包含3,3'-二-N-十八烷基氧代羰花青高氯酸盐。
17.根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于：
所述脂质体溶液中含有的脂质体的浓度为12~18mM。
18.根据权利要求17所述的制备方法，其特征在于：
所述脂质体溶液中含有的脂质体的浓度为15mM。
19.根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于：
所述脂质体溶液与所述庆大霉素溶液按照体积比为（3.5~4.5）：（5.5~6.5）混合均匀。
20.根据权利要求19所述的制备方法，其特征在于：
所述脂质体溶液与所述庆大霉素溶液按照体积比为4:6混合均匀。
21.根据权利要求5至20中任一项所述的制备方法，其特征在于：
所述电纺液以六氟异丙醇为溶剂，所述电纺液的浓度为15~25w/v%；
在进行静电纺丝时，所述电纺液的流速为0.8~1.5mL/h，接收距离为15~25cm，高压直流电源的电压为18~36kV；
接收器的转速为100~200r/min，接收器为圆柱形接收器，所述圆柱形接收器的直径为6~10cm。
22.根据权利要求21所述的制备方法，其特征在于：
所述电纺液的浓度为20w/v%。
23.根据权利要求21所述的制备方法，其特征在于：
所述电纺液的流速为1mL/h，接收距离为20cm，高压直流电源的电压为20kV。
24.根据权利要求21所述的制备方法，其特征在于：
接收器的转速为150r/min。
25.根据权利要求5至20中任一项所述的制备方法，其特征在于：
所述共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液以醋酸溶液为溶剂；
所述共价负载有抗生素脂质体的壳聚糖溶液的质量浓度为0.8~1.2%；
所述纤维素溶液以水为溶剂；
所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液以六氟异丙醇为溶剂，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液的浓度为15~25w/v%。
26.根据权利要求25所述的制备方法，其特征在于：
所述醋酸溶液为质量分数为0.8~1.2%的醋酸水溶液。
27.根据权利要求25所述的制备方法，其特征在于：
所述纤维素溶液的质量浓度为0.8~1.2%。
28.根据权利要求25所述的制备方法，其特征在于：
所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶液的浓度为20w/v%。
29.根据权利要求25所述的制备方法，其特征在于：
所述预冷冻的温度为-20℃，所述预冷冻的时间为30min。
30.根据权利要求5至20中任一项所述的制备方法，其特征在于：
所述纤维素溶液的配制为：将细菌纤维素置于质量浓度为0.8~1.2%的氢氧化钠溶液中浸泡18~36h，然后用水冲洗至pH为6.8~7.2，烘干后再置于水中通过高速分散均质机分散均匀，得到纤维素溶液。
31.根据权利要求30所述的制备方法，其特征在于：
在15000~30000r/min的转速下分散均匀。
32.根据权利要求31所述的制备方法，其特征在于：
在20000r/min的转速下分散均匀。
33.根据权利要求30所述的制备方法，其特征在于：
所述分散的时间为5~15min。
34.根据权利要求33所述的制备方法，其特征在于：
所述分散的时间为10min。
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