CN115327005B

CN115327005B - 一种氧化氯吡格雷有关物质的检测方法

Info

Publication number: CN115327005B
Application number: CN202210964672.9A
Authority: CN
Inventors: 陆瑶; 张海; 徐霞
Original assignee: Chengdu Shibeikang Biological Medicine Technology Co ltd
Current assignee: Chengdu Shibeikang Biological Medicine Technology Co ltd
Priority date: 2022-08-12
Filing date: 2022-08-12
Publication date: 2024-01-26
Anticipated expiration: 2042-08-12
Also published as: CN115327005A

Abstract

本发明涉及药物检测分析领域，具体涉及一种氧化氯吡格雷有关物质的检测方法。本发明的氧化氯吡格雷有关物质检测方法采用高效液相色谱法，取(7aS,2'S)‑2‑氧‑氯吡格雷，溶剂稀释后，得供试品溶液；将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，按照色谱条件检测；色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长220±2nm，以含酸性离子对的带酸性pH值的盐溶液为流动相A，含乙腈和/或醇的溶液为流动相B，按梯度洗脱。本发明提供的检测方法专属性好、灵敏度和准确度高，适合用于(7aS,2'S)‑2‑氧‑氯吡格雷的药品注册质量研究。

Description

一种氧化氯吡格雷有关物质的检测方法

技术领域

本发明涉及药物检测分析领域，具体涉及一种(7aS, 2’S)-2-氧-氯吡格雷有关物质的检测方法。

背景技术

(7aS, 2’S)-2-氧-氯吡格雷（以下用“化合物A”表示），为氯吡格雷在人体的代谢产物，是一款活性更高且更安全的血小板聚集抑制剂，其化学名为：（S）-2-（2-氯苯基）-2-（（S）-2-氧代-2,6,7,7a-四氢噻吩[3,2-c]并吡啶-5（4H）基）乙酸甲酯：

。

目前化合物A的制备工艺主要为专利CN104245707A报道的路线，以R-(-)-邻氯扁桃酸（SM1）为起始物料，经甲酯化后生成中间体I，与对硝基苯磺酰氯(SM2)缩合生成关键中间体II，再经取代、提纯生成目标化合物A。大致反应路线如下：

。

根据化合物A的分子特性和制备工艺，其有关物质主要为降解杂质、异构体和工艺杂质。其中降解杂质如羟基杂质（P1Z5）、烯醇杂质（P1Z12），主要异构体如P1Z2，以及关键工艺杂质中间体II（P1Z1），各杂质结构详情见表1。

。

有关物质研究对于药品的质量控制至关重要，但现有技术还没有完整的关于化合物A质量控制方面的信息报道，尤其有关物质质量研究。虽然现有技术（CN111943958A）的说明书公开了一种标定式I化合物的检测方法，但该方法无法满足同时检测上述杂质要求，尤其无法满足检测工艺杂质要求。为了更好地控制化合物A的有关物质，满足药品上市要求，开发适合化合物A的有关物质质量控制方法，是目前该药物质量研究中亟待解决的技术问题。

发明内容

为解决(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷的质量控制需求，本发明提供一种(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷有关物质的检测方法。

本发明提供的(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷有关物质检测方法，采用高效液相色谱法，能够检测大部分杂质，包括但不限于杂质P1Z1、P1Z2、P1Z5和P1Z12。

本发明提供一种(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷有关物质检测方法，所述方法采用高效液相色谱法，操作步骤包括：

（1）取(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷，溶剂稀释后，得供试品溶液；

（2）将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，采用色谱条件检测即可。

在某些实施例中，上述色谱条件包含：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，检测波长220±2nm，以含酸性离子对的带酸性pH值的盐溶液为流动相A，含乙腈和/或醇的溶液为流动相B，按梯度洗脱。

在某些实施例中，上述所述梯度洗脱至少包含两段程序：第一段程序流动相A的比例为35%～60%，流动相B的比例为65%～40%；第二段程序流动相A的比例为5%～20%，流动相B的比例为95%～80%；且第一段程序的总时间为10～50分钟，第二段程序的总时间为10～50分钟。

进一步地，上述第二段程序的总时间包含流动相A的比例下降时间、流动相B的比例上升时间以及维持时间，其中流动相A的比例下降时间等于流动相B的比例上升时间，且为5～30分钟，维持时间为5～30分钟。

在某些实施例中，上述检测方法包括系统适用性试验：分别称取杂质对照品和(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷适量，采用一次性配制方式或先浓配再稀配方式，将杂质对照品和(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷用溶剂溶解稀释至目标浓度的混合溶液。

进一步地，上述系统适用性试验采用先浓配再稀配方式：分别取杂质对照品适量，用溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中各约含5～250ug的混合溶液，作为杂质储备液，另取(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷适量，置量瓶中，加入杂质储备液适量，再用溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中含有各杂质0.5～10ug、(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷0.5～10mg。

在某些实施例中，上述色谱条件的梯度洗脱程序包含：0分钟时流动相A的比例为35%～60%，流动相B的比例为65%～40%，并维持到20～40分钟；30～60分钟时流动相A的比例下降至5%～20%，流动相B上升至95%～80%，并维持到50～70分钟。

在某些实施例中，上述色谱条件的梯度洗脱程序包含：0分钟时流动相A的比例为35%～60%，流动相B的比例为65%～40%，并维持到25～35分钟；40～60分钟时流动相A的比例下降至5%～20%，流动相B上升至95%～80%，并维持到55～65分钟。

进一步地，上述色谱条件的梯度洗脱程序包含：0分钟时流动相A的比例为35%～60%，流动相B的比例为65%～40%，并维持到30分钟；50分钟时流动相A的比例下降至5%～20%，流动相B上升至95%～80%，并维持到60分钟。

更进一步地，上述色谱条件的梯度洗脱程序包含：0分钟时流动相A的比例为46%，流动相B的比例为54%，并维持到30分钟；50分钟时流动相A的比例下降至10%，流动相B上升至90%，并维持到60分钟。

在某些实施例中，上述梯度洗脱程序还包括系统平衡程序，所述系统平衡程序包括恢复时间和维持时间。

进一步地，上述恢复时间为0.1～20分钟，优选0.1～5分钟；上述维持时间为0.1～20分钟，优选10分钟。

进一步地，上述梯度洗脱程序还包括系统平衡程序：50.1～71分钟时流动相A的比例上升为35%～60%，流动相B的比例下降为65%～40%，并维持5～20分钟。

更进一步地，上述梯度洗脱程序还包括系统平衡程序，示例性如61分钟时流动相A的比例上升为35%～60%，流动相B的比例下降为65%～40%，并维持到70分钟。

再进一步地，上述系统平衡程序，示例性如61分钟时流动相A的比例上升为46%，流动相B的比例下降为54%，并维持到70分钟。

在某些实施例中，上述色谱条件的流速为0.5～2.0ml/min；优选0.8～1.5ml/min。

在某些实施例中，上述色谱条件的柱温为0～40℃；优选20～40℃。

在某些实施例中，上述有关物质包含P1Z5、P1Z2、P1Z1、P1Z12中的一种或多种。

在某些实施例中，上述溶剂包括乙腈、THF、醇或流动相B和A的体积比为40:60～100:0的混合溶剂；优选乙腈。

进一步地，上述溶剂为流动相B和A的体积比为50:50～95:5、55:45、60:40、65:35、80:20、85:15、或90:10的混合溶剂。

在某些实施例中，上述酸性离子对包括戊烷磺酸钠、己烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠或十二烷磺酸钠。

进一步地，上述酸性离子对的浓度为0.001mol/L～2.0mol/L；优选0.005mol/L～0.5mol/L。

在某些实施例中，上述盐溶液的盐包括磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵、醋酸铵、醋酸钠或醋酸钾。

进一步地，上述盐溶液的浓度为0.001mol/L～2.0mol/L；优选0.005mol/L～0.5mol/L。

在某些实施例中，上述盐溶液的pH值为1.0～6.0；优选为2.0～5.0。

进一步地，上述pH值采用pH调节剂调节，所述pH调节剂包括磷酸、盐酸、硫酸、冰醋酸或甲酸。

在某些实施例中，上述流动相B为醇、乙腈或醇和乙腈的体积比为80:20～100:0的混合溶液；优选醇和乙腈的体积比为90:10～98:2的混合溶液。

进一步地，上述醇包括甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇。

在某些实施例中，上述流动相A为含辛烷磺酸钠的盐溶液（pH值为1.0～6.0）。盐溶液的定义同上。进一步地，上述pH值优选为2.0～5.0。

进一步地，上述流动相A为含0.001mol/L～2.0mol/L辛烷磺酸钠溶液的盐溶液（pH值为1.0～6.0）。盐溶液的定义同上。

更进一步地，上述流动相A为含0.001mol/L～2.0mol/L辛烷磺酸钠溶液的0.001mol/L～2.0mol/L盐溶液（pH值为1.0～6.0）。盐溶液的定义同上。

再近一步地，上述流动相A为含0.001mol/L～2.0mol/L辛烷磺酸钠溶液的0.001mol/L～2.0mol/L磷酸二氢钾溶液（pH值为1.0～6.0）。

在某些实施例中，上述流动相B为乙腈。

在某些实施例中，上述流动相B为醇。醇的定义同上。

在某些实施例中，上述流动相B为乙腈和醇体积比为80:20～100:0的混合溶液；优选醇和乙腈的体积比为90:10～98:2的混合溶液。醇的定义同上。

在某些实施例中，上述系统适用性试验中，按如下顺序出峰：P1Z5、P1Z2、化合物A、P1Z1、P1Z12。

在某些实施例中，上述供试品溶液的色谱图中，按如下顺序出峰：P1Z5、P1Z2、化合物A、P1Z1、P1Z12。

在某些实施例中，上述供试品溶液的色谱图中，有关物质含量按外标法以峰面积计算和/或按自身对照法以峰面积计算和/或按峰面积归一化法计算。

在某些实施例中，上述供试品溶液的色谱图中，如有有关物质，杂质P1Z1和P1Z5不超过0.1%；和/或杂质P1Z2不超过1.0%；和/或杂质P1Z12不超过0.1%；和/或其他单个未知杂质不超过0.1%；和/或总杂不超过2.0%。

在某些实施例中，上述供试品溶液的色谱图中，如有有关物质，杂质P1Z1和P1Z5按外标法以峰面积计算，不超过0.1%；和/或杂质P1Z2按峰面积归一化法计算不超过1.0%；和/或杂质P1Z2按自身对照法以峰面积计算不超过1.0%；和/或其他单个杂质按峰面积归一化法计算不得过0.1%；和/或其他单个杂质按自身对照法以峰面积计算不得过0.1%。

在某些实施例中，上述供试品溶液的色谱图中，如有有关物质，杂质P1Z1和P1Z5按外标法以峰面积计算，不超过0.1%；和/或杂质P1Z2按峰面积归一化法计算不超过1.0%；和/或其他单个杂质按峰面积归一化法计算不得过0.1%。

在某些实施例中，上述供试品溶液的色谱图中，如有有关物质，按峰面积归一化法计算，各杂质峰面积之和不超过2.0%。

有益效果：本发明的(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷有关物质检测方法各峰的峰型好，各峰之间分离度均大于1.5，分离度良好，方法专属性好、灵敏度和准确度高，符合质量分析检测要求，适合本品的有关物质质量研究。

附图说明

图1：系统适用性溶液色谱图。

具体实施方式

下面将结合实验例和实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的各例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。各例中未注明的具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为通过市购获得的常规产品。

化合物A在乙腈中溶解，在甲醇中微溶，在水中几乎不溶。以下实验例和实施例所用的化合物A工作对照品（批号：201113-D，纯度99.6%）和供试品（批号：39201001）均来源于成都施贝康生物医药科技有限公司，P1Z5对照品购自于TRC；异构体杂质P1Z2和杂质P1Z12由于不稳定无法合成，但主药中可以检测出，配合使用LC-MS检测定位。

实验例1：化合物A有关物质检测方法的方法学考察

⒈各种对照品溶液和供试品溶液的配制

供试品溶液：取样品（化合物A，批号：39201001）适量，精密称定，加乙腈溶解并定量稀释制成每1ml约含1mg的溶液（临用新制）。

杂质对照品溶液：分别取P1Z5对照品和P1Z1对照品适量，用乙腈溶解并定量稀释制成每1ml各约含1μg的混合溶液。

系统适用性溶液：分别取P1Z5对照品和P1Z1对照品适量，用乙腈溶解并定量稀释制成每1ml中各约含10ug的混合溶液，作为杂质储备液，另取化合物A约10mg，置10ml量瓶中，精密加入杂质储备液1ml，再用乙腈稀释至刻度，摇匀。

说明：上述溶液还可以使用包括但不限于THF、醇或流动相B和A的体积比为40:60～100:0的混合溶剂溶解配制，以及可以溶解本品的其他试剂。

⒉色谱条件

根据化合物A的化学结构式，发明人首选了专利CN111943958A说明书试验1中公开的色谱条件，但在加入杂质P1Z1时，杂质P1Z1与杂质P1Z12重合，通过摸索，加入离子对试剂，再配合调整梯度洗脱程序等优化方式，最终确定本品有关物质的检测方法。

（1）流动相和梯度洗脱程序的选择

在其他条件不变的情况下，筛选流动相如下：

（a）流动相A：含0.01mol/L的辛烷磺酸钠溶液的0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至3.0)，流动相B：甲醇；

（b）流动相A：含0.01mol/L的辛烷磺酸钠溶液的0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至3.0)，流动相B：甲醇：乙腈（94:6，v/v）；

（c）流动相A：含0.01mol/L的辛烷磺酸钠溶液的0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至3.0)，流动相B：乙腈。

梯度洗脱程序1如表1-1所述：

。

梯度洗脱程序如表1-2所述：

。

采用色谱条件a分别和梯度洗脱程序1～2、色谱条件b和c分别与梯度洗脱程序2，分别对系统适用性溶液进样检测，采集色谱图。

结果说明：色谱条件a和梯度洗脱程序1的条件下峰型好，杂质间的分离度欠佳。色谱条件a和梯度洗脱程序2的条件下，峰型好，主峰与各杂质均能达到良好的分离，杂质峰之间也能达到良好的分离。色谱条件b和c分别与梯度洗脱程序2的条件下，峰型均好，主峰与各杂质均能达到良好的分离，杂质峰之间也能达到良好的分离。

（2）流动相水相pH的选择

在其他条件不变的情况下，选择七种流动相A的pH进行试验，pH1（1.0）、pH2（2.0）、pH3（3.0）、pH4（4.0）、pH5（5.0）、pH6（6.0）、pH7（7.0），pH调节剂采用磷酸、盐酸、硫酸、冰醋酸或甲酸的任意一种。采用上述条件，分别对系统适用性溶液进样检测，采集色谱图。

结果说明：前六种pH值条件下，无论采用何种pH调节剂，峰型均好，主峰与各杂质均能达到良好的分离，杂质峰之间也能达到良好的分离，各峰分离度均大于1.5，且测得的已知杂质含量及杂质个数无明显变化。但pH7.0的中性条件下，部分杂质无法有效分离，且部分杂质峰的峰型不对称。表明酸性流动相pH值对有关物质测定结果无影响。

（3）柱温的选择

在其他条件不变的情况下，选择四种色谱柱温度进行试验，柱温1（0℃）、柱温2（20℃）、柱温3（30℃）、柱温4（40℃）。采用上述条件，分别对系统适用性溶液进样检测，采集色谱图。

结果说明：四种柱温条件下，峰型均好，主峰与各杂质均能达到良好的分离，杂质峰之间也能达到良好的分离，各峰分离度均大于1.5，且测得的已知杂质含量及杂质个数无明显变化。表明柱温对有关物质测定结果无影响。

（4）流速的选择

在其他条件不变的情况下，选择四种色谱流速进行试验，流速1（0.5ml/min）、流速2（1.0ml/min）、流速3（1.5ml/min）、流速4（2.0ml/min）。采用上述四种条件，分别对系统适用性溶液进样检测，采集色谱图。

结果说明：四种流速条件下，峰型均好，主峰与各杂质均能达到良好的分离，杂质峰之间也能达到良好的分离，各峰分离度均大于1.5，且测得的已知杂质含量及杂质个数无明显变化。表明流速对有关物质测定结果无影响。

（5）色谱柱型号的选择

在其他条件不变的情况下，选择三种不同色谱柱型号：型号1： C18柱，250*4.6mm，5µm，型号2：C18柱，250*4.6mm，3.5µm，型号3：C18柱，250*3.0mm，3.0µm，分别对系统适应性溶液进样检测，采集色谱图。

结果说明：三种型号条件下，峰型均好，主峰与各杂质均能达到良好的分离，杂质峰之间也能达到良好的分离，各峰分离度均大于1.5，且测得的已知杂质含量及杂质个数无明显变化。表明C18柱的型号对有关物质测定结果无影响。此外，本发明人基本尝试过常见的C18柱，都能满足分离度大于1.5，且各峰型良好，证明本发明的色谱方法不受柱子型号和品牌的影响。

实验例2：方法学验证

⒈专属性验证

色谱条件：采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（Chromcore120C18 4.6mm×250mm 5µm），检测波长220nm，流动相和梯度洗脱程序为实验例1中的流动相c和梯度洗脱程序3，流速1.0ml/min，柱温30℃。

各溶液配制方法同实验例1。

取已知杂质P1Z1、P1Z5及化合物A各适量，按拟定的色谱条件进样测定。分析结果见表2-1，系统适用性溶液的色谱图见附图1。

由试验结果可知，在拟定的色谱条件下，溶剂不干扰供试品溶液中各杂质的检测，杂质与杂质间、杂质与主峰间分离度均达到1.5以上；峰纯度指数均达到分析要求；各物质出峰先后顺序为：P1Z5、P1Z2、主峰、P1Z1、P1Z12，结果表明该方法专属性好。

⒉强力破坏试验

样品制备方法：称取3份适量的化合物A样品（批号：39201001），分别用2ml乙腈溶解样品后，分别加入0.1mol/L盐酸0.1ml或0.1mol/L氢氧化钠70ul或3%过氧化氢1ml，强酸、强碱室温放置2分钟，氧化室温放置24小时，强力破坏后分别用乙腈溶解并稀释制成每1ml约含1mg的溶液，即得。强力破坏试验结果如表2-2所述。

在酸、碱、氧化各强制破坏试验条件下，主峰与其相邻峰分离度均大于1.5，降解杂质均不干扰已知杂质的检测，且主峰纯度参数均符合规定。

⒊检测线、定量限

取杂质P1Z5、P1Z1及化合物A工作对照品各适量，分别加乙腈溶解并逐级稀释，当各物质的峰高约为基线噪音的3倍，即信噪比约等于3:1时，为该物质的检测限；当峰高约为基线噪音的10倍，即信噪比约等于10:1时，为该物质的定量限。结果见表2-3。

试验结果表明：杂质P1Z5的检测限为1.080ng，其余杂质的检测限均低于P1Z5的检测限，本品有关物质检查拟定的进样浓度为1mg/ml，进样量10µl，绝对进样量为10000ng。绝对进样量大于P1Z5检测限的9000多倍，表明拟定的进样浓度能够保证本品杂质的有效检出。

⒋线性及范围

取“专属性”试验项下杂质P1Z5、P1Z1对照品储备液各适量，精密量取，加乙腈稀释制成限度浓度的10%、20%、50%、80%、100%、200%的溶液，照拟定的色谱条件，取线性对照品溶液各1μl，注入气相色谱仪，记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，结果见表2-4。

综上，当P1Z5的浓度在0.1002μg/ml～2.0040μg/ml之间时，浓度与峰面积的线性关系良好；杂质P1Z1的浓度在0.1080μg/ml～2.1600μg/ml范围内，其浓度与峰面积呈良好的线性关系；化合物A的浓度在0.1169μg/ml～2.3380μg/ml范围内，其浓度与峰面积呈良好的线性关系；Y轴截距与100%峰面积的比值均在25%以内。

⒌精密度和重复性试验

取“线性试验项下”100%浓度杂质混合对照品溶液，连续进样6次，记录峰面积，考察进样精密度。结果表明：杂质P1Z5峰面积的RSD为：0.9%，杂质P1Z1峰面积的RSD为：2.1%，均符合要求，满足液相色谱精密度测定要求。

平行制备6份供试品溶液，对照品溶液同进样精密度试验，照拟定的色谱条件测定供试品中各杂质含量，杂质P1Z5、P1Z1按外标法以峰面积计算杂质含量，杂质P1Z2、P1Z12及总杂分别按自身对照法和面积归一化法计算，结果如表2-5所述。

由以上结果可知，6份样品中杂质P1Z5、P1Z1均未检出，杂质P1Z2、P1Z12均有检出，用自身对照法和面积归一化法计算6份样品中的杂质P1Z2、P1Z12及总杂的检测结果无显著差异，且面积归一化法6份样品的RSD较自身对照法好，因此选择面积归一化法作为杂质的计算方法。面积归一化法检测6份样品，杂质P1Z2的平均值为0.25%，RSD为0.7%，P1Z12的平均值为0.02%，RSD为17.0%，总杂的平均值0.27%，RSD为1.6%，表明该方法重复性好。

⒍回收率

为了考察拟定的检测方法对杂质P1Z5、P1Z1的检测结果与真实值之间的接近程度，采用加样回收的方式对准确度进行验证。取已知各杂质含量的供试品适量，按拟定方法制备供试品溶液，在供试品溶液中分别加入限度浓度80%、100%、120%的已知杂质后进样测定，计算回收率。试验结果见表2-6。

由以上结果可知，P1Z5加样回收率分别在97.36%～105.60%之间，平均回收率为102.4%，RSD为2.6%；P1Z1加样回收率分别在91.12%～102.08%之间，平均回收率为97.2%，RSD为3.2%，说明该方法能准确检出本品中的P1Z5、P1Z1杂质，准确度较好。

⒎耐用性

为了验证拟定的液相条件发生微小变动时，测定结果的准确性不受影响的程度，对拟定色谱条件的耐用性进行了考察。

取系统适用性溶液、供试品溶液、自身对照溶液，按拟定色谱条件进行测定。

试验结果表明，当流速、柱温、色谱柱及流动相发生微小变动时，如流速变化±0.2ml/min、柱温变化±5℃、变换不同型号色谱柱（填料不变）、流动相B的比例变化±2、流动性A的pH值变化±2，在各条件下，测得的已知杂质含量及杂质个数无明显变化。表明柱温、流速、色谱柱、流动相pH值对有关物质测定结果无影响。

实施例1：有关物质检查1（流动相1）

各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中色谱条件流动相B为甲醇，其他条件不变。

测定法：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。

实施例2：有关物质检查2（流动相2）

各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中色谱条件流动相B为乙腈，其他条件不变。

测定法：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。

实施例3：有关物质测定3（流动相3）

各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中色谱条件流动相B为甲醇、乙腈体积比为80:20的混合溶液，其他条件不变。

测定法：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。

实施例4：有关物质测定4（流动相4）

各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中色谱条件流动相A中的酸性离子对由0.01mol/L辛烷磺酸钠换成2.0mol/L戊烷磺酸钠，其他条件不变。

测定法：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。

实施例5：有关物质测定5（流动相5）

各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中色谱条件流动相A中的盐溶液由0.01mol/L磷酸二氢钾换成0.001mol/L醋酸铵，其他条件不变。

测定法：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。

实施例6：有关物质测定6（流动相6）

各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中流动相A用冰醋酸调节pH值至5.0，其他条件不变。

测定法：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。

实施例7：有关物质测定7（梯度程序3）

各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中梯度洗脱程序见表3-1，其他条件不变。

测定法：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。

实施例8：有关物质测定8（梯度程序4）

各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中梯度洗脱程序见表3-2，其他条件不变。

测定法：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。

实施例9：有关物质测定9（梯度程序5）

各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中梯度洗脱程序见表3-3，其他条件不变。

测定法：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。

实施例10：有关物质测定10（梯度程序6）

各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中梯度洗脱程序见表3-4，其他条件不变。

测定法：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。

实施例11：有关物质测定11（梯度程序7）

各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中梯度洗脱程序见表3-5，其他条件不变。

测定法：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。

实施例12：有关物质测定12（梯度程序8）

各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中梯度洗脱程序见表3-6，其他条件不变。

测定法：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。

实施例13：有关物质测定13（流动相A的pH为1.0）

各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中流动相A的pH值由原来的4.0改为1.0，其他条件不变。

测定：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。

实施例14：有关物质测定14（流动相A的pH为6.0）

各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中流动相A的pH值由原来的4.0改为6.0，其他条件不变。

测定：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。

实施例15：有关物质测定15

各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中流速由原来的1.0ml/min改为2.0ml/min，其他条件不变。

测定：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。

实施例16：有关物质测定16

各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中流速由原来的1.0ml/min改为0.5ml/min，其他条件不变。

测定：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。

实施例17：有关物质测定17（流动相7）

各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中色谱条件流动相A中的酸性离子对由0.01mol/L辛烷磺酸钠换成0.001mol/L戊烷磺酸钠，其他条件不变。

测定法：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。

实施例18：有关物质测定18（流动相8）

各溶液配制和色谱条件同实验例2，其中色谱条件流动相A中的盐溶液由0.01mol/L磷酸二氢钾换成2.0mol/L醋酸铵，其他条件不变。

测定法：将各溶液注入色谱系统，采集色谱图。

值得注意的是，上述实施例1～10、13～18的后10分钟以及实施例11～12的后20分钟为系统平衡时间，且该部分程序不再有杂质洗脱出峰。

杂质P1Z1和P1Z5按外标法以峰面积计算，P1Z2、P1Z12按自身对照法或面积归一化法以峰面积计算，其他单个杂质和总杂按峰面积归一化法计算。

数据统计和总结：汇总实验例2“专属性项下”和上述实施例1～18的各色谱图，统计峰面积、保留时间和分离度，结果显示：（1）各系统适用性溶液色谱图中：各峰的峰型较好，各主峰与杂质峰以及杂质峰与杂质峰之间的分离度位于1.5～15.0之间，均大于1.5，各峰分离度较好，各方法专属好，符合质量分析要求。（2）各供试品溶液色谱图中：各主峰化合物A，按外标法以峰面积计算，与实验例2的含量差值在0.1%以内；杂质P1Z5和P1Z1均未检出，杂质P1Z2、P1Z12均有检出，用自身对照法和面积归一化法计算，杂质P1Z2的含量均在0.24%～0.27%，P1Z12的含量均在0.01%～0.04%，总杂按面积归一化法计算均不超过0.30%，表明拟定的有关物质测定方法准确度和重现性良好。据此可以确定本品质量控制标准，即供试品溶液中，如有杂质峰，杂质P1Z1和P1Z5按外标法以峰面积计算，不超过0.1%；杂质P1Z2按自身对照法以峰面积计算或峰面积归一化法计算不超过1.0%；其他单个未知杂质按峰面积归一化法计算不得过0.1%；各杂质峰面积之和不超过2.0%。其中杂质P1Z12按自身对照法以峰面积计算或按面积归一化法计算均不超过0.1%；可按照未知杂质控制。

Claims

1.一种(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷及有关物质的检测方法，其特征在于，所述方法采用高效液相色谱法，操作方法包括：

取(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷，溶剂稀释后，得供试品溶液；

将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，按照色谱条件检测；

系统适用性溶液：分别称取有关物质对照品和(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷适量，采用一次性配制方式或先浓配再稀配方式，将有关物质对照品和(7aS, 2'S)-2-氧-氯吡格雷用溶剂溶解稀释至目标浓度的混合溶液；

将系统适用性溶液注入高效液相色谱仪中，按照色谱条件检测；

所述色谱条件包括：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长220±2nm，以含酸性离子对的带酸性pH值的盐溶液为流动相A，含乙腈和/或醇的溶液为流动相B，按梯度洗脱；所述梯度洗脱的程序包含：0分钟时流动相A的比例为35%～60%，流动相B的比例为65%～40%，并维持到20～40分钟；30～60分钟时流动相A的比例下降至5%～20%，流动相B上升至95%～80%，并维持到50～70分钟；

所述有关物质包含P1Z1、P1Z2、P1Z5、P1Z12中的两种或两种以上，其中P1Z1、P1Z2、P1Z5、P1Z12的结构分别如下：

。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述溶剂包括乙腈、THF、醇或流动相B和A的体积比为40:60～100:0的混合溶剂。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述溶剂为乙腈。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述酸性离子对包括戊烷磺酸钠、己烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠或十二烷磺酸钠。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述盐溶液的盐包括磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵、醋酸铵、醋酸钠或醋酸钾。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述盐溶液的pH值为1.0～6.0。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述盐溶液的pH值为2.0～5.0。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述pH值采用pH调节剂调节，所述pH调节剂包括磷酸、盐酸、硫酸、冰醋酸或甲酸。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相B为醇、乙腈或醇和乙腈的体积比为80:20～100:0的混合溶液。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述流动相B为醇和乙腈的体积比为90:10～98:2的混合溶液。

11.根据权利要求1～10任一所述的检测方法，其特征在于，所述醇包括甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇。

12.根据权利要求1～10任一所述的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的色谱图中，如有有关物质， P1Z1和P1Z5不超过0.1%；和/或P1Z2不超过1.0%；和/或P1Z12不超过0.1%；和/或其他单个未知有关物质不超过0.1%；和/或总有关物质不超过2.0%。