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CN115308141A - 一种腺苷脱氨酶（ada）检测试剂盒质量检测方法 - Google Patents

一种腺苷脱氨酶（ada）检测试剂盒质量检测方法 Download PDF

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CN115308141A
CN115308141A CN202210496816.2A CN202210496816A CN115308141A CN 115308141 A CN115308141 A CN 115308141A CN 202210496816 A CN202210496816 A CN 202210496816A CN 115308141 A CN115308141 A CN 115308141A
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CN
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Application number
CN202210496816.2A
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贾刚
王贤理
池万余
苗准
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Zhejiang Erkn Biological Technology Co ltd
Original Assignee
Zhejiang Erkn Biological Technology Co ltd
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Publication date
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Priority to CN202210496816.2A priority Critical patent/CN115308141A/zh
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    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
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    • G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
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Abstract

本发明属于试剂盒检测领域，具体涉及一种用于腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒的质量检测方法。所述质量检测方法利用物理特性、化学特性、外观特性多个维度进行质量检测。本发明所述方法准确度、灵敏度高，实现了对腺苷酸脱氨酶(ADA)质量的有效控制。试验证明，可作为腺苷酸脱氨酶(ADA)检测试剂盒质量检测的常规方法。

Description

一种腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒质量检测方法
技术领域
本发明涉及试剂盒质量检测方法，具体涉及一种腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒质量检测方法的技术领域。
背景技术
腺苷脱氨酶(adenosine deaminase，ADA)是嘌呤核苷代谢中重要的酶类，是一种与机体细胞免疫活性有重要关系的核酸代谢酶，它的活性高低是肝损伤的敏感指标，可作为肝功能常规检查项目之一。
目前，血清中的ADA活性测定可用于判断急性肝损伤及残留病变；协助诊断慢性肝病；有助于肝纤维的诊断；有助于黄疸的鉴别；ADA活性缺乏与重症联合免疫缺陷病(SCID)有关， ADA缺乏可导致核酸代谢障碍，影响到胸腺的发育，从而引起免疫功能缺陷。脑脊液ADA检测可作为中枢神经系统疾病诊断和鉴别诊断的重要指标。
ADA在良恶性难辨的渗出液鉴别诊断上也具有重要价值。因此，测定血液、体液中的ADA及其同工酶水平对这些疾病的鉴别、诊断、治疗及免疫功能的研究日趋受到临床重视。
虽然腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒具有很大的应用价值，但目前缺乏对其有效的质量控制方法，难以对市面上的腺苷脱氨酶(ADA)试剂盒进行有效的质量评价。
发明内容
针对现有腺苷脱氨酶检测剂盒在测试过程中存在的上述缺陷，本发明提供一种灵敏、准确性好、稳定性好腺苷脱氨酶(ADA)检测剂盒质量检测方法。
本发明的第一方面，提供了一种腺苷酸脱氨酶(ADA)检测试剂盒的质量检测方法，所述质量检测步骤如下：
(1)物理检测
(1.1)检测试剂盒外观，检查试剂盒内封盖是否盖紧，无漏液；
(1.2)检查试剂盒内试剂澄清度及含量情况；
(2)化学检测
(2.1)试剂空白吸光度；
(2.2)分析灵敏度；
(2.3)准确度检测
(3)检测并评价校准品、质控品
(3.1)外观检测
(3.2)准确度检测
(3.3)均一性检测；
进一步优选地，所述步骤(1.2)中，利用同一无色光照条件照射试剂容器，检查试剂是否为无色澄清液体；所述含量采用量具测量，进一步地，所述的量具精度不低于0.5mL。
进一步优选地，所述步骤(2.1)中，以纯化水或蒸馏水为样本，在546nm下测定其反应混合液的吸光度值，检查其吸光度应是否小于等于1.0000；所述试剂空白变化率的要求为：每分钟试剂空白吸光度的变化率(ΔA/min)≤0.0200。
进一步优选地，所述步骤(2.2)中，当样品中ADA浓度为90U/L时，其吸光度变化值ΔA/min ≥0.0200；如果样品浓度不是90U/L，可选择其他已知浓度的样品通过换算得出90U/L的近似吸光度值以便于计算。
更进一步优选地，所述步骤(2.3)准确度检测步骤如下：
(2.3.1)至少选取两个水平的定值质控品进行测定，按下式求出相对偏差(Bias％)。
Figure BDA0003633732630000021
式中：Bias％——相对偏差；
Figure BDA0003633732630000022
——样本测定结果均值；TV——质控样本靶值。
其相对偏差Bias％应≤10.0％；
(2.3.2)在人源血清样品中加入一定体积标准溶液或纯品进行测试，各样品重复测定3次，按下式求出回收率R(％)；
Figure BDA0003633732630000023
式中：R——回收率；V——加入标准溶液的体积；V0——血清样本的体积；c——血清样本加入标准溶液后的检测浓度；c0——血清样品的检测浓度；cs——标准溶液的浓度；所述回收率在90％-110％范围内；
(2.3.3)精密度测定：用同批试剂平行测定同一份质控样本10次，所述质控样本ADA≥20U/L，计算均值和标准差，按下式计算批内变异系数(CV批内)，其批内变异系数CV批内≤4.0％；
Figure BDA0003633732630000024
式中：
Figure BDA0003633732630000025
——样本测定结果均值；S——标准差；CV批内——批内变异系数。
(2.3.4)线性范围测定：
该试剂盒在4-250U/L浓度范围内，相关系数r≥0.990；样本浓度≤25U/L，绝对偏差≤5U/L；样本浓度＞25U/L，相对偏差≤10.0％；
在4-250U/L浓度范围内，取接近线性范围上限的高浓度样品和接近线性范围下限的低浓度样品，混合成至少5个稀释浓度样品(xi)，每个稀释浓度样品测试至少2次，分别求出测定结果的均值(yi)；以稀释浓度(xi)为自变量，以测定结果均值(yi)为因变量求出线性回归方程，按以下公式计算线性回归的相关系数(r)。将稀释浓度(xi)代入线性回归方程，计算yi的估计值以及yi与估计值的相对偏差或绝对偏差，取绝对值。
Figure BDA0003633732630000026
(2.3.5)批间差测定：用3个不同批号的试剂分别测试同一质控样本，所述质控样本浓度≥20U/L，每个批号重复测试3次；分别计算每批3次测定结果的均值
Figure BDA0003633732630000027
和3 个批号测试结果的总均值
Figure BDA0003633732630000028
按下列公式求出三个批号试剂测定均值的相对极差(R)，所述相对极差(R)≤8.0％；
Figure BDA0003633732630000029
式中：xmax——
Figure BDA0003633732630000031
中的最大值，
xmin——
Figure BDA0003633732630000032
中的最小值。
进一步优选地，所述步骤(3.1)外观检测中，先将冻干品溶解检测，要求溶解后的液体呈微黄色；所述步骤(3.2)准确度检测中，用检测合格的校准品与试剂盒定标后，测定待测校准品，重复测定3次，分别计算测定结果的均值
Figure BDA0003633732630000033
按下式求出相对偏差(Bias)；
Figure BDA0003633732630000034
其相对偏差(Bias)或测量值与标示的偏差≤10.0％；所述步骤(3.3)均一性检测中，取 10瓶待测校准品或质控品，每瓶测定1次，分别计算测量值的均值
Figure BDA0003633732630000035
和标准差(S1)；再取其中1瓶，重复测定10次，分别计算测量值的均值
Figure BDA0003633732630000036
和标准差(S2)，按下式求出瓶间标准差(S瓶间)和变异系数(CV瓶间)，当S1＜S2，令CV＝0；
Figure BDA0003633732630000037
其批内精密度(CV瓶间)≤8.0％。
本发明的第二方面，提供了上述试剂盒检测方法在腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒质量检测中的应用。
本发明与常规的试剂盒检测方法相比，具有如下有益效果：
(1)本发明通过优化试剂盒质量检测方法，不局限于简单的外观检测、物理检测或化学检测，而是根据正常腺苷脱氨酶(ADA)试剂盒的特点，设计多维度的检测方式，显著优于现有技术。
(2)本发明不局限于定性的检测方式，而是设计了较为准确的检测公式及相应的参数，能够显著改善了现有技术中仅仅定性检测试剂盒的弊端，能够更加准确、快速的确定待检试剂盒的质量。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1
1.材料准备
腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒：随机从市面上抽检多批次试剂盒。
全自动生化分析仪：采用常规全自动生化分析仪，例如，可采用日立7180全自动生化分析仪。
2.质量检测
第一次检测
(1)物理检测
(1.1)检测试剂盒外观，看试剂盒内封盖是否盖紧，并查看是否有漏液现象，发现没有该现象；
(1.2)将检查试剂盒内试剂澄清度及含量情况，取出所抽检的试剂盒中的试剂，将其平衡至室温，利用同一无色光照条件照射试剂容器，检查试剂是否为无色澄清液体；所述含量采用量具测量，所述的量具精度不低于0.5mL，经检查发现该批抽样试剂盒符合要求。
(2)化学检测
(2.1)打开生全自动生化分析仪进行自检或校准，并设定仪器参数。
按以下内容进行基本参数的设定。
测定波长(主/副) 546nm/700nm 测定温度 37℃ 校准模式 线性
试剂样品比(R1：R2：S) 225：75：6 反应类型 速率法 反应方向 向上
延迟时间 3分钟 读数时间 2分钟 / /
试剂样品量可根据实际需要按比例进行调整，S为样品sample。
使用全自动生化分析仪，装载试剂后执行校准(定标)，校准后进行准确度、精密度和线性范围的测定。若使用半自动生化分析仪，则将R1与R2按3：1(V/V)混合成单一工作液，再分别加入质控品、待测样品后测定。
全自动生化分析仪测定结果的计算原理如下，仪器会自动显示测定结果。
ADA(U/L)＝CS×ΔAT/ΔAS(U/L)
式中：ΔAT待测样品平均每分钟吸光度变化值
ΔAS校准液平均每分钟吸光度变化值
CS校准液中ADA的浓度
测定空白样本，确保试剂空白变化率在要求范围内；以纯化水或蒸馏水为样本，在546nm 下测定其反应混合液的吸光度值，检查其吸光度应≤1.0000，该批次经检测空白对照试剂吸光度值为0.169，符合上述要求；经实际检测，每分钟试剂空白吸光度的变化率(ΔA/min) 为0.0009，符合要求(≤0.0200)；
(2.2)分析灵敏度
合格要求为：当样品中ADA浓度为90U/L时，其吸光度变化值(ΔA/min)应≥0.0200；可选择其他已知浓度的样品通过换算得出90U/L的近似吸光度值。
经实际检测，该批次试剂盒校准品浓度为65U/L，其初次检测STD吸光度值为0.0466和 0.0466，均值为0.0466，转换为90U/L浓度的吸光度变化值为0.0630，吸光度变化值变化 (ΔA/min)远大于0.0200，符合要求。
(2.3)准确度检测
准确度检测步骤如下：
(2.3.1)合格要求为：至少选取两个水平的定值质控品进行测定，按下式求出相对偏差 (Bias％)。
Figure BDA0003633732630000041
式中：Bias％——相对偏差；
Figure BDA0003633732630000042
——样本测定结果均值；TV——质控样本靶值。
其相对偏差Bias％应≤10.0％；
根据上述要求，检测并计算出样本测定结果均值
Figure BDA0003633732630000043
为16.3和32.9，质控样本靶值TV为17.0 和34.0，通过公式计算，相对偏差值Bias％为3.92％和3.33％，符合合格要求。
(2.3.2)在人源血清样品中加入一定体积标准溶液或纯品进行测试，各样品重复测定3次，按下式求出回收率R(％)；
Figure BDA0003633732630000051
式中：R——回收率；V——加入标准溶液的体积；V0——血清样本的体积；c——血清样本加入标准溶液后的检测浓度；c0——血清样品的检测浓度；cs——标准溶液的浓度；
合格要求为：所述回收率在90％-110％范围内；
经对该批次回收率计算，加入标准溶液的体积V为20，血清样本的体积V0为200；血清样本加入标准溶液后的检测浓度c为21.1；血清样品的检测浓度c0为16.33；标准溶液的浓度cs为65，经计算得出回收率R为105.8％，符合合格要求。
(2.3.3)精密度测定：用同批试剂平行测定同一份质控样本10次，所述质控样本ADA≥20U/L，计算均值和标准差，按下式计算批内变异系数(CV批内)，合格要求为批内变异系数CV批内≤4.0％；
Figure BDA0003633732630000052
式中：
Figure BDA0003633732630000053
——样本测定结果均值；S——标准差；CV批内——批内变异系数。
通过对该批次试剂检测，检测出样本测定结果值为23.1、24.5、24.3、23.0、23.9、24.2、 24.1、23.1、23.6、23.2，样本测定结果均值
Figure BDA00036337326300000515
为23.70，标准差S为0.57，批内变异系数CV批内为2.4％，故符合上述合格要求。
(2.3.4)线性范围测定：
合格要求为：该试剂盒在4-250U/L浓度范围内，相关系数r≥0.990；样本浓度≤25U/L，绝对偏差≤5U/L；样本浓度＞25U/L，相对偏差≤10.0％；
在4-250U/L浓度范围内，取接近线性范围上限的高浓度样品和接近线性范围下限的低浓度样品，混合成至少5个稀释浓度样品(xi)，每个稀释浓度样品测试至少2次，分别求出测定结果的均值(yi)；以稀释浓度(xi)为自变量，以测定结果均值(yi)为因变量求出线性回归方程，按以下公式计算线性回归的相关系数(r)。将稀释浓度(xi)代入线性回归方程，计算yi的估计值以及yi与估计值的相对偏差或绝对偏差，取绝对值。
Figure BDA0003633732630000054
该批次试剂测定值如下：将样品浓度进行混合稀释，混合成为5个稀释浓度样品xi为0U/L、 62.5U/L、125U/L、187.5U/L，250U/L，样本测定平均值
Figure BDA0003633732630000055
为0.00、31.8、64.17、128.1、 183.07、249.00，计算得出r值为0.9997，样本浓度≤25U/L，绝对偏差为1.49U/L；样本浓度＞25U/L，相对偏差为1.57％、2.59％、1.87％、0.30％。
(2.3.5)批间差测定：用3个不同批号的试剂分别测试同一质控样本，所述质控样本浓度≥20U/L，每个批号重复测试3次；分别计算每批3次测定结果的均值
Figure BDA0003633732630000056
和3 个批号测试结果的总均值
Figure BDA0003633732630000057
按下列公式求出三个批号试剂测定均值的相对极差(R)，合格要求为：相对极差(R)≤8.0％；
Figure BDA0003633732630000058
式中：xmax——
Figure BDA0003633732630000059
中的最大值，
xmin——
Figure BDA00036337326300000510
中的最小值。
针对该批次试剂，用3个不同批号的试剂分别测试同一质控样本，所述质控样本浓度为
Figure RE-GDA00038590192600000512
Figure RE-GDA0003859019260000061
分别为11.9、12.3、11.8，故比较上述三个浓度后得出xmax为12.3，xmin为11.8，进而计算出相对极差R为4.2％，故符合合格要求。
(3)检测并评价校准品、质控品
(3.1)外观检测
先将冻干品溶解检测，经观察，发现溶解后的液体呈微黄色，符合要求；
(3.2)准确度检测
所述步骤(3.2)准确度检测中，用检测合格的校准品与试剂盒定标后，测定待测校准品，重复测定3次，分别计算测定结果分别为61.6、62.3、60.1，得出均值
Figure BDA0003633732630000061
为61.33，校准品标示值为62.6，按下式求出相对偏差(Bias)；
Figure BDA0003633732630000062
其相对偏差(Bias)或测量值与标示的偏差计算得出为2.02％，符合≤10.0％的合格要求； (3.3)均一性检测；所述步骤(3.3)均一性检测中，取10瓶待测校准品或质控品，每瓶测定1次，计算出各个数值校准品为66.2、63.0、64.4、62.5、65.2、65.4、61.3、62.6、58.5、60.0；质控品为35.1、30.2、31.7、29.4、34.6、35.2、35.6、35.5、35.7、29.7，分别计算测量值的均值
Figure BDA0003633732630000063
校准品为62.91、质控品为33.27和标准差(S1)校准品为2.35、质控品为2.54；再取其中1瓶，重复测定10次，分别计算测量值的均值
Figure BDA0003633732630000064
校准品为64.44、质控品为33.36和标准差(S2)校准品为1.40、质控品为1.95，按下式求出瓶间标准差(S瓶间)和变异系数(CV瓶间)，当S1＜S2，令CV＝0；
Figure BDA0003633732630000065
最终计算出批内精密度(CV瓶间)校准品为3.00％、质控品为4.93％，符合合格要求(≤8.0％) 根据化学检测步骤、检测并评价校准品、质控品要求，利用公式对各项数据的计算和统计，并记录在检验原始记录表中，填写各项判定结果，本次检测结果符合要求。
第二次检测
(1)物理检测
(1.1)检测试剂盒外观，看试剂盒内封盖是否盖紧，并查看是否有漏液现象，发现没有该现象；
(1.2)将检查试剂盒内试剂澄清度及含量情况，取出所抽检的试剂盒中的试剂，将其平衡至室温，利用同一无色光照条件照射试剂容器，检查试剂是否为无色澄清液体；所述含量采用量具测量，所述的量具精度不低于0.5mL，经检查发现该批抽样试剂盒符合要求。
(2)化学检测
(2.1)打开生全自动生化分析仪进行自检或校准，并设定仪器参数。
按以下内容进行基本参数的设定。
测定波长(主/副) 546nm/700nm 测定温度 37℃ 校准模式 线性
试剂样品比(R1：R2：S) 225：75：6 反应类型 速率法 反应方向 向上
延迟时间 3分钟 读数时间 2分钟
试剂样品量可根据实际需要按比例进行调整，S为样品sample。
使用全自动生化分析仪，装载试剂后执行校准(定标)，校准后进行准确度、精密度和线性范围的测定。若使用半自动生化分析仪，则将R1与R2按3：1(V/V)混合成单一工作液，再分别加入质控品、待测样品后测定。
全自动生化分析仪测定结果的计算原理如下，仪器会自动显示测定结果。
ADA(U/L)＝CS×ΔAT/ΔAS(U/L)
式中：ΔAT待测样品平均每分钟吸光度变化值
ΔAS校准液平均每分钟吸光度变化值
CS校准液中ADA的浓度
测定空白样本，确保试剂空白变化率在要求范围内；以纯化水或蒸馏水为样本，在546nm 下测定其反应混合液的吸光度值，检查其吸光度应≤1.0000，该批次经检测空白对照试剂吸光度值为0.0154，符合上述要求；经实际检测，每分钟试剂空白吸光度的变化率(ΔA/min) 为0.0008，符合要求(≤0.0200)；
(2.2)分析灵敏度
合格要求为：当样品中ADA浓度为90U/L时，其吸光度变化值(ΔA/min)应≥0.0200；可选择其他已知浓度的样品通过换算得出90U/L的近似吸光度值。
经实际检测，该批次试剂盒试剂校准品浓度为66U/L，其初次检测STD吸光度值为0.0442 和0.0444，均值为0.0443，转换为90U/L浓度的吸光度后，吸光度变化值(ΔA/min)为 0.0590，远大于0.0200，符合要求。
(2.3)准确度检测
准确度检测步骤如下：
(2.3.1)合格要求为：至少选取两个水平的定值质控品进行测定，按下式求出相对偏差 (Bias％)。
Figure BDA0003633732630000071
式中：Bias％——相对偏差；
Figure BDA0003633732630000073
——样本测定结果均值；TV——质控样本靶值。
其相对偏差Bias％应≤10.0％；
根据上述要求，检测并计算出样本测定结果均值
Figure BDA0003633732630000074
为17.5和34.5，质控样本靶值TV为17.00 和34.00，通过公式计算，相对偏差值Bias％为3.47％，符合合格要求。
(2.3.2)在人源血清样品中加入一定体积标准溶液或纯品进行测试，各样品重复测定3次，按下式求出回收率R(％)；
Figure BDA0003633732630000072
式中：R——回收率；V——加入标准溶液的体积；V0——血清样本的体积；c——血清样本加入标准溶液后的检测浓度；c0——血清样品的检测浓度；cs——标准溶液的浓度；
合格要求为：所述回收率在90％-110％范围内；
经对该批次回收率计算，加入标准溶液的体积V为20，血清样本的体积V0为200；血清样本加入标准溶液后的检测浓度c为20.93；血清样品的检测浓度c0为16.33；标准溶液的浓度cs为65.0，经计算得出回收率R为102.9％，符合合格要求。
(2.3.3)精密度测定：用同批试剂平行测定同一份质控样本10次，所述质控样本ADA≥20U/L，计算均值和标准差，按下式计算批内变异系数(CV批内)，合格要求为批内变异系数CV批内≤4.0％；
Figure BDA0003633732630000081
式中：
Figure BDA0003633732630000084
——样本测定结果均值；S——标准差；CV批内——批内变异系数。
通过对该批次试剂检测，检测出样本测定结果值为24.1、24.3、23.3、23.0、24.9、24.2、 23.1、24.1、23.6、23.4，样本测定结果均值
Figure BDA0003633732630000085
为23.80，标准差S为0.61，批内变异系数CV批内为2.57，故符合上述合格要求。
(2.3.4)线性范围测定：
合格要求为：该试剂盒在4-250U/L浓度范围内，相关系数r≥0.990；样本浓度≤25U/L，绝对偏差≤5U/L；样本浓度＞25U/L，相对偏差≤10.0％；
在4-250U/L浓度范围内，取接近线性范围上限的高浓度样品和接近线性范围下限的低浓度样品，混合成至少5个稀释浓度样品(xi)，每个稀释浓度样品测试至少2次，分别求出测定结果的均值(yi)；以稀释浓度(xi)为自变量，以测定结果均值(yi)为因变量求出线性回归方程，按以下公式计算线性回归的相关系数(r)。将稀释浓度(xi)代入线性回归方程，计算yi的估计值以及yi与估计值的相对偏差或绝对偏差，取绝对值。
Figure BDA0003633732630000082
该批次试剂测定值如下：将样品浓度进行混合稀释，混合成为5个稀释浓度样品xi为0U/L、 6.5U/L、125U/L、187.5U/L、250U/L，样本测定平均值
Figure BDA00036337326300000815
为-0.10、66.00、131.47、195.87、258.40，计算得出r值为0.9999，样本浓度≤25U/L，绝对偏差为1.05U/L；样本浓度＞25U/L，相对偏差为0.55％、0.87％、0.44％、0.50％。
(2.3.5)批间差测定：用3个不同批号的试剂同步测试同一质控样本，所述质控样本浓度≥20U/L，每个批号重复测试3次；分别计算每批3次测定结果的均值
Figure BDA0003633732630000087
和3 个批号测试结果的总均值
Figure BDA0003633732630000086
按下列公式求出三个批号试剂测定均值的相对极差(R)，合格要求为：相对极差(R)≤8.0％；
Figure BDA0003633732630000083
式中：xmax——
Figure BDA0003633732630000088
中的最大值，
xmin——
Figure BDA0003633732630000089
中的最小值。
针对该批次试剂，用3个不同批号的试剂同步测试同一质控样本，所述质控样本浓度为
Figure RE-GDA00038590192600000811
Figure RE-GDA00038590192600000812
分别为11.9、12.6、13.8，故比较上述三个浓度后得出xmax为17.5，xmin为15.3，进而计算出相对极差R为14.8％，发现该值大于8％，该次检测不符合合格要求。
(3)检测并评价校准品、质控品
(3.1)外观检测
先将冻干品溶解检测，经观察，发现溶解后的液体呈微黄色，符合要求；
(3.2)准确度检测
所述步骤(3.2)准确度检测中，用检测合格的校准品与试剂盒定标后，测定待测校准品，重复测定3次，分别计算测定结果分别为63.3、62.6、64.5，得出均值
Figure BDA00036337326300000814
为63.47，校准品标示值62.6，按下式求出相对偏差(Bias)；
Figure BDA0003633732630000091
其相对偏差(Bias)或测量值与标示的偏差计算得出为1.38％，符合≤10.0％的合格要求； (3.3)均一性检测；所述步骤(3.3)均一性检测中，取10瓶待测校准品或质控品，每瓶测定1次，计算出各个数值校准品为65.5、64.9、65.7、63.5、66.3、63.2、63.4、65.1、63.8、63.1；质控品为32.6、30.0、34.6、30.5、32.8、32.4、35.2、33.1、35.2、31.7，分别计算测量值的均值
Figure BDA0003633732630000094
校准品为64.45、质控品为32.81和标准差(S1)校准品为1.12、质控品为1.71；再取其中1瓶，重复测定10次，分别计算测量值的均值
Figure BDA0003633732630000093
校准品为64.65、质控品为32.32和标准差(S2)校准品为0.85、质控品为1.31，按下式求出瓶间标准差(S瓶间)和变异系数(CV瓶间)，当S1＜S2，令CV＝0；
Figure BDA0003633732630000092
最终计算出批内精密度(CV瓶间)校准品为1.13％、质控品为3.36％，符合合格要求(≤8.0％) 根据化学检测步骤、检测并评价校准品、质控品要求，利用公式对各项数据的计算和统计，并记录在检验原始记录表中，填写各项判定结果，本次检测结果符合要求。
第三次检测
(1)物理检测
(1.1)检测试剂盒外观，看试剂盒内封盖是否盖紧，并查看是否有漏液现象，发现没有该现象；
(1.2)将检查试剂盒内试剂澄清度及含量情况，取出所抽检的试剂盒中的试剂，将其平衡至室温，利用同一无色光照条件照射试剂容器，检查试剂是否为无色澄清液体；所述含量采用量具测量，所述的量具精度不低于0.5mL，经检查发现该批抽样试剂盒符合要求。
(2)化学检测
(2.1)打开生全自动生化分析仪进行自检或校准，并设定仪器参数。
按以下内容进行基本参数的设定。
测定波长(主/副) 546nm/700nm 测定温度 37℃ 校准模式 线性
试剂样品比(R1：R2：S) 225：75：6 反应类型 速率法 反应方向 向上
延迟时间 3分钟 读数时间 2分钟
试剂样品量可根据实际需要按比例进行调整，S为样品sample。
使用全自动生化分析仪，装载试剂后执行校准(定标)，校准后进行准确度、精密度和线性范围的测定。若使用半自动生化分析仪，则将R1与R2按3：1(V/V)混合成单一工作液，再分别加入质控品、待测样品后测定。
全自动生化分析仪测定结果的计算原理如下，仪器会自动显示测定结果。
ADA(U/L)＝CS×ΔAT/ΔAS(U/L)
式中：ΔAT待测样品平均每分钟吸光度变化值
ΔAS校准液平均每分钟吸光度变化值
CS校准液中ADA的浓度
测定空白样本，确保试剂空白变化率在要求范围内；以纯化水或蒸馏水为样本，在546nm 下测定其反应混合液的吸光度值，检查其吸光度应≤1.0000，该批次经检测空白对照试剂吸光度值为0.0123，符合上述要求；经实际检测，每分钟试剂空白吸光度的变化率(ΔA/min) 为0.0008，符合要求(≤0.0200)；
(2.2)分析灵敏度
合格要求为：当样品中ADA浓度为90U/L时，其吸光度变化值ΔA/min≥0.0200；可选择其他已知浓度的样品通过换算得出90U/L的近似吸光度值。
经实际检测，该批次试剂盒校准品浓度为66U/L，其初次检测STD吸光度值为0.0446和 0.0445，均值为0.0446，转换为90U/L浓度的吸光度后，吸光度变化值(ΔA/min)为0.06，远大于0.0200，符合要求。
(2.3)准确度检测
准确度检测步骤如下：
(2.3.1)合格要求为：至少选取两个水平的定值质控品进行测定，按下式求出相对偏差 (Bias％)。
Figure BDA0003633732630000101
式中：Bias％——相对偏差；
Figure BDA0003633732630000104
——样本测定结果均值；TV——质控样本靶值。
其相对偏差Bias％应≤10.0％；
根据上述要求，检测并计算出样本测定结果均值
Figure BDA0003633732630000106
为16.6和33.6，质控样本靶值TV为17.00 和34.00，通过公式计算，相对偏差值Bias％为2.16％和1.18％，符合合格要求。
(2.3.2)在人源血清样品中加入一定体积标准溶液或纯品进行测试，各样品重复测定3次，按下式求出回收率R(％)；
Figure BDA0003633732630000102
式中：R——回收率；V——加入标准溶液的体积；V0——血清样本的体积；c——血清样本加入标准溶液后的检测浓度；c0——血清样品的检测浓度；cs——标准溶液的浓度；
合格要求为：所述回收率在90％-110％范围内；
经对该批次回收率计算，加入标准溶液的体积V为20，血清样本的体积V0为200；血清样本加入标准溶液后的检测浓度c为20.77；血清样品的检测浓度c0为16.33；标准溶液的浓度cs为65.0，经计算得出回收率R为100.15％，符合合格要求。
(2.3.3)精密度测定：用同批试剂平行测定同一份质控样本10次，所述质控样本ADA≥20U/L，计算均值和标准差，按下式计算批内变异系数(CV批内)，合格要求为批内变异系数CV批内≤4.0％；
Figure BDA0003633732630000103
式中：
Figure BDA0003633732630000105
——样本测定结果均值；S——标准差；CV批内——批内变异系数。
通过对该批次试剂检测，检测出样本测定结果值为25.5、25.6、、25.2、25.6、25.7、25.4、 25.5、25.4、25.2、25.3，样本测定结果均值
Figure BDA0003633732630000107
为25.44，标准差S为0.17，批内变异系数CV批内为0.67％，故符合上述合格要求。
(2.3.4)线性范围测定：
合格要求为：该试剂盒在4-250U/L浓度范围内，相关系数r≥0.990；样本浓度≤25U/L，绝对偏差≤5U/L；样本浓度＞25U/L，相对偏差≤10.0％；
在4-250U/L浓度范围内，取接近线性范围上限的高浓度样品和接近线性范围下限的低浓度样品，混合成至少5个稀释浓度样品(xi)，每个稀释浓度样品测试至少2次，分别求出测定结果的均值(yi)；以稀释浓度(xi)为自变量，以测定结果均值(yi)为因变量求出线性回归方程，按以下公式计算线性回归的相关系数(r)。将稀释浓度(xi)代入线性回归方程，计算yi的估计值以及yi与估计值的相对偏差或绝对偏差，取绝对值。
Figure BDA0003633732630000111
该批次试剂测定值如下：将样品浓度进行混合稀释，混合成为5个稀释浓度样品xi为0U/L、 62.5U/L、125U/L、187.5U/L、250U/L，样本测定平均值
Figure BDA0003633732630000115
为-0.2U/L、66.2U/L、134.4U/L、 199.5U/L、262.7U/L，计算得出r值为0.9999，样本浓度≤25U/L，绝对偏差为0.88U/L；样本浓度＞25U/L，相对偏差为0.65％、1.42％、0.53％、0.62％。
(2.3.5)批间差测定：用3个不同批号的试剂分别测试同一质控样本，所述质控样本浓度≥20U/L，每个批号重复测试3次；分别计算每批3次测定结果的均值
Figure BDA0003633732630000116
和3 个批号测试结果的总均值
Figure BDA00036337326300001112
按下列公式求出三个批号试剂测定均值的相对极差(R)，合格要求为：相对极差(R)≤8.0％；
Figure BDA0003633732630000112
式中：xmax——
Figure BDA00036337326300001110
中的最大值，
xmin——
Figure BDA00036337326300001111
中的最小值。
针对该批次试剂，用3个不同批号的试剂同步测试同一质控样本，所述质控样本浓度为
Figure RE-GDA0003859019260000118
Figure RE-GDA0003859019260000119
分别为13.8、12.9、13.2，故比较上述三个浓度后得出xmax为13.8，xmin为12.9，进而计算出相对极差R为6.8％，故符合合格要求。
(3)检测并评价校准品、质控品
(3.1)外观检测
先将冻干品溶解检测，经观察，发现溶解后的液体呈微黄色，符合要求；
(3.2)准确度检测
所述步骤(3.2)准确度检测中，用检测合格的校准品与试剂盒定标后，测定待测校准品，重复测定3次，分别计算测定结果分别为63.5、64.2、63.4，得出均值
Figure BDA00036337326300001116
为63.7，校准品标示值为62.6，按下式求出相对偏差(Bias)；
Figure BDA0003633732630000113
其相对偏差(Bias)或测量值与标示的偏差计算得出为1.76％，符合≤10.0％的合格要求；(3.3)均一性检测；所述步骤(3.3)均一性检测中，取10瓶待测校准品或质控品，每瓶测定1次，计算出各个数值校准品为65.5、63.2、63.8、65.9、63.0、64.5、66.4、65.3、63.2、65.6、质控品为35.1、30.7、30.0、31.7、35.0、35.6、34.1、31.8、30.6、30.1，分别计算测量值的均值
Figure BDA00036337326300001114
校准品为64.64、质控品为32.47和标准差(S1)校准品为1.20质控品为 2.13；再取其中1瓶，重复测定10次，分别计算测量值的均值
Figure BDA00036337326300001115
校准品为64.04、质控品为33.45和标准差(S2)校准品为0.70、质控品为1.53，按下式求出瓶间标准差(S瓶间) 和变异系数(CV瓶间)，当S1＜S2，令CV＝0；
Figure BDA0003633732630000114
最终计算出批内精密度(CV瓶间)校准品为0.97％、质控品为4.54％，符合合格要求(≤8.0％) 根据化学检测步骤、检测并评价校准品、质控品要求，利用公式对各项数据的计算和统计，并记录在检验原始记录表中，填写各项判定结果，本次检测结果符合要求。
最后应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (7)

1.一种腺苷酸脱氨酶(ADA)检测试剂盒的质量检测方法，其特征在于，所述质量检测步骤如下：
(1)物理检测
(1.1)检测试剂盒外观，检查试剂盒内封盖是否盖紧，无漏液；
(1.2)检查试剂盒内试剂澄清度及含量情况；
(2)化学检测
(2.1)试剂空白吸光度；
(2.2)分析灵敏度；
(2.3)准确度检测
(3)检测并评价校准品、质控品
(3.1)外观检测
(3.2)准确度检测
(3.3)均一性检测。
2.根据权利要求1所述的质量检测方法，所述步骤(1.2)中，利用同一无色光照条件照射试剂容器，检查试剂是否为无色澄清液体；所述含量采用量具测量，进一步地，所述的量具精度不低于0.5mL。
3.根据权利要求1或2所述的质量检测方法，所述步骤(2.1)中，以纯化水或蒸馏水为样本，在546nm下测定其反应混合液的吸光度值，检查其吸光度是否≤1.0000；所述试剂空白变化率的要求为：每分钟试剂空白吸光度的变化率(ΔA/min)≤0.0200。
4.根据权利要求1-3任一项的质量检测方法，所述步骤(2.2)中，当样品中ADA浓度为90U/L时，其吸光度变化值ΔA/min≥0.0200；如果样品浓度不是90U/L，可选择其他已知浓度的样品通过换算得出90U/L的近似吸光度值以便于计算。
5.根据权利要求1-4任一项的质量检测方法，所述步骤(2.3)准确度检测步骤如下：
(2.3.1)至少选取两个水平的定值质控品进行测定，按下式求出相对偏差(Bias％)。
Figure FDA0003633732620000011
式中：Bias％——相对偏差；
Figure FDA0003633732620000012
——样本测定结果均值；TV——质控样本靶值。
其相对偏差Bias％应≤10.0％；
(2.3.2)在人源血清样品中加入一定体积标准溶液或纯品进行测试，各样品重复测定3次，按下式求出回收率R(％)；
Figure FDA0003633732620000013
式中：R——回收率；V——加入标准溶液的体积；V0——血清样本的体积；c——血清样本加入标准溶液后的检测浓度；c0——血清样品的检测浓度；cs——标准溶液的浓度；所述回收率在90％-110％范围内；
(2.3.3)精密度测定：用同批试剂平行测定同一份质控样本10次，所述质控样本ADA≥20U/L，计算均值和标准差，按下式计算批内变异系数(CV批内)，其批内变异系数CV批内≤4.0％；
Figure FDA0003633732620000021
式中：
Figure FDA0003633732620000022
——样本测定结果均值；S——标准差；CV批内——批内变异系数。
(2.3.4)线性范围测定：
该试剂盒在4-250U/L浓度范围内，相关系数r≥0.990；样本浓度≤25U/L，绝对偏差≤5U/L；样本浓度＞25U/L，相对偏差≤10.0％；
在4-250U/L浓度范围内，取接近线性范围上限的高浓度样品和接近线性范围下限的低浓度样品，混合成至少5个稀释浓度样品(xi)，每个稀释浓度样品测试至少2次，分别求出测定结果的均值(yi)；以稀释浓度(xi)为自变量，以测定结果均值(yi)为因变量求出线性回归方程，按以下公式计算线性回归的相关系数(r)。将稀释浓度(xi)代入线性回归方程，计算yi的估计值以及yi与估计值的相对偏差或绝对偏差，取绝对值。
Figure FDA0003633732620000023
(2.3.5)批间差测定：用3个不同批号的试剂分别测试同一质控样本，所述质控样本浓度≥20U/L，每个批号重复测试3次；分别计算每批3次测定结果的均值
Figure FDA0003633732620000024
和3个批号测试结果的总均值
Figure FDA0003633732620000025
按下列公式求出三个批号试剂测定均值的相对极差(R)，所述相对极差(R)≤8.0％；
Figure FDA0003633732620000026
式中：xmax——
Figure FDA0003633732620000027
中的最大值，
xmin——
Figure FDA0003633732620000028
中的最小值。
6.根据权利要求5的质量检测方法，所述步骤(3.1)外观检测中，先将冻干品溶解检测，要求溶解后的液体呈微黄色；所述步骤(3.2)准确度检测中，用检测合格的校准品与试剂盒定标后，测定待测校准品，重复测定3次，分别计算测定结果的均值
Figure FDA0003633732620000029
按下式求出相对偏差(Bias)；
Figure FDA00036337326200000210
其相对偏差(Bias)或测量值与标示的偏差≤10.0％；所述步骤(3.3)均一性检测中，取10瓶待测校准品或质控品，每瓶测定1次，分别计算测量值的均值
Figure FDA00036337326200000211
和标准差(S1)；再取其中1瓶，重复测定10次，分别计算测量值的均值
Figure FDA00036337326200000212
和标准差(S2)，按下式求出瓶间标准差(S瓶间)和变异系数(CV瓶间)，当S1＜S2，令CV＝0；
Figure FDA00036337326200000213
其批内精密度(CV瓶间)≤8.0％。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的质量检测方法在腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒质量检测中的应用。
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