CN115161214B - 一种防控地下害虫的生物有机肥、制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种防控地下害虫的生物有机肥、制备方法和应用，涉及生物有机肥料领域，解决了现有技术中采用化学农药防控害虫，存在农药残留及环境污染的问题。该方法包括如下步骤：制备枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌粉，制备白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48孢子粉；制备油枯型有机肥；将枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌粉、白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48孢子粉与油枯型有机肥复配，制得防控地下害虫的生物有机肥；枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌粉中有效活菌数的量不小于1000亿/克，白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48孢子粉中白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48的有效活菌量不小于100亿/克。本发明的生物有机肥，既能防治地下害虫，同时也能使土壤有益微生物群落种群数量增，还可大大减少化学农药的施用量，减少环境污染，提高作物安全性。
Description
技术领域
本发明涉及生物有机肥料技术领域，尤其涉及一种防控地下害虫的生物有机肥、制备方法和应用。
背景技术
蛴螬是鞘翅目金龟甲总科幼虫的统称，同时也是世界上公认的地下害虫，可危害多种植物，是近几年来危害最重，给农业生产造成巨大损失的一类地下害虫。蛴螬终年生活在土壤中，主要危害麦类、玉米、薯类、豆类、花生等大田作物，同时对烟草的危害也不容小觑，蛴螬对各类作物的危害，主要表现为取食萌发的种子和嫩根、咬断麦苗根茎、直接咬食花生嫩果或马铃薯、甘薯、甜菜的块茎和块根等，不仅造成作物减产，而且伤口容易引起病菌的侵染。据调查统计，植物地下部分受害中86％是由蛴螬危害造成的。
蛴螬是危害烟草的一种重要地下害虫，在云南烟区发生严重，对云南烟草产业造成严重影响。小地老虎，又名土蚕，切根虫，经历卵，幼虫，蛹，成虫。年发生代数随各地气候不同而异，对农、林木幼苗危害很大，轻则造成缺苗断垄，重则毁种重播。对烟草的种植受到较大影响。
20世纪50、60年代，地下害虫防治主要用有机氯杀虫剂和有机磷杀虫剂，但这两种药剂毒性高，残留高，对人、畜不安全，现已被禁用。近些年，蛴螬化学防治的研究也越来越多，所用化学药剂主要有辛硫磷、甲基异柳磷、丁硫克百威、吡虫啉、毒死蜱、敌百虫以及生物农药印楝素和除虫菊素等。为配合幼虫的防治，金龟子成虫的防治也同样重要。成虫发生季节主要采用的防治药剂有氧乐果、敌百虫、毒死蜱、高效氯氰菊酯等。目前.化学防治仍然是一种广泛应用的防治方法，特别是在蛴螬大量发生而其他防治方法又不能立即奏效的情况下是非常有效的，化学防治能在短时间内将蛴螬的种群密度降低到经济允许水平以下。但由于蛴螬在地下危害，加之土壤的隔离作用，使得蛴螬对农药的使用方法、使用剂量和使用时期及残留都提出了很高的要求。
大量研究表明，随着化学农药的长期使用，农药残留及环境污染问题愈发严重，且长期使用化学农药会导致土壤中适宜烟株生长的微生物群落种群密度降低，影响土壤微生物群落的平衡，导致烟株的生长发育受到不同程度的影响，随着高毒化学农药的逐步禁用，防治蛴螬的高效药剂越来越少，且剂型单一，蛴螬的抗药性逐渐增强，因此，急需研发新的防治药剂。
生物防控及生态防控在近几年得到广泛的重视，生物防控主要是利用杀虫微生物菌剂侵染地下害虫，使之能够快速寄生于害虫身上，最后致死害虫的过程。考虑到环境因素、农药残留等一系列问题，防治蛴螬最理想的方法是生物防治。因此，急需研究开发新的防治地下害虫的微生物菌剂。
发明内容
本发明的目的是提出一种防控地下害虫的生物有机肥、制备方法和应用，解决了现有技术中采用化学农药防控害虫，存在农药残留及环境污染的技术问题。本发明优选技术方案所能产生的诸多技术效果详见下文阐述。
为实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明防控地下害虫的生物有机肥的制备方法，包括如下步骤：
制备枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌粉，制备白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48孢子粉；
通过发酵制备油枯型有机肥；
将制备的枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌粉、白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48孢子粉与油枯型有机肥复配，制得防控地下害虫的生物有机肥；
其中，枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌粉中有效活菌数的量不小于1000亿/克，白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48孢子粉中白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48的有效活菌量不小于100亿/克。
本发明的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，其编号为WSWFJ44，保藏登记号为CGMCC No.20144，保藏日期2020年06月28日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
本发明的白僵菌(Beauveria sp.)，其编号为WSWFJ49，保藏登记号为CGMCCNo.20213，保藏日期2020年06月28日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
本发明的绿僵菌(Metarhizium sp.)，其编号为WSWFJ48，保藏登记号为CGMCCNo.19926，保藏日期2020年06月28日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
根据一个优选实施方式，复配过程中，枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌粉、白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48孢子粉的重量比为2∶0.5∶0.5。
根据一个优选实施方式，枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌粉的制备过程包括如下步骤：
菌种活化：将﹣80℃下保存的枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌株在LB固体培养基上活化12h～16h，得活化的菌株；
种子液制备：用无菌接种环刮取一环活化的菌株接种到50ml LB液体培养基中，在温度为36.5℃-37.5℃、转速为160rpm/min条件下培养24h，得种子液；
发酵液制备：按照菌种、培养液体积比为1∶120的比例将所得的种子液接入到车间发酵料培养基中，在温度为36.5℃-37.5℃，转速为120rpm/min条件下培养24h-36h，得发酵液，即为枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌悬液，并且枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌悬液的有效活菌数为20.0×108cfu/g以上；
将所得发酵液离心后添加吸附保护剂，再将添加吸附保护剂的发酵液转入喷粉设备得到枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌粉，并且枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌粉中有效活菌数的量不小于1000亿/克。
根据一个优选实施方式，菌种活化过程中，LB固体培养基包括如下浓度的成分：细菌学蛋白胨10g/L、酵母提取粉5g/L、氯化钠10g/L、琼脂粉24g/L；种子液制备过程中，LB液体培养基包括如下浓度的成分：细菌学蛋白胨10g/L、酵母提取粉5g/L、氯化钠10g/L。
根据一个优选实施方式，发酵液制备过程中，发酵料培养基包括如下质量百分数的成分：黄豆粉1.0％-1.6％、蔗糖0.1％-0.5％、蛋白胨0.2％-0.6％、玉米粉0.2％-0.6％、碳酸钙0.3％-0.9％、鱼粉0.1％-0.3％、硫酸铵0.01％-0.08％、硫酸镁0.02％-0.05％、磷酸二氢钾0.01％-0.04％、磷酸氢二钾0.02％-0.05％、硫酸锰0.01％-0.04％、氢氧化钠0.01％-0.04％、氯化钠0.02％-0.03％、消泡剂0.5％-1.5％，余量为水，用盐酸及氢氧化钠调节pH至6.8-7.5。
根据一个优选实施方式，白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48孢子粉的制备过程包括如下步骤：
白僵菌WSWFJ49、绿僵菌WSWFJ48种子液的制备：将保存的白僵菌WSWFJ49、绿僵菌WSWFJ48分别活化于PDA固体培养基上，活化后分别接种至200mL PDA液体培养基中，置于温度28℃及转速180r/min的恒温摇床上培养72h，再将培养后的菌悬液按1％接种量接种于1000mL PDA液体培养基中，置于温度28℃及转速180r/min的恒温摇床上扩繁72h，制得白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48种子液；
白僵菌WSWFJ49、绿僵菌WSWFJ48发酵液的制备：在容积为1000L的发酵罐中加入600L专用发酵培养基，将白僵菌WSWFJ49、绿僵菌WSWFJ48种子液加入到发酵罐中，在通气量35m3/h、温度28℃及转速160r/min条件下发酵48h-72h，制得白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48的发酵液；
固体发酵：将白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48的发酵液按重量比为1∶10的比例添加到固体培养基上，加水调节发酵物料含水量至60％-80％，在搅拌机中混合均匀，混合后将发酵物料平铺至发酵池中，混合物料平铺高度为10cm-15cm，用黑色遮荫网覆盖发酵池顶部，在温度28℃-30℃及通气量5m3/h条件下发酵60h，60h后打开黑色遮荫网在30℃-35℃及通气量5m3/h条件下发酵36h，36h后将混合物料加入干燥桶中，在保持温度50℃-55℃下烘干，直至物料含水量降为10％-15％，烘干后粉碎，得到白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48的孢子粉，并且孢子粉中的有效活菌量不小于100亿/克。
根据一个优选实施方式，白僵菌WSWFJ49、绿僵菌WSWFJ48种子液制备过程中，PDA液体培养基包括如下浓度的成分：马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L；PDA固体培养基包括如下浓度的成分：马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂24g/L。
根据一个优选实施方式，白僵菌WSWFJ49、绿僵菌WSWFJ48发酵液制备过程中，专用发酵培养基包括如下浓度的成分：酵母膏3g/L-5g/L、蛋白胨3g/L-5g/L、玉米浆干粉8g/L-10g/L、玉米淀粉3g/L-5g/L、磷酸氢二钾0.2g/L-0.5g/L、磷酸二氢钾0.1g/L-0.3g/L、葡萄糖10g/L-15g/L及糖蜜粉1g/L-10g/L，调节PH至6.5-7.0；
固体发酵过程中，固体培养基包括如下重量份的组分：玉米粉50份L-100份、油枯300份L-400份、草炭300份L-400份、麦麸100份L-200份、稻壳100份L-200份、黄豆粉50份L-100份，加水调至含水量为60％-80％。
本发明防控地下害虫的生物有机肥，是采用本发明中任一项技术方案的制备方法制得的。
本发明中任一项技术方案防控地下害虫的生物有机肥的应用，在植物种植过程中，所述生物有机肥作为底肥施用。
本发明提供的防控地下害虫的生物有机肥、制备方法和应用至少具有如下有益技术效果：
本发明防控地下害虫的生物有机肥，是通过枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌粉、白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48孢子粉与油枯型有机肥复配制得的，一方面，本发明防控地下害虫的生物有机肥具有生防菌株，可有效侵染害虫，从而可对地下害虫进行有效防控，另一方面，本发明防控地下害虫的生物有机肥还具有油枯型有机肥，油枯型有机肥可诱导土壤微生物种群数量增加，从而使得本发明防控地下害虫的生物有机肥，既能防治地下害虫，同时也能使土壤有益微生物群落种群数量增，还可大大减少化学农药的施用量，减少环境污染，提高作物安全性。
本发明防控地下害虫的生物有机肥的应用，在植物种植过程中，将生物有机肥作为底肥施用，可防治地下害虫，同时也可使土壤有益微生物群落种群数量增，还可大大减少化学农药的施用量，减少环境污染，提高作物安全性。例如，将本发明防控地下害虫的生物有机肥用于烟草种植过程中，可以对烟草地下害虫蛴螬进行有效防控，能够在很大程度上减少化学农药的施用量，减少环境污染，提高作物安全性。
即本发明防控地下害虫的生物有机肥、制备方法和应用，解决了现有技术中采用化学农药防控害虫，存在农药残留及环境污染的技术问题。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
下面结合实施例1和2对本发明做进一步说明。
实施例1
本实施例对本发明中生防菌剂的筛选方法进行详细说明。
1、材料与方法
1.1、材料
生防菌剂：枯草芽孢杆菌WSWFJ44、白僵菌WSWFJ49、绿僵菌WSWFJ48。
供试虫体：蛴螬(采自云南省微生物发酵工程研究中心有限公司试验地)。
培养基：PDA培养基(马铃薯200g、葡萄糖20g、水1L)、LB液体培养基(酵母提取粉5g、细菌学蛋白胨10g、氯化钠5g、水1L)。
1.2、方法
1.2.1将供试生防杀虫菌剂活化后培养3-5天，制成菌悬液备用。
1.2.2采用浸虫法对地下害虫蛴螬进行室内生测试验，将蛴螬放入配制药剂中3-5秒后拿出放入培养皿内，每个培养皿放置10头蛴螬，每个处理共计3个重复。试验设置处理为：
a.枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌悬液原液处理；
b.白僵菌WSWFJ49菌悬液原液处理；
c.绿僵菌WSWFJ48菌悬液原液处理；
d.高效氯氰菊酯800倍处理；
e.枯草芽孢杆菌WSWFJ44、白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48按2∶0.5∶0.5混合的发酵液液处理；
f.清水处理(空白对照)。
1.2.3处理后1天、5天、7天、10天对培养皿内的蛴螬死亡率进行统计记录，按下述公式计算其死亡率。
2、结果分析
不同菌剂处理对蛴螬的平均死亡率统计结果如表1所示。由表1可知：处理a在第5天开始有明显对蛴螬致死的情况，其死亡率为36.67％；处理b则在第7天开始有致死作用，第7天的死亡率为70％；处理c在第5天对蛴螬有明显致死作用，其死亡率为40％；处理d在处理后1天开始有致死作用，1天时对蛴螬的死亡率为33.33％；处理e则在第5天时对蛴螬有明显致死作用，其死亡率为53.33％；而处理f空白对照则无明显死亡蛴螬。经过统计后发现在第10天时，除了处理f空白对照无蛴螬死完外，处理a的死亡率为80％，而其余处理均达到100％的死亡率，说明筛选得到的生防杀虫菌剂枯草芽孢杆菌WSWFJ44、白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48均对蛴螬有明显的致死作用。
表1不同菌剂处理对蛴螬的平均死亡率统计结果表
注：上述测量结果为3次重复计算所得死亡率平均值。
实施例2
本实施例对本发明中防控地下害虫的生物有机肥对烟草地下害虫蛴螬、小地老虎室外拮抗试验进行详细说明。
1、试验目的
为验证生防杀虫菌剂枯草芽孢杆菌WSWFJ44、白僵菌WSWFJ49、绿僵菌WSWFJ48与油枯型有机肥互配后得到的防控地下害虫的生物有机肥对地下害虫蛴螬、小地老虎的防治效果。
2、材料与方法
2.1、材料
供试有机肥：添加杀虫菌剂的油枯有机肥、普通有机肥。
供试对象：烟草地下害虫蛴螬、小地老虎。
供试品种：云烟97。
试验地点：曲靖市麒麟区越州镇马坊村和曲靖市沾益区大坡乡。
2.2、方法
试验前对两块试验地土壤中蛴螬的虫口密度进行了统计，主要是挖土取样调查，以5点取样，每点50cm*50cm(2500cm2)挖土深度一般以30cm为宜，并仔细统计所挖土样中的蛴螬数量并记录，结果如下：
表2试验地块土壤中蛴螬、小地老虎虫口密度调查结果表
| 试验点 | 试验地块土壤中虫口密度(头/m2) |
| 麒麟越州 | 1 |
| 沾益大坡 | 2 |
将供试生物有机肥及普通有机肥按当地施用量80kg/亩施用，同时设置不施肥处理作为对照。试验设置处理为：
A.施加加入生防菌剂的生物有机肥80kg/亩；
B.施加普通有机肥80kg/亩；
C.不施肥。
每个处理3次重复，每个小区面积100m2，大约150株烟，在烟草移栽前进行底肥施入，后期水肥管理一致。
调查方法，移栽后直至采烤前管理均一致，采烤后将对每个小区进行拔根调查，每个小区随机调查20株，并按照以下公式进行统计被害株率及防治效果。公式如下：
3、结果分析
3.1.生物有机肥对蛴螬曲靖市麒麟越州田间试验结果
根据表3中的数据统计结果可知：在曲靖市麒麟越州试验点上，施加加入生防杀虫菌剂的生物有机肥，在采烤前统计被害株率为3.33％，对地下害虫蛴螬及小地老虎的防治效果为87.5％；而施加普通有机肥处理组，被害株率为13.33％，且防治效果50％；而不施肥处理组，被害株率达到26.67％。说明施用生物有机肥对地下害虫蛴螬、小地老虎有明显的抑制作用，且施用普通有机肥对蛴螬、小地老虎也同样有抑制效果，但效果不如添加生防菌剂的生物有机肥的抑制效果。
表3麒麟越州生物有机肥对地下害虫蛴螬防治效果统计结果表
| 处理组 | 调查总株数/株 | 被害株数/株 | 被害株率/％ | 防治效果/％ |
| A | 60 | 2 | 3.33 | 87.50 |
| B | 60 | 8 | 13.33 | 50.00 |
| C | 60 | 16 | 26.67 | / |
3.2生物有机肥对蛴螬曲靖沾益大坡田间试验结果
根据表4中的数据统计结果可知：在曲靖市沾益大坡试验点上，施加加入生防杀虫菌剂的生物有机肥，在采烤前统计被害株率为5％，对地下害虫蛴螬及小地老虎的防治效果为80％；而施加普通有机肥处理组，被害株率为15％，且防治效果40％；而不施肥处理组，被害株率达到25％。说明施用生物有机肥对地下害虫蛴螬、小地老虎有明显的抑制作用，且施用普通有机肥对蛴螬、小地老虎也同样有抑制效果，但效果仅为添加生防菌剂的生物有机肥的一半。
表4沾益大坡生物有机肥对地下害虫蛴螬防治效果统计结果表
| 处理组 | 调查总株数/株 | 被害株数/株 | 被害株率/％ | 防治效果/％ |
| A | 60 | 3 | 5.00 | 80.00 |
| B | 60 | 9 | 15.00 | 40.00 |
| C | 60 | 15 | 25.00 | / |
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。
Claims (10)
1.一种防控地下害虫的生物有机肥的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
制备枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌粉，制备白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48孢子粉；
通过发酵制备油枯型有机肥；
将制备的枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌粉、白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48孢子粉与油枯型有机肥复配，制得防控地下害虫的生物有机肥；
其中，枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌粉中有效活菌数的量不小于1000亿/克，白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48孢子粉中白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48的有效活菌量不小于100亿/克；
所述枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）WSWFJ44的保藏登记号为CGMCC No.20144，所述白僵菌（Beauveria sp.）WSWFJ49的保藏登记号为CGMCC No.20213，所述绿僵菌（Metarhizium sp.）WSWFJ48的保藏登记号为CGMCC No.19926。
2.根据权利要求1所述的防控地下害虫的生物有机肥的制备方法，其特征在于，复配过程中，枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌粉、白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48孢子粉的重量比为2∶0.5∶0.5。
3.根据权利要求1或2所述的防控地下害虫的生物有机肥的制备方法，其特征在于，枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌粉的制备过程包括如下步骤：
菌种活化：将﹣80℃下保存的枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌株在LB固体培养基上活化12h～16h，得活化的菌株；
种子液制备：用无菌接种环刮取一环活化的菌株接种到50ml LB液体培养基中，在温度为36.5℃-37.5℃、转速为160rpm/min条件下培养24h，得种子液；
发酵液制备：按照菌种、培养液体积比为1∶120的比例将所得的种子液接入到车间发酵料培养基中，在温度为36.5℃-37.5℃，转速为120rpm/min条件下培养24h-36h，得发酵液，即为枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌悬液，并且枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌悬液的有效活菌数为20.0×108cfu/g以上；
将所得发酵液离心后添加吸附保护剂，再将添加吸附保护剂的发酵液转入喷粉设备得到枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌粉，并且枯草芽孢杆菌WSWFJ44菌粉中有效活菌数的量不小于1000亿/克。
4.根据权利要求3所述的防控地下害虫的生物有机肥的制备方法，其特征在于，菌种活化过程中，LB固体培养基包括如下浓度的成分：细菌学蛋白胨10g/L、酵母提取粉5g/L、氯化钠10g/L、琼脂粉24g/L；
种子液制备过程中，LB液体培养基包括如下浓度的成分：细菌学蛋白胨10g/L、酵母提取粉5g/L、氯化钠10g/L。
5.根据权利要求3所述的防控地下害虫的生物有机肥的制备方法，其特征在于，发酵液制备过程中，发酵料培养基包括如下质量百分数的成分：黄豆粉1.0%-1.6%、蔗糖0.1%-0.5%、蛋白胨0.2%-0.6%、玉米粉0.2%-0.6%、碳酸钙0.3%-0.9%、鱼粉0.1%-0.3%、硫酸铵0.01%-0.08%、硫酸镁0.02%-0.05%、磷酸二氢钾0.01%-0.04%、磷酸氢二钾0.02%-0.05%、硫酸锰0.01%-0.04%、氢氧化钠0.01%-0.04%、氯化钠0.02%-0.03%、消泡剂0.5%-1.5%，余量为水，用盐酸及氢氧化钠调节pH至6.8-7.5。
6.根据权利要求1或2所述的防控地下害虫的生物有机肥的制备方法，其特征在于，白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48孢子粉的制备过程包括如下步骤：
白僵菌WSWFJ49、绿僵菌WSWFJ48种子液的制备：将保存的白僵菌WSWFJ49、绿僵菌WSWFJ48分别活化于PDA固体培养基上，活化后分别接种至200mL PDA液体培养基中，置于温度28℃及转速180r/min的恒温摇床上培养72h，再将培养后的菌悬液按1%接种量接种于1000mL PDA液体培养基中，置于温度28℃及转速180r/min的恒温摇床上扩繁72h，制得白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48种子液；
白僵菌WSWFJ49、绿僵菌WSWFJ48发酵液的制备：在容积为1000L的发酵罐中加入600L专用发酵培养基，将白僵菌WSWFJ49、绿僵菌WSWFJ48种子液加入到发酵罐中，在通气量35m3/h、温度28℃及转速160r/min条件下发酵48h-72h，制得白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48的发酵液；
固体发酵：将白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48的发酵液按重量比为1∶10的比例添加到固体培养基上，加水调节发酵物料含水量至60%-80%，在搅拌机中混合均匀，混合后将发酵物料平铺至发酵池中，混合物料平铺高度为10cm-15cm，用黑色遮荫网覆盖发酵池顶部，在温度28℃-30℃及通气量5m3/h条件下发酵60h，60h后打开黑色遮荫网在30℃-35℃及通气量5m3/h条件下发酵36h，36h后将混合物料加入干燥桶中，在保持温度50℃-55℃下烘干，直至物料含水量降为10%-15%，烘干后粉碎，得到白僵菌WSWFJ49和绿僵菌WSWFJ48的孢子粉，并且孢子粉中的有效活菌量不小于100亿/克。
7.根据权利要求6所述的防控地下害虫的生物有机肥的制备方法，其特征在于，白僵菌WSWFJ49、绿僵菌WSWFJ48种子液制备过程中，PDA液体培养基包括如下浓度的成分：马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L；PDA固体培养基包括如下浓度的成分：马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂24g/L。
8.根据权利要求6所述的防控地下害虫的生物有机肥的制备方法，其特征在于，白僵菌WSWFJ49、绿僵菌WSWFJ48发酵液制备过程中，专用发酵培养基包括如下浓度的成分：酵母膏3g/L-5g/L、蛋白胨3g/L-5g/L、玉米浆干粉8g/L-10g/L、玉米淀粉3g/L-5g/L、磷酸氢二钾0.2g/L-0.5g/L、磷酸二氢钾0.1g/L-0.3g/L、葡萄糖10g/L-15g/L及糖蜜粉1g/L-10g/L，调节PH至6.5-7.0；
固体发酵过程中，固体培养基包括如下重量份的组分：玉米粉50份-100份、油枯300份-400份、草炭300份-400份、麦麸100份-200份、稻壳100份-200份、黄豆粉50份-100份，加水调至含水量为60%-80%。
9.一种防控地下害虫的生物有机肥，其特征在于，是采用权利要求1至8中任一项的制备方法制得的。
10.权利要求9所述的防控地下害虫的生物有机肥的应用，其特征在于，在植物种植过程中，所述生物有机肥作为底肥施用。
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