CN115068611A - ssc-miR-374b-3p在制备抗PDCoV增殖药物中的应用 - Google Patents
ssc-miR-374b-3p在制备抗PDCoV增殖药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115068611A CN115068611A CN202210730735.4A CN202210730735A CN115068611A CN 115068611 A CN115068611 A CN 115068611A CN 202210730735 A CN202210730735 A CN 202210730735A CN 115068611 A CN115068611 A CN 115068611A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mir
- ssc
- pdcov
- expression
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108091048441 Sus scrofa miR-374b stem-loop Proteins 0.000 title claims abstract description 63
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 title claims abstract description 31
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 23
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 44
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 19
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 20
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 20
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 60
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 25
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 abstract description 22
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 abstract description 21
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 abstract description 17
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 abstract description 17
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 10
- 238000001890 transfection Methods 0.000 abstract description 8
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 abstract description 6
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 abstract description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 abstract description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 2
- 241001361508 Porcine deltacoronavirus Species 0.000 description 44
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 19
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 16
- 239000012124 Opti-MEM Substances 0.000 description 15
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 15
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 12
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 7
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 7
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 6
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 6
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 5
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 5
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 5
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 4
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 3
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 3
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 3
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 3
- UPJVQRZPXLZUET-UHFFFAOYSA-N (10R)-3c,5t,8t-Trihydroxy-10r,13c-dimethyl-17c-((1R:4R)-1,4,5-trimethyl-hexen-(2t)-yl)-(9tH,14tH)-Delta6-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren Natural products OC12C=CC3(O)CC(O)CCC3(C)C2CCC2(C)C1CCC2C(C)C=CC(C)C(C)C UPJVQRZPXLZUET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108700013035 ISG15 Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 102100037505 Secretin Human genes 0.000 description 2
- 108010086019 Secretin Proteins 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- VXOZCESVZIRHCJ-KGHQQZOUSA-N ergosterol peroxide Chemical compound O1O[C@@]2(C=C3)[C@@H]4CC[C@H]([C@H](C)/C=C/[C@H](C)C(C)C)[C@@]4(C)CC[C@@H]2[C@]2(C)[C@@]13C[C@@H](O)CC2 VXOZCESVZIRHCJ-KGHQQZOUSA-N 0.000 description 2
- VXOZCESVZIRHCJ-KYQKSOQPSA-N ergosterol peroxide Natural products CC(C)[C@@H](C)C=C[C@H](C)[C@H]1CC[C@@H]2[C@]1(C)CC[C@@H]3[C@@]4(C)CC[C@H](O)C[C@@]45OO[C@@]23C=C5 VXOZCESVZIRHCJ-KYQKSOQPSA-N 0.000 description 2
- LESGHGUKCRHTCP-UHFFFAOYSA-N ergosteryl peroxide Natural products C1C(OO)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CC(C)C(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 LESGHGUKCRHTCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 2
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 229960002101 secretin Drugs 0.000 description 2
- OWMZNFCDEHGFEP-NFBCVYDUSA-N secretin human Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(N)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 OWMZNFCDEHGFEP-NFBCVYDUSA-N 0.000 description 2
- 239000005723 virus inoculator Substances 0.000 description 2
- OEANUJAFZLQYOD-CXAZCLJRSA-N (2r,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3r,4r,5r,6r)-5-acetamido-3-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-methoxyoxan-4-yl]oxy-4,5-dihydroxy-3-methoxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](OC)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](OC)[C@H](C(O)=O)O1 OEANUJAFZLQYOD-CXAZCLJRSA-N 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N (3beta,5beta,7alpha)-3,7-Dihydroxycholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WJUNQSYQHHIVFX-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-[2,4-dichloro-5-(2-pyrrolidin-1-ylethoxy)phenyl]-n-ethylthieno[2,3-d]pyrimidine-6-carboxamide Chemical compound N1=C(N)N=C2SC(C(=O)NCC)=CC2=C1C(C(=CC=1Cl)Cl)=CC=1OCCN1CCCC1 WJUNQSYQHHIVFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- INBGSXNNRGWLJU-ZHHJOTBYSA-N 25-hydroxycholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@@H](CCCC(C)(C)O)C)[C@@]1(C)CC2 INBGSXNNRGWLJU-ZHHJOTBYSA-N 0.000 description 1
- INBGSXNNRGWLJU-UHFFFAOYSA-N 25epsilon-Hydroxycholesterin Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCCC(C)(C)O)C)C1(C)CC2 INBGSXNNRGWLJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001447918 Baoris Species 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 208000005156 Dehydration Diseases 0.000 description 1
- 229920000045 Dermatan sulfate Polymers 0.000 description 1
- 102100037388 Gasdermin-D Human genes 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 1
- 101001069938 Griffithsia sp. (strain Q66D336) Griffithsin Proteins 0.000 description 1
- 101001026262 Homo sapiens Gasdermin-D Proteins 0.000 description 1
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N Lithocholsaeure Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- YJPIGAIKUZMOQA-UHFFFAOYSA-N Melatonin Natural products COC1=CC=C2N(C(C)=O)C=C(CCN)C2=C1 YJPIGAIKUZMOQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 1
- 241000711466 Murine hepatitis virus Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 241001135549 Porcine epidemic diarrhea virus Species 0.000 description 1
- 208000027954 Poultry disease Diseases 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 1
- 101710198474 Spike protein Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N chenodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N 0.000 description 1
- 229960001091 chenodeoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000741 diarrhetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000003481 heat shock protein 90 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003903 intestinal lesions Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N lithocholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N 0.000 description 1
- 229940124590 live attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940023012 live-attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229960003987 melatonin Drugs 0.000 description 1
- DRLFMBDRBRZALE-UHFFFAOYSA-N melatonin Chemical compound COC1=CC=C2NC=C(CCNC(C)=O)C2=C1 DRLFMBDRBRZALE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091055059 miR-30c stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091048101 miR-374b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 230000006676 mitochondrial damage Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical class [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- AYUNIORJHRXIBJ-TXHRRWQRSA-N tanespimycin Chemical compound N1C(=O)\C(C)=C\C=C/[C@H](OC)[C@@H](OC(N)=O)\C(C)=C\[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](OC)C[C@H](C)CC2=C(NCC=C)C(=O)C=C1C2=O AYUNIORJHRXIBJ-TXHRRWQRSA-N 0.000 description 1
- 229950007866 tanespimycin Drugs 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000007501 viral attachment Effects 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 description 1
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1131—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
- C12N2310/141—MicroRNAs, miRNAs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
- C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了ssc‑miR‑374b‑3p在制备抗PDCoV增殖药物中的应用。属于抗病毒药物技术领域。本发明将增加ssc‑miR‑374b‑3p表达的模拟物和降低ssc‑miR‑374b‑3p表达的抑制剂分别转染至猪小肠上皮细胞(IPEC‑J2)，转染后24h使用PDCoV感染细胞，感染病毒后12h以荧光定量PCR技术检测细胞中PDCoVM基因的表达量，发现PDCoVM基因的表达量分别显著减少和升高，表明ssc‑miR‑374b‑3p能够抑制PDCoV在IPEC‑J2细胞中的增殖。本发明为抗PDCoV增殖药物的制备提供了新的候选miRNA。
Description
技术领域
本发明涉及抗病毒药物技术领域，更具体的说是涉及ssc-miR-374b-3p在制备抗PDCoV增殖药物中的应用。
背景技术
猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种猪肠道致病性腹泻病原，可诱发猪出现水样腹泻、呕吐、脱水和死亡。该病毒已成为诱发猪腹泻病的主要病原体之一，对养猪业造成了巨大的经济损失。目前尚无商业化疫苗和特异性药物用于防治该病毒引发的猪腹泻病，迫切需要发展新的抗病毒策略。
目前研究者正在从研制抗病毒药物和疫苗靶标两个角度积极寻找抑制PDCoV复制的抗病毒分子。
从研发抗病毒药物角度探索的抗病毒分子多为化合物。罗丹宁衍生物LJ001对PDCoV在ST细胞中的复制具有有效的抑制能力，其能够限制病毒RNA和蛋白质的合成，并抑制该病毒的复制。胆固醇的氧化产物25-羟基胆固醇能够通过阻断PDCoV进入细胞进而抑制该病毒复制。胆汁酸鹅去氧胆酸和石胆酸通过诱导IFN-λ3和IFN刺激基因15(ISG15)的产生抑制PDCoV复制。麦角甾醇过氧化物(EP)在病毒附着、病毒入侵阶段对PDCoV的复制均具有抑制活性。此外，褪黑素、热休克蛋白90抑制剂17-AAG和VER-82576，均在PDCoV复制的早期阶段抑制该病毒的复制，凝集素GRFT能够与PDCoV表面的刺突蛋白结合，通过包裹病毒并阻止其进入细胞抑制该病毒复制，而消化道皮肤素D(GSDMD)通过促进IFN-β的非常规分泌抑制PDCoV复制。
从研发疫苗角度寻找抗病毒分子的报道集中于构建表达病毒基因的shRNA质粒、来自病毒基因组的减毒活病毒疫苗候选基因和病毒样颗粒(VLP)。基于PDCoV基因组M和N基因构建的shRNA能够抑制PDCoV在ST细胞中的复制，研究人员进而设计了一种针对N基因的双shRNA表达质粒，命名为pSil-double-shRNA-N1。NS6蛋白是PDCoV的一个重要毒力因子，为开发减毒活疫苗提供了潜在的候选基因。Zhang等人用绿色荧光蛋白(GFP)替换PDCoV全长感染性cDNA克隆的NS6基因，以生成重组病毒rPDCoV-ΔNS6-GFP。rPDCoV-ΔNS6-GFP在体外和体内均表现出病毒产量下降，并且rPDCoV-ΔNS6-GFP感染仔猪后几乎未观察到临床症状或肠道病变。含Qβ噬菌体外壳蛋白的VLP嵌合疫苗具有冠状病毒的抗原表位，该疫苗可以诱导小鼠体内产生对MHV、PEDV和PDCoV的中和抗体反应。
综上所述，有待从新的角度进一步探索抑制PDCoV复制的抗病毒分子及相关机制，以丰富用于该病毒疫苗和特异性药物研发的靶标分子种类。
microRNA(miRNA/miR)是非编码RNA家族的成员，其在转录后水平调控功能基因的表达，广泛参与多种生物学过程的调控。研究发现，miRNA能够通过调控宿主细胞天然免疫应答、细胞凋亡、线粒体损伤等途径实现对多种冠状病毒增殖的抑制作用，但抑制PDCoV增殖的抗病毒miRNA尚不明确。本发明另辟蹊径，从miRNA角度为PDCoV的抑制药物提供候选抗病毒分子。
申请人发现，猪miR-374b-3p(ssc-miR-374b-3p)能够调节PDCoV在猪小肠上皮细胞(Intestinal porcine epithelial cell line J2，IPEC-J2)中的增殖，本发明从新的角度为抗PDCoV增殖药物的制备提供了候选miRNA。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了ssc-miR-374b-3p在制备抗PDCoV增殖药物中的应用。
本发明将增加ssc-miR-374b-3p表达的模拟物(核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示)和降低ssc-miR-374b-3p表达的抑制剂(核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示)分别转染至猪小肠上皮细胞(Intestinal porcine epithelial cell line J2，IPEC-J2)，转染后24h使用PDCoV-TJ1毒株感染细胞，感染病毒后12h以荧光定量PCR技术检测细胞中PDCoV M基因的表达量，发现PDCoV M基因的表达量分别显著减少和升高，表明ssc-miR-374b-3p能够抑制PDCoV在IPEC-J2细胞中的增殖。本发明为抗PDCoV增殖药物的制备提供了候选miRNA。
CUUAUCAGGUUGUAUUAUCAUU；SEQ ID NO.1；
CUGGGAGAAGGCTGTTACTCT；SEQ ID NO.2。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
以ssc-miR-374b-3p为作用靶点在制备抗PDCoV增殖药物中的应用，所述ssc-miR-374b-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
CUUAUCAGGUUGUAUUAUCAUU；SEQ ID NO.1。
增加ssc-miR-374b-3p表达量的物质在制备抗PDCoV增殖药物中的应用；
所述ssc-miR-374b-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
CUUAUCAGGUUGUAUUAUCAUU；SEQ ID NO.1。
ssc-miR-374b-3p在制备抗PDCoV增殖药物中的应用；
所述ssc-miR-374b-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
CUUAUCAGGUUGUAUUAUCAUU；SEQ ID NO.1。
一种抗PDCoV增殖的药物，包括增加ssc-miR-374b-3p表达量的物质。
进一步的，所述增加ssc-miR-374b-3p表达量的物质的核苷酸序列如下：
CUUAUCAGGUUGUAUUAUCAUU；SEQ ID NO.1。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明取得的有益效果为：ssc-miR-374b-3p能够抑制PDCoV在猪小肠上皮细胞(Intestinal porcine epithelial cell lineJ2，IPEC-J2)中的增殖，本发明从新的角度为抗PDCoV增殖药物的制备提供了候选miRNA。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为本发明实施例1中PDCoV感染IPEC-J2细胞后降低ssc-miR-374b-3p的表达；
图2附图为本发明实施例2中模拟物增加ssc-miR-374b-3p在IPEC-J2细胞中的表达，其中*代表P<0.05；
图3附图为本发明实施例3中抑制剂降低ssc-miR-374b-3p在IPEC-J2细胞中的表达；
图4附图为本发明实施例4中增加ssc-miR-374b-3p的表达可以抑制PDCoV在IPEC-J2细胞中的增殖，其中**代表P<0.01；
图5附图为本发明实施例5中降低ssc-miR-374b-3p的表达可以促进PDCoV在IPEC-J2细胞中的增殖，其中*代表P<0.05。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
IPEC-J2细胞购自广州吉妮欧生物科技有限公司；
胎牛血清购自依科赛生物科技(太仓)有限公司；
高糖DMEM培养基购自Gibco公司；
PDCoV-TJ1毒株为天津市农业科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控创新团队分离并保存；(郑丽,李秀丽,鄢明华*,任卫科,张蕾,路超,田向学,韩伟.猪德尔塔冠状病毒TJ1株的分离鉴定及生物学特性分析[J].中国畜牧兽医(中文核心期刊).2018,45(1):219-224)；
riboSCRIPT Reverse Transcription Kit(500T)购自广州锐博生物技术有限公司；
Bulge-LoopTM miRNA qRT-PCR Starter Kit购自广州锐博生物技术有限公司；
Opti-MEM培养基购自Thermo Fisher Scientific公司；
Lipofectamine 3000 Reagent购自Thermo Fisher Scientific公司；
PrimeScriptTM RT reagent Kit(Perfect Real Time)购自宝日医生物技术(北京)有限公司；
TB
Premix Ex TaqTM II(Tli RNaseH Plus)购自宝日医生物技术(北京)有限公司；
未提及实验试剂、用品为常规实验试剂、用品，采购自市售渠道；
未提及的实验方法为常规实验方法，在此不再一一赘述。
实施例1
PDCoV感染IPEC-J2细胞后降低ssc-miR-374b-3p的表达
1.实验细胞培养：
将IPEC-J2细胞接种于6孔板，用含有10％体积浓度胎牛血清的高糖DMEM培养基在37℃、5％CO2条件下培养至80％汇合度的细胞单层。
2.病毒接种：
将PDCoV-TJ1毒株以MOI为1.0的剂量接种于IPEC-J2细胞(每孔1.6mL，含终体积浓度为1％胰液素)(接毒组)，同时设未接病毒的对照组，随后在37℃、5％CO2条件下进行培养。
3.总RNA提取与miRNA RT产物合成：
接种病毒后12h收集IPEC-J2细胞沉淀，采用TRIzol法提取总RNA，使用riboSCRIPTReverse Transcription Kit(500T)将总RNA反转录为miRNA RT产物(反转录时使用的ssc-miR-374b-3p茎环引物核苷酸序列为SEQ ID NO.3)，每10μL体系加入5μg总RNA；反转录程序为42℃60min，70℃10min。
GGTTGTGGTTGGTTGGTTTGTATACCACAACCAATGAT；SEQ ID NO.3。
4.荧光定量PCR：
以反转录得到的miRNA RT产物为荧光定量PCR的模板；将ssc-miR-374b-3p和内参基因U6的引物分别稀释为200nM，ssc-miR-374b-3p上游引物和下游引物核苷酸序列分别为SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5，U6上游引物和下游引物核苷酸序列分别为SEQ ID NO.6和SEQID NO.7，采用Bulge-LoopTM miRNA qRT-PCR Starter Kit并根据说明书配置体系和设定程序(退火温度设为60℃)；根据荧光定量PCR实验的Ct值，以U6为内参基因，用2-ΔΔCt公式计算出对照组与接毒组之间ssc-miR-374b-3p的表达量变化倍数。
AGGGGCTTATCAGGTTGTATT；SEQ ID NO.4；
GTTGTGGTTGGTTGGTTTGT；SEQ ID NO.5；
ATAGATCTAGGAGGACTCCAGGGAC；SEQ ID NO.6；
CTGAATTCGGGTCTTCTCAGAGG；SEQ ID NO.7。
结果如图1所示，图1结果表明，ssc-miR-374b-3p在PDCoV TJ1感染后12h的IPEC-J2细胞中表达量降低。
实施例2
增加ssc-miR-374b-3p表达的模拟物(核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示)增加ssc-miR-374b-3p在IPEC-J2细胞中的表达
1.实验细胞培养：
将IPEC-J2细胞接种于96孔板，用含有10％体积浓度胎牛血清的高糖DMEM培养基在37℃、5％CO2条件下培养至80％汇合度的细胞单层。
2.细胞转染实验：
将0.75μL终浓度为150nM的增加ssc-miR-374b-3p表达的模拟物和模拟物对照分别加入5μL Opti-MEM培养基中充分混匀，静置10min；将0.3μl Lipofectamine 3000Reagent加入5μL Opti-MEM培养基中充分混匀，静置10min；将稀释好的模拟物溶液、模拟物对照溶液分别与加入Opti-MEM的Lipofectamine 3000 Reagent充分混匀，静置15min；用Opti-MEM培养基润洗预先接种在96孔板的IPEC-J2细胞，接着将上述模拟物/模拟物对照和Lipofectamine 3000 Reagent的混合液加入各孔IPEC-J2细胞中，每孔90μL，轻轻摇晃后，放置37℃、5％CO2条件下的细胞培养箱培养，24h后收集IPEC-J2细胞沉淀。
3.总RNA提取与miRNA RT产物合成：
使用TRIzol法提取总RNA，采用riboSCRIPT Reverse Transcription Kit(500T)将总RNA反转录为miRNA RT产物，反转录时使用的ssc-miR-374b-3p茎环引物核苷酸序列为SEQ ID NO.3，每10μL体系加入5μg总RNA；反转录程序为42℃60min，70℃10min。
4.荧光定量PCR：
以反转录得到的miRNA RT产物为荧光定量PCR的模板；将ssc-miR-374b-3p和内参基因U6的引物分别稀释为200nM，ssc-miR-374b-3p上游引物和下游引物核苷酸序列分别为SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5，U6上游引物和下游引物核苷酸序列分别为SEQ ID NO.6和SEQID NO.7，采用Bulge-LoopTM miRNA qRT-PCR Starter Kit并根据说明书配置体系和设定程序(退火温度设为60℃)；根据荧光定量PCR实验的Ct值，以U6为内参基因，用2-ΔΔCt公式计算出模拟物组与模拟物对照组之间ssc-miR-30c-3p的表达量变化倍数。
结果如图2所示，图2表明，转染增加ssc-miR-374b-3p表达的模拟物后24h，IPEC-J2细胞中ssc-miR-374b-3p的表达量显著增加。
实施例3
降低ssc-miR-374b-3p表达的抑制剂(核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示)降低ssc-miR-374b-3p在IPEC-J2细胞中的表达
1.实验细胞培养：
将IPEC-J2细胞接种于96孔板，用含有10％体积浓度胎牛血清的高糖DMEM培养基在37℃、5％CO2条件下培养至80％汇合度的细胞单层。
2.细胞转染实验：
将0.75μL终浓度为150nM的降低ssc-miR-374b-3p表达的抑制剂和抑制剂对照分别加入5μL Opti-MEM培养基中充分混匀，静置10min；将0.3μl Lipofectamine 3000Reagent加入5μL Opti-MEM培养基中充分混匀，静置10min；将稀释好的抑制剂溶液和抑制剂对照溶液分别与加入Opti-MEM的Lipofectamine 3000 Reagent充分混匀，静置15min；用Opti-MEM培养基润洗预先接种在96孔板的IPEC-J2细胞，接着将抑制剂/抑制剂对照和Lipofectamine 3000 Reagent的混合液加入各孔IPEC-J2细胞中，每孔90μL，轻轻摇晃后，放置37℃、5％CO2条件下的细胞培养箱中培养，24h后收集IPEC-J2细胞沉淀。
3.总RNA提取与miRNA RT产物合成：
使用TRIzol法提取总RNA，采用riboSCRIPT Reverse Transcription Kit(500T)将总RNA反转录为miRNA RT产物，反转录时使用的ssc-miR-374b-3p茎环引物核苷酸序列为SEQ ID NO.3，每10μL体系加入5μg总RNA；反转录程序为42℃60min，70℃10min。
4.荧光定量PCR：
以反转录得到的miRNA RT产物为荧光定量PCR的模板；将ssc-miR-374b-3p和内参基因U6的引物分别稀释为200nM，ssc-miR-374b-3p上游引物和下游引物核苷酸序列分别为SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5，U6上游引物和下游引物核苷酸序列分别为SEQ ID NO.6和SEQID NO.7，采用Bulge-LoopTM miRNA qRT-PCR Starter Kit并根据说明书配置体系和设定程序(退火温度设为60℃)；根据荧光定量PCR实验的Ct值，以U6为内参基因，用2-ΔΔCt公式计算出对照组与接毒组之间ssc-miR-374b-3p的表达量变化倍数。
结果如图3所示，图3表明，转染降低ssc-miR-374b-3p表达的抑制剂后24h，IPEC-J2细胞中ssc-miR-374b-3p的表达量降低。
实施例4
增加ssc-miR-374b-3p的表达抑制PDCoV在IPEC-J2细胞中的增殖
1.实验细胞培养：
将IPEC-J2细胞接种于96孔板，用含有10％体积浓度胎牛血清的高糖DMEM培养基在37℃、5％CO2条件下培养至80％汇合度的细胞单层。
2.细胞转染与接毒实验：
将0.75μL终浓度为150nM的增加ssc-miR-374b-3p表达的模拟物(核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示)和模拟物对照分别加入5μL Opti-MEM培养基中充分混匀，静置10min；将0.3μl Lipofectamine 3000 Reagent加入5μL Opti-MEM培养基中充分混匀，静置10min；将稀释好的模拟物溶液、模拟物对照溶液分别与加入Opti-MEM的Lipofectamine 3000Reagent充分混匀，静置15min；用Opti-MEM培养基润洗预先接种在96孔板的IPEC-J2细胞，接着将上述模拟物/模拟物对照和Lipofectamine 3000 Reagent的混合液加入各孔细胞中，每孔90μL，轻轻摇晃后，放置37℃、5％CO2条件下的细胞培养箱培养，24h后将PDCoV-TJ1毒株以MOI为1.0的剂量接种于IPEC-J2细胞(每孔100μL，含终体积浓度为1％的胰液素)，随后在37℃、5％CO2条件下进行培养，接毒后12h收获IPEC-J2细胞沉淀。
3.总RNA提取与cDNA产物合成：
使用TRIzol法提取总RNA，PrimeScriptTM RT reagent Kit(Perfect Real Time)将总RNA反转录为cDNA，每20μL体系加入1μg总RNA；反转录程序为30℃10min，42℃1h，99℃5min。
4.荧光定量PCR：
以反转录得到的cDNA产物为荧光定量PCR的模板；将PDCoV M基因和内参基因GAPDH的引物分别稀释为10μM，PDCoV M基因上游引物和下游引物核苷酸序列分别为SEQ IDNO.8和SEQ ID NO.9，GAPDH上游引物和下游引物核苷酸序列分别为SEQ ID NO.10和SEQ IDNO.11，根据TB
Premix Ex TaqTM II(Tli RNaseH Plus)说明书配置体系和设定程序(退火温度设为59℃)，使用该试剂盒完成荧光定量PCR试验，根据荧光定量PCR实验的Ct值，以GAPDH为内参基因，用2-ΔΔCt公式计算出对照组与接毒组之间PDCoV M基因的表达量变化倍数。
CGTGTGATCTATGTTATTAAAC；SEQ ID NO.8；
CAGGATATGAAGGTCAGTA；SEQ ID NO.9；
AGGAGTAAGAGCCCCTGGA；SEQ ID NO.10；
TCTGGGATGGAAACTGGAA；SEQ ID NO.11。
结果如图4所示，图4表明，在增加ssc-miR-374b-3p表达量的IPEC-J2细胞中，PDCoV M基因的表达量显著下降，表明PDCoV的增殖水平显著减少。提示增加ssc-miR-374b-3p的表达抑制PDCoV在IPEC-J2细胞中的增殖。
实施例5
降低ssc-miR-374b-3p的表达促进PDCoV在IPEC-J2细胞中的增殖
1.实验细胞培养：
将IPEC-J2细胞接种于96孔板，用含有10％体积浓度胎牛血清的高糖DMEM培养基在37℃、5％CO2条件下培养至80％汇合度的细胞单层。
2.细胞转染与接毒实验：
将0.75μL终浓度为150nM的降低ssc-miR-374b-3p表达的抑制剂(核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示)和抑制剂对照分别加入5μL Opti-MEM培养基中充分混匀，静置10min；将0.3μl Lipofectamine 3000Reagent加入5μL Opti-MEM培养基中充分混匀，静置10min；将稀释好的抑制剂溶液、抑制剂对照溶液分别与加入Opti-MEM的Lipofectamine 3000Reagent充分混匀，静置15min；用Opti-MEM培养基润洗预先接种在96孔板的IPEC-J2细胞，接着将上述抑制剂/抑制剂对照和Lipofectamine 3000 Reagent的混合液加入各孔细胞中，每孔90μL，轻轻摇晃后，放置37℃、5％CO2条件下的细胞培养箱培养，24h后将PDCoV-TJ1毒株以MOI为1.0的剂量接种于IPEC-J2细胞(每孔100μL，含终体积浓度为1％胰液素)，随后在37℃、5％CO2条件下进行培养，接毒后12h收获IPEC-J2细胞沉淀。
3.总RNA提取与cDNA产物合成：
使用TRIzol法提取总RNA，采用PrimeScriptTM RT reagent Kit(Perfect RealTime)将总RNA反转录为cDNA，每20μL体系加入1μg总RNA；反转录程序为30℃10min，42℃1h，99℃5min。
4.荧光定量PCR：
以反转录得到的cDNA产物为荧光定量PCR的模板；将PDCoV M基因和内参基因GAPDH的引物分别稀释为10μM，PDCoV M基因上游引物和下游引物核苷酸序列分别为SEQ IDNO.8和SEQ ID NO.9，GAPDH上游引物和下游引物核苷酸序列分别为SEQ ID NO.10和SEQ IDNO.11，根据TB
Premix Ex TaqTM II(Tli RNaseH Plus)说明书配置体系和设定程序(退火温度设为59℃)，使用该试剂盒完成荧光定量PCR试验，根据荧光定量PCR实验的Ct值，以GAPDH为内参基因，用2-ΔΔCt公式计算出对照组与接毒组之间PDCoV M基因的表达量变化倍数。
结果如图5所示，图5表明，在抑制ssc-miR-374b-3p表达的IPEC-J2细胞中，PDCoVM基因的表达量显著上升，表明PDCoV的增殖水平显著升高。提示抑制ssc-miR-374b-3p的表达促进PDCoV在IPEC-J2细胞中的增殖。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
序列表
<110> 天津市农业科学院
<120> ssc-miR-374b-3p在制备抗PDCoV增殖药物中的应用
<160> 11
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
cuuaucaggu uguauuauca uu 22
<210> 2
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
cugggagaag gctgttactc t 21
<210> 3
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ggttgtggtt ggttggtttg tataccacaa ccaatgat 38
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
aggggcttat caggttgtat t 21
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
gttgtggttg gttggtttgt 20
<210> 6
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
atagatctag gaggactcca gggac 25
<210> 7
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
ctgaattcgg gtcttctcag agg 23
<210> 8
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
cgtgtgatct atgttattaa ac 22
<210> 9
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
caggatatga aggtcagta 19
<210> 10
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
aggagtaaga gcccctgga 19
<210> 11
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
tctgggatgg aaactggaa 19
Claims (5)
1.以ssc-miR-374b-3p为作用靶点在制备抗PDCoV增殖药物中的应用，所述ssc-miR-374b-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
CUUAUCAGGUUGUAUUAUCAUU；SEQ ID NO.1。
2.增加ssc-miR-374b-3p表达量的物质在制备抗PDCoV增殖药物中的应用；
所述ssc-miR-374b-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
CUUAUCAGGUUGUAUUAUCAUU；SEQ ID NO.1。
3.ssc-miR-374b-3p在制备抗PDCoV增殖药物中的应用；
所述ssc-miR-374b-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
CUUAUCAGGUUGUAUUAUCAUU；SEQ ID NO.1。
4.一种抗PDCoV增殖的药物，其特征在于，包括增加ssc-miR-374b-3p表达量的物质。
5.如权利要求4所述的药物，其特征在于，所述增加ssc-miR-374b-3p表达量的物质的核苷酸序列如下：
CUUAUCAGGUUGUAUUAUCAUU；SEQ ID NO.1。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210730735.4A CN115068611B (zh) | 2022-06-24 | 2022-06-24 | ssc-miR-374b-3p在制备抗PDCoV增殖药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210730735.4A CN115068611B (zh) | 2022-06-24 | 2022-06-24 | ssc-miR-374b-3p在制备抗PDCoV增殖药物中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115068611A true CN115068611A (zh) | 2022-09-20 |
| CN115068611B CN115068611B (zh) | 2023-04-18 |
Family
ID=83255008
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210730735.4A Active CN115068611B (zh) | 2022-06-24 | 2022-06-24 | ssc-miR-374b-3p在制备抗PDCoV增殖药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115068611B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114990159A (zh) * | 2022-05-18 | 2022-09-02 | 昆明理工大学 | 一种micorRNA206抑制HCV增殖的建立方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102600482A (zh) * | 2012-03-26 | 2012-07-25 | 南京农业大学 | ssc- miR-374b-5p 在制备减少脂肪沉积和/或抗肥胖相关性疾病的药物中的应用 |
| CN109689027A (zh) * | 2016-06-29 | 2019-04-26 | 奥德纳米有限公司 | 甘油三酯耳用制剂及其用途 |
| AU2020101084A4 (en) * | 2019-12-05 | 2020-07-23 | Institute Of Animal Science And Veterinary Medicine, Hubei Academy Of Agricultural Sciences | A long non-coding RNA porcine Lnc-000649 and its application |
| CN111840310A (zh) * | 2020-07-27 | 2020-10-30 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | ssc-miR-151-3p在制备调节猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的药物中的应用 |
| CN111904973A (zh) * | 2020-07-27 | 2020-11-10 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | ssc-miR-122在制备调节猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的药物中的应用 |
-
2022
- 2022-06-24 CN CN202210730735.4A patent/CN115068611B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102600482A (zh) * | 2012-03-26 | 2012-07-25 | 南京农业大学 | ssc- miR-374b-5p 在制备减少脂肪沉积和/或抗肥胖相关性疾病的药物中的应用 |
| CN109689027A (zh) * | 2016-06-29 | 2019-04-26 | 奥德纳米有限公司 | 甘油三酯耳用制剂及其用途 |
| AU2020101084A4 (en) * | 2019-12-05 | 2020-07-23 | Institute Of Animal Science And Veterinary Medicine, Hubei Academy Of Agricultural Sciences | A long non-coding RNA porcine Lnc-000649 and its application |
| CN111840310A (zh) * | 2020-07-27 | 2020-10-30 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | ssc-miR-151-3p在制备调节猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的药物中的应用 |
| CN111904973A (zh) * | 2020-07-27 | 2020-11-10 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | ssc-miR-122在制备调节猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的药物中的应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 朱静静;周晓龙;汪涵;李向臣;赵阿勇;杨松柏;: "靶向猪内质网应激通路的microRNAs预测与验证" * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114990159A (zh) * | 2022-05-18 | 2022-09-02 | 昆明理工大学 | 一种micorRNA206抑制HCV增殖的建立方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115068611B (zh) | 2023-04-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102131526B (zh) | 载体 | |
| CN115161321B (zh) | ssc-miR-30c-3p在制备抗PDCoV增殖药物中的应用 | |
| CN115068611B (zh) | ssc-miR-374b-3p在制备抗PDCoV增殖药物中的应用 | |
| CN113416768B (zh) | Prkra基因作为靶点在抑制小反刍兽疫病毒复制中的应用 | |
| CN101880677B (zh) | 针对2009新甲型流感病毒多聚酶基因和核蛋白基因的siRNA序列及其应用 | |
| CN110684841A (zh) | let-7b和rSjp40在制备预防或治疗血吸虫感染肝纤维化药物方面的应用 | |
| US7776569B2 (en) | Virally-encoded RNAs as substrates, inhibitors and delivery vehicles for RNAi | |
| CN108498794B (zh) | 一种防治新型鸭呼肠孤病毒的灭活疫苗及其制备方法 | |
| CN117281824A (zh) | Trim基因的过表达剂在制备抑制猪塞内卡病毒复制的产品中的应用 | |
| WO2015085903A1 (zh) | 体内感染微生物、寄生微生物、共生微生物的非编码性rna及其鉴定和应用 | |
| CN105586344B (zh) | 抑制流感病毒相关基因的siRNA及其应用 | |
| CN101906417B (zh) | 针对乙肝病毒的shRNA及携带其的重组腺相关病毒基因治疗载体 | |
| CN110964851B (zh) | 组蛋白修饰酶基因setd8在抗dna病毒中的应用 | |
| CN110592085B (zh) | 一种h9n2亚型禽流感病毒抑制物及其应用 | |
| KR20220164524A (ko) | 태반추출물 유래 마이크로 rna를 포함하는 항바이러스 조성물 | |
| CN100365122C (zh) | 针对乙型流感病毒多聚酶基因的siRNA序列及其应用 | |
| Liu et al. | Construction and Efficacy of recombinant Newcastle disease virus co-expressing VP2 and VP3 proteins of very virulent infectious bursal disease virus | |
| CN108404116A (zh) | 干扰素诱导跨膜蛋白1在制备抗鸭病毒药物中的应用 | |
| CN119162308A (zh) | ssc-miR-148a-5p在制备抗PDCoV增殖药物和疫苗中的应用 | |
| CN102703392A (zh) | 整合O型口蹄疫病毒shRNA转基因克隆猪的制备方法 | |
| CN119552863A (zh) | LOC106509199 siRNA在制备抗PDCoV增殖药物和疫苗中的应用 | |
| CN113038955B (zh) | 用于抑制乙型肝炎病毒复制的组合物 | |
| CN114457072A (zh) | 一种具有抗病毒活性的多核苷酸及其用途 | |
| CN118717993A (zh) | Rasa2基因/蛋白作为靶点在筛选预防或治疗塞内卡病毒感染的药物中的用途 | |
| CN116064511A (zh) | 一种抑制鲤疱疹病毒ii型立即早期基因orf121的rna干扰序列及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |