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CN114929738A - 抗nampt抗体及其用途 - Google Patents

抗nampt抗体及其用途 Download PDF

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CN114929738A
CN114929738A CN202080069890.5A CN202080069890A CN114929738A CN 114929738 A CN114929738 A CN 114929738A CN 202080069890 A CN202080069890 A CN 202080069890A CN 114929738 A CN114929738 A CN 114929738A
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J·G·N·加西亚
D·麦卡恩
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Scuba Therapy Co
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Abstract

描述了抗烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)抗体，或其抗原结合片段，以及用于治疗患有(NAMPT)相关的局部和/或全身性炎性障碍的受试者的方法。

Description

抗NAMPT抗体及其用途
联邦资助的研究或开发
本发明是在由美国国立卫生研究院(NIH)依据授权号R41 HL110707 STTR和R42HL152888的美国政府支持下完成的。美国政府对本发明享有一定的权利。
相关申请
本申请要求于2019年8月7日提交的美国临时申请No.62/883,952的优先权。前述优先权申请的全部内容通过引用并入本文。
序列表
本申请包含已以ASCII格式电子提交的序列表，并在此通过引用整体并入。创建于2020年7月1目的所述ASCII副本命名为A105818_1020WO_SL.txt，且大小为53,767字节。
背景技术
烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)基因编码一种催化烟酰胺与5-磷酸核糖基-1-焦磷酸盐缩合以产生烟酰胺单核苷酸的蛋白质。该蛋白质属于烟酸磷酸核糖基转移酶(NAPRTase)家族，且认为其参与许多重要的生物过程，包括新陈代谢、应激反应和衰老。
烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)作为胞内NAMPT和胞外NAMPT(eNAMPT)蛋白两者存在。eNAMPT被分泌到血液中，并作为细胞因子/酶(细胞致活酶(cytozyme))发挥作用，其通过Toll样受体4(TLR4)的连接激活NF-κB信号传导，进一步用作炎性肺障碍(如急性呼吸窘迫综合征)的生物标志物。
发明内容
本文提供了抗NAMPT抗体，包括可用于治疗目的的人源化抗体。目前已知的用于临床治疗急性和慢性炎性肺障碍(例如，ARDS、VILI)的疗法仅仅是支持性的。因此，本领域对降低炎性障碍的发病率和死亡率并在患有这些障碍的患者，特别是重症患者中观察到的发病率和死亡率有效的预防剂和治疗剂的需求未得到满足。
在第一个方面中，本发明提供了一种分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性地结合人烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)，所述抗体或其抗原结合片段包含：(i)重链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域的区域；具有如SEQ ID NO:4或29所示氨基酸序列的CDR2结构域；和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)轻链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:6或11所示氨基酸序列的CDR1结构域；具有如SEQ ID NO:7、12、14、33、35或37所示氨基酸序列的CDR2结构域；和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
在上述方面的一些实施方式中，分离的抗体或其抗原结合片段的重链可变区包含：(a)具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；或(b)具有如SEQID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:29所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域。
在上述方面的一些实施方式中，分离的抗体或其抗原结合片段的轻链可变区包含：(a)具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；(b)具有如SEQID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:12所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；(c)具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:14所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；(d)具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:33所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；(e)具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQID NO:35所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；(f)具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:37所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；(g)具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；(h)具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:12所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；(i)具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域；具有如SEQ ID NO:14所示氨基酸序列的CDR2结构域；和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；(j)具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域；具有如SEQ ID NO:33所示氨基酸序列的CDR2结构域；和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；(k)具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域；具有如SEQ ID NO:35所示氨基酸序列的CDR2结构域；和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；或(l)具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域；具有如SEQ ID NO:37所示氨基酸序列的CDR2结构域；和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
在另一个方面中，本发明提供了分离的抗体，或其抗原结合片段，其特异性地结合人NAMPT，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和轻链可变区，其具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；(b)重链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和轻链可变区，其具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:12所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ IDNO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；(c)重链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ IDNO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和轻链可变区，其具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:14所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ IDNO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；(d)重链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:29所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和轻链可变区，其具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:14所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ IDNO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；(e)重链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:29所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和轻链可变区，其具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:33所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ IDNO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；(f)重链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:29所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和轻链可变区，其具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:35所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ IDNO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；(g)重链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:29所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和轻链可变区，其具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:37所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ IDNO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；(h)重链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ IDNO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和轻链可变区，其具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:33所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ IDNO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；(i)重链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ IDNO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和轻链可变区，其具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:35所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ IDNO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；或(j)重链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和轻链可变区，其具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:37所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ IDNO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
在上述任一方面的一些实施方式中，分离的抗体，或其抗原结合片段是人源化的。
在上述任一方面的一些实施方式中，分离的抗体或其抗原结合片段包含具有如SEQ ID NO:2、10、13、30、31、32、34或36所示氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方式中，分离的抗体，或其抗原结合片段包含具有如SEQ ID NO:1、9、15、16或28所示氨基酸序列的重链可变区。
在另一个方面中，本发明的特征在于分离的抗体，或其抗原结合片段，其特异性地结合人NAMPT，所述抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含含有如SEQ IDNO:15所示的氨基酸序列的可变区，所述轻链包含含有如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列的可变区。
在不同的方面中，本发明提供了分离的抗体，或其抗原结合片段，其特异性地结合人NAMPT，所述抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含含有如SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列的可变区，所述轻链包含含有如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列的可变区。
在另一个方面中，本发明的特征在于分离的抗体，或其抗原结合片段，其特异性地结合人NAMPT，所述抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含如表17中所述的可变区，所述轻链包含如表17中所述的可变区。
在再另一个方面中，本发明的特征在于分离的抗体，或其抗原结合片段，其特异性地结合人NAMPT，所述抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含如表17中所述的重链CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链包含如表17中所述的轻链CDR1、CDR2和CDR3。
在不同的方面中，本发明提供了分离的抗NAMPT抗体，其包含抗体AL-303的重链可变区和轻链可变区。
在另一个方面中，本发明的特征在于分离的抗NAMPT抗体，其包含抗体AL-310的重链可变区和轻链可变区。
在再另一个方面中，本发明的特征在于分离的人源化抗NAMPT抗体，其包含源自小鼠抗体AL-303或抗体AL-310的人源化重链可变区和源自小鼠抗体AL-303或抗体AL-310的人源化轻链可变区。
在不同的方面中，本发明的特征在于以同二聚体构象特异性结合人NAMPT的分离的抗NAMPT抗体，其中抗体结合人NAMPT上的表位，包括：(a)人NAMPT上的表位，其包含SEQID NO:60的氨基酸残基17-44中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基117-127中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基162-170中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基242-261中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基262-273中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基289-305中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基332-342中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基374-389中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基418-425中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基453-466中的至少一个氨基酸；和SEQ ID NO:60的氨基酸残基408-416中的至少一个氨基酸；或(b)人NAMPT上的表位，其包含SEQ ID NO:60的氨基酸残基29-51中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基61-72中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基156-170中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基216-234中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基316-331中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基332-342中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基373-389中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基417-431中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基454-469中的至少一个氨基酸；和SEQ ID NO:60的氨基酸残基470-478中的至少一个氨基酸；
在上述任一方面的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含Fc结构域。
在上述任一方面的一些实施方式中，分离的抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体。
在上述任一方面的一些实施方式中，分离的抗体或其抗原结合片段是IgG。在一些实施方式中，分离的抗体或其抗原结合片段是IgG1。在一些实施方式中，分离的抗体或其抗原结合片段是IgG4。
在一些实施方式中，本发明包括编码本文所述的任一分离的抗体或其抗原结合片段的核酸、包含该核酸的载体和/或包含该核酸或载体的宿主细胞。
在某些实施方式中，本发明提供了包含本文所述的任一分离的抗体或其抗原结合片段和药学上可接受载体的药物组合物。
在一些实施方式中，本发明包括通过将有效量的本文所述的任一分离的抗体或其抗原结合片段施用于受试者来治疗需要的受试者中与有害的NAMPT活性相关的疾病的方法。
本文的特征还在于治疗患有炎性病症的受试者的方法，所述方法包括将有效量的本文所述的分离的抗体或抗原结合片段施用于受试者。在一些实施方式中，炎性病症是肺纤维化(IPF)、肺动脉高压、急性肺损伤(ALI)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、呼吸机引起的肺损伤(VILI)、ARDS/VILI引起的ALI、外伤引起的急性肺损伤(TIALI)和脑损伤，或放射诱导的肺损伤(例如，由与癌症治疗相关的放射引起的放射诱导的肺损伤)。
在一些实施方式中，本发明的特征在于用于治疗需要的受试者中的前列腺癌(PCa)的方法，所述方法包括将有效量的本文所述的任一分离的抗体或抗原结合片段施用于受试者。
在一些实施方式中，受试者患有复发性PCa。在一些实施方式中，受试者处于发展转移性PCa的风险中。在某些实施方式中，PCa对雄激素剥夺疗法(ADT)是抗性的。在一些实施方式中，该方法进一步包括给受试者施用ADT。
附图说明
图1是描绘了通过鼠抗NAMPT抗体AL-303、AL-304、AL-305、AL-309和AL-310检测人和小鼠NAMPT的蛋白质印迹测定。
图2是描绘了鼠抗NAMPT抗体AL-303、AL-304、AL-305、AL-309和AL-310mAb降低hNAMPT诱导的NFκB磷酸化的能力的蛋白质印迹测定。
图3是用于体内研究的实验方案的示意图，所述体内研究用于评估鼠抗NAMPT抗体AL-303、AL-304和AL-305对NAMPT诱导的鼠肺损伤的作用。
图4是鼠抗NAMPT抗体AL-303、AL-304和AL-305对NAMPT诱导的鼠肺损伤的作用的示意图。图4A是显示了鼠抗NAMPT抗体对NAMPT诱导的支气管肺泡灌洗液(BAL)蛋白质水平的作用的图，和图4B是显示了鼠抗NAMPT抗体对NAMPT诱导的表达BAL的多形核中性粒细胞(PMN)计数的作用的图(n＝3-6只小鼠，*P＜0.05)。
图5是用于体内研究的实验方案的示意图，所述体内研究用于评估鼠抗NAMPT抗体AL-310对LPS诱导的鼠肺损伤的作用。
图6是显示了鼠抗NAMPT抗体AL-310对LPS诱导的BAL蛋白质水平的作用的图。
图7A-7B是人源化1076和1093抗hNAMPT抗体的作用的图形表示。图7A是人源化1076和1093抗hNAMPT抗体对hNAMPT诱导的NFκB磷酸化的作用的图形表示。图7B是人源化1076和1093抗hNAMPT抗体对hNAMPT诱导的内皮细胞(EC)屏障完整性下降的作用的图形表示。
图8A-8D描绘了人源化1076和1093抗hNAMPT抗体对小鼠和大鼠的肺损伤模型的作用。图8A是小鼠肺损伤模型中1076抗hNAMPT抗体V-1076、N-1076、K-1076和P-1076对BAL蛋白质水平(图8A，左图)和BAL PMN计数(图8A，右图)的作用的图形表示。图8B是小鼠肺损伤模型中1093抗hNAMPT抗体SS-1093、CC-1093、XX-1093和UU-1093对BAL蛋白质水平(图8B，左图)和BAL PMN计数(图8B，右图)的作用的图形表示。图8C是大鼠肺损伤模型中1076抗hNAMPT抗体P-1076对BAL蛋白质水平(图8C，左图)和BAL PMN计数(图8C，右图)的作用的图形表示。图8D描绘了H&E染色的显微照片，该照片显示了小鼠肺损伤模型中1093抗hNAMPT抗体UU-1093对细胞浸润和水肿的作用。
图9A-9D显示了针对正常、最小侵袭性和高度侵袭性的前列腺癌(PCa)中的NAMPT的免疫组织化学(IHC)染色。图9A是显示了正常前列腺组织中极低的NAMPT表达的显微照片。图9B是显示了局限于腺体的前列腺癌中显著增加中等的NAMPT表达的显微照片。图9C是显示了三种具有平滑肌包膜穿透和侵入前列腺周围脂肪组织中的独立前列腺腺癌中的肿瘤细胞内的强NAMPT表达的显微照片。图9D是显示了26名具有器官局限(n＝12)和包膜浸润性疾病(n＝14)的PCa患者中的NAMPT表达的累积分析的图。
图10A-10D描绘了来自急性和亚急性放射后鼠和人组织的分析结果。图10A提供了H&E染色的显微照片，该照片显示了在放射暴露后1周(图10A，下图)和暴露于单剂量的胸部放射前(图10A，上图)鼠肺组织的炎症和损伤的证据。图10B提供了IHC染色的照片，显示了在放射暴露后1周(图10B，下图)和暴露于放射前(图10B，上图)鼠肺组织中的NAMPT表达。图10C是显微照片的高倍放大图像，显示了肺泡巨噬细胞(长箭头)和肺细胞(短箭头)的NAMPT表达。图10D描绘了显微照片，该照片显示了暴露于8Gy放射24hr(“照射的”)(图10D，下图)或未暴露于放射(“未照射的”)(图10D，上图)的正常、术后人扁桃体上皮组织中的NAMPT表达。
图11A-11B描绘了来自人DU-145PCa细胞通过人平滑肌细胞的迁移的体外测定的结果。图11A是显示了在不存在NAMPT(“仅培养基”)或存在NAMPT(“NAMPT”)下侵入的DU-145PCa细胞的数量；不含PCa细胞的培养基(“无PCa细胞”)用作阴性对照。图11B提供了含有在不存在NAMPT(“仅培养基”)或存在NAMPT(“NAMPT”)下培养的PCa细胞的孔的显微照片；不含PCa细胞的孔(“无PCa细胞”)用作阴性对照。
图12A-12C描绘了1076人源化抗hNAMPT抗体(N-1076、K-1076和P-1076)和1093人源化抗hNAMPT抗体(SS-1093、XX-11093和UU-1093)对鼠肺损伤模型中的炎症和损伤的体内测试的结果。图12A是显示了人源化抗hNAMPT抗体对LPS诱导的“一击”肺损伤模型中的肺损伤评分的作用的图。图12B是显示了人源化抗hNAMPT抗体对LPS/VILI诱导的“双击”肺损伤模型中的肺损伤评分的作用的图。图12C提供了显微照片，显示了人源化抗hNAMPT抗体P-1076对LPS诱导的“一击”肺损伤模型(图12C，上图)和LPS/VILI诱导的“双击”肺损伤模型(图12C，下图)中的肺损伤的作用的组织学指标。
图13A-13C描绘了PCa细胞通过膈平滑肌的侵袭性的体内测定的结果。图13A是显微照片，显示了腹膜内(IP)注射PC3(一种高度转移性的人PCa细胞)后6周，SCID小鼠中具有通过平滑肌层的侵袭的严重腹膜穿刺(studding)；图13A，下图中提供了显微照片的放大图像。图13B是显微照片，显示了接受了人源化抗hNAMPT抗体P-1076的注射PC3的小鼠中的PC3细胞侵袭的抑制；图13B，下图中提供了显微照片的放大图像。图13C是显示了用抗hNAMPT抗体P-1076或单独的媒介处理的小鼠中侵入隔膜的PC3细胞的百分比的图。
图14A-14E描绘了NAMPT中和抗体对肺部炎症(通过H&E染色评估的)、BALA蛋白质的量和BAL表达细胞的计数的作用，如在鼠RILI模型中评价的。图14A提供了代表性的显微照片，显示了非照射对照小鼠(图14A的插图，左图)或注射媒介对照(图14A，左图)、抗NAMPT多克隆抗体(pAb)(图14A，中图)或抗NAMPT单克隆抗体(mAb)(图14A，右图)的照射RILI小鼠在放射暴露后的肺组织的H&E染色。图14B是非照射对照小鼠或注射媒介对照、抗NAMPT pAb或抗NAMPT mAb的照射RILI小鼠的肺组织中的H&E染色(％面积)的图形表示。图14C是非照射对照小鼠或注射媒介对照、抗NAMPT pAb或抗NAMPT mAb的照射RILI小鼠的肺组织中的BAL蛋白质水平(μg/ml)的图形表示。图14D是非照射对照小鼠或注射媒介对照、抗NAMPTpAb或抗NAMPT mAb的照射RILI小鼠的肺组织中BAL表达细胞的数量的图形表示。图14E是非照射对照小鼠或注射媒介对照、抗NAMPT pAb或抗NAMPT mAb的照射RILI小鼠的ALI严重性评分的图形表示。*表示p＜0.05。
图15A-15D描绘了通过99mTc-标记的抗NAMPT mAb探针检测NAMPT表达。图15A提供了代表性的放射自显影图像，其描绘了在非照射对照小鼠(图15A，左图)或暴露于8Gy部分身体放射(PBI)的照射(RILI)小鼠(图15A，右图)中通过99mTc-标记的抗NAMPT mAb探针检测NAMPT表达。图15B提供了代表性的放射自显影图像，其描绘了在非照射对照小鼠(图15B，左图)或照射的(RILI)小鼠(图15B，下图)中通过99mTc-标记的抗NAMPT mAb探针检测NAMPT表达。图15C是来自非照射对照小鼠或照射(RILI)小鼠的左肺和右肺的肺活性相对于组织背景的比率的图形表示。图15D是非照射对照小鼠或照射(RILI)小鼠的肺组织中的放射活性(％ID/g)的图形表示。*表示p＜0.05。
图16A-16C描绘了人源化抗NAMPT mAb对BAL细胞计数、胶原蛋白沉积和肺组织平滑肌肌动蛋白(SMA)的表达的作用，如在20Gy放射暴露后18周在鼠RILI模型中评价的。图16A是描绘了腹膜内注射抗NAMPT mAb或媒介对照的照射RILI小鼠的肺组织中BAL表达细胞的数量的图。图16B提供了来自蛋白质印迹分析的代表性图像，显示了腹膜内注射抗NAMPTmAb或媒介对照的照射RILI小鼠的肺组织匀浆中的SMA表达。图16C提供了代表性显微照片，显示了腹膜内注射抗NAMPT mAb或媒介对照的照射RILI小鼠的肺组织中的胶原蛋白沉积，如通过Trichrome染色检测的。*表示p＜0.05。
图17A-17C描绘了人源化抗NAMPT mAb对炎性细胞浸润、水肿和肺损伤评分的作用，如在创伤(爆破)/通气引起的肺损伤(VILI)的大鼠模型中评估的。图17A提供了代表性图像和显微照片，显示了注射了媒介对照的创伤/VILI挑战的大鼠的肺或肺组织切片。图17A的左图提供了来自注射媒介对照的创伤/VILI挑战大鼠的肺的代表性图像。图17A的中图和右图提供了代表性的显微照片，显示了注射媒介对照的创伤/VILI挑战的大鼠中的炎性细胞浸润和水肿，如通过H&E染色评价的。图17A最右图的插图提供了代表性的显微照片，显示了未经创伤/VILI挑战的大鼠的肺组织中的H&E染色。图17B提供了代表性的图像和显微照片，显示了注射抗NAMPT mAb的创伤/VILI挑战的大鼠的肺或肺组织切片。图17B的左图提供了来自注射抗NAMPT mAb的创伤/VILI挑战的大鼠的肺的代表性图像。图17B的中图和右图提供了代表性的显微照片，显示了注射抗NAMPT mAb的创伤/VILI挑战的大鼠中的炎性细胞浸润和水肿，如通过H&E染色评价的。图17C是描绘了注射抗NAMPT mAb或媒介对照的创伤/VILI挑战的大鼠的肺损伤评分的图。
图18A-18C描绘了NAMPT中和抗体对炎性细胞浸润、水肿和肺损伤评分的作用，如在鼠LPS/VILI肺损伤模型中评价的。图18A提供了代表性显微照片，显示了注射媒介对照的LPS/VILI挑战的小鼠中的炎性细胞浸润和水肿，如通过H&E染色评估的。图18A的插图提供了代表性显微照片，显示了来自未用LPS/VILI挑战的小鼠的肺组织中的H&E染色。图18B提供了代表性的显微照片，显示了注射抗NAMPT mAb的LPS/VILI挑战的小鼠中的炎性细胞浸润和水肿，如通过H&E染色评估的。图18C是描绘了注射抗NAMPT mAb、抗NAMPT pAb或媒介对照(PBS)的LPS/VILI挑战的小鼠中评估的ALI严重性评分的图。图18C中的图还描绘了未用LPS/VILI挑战的对照小鼠的ALI严重性评分。*表示p＜0.05；***表示p＜0.001。
图19A-19D描绘了通过99mTc标记的抗NAMPT mAb探针检测NAMPT表达。图19A提供了代表性的自显影图像，描绘了在暴露于20Gy总肺放射(WTLI)的小鼠中通过99mTc标记的抗NAMPT mAb探针(PRONAMPTOR)(图19A，右图)或放射性标记的IgG对照Ab(图19A，左图)来检测NAMPT表达。图19B提供了代表性的自显影图像，描绘了在LPS挑战后3小时LPS挑战的小鼠中(图19B，右图)或在非挑战的对照小鼠(图19B，左图)中通过99mTc标记的抗NAMPT mAb探针来检测NAMPT表达。图19C提供了代表性的自显影图像，描绘了在LPS挑战后3小时LPS挑战的小鼠的肺中(图19C，下图)或在非挑战的对照小鼠的肺中(图18C，上图)通过99mTc标记的抗NAMPT mAb探针来检测NAMPT表达。图19D是LPS挑战后3小时和18小时的LPS挑战的小鼠的肺组织中或非挑战的对照小鼠的肺组织中的放射性标记的抗NAMPT mAb探针摄取(如通过放射性(％ID/g)评估的)的图形表示。*表示p＜0.05。
图20A-20B描绘了人源化抗NAMPT mAb对右心室收缩压(RVSP)和肺动脉厚度的作用，如在PAH的大鼠野百合碱(MCT)模型中评估的。图20A是注射抗NAMPT mAb或媒介质对照(对照MCT小鼠)的MCT挑战的大鼠中的RVSP的图形表示。图20B提供了代表性显微照片，显示了注射抗NAMPT mAb(图20B，右图)和媒介对照(图20B，左图)的MCT挑战的大鼠中的肺动脉厚度，如通过H&E染色评估的。*表示p＜0.05。
具体实施方式
本发明可以以许多不同的形式体现。本文公开了本发明的非限制性的说明性实施方式，其举例说明了其原理。本文使用的任何章节标题仅用于组织目的，不应被解释为限制所描述的主题。出于本公开的目的，除非另有说明，否则所有识别序列登录号均可在NCBI参照序列(REFSEQ)数据库和/或NCBI
Figure BDA0003579371420000141
档案序列数据库中找到。
本发明的各个方面涉及抗NAMPT抗体和抗体片段，及其药物组合物，以及用于制备此类抗体和片段的核酸、重组表达载体和宿主细胞。使用本文所述的抗体检测人NAMPT、抑制人NAMPT活性(体外或体内)和治疗NAMPT相关疾病的方法也涵盖在本发明中，所述疾病包括但不限于肺纤维化(IPF)、肺动脉高血压、急性肺损伤(ALI)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、呼吸机诱导的肺损伤(VILI)、ARDS/VILI诱导的ALI、外伤诱导的急性肺损伤(TIALI)和脑损伤、放射诱导的肺损伤以及癌症(例如，前列腺癌(PCa))。
定义
为了更容易理解本发明，首先定义某些术语。此外，应当注意，每当描述参数的值或值的范围时，旨在所述值的中间值和范围也意图成为本发明的一部分。
在本文中可互换使用的术语“NAMPT”或“eNAMPT”是指烟酰胺磷酸核糖基转移酶的分泌形式，除非特别提及涉及非分泌形式(例如，细胞内NAMPT或NAMPT核酸)。分泌的人NAMPT(也称为人eNAMPT)的氨基酸序列在下面提供为SEQ ID NO:60(也参见NCBI基因参照号NC_000007.14和蛋白质参照号NP_005737.1)。
Figure BDA0003579371420000151
NAMPT也称为前B细胞集落增强因子(PBEF)或内脂素。
本文可互换使用的术语“NAMPT抗体”或“抗-NAMPT抗体”是指特异性结合分泌形式的NAMPT(本文也称为eNAMPT)的抗体。“结合”目标抗原(即NAMPT)的抗体是一种能够以足够的亲和力结合该抗原以使该抗体可用于靶向表达该抗原的细胞的抗体。在优选实施方式中，抗体特异性结合人NAMPT(hNAMPT)，特别是细胞外人NAMPT(人eNAMPT)。抗-eNAMPT抗体的实例公开于下文提供的实施例和序列表中。
如本文所用，“NAMPT的生物学活性”是指NAMPT的所有固有生物学特性，包括但不限于与TLR4的结合。
术语“特异性结合”或“与……特异性结合”等是指抗体或其抗原结合片段与在生理条件下相对稳定的抗原(例如NAMPT)形成复合物。特异性结合可以通过至少约1×10-8M或更小的平衡解离常数来表征(例如，越小的KD表示越紧密的结合)。用于确定两个分子是否特异性结合的方法在本领域中是众所周知的并且包括例如平衡透析、表面等离子体共振等。
术语“抗体”广泛地指免疫球蛋白(Ig)分子，通常由四条多肽链，两条重(H)链和两条轻(L)链组成，或保留了Ig分子的必要靶结合特征的其任何功能性片段、突变体、变体或衍生物。此类突变体、变体或衍生抗体形式是本领域已知的。以下讨论其非限制性实施方式。
在全长抗体中，每条重链由重链可变区(本文缩写为HCVR或VH)和重链恒定区组成。
轻链和重链两者都分为结构和功能同源性的区域。术语“恒定”和“可变”在功能上使用。在这方面，应当理解可变轻链(VL)和可变重链(VH)链部分的可变结构域决定抗原识别和特异性。相反，轻链(CL)和重链(CH1、CH2或CH3)的恒定结构域赋予生物学特性，如分泌、跨胎盘移动性、Fc受体结合、补体结合等。按照惯例，恒定区结构域的编号随着它们变得更远离抗体的抗原结合位点或氨基末端而增加。N-末端部分是可变区，而C-末端部分是恒定区；CH3(或IgM的情况中的CH4)和CL结构域实际上分别包含重链和轻链的羧基末端。
重链恒定区由三个结构域CH1、CH2和CH3组成。每条轻链由轻链可变区(本文缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH和VL区可以进一步细分为超变区，称为互补决定区(CDR)，其中散布着更保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL由三个CDR和四个FR组成，从氨基端到羧基端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。免疫球蛋白分子可以是任何类别(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)和同种型(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。轻链分为类为kappa或lambda(k，λ)。
存在于抗体抗原结合结构域中的“互补决定区”或“CDR”各自是短的、非连续的氨基酸序列，在抗体在水性环境中呈现其三维构型时，这些氨基酸被特异性定位以形成结合结构域。抗体结合结构域中的其余氨基酸，称为“框架”或“FW”区域，显示出较少的分子间变异性。由定位的CDR形成的结合结构域定义了与免疫反应性抗原上的表位互补的表面。这个互补表面促进抗体与其同源表位的非共价结合。对于任何给定的重链或轻链可变区，本领域普通技术人员可以容易地鉴定分别构成CDR和框架区的氨基酸，因为它们已经以如下所述的各种不同方式定义。本文提供了示例性CDR。但是，CDR也可以根据Kabat、Chothia、Martin、PyIgClassify或IMGT来定义。示例性CDR定义在Chiu等，“Antibody Structure andFunction:The Basis for Engineering Therapeutics”，Antibodies,8(55):1-80(2019)中进行了描述，其通过引用整体并入本文。
对于本发明中讨论的重链恒定区氨基酸位置，编号是根据Edelman等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 63(1):78-85中首次描述的EU索引进行的，其描述了骨髓瘤蛋白Eu的氨基酸序列，据报道这是第一个测序的人类IgG1。Edelman的EU索引也在Kabat等，1991(同上)中提出。因此，重链情况中的术语“Kabat中示出的EU索引”或“Kabat的EU索引”或“EU索引”或“EU编号”是指基于Edelman等的人IgG1 Eu抗体的残基编号系统，如Kabat等，1991(同上)中所示出的。用于轻链恒定区氨基酸序列的编号系统类似地在Kabat等(同上)中列出。与本公开相容的示例性κ轻链恒定区氨基酸序列在下面列出：
Figure BDA0003579371420000181
相似地，与本发明相容的示例性IgG1重链恒定区氨基酸序列在下面列出：
Figure BDA0003579371420000182
如本文中使用的，术语抗体的“抗原结合部分”或“结合片段”是指保留特异性地结合抗原(例如，hNAMPT)的能力的抗体的一个或多个片段。已经表明可以通过全长抗体的片段来执行抗体的抗原结合功能。这样的抗体实施方式还可以是双特异性的、双重特异性的或多特异性的形式；特异性地结合两个或更多个不同的抗原。术语抗体的“抗原结合部分”内包括的结合片段的实例包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab’)2片段，包括通过铰链区的二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)Fd片段，由VH和CH1结构域组成；(iv)Fv片段，由抗体的单臂的VL和VH结构域组成，(v)dAb片段(Ward等(1989)Nature 341:544-546，Winter等，PCT公开WO 90/05144A1，按引用并入本文)，其包括单个可变结构域；和(vi)分离的互补决定区(CDR)。此外，尽管通过单独的基因编码Fv片段的两个结构域，VL和VH，但可以使用重组方法，通过合成接头将它们连接，所述合成接头使其能够作为单个蛋白质链制得，其中VL和VH区配对形成单价分子(称为单链Fv(scFv)；参见，例如，Bird等(1988)Science 242:423-426；和Huston等(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883)。这样的单链抗体也打算包括在术语抗体的“抗原结合部分”内。在本发明的某些实施方式中，可以将scFv分子结合到融合蛋白中。还包括单链抗体的其他形式，如双体抗体。双体抗体是二价的、双特异性抗体，其中VH和VL结构域在单个多肽链上表达，但使用太短以致不允许同一链上的两个结构域之间配对的接头，由此迫使结构域与另一条链的互补结构域配对，并且形成两个抗原结合位点(参见，例如，Holliger P.等，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448；Poljak R.J.等，Structure 2:1121-1123(1994))。这样的抗体结合部分是本领域已知的(Kontermann和Dubel编辑，Antibody Engineering(2001)Springer-Verlag.New York.790pp.(ISBN 3-540-41354-5))。
“全人”抗体包括具有源自人免疫球蛋白(例如，获自人免疫球蛋白编码序列)的序列的抗体可变结构域。术语“人抗体”包括例如具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区(如果存在)的抗体。如本文应用于抗体或片段(如可变结构域)的术语“人”不涵盖来自另一物种(例如小鼠)的已经通过将人恒定区序列移植到抗体多肽上(即，用人恒定区置换非人恒定区)或通过将人V区框架序列移植到来自非人哺乳动物的免疫球蛋白可变结构域上(即，用人框架区置换V结构域的非人框架区)而被“人源化”的抗体。已经描述了通过合理修饰互补决定残基来人源化免疫球蛋白可变区的方法(US 2006/0258852)。
术语“人源化抗体”表示来自非人物种的抗体，其具有来自所述非人物种的一个或多个互补决定区(CDR)和来自人免疫球蛋白分子的框架区。人源化抗体可以任选进一步包含一个或多个源自CDR所来源的非人物种的框架残基。此类框架序列可以从覆盖种系抗体基因序列的公共DNA数据库或从公开的参考文献获得。例如，人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列可以在“Vbase”人种系序列数据库(可在网站www.mrccpe.com.ac.uk/vbase上获得)中找到，以及可以在Kabat，E A等，1991Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第5版中找到。为了避免在免疫原性降低的过程中活性降低，对人抗体的可变区框架序列进行最小回复突变以维持活性。
人源化抗体可以选自任何类别的免疫球蛋白，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE，以及任何同种型，包括但不限于IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。人源化抗体可以包含来自多于一种类别或同种型的序列，并且可以使用本领域熟知的技术选择特定的恒定结构域以优化所需的效应子功能。
术语“多特异性”抗体是指在单个抗体分子内具有针对两个或更多个不同表位的结合结构域的抗体。除了规范抗体结构之外，可以构建具有两种结合特异性的其他结合分子。双特异性或多特异性抗体的表位结合可以是同时的或顺序的。Triomas和杂合杂交瘤是可以分泌双特异性抗体的细胞系的两个实例。还可以通过重组手段构建双特异性抗体。(Strohlein和Heiss，Future Oncol.6:1387-94(2010)；Mabry和Snavely，IDrugs.13:543-9(2010))。双特异性抗体也可以是双体抗体。
如本文所用，术语“标记的抗体”是指具有用于鉴定结合蛋白(例如，抗体)的结合标记的抗体或其抗原结合部分。优选地，标记是可检测标志物，例如掺入放射性标记的氨基酸或连接可以通过标记的抗生物素蛋白(例如含有可以通过光学或比色方法检测的荧光标志物或酶活性的链霉亲和素)检测的生物素基部分的多肽。用于多肽的标记的实例包括但不限于以下的：放射性同位素或放射性核素(例如，3H、14C、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Ho或153Sm)；荧光标记(例如，FITC、罗丹明、镧系元素磷光体)、酶标记(例如，辣根过氧化物酶、荧光素酶、碱性磷酸酶)；化学发光标志物；生物素基团；由第二报告物识别的预定多肽表位(例如亮氨酸拉链对序列、第二抗体的结合位点、金属结合结构域、表位标签)；和磁性剂，如钆螯合物。
“保守性氨基酸置换”是其中一个氨基酸被具有相似侧链的另一个氨基酸替换的氨基酸置换。本领域已经定义了具有相似侧链的氨基酸家族，包括碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-支链侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。例如，苯丙氨酸取代酪氨酸是保守性置换。在某些实施方式中，本公开的多肽和抗体的序列中的保守性置换不消除含有该氨基酸序列的多肽或抗体与结合分子所结合的抗原的结合。鉴定不消除抗原结合的核苷酸和氨基酸保守置换的方法是本领域熟知的(参见，例如Brummell等，Biochem.32:1180-1187(1993)；Kobayashi等，Protein Eng.12(10):879-884(1999)；和Burks等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94：412-417(1997))。
术语“多核苷酸”旨在涵盖单个核酸以及多个核酸，并且是指分离的核酸分子或构建体，例如信使RNA(mRNA)、cDNA或质粒DNA(pDNA)。多核苷酸可以包含常规磷酸二酯键或非常规键(例如，酰胺键，如在肽核酸(PNA)中发现的)。术语“核酸”或“核酸序列”是指存在于多核苷酸中的任何一个或多个核酸区段，例如DNA或RNA片段。
“分离的”核酸或多核苷酸意指与其天然环境分离的任何形式的核酸或多核苷酸。例如，凝胶纯化的多核苷酸或包含在载体中的编码多肽的重组多核苷酸将被认为是“分离的”。另外，已经被工程化以具有用于克隆的限制性位点的多核苷酸区段，例如PCR产物，被认为是“分离的”。分离的多核苷酸的其他实例包括在异源宿主细胞中维持的重组多核苷酸或在非天然溶液(如缓冲液或盐水)中(部分或基本上)纯化的多核苷酸。分离的RNA分子包括多核苷酸的体内或体外RNA转录物，其中转录物不是将在自然界中发现的转录物。分离的多核苷酸或核酸还包括合成产生的此类分子。此外，多核苷酸或核酸可以是或可以包括调节元件，如启动子、核糖体结合位点或转录终止子。
如本文所用的术语“表达”是指基因产生生物化学物质(例如多肽)的过程。该过程包括基因在细胞内的功能性存在的任何表现，包括但不限于基因敲低以及瞬时表达和稳定表达。其包括但不限于将基因转录成信使RNA(mRNA)，以及将此类mRNA翻译成多肽。如果最终期望的产物是生物化学物质，则表达包括产生该生物化学物质和任何前体。基因的表达产生“基因产物”。如本文所用，基因产物可以是核酸，例如通过基因转录产生的信使RNA，或从转录物翻译的多肽。本文所述的基因产物还包括具有转录后修饰(例如聚腺苷酸化)的核酸，或具有翻译后修饰(例如甲基化、糖基化、添加脂质、与其他蛋白质亚基缔合、蛋白水解切割等)的多肽。
如本文所用，“中和抗体”(例如，“抑制NAMPT活性的抗体”)旨在包括其与NAMPT的结合导致NAMPT生物活性的抑制的抗体。当过量的抗体将与决定簇结合的结合配偶体的量减少至少约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％、99％或更多时，中和抗体将实质上抑制NAMPT与其配体或底物的结合，如例如通过靶分子活性或在体外竞争性结合测定中所测量的。应当理解，改变的活性可以使用本领域公认的技术直接测量，或者可以通过改变的活性对下游的影响来测量。NAMPT或其配体的生物活性的这种抑制可以通过测量NAMPT生物活性的一种或多种指标来评估，如细胞外NAMPT的量(体外或体内)、NAMPT诱导的细胞激活(例如，NFκB磷酸化)和NAMPT与NAMPT配体的结合。NAMPT生物活性的这些指标可以通过本领域已知的几种标准体外或体内测定中的一种或多种来评估(参见实施例)。例如，在一些实施方式中，通过抑制NAMPT诱导的内皮细胞激活来评估抗体抑制NAMPT活性的能力。作为NAMPT活性的另外的或替代的参数，可以评估抗体通过NFκB抑制NAMPT诱导的转录活性的能力，其作为NAMPT诱导的细胞激活的量度。
如“治疗(treating)”或“疗法(treatment)”或“处理(treat)”或“减轻(alleviating)”或“缓解(alleviate)”的术语是指治愈、减缓、减轻现有诊断的病理状况或病症的症状和/或停止或减缓现有诊断的病理状况或病症的进展的治疗性措施。这种治疗可以包括但不需要完全消除所有症状或治愈疾病。如“预防(prevent)”、“防止(prevention)”、“避免(avoid)”、“阻止(deterrence)”等术语是指预防未诊断的靶向病理状况或病症发展的预防性或防止性措施。因此，“需要治疗的那些”可以包括已经患有该病症的那些；倾向于患有该病症的那些；处于发展该病症的风险中的那些；以及要预防病症的那些。
“受试者”或“个体”或“动物”或“患者”或“哺乳动物”是指需要诊断、预后或治疗的任何受试者，特别是哺乳动物受试者。哺乳动物受试者包括人、家畜、农场动物和动物园、运动或宠物动物，如狗、猫、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、马、猪、牛、熊等。
如本文所用，如“受益于疗法的受试者”和“需要治疗的动物”的短语包括将受益于施用抗NAMPT抗体(例如，人源化抗NAMPT抗体)的受试者，如哺乳动物受试者。此类抗体可用于例如诊断程序和/或用于治疗或预防疾病，例如炎性肺病或癌症(例如前列腺癌)。
术语“有效量”和“治疗有效量”在本文中可互换使用，并且是指如本文所述的化合物、制剂、材料或组合物有效实现特定生物学结果的量。这样的结果可以包括但不限于抑制NAMPT表达或活性，或通过本领域中任何合适的方法确定的在NAMPT下游的信号传导分子的表达或活性。例如，NAMPT活性包括但不限于细胞因子活性、烟酰胺磷酸核糖基转移酶活性、趋化因子、NF-κB信号传导活性、氧化还原信号传导活性和/或在线粒体功能和细胞凋亡中的作用。需要强调的是，治疗有效量在治疗病症方面并不总是有效的，即使这样的剂量被本领域技术人员认为是治疗有效量。仅为方便起见，本文参照成人受试者提供了示例性剂量、药物递送量、治疗有效量和治疗水平。本领域技术人员可以根据治疗特定受试者和/或病症所需的标准实践来调整这样的量。
抗NAMPT抗体
如本文所提供的，本公开涉及抗烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)抗体或其抗原结合片段，包括包含其的组合物、方法和制品(例如，试剂盒、系统)，其用于患有NAMPT相关的局部和全身性炎性病症的患者的预防和治疗用途。还描述了包括编码此类抗体的多核苷酸序列的核酸。在特定实施方式中，本文提供的单克隆抗体与细胞外NAMPT(eNAMPT)结合，并阻止Toll样受体4(TLR4)激活，从而减少或阻断特定呼吸病症中的一种或多种下游信号转导途径和随之发生的全身性和肺部炎症。
NAMPT基因产物是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)补救途径中的限速酶，所述途径在哺乳动物中将烟酰胺转化为烟酰胺单核苷酸以实现NAD+生物合成。细胞外NAMPT蛋白的成熟形式是约120kDa的同型二聚体(Takahashi等，J.Biochem.147:95-107(2010))。已经确定了降低或抑制NAMPT酶功能的突变可以减少引起如白血病和肺动脉高压(PAH)的病症的病理生理过程。
人NAMPT基因(NAMPT)位于染色体7(区段7q22.3；碱基对106,248,285至106,286,326)。人NAMPT基因产物的核酸序列是本领域已知的。参见，例如，NCBI参考序列：NM_005746.2，智人(Homo sapiens)烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)，mRNA(也参见Samal等，Mol.Cell.Biol.14(2)，1431-1437(1994))。人NAMPT酶的氨基酸序列是本领域已知的。参见，例如，GenBank登录号NP_005737.1。已经显示了NAMPT增加CD14+单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞中的IL-6、TNF-α和IL-1β产生，增强T细胞的有效性，并参与B和T淋巴细胞的发育(Sun等，Cytokine&Growth Factor Reviews 24(5)：433-442(2013))。NAMPT酶晶体结构详细描述于Kim等，J.Mol.Biol.362:66-77(2006)。
NAMPT的受体是Toll样受体4(TLR4)，一种在人类中由TLR4基因编码的蛋白质。TLR4是跨膜蛋白和Toll样受体家族的成员，其属于模式识别受体(PRR)家族。其激活导致细胞内NF-κB信号传导途径和炎性细胞因子产生，其负责激活先天免疫系统。它对于识别脂多糖(LPS)是最众所周知的，脂多糖(LPS)是存在于许多革兰氏阴性细菌(例如奈瑟氏菌属(Neisseria spp.))和选择的革兰氏阳性细菌中的组分。其配体还包括几种病毒蛋白、多糖和各种内源性蛋白，如低密度脂蛋白、β-防御素和热休克蛋白。人TLR4基因(TLR4)位于9号染色体(区段9q32-q33)(Georgel等，PLoS One 4(11):e7803(2009))。人TLR4基因产物的核酸序列是本领域已知的。参见，例如，NCBI参考序列：AAY82268.1，智人Toll样受体4(TLR4)，mRNA。人TLR4的氨基酸序列是本领域已知的。参见例如GenBank登录号AAY82268。
在某些方面中，本公开提供了人源化1076抗hNAMPT抗体或其抗原结合片段。下文提供了抗NAMPT抗体的实例。
抗NAMPT抗体D-1076：D-1076具有(i)具有如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ IDNO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体G-1076：G-1076具有(i)具有如SEQ ID NO:9所示氨基酸序列的重链可变区，含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:10所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:12所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ IDNO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体K-1076：K-1076具有(i)具有如SEQ ID NO:9所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:13所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:14所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ IDNO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体N-1076：N-1076具有(i)具有如SEQ ID NO:15所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ IDNO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；
抗NAMPT抗体P-1076：P-1076具有(i)具有如SEQ ID NO:15所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:13所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:14所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ IDNO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；。
抗NAMPT抗体V-1076：V-1076具有(i)具有如SEQ ID NO:16所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:10所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:12所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ IDNO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体X-1076：X-1076具有(i)具有如SEQ ID NO:16所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ IDNO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体P-1076-mod1：P-1076-mod1具有(i)具有如SEQ ID NO:28所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQID NO:29所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:30所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:14所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体P-1076-mod2：P-1076-mod2具有(i)具有如SEQ ID NO:28所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQID NO:29所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:31所示氨基酸序列的CDR3结构域，其含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:14所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体P-1076-mod3：P-1076-mod3具有(i)具有如SEQ ID NO:28所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQID NO:29所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:32所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:33所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体P-1076-mod4：P-1076-mod4具有(i)具有如SEQ ID NO:28所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQID NO:29所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:34所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:35所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体P-1076-mod5：P-1076-mod5具有(i)具有如SEQ ID NO:28所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQID NO:29所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:36所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:37所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体P-1076-mod6：P-1076-mod6具有(i)具有如SEQ ID NO:15所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:30所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:14所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体P-1076-mod7：P-1076-mod7具有(i)具有如SEQ ID NO:15所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:31所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:14所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体P-1076-mod8：P-1076-mod8具有(i)具有如SEQ ID NO:15所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:32所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:33所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体P-1076-mod9：P-1076-mod9具有(i)具有如SEQ ID NO:15所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:34所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体P-1076-mod10：P-1076-mod10具有(i)具有如SEQ ID NO:15所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:36所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ IDNO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:37所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体P-1076-mod11：P-1076-mod11具有(i)具有如SEQ ID NO:28所示氨基酸序列的重链可变区，含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQID NO:29所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:13所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:14所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
在某些方面中，本公开提供了人源化1093抗hNAMPT抗体或其抗原结合片段。下文提供了a1093抗NAMPT抗体的实例。
抗NAMPT抗体FF-1093：FF-1093具有(i)具有如SEQ ID NO:17所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:18所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体II-1093：II-1093具有(i)具有如SEQ ID NO:23所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:24所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体NN-1093：NN-1093具有(i)具有如SEQ ID NO:25所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:24所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体PP-1093：PP-1093具有(i)具有如SEQ ID NO:25所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:18所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体SS-1093：SS-1093具有(i)具有如SEQ ID NO:26所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:24所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体UU-1093：UU-1093具有(i)具有如SEQ ID NO:26所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:18所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体XX-1093：XX-1093具有(i)具有如SEQ ID NO:27所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:24所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体ZZ-1093：ZZ-1093具有(i)具有如SEQ ID NO:27所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:18所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体UU-1093-mod1：UU-1093-mod1具有(i)具有如SEQ ID NO:38所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:47所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体UU-1093-mod2：UU-1093-mod2具有(i)具有如SEQ ID NO:40所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:41所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:47所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体UU-1093-mod3：UU-1093-mod3具有(i)具有如SEQ ID NO:42所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:43所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:44所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:47所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体UU-1093-mod4：UU-1093-mod4具有(i)具有如SEQ ID NO:45所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:46所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:41所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:47所示氨基酸序列的轻链可变区，其包含具有如SEQID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体UU-1093-mod5：UU-1093-mod5具有(i)具有如SEQ ID NO:38所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:48所示氨基酸序列的轻链可变区，含有具有如SEQID NO:49所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:50所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体UU-1093-mod6：UU-1093-mod6具有(i)具有如SEQ ID NO:40所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:41所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:48所示氨基酸序列的轻链可变区，含有具有如SEQID NO:49所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:50所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体UU-1093-mod7：UU-1093-mod7具有(i)具有如SEQ ID NO:42所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:43所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:44所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:48所示氨基酸序列的轻链可变区，含有具有如SEQID NO:49所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:50所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体UU-1093-mod8：UU-1093-mod8具有(i)具有如SEQ ID NO:45所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:46所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:41所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:48所示氨基酸序列的轻链可变区，含有具有如SEQID NO:49所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:50所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体UU-1093-mod9：UU-1093-mod9具有(i)具有如SEQ ID NO:38所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:51所示氨基酸序列的轻链可变区，含有具有如SEQID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:52所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:53所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体UU-1093-mod10：UU-1093-mod10具有(i)具有如SEQ ID NO:40所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:41所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:51所示氨基酸序列的轻链可变区，含有具有如SEQID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:52所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:53所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体UU-1093-mod11：UU-1093-mod11具有(i)具有如SEQ ID NO:42所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:43所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:44所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR2结构域、具有如SEQ ID NO:52所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:53所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体UU-1093-mod12：UU-1093-mod12具有(i)具有如SEQ ID NO:45所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:46所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:41所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:51所示氨基酸序列的轻链可变区，含有具有如SEQID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:52所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:53所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体UU-1093-mod13：UU-1093-mod13具有(i)具有如SEQ ID NO:38所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:18所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体UU-1093-mod14：UU-1093-mod14具有(i)具有如SEQ ID NO:40所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:41所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:18所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体UU-1093-mod15：UU-1093-mod15具有(i)具有如SEQ ID NO:42所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:43所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:44所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:18所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体UU-1093-mod16:UU-1093-mod16具有(i)具有如SEQ ID NO:45所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:46所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:41所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:18所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体UU-1093-mod17：UU-1093-mod17具有(i)具有如SEQ ID NO:26所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:47所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体UU-1093-mod18：UU-1093-mod18具有(i)具有如SEQ ID NO:26所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:48所示氨基酸序列的轻链可变区，其含有具有如SEQID NO:49所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:50所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
抗NAMPT抗体UU-1093-mod19：UU-1093-mod19具有(i)具有如SEQ ID NO:26所示氨基酸序列的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域；和(ii)具有如SEQ ID NO:51所示氨基酸序列的轻链可变区，含有具有如SEQID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:52所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:53所示氨基酸序列的CDR3结构域。
在一些实施方式中，本发明包括抗NAMPT抗体，其结合NAMPT同型二聚体构象的人NAMPT，结合于人NAMPT上的不连续表位。在一些实施方式中，抗体或其抗原结合部分与人NAMPT上的表位结合，所述表位包含SEQ ID NO:60的氨基酸残基17-44中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基117-127中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基162-170中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基242-261中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基262-273中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基289-305中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基332-342中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基374-389中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基418-425中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基453-466中的至少一个氨基酸；和/或SEQ ID NO:60的氨基酸残基408-416中的至少一个氨基酸。在一些实施方式中，抗体或其抗原结合部分结合人NAMPT上的表位，所述表位包含SEQ ID NO:60的氨基酸残基29-51中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基61-72中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基156-170中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基216-234中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基316-331中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基332-342中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基373-389中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基417-431中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基454-469中的至少一个氨基酸；和/或SEQ ID NO:60的氨基酸残基470-478中的至少一个氨基酸。
在某些方面中，所提供的抗体或其片段可以对在人细胞上表达的人NAMPT具有约3nM至约20nM的结合亲和力(KD)，如通过表面等离子体共振所测量的。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原结合片段以小于或等于例如5x10-2秒-1、10-2秒-1、5x10-3秒-1、10-3秒-1、5x10-4秒-1、10-4秒-1、5x10-5秒-1或10-5秒-1、5x10-6秒-1、10-6秒-1、5x10-7秒-1或10-7秒-1的解离速率(k(off))结合NAMPT，例如人NAMPT。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原结合片段以大于或等于例如103M- 1sec-1、5x103M-1sec-1、104M-1sec-1、5x104M-1sec-1、105M-1sec-1、5x105M-1sec-1、106M-1sec-1或5x106M-1sec-1或107M-1sec-1的结合速率(k(on))结合NAMPT，例如人NAMPT。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原结合片段以等于或大于例如5x10- 7M、10-7M、5x10-8M、10-8M、5x10-9M、10-9M、5x10-10M、10-10M、5x10-11M、10-11M、5x10-12M、10-12M或5x10-13M的解离常数或KD结合NAMPT，例如人NAMPT。可以使用本领域已知的各种技术来测定结合亲合力，例如，表面等离子体共振(SPR)、生物层干涉、双偏振干涉、静态光散射、动态光散射、等温滴定量热法、ELISA、分析超速离心和流式细胞术。
在某些方面中，如本文提供的抗NAMPT抗体或其抗原结合片段还可以包括异源试剂，例如稳定剂、免疫应答调节剂或可检测试剂。在某些方面中，异源试剂包含通过肽键与多肽亚基融合的一个或多个另外的多肽序列，如信号序列(例如分泌信号序列)、接头序列、氨基酸标签或标记，或促进纯化的肽或多肽序列。在某些方面中，异源多肽可以融合至重链或轻链抗体亚基或其片段的N-末端或C-末端，只要保持结构域的功能特征即可。
在某些方面中，异源试剂可以与本文提供的抗NAMPT抗体或其抗原结合片段化学缀合。可以与多肽亚基化学缀合的示例性异源试剂包括但不限于接头、药物、毒素、成像剂、放射性化合物、有机和无机聚合物，以及可以提供多肽亚基本身不提供的所需活性的任何其他组合物。具体试剂包括但不限于聚乙二醇(PEG)、细胞毒性剂、放射性核素、成像剂、生物素。
在一些实施方式中，用放射性标记标记抗NAMPT抗体或片段以用于体外或体内检测。可用于标记本文公开的抗体的放射性同位素的实例包括但不限于At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212或Lu的放射性同位素。在一些实施方式中，本发明包括如本文所述的抗NAMPT抗体，其与放射性原子缀合以形成放射性缀合物。多种放射性同位素可用于产生放射性缀合物。实例包括At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素。放射性缀合物用于检测时，它可以包含用于闪烁扫描研究的放射性原子，例如tc99m或I123，或用于核磁共振(NMR)成像(也称为磁共振成像，MRI)的自旋标记，例如碘-123、碘-131、铟-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、钆、锰或铁。
在某些实施方式中，本文提供的任一抗NAMPT抗体可用于检测生物样品中NAMPT的存在。如本文所用的术语“检测”涵盖定量或定性检测。在某些实施方式中，生物样品包含细胞或组织，如脑脊液、肺的细胞或组织或血液。
在一些实施方式中，提供了用于诊断或检测方法的抗NAMPT抗体。在另一个方面中，提供了检测生物样品中NAMPT的存在的方法。在某些实施方式中，所述方法包括在允许抗NAMPT抗体与NAMPT结合的条件下使生物样品与如本文所述的抗NAMPT抗体接触，并检测抗NAMPT抗体与NAMPT之间是否形成复合物。这种方法可以是体外或体内方法。此外，可以将测试生物样品中抗NAMPT抗体和NAMPT之间形成的复合物与对照生物样品(例如，来自一个或多个健康受试者的生物样品)中形成的复合物进行比较。还可以定量测试生物样品中抗NAMPT抗体和NAMPT之间形成的复合物的量，并与对照生物样品(例如，来自一个或多个健康受试者的生物样品)中形成的复合物的量或与已知在健康受试者中形成的复合物的平均量进行比较。
本文公开的抗NAMPT抗体和片段也可以用作检测人NAMPT的试剂，并且在一些实施方式中，用作检测鼠NAMPT的试剂。例如，本文所述的抗NAMPT抗体可用于ELISA测定中。检测NAMPT的存在可以使用本文公开的抗体和片段以多种方式来完成，如通过蛋白质印迹(有或没有免疫沉淀)、免疫沉淀、荧光激活细胞分选(FACS)、流式细胞术和ELISA程序，用于测定广泛多样的组织和样品，包括血浆或血清。使用这种测定形式的广泛范围的免疫测定技术是可用的，其可以包括本文公开的抗体，参见例如美国专利No.4,016,043、4,424,279和4,018,653。这些包括非竞争性类型的单位点和双位点或“夹心”测定，以及传统的竞争性结合测定。这些测定还包括标记的抗NAMPT抗体与靶生物标志物的直接结合。
夹心测定法是最有用的和最常用的测定法。存在夹心测定技术的许多变型，并且所有这些变型都旨在被本发明所涵盖。简言之，在典型的正向测定中，将未标记的抗体固定在固体基质上，并使待测试的样品与结合的分子接触。在孵育足以允许抗体-抗原复合物形成的一段时间后，然后加入对抗原特异性的第二抗体，所述抗体用能够产生可检测信号的报告分子标记，并孵育，允许足以形成抗体-抗原标记的抗体的另一种复合物的时间。洗去任何未反应的物质，通过观察报告分子产生的信号来确定抗原的存在。结果可以是定性的，通过可见信号的简单观察，或者可以通过与含有已知量的生物标志物的对照样品进行比较来定量。
为了重组产生抗NAMPT抗体，分离编码例如如上所述的抗体的核酸，并将其插入一种或多种载体中用于在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。可以使用常规程序(例如，通过使用能够与编码抗体重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)容易地分离此类核酸并测序。
用于克隆或表达抗体编码载体的合适宿主细胞包括本文所述的原核或真核细胞。例如，可以在细菌中产生抗体，特别是在不需要糖基化和Fc效应子功能时。对于抗体片段和多肽在细菌中的表达，参见例如美国专利No.5,648,237、5,789,199和5,840,523。(还参见Charlton，Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo编辑，Humana Press，Totowa，N.J.，2003)，第245-254页，其描述了抗体片段在大肠杆菌中的表达)。在表达后，可以从细菌细胞浆中分离可溶性部分中的抗体，并且可以进一步纯化。
除原核生物外，真核微生物(如丝状真菌或酵母)也是用于抗体编码载体的合适克隆或表达宿主，包括其糖基化途径已被“人源化”的真菌和酵母菌株，导致产生具有部分或完全人糖基化模式的抗体。参见Gerngross，Nat.Biotech.22:1409-1414(2004)和Li等，Nat.Biotech.24:210-215(2006)。
用于表达糖基化抗体的合适宿主细胞也源自多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的实例包括植物和昆虫细胞。已经鉴定了许多杆状病毒株，其可以与昆虫细胞结合使用，特别是用于草地贪夜蛾细胞的转染。
脊椎动物细胞也可用作宿主。例如，适于悬浮生长的哺乳动物细胞系可能是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其他实例是由SV40转化的猴肾CV1系(COS-7)；人胚肾系(293或293细胞，如例如Graham等，J.Gen Virol.36:59(1977)中所述的)；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠支持细胞(TM4细胞，如例如Mather，Biol.Reprod.23:243-251(1980)中所述的)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK)；水牛大鼠肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳腺肿瘤(MMT060562)；TRI细胞，如，例如Mather等，Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中所述的；MRC 5细胞；和FS4细胞。其他有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216(1980))；和骨髓瘤细胞系，如Y0、NS0和Sp2/0。对于适用于抗体产生的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见例如Yazaki和Wu，Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo编辑，Humana Press，Totowa，N.J.)，第255-268页(2003)。
抗NAMPT抗体药物组合物和治疗用途
还提供了治疗与炎症相关的病症的方法。一些实施方式包括通过施用抗NAMPT抗体或其抗原结合片段以剂量依赖性方式减少炎症、损伤、BAL液中的蛋白质的量和/或BALPMN。一些实施方式包括减少eNAMPT-、脂多糖-和/或呼吸机-诱导的肺损伤。可用抗NAMPT抗体或其结合片段治疗的病症包括但不限于炎性病症，如肺纤维化(IPF)、肺高血压、急性肺损伤(ALI)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、呼吸机诱导的肺损伤(VILI)、ARDS/VILI诱导的ALI、创伤诱导的急性肺损伤(TIALI)、脑损伤(包括创伤性脑损伤)或放射诱导的肺损伤(RILI)；前列腺癌；肺癌；与炎症相关的癌症；患有绒毛膜羊膜炎的孕妇(例如，处于早产和母体/新生儿并发症风险中的受试者)；非酒精性脂肪性肝炎(NASH)；肝纤维化；心肌缺血；和心脏纤维化。
还提供了组合物(例如，药物组合物)，其包含本文所述的抗NAMPT抗体或其抗原结合片段，任选还包含一种或多种载体、稀释剂、赋形剂或其他添加剂。一些实施方式包含组合物(例如，药物组合物)，其包含多核苷酸或载体，任选还包含一种或多种载体、稀释剂、赋形剂或其他添加剂。
还提供了制备抗NAMPT抗体或其抗原结合片段并向有需要的受试者施用抗NAMPT抗体或其抗原结合片段的方法，例如，以减轻和/或治疗与NAMPT相关的急性和慢性炎性病症(例如，ARDS、VILI和创伤诱导的炎性肺损伤)相关的症状、发病率或死亡率，其是本领域技术人员熟知的或可以由本领域技术人员容易地确定。抗NAMPT抗体或其抗原结合片段可以例如静脉内、动脉内、腹膜内、胸膜内、气管内、局部、皮下、粘膜、心包内、口服、局部、通过吸入、通过注射、通过输注、通过连续输注、通过局部灌注直接浸泡靶细胞、通过导管、通过气溶胶、通过雾化器和/或通过灌洗施用于受试者。在一些实施方式中，将包含抗NAMPT抗体或其抗原结合片段的组合物直接施用于发炎或显示炎症迹象的组织或器官。通常，合适的药物组合物可以包含但不限于缓冲剂(例如乙酸盐、磷酸盐或柠檬酸盐缓冲剂)、表面活性剂(例如聚山梨醇酯)、稳定剂(例如人白蛋白)等。
本文提供的某些药物组合物可以以可接受的剂型口服施用，包括例如胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。某些药物组合物也可以通过鼻气雾剂或吸入施用。这样的组合物可以制备成在盐水中的溶液，使用苯甲醇或其他合适的防腐剂、增强生物利用度的吸收促进剂和/或其他常规的增溶剂或分散剂。
可以与载体材料组合以产生单一剂型的抗NAMPT抗体或其抗原结合片段的量将根据所治疗的受试者和特定的施用方式而变化。组合物可以作为单剂量、多剂量或在确定的时间段内以输注施用。还可以调整剂量方案以提供最佳的所需响应(例如，治疗或预防响应)。例如，抗体可以以约0.1mg/kg至约20mg/kg的量以约每周至每月的频率静脉内施用于/可施用于患者。
在一些实施方式中，预期目标是预防或治疗炎性病症或疾病，这意味着有效量是预期实现炎性病症或疾病的一些预防或治疗的量。在一些实施方式中，它是指预防或缓解与特定疾病或病症相关的症状和/或细胞过程，包括但不限于VILI、ALI或ARDS；此类症状可以是血管通透性或升高的BAL蛋白分泌)。炎性疾病或病症是指以炎症为特征的疾病或病症。炎症可影响以下任一组织或器官：心脏、肺、肾、肝、骨髓、胰腺、脑、皮肤、骨、静脉、动脉、角膜、耳、眼、鼻咽组织、胃、关节、软骨、血管组织或细胞、血液、小肠、大肠、喉、脑、脊髓、平滑肌、神经、骨骼肌、乳房、卵巢、睾丸、子宫和脐带。此外，组织可含有一种或多种以下细胞类型：血小板、髓细胞、红细胞、淋巴细胞、脂肪细胞、成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞、平滑肌细胞、骨骼肌细胞、内分泌细胞、神经胶质细胞、神经元、分泌细胞、屏障功能细胞、收缩细胞、吸收细胞、粘膜细胞、角膜缘细胞(来自角膜)、干细胞(全能、多能性(pluripotent)或多能(multipotent))、未受精或受精卵母细胞或精子。
在一些方面中，一种或多种药剂可能已经向患者施用，同时施用/可施用，或稍后施用/可施用。示例性药剂包括硫唑嘌呤、硼替佐米、卡非佐米、环磷酰胺、地塞米松、多柔比星、来那度胺、美法仑、泊马度胺、泼尼松龙、沙利度胺和长春新碱。示例性药剂还包括抗生素。示例性药剂也可以作为治疗方案的一部分施用/可施用。
本公开还提供了包含一个或多个容器的药物包装和试剂盒，其中容器可包含一个或多个剂量的抗NAMPT抗体或抗原结合片段，包括可用于进行本文所述方法的组合物。在某些实施方式中，试剂盒包含至少一种纯化的抗NAMPT抗体或其抗原结合片段。本领域技术人员将容易地认识到所公开的抗NAMPT抗体可以容易地并入本领域熟知的已建立的试剂盒形式之一中。
在某些方面中，本公开提供了用于预防、减少和/或逆转有需要的受试者中导致NAMPT相关急性和慢性炎症的发作和进展的病理生理过程的预防和/或治疗方法，该方法包括施用有效量的抗NAMPT抗体或其抗原结合片段(包括本文提供的组合物和药物组合物)。如本文所用，“NAMPT相关的急性和慢性炎性疾病或病症”包括导致涉及NAMPT的炎症的任何炎性病症或生物过程，例如，升高的NAMPT(例如，eNAMPT)(包括下游信号传导分子，如炎性细胞因子)的表达和/或活性。在特定实施方式中，组合物包含中和性人源化抗NAMPT抗体。在特定实施方式中，受试者是哺乳动物，包括但不限于人。根据本文教导的治疗方法和相应用途可以延缓、阻止或逆转与疾病相关的一种或多种症状，从而改善受试者的生活质量和/或延长患者的寿命。
在一些实施方式中，本文所述的抗NAMPT抗体或其片段用于治疗具有急性或慢性炎性病症或疾病(例如，炎性肺部病症或疾病)的症状或处于发展急性或慢性炎性病症或疾病(例如，炎性肺部病症或疾病)的风险中的患者。
将受益于本公开提供的方法的有需要的受试者包括但不限于危重受试者；患有呼吸衰竭的危重患者；暴露于感染、创伤和/或败血症的危重患者；具有放射暴露的受试者；诊断为肺纤维化(IPF)的受试者；患有肺高血压的受试者；患有急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的受试者；患有呼吸机诱导的肺损伤(VILI)的受试者；患有呼吸衰竭或处于VILI和/或ARDS/VILI诱导的ALI风险中的重症监护病房(ICU)受试者；患有胰腺炎的受试者；患有烟雾吸入性损伤、爆炸损伤和/或创伤诱导的急性肺损伤(TIALI)的受试者；患有创伤性脑损伤的受试者；患有出血性休克和复苏的受试者；患有放射诱导的肺损伤(包括癌症治疗相关的放射诱导的肺损伤)的受试者；患有绒毛膜羊膜炎的怀孕受试者(例如，处于早产和母体/新生儿并发症或早产并发症的风险中)；以及患有原发性和转移性癌症的受试者。还提供了处于发展本文公开的任何病症的风险中的受试者。
在某些方面中，本公开提供了一种用于治疗患有炎性肺部病症或疾病或处于患炎性肺部病症或疾病风险中的患者的方法，包括向患者施用有效量的抗NAMPT抗体或其抗原结合片段(包括本文提供的组合物和药物组合物)。这可以基于患者的症状、病史或一个或多个测试的结果。在一些情况下，向患者施用抗NAMPT抗体或其抗原结合片段(包括本文提供的组合物和药物组合物)时，患者已经被诊断为患有肺部的炎性病症或疾病。在其他情况下，患者尚未被诊断为患有肺部的炎性病症或疾病，但患者处于这种疾病或病症的风险中。这样的患者包括已经被放置或将放置呼吸机的患者、患有肺炎的患者、经历过身体创伤的患者、严重出血的患者、吸出呕吐物的患者、吸入化学物质的患者、大量吸烟的患者和/或大量饮酒的患者。例如，患者可在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、30、36、42、48、54、60、66、72、78、84、90、96、102、108、114或120小时(或其中可导出的任何范围)和/或1、2、3、4、5、6或7天(或其中可导出的任何范围)内放置呼吸机或已经放置呼吸机。
在某些方面中，本公开提供了一种用于治疗患有急性肺损伤(ALI)、呼吸机诱导的肺损伤(VILI)或呼吸窘迫综合征(ARDS)或处于急性肺损伤(ALI)、呼吸机诱导的肺损伤(VILI)或呼吸窘迫综合征(ARDS)风险中的患者的方法，包括向患者施用有效量的抗NAMPT抗体或其抗原结合片段(包括本文提供的组合物和药物组合物)。处于风险中的患者包括但不限于具有败血症或败血症症状的患者、具有肺炎或肺炎症状的患者、由于身体损伤而具有严重出血的患者、胸部或头部具有严重损伤的患者、呼吸有害烟或雾的患者、吸入呕吐物的患者、多次或大量输血的患者、长骨(如股骨)骨折的患者、几乎淹死的患者、对癌症药物或其他药物具有不良反应的患者、药物过量的患者、患有胰腺炎的患者、大量吸烟的患者、大量饮酒的患者、患有炎性肠病的患者、患有类风湿性关节炎的患者、患有结肠直肠癌的患者和患有肥胖相关的胰岛素抗性的患者，或其任意组合。
在某些方面中，本公开提供了一种用于预防患者的呼吸机诱导的肺损伤(VILI)的方法，该方法包括施用有效量的抗NAMPT抗体或其抗原结合片段(包括本文提供的组合物和药物组合物)。在特定实施方式中，抗NAMPT抗体是中和抗体。在特定实施方式中，施用在患者上呼吸机前进行。在特定实施方式中，施用在患者上呼吸机后进行。
在某些方面中，本公开提供了一种降低处于患NAMPT相关急性和/或慢性炎性病症的风险中的受试者或患有NAMPT相关急性和/或慢性炎性病症的受试者中的一种或多种细胞因子(例如，IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-8)水平的方法。
在某些方面中，本公开提供了一种用于降低处于患NAMPT相关急性和/或慢性炎性病症的风险中的受试者或患有NAMPT相关急性和/或慢性炎性病症的受试者中的eNAMPT水平的方法。
在一些实施方式中，本文公开的抗NAMPT抗体可用于治疗癌症。在一些实施方式中，癌症是前列腺癌(PCa)。在特定方面中，本公开提供了一种通过向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的抗NAMPT抗体或抗原结合片段来治疗所述受试者的PCa的方法。在一些实施方式中，患有前列腺癌的受试者患有复发性PCa、侵袭性PCa或转移性PCa。在一些实施方式中，受试者患有对雄激素剥夺疗法(ADT)具有抗性的侵袭性PCa。
或者，在一些情况下，抗NAMPT抗体或抗原结合片段可以与ADT组合施用于受试者。ADT可以在施用抗NAMPT抗体或抗原结合片段之前、同时或之后施用于受试者。
可以与抗NAMPT抗体或抗原结合片段组合施用于受试者的ADT可以包括以下中的一种或多种：促黄体激素释放激素(LHRH)激动剂；LHRH拮抗剂；CYP17抑制剂；抗雄激素；和/或雄激素抑制药物。在特定实施方式中，LHRH激动剂可以是亮丙瑞林(例如LUPRONTM、ELIGARDTM等)、戈舍瑞林(例如ZOLADEXTM)、曲普瑞林(例如TRELSTARTM)和/或组氨瑞林(例如VANTASTM)；LHRH拮抗剂可以是地加瑞克(例如，FIRMAGONTM)；CYP17抑制剂可以是阿比特龙(例如，ZYTIGATM)；抗雄激素可以是氟他胺(例如，EULEXINTM)、比卡鲁胺(例如，CASODEXTM)、尼鲁米特(例如，NILANDRONTM)、恩杂鲁胺(例如，XTANDITM)和/或阿帕鲁胺(例如，ERLEADATM)；和/或雄激素抑制药物可以是雌激素和/或酮康唑(例如，NIZORALTM)。
一些实施方式包括用一种或多种NAMPT抗体治疗冠状病毒疾病2019(COVID-19)。COVID-19是由冠状病毒2(SARS-CoV-2)引起的严重急性呼吸道综合征。SARS-CoV-2的直径为60nm至140nm，并且具有范围为9nm至12nm的独特尖峰，使病毒粒子呈现出太阳日冕的外观。通过基因重组和变异，冠状病毒可以适应并感染新的宿主。SARS-CoV-2感染可能是无症状的，或者它可能引起各种各样的症状。示例性症状包括发烧、咳嗽、呼吸短促、虚弱、疲劳、恶心、呕吐以及味道和气味变化。不良结果包括弥漫性血管内凝血；发炎的肺组织和肺内皮细胞；深静脉血栓形成；肺栓塞；血栓性动脉并发症(例如肢体缺血；缺血性中风；心肌梗塞)；脓毒症；和多器官衰竭。Wiersinga等“Pathophysiology，Transmission，Diagnosis，and Treatment of Coronavirus Disease 2019(COVID-2019):A Review”，JAMA，doi:10.1001/jama.2020.12839(2020年7月10日在线公开)中更详细地讨论了SARS-CoV-2感染，其全部内容通过引用并入本文中。在一些实施方式中，本公开提供了通过向受试者施用有效量的抗NAMPT抗体或其抗原结合片段来治疗患有COVID-19的受试者(例如，诊断为COVID-19的受试者和/或显示COVID-19的一种或多种症状的受试者)的方法。
实施例
包括以下实施例仅用于说明的目的，而不是限制性的。
实施例1：抗人NAMPT单克隆抗体的产生
通过用重组胞外人NAMPT(hNAMPT；MBL International)免疫三只小鼠来开发抗NAMPT中和鼠抗体。小鼠4C6和小鼠589总共产生52个亲本克隆抗NAMPT抗体。通过ELISA评估鼠抗体与hNAMPT的结合。还通过分析抗体对hNAMPT诱导的NFκB磷酸化的影响来测试鼠抗体的体外中和。选择抗hNAMPT抗体AL-303和AL-310结合重组hNAMPT以及来自人肺动脉内皮细胞(HPAEC)的裂解物中的hNAMPT的能力。AL-303和AL-310也能够抑制hNAMPT诱导的NFκB磷酸化。AL-303进一步能够与重组小鼠NAMPT(mNAMPT)交叉反应，而AL-310不能。此外，如以下实施例4和5中所述的，对这些抗体进行体内测试。
AL-303
鼠抗hNAMPT抗体AL-303具有氨基酸序列如SEQ ID NO:54中所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:55中所示的轻链可变区。AL-303的重链可变区含有具有如SEQ IDNO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域。AL-303的轻链可变区含有具有如SEQID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
AL-310
鼠抗NAMPT抗体AL-310具有氨基酸序列如SEQ ID NO：56所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO：57所示的轻链可变区。AL-310的重链可变区含有具有如SEQ ID NO：19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO：20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO：21所示氨基酸序列的CDR3结构域。AL-310的轻链可变区含有具有如SEQ IDNO：6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO：7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO：22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
AL-303和AL-310的重链和轻链可变区以及CDR的氨基酸序列提供于表1中。
表1.鼠抗NAMPT抗体的序列
Figure BDA0003579371420000501
Figure BDA0003579371420000511
实施例2.通过鼠抗NAMPT抗体检测人和小鼠NAMPT
为了评估鼠抗NAMPT抗体AL-303和AL-310对人和小鼠NAMPT的免疫反应性，通过蛋白质印迹分析测试这些抗体对hNAMPT和mNAMPT的检测。还通过评估这些抗体检测重组hNAMPT和HPAEC细胞裂解物中的hNAMPT的能力来评估AL-303和AL-310与hNAMPT的免疫反应性。通过评估这些抗体检测重组mNAMPT、来自自发呼吸小鼠(“SB”)的裂解物中的mNAMPT、来自暴露于LPS的鼠肺的裂解物中的mNAMPT和来自鼠呼吸机诱导的肺损伤(VILI)模型的裂解物中的mNAMPT的能力，进一步测试AL-303AL-310与mNAMPT的免疫反应性。
图1中提供了来自相应蛋白质印迹分析的结果。如所示的，AL-303和AL-310与hNAMPT具有强免疫反应性(与其他抗体相比)。相比之下，这些抗体与mNAMPT的免疫反应性显著较弱。在测试的五种鼠抗体中，只有AL-303和AL-304(其含有与AL-303相同的序列)与重组mNAMPT具有免疫反应性，而所有抗体与重组hNAMPT和HPAEC细胞中的hNAMPT具有反应性。
实施例3.鼠抗NAMPT抗体对hNAMPT诱导的NFκB磷酸化的作用
在不存在或存在鼠抗NAMPT抗体AL-303、AL-304、AL-305、AL-309和AL-310的情况下，通过蛋白质印迹分析暴露于hNAMPT的细胞中的磷酸-NFκB(p-NFκB)表达，评估了这些抗体对hNAMPT诱导的NFκB磷酸化的作用。
将重组hNAMPT(1μg/mL)与介质、100μg/ml抗NAMPT多克隆(pAb)或100μg/mL鼠抗NAMPT抗体(AL-303、AL-304、AL-305、AL-309或AL-310)预混合30min。通过将细胞暴露于hNAMPT混合物1hr来刺激HPAEC细胞。将暴露于介质、100μg/mL抗NAMPT pAb或单独的100μg/mL鼠抗NAMPT抗体(AL-303、AL-304、AL-305、AL-309或AL-310)的未刺激细胞(“Unstim”)用作阴性对照。将暴露于TNF-α的HPAEC细胞用作阳性对照。使用p-NFκB特异性抗体通过蛋白质印迹分析评估了来自未刺激的细胞、hNAMPT刺激的细胞和TNF-α刺激的细胞的裂解物中的p-NFκB表达。蛋白质印迹分析的结果提供于图2中。
如图2所示，hNAMPT刺激的细胞中hNAMPT诱导的NFκB磷酸化，其在AL-303、AL-304、AL-305、AL-309或AL-310存在下显著减弱。虽然所有五种抗体都有效地减少了hNAMPT诱导的NFκB磷酸化，但对AL-303和AL-310观察到了最显著的作用。AL-304、AL-304、AL-305和AL-309是也在初始鼠筛选中获得的抗hNAMPT抗体。
实施例4.AL303、AL304和AL305在肺损伤模型中的体内测试
使用小鼠模型在体内测试了鼠抗NAMPT抗体AL-303、AL-304和AL-305治疗肺损伤的能力。
如图3中所述，C57/B6小鼠静脉内注射50μg、100μg或200μg鼠抗NAMPT抗体AL-303、AL-304或AL-305，或单独的介质。在抗NAMPT抗体注射后1小时，将小鼠暴露于40μg/mL气管内hNAMPT(Peprotech)。hNAMPT暴露后8小时，再次以相同浓度施用抗NAMPT抗体。对照小鼠注射介质并暴露于气管内hNAMPT，或注射介质而不暴露于气管内hNAMPT。在hNAMPT暴露后24hr处死所有动物，并通过分析支气管肺泡灌洗(BAL)蛋白的表达和表达BAL的多形核中性粒细胞(PMN)的计数来评估肺损伤。
评估结果提供于图4中。如图4中所述，在暴露于气管内hNAMPT的小鼠中诱导BAL蛋白的表达(图4A)和表达BAL的PMN的计数(图4B)。鼠抗NAMPT抗体AL-303、AL-304和AL-305有效地减少了hNAMPT介导的BAL PMN计数的诱导，并且hNAMPT诱导的BAL蛋白水平的增加被AL-303显著减弱。因此，如图4中所述，AL-303、AL-304和AL-305均有效地降低了hNAMPT诱导的鼠肺损伤，而用AL-303观察到最显著的作用。因此，选择AL-303用于随后的人源化。
实施例5.肺损伤中的AL-310的体内测试
使用小鼠模型在体内测试了鼠抗NAMPT抗体AL-310治疗肺损伤的能力。
如图5中所述，C57/B6小鼠静脉内注射10μg、25μg、50μg、100μg或200μg鼠抗NAMPT抗体AL-310、100μg抗NAMPT pAb或单独的介质。在抗体注射的同时，将小鼠暴露于1mg/kg气管内LPS。将暴露于气管内LPS并注射介质或pAb的小鼠用作阳性对照。将注射介质且未暴露于气管内LPS的小鼠用作阴性对照。在LPS暴露后6hr处死所有动物，并通过分析BAL蛋白水平的表达来评估肺损伤。
评估结果提供于图6中。如图6中所示，在暴露于气管内LPS的小鼠中诱导BAL蛋白的表达。鼠抗NAMPT抗体AL-310有效地降低了LPS介导的BAL蛋白水平的诱导，并且与用阳性对照观察到的效果相比，该效果实质上更显著。因此，图6显示AL-310有效地减少了LPS诱导的鼠肺损伤。因此，选择AL-310用于随后的人源化。
实施例6.抗NAMPT抗体AL-303的人源化
基于实施例2-4中描述的体外和体内测试的结果，选择鼠抗NAMPT抗体AL-303用于人源化。
1076人源化抗hNAMPT抗体
术语“1076”总体地是指抗hNAMPT抗体AL-303的人源化形式。具体地，将AL-303的VH和VL链的CDR移植到人重链和轻链受体序列上。
移植后，通过本领域熟知的方法，通过可变结构域的从头合成，或诱变寡核苷酸引物和聚合酶链反应，或两者，引入各种框架回复突变。对于每种CDR移植物的重链和/或轻链构建回复突变和其他突变的不同组合，以产生1076人源化抗hNMAPT抗体D-1076、G-1076、K-1076、N-1076、P-1076、V-1076和X-1076。
表2中提供了1076人源化抗hNMAPT抗体的重链和轻链可变区的氨基酸序列。表3提供了与鼠抗NAMPT抗体AL-303相比，1076人源化抗hNMAPT抗体D-1076、G-1076、K-1076、N-1076、P-1076、V-1076和X-1076的重链CDR的氨基酸序列的比对。表4提供了与鼠抗NAMPT抗体AL-303相比，1076人源化抗hNMAPT抗体D-1076、G-1076、K-1076、N-1076、P-1076、V-1076和X-1076的轻链CDR的氨基酸序列的比对。表3和表4中的空白格表示残基与AL-303相同。
D-1076
1076人源化抗hNMAPT抗体D-1076具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。D-1076的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于D-1076的重链，引入一个或多个回复突变和其他突变。D-1076的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
G-1076
1076人源化抗hNMAPT抗体G-1076具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。G-1076的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于G-1076的重链，引入一个或多个回复突变和其他突变。G-1076的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:12所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
K-1076
1076人源化抗hNMAPT抗体K-1076具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。K-1076的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于K-1076的重链，引入一个或多个回复突变和其他突变。K-1076的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:14所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
N-1076
1076人源化抗hNMAPT抗体N-1076具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。N-1076的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于N-1076的重链，引入一个或多个回复突变和其他突变。N-1076的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
P-1076
1076人源化抗hNMAPT抗体P-1076具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。P-1076的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于P-1076的重链，引入一个或多个回复突变和其他突变。P-1076的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:14所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
V-1076
1076人源化抗hNMAPT抗体V-1076具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。V-1076的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO：5所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于V-1076的重链，引入一个或多个回复突变和其他突变。V-1076的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO：11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO：12所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO：8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
X-1076
1076人源化抗hNMAPT抗体X-1076具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。X-1076的重链可变区含有具有如SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO：5所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于X-1076的重链，引入一个或多个回复突变和其他突变。X-1076的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO：6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO：7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO：8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
表2. 1076人源化抗hNAMPT抗体的序列
Figure BDA0003579371420000571
Figure BDA0003579371420000581
Figure BDA0003579371420000591
Figure BDA0003579371420000601
Figure BDA0003579371420000611
Figure BDA0003579371420000621
Figure BDA0003579371420000631
实施例7.抗hNAMPT抗体AL-310的人源化
基于实施例2-5中描述的体外和体内测试的结果，选择鼠抗NAMPT抗体AL-310用于人源化。
“1093”是指源自鼠抗NAMPT抗体AL-310的一组人源化抗体。通过应用人源化方法，将AL-310的VH和VL链的CDR序列移植到不同的人重链和轻链受体序列上。
通过将AL-310的相应VH和VL CDR移植到这些受体序列中，制备了CDR移植的、人源化的和修饰的VH和VL序列。
为了产生具有潜在框架回复突变的人源化抗体，通过本领域熟知的方法，通过可变结构域的从头合成或诱变寡核苷酸引物和聚合酶链反应，或两者，鉴定突变并引入CDR移植的抗体序列中。为每种CDR移植物的重链和/或轻链构建回复突变和其他突变的不同组合，以产生1093人源化抗hNMAPT抗体FF-1093、II-1093、NN-1093、PP-1093、SS-1093、UU-1093、XX-1093和ZZ-1093。
表5中提供了1093人源化抗hNMAPT抗体的重链和轻链可变区的氨基酸序列。表6提供了与鼠抗NAMPT抗体AL-310相比，1093人源化抗hNMAPT抗体FF-1093、II-1093、NN-1093、PP-1093、SS-1093、UU-1093、XX-1093和ZZ-1093的重链CDR的氨基酸序列的比对。表7提供了与鼠抗NAMPT抗体AL-310相比，1093人源化抗hNMAPT抗体FF-1093、II-1093、NN-1093、PP-1093、SS-1093、UU-1093、XX-1093和ZZ-1093的轻链CDR的氨基酸序列的比对。表6和7中的空白格表示残基与AL-310相同。
FF-1093
1093人源化抗hNMAPT抗体FF-1093具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO：18所示的氨基酸序列。FF-1093的重链可变区含有具有如SEQ ID NO：19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO：20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于FF-1093的重链，引入一个或多个回复突变和其他突变。FF-1093的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
II-1093
1093人源化抗hNMAPT抗体II-1093具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列。II-1093的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于II-1093的重链，引入一个或多个回复突变和其他突变。II-1093的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
NN-1093
1093人源化抗hNMAPT抗体NN-1093具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列。NN-1093的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于NN-1093的重链，引入一个或多个回复突变和其他突变。NN-1093的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
PP-1093
1093人源化抗hNMAPT抗体PP-1093具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列。PP-1093的重链可变区，其含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于PP-1093的重链，引入一个或多个回复突变和其他突变。PP-1093的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
SS-1093
1093人源化抗hNMAPT抗体SS-1093具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列。SS-1093的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于SS-1093的重链，引入一个或多个回复突变和其他突变。SS-1093的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
UU-1093
1093人源化抗hNMAPT抗体UU-1093具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列。UU-1093的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093的重链，引入一个或多个回复突变和其他突变。UU-1093的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
XX-1093
1093人源化抗hNMAPT抗体XX-1093具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列。XX-1093的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于XX-1093的重链，引入一个或多个回复突变和其他突变。XX-1093的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
ZZ-1093
1093人源化抗hNMAPT抗体ZZ-1093具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列。ZZ-1093的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于ZZ-1093的重链，引入一个或多个回复突变和其他突变。ZZ-1093的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO：7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO：22所示氨基酸序列的CDR3结构域。
表5. 1093人源化抗hNAMPT抗体的序列
Figure BDA0003579371420000681
Figure BDA0003579371420000691
Figure BDA0003579371420000701
Figure BDA0003579371420000711
Figure BDA0003579371420000721
Figure BDA0003579371420000731
Figure BDA0003579371420000741
实施例8.人源化抗hNAMPT抗体的表位作图
使用线性和构象表位作图两者对人源化抗NAMPT抗体K-1076(在实施例6中描述)和人源化抗NAMPT抗体NN-1093(在实施例7中描述)的表位作图。
使用基于Fmoc的固相肽合成来合成基于肽的肽模拟物的文库。为了产生线性肽模拟物文库，将人NAMPT的氨基酸序列(SEQ ID NO：60)在计算机上分成重叠片段，然后在固体支持物上合成。通过用专有的亲水性聚合物制剂接枝，然后使用二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三唑(HOBt)与叔丁氧基羰基-六亚甲基二胺(BocHMDA)反应，并随后使用三氟乙酸(TFA)裂解Boc-基团，获得了氨基官能化的聚丙烯支持物。通过定制改进的JANUS液体处理站(Perkin Elmer)，使用标准Fmoc-肽合成在氨基官能化的固体支持物上合成肽。
使用Pepscan的专有支架化学连接肽(CLIPS)技术进行结构模拟物的合成。CLIPS技术允许将肽结构化成单环、双环、三环、片状折叠、螺旋状折叠及其组合。CLIPS模板与半胱氨酸残基偶联。肽中多个半胱氨酸的侧链与一个或两个CLIPS模板偶联。例如，将0.5mM的P2 CLIPS(2，6-双(溴甲基)吡啶)溶液溶解于碳酸氢铵(20mM，pH 7.8)/乙腈(1∶3(v/v))中。将该溶液添加到肽阵列上。CLIPS模板与肽阵列(具有3μL孔的455孔板)的固相结合肽中存在的两个半胱氨酸的侧链结合。将肽阵列在溶液中轻轻振荡30至60分钟，同时完全覆盖在溶液中。最后，用过量的H2O充分洗涤肽阵列，并在70℃下在含有PBS(pH 7.2)中的1％SDS/0.1％2，2′-(亚乙二氧基)二乙硫醇的破坏缓冲液中超声处理30分钟，然后在H2O中超声处理另外45分钟。携带肽的T3 CLIPS以类似的方式制备，但具有三个半胱氨酸。
在基于Pepscan的ELISA中测试了抗体与每种合成肽的结合。将肽阵列与一抗溶液一起孵育(在4℃下过夜)。洗涤后，将肽阵列与1/1000稀释的适当检测抗体(抗体过氧化物酶缀合物(SBA))在25℃下孵育1小时。使用HRP缀合的山羊抗人抗体(Southern Biotech；目录号：2010-05)作为检测抗体。洗涤后，加入过氧化物酶底物2,2'-连氮基-二-3-乙基苯并噻唑啉磺酸盐(ABTS)和20μl/ml的3％H2O2。一小时后，测量显色。用电荷耦合器件(CCD)相机和图像处理系统定量显色。
从CCD相机获得的值在0至3000mAU的范围内，类似于标准96孔板ELISA读数器。将结果定量并存储到Peplab数据库中。偶尔含有气泡的孔导致假阳性值；因此，手动检查卡片，并将由气泡引起的任何值评分为0。
为了验证合成肽的质量，平行合成了一组单独的阳性和阴性对照肽。它们用商业抗体3C9A和57.9筛选(Posthumus等(J Virol 64：3304-3309，1990))。
使用盒须图、线性强度分布和热图分析进行数据分析和解释。
如下所述，合成了大小范围为9至30个氨基酸的肽的十个不同集合(集合1-集合10)。
集合1(LIN15)
集合1肽，在本文中也称为LIN15肽，是15个氨基酸长的线性肽，其源自NAMPT的靶序列，具有一个残基的偏移。
集合2(LIN15.AA)
集合2肽，在本文中也称为LIN15.AA肽，是15个氨基酸长的线性肽，其类似于集合1或LIN15肽，但第10和11位残基被Ala替代。天然Ala将出现在任一位置上时，其被Gly替代。
集合3(LIN30)
集合3肽，在本文中也称为LIN30肽，是30个氨基酸长的线性肽，其源自NAMPT的靶序列，具有一个残基的偏移。
集合4(LOOP7)
集合4肽，在本文中也称为LOOP7肽，是9个氨基酸长的约束肽。在位置2-8上是源自NAMPT的靶序列的7-mer肽，具有一个残基的偏移。将Cys残基插入位置1和9并通过mP2CLIPS连接以产生环模拟物。天然Cys被Cys-acm(表示为“2”)替换。
集合5(LOOP 15)
集合5肽，在本文中也称为LOOP 15肽，是17个氨基酸长的约束肽。在位置2-16上是衍生自NAMPT(SEQ ID NO:60)的靶序列的15-mer肽，具有一个残基的偏移。将Cys残基插入位置1和17并通过mMP2 CLIPS连接以产生环模拟物。天然Cys被Cys-acm(表示为“2”)替换。
集合6(LOOP15.AA)
集合6肽，在本文中也称为LOOP15.AA肽，是17个氨基酸长的约束肽，其类似于集合5或LOOP15肽，但位置10和11上的残基被Ala取代。在天然Ala将出现在任一位置上时，其被Gly替换。
集合7(LOOP25)
集合7肽，在本文中也称为LOOP 25肽，是27个氨基酸长的约束肽。在位置2-26上是衍生自NAMPT(SEQ ID NO:60)的靶序列的25-mer肽，具有一个残基的偏移。将Cys残基插入位置1和27并通过mP2 CLIPS连接以产生环模拟物。天然Cys被Cys-acm(表示为“2”)替换。
集合8(BET)
集合8肽，在本文中也称为BET肽，是22个氨基酸长的β-转角肽模拟物。在位置2-21上是源自NAMPT(SEQ ID NO:60)的靶序列的20-mer肽，具有一个残基的偏移。位置11和12上的残基被“PG”基序替换，以诱导β-转角形成。将Cys残基插入位置1和22并通过mP2 CLIPIS连接以稳定模拟物。天然Cys被Cys-acm(表示为“2”)替换。
集合9(HEL.CC)
集合9肽，在本文中也称为HEL.CC肽，是源自靶序列(NAMPT，SEQ ID NO：60)残基的22个氨基酸长的α-螺旋肽模拟物，具有一个残基的偏移。将Cys残基插入位置1和5上，并通过mP2 CLIPIS连接以使α-螺旋结构成核。天然Cys被Cys-acm(表示为“2”)替换。
集合10(HEL.IL)
集合10组，在本文中也称为HEL.IL肽，是源自靶序列(NAMPT，SEQ ID NO：60)残基的26个氨基酸长的α-螺旋肽模拟物，其中在序列中插入一个残基Leu和Ile残基的偏移，以促进螺旋二级结构而没有共价限制。
筛选细节
抗体结合取决于多种因素的组合，包括抗体浓度以及和ELISA缓冲液中竞争蛋白的量和性质。此外，预涂覆条件(在与实验样品孵育之前对肽阵列的特定处理)影响结合。这些细节总结在表8中。对于Pepscan缓冲液和预调节(SQ)，数字表示竞争蛋白(马血清和卵清蛋白的组合)的相对量。
表8.筛选细节
标记 稀释 样品缓冲液 预调节
K-1076(Ab-1076-HC2-LC5) 5ug/mL 10％SQ 10％SQ
NN-1093(NN-1093-HC3-LC3) 2ug/mL 1％SQ 1％SQ
对于这个研究中的两种抗体，我们观察到在整个NAMPT序列中的各种不同区域中的结合信号。这表明两种抗体的表位是不连续表位。观察到的所有信号对于抗体是特异性的，因为与单独二抗一起孵育不会在阵列上产生任何信号。对于Ab-1076-HC2-LC5，源自重叠肽序列的核心序列似乎形成跨越NAMPT二聚体内的两个单体的结合界面。特别是在LIN30模拟物的图中，可以观察到优势推定结合位点，其在结构中被源自较低强度峰的其他序列包围。抗体的试验性核心表位列于下文中。两种抗体结合NAMPT的二聚形式。
两个序列的鉴定表位候选物显示出显著量的重现序列相似性(例如17SYKVTHYKQYPPNTSKVYSYFECREKKT44(SEQ ID NO：61)vs.162ATNSREQKK170(SEQ ID NO：63)，29NTSKVYSYFECREKKTENSKLRK51(SEQ ID NO：72)vs.332FPVTENSKGYK342(SEQ ID NO：67)，和216KGTDTVAGLALIKKYYGTK 234(SEQ ID NO：75)vs.316NPLDTVLKVLEILGKK 331(SEQ ID NO：76)。
表9.这个研究中发现的主要表位候选物的列表。对于线性和构象肽阵列，最佳候 选物基于至少2X的中值强度值的强度。
Figure BDA0003579371420000791
Figure BDA0003579371420000801
实施例9.人源化抗hNAMPT抗体的表征
对实施例6中描述的1076人源化抗hNAMPT抗体和实施例7中描述的1093人源化抗hNAMPT抗体进行体外和体内测试以选择先导人源化抗hNAMPT抗体。
人源化抗hNAMPT抗体对hNAMPT诱导的炎性信号传导的作用
通过评估在不存在或存在以下这些抗体的情况下暴露于hNAMPT的细胞中的NFκB激活来评估1093人源化抗hNAMPT抗体CC-1093、KK-1093、RR-1093、UU-1093和XX-1093对hNAMPT诱导的炎性信号传导的作用。
将重组hNAMPT(1.5μg/mL)与介质或100μg/mL的1093人源化抗hNAMPT抗体(CC-1093、KK-1093、RR-1093、UU-1093或XX-1093)预混合。通过将细胞暴露于hNAMPT混合物1hr来刺激人肺内皮细胞(EC)。未暴露于hNAMPT混合物的未刺激的细胞用作阴性对照(“NC”)。暴露于与单独介质预混合的hNAMPT的刺激的细胞(“--”)用作阳性对照。通过评估NFκB荧光素酶活性(NFκB-SecNanoluc)来评估细胞中的NFκB激活(对于每种mAb，n＝3-4)。荧光素酶测定的结果提供于图7A中。
如图7A所示，hNAMPT在hNAMPT刺激的细胞中诱导NFκB激活，其在人源化抗hNAMPT抗体CC-1093、KK-1093、RR-1093、UU-1093或XX-1093存在下显著减弱。虽然所有五种抗体均有效降低hHNAMPT诱导的NFκB激活，但用UU-1093和XX-1093观察到最显著的作用。
人源化抗hNAMPT抗体对hNAMPT诱导的EC屏障完整性下降的作用
EC电阻是肺EC屏障完整性的反映。因此，通过评估在不存在或存在以下这些抗体的情况下暴露于hNAMPT的EC中的电阻来评估1093人源化抗hNAMPT抗体UU-1093和1076人源化抗hNAMPT抗体H-1076、P-1076、N-1076和D-1076对hNAMPT诱导的EC屏障完整性下降的影响。
将重组hNAMPT(1.5μg/mL)与单独的载体、抗NAMPT pAb或人源化抗hNAMPT抗体(UU-1093、H-1076、P-1076、N-1076或D-1076)预混合。通过将细胞暴露于hNAMPT混合物1hr来刺激人肺EC。暴露于与单独的介质预混合的hNAMPT或暴露于与pAb预混的hNAMPT的刺激的细胞用作对照。作为EC屏障完整性的读数来评估EC电阻。图7B中提供了测试结果。
如图7B所示，暴露于与每种人源化抗hNAMPT抗体预混合的hNAMPT的EC显示出相对于对照细胞的EC屏障活性的实质性诱导。因此，在1076和1093人源化抗hNAMPT抗体存在下，hNAMPT介导的EC屏障活性下降被有效逆转。
人源化抗hNAMPT抗体在肺损伤中的体内测试
使用小鼠和大鼠肺损伤模型在体内测试了1076人源化抗hNAMPT抗体(V-1076、N-1076、K-1076和P-1076)和1093人源化抗hNAMPT抗体(SS-1093、CC-1093、XX-1093和UU-1093)治疗肺损伤的能力。
为了评估人源化抗hNAMPT抗体对肺损伤的鼠模型的作用，将V-1076、N-1076、K-1076、P-1076、SS-1093、CC-1093、XX-1093或UU-1093以0.4mg/kg的剂量静脉内注射至暴露于LPS 8hr并暴露于VILI最后4hr的小鼠。注射介质并暴露于hNAMPT和VILI的小鼠作为对照。通过分析BAL蛋白的表达和BAL表达细胞的计数来评估小鼠的肺损伤。此外，通过H&E染色评估肺组织中的水肿和炎性细胞浸润，作为肺损伤的读数。在图8A、8B和8D中提供了来自该肺损伤的“双击”模型的结果。
如图8A中所述的，与对照小鼠相比，BAL蛋白水平(图8A，左图)和BAL表达细胞的计数(图8A，右图)在注射了任一种1076人源化抗hNAMPT抗体的小鼠中被有效降低。尽管在该“双击”鼠模型中，测试的所有1076人源化抗hNAMPT抗体均有效降低了肺损伤，但使用P-1076观察到最显著的作用。
如图8B中所述的，与对照小鼠相比，BAL蛋白水平(图8B，左图)和BAL表达细胞的计数(图8B，右图)在注射了任一种1093人源化抗hNAMPT抗体的小鼠中被有效降低。尽管在该“双击”鼠模型中，测试的所有1093人源化抗hNAMPT抗体均有效降低了肺损伤，但使用UU-1093观察到最显著的作用。此外，如图8D中所述的，通过来自注射了UU-1093的小鼠的肺组织中减少的炎性细胞浸润和减少的水肿进一步反映出UU-1093在双击肺损伤模型中的保护作用。
为了评估人源化抗hNAMPT抗体对肺损伤的大鼠模型的作用，将40mg/kg、80mg/kg或160mg/kg的P-1076静脉内注射至暴露于LPS的Sprague Dawley大鼠。注射载体并暴露于LPS的大鼠用作阳性对照。注射单独介质且未暴露于LPS的大鼠用作阴性对照。通过分析BAL蛋白的表达和BAL表达细胞的计数来评估大鼠的肺损伤。图8C中提供了来自该肺损伤大鼠模型的结果。
如图8C中所述的，与对照小鼠(注射介质并暴露于LPS)相比，注射了人源化抗hNAMPT抗体P-1076的小鼠中，BAL蛋白水平(图8C，左图)和BAL表达细胞的计数(图8C，右图)被有效降低。
因此，如图8中所述的，尽管所有测试的人源化抗hNAMPT抗体均有效地降低了体内肺损伤模型中的肺损伤，但使用P-1076和UU-1093观察到最显著的作用。因此，选择P-1076和UU-1093作为先导人源化和抗hNAMPT抗体，并进一步修饰以产生改进的抗hNAMPT抗体。
实施例10.人源化抗hNAMPT抗体P-1076的修饰
基于实施例9中描述的体外和体内测试的结果，选择抗hNAMPT抗体P-1076用于进一步修饰以产生改进的1076抗hNAMPT抗体。
P-1076-mod人源化抗hNAMPT抗体
P-1076-mod是指通过修饰1076人源化抗hNAMPT抗体P-1076产生的人源化抗hNAMPT抗体。
为了产生改进的P-1076-mod抗hNAMPT抗体，通过本领域熟知的方法，通过可变结构域的从头合成，或诱变寡核苷酸引物和聚合酶链式反应，或两者将一个或多个突变引入P-1076序列中。引入这些突变以去除氧化位点、减少或去除脱酰胺、去除潜在的切割或片段化位点、去除潜在的T细胞表位和/或减少潜在的T细胞表位的结合。为P-1076的重链和/或轻链构建回复突变和其他突变的不同组合，以产生P-1076-mod抗hNAMPT抗体P-1076-mod1、P-1076-mod2、P-1076-mod3、P-1076-mod4、P-1076-mod5、P-1076-mod6、P-1076-mod7、P-1076-mod8、P-1076-mod9、P-1076-mod10和P-1076-mod11。
表10中提供了经修饰的P-1076-mod抗hNAMPT抗体的重链和轻链可变区的氨基酸序列。在表10中，突变残基为粗体。表11提供了与P-1076相比，修饰的P-1076-mod抗hNAMPT抗体P-1076-modl、P-1076-mod2、P-1076-mod3、P-1076-mod4、P-1076-mod5、P-1076-mod6、P-1076-mod7、P-1076-mod8、P-1076-mod9、P-1076-mod10和P-1076-mod11的重链CDR的氨基酸序列的比对。表12提供了与P-1076相比，修饰的P-1076-mod抗hNAMPT抗体P-1076-mod1、P-1076-mod2、P-1076-mod3、P-1076-mod4、P-1076-mod5、P-1076-mod6、P-1076-mod7、P-1076-mod8、P-1076-mod9、P-1076-mod10和P-1076-mod11的轻链CDR的氨基酸序列的比对。表11和12中的空白格表示残基与P-1076相同。表13中提供了经修饰的P-1076-mod抗hNAMPT抗体的生物物理特征的总结。
P-1076-mod1
P-1076-mod抗hNAMPT抗体P-1076-mod1具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列。P-1076-mod1的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:29所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于P-1076-mod1的重链，将D至E突变引入P-1076 VH CDR2中以除去潜在的切割或片段化位点。P-1076-mod1的轻链可变区包含具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:14所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于P-1076-mod1的轻链，将L至V突变引入P-1076VL的框架区中以去除潜在的T细胞表位。
P-1076-mod2
P-1076-mod抗hNAMPT抗体P-1076-mod2具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列，所示轻链可变区具有如SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列。P-1076-mod2的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:29所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于P-1076-mod2的重链，将D至E突变引入P-1076 VH CDR2中以除去潜在的切割或片段化位点。P-1076-mod2的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:14所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于P-1076-mod2的轻链，将L至I突变引入P-1076VL的框架区中以去除潜在的T细胞表位。
P-1076-mod3
P-1076-mod抗hNAMPT抗体P-1076-mod3具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列。P-1076-mod3的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:29所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于P-1076-mod3的重链，将D至E突变引入P-1076 VH CDR2中以除去潜在的切割或片段化位点。P-1076-mod3的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:33所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于P-1076-mod3的轻链，将L至V突变引入P-1076VL的框架区中，并将L至G突变引入P-1076 VL CDR2中，以除去潜在的T细胞表位。
P-1076-mod4
P-1076-mod抗hNAMPT抗体P-1076-mod4具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列。P-1076-mod4的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:29所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于P-1076-mod4的重链，将D至E突变引入P-1076 VH CDR2中以除去潜在的切割或片段化位点。P-1076-mod4的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:35所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于P-1076-mod4的轻链，将L至V突变引入P-1076VL的框架区中，并将L至E突变引入P-1076 VL CDR2中，以除去潜在的T细胞表位。
P-1076-mod5
P-1076-mod抗hNAMPT抗体P-1076-mod5具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区如SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列。P-1076-mod5的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:29所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于P-1076-mod5的重链，将D至E突变引入P-1076 VH CDR2中以除去潜在的切割或片段化位点。P-1076-mod5的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:37所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ IDNO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于P-1076-mod5的轻链，将L至I突变引入P-1076 VL的框架区中以去除潜在的T细胞表位，并将L至E突变引入P-1076 VL CDR2中以减少潜在的T细胞表位的结合。
P-1076-mod6
P-1076-mod抗-hNAMPT抗体P-1076-mod6具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列。P-1076-mod6的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域。P-1076-mod6的重链与P-1076 VH相同。P-1076-mod6的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:14所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于P-1076-mod5的轻链，将L至V突变引入P-1076 VL的框架区中以去除潜在的T细胞表位。
P-1076-mod7
P-1076-mod抗hNAMPT抗体P-1076-Mod7具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列。P-1076-mod7的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域。P-1076-Mod7的重链与P-1076 VH相同。P-1076-mod7的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:14所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于P-1076-mod7的轻链，将L至I突变引入P-1076 VL的框架区中以去除潜在的T细胞表位。
P-1076-mod8
P-1076-mod抗hNAMPT抗体P-1076-mod8具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列。P-1076-mod8的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域。P-1076-mod8的重链与P-1076 VH相同。P-1076-mod8的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:33所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于P-1076-mod8的轻链，将L至V突变引入P-1076 VL的框架区中，并将L至G突变引入P-1076 VL CDR2中，以除去潜在的T细胞表位。
P-1076-mod9
P-1076-mod抗hNAMPT抗体P-1076-mod9具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列。P-1076-Mod9的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域。P-1076-mod9的重链与P-1076 VH相同。P-1076-mod9的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:35所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于P-1076-mod9的轻链，将L至V突变引入P-1076 VL的框架区中，并将L至E突变引入P-1076 VL CDR2中，以除去潜在的T细胞表位。
P-1076-mod10
P-1076-mod抗hNAMPT抗体P-1076-mod10具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:15所示方氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列。P-1076-Mod10的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域。P-1076-mod10的重链与P-1076 VH相同。P-1076-Mod10的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:37所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于P-1076-mod10的轻链，将L至I突变引入P-1076 VL的框架区中，以去除潜在的T-细胞表位，并将L至V突变引入P-1076 VL CDR2中，以降低潜在的T-细胞表位的结合。
P-1076-mod11
修饰的P-1076-mod抗hNAMPT抗体P-1076-mod11具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列。P-1076-mod11的重链可变区含有具有如SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO：29所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO：5所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于P-1076-mod11的重链，将D至E突变引入P-1076 VHCDR2中以除去潜在的切割或片段化位点。P-1076-mod11的轻链可变区含有具有如SEQ IDNO：11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO：14所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO：8所示氨基酸序列的CDR3结构域。P-1076-mod11的轻链与P-1076 VL相同。
表10.P-1076-mod抗hNAMPT抗体的序列
Figure BDA0003579371420000891
Figure BDA0003579371420000901
Figure BDA0003579371420000911
Figure BDA0003579371420000921
Figure BDA0003579371420000931
Figure BDA0003579371420000941
*在表10中，突变残基为粗体。
Figure BDA0003579371420000951
Figure BDA0003579371420000961
表13.P-1076-mod抗-hNAMPT抗体的生物物理特征
Figure BDA0003579371420000971
实施例11.人源化抗hNAMPT抗体UU-1093的修饰
基于实施例9中描述的体外和体内测试的结果，选择抗hNAMPT抗体UU-1093进行进一步修饰以产生修饰的1093抗hNAMPT抗体。
UU-1093-mod人源化抗hNAMPT抗体
UU-1093-mod是指通过修饰1093人源化抗hNAMPT抗体UU-1093产生的人源化抗hNAMPT抗体。
为了产生改进的UU-1093-mod抗hNAMPT抗体，通过本领域熟知的方法，通过可变结构域的从头合成，或诱变寡核苷酸引物和聚合酶链式反应，或两者，将一个或多个突变引入UU-1093氨基酸序列中。引入这些突变以去除氧化位点、减少或去除脱酰胺、去除潜在的切割或片段化位点、去除潜在的T细胞表位和/或减少潜在的T细胞表位的结合。针对UU-1093的重链和/或轻链构建回复突变和其他突变的不同组合，以产生修饰的UU-1093-mod抗hNAMPT抗体UU-1093-mod1、UU-1093-mod2、UU-1093-mod3、UU-1093-mod4、UU-1093-mod5、UU-1093-mod6、UU-1093-mod7、UU-1093-mod8、UU-1093-mod9、UU-1093-mod10、UU-1093-mod11、UU-1093-mod12、UU-1093-mod13、UU-1093-mod14、UU-1093-mod15、UU-1093-mod16、UU-1093-mod17、UU-1093-mod18和UU-1093-mod19。
表14中提供了修饰的P-1076-mod抗hNAMPT抗体的重链和轻链可变区的氨基酸序列。在表14中，突变的残基为粗体。表15提供了修饰的UU-1093-mod抗hNAMPT抗体UU-1093-mod1、UU-1093-mod2、UU-1093-mod3、UU-1093-mod4、UU-1093-mod5、UU-1093-mod6、UU-1093-mod7、UU-1093-mod8、UU-1093-mod9、UU-1093-mod10、UU-1093-mod11、UU-1093-mod12、UU-1093-mod13、UU-1093-mod14、UU-1093-mod15、UU-1093-mod16、UU-1093-mod17、UU-1093-mod18和UU-1093-mod19与UU-1093相比的重链CDR的氨基酸序列的比对。表16提供了修饰的UU-1093-mod抗hNAMPT抗体UU-1093-mod1、UU-1093-mod2、UU-1093-mod3、UU-1093-mod4、UU-1093-mod5、UU-1093-mod6、UU-1093-mod7、UU-1093-mod8、UU-1093-mod9、UU-1093-mod10、UU-1093-mod11、UU-1093-mod12、UU-1093-mod13、UU-1093-mod14、UU-1093-mod15、UU-1093-mod16、UU-1093-mod17、UU-1093-mod18和UU-1093-mod19与UU-1093相比的轻链CDR的氨基酸序列的比对。表15和16中的空白格表示残基与UU-1093相同。
UU-1093-mod1
UU-1093-mod抗hNAMPT抗体UU-1093-mod1具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列。UU-1093-mod1的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod1的重链，将D至E突变引入UU-1093 VH CDR2中以去除潜在的切割或片段化位点。UU-1093-mod1的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod1的轻链，将N至Q突变引入UU-1093 VL CDR1中以减少或去除脱酰胺化。
UU-1093-mod2
UU-1093-mod抗hNAMPT抗体UU-1093-mod2具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列。UU-1093-mod2的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:41所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod2的重链，将D至E突变引入UU-1093 VH CDR2中以去除潜在的切割或片段化位点，并将S至T突变引入UU-1093VH CDR3中以去除潜在的T细胞表位。UU-1093-mod2的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod2的轻链，将N至Q突变引入UU-1093 VL CDR1中以减少或去除脱酰胺化。
UU-1093-mod3
UU-1093-mod抗hNAMPT抗体UU-1093-mod3具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列。UU-1093-mod3的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:43所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:44所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod3的重链，将M至I突变引入UU-1093 VH CDR1中以除去氧化位点；将M至V突变引入UU-1093 VH框架区2中以除去氧化位点和潜在的T细胞表位；将D至E突变引入UU-1093 VH CDR2中以去除潜在的切割或片段化位点；将M至V突变引入UU-1093 VH框架区3中以除去氧化位点；并且将K至R突变引入UU-1093 VH CDR3中以减少潜在的T细胞表位的结合。UU-1093-mod3的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ IDNO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod3的轻链，将N至Q突变引入UU-1093VL CDR1中以减少或去除脱酰胺化。
UU-1093-mod4
UU-1093-mod抗hNAMPT抗体UU-1093-mod4具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列。UU-1093-mod4的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:46所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:41所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod4的重链，将W至F突变和M至I突变引入UU-1093 VH CDR1中以除去氧化位点；将M至V突变引入UU-1093 VH框架区2中以除去氧化位点和潜在的T细胞表位；将D至E突变引入UU-1093 VH CDR2中以去除潜在的切割或片段化位点；将M至V突变引入UU-1093 VH框架区3中以去除氧化位点；并且将S至T突变引入UU-1093VH CDR3中以去除潜在的T细胞表位。UU-1093-mod4的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod4的轻链，将N至Q突变引入UU-1093 VL CDR1中以减少或去除脱酰胺化。
UU-1093-mod5
UU-1093-mod抗hNAMPT抗体UU-1093-mod5具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。UU-1093-mod5的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod5的重链，将D至E突变引入UU-1093 VH CDR2中以去除潜在的切割或片段化位点。UU-1093-mod5的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:49所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:50所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod5的轻链，将G至A突变引入UU-1093 VL CDR1中以减少或去除脱酰胺化；将I至V突变引入UU-1093 VL框架区2中以减少潜在的T细胞表位的结合；将M至V突变引入UU-1093 VL CDR2中以减少潜在的T细胞表位的结合并去除氧化位点；并且将I至V突变引入UU-1093 VH框架区3中以减少潜在的T细胞表位的结合。
UU-1093-mod6
UU-1093-mod抗hNAMPT抗体UU-1093-mod6具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。UU-1093-mod6的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:41所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod6的重链，将D至E突变引入UU-1093 VH CDR2中以去除潜在的切割或片段化位点，并将S至T突变引入UU-1093 VH CDR3中以去除潜在的T细胞表位。UU-1093-mod6的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:49所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:50所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod6的轻链，将G至A突变引入UU-1093 VL CDR1中以减少或去除脱酰胺化；将I至V突变引入UU-1093 VL框架区2中以减少潜在的T细胞表位的结合；将M至V突变引入UU-1093 VL CDR2中以减少潜在的T细胞表位的结合并去除氧化位点；并且将I至V突变引入UU-1093 VH框架区3中以减少潜在的T细胞表位的结合。
UU-1093-mod7
UU-1093-mod抗hNAMPT抗体UU-1093-mod7具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。UU-1093-mod7的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:43所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:44所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod7的重链，将M至I突变引入UU-1093 VH CDR1中以除去氧化位点；将M至V突变引入UU-1093 VH框架区2中以除去氧化位点和潜在的T细胞表位；将D至E突变引入UU-1093 VH CDR2中以去除潜在的切割或片段化位点；将M至V突变引入UU-1093 VH框架区3中以除去氧化位点；并且将K至R突变引入UU-1093 VH CDR3中以减少潜在的T细胞表位的结合。UU-1093-mod7的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:49所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:50所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ IDNO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod7的轻链，将G至A突变引入UU-1093VL CDR1中以减少或去除脱酰胺化；将I至V突变引入UU-1093 VL框架区2中以减少潜在的T细胞表位的结合；将M至V突变引入UU-1093 VL CDR2中以减少潜在的T细胞表位的结合并去除氧化位点；并且将I至V突变引入UU-1093 VH框架区3中以降低的潜在T细胞表位的结合。
UU-1093-mod8
UU-1093-mod抗hNAMPT抗体UU-1093-mod8具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。UU-1093-mod8的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:46所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:41所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod8的重链，将W至F突变和M至I突变引入UU-1093 VH CDR1中以去除氧化位点；将M至V突变引入UU-1093 VH框架区2中以除去氧化位点和潜在的T细胞表位；将D至E突变引入UU-1093 VH CDR2中以去除潜在的切割或片段化位点；将M至V突变引入UU-1093 VH框架区3中以除去氧化位点；并且将S至T突变引入UU-1093VH CDR3中以去除潜在的T细胞表位。UU-1093-mod8的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:49所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:50所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod8的轻链，将G至A突变引入UU-1093 VL CDR1中以减少或去除脱酰胺化；将I至V突变引入UU-1093 VL框架区2中以减少潜在的T细胞表位的结合；将M至V突变引入UU-1093 VL CDR2中以减少潜在的T细胞表位的结合并去除氧化位点；并且将I至V突变引入UU-1093 VH框架区3中以减少潜在的T细胞表位的结合。
UU-1093-mod9
UU-1093-mod抗hNAMPT抗体UU-1093-mod9具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列。UU-1093-mod9的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod9的重链，将D至E突变引入UU-1093 VH CDR2中以去除潜在的切割或片段化位点。UU-1093-mod9的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:52所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:53所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod9的轻链，将N至Q突变引入UU-1093 VL CDR1中以减少或去除脱酰胺化；将I至V突变引入UU-1093 VL框架区2中以去除潜在的T细胞表位；将M至V突变引入UU-1093 VL CDR2中以去除潜在的T细胞表位并去除氧化位点；将A至G突变引入UU-1093 VL CDR2中以去除潜在的T细胞表位；并且将W至F突变引入UU-1093 VL CDR3中以去除氧化位点。
UU-1093-mod10
UU-1093-mod抗hNAMPT抗体UU-1093-mod10具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列，轻链可变区具有如SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列。UU-1093-Mod10的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:41所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod10的重链，将D至E突变引入UU-1093 VHCDR2中以去除潜在的切割或片段化位点，并将S至T突变引入UU-1093 VH CDR3中以去除潜在的T细胞表位。UU-1093-Mod10的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:52所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:53所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod10的轻链，将N至Q突变引入UU-1093 VLCDR1中以减少或去除脱酰胺化；将I至V突变引入UU-1093 VL框架区2中以去除潜在的T细胞表位；将M至V突变引入UU-1093 VL CDR2中以去除潜在的T细胞表位并去除氧化位点；将A至G突变引入UU-1093 VL CDR2中以去除潜在的T细胞表位；并且将W至F突变引入UU-1093 VLCDR3中以去除氧化位点。
UU-1093-mod11
UU-1093-mod抗hNAMPT抗体UU-1093-mod11具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列。UU-1093-mod11的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:43所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:44所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod11的重链，将M至I突变引入UU-1093 VHCDR1中以除去氧化位点；将M至V突变引入UU-1093 VH框架区2中以除去氧化位点和潜在的T细胞表位；将D至E突变引入UU-1093 VH CDR2中以去除潜在的切割或片段化位点；将M至V突变引入UU-1093 VH框架区3中以除去氧化位点；并且将K至R突变引入UU-1093 VH CDR3中以减少潜在的T细胞表位的结合。UU-1093-mod11的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:52所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:53所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod11的轻链，将N至Q突变引入UU-1093 VL CDR1中以减少或去除脱酰胺化；将I至V突变引入UU-1093 VL框架区2中以去除潜在的T细胞表位；将M至V突变引入UU-1093 VL CDR2中以去除潜在的T细胞表位并去除氧化位点；将A至G突变引入UU-1093 VL CDR2中以去除潜在的T细胞表位；并且将W至F突变引入UU-1093 VL CDR3中以去除氧化位点。
UU-1093-mod12
UU-1093-mod抗hNAMPT抗体UU-1093-mod12具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列。UU-1093-mod12的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:46所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:41所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod12的重链，将W至F突变和M至I突变引入UU-1093 VH CDR1中以除去氧化位点；将M至V突变引入UU-1093 VH框架区2中以除去氧化位点和潜在的T细胞表位；将D至E突变引入UU-1093 VH CDR2中以去除潜在的切割或片段化位点；将M至V突变引入UU-1093 VH框架区3中以除去氧化位点；并且将S至T突变引入UU-1093VH CDR3中以去除潜在的T细胞表位。UU-1093-mod12的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:52所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:53所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod12的轻链，将N至Q突变引入UU-1093 VL CDR1中以减少或去除脱酰胺化；将I至V突变引入UU-1093 VL框架区2中以去除潜在的T细胞表位；将M至V突变引入UU-1093 VL CDR2中以去除潜在的T细胞表位并去除氧化位点；将A至G突变引入UU-1093 VL CDR2中以去除潜在的T细胞表位；并且将W至F突变引入UU-1093 VL CDR3中以去除氧化位点。
UU-1093-mod13
UU-1093-mod抗hNAMPT抗体UU-1093-mod13具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列。UU-1093-mod13的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod13的重链，将D至E突变引入UU-1093 VHCDR2中以除去潜在的切割或片段化位点。UU-1093-mod13的轻链可变区含有具有如SEQ IDNO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。UU-1093-mod13的轻链与UU-1093 VL相同。
UU-1093-mod14
UU-1093-mod抗hNAMPT抗体UU-1093-mod14具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列UU-1093-Mod14的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:41所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod14的重链，将D至E突变引入到UU-1093 VHCDR2中以去除潜在的切割或片段化位点，并且将S至T突变引入UU-1093 VH CDR3中以去除潜在的T细胞表位。UU-1093-mod14的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。UU-1093-mod14的轻链与UU-1093 VL相同。
UU-1093-mod15
UU-1093-mod抗hNAMPT抗体UU-1093-mod15具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列。UU-1093-mod15的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:43所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:44所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod15的重链，将M至I突变引入UU-1093 VHCDR1中以除去氧化位点；将M至V突变引入UU-1093 VH框架区2中以除去氧化位点和潜在的T细胞表位；将D至E突变引入UU-1093 VH CDR2中以去除潜在的切割或片段化位点；将M至V突变引入UU-1093 VH框架区3中以除去氧化位点；并且将K至R突变引入UU-1093 VH CDR3中以减少潜在的T细胞表位的结合。UU-1093-mod15的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。UU-1093-mod15的轻链与UU-1093 VL相同。
UU-1093-mod16
UU-1093-mod抗hNAMPT抗体U-1093-mod16具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列。UU-1093-Mod16的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:46所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:39所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:41所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod16的重链，将W至F突变和M至I突变引入UU-1093 VH CDR1中以除去氧化位点；将M至V突变引入UU-1093 VH框架区2中以除去氧化位点和潜在的T细胞表位；将D至E突变引入UU-1093 VH CDR2中以去除潜在的切割或片段化位点；将M至V突变引入UU-1093 VH框架区3中以除去氧化位点；并且将S至T突变引入UU-1093VH CDR3中以去除潜在的T细胞表位。UU-1093-Mod16的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。UU-1093-mod16的轻链与UU-1093 VL相同。
UU-1093-mod17
U-1093-mod抗hNAMPT抗体UU-1093-mod17具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列。UU-1093-mod17的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域。UU-1093-mod17的重链与UU-1093 VH相同。UU-1093-mod17的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod17的轻链，将N至Q突变引入UU-1093 VL CDR1中以减少或去除脱酰胺化。
UU-1093-mod18
UU-1093-mod抗hNAMPT抗体UU-1093-mod18具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。UU-1093-mod18的重链可变区含有具有如SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO:20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR3结构域。UU-1093-mod18的重链与UU-1093 VH是相同的。UU-1093-mod18的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO:49所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQID NO:50所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod18的轻链，将G至A突变引入UU-1093 VL CDR1中以减少或去除脱酰胺化；将I至V突变引入UU-1093 VL框架区2中以减少潜在的T细胞表位的结合；将M至V突变引入UU-1093 VL CDR2中以减少潜在T细胞表位的结合并去除氧化位点；并且将I至V突变引入UU-1093 VH框架区3中以减少潜在的T细胞表位的结合。
UU-1093-mod19
UU-1093-mod抗hNAMPT抗体UU-1093-mod19具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO：26的所示氨基酸序列，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO：51所示的氨基酸序列。UU-1093-mod19的重链可变区含有具有如SEQ ID NO：19所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO：20所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO：21所示氨基酸序列的CDR3结构域。UU-1093-mod17的重链与UU-1093 VH相同。UU-1093-mod19的轻链可变区含有具有如SEQ ID NO：11所示氨基酸序列的CDR1结构域、具有如SEQ ID NO：52所示氨基酸序列的CDR2结构域和具有如SEQ ID NO：53所示氨基酸序列的CDR3结构域。对于UU-1093-mod19的轻链，将N至Q突变引入UU-1093 VL CDR1中以减少或去除脱酰胺化；将I至V突变引入UU-1093 VL框架区2中以去除潜在的T细胞表位；将M至V突变引入UU-1093 VLCDR2中以去除潜在的T细胞表位并去除氧化位点；将A至G突变引入UU-1093 VL CDR2中以去除潜在的T细胞表位；并且将W至F突变引入UU-1093 VL CDR3中以去除氧化位点。
表14.改进的UU-1093-mod抗hNAMPT抗体的氨基酸序列
Figure BDA0003579371420001101
Figure BDA0003579371420001111
Figure BDA0003579371420001121
Figure BDA0003579371420001131
Figure BDA0003579371420001141
Figure BDA0003579371420001151
Figure BDA0003579371420001161
Figure BDA0003579371420001171
Figure BDA0003579371420001181
Figure BDA0003579371420001191
Figure BDA0003579371420001201
Figure BDA0003579371420001211
在表14中，突变的残基为粗体。
Figure BDA0003579371420001221
Figure BDA0003579371420001231
Figure BDA0003579371420001241
实施例12.人侵袭性PCa中的NAMPT组织表达
为了评估NAMPT在前列腺癌(PCa)侵袭性和进展中的作用，在PCa组织中研究了NAMPT表达。
通过免疫组织化学(IHC)染色评估在正常前列腺组织、局限于前列腺且没有包膜侵入的前列腺腺癌以及具有包膜侵入前列腺周围脂肪组织的前列腺腺癌中的NAMPT表达。代表性显微照片提供于图9A-9C中。另外，通过IHC染色评估良性前列腺组织、来自患有局限于器官的疾病(T2疾病，n＝12)的PCa患者的组织和来自患有包膜侵入疾病(T3疾病，n＝14)的PCa患者的组织中的NAMPT表达；累积分析提供于图9D中。
如图9所示，正常和PCa组织的IHC分析显示在正常前列腺组织中基本上不存在NAMPT表达(图9A)，并且在局限于前列腺且没有包膜侵入的前列腺腺癌中NAMPT的最小表达(图9B)。相比之下，包膜侵入前列腺周围脂肪组织中的前列腺腺癌显示出显著稳定的NAMPT染色(图9C)。此外，良性前列腺组织以及来自26名患有T2和T3疾病的PCa患者的组织的比较分析显示NAMPT的表达增加及PCa侵袭性增加(图9D)。因此，在人的侵袭性PCa中观察到NAMPT表达增加。
实施例13.放射暴露对NAMPT表达的影响
放疗是PCA疗法的支柱。由于细胞外NAMPT(eNAMPT)在先天免疫中作为损伤相关分子模式蛋白(DAMP)起作用，因此通过评估放射暴露的鼠和人组织中NAMPT的表达来评价放射对NAMPT表达的影响。
为了评估放射诱导的组织损伤和损害对鼠组织中NAMPT表达的影响，将C57/B6小鼠暴露于单剂量的胸部放射(20)1周。放射暴露后通过鼠肺组织的H&E染色评估放射对炎症、血管渗漏和炎性肺损伤的影响。代表性显微照片提供于图10A中。通过IHC染色评估放射前后肺组织中的NAMPT表达。代表性显微照片提供于图10B和10C中。为了评估放射对人组织中NAMPT表达的影响，将正常人上皮组织(扁桃体)暴露于放射(8Gy)24小时，并通过IHC染色评估NAMPT表达。代表性显微照片提供于图10D中。
如图10所示，在放射暴露1周后，在鼠肺组织中观察到炎症、血管渗漏和炎性损伤的增加(图10A)。放射诱导的肺损伤伴随着显著的NAMPT表达(图10B)，特别是在肺泡巨噬细胞和上皮细胞中(图10C)。与放射作为用于小鼠中NAMPT组织表达的刺激一致，在放射暴露后24小时，在正常人上皮组织(扁桃体)中观察到NAMPT表达的显著增加(图10D)。因此，放射诱导的组织损伤显著诱导NAMPT表达。
实施例14.NAMPT在PCa细胞迁移中的作用
PCa细胞通过人平滑肌细胞的迁移的体外测定用于评估NAMPT对PCa细胞迁移的作用。
为了评估NAMPT在PCa细胞迁移中的作用，将NAMPT(100ng/ml)加入人DU-145PCa细胞的培养物中。在NAMPT暴露24小时后，评估PCa细胞的迁移。观察结果的概述提供于图11A中，并且代表性显微照片提供于图11B中。
如图11中所示，NAMPT用作人DU-145PCa细胞的有效化学引诱物，并在24小时内诱导PCa细胞迁移。
实施例15.人源化抗hNAMPT抗体的表征
使用两种鼠肺损伤模型：通过将LPS气管内递送到小鼠中开发的肺损伤的“单击”模型，和通过将小鼠暴露于LPS和机械VILI开发的肺损伤的“双击”模型，在体内测试1076人源化抗hNAMPT抗体(N-1076、K-1076和P-1076)和1093人源化抗hNAMPT抗体(SS-1093、XX-1093和UU-1093)治疗肺损伤的能力。给这些小鼠施用任一种人源化抗hNAMPT抗体，以评估抗体减轻急性炎症和损伤的能力。测试结果提供于图12中。
如图12A中所示，综合肺损伤评分的分析显示了所有测试的抗hNAMPT抗体在LPS诱导的“单击”模型中有效减少肺损伤。然而，用抗hNAMPT抗体P-1076观察到最显著的效果。如图12B中所述，综合肺损伤评分的分析显示了所有测试的抗hNAMPT抗体在LPS/vILI诱导的“双击”模型中有效减少肺损伤。然而，用抗hNAMPT抗体P-1076观察到最显著的效果。如图12C中所述，抗hNAMPT抗体P-1076有效降低LPS/vILI诱导的急性炎性损伤的“双击”模型中的组织学损伤指数。
实施例16.人源化抗hNAMPT抗体P-1076对PCa细胞侵袭的影响
为了评估人源化抗hNAMPT抗体P-1076对PCa细胞侵袭的影响，在严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠中评估人PCa细胞的腹膜侵袭。
为了评估人源化抗hNAMPT抗体P-1076对PCa细胞侵袭的作用，将转移性人PCa细胞PC3腹膜内(i.p.)注射到SCID小鼠中。小鼠每周两次注射2μg人源化抗hNAMPT抗体P-1076或单独的媒介。在PC3细胞注射后6周评估PC3细胞的腹膜侵袭。代表性显微照片和结果总结提供于图13中。
如图13中所示，注射人PCA细胞系引起实质性的腹膜肌肉侵入(图13A)，而接受人源化抗hNAMPT抗体P-1076的PC3攻击的SCID小鼠表现出平滑肌腹膜的PC3侵入显著减少(图13B)。
因此，如图13C中总结的，来自该研究的观察结果强烈暗示NAMPT在PCa细胞侵袭性中的作用以及人源化抗hNAMPT抗体P-1076延迟这种侵袭行为的关键潜力。
实施例17.使用抗NAMPT抗体体内治疗RILI
使用C57/B6小鼠中的体内实验评估抗NAMPT施用对RILI的能力影响。将小鼠分成四组：接受20Gy胸部放射并腹膜内注射多克隆NAMPT中和抗体(pAb)的小鼠；接受20Gy胸部放射并腹膜内注射单克隆抗NAMPT抗体(mAb)(P-1076-mod1)的小鼠；和注射单独媒介的未照射小鼠(“Ctrl”)；和注射单独媒介的照射小鼠(“Ctrl”)。测量了BAL蛋白的量并获得BAL表达细胞的计数。还将肺组织进行H&E染色以评估肺部炎症。此外，基于BAL指数和H&E染色评估急性肺损伤(ALI)严重程度评分。来自相应分析的结果提供于图14A-E中。
如图14A中所示，与来自未照射的对照小鼠的肺组织(图14A的插图，左图)相比，来自放射的对照小鼠(注射单独媒介)的肺组织的H&E染色在放射暴露后4周显示出弥漫性肺泡损伤(图14A，左图)。相比之下，来自注射了抗NAMPT pAb(图14A，中图)或抗NAMPT mAb(图14A，右图)的小鼠的肺组织显示出减少的H&E染色，表明放射暴露后抗NAMPT Ab治疗的小鼠中肺泡损伤较少。图14B总结了未照射的对照小鼠、照射的对照小鼠和注射抗NAMPT pAb或mAb的照射小鼠的肺组织中的H&E染色。如图14B中所示，与来自未照射的对照小鼠的肺组织相比，来自照射的对照小鼠的肺组织中的H&E染色面积增加。然而，与照射的对照小鼠相比，在来自注射了抗NAMPT pAb或mAb的小鼠的肺组织中观察到H&E染色面积的显著减少(p<0.05)，表明了NAMPT在RILI发展中的作用。图14C示出了未照射的对照小鼠、照射的对照小鼠和注射抗NAMPT pAb或mAb的照射小鼠的肺组织中的BAL蛋白水平。如图14C中所示，与未放射的对照小鼠相比，暴露于放射的小鼠显示出增加的BAL蛋白水平。然而，与照射的对照小鼠相比，注射了抗NAMPT pAb或mAb的照射小鼠表现出显著降低的BAL蛋白水平(p<0.05)，在用抗NAMPT mAb治疗的照射小鼠中观察到更显著的降低。类似地，在暴露于放射的小鼠中BAL细胞的计数增加，尽管注射了抗NAMPT pAb或mAb的照射小鼠与照射的对照小鼠相比显示出显著减少的BAL细胞计数(p<0.05)，在用抗NAMPT mAb治疗的照射小鼠中观察到更显著的减少。此外，如图14E中所示，与对照小鼠相比，暴露于放射的小鼠显示出增加的ALI严重性评分；然而与照射的对照小鼠相比，注射了抗NAMPT pAb或mAb的照射小鼠表现出显著降低的ALI严重程度评分，在用抗NAMPT mAb治疗的照射小鼠中观察到更显著的降低。因此，结果显示了用抗NAMPT Ab治疗后RILI的减弱，强调了NAMPT作为RILI中的潜在治疗靶标。
实施例18.放射性标记的抗NAMPT抗体确定发炎肺组织中增加的NAMPT表达
开发放射性标记的抗NAMPT抗体，目的是非侵入性地体内检测不同组织中的NAMPT信号传导途径和NAMPT表达。使用放射性标记的抗NAMPT mAb(P-1076-mod1)对RILI的小鼠模型进行成像能够定义部署抗NAMPT mAb作为治疗干预的最佳时间，并在全身照射(TBI)或部分身体照射(PBI)(如在核事件中)后，采用其他特异性放射性标记来调查主要器官的炎症和细胞凋亡。为了测试通过放射性标记的抗NAMPT抗体对NAMPT表达的检测，将99mTc标记的抗NAMPT mAb探针注射到对照小鼠和暴露于8Gy PBI的小鼠中，并进行快速放射自显影成像。分析结果描述于图15A-D中。
如图15A-B中所示，与未照射的对照小鼠相比，在照射小鼠的肺中观察到更高的放射性摄取，表明由RILI诱导的NAMPT表达更高。此外，放射性标记的抗NAMPT抗体的摄取用作照射小鼠或未照射对照小鼠中肺活性的量度。如图15C中所示，与来自未照射的对照小鼠的那些相比，在来自照射的小鼠的右肺和左肺两者中观察到肺活性相对于组织背景的显著增加(p＜0.05)。此外，确定照射小鼠或未照射对照小鼠中的放射性水平以评估放射性标记的抗NAMPT mAb的摄取。如图15D中所示，与未照射的对照小鼠相比，在照射的小鼠中观察到放射性的显著增加(p＜0.05)，因此证实了在照射的小鼠中放射性标记的抗NAMPT mAb的摄取增加。
因此，放射性标记的抗NAMPT抗体在检测发炎肺组织中增加的NAMPT表达中是有效的。这强调了利用放射性标记的抗NAMPT抗体作为检测NAMPT的工具的潜力，这在使用NAMPT作为RILI中的生物标志物可能是关键的。
实施例19.使用放射诱导的肺纤维化的体内模型验证NAMPT作为RILI中的治疗靶标。
为了进一步验证NAMPT作为RILI中的治疗靶标，将WT C57/B6小鼠暴露于20GyWTLI。照射的小鼠腹膜内注射10μg抗NAMPT mAb(P-1076-mod1)或媒质对照。在放射暴露后18周，通过评估BAL细胞计数、胶原沉积和肺组织平滑肌肌动蛋白(SMA)的表达(其是成肌纤维细胞转变和纤维化的反映)来评估小鼠的放射诱导的肺纤维化(RILF)。结果显示在图16A-C中。
如图16A-C中所示，抗NAMPT mAb显著降低了IR诱导的RILI，这通过与媒介治疗的对照小鼠相比，Ab治疗的小鼠中BAL细胞计数减少(图16A)、肺组织SMA表达减少(通过蛋白质印迹分析检测，如图16B所示)和胶原沉积减少(通过肺组织三色染色检测，如图16C所示)来反映。
因此，结果强调了抗NAMPT Ab在减弱RILF中的作用，进一步验证了NAMPT作为RILI中的治疗靶标。
实施例20.评价抗NAMPT mAb在肺损伤的临床前模型中的功效
在创伤(爆破)/呼吸机诱导的肺损伤(VILI)的大鼠模型中验证了抗NAMPT mAb的功效。用创伤(爆破)攻击Sprague Dawley大鼠，然后机械通气4小时。在爆破后30分钟向大鼠注射抗NAMPT mAb(P-1076-mod1，100μg，静脉内(IV))。暴露于创伤(爆破)/VILI并注射媒介的大鼠用作对照。爆破发生后约5小时从大鼠中取出肺并评估损伤。此外，通过苏木精和伊红(H&E)染色评估肺组织中的水肿和炎性细胞浸润，作为肺损伤的读数。图17A-C中提供了来自该创伤(爆破)/VILI肺损伤模型的结果。
如图17A中所示，与非攻击的大鼠(图17A，最右侧框中的插图)相比，来自注射媒介的对照创伤/VILI大鼠的肺组织显示出炎性细胞浸润和水肿，其是创伤/VILI诱导的肺损伤的指示。相比之下，如图17B中所示，来自抗NAMPT mAb治疗的创伤/VILI大鼠的肺组织显示出炎性细胞浸润和水肿显著减少，因此表明抗NAMPT mAb减轻创伤/VILI诱导的肺损伤。抗NAMPT mAb对创伤/VILI诱导的肺损伤的影响总结在图17C中，其显示了如从H&E染色指数评估的大鼠的肺损伤评分。如图17C中所示，与注射媒介对照的大鼠相比，用抗NAMPT mAb治疗的大鼠的肺损伤评分显著降低(p<0.05)。因此，图17A-C中概述的结果显示了NAMPT中和mAb在减轻创伤/VILI诱导的肺损伤中的功效。
接下来，在LPS/VILI的鼠模型中验证了抗NAMPT mAb的功效。用LPS攻击小鼠18小时，然后机械通气4小时。给小鼠注射了抗NAMPT mAb(P-1076-mod1，10μg，IV)、抗NAMPT多克隆抗体(pAb)或媒介对照(PBS)。未暴露于LPS/VILI的小鼠用作对照。然后通过H&E染色评估来自小鼠的肺组织中的水肿和炎性细胞浸润，作为肺损伤的读数。来自该LPS/VILI肺损伤模型的结果提供于图18A-C中。
如图18A中所示，与非攻击的小鼠相比(图18A，插图)，来自注射媒介的对照小鼠的肺组织显示出炎性细胞浸润和水肿，这是LPS/VILI诱导的肺损伤的指示。相比之下，如图18B中所示，来自抗NAMPT mAb治疗的小鼠的肺组织显示出炎性细胞浸润和水肿的显著减少，因此表明了抗NAMPT mAb减轻了LPS/VILI诱导的肺损伤。抗NAMPT mAb对创伤/VILI诱导的肺损伤的作用总结在图18C中，其显示了小鼠的急性肺损伤(ALI)严重程度评分，如从H&E染色指数评估的。如图18C中所示，与注射媒介的小鼠相比，用抗NAMPT pAb或mAb治疗的小鼠中ALI显著降低，在用抗NAMPT mAb治疗的小鼠中观察到ALI严重程度评分的最强烈降低(p＜0.001)。因此，图18A-C中列出的结果显示了NAMPT中和mAb在减轻创伤/VILI诱导的肺损伤中的功效。
因此，结果证明了抗NAMPT mAb在临床前体内肺损伤模型中减少肺损伤的有效性。
实施例21.放射性标记的抗NAMPT抗体确定了发炎的肺组织中增加的NAMPT表达
放射性标记人源化抗NAMPT mAb(K-1076)以开发成像探针，其能够非侵入性地体内检测不同组织中的NAMPT信号传导途径和NAMPT表达。考虑到NAMPT作为急性炎性病症(例如，COVID-19、ARDS和肺损伤)的诊断和/或预后生物标志物的潜力，放射性标记的抗NAMPTmAb可用作处于发展此类病症风险中的受试者的诊断工具，或用于选择可能对用抗NAMPTmAb治疗此类炎性病症有反应的受试者。本实施例描述了使用放射性标记的抗NAMPT mAb检测发炎组织(如LPS攻击和电离放射暴露的肺)中的NAMPT表达。
首先，为了测试通过放射性标记的抗NAMPT抗体对NAMPT表达的检测，将99mTc标记的抗NAMPT mAb探针或放射性标记的IgG对照Ab注射到暴露于20Gy全胸肺照射(WTLI)的小鼠中，并进行快速放射自显影成像。
如图19A中所示，与注射放射性标记的IgG对照的照射小鼠(图19A，左图)相比，在注射放射性标记的抗NAMPT mAb(PRONAMPTOR)的照射小鼠(图19A，右图)中观察到显著更高的放射性摄取。因此，图19A中所示的结果证明了放射性标记的抗NAMPT成像探针在检测放射诱导的NAMPT表达中的能力。
为了进一步评估放射性标记的抗NAMPT成像探针对NAMPT表达的检测，在LPS攻击后3小时或18小时将99mTc标记的抗NAMPT mAb注射到媒介攻击的对照小鼠或LPS攻击的小鼠中，并进行快速放射自显影成像。分析结果显示于图19B-D中。
如图19B中所示，与对照小鼠(图19B，左图)相比，LPS攻击的小鼠在LPS攻击后3小时显示出显著更高的放射性标记的抗NAMPT成像探针的摄取(图19B，右图)。来自LPS攻击的小鼠或对照小鼠的肺的放射自显影成像进一步证实了该观察结果；与对照小鼠相比(图19C，左图)，LPS攻击小鼠的肺在LPS攻击后3小时显示出显著更高的放射性标记的抗NAMPT成像探针的摄取(图19C，右图)。此外，如图19D中所示，与对照小鼠相比，LPS攻击的小鼠在LPS攻击后3小时和18小时显示出显著更高的放射性(p＜0.05)，表明放射性标记的抗NAMPT成像探针的摄取更高。因此，图19B-D中描述的结果证明了放射性标记的抗NAMPT成像探针在检测LPS诱导的NAMPT表达中的能力。
因此，放射性标记的抗NAMPT抗体在检测发炎组织中增加的NAMPT表达方面是有效的。这强调了利用放射性标记的抗NAMPT抗体作为检测NAMPT的工具的潜力，这在使用NAMPT作为急性炎性病症中的诊断和/或预后生物标志物中可能是关键的。此外，通过检测发炎组织中增加的NAMPT表达，这种放射性标记的抗NAMPT成像探针可用于选择可能对用中和性抗NAMPT mAb治疗急性炎性病症有反应的受试者。
实施例22.抗NAMPT抗体降低了大鼠模型中的PAH表现
为了探索NAMPT作为PAH中的治疗靶标的潜力，使用PAH的大鼠野百合碱(MCT)模型。将一剂MCT(60mg/kg体重)皮下注射给Sprague-Dawley大鼠(190-200g)。然后MCT攻击的大鼠每周两次注射抗NAMPT mAb(P-1076-mod1，i.p.，100μg/大鼠)或媒介对照(对照MCT大鼠)。然后评估大鼠的右心室收缩压(RVS)和肺动脉重塑。结果显示在图20A和20B中。
使用Millar压力传感器导管通过右心导管插入术在抗NAMPT Ab治疗的MCT大鼠或对照MCT大鼠中测定RVSP。如图20A所示，与对照MCT大鼠相比，在用抗NAMPT mAb治疗的MCT大鼠中观察到RVSP的显著降低(p＜0.05)。
用H&E染色来自抗NAMPT Ab治疗的MCT大鼠或对照MCT大鼠的肺后，使用APERIOIMAGESCOPE软件评估肺动脉重塑。如图20B中所示，与对照MCT大鼠相比，在抗NAMPT mAb处理的MCT大鼠中观察到肺动脉厚度显著降低。
结果证明了抗NAMPT mAb的NAMPT中和逆转了PAH大鼠模型中的血管重塑和RV功能障碍，因此表明NAMPT作为PAH中的治疗靶标的有效性。
除非另有说明，否则本文引用的每个专利、专利申请和出版物的公开内容通过引用并入本文至参考文献阐述与本公开相关的信息的程度。虽然已经参考特定实施方式公开了本发明，但是显而易见的是，在不脱离本发明的真实精神和范围的情况下，本领域其他技术人员可以设计出本发明的一些实施方式和变型。所附权利要求包括所有这样的实施方式和等同变型。
本文公开的和/或与本发明相关的序列列于以下的序列汇总表(表17)中。
表17：序列汇总表
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Claims (32)

1.一种分离的抗体，或其抗原结合片段，其结合人烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(i)重链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域；具有如SEQID NO:4或29所示氨基酸序列的CDR2结构域；和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和
(ii)轻链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:6或11所示氨基酸序列的CDR1结构域；具有如SEQ ID NO:7、12、14、33、35或37所示氨基酸序列的CDR2结构域；和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
2.根据权利要求1所述的分离的抗体，或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含：
(a)具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；或
(b)具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:29所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；
3.根据权利要求1或2所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含：
(a)具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；
(b)具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:12所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；
(c)具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:14所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；
(d)具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:33所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；
(e)具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:35所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；
(f)具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:37所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；
(g)具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；
(h)具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ ID NO:12所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；
(i)具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域；具有如SEQ ID NO:14所示氨基酸序列的CDR2结构域；和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；
(j)具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域；具有如SEQ ID NO:33所示氨基酸序列的CDR2结构域；和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；
(k)具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域；具有如SEQ ID NO:35所示氨基酸序列的CDR2结构域；和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；或
(l)具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域；具有如SEQ ID NO:37所示氨基酸序列的CDR2结构域；和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
4.一种分离的抗体，或其抗原结合片段，其结合人NAMPT，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)重链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和轻链可变区，其具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ IDNO:7所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；
(b)重链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和轻链可变区，其具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ IDNO:12所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；
(c)重链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和轻链可变区，其具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ IDNO:14所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；
(d)重链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQID NO:29所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和轻链可变区，其具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ IDNO:14所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；
(e)重链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQID NO:29所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和轻链可变区，其具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ IDNO:33所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；
(f)重链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQID NO:29所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和轻链可变区，其具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ IDNO:35所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；
(g)重链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQID NO:29所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和轻链可变区，其具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ IDNO:37所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；
(h)重链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和轻链可变区，其具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ IDNO:33所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；
(i)重链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和轻链可变区，其具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ IDNO:35所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域；或
(j)重链可变区，其包含具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQID NO:4所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的CDR3结构域；和轻链可变区，其具有如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR1结构域，具有如SEQ IDNO:37所示氨基酸序列的CDR2结构域，和具有如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的CDR3结构域。
5.根据权利要求1-4任一项所述的分离的抗体，或其抗原结合片段，其中所述抗体，或其抗原结合片段，是人源化的。
6.根据权利要求1-5任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:2、10、13、30、31、32、34或36所示的氨基酸序列。
7.根据权利要求1-6任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区具有如SEQ ID NO:1、9、15、16或28所示的氨基酸序列。
8.一种分离的抗体，或其抗原结合片段，其结合人烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)，所述抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含含有如SEQ ID NO:15所示氨基酸序列的可变区，且所述轻链包含含有如SEQ ID NO:13所示氨基酸序列的可变区。
9.一种分离的抗体，或其抗原结合片段，其结合人NAMPT，所述抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含含有如SEQ ID NO:26所示氨基酸序列的可变区，所述轻链包含含有SEQ ID NO:18所示氨基酸序列的可变区。
10.一种分离的抗体，或其抗原结合片段，其结合人NAMPT，所述抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含如表17中所述的可变区，所述轻链包含如表17中所述的可变区。
11.一种分离的抗体，或其抗原结合片段，其结合人NAMPT，所述抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含如表17中所述的重链CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链包含如表17中所述的轻链CDR1、CDR2和CDR3。
12.一种分离的抗NAMPT抗体，其包含抗体AL-303的重链可变区和轻链可变区。
13.一种分离的抗NAMPT抗体，其包含抗体AL-310的重链可变区和轻链可变区。
14.一种分离的人源化抗NAMPT抗体，其包含源自鼠抗体AL-303或AL-310的人源化重链可变区和源自鼠抗体AL-303或AL-310的人源化轻链可变区。
15.一种以同二聚体构象特异性结合人NAMPT的分离的抗NAMPT抗体，其中所述抗体结合人NAMPT上的表位，所述人NAMPT上的表位包含以下任一：
a)人NAMPT上的表位，其包含SEQ ID NO:60的氨基酸残基17-44中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基117-127中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基162-170中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基242-261中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基262-273中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基289-305中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基332-342中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基374-389中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基418-425中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基453-466中的至少一个氨基酸；和SEQ ID NO:60的氨基酸残基408-416中的至少一个氨基酸；或
b)人NAMPT上的表位，其包含SEQ ID NO:60的氨基酸残基29-51中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基61-72中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基156-170中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基216-234中的至少一个氨基酸；SEQID NO:60的氨基酸残基316-331中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基332-342中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基373-389中的至少一个氨基酸；SEQ IDNO:60的氨基酸残基417-431中的至少一个氨基酸；SEQ ID NO:60的氨基酸残基454-469中的至少一个氨基酸；和SEQ ID NO:60的氨基酸残基470-478中的至少一个氨基酸。
16.根据权利要求1-15任一项所述的分离的抗体，或其抗原结合片段，其中所述抗体，或其抗原结合片段，包含Fc结构域。
17.根据权利要求1-16任一项所述的分离的抗体，或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体。
18.根据权利要求1-17任一项所述的分离的抗体，或其抗原结合片段，其中所述抗体是IgG抗体。
19.根据权利要求18所述的分离的抗体，或其抗原结合片段，其中所述抗体是IgG1或IgG4抗体。
20.一种编码权利要求1-19任一项的分离的抗体或其抗原结合片段的核酸。
21.一种包含权利要求20的核酸的载体。
22.一种包含权利要求20的核酸或权利要求21的载体的宿主细胞。
23.一种包含权利要求1-19任一项的分离的抗体，或其抗原结合片段，和药学上可接受载体的药物组合物。
24.一种治疗需要的受试者中与有害的NAMTP活性相关的障碍的方法，包括将有效量的权利要求1-19任一项的分离的抗体或抗原结合片段施用于所述受试者。
25.一种治疗患有炎性病症的受试者的方法，所述方法包括将有效量的权利要求1-19任一项的分离的抗体或抗原结合片段施用于所述受试者。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述炎性病症是肺纤维化(IPF)、肺动脉高压、急性肺损伤(ALI)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、呼吸机引起的肺损伤(VILI)、ARDS/VILI引起的ALI、外伤引起的急性肺损伤(TIALI)和脑损伤，或放射诱导的肺损伤。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述放射诱导的肺损伤是由与癌症治疗相关的放射引起的。
28.一种用于治疗需要的受试者中的前列腺癌(PCa)的方法，所述方法包括将有效量的权利要求1-19任一项的分离的抗体或其抗原结合片段施用于所述受试者。
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述受试者患有复发性PCa。
30.根据权利要求28所述的方法，其中所述受试者处于产生转移性PCa的风险中。
31.根据权利要求28-30任一项所述的方法，其中所述PCa对雄激素剥夺疗法(ADT)是抗性的。
32.根据权利要求28-31任一项所述的方法，进一步包括给所述受试者施用ADT。
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