CN114760861A - 婴儿配方食品 - Google Patents

Abstract

本发明提供了用于在预防或减少婴儿的变应性致敏的发生中使用的婴儿配方食品，其中所述婴儿配方食品包含0.8‑2.5g/L 2'‑岩藻糖基乳糖(2'FL)和/或0.05‑0.2g/L乳糖‑N‑新四糖(LNnT)。

Description

婴儿配方食品

技术领域

本发明涉及用于预防或减少婴儿的变应性致敏的发生的婴儿配方食品。特别地，本发明涉及包含2'-岩藻糖基乳糖(2'FL)和/或乳糖-N-新四糖(LNnT)的婴儿配方食品。

背景技术

变应性疾病诸如特应性皮炎、食物过敏和哮喘的发病率在全球范围内不断增加。例如，全世界有3亿人患有哮喘，并且在欧盟有11-26百万人患有食物过敏(Martins,T.B.等人(2014)J Allergy Clin Immunol 133:589-91)。

关于婴儿肠道微生物组合物在婴儿宿主的免疫轨迹和变态反应发展中的作用的证据越来越多(Quante M.等人(2012)BMC Public Health 12:1021)。因此，环境因素诸如饮食、污染、城市生活方式、清洁度和出生方法与免疫系统发育和变应性疾病发展有关(Seppo,A.E.等人(2017)J Allergy Clin Immunol 139:708-11e5；Azad,M.B.等人(2018)JNutr 148:1733-42)。

母乳是一种免疫活性流体，其含有许多可调节免疫系统发育并且进而调节变应性疾病发展的组分。人乳低聚糖(HMO)是母乳中第三最丰富的组分，在变应性疾病的发展中的影响受到特别关注。HMO是结构上变化的基于乳糖的复合聚糖，其包括短链和长链低聚糖两者。在其他哺乳动物乳汁中没有观察到人母乳中HMO的数量(已鉴定超过200种HMO)和结构多样性。HMO组成受环境和遗传影响两者的影响，并且在母体群体之间变化很大。乳腺中合成的母乳中的HMO量在初乳中约20.9g/L至成熟乳中12.9g/L的范围内。

有一些体外证据表明HMO可调节变应性应答，并且已经表明某些HMO(例如2'-岩藻糖基乳糖，2'FL)在食物过敏动物模型中降低变应性应答。此外，相关研究已经鉴定了与婴儿中乳或食物过敏相关的HMO的一些母乳水平。然而，合成的食品级HMO直到最近才可获得，这使得不可能在干预研究中对婴儿进行HMO的测试。

此外，对于在调节变态反应中可能有益的特定HMO的身份以及可能提供有益效果的HMO的水平仍然存在不确定性。

人类母乳和母乳喂养被认为是出生后头几个月内健康婴儿的最佳营养形式。然而，需要除母乳之外还可使用的营养来源。此外，并非所有婴儿都能母乳喂养，更虚弱的婴儿诸如早产儿的需求不能通过其母乳来实现，因此也需要母乳的替代品。满足婴儿营养需求的营养组合物，诸如婴儿配方食品，可用作人类母乳的替代品或补充品。然而，必须仔细控制婴儿配方食品的组成以满足营养要求，提供可接受的味道并进一步帮助婴儿发育，特别是当针对过敏或有变态反应风险的婴儿时。

因此，仍然非常需要可用于预防或减少婴儿的变态反应发展的营养组合物，诸如婴儿配方食品，特别是有效预防或减少婴儿的变应性致敏的婴儿配方食品。

发明内容

本发明人惊奇地发现，中等水平的HMO即2'-岩藻糖基乳糖(2'FL)和乳糖-N-新四糖(LNnT)在预防变应性致敏中最有效。本发明人已经发现，低于或高于最佳中等剂量的水平可能是不太有利的。

本发明人分析了来自母亲队列的母乳中的HMO水平，并鉴定了与皮肤致敏或皮疹相关的两种HMO，即2'FL和LNnT。此外，通过分析临床诊断群体中HMO水平的分布，本发明人发现了非线性分布，表明中等剂量水平的有益效果。本发明人然后进行了动物模型研究，其证实了当与较低或较高剂量相比时，中等水平的HMO在预防变应性致敏方面确实表现出更有益的效果。

因此，在一个方面，本发明提供了用于预防或减少婴儿的变应性致敏的发生的婴儿配方食品，其中该婴儿配方食品包含0.8-2.5g/L 2'-岩藻糖基乳糖(2'FL)和/或0.05-0.2g/L乳糖-N-新四糖(LNnT)。

在另一方面，本发明提供了用于预防或减少婴儿的变应性致敏的发生的方法，其中该方法包括向婴儿施用婴儿配方食品，其中该婴儿配方食品包含0.8-2.5g/L 2'-岩藻糖基乳糖(2'FL)和/或0.05-0.2g/L乳糖-N-新四糖(LNnT)。

在一些实施方案中，婴儿配方食品包含0.8-1.5g/L、0.8-1.4g/L、0.8-1.3g/L、0.8-1.2g/L、0.8-1.1g/L、0.9-1.1g/L或约1g/L 2'FL。在一些实施方案中，婴儿配方食品包含0.8-1.2g/L 2'FL。在一些实施方案中，婴儿配方食品包含0.9-1.1g/L 2'FL。

在一些实施方案中，婴儿配方食品包含1-1.5g/L、1-1.4g/L、1-1.3g/L、1-1.2g/L、1-1.1g/L或约1g/L 2'FL。在一些实施方案中，婴儿配方食品包含1-1.1g/L 2'FL。

在优选的实施方案中，婴儿配方食品包含约1g/L 2'FL。

在一些实施方案中，婴儿配方食品包含1.5-2.5g/L、1.5-2.4g/L、1.5-2.3g/L、1.5-2.2g/L、1.5-2.1g/L、1.5-2g/L、1.6-2g/L、1.7-1.9g/L或约1.8g/L2'FL。在一些实施方案中，婴儿配方食品包含1.5-2g/L 2'FL。在一些实施方案中，婴儿配方食品包含1.7-1.9g/L 2'FL。

在优选的实施方案中，婴儿配方食品包含约1.8g/L 2'FL。

在一些实施方案中，婴儿配方食品包含0.05-0.15g/L、0.06-0.14g/L、0.07-0.13g/L、0.08-0.12g/L、0.09-0.11g/L或约0.1g/L LNnT。在一些实施方案中，婴儿配方食品包含0.08-0.12g/L LNnT。在一些实施方案中，婴儿配方食品包含0.09-0.11g/L LNnT。

在优选的实施方案中，婴儿配方食品包含约0.1g/L LNnT。

在优选的实施方案中，婴儿配方食品包含2'FL和LNnT。

在一些实施方案中，婴儿配方食品包含约1.5-2g/L 2'FL和约0.08-0.12g/LLNnT。在一些实施方案中，婴儿配方食品包含约1.7-1.9g/L 2'FL和约0.09-0.11g/L LNnT。在一些实施方案中，婴儿配方食品包含约1.8g/L2'FL和约0.1g/L LNnT。

在一些实施方案中，婴儿配方食品是深度水解的婴儿配方食品(eHF)。在一些实施方案中，婴儿配方食品是基于氨基酸的婴儿配方食品(AAF)。

在优选的实施方案中，婴儿配方食品包含蛋白质、碳水化合物和脂肪。

在一些实施方案中，婴儿配方食品包含：

(a)1.8-3.2g蛋白质/100kcal；

(b)9-14g碳水化合物/100kcal；和/或

(c)4.0-6.0g脂肪/100kcal。

在一些实施方案中，婴儿配方食品包含约2.4g或更少蛋白质/100kcal。

在一些实施方案中，婴儿配方食品包含1.8-2.4g蛋白质/100kcal、2.1-2.3g蛋白质/100kcal或2.15-2.25g蛋白质/100kcal。在优选的实施方案中，婴儿配方食品包含约2.2g蛋白质/100kcal。

在一些实施方案中，约30重量％或更少的脂肪是中链甘油三酯(MCT)。

在一些实施方案中，婴儿配方食品中约25重量％或更少、20重量％或更少、15重量％或更少、10重量％或更少、5重量％或更少、或1重量％或更少的脂肪是中链甘油三酯(MCT)。

在一些实施方案中，婴儿配方食品不包含添加的MCT。

在另一方面，本发明提供了包含0.05-0.2g/L、0.05-0.15g/L、0.05-0.1g/L或约0.1g/L LNnT的婴儿配方食品，优选地其中该婴儿配方食品包含约0.1g/L LNnT。

附图说明

图1

来自非变应性(N＝40)和医学诊断的变应性/特应性婴儿(N＝29)的母亲的母乳中的人乳低聚糖(HMO)水平。在3个月时采集乳样品。箱线图示出了指示第25和第75百分位数的箱内的中值(水平线)，须线指示第10和第90百分位数，并且圆圈表示上下10％。在来自非变应性和变应性组的乳的HMO之间没有发现统计学差异(Q或校正的p>0.05)(非参数Mann-Whitney-Wilcoxon检验)。

图2

人母乳中的(A)2'-岩藻糖基乳糖(2'FL)水平(mg/L)和(B)乳糖-N-新四糖(LNnT)(μg/mL)的四分位数分析，其显示群体亚组之间的分布差异：绿色的百分比值(用椭圆形突出显示)显示统计学显著的阳性结果；并且红色的百分比值(用矩形突出显示)显示阴性结果。

图3

在预防变应性致敏中2'FL和LNnT(HMO)的2:1混合物的1％的最佳中等剂量，如在皮肤致敏的小鼠模型中观察到的特异性IgG浓度降低所示。

具体实施方式

本文中所用，术语“包含”和“由......构成”与“包括”或“含有”同义，并且包括端值在内或是开放式的，并且不排除另外的未列举的成员、要素或步骤。术语“包含”和“由......构成”也包括术语“由......组成”。

婴儿配方食品

如2015年9月25日的欧盟委员会条例(EU)2016/127中所定义，术语“婴儿配方食品”可以指旨在用于婴儿在出生后第一年的特殊营养用途，并且其本身满足此类人群的营养需求的食品。

在一些实施方案中，婴儿配方食品是深度水解的婴儿配方食品(eHF)。

在一些实施方案中，婴儿配方食品是基于100％乳清的部分水解配方食品(pHF)，

在一些实施方案中，婴儿配方食品是基于氨基酸的婴儿配方食品(AAF)。

在一些实施方案中，该配制物是补充剂，其可混入例如不含有HMO的婴儿配方食品或膳食中。

术语“深度水解的婴儿配方食品”或“eHF”可以指包含深度水解蛋白的婴儿配方食品。eHF可以是低变应原性婴儿配方食品，其为不能消化完整牛乳蛋白质(CMP)或对CMP不耐受或过敏的婴儿提供完全营养。

术语“基于氨基酸的婴儿配方食品”或“AAF”可以指仅包含游离氨基酸作为蛋白质源的婴儿配方食品。AAF可以不含可检测肽。AAF可以是低变应原性婴儿配方食品，其为患有食物蛋白过敏和/或食物蛋白耐受不良的婴儿提供完全营养。例如，AAF可以是低变应原性婴儿配方食品，其为不能消化完整CMP或对CMP不耐受或过敏并且可能具有极其严重或危及生命的症状和/或对多种食物过敏的婴儿提供完全营养。

“低变应原性”组合物是不太可能引起变应性反应的组合物。合适地，本发明的婴儿配方食品对超过90％的患有牛乳蛋白质过敏(CMPA)的婴儿耐受。这符合美国儿科学会提供的指南(Committee on Nutrition(2000)Pediatrics 106(2):346-349)。合适地，本发明的婴儿配方食品可以不含被CMP特异性IgE(例如来自患有CMPA的受试者的IgE)识别的肽。

pHF组合物是水解以减少暴露于完整乳变应原的组合物。合适地，本发明的婴儿配方食品旨在用于普通婴儿群体以预防变应性疾病。

可只用婴儿配方食品喂养婴儿，或者可将婴儿配方食品用作人乳的补充物。

本发明的婴儿配方食品可为粉末或液体形式。

液体可为例如浓缩液体婴儿配方食品或即食婴儿配方食品。婴儿配方食品可为重构婴儿配方食品的形式(即，从粉末状形式重构的液体婴儿配方食品)。浓缩液体婴儿配方食品优选能够被稀释成适用于喂食婴儿的液体组合物，例如通过添加水。

在一些实施方案中，婴儿配方食品呈粉末形式。粉末能够被重构成适用于喂食婴儿的液体组合物，例如通过添加水。

当按照指示配制时，婴儿配方食品可以具有每100mL约60kcal-72kcal的能量密度。合适地，当按照指示配制时，婴儿配方食品可以具有每100mL约60kcal至70kcal的能量密度。

人乳低聚糖

本发明的婴儿配方食品包含人乳低聚糖(HMO)2'-岩藻糖基乳糖(2'FL)和/或乳糖-N-新四糖(LNnT)中的至少一种。

在人乳中发现了许多不同种类的HMO。每种单独的低聚糖都基于葡萄糖、半乳糖、唾液酸(N-乙酰神经氨酸)、岩藻糖和/或N-乙酰基葡糖胺的组合，它们之间具有各式各样的键，因此解释了人乳中大量不同的低聚糖。几乎所有的HMO在其还原端有乳糖分子，且非还原端的末端位置都由唾液酸和/或岩藻糖(如果有的话)占据。HMO可以呈酸性(例如，含带电唾液酸的低聚糖)或呈中性(例如，岩藻糖基化低聚糖)。

本发明的婴儿配方食品包含2'-岩藻糖基乳糖(2'FL)和/或乳糖-N-新四糖(LNnT)。

在一些实施方案中，婴儿配方食品包含2'FL。在一些实施方案中，不存在除2'FL以外的其他类型的岩藻糖基化低聚糖，即，本发明的婴儿配方食品仅包含2'FL作为岩藻糖基化低聚糖。

可使用特定岩藻糖基转移酶和/或岩藻糖苷酶，通过生物技术手段，通过使用基于酶(重组酶或天然酶)的发酵技术或微生物发酵技术来制备2'FL。在后一种情况下，微生物可表达其天然酶和底物，或者可经工程化以产生相应的底物和酶。另选地，可以通过由乳糖和游离岩藻糖化学合成来制备2'FL。

在一些实施方案中，婴儿配方食品包含LNnT。在一些实施方案中，不存在除了LNnT之外的其他类型的N-乙酰化低聚糖，即本发明的婴儿配方食品仅包含LNnT作为N-乙酰化低聚糖。

LNnT可采用酶转移法，即使用糖基转移酶将供体部分的糖单元转移到受体部分来化学合成，如例如美国专利号5,288,637和WO 1996/010086中所述。另选地，LNnT可以通过将游离的或与低聚糖(例如，乳果糖)结合的酮-己糖(例如，果糖)化学转化成N-乙酰己糖胺或包含N-乙酰己糖胺的低聚糖来制备，如Wrodnigg,T.M.和Stutz,A.E.(1999)Angew.Chem.Int.Ed.38:827-828中所述。然后可将用这种方式制得的N-乙酰基-乳糖胺转移到作为受体部分的乳糖。

在一些实施方案中，婴儿配方食品包含含有2'FL和/或LNnT的低聚糖混合物。在优选的实施方案中，婴儿配方食品包含由2'FL和LNnT组成的低聚糖混合物。本发明的婴儿配方食品可以例如仅包含2'FL作为岩藻糖基化低聚糖，并且仅包含LNnT作为N-乙酰化低聚糖。

2'FL可例如以0.8-2.5g/L婴儿配方食品的总量存在于婴儿配方食品中(当按指示配制时)。

在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含0.8-1.5g/L、0.8-1.4g/L、0.8-1.3g/L、0.8-1.2g/L、0.8-1.1g/L、0.9-1.1g/L或约1g/L 2'FL。在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含0.8-1.2g/L 2'FL。在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含0.9-1.1g/L 2'FL。

在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含1-1.5g/L、1-1.4g/L、1-1.3g/L、1-1.2g/L、1-1.1g/L或约1g/L 2'FL。在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含1-1.1g/L 2'FL。

在优选的实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含约1g/L2'FL。

在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含1.5-2.5g/L、1.5-2.4g/L、1.5-2.3g/L、1.5-2.2g/L、1.5-2.1g/L、1.5-2g/L、1.6-2g/L、1.7-1.9g/L或约1.8g/L 2'FL。在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含1.5-2g/L 2'FL。在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含1.7-1.9g/L 2'FL。

在优选的实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含约1.8g/L 2'FL。

LNnT可例如以0.05-0.2g/L婴儿配方食品(当按指示配制时)的总量存在于婴儿配方食品中。

在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含0.05-0.15g/L、0.06-0.14g/L、0.07-0.13g/L、0.08-0.12g/L、0.09-0.11g/L或约0.1g/L LNnT。在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含0.08-0.12g/L LNnT。在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含0.09-0.11g/L LNnT。

在优选的实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含约0.1g/L LNnT。

在优选的实施方案中，婴儿配方食品包含2'FL和LNnT。

在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含约0.8-1.2g/L 2'FL和约0.08-0.12g/L LNnT。

在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含约0.9-1.1g/L 2'FL和约0.09-0.11g/L LNnT。

在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含约1.8g/L2'FL和约0.1g/L LNnT。

在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含约1.5-2g/L 2'FL和约0.08-0.12g/L LNnT。

在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含约1.7-1.9g/L 2'FL和约0.09-0.11g/L LNnT。

在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含约1.8g/L2'FL和约0.1g/L LNnT。

在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含0.12-0.225g/100kcal、0.12-0.21g/100kcal、0.12-0.195g/100kcal、0.12-0.18g/100kcal、0.12-0.165g/100kcal、0.135-0.165g/100kcal或约0.15g/100kcal 2'FL。在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含0.12-0.18g/100kcal 2'FL。在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含0.135-0.165g/100kcal 2'FL。

在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含0.15-0.225g/100kcal、0.15-0.21g/100kcal、0.15-0.195g/100kcal、0.15-0.18g/100kcal、0.15-0.165g/100kcal或约0.15g/100kcal 2'FL。在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含0.15-0.165g/100kcal 2'FL。

在优选的实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含约0.15g/100kcal 2'FL。

在一些实施方案中，婴儿配方食品(当指示配制时)包含0.225-0.375g/100kcal、0.225-0.36g/100kcal、0.225-0.345g/100kcal、0.225-0.33g/100kcal、0.225-0.315g/100kcal、0.225-0.3g/100kcal、0.24-0.3g/100kcal、0.255-0.285g/100kcal或约0.27g/100kcal 2'FL。在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含0.225-2g/100kcal 2'FL。在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含0.255-0.285g/100kcal 2'FL。

在优选的实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含约0.27g/100kcal 2'FL。

LNnT可例如以0.0075-0.03g/100kcal婴儿配方食品(当按指示配制时)的总量存在于婴儿配方食品中。

在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含0.0075-0.0225g/100kcal、0.009-0.021g/100kcal、0.0105-0.0195g/100kcal、0.012-0.018g/100kcal、0.0135-0.0165g/100kcal或约0.015g/100kcal LNnT。在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含0.012-0.018g/100kcal LNnT。在一些实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含0.0135-0.0165g/100kcal LNnT。

在优选的实施方案中，婴儿配方食品(当按指示配制时)包含约0.015g/100kcalLNnT。

蛋白质

术语“蛋白质”包括肽和游离氨基酸。婴儿配方食品的蛋白质含量可以通过本领域技术人员已知的任何方法来计算。合适地，蛋白质含量可以通过氮-蛋白质转化方法确定。例如，如Maubois,J.L.和Lorient,D.(2016)Dairy Science&Technology 96(1):15-25中所述。优选，蛋白质含量计算为氮含量×6.25，如2015年9月25日的欧盟委员会条例(EU)2016/127中所定义。氮含量可通过本领域技术人员已知的任何方法测定。例如，可以通过凯氏方法测量氮含量。

蛋白质浓度

婴儿配方食品的蛋白质含量优选地在1.8-3.2g蛋白质/100kcal范围内。在一些实施方案中，婴儿配方食品的蛋白质含量在1.8-2.8g蛋白质/100kcal的范围内。

eHF通常含有2.6-2.8g蛋白质/100kcal，并且AAF通常含有2.8-3.1g蛋白质/100kcal，例如以满足患有严重吸收不良的胃肠病理的婴儿或需要更多蛋白质和卡路里以满足更高的代谢率的婴儿的需要。

具有较低蛋白质含量的婴儿配方食品诸如eHF或AAF可支持变应性婴儿的适当生长和发育，以及是安全和良好耐受的。

因此，在一些实施方案中，婴儿配方食品可包含约2.4g或更少蛋白质/100kcal。例如，婴儿配方食品可包含约2.3g或更少蛋白质/100kcal、2.25g或更少蛋白质/100kcal、或2.2g或更少蛋白质/100kcal。

合适地，婴儿配方食品包含约1.8g或更多蛋白质/100kcal。例如，婴儿配方食品可包含约1.86g或更多蛋白质/100kcal、1.9g或更多蛋白质/100kcal、2.0g或更多蛋白质/100kcal、或2.1g或更多蛋白质/100kcal。优选地，婴儿配方食品包含约1.86g或更多蛋白质/100kcal，以符合目前的EU法规(EFSA NDA Panel(2014)EFSA journal 12(7):3760)。

在一些实施方案中，婴儿配方食品可包含1.8-2.4g蛋白质/100kcal、1.86-2.4g蛋白质/100kcal、1.9-2.4g蛋白质/100kcal、2.0-2.4g蛋白质/100kcal、2.0-2.3g蛋白质/100kcal、2.1-2.3g蛋白质/100kcal或2.15-2.25g蛋白质/100kcal。

优选，婴儿配方食品包含约2.2g蛋白质/100kcal。

蛋白质源

蛋白质源可以是适用于婴儿配方食品的任何来源。合适地，蛋白质为牛乳蛋白质。

在一些实施方案中，婴儿配方食品不包含乳蛋白质。在一些实施方案中，婴儿配方食品不包含牛乳蛋白质。因此，在一些实施方案中，总蛋白质的100重量％是非乳蛋白质。

在一些实施方案中，婴儿配方食品包含植物蛋白质。可任选地用于本发明的婴儿配方食品中的示例性植物蛋白包括马铃薯蛋白质、豌豆蛋白质、大米蛋白质、藜麦蛋白质、燕麦蛋白质、向日葵蛋白质、椰子蛋白质或它们的组合。用于婴儿配方食品的其他示例性非乳蛋白质包括藻类蛋白质或叶蛋白质。

基于深度水解/水解的乳清的配方产品可能比基于深度水解/水解的酪蛋白的配方产品更可口，并且/或者受试者可能仅对酪蛋白过敏。因此，合适地，超过约50％、超过约60％、超过约70％、超过约80％、超过约90％或约100％的蛋白质是乳清蛋白质。优选，蛋白质源是乳清蛋白质。

乳清蛋白质可以是来自奶酪制作的乳清，尤其是诸如经凝乳酶凝结酪蛋白产生的甜乳清、经酸或酸化发酵剂凝结酪蛋白产生的酸性乳清，或甚至经酸和凝乳酶凝结产生的混合乳清。这种原料可以是已通过离子交换和/或电渗析进行脱矿质化的乳清，被称作脱矿质化的乳清蛋白质(DWP)。

乳清蛋白质的来源可以是完全或部分去除酪蛋白糖巨肽(CGMP)的甜乳清。这种被称作改性甜乳清(MSW)。将CGMP从甜乳清中去除使得蛋白质材料中的苏氨酸和色氨酸含量更接近其在人乳中的含量。用于从甜乳清中去除CGMP的方法在EP880902中有所描述。

乳清蛋白质可以是DWP和MSW的混合物。

在一些实施方案中，婴儿配方食品中酪蛋白的量是不可检测的，例如小于0.2mg/kg。酪蛋白的量可通过本领域技术人员已知的任何方法测定。

水解度

在eHF中，蛋白质是“深度水解”的，使得90％以上的患有CMPA的婴儿可以耐受eHF。

蛋白质水解产物可具有通过NPN/TN％来表征的水解程度，这是指非蛋白质氮除以总氮×100。非蛋白质氮是指与试剂如三硝基苯磺酸(TNBS)自由反应的氨基氮。NPN/TN％可通过本领域技术人员已知的任何方法测定。例如，NPN/TN％可根据Adler-Nissen(Adler-Nissen,J.(1979)J.Agric.Food Chem.27:1256-1262)所述的方法进行测量。合适地，蛋白质可以具有大于90％、大于95％或大于98％的NPN/TN％。

水解程度也可以通过水解度确定。“水解度”(DH)定义为蛋白质水解产物中裂解的肽键的比例，并且可以通过本领域技术人员已知的任何方法确定。合适地，水解度通过pH-状态、三硝基苯磺酸(TNBS)、邻苯二甲醛(OPA)、三氯乙酸可溶性氮(SN-TCA)或甲醛滴定方法来确定。(Rutherfurd,S.M.(2010)Journal of AOAC International 93(5):1515-1522)。蛋白质的水解度(DH)可以例如大于90、大于95或大于98。

水解程度也可以通过肽分子质量分布来确定。肽分子质量分布可以通过高性能尺寸排阻色谱法确定，任选地使用UV检测(HPSEC/UV)(Johns,P.W.等人,(2011)Foodchemistry 125(3):1041-1050)。例如，肽分子质量分布可以是在205nm、214nm或220nm处测定的基于HPSEC峰面积的估计值。合适地，当肽分子质量分布通过HPSEC/UV确定时，具有一定分子质量的“肽的重量百分比”可以通过具有在205nm、214nm或220nm处测定的分子量的“峰面积的分数占总峰面积的百分比”来估计。合适地，水解程度可以通过WO 2016/156077中描述的方法确定。另选地，肽分子质量分布可以通过本领域技术人员已知的任何方法确定，例如通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)(Chauveau,A.等人(2016)Pediatric Allergy and Immunology 27(5):541-543)。

理论上，为了与细胞膜结合的IgE结合，肽大小应大于约1500Da(大约15个氨基酸)并且为了交联IgE分子并诱导免疫应答，肽大小必须大于约3000Da(大约30个氨基酸)(Nutten(2018)EMJ Allergy Immunol 3(1):50-59)。

因此，合适地，eHF中至少约95重量％、至少约98重量％、至少约99重量％或约100重量％的肽具有小于约3000Da的分子质量。例如，eHF中可能不存在大小为约3000Da或更大的可检测肽。

因此，合适地，eHF中至少约95重量％、至少约98重量％、至少约99重量％或约100重量％的肽具有小于约1500Da的分子质量。优选，至少99重量％的肽具有小于约1500Da的分子质量。例如，eHF中可能不存在大小为约1500Da或更大的可检测肽。

优选，eHF中至少约85重量％、至少约90重量％、至少约95重量％、至少约98重量％或至少约99重量％的肽具有小于约1200Da的分子质量。更优选，eHF中至少95重量％或98重量％的肽具有小于约1200Da的分子质量。

合适地，eHF中至少约80重量％、至少约85重量％、至少约90重量％或至少约95重量％的肽具有小于约1000Da的分子质量。优选，eHF中至少约95重量％的肽具有小于约1000Da的分子质量。

优选，eHF不具有大小为约3000Da或更大的可检测肽；并且至少约95重量％的肽具有小于约1200Da的分子质量。

即使在患有肠道受损的患者中，具有高比例的二肽和三肽也可以改善氮(蛋白质)吸收。PEPT1是用于小肽吸收(例如二肽和三肽)的专用促进剂转运途径。在出生后的前几周，肠道PEPT1对于营养摄入是重要的，并且随后对于断奶后的饮食转换是重要的。

因此，eHF中至少约30重量％、至少约40重量％或至少约50重量％的肽可以是例如二肽和三肽。优选，eHF中至少约45重量％、至少约50重量％、45重量％-55重量％或50重量％-54重量％的肽是二肽和三肽。更优选，eHF中约51重量％-53重量％，或最优选约52重量％的肽是二肽和三肽。

合适地，eHF中至少约30重量％、至少约40重量％或至少约50重量％的肽具有介于240Da与600Da之间的分子质量。优选，eHF中至少约45重量％、至少约50重量％、45重量％-55重量％或50重量％-54重量％的肽具有介于240Da与600Da之间的分子质量。更优选，eHF中约51重量％-53重量％，或最优选约52重量％的肽具有介于240Da与600Da之间的分子质量。

eHF中的肽可以例如具有300Da至370Da，优选320Da至360Da的中值分子量。

主要公认的牛乳变应原是α-乳白蛋白(aLA)、β-乳球蛋白(bLG)和牛血清白蛋白(BSA)。

因此，合适地，eHF可以具有不可检测的aLA含量，例如约0.010mg/kg aLA或更少；eHF可以具有不可检测的bLG含量，例如约0.010mg/kg bLG或更少；并且/或者eHF可以具有不可检测的BSA含量，例如约0.010mg/kg BSA或更少。优选，eHF不包含可检测量的aLA、bLG和BSA。aLA、bLG和BSA的含量可以通过本领域技术人员已知的任何方法确定，例如ELISA。

在优选实施方案中，本发明的eHF：不具有大小为约3000Da或更大的可检测肽；至少约95重量％的肽具有小于约1200Da的分子质量；任选地至少约45重量％、至少约50重量％或45重量％-55重量％的肽具有介于240Da与600Da之间的分子质量并且/或者为二肽或三肽；并且eHF不包含添加的MCT。

水解方法

本发明的婴儿配方食品中使用的蛋白质可以通过本领域已知的任何合适方法水解。例如，蛋白质可例如使用蛋白酶进行酶促水解。例如，可以使用碱性蛋白酶水解蛋白质(例如，在约1重量％-15重量％的酶:底物比率下并且持续约1小时-10小时的持续时间)。温度可以在约40℃至60℃的范围内，例如约55℃。反应时间可以是例如1小时至10小时，并且在开始水解之前的pH值可以例如落入6至9的范围内，优选为6.5至8.5，更优选为7.0至8.0。

猪类酶，尤其是猪胰酶可以用于水解方法。例如，WO1993004593A1公开了使用胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的水解方法，该水解方法包括两步水解反应，在其间具有热变性步骤以确保最终水解产物基本上不含完整的变应原蛋白质。这些方法中使用的胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶是由猪胰腺提取物产生的制剂。

WO2016156077A1公开了用于制备乳蛋白质水解产物的方法，该方法包括用微生物碱性丝氨酸蛋白酶结合菠萝蛋白酶、来自曲霉(Aspergillus)的蛋白酶和来自芽孢杆菌(Bacillus)的蛋白酶水解乳基蛋白质类材料。

游离氨基酸

本发明的婴儿配方食品可以包含游离氨基酸。

可以选择游离氨基酸的水平以提供足以用于婴儿营养的氨基酸谱，特别是满足营养法规(例如欧洲委员会指令2006/141/EC)的氨基酸谱。

游离氨基酸可例如掺入本发明的eHF中以补充肽中所包含的氨基酸。

用于本发明的婴儿配方食品中的示例游离氨基酸包括组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸、肉毒碱、牛磺酸以及它们的混合物。

游离氨基酸提供蛋白质等效源(即有助于氮含量)。如上所述，即使在患有肠道受损的患者中，具有高比例的二肽和三肽也可以改善氮(蛋白质)吸收。因此，即使在患有肠道受损的患者中，具有低比例的游离氨基酸也可以改善氮(蛋白质)吸收。

因此，合适地，基于氨基酸的总重量，eHF中的游离氨基酸可以50重量％或更少、40重量％或更少、30重量％或更少或25重量％或更少的浓度存在。优选，基于氨基酸的总重量，eHF包含25重量％或更少的游离氨基酸。更优选，基于氨基酸的总重量，eHF中的游离氨基酸以20重量％-25重量％、21重量％-23重量％或约22重量％的浓度存在。

游离氨基酸含量可以通过本领域技术人员已知的任何方法测定。合适地，游离氨基酸含量可以通过用茚三酮试剂进行柱后衍生化后，用离子交换色谱法和光度检测法分离含水样品提取物中存在的游离氨基酸来获得。如上文所描述，总氨基酸含量可以通过在氮气下将测试部分在6mol/L HCl中水解并且通过离子交换色谱分离单个氨基酸来获得。

在优选实施方案中，本发明的eHF：不具有大小为约3000Da或更大的可检测肽；至少约95重量％的肽具有小于约1200Da的分子质量；任选地至少约45重量％、至少约50重量％或45重量％-55重量％的肽具有介于240Da与600Da之间的分子质量和/或为二肽或三肽，和/或基于氨基酸的总重量的20重量％-25重量％、21重量％-23重量％或约22重量％；并且eHF不包含添加的MCT。

碳水化合物

本发明的婴儿配方食品的碳水化合物含量优选地在9g-14g碳水化合物/100kcal的范围内。

碳水化合物可以是适用于婴儿配方食品的任何碳水化合物。

用于本发明的婴儿配方食品的示例碳水化合物包括乳糖、蔗糖、麦芽糖糊精和淀粉。可使用碳水化合物的混合物。

在一些实施方案中，碳水化合物含量包含麦芽糖糊精。在一些实施方案中，总碳水化合物含量的至少约20重量％、至少约25重量％、至少约30重量％、至少约35重量％、至少约40重量％、至少约50重量％、至少约60重量％或至少约70重量％是麦芽糖糊精。

在一些实施方案中，碳水化合物含量包含乳糖。在一些实施方案中，总碳水化合物含量的至少约20重量％、至少约25重量％、至少约30重量％、至少约35重量％、至少约40重量％、至少约50重量％、至少约60重量％或至少约70重量％是乳糖。

在一些实施方案中，碳水化合物包含乳糖和麦芽糖糊精。

脂肪

本发明的婴儿配方食品的脂肪含量优选在4.0g-6.0g脂肪/100kcal的范围内。

脂肪可以是适用于婴儿配方食品的任何脂质或脂肪。

用于本发明的婴儿配方食品中的示例脂肪包括向日葵油、低芥酸菜籽油、红花油、芥花油、橄榄油、椰子油、棕榈仁油、大豆油、鱼油、棕榈油酸、高油酸向日葵油和高油酸红花油、以及包含长链多不饱和脂肪酸的微生物发酵油。

脂肪还可以呈衍生自这些油的级分形式，诸如棕榈油精、中链甘油三酯(MCT)和脂肪酸酯，诸如花生四烯酸、亚油酸、棕榈酸、硬脂酸、二十二碳六烯酸、亚麻酸、油酸、月桂酸、癸酸、辛酸、己酸等。

进一步的示例脂肪包括结构化脂质(即，化学或酶促改性以改变其结构的脂质)。优选，结构化脂质是sn2结构化脂质，例如包括在甘油三酯的sn2位处具有升高水平的棕榈酸的甘油三酯。可添加或可省略结构化脂质。

还可添加含有大量预先形成的花生四烯酸(ARA)和/或二十二碳六烯酸(DHA)的油，诸如鱼油或微生物油。

还可添加长链多不饱和脂肪酸，诸如二均聚γ亚麻酸、花生四烯酸(ARA)、二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸(DHA)。

婴儿配方食品可以包含2mg-20mg ARA/100kcal、5mg-15mg ARA/100kcal、或约10mg ARA/100kcal和/或2mg-20mg DHA/100kcal、5-15DHA/100kcal、或约10mg DHA/100kcal。优选，婴儿配方食品包含约10mg ARA/100kcal和约10mg DHA/100kcal。

中链甘油三酯(MCT)

高浓度的MCT可能损害早期体重增加。MCT不存储并且不支持脂肪储存。例如，Borschel等人已经报道，喂食不含MCT的配方产品的婴儿在1天-56天内比喂食含有50％来自MCT的脂肪的配方产品的婴儿体重增加明显更多(Borschel,M.等人,(2018)Nutrients10(3):289)。

因此，在本发明的婴儿配方食品中，约30重量％或更少的脂肪可以是例如中链甘油三酯(MCT)。

在一些实施方案中，约25重量％或更少、20重量％或更少、15重量％或更少、10重量％或更少、5重量％或更少、4重量％或更少、3重量％或更少、2重量％或更少、1重量％或更少、0.5重量％或更少、或0.1重量％或更少的脂肪为中链甘油三酯(MCT)。

在一些实施方案中，0重量％-30重量％、0重量％-25重量％、0重量％-20重量％、0重量％-15重量％、0重量％-10重量％、0重量％-5重量％、0重量％-4重量％、0重量％-3重量％、0重量％-2重量％、0重量％-1重量％、0重量％-0.5重量％或0重量％-0.1重量％的脂肪为中链甘油三酯(MCT)。

优选，婴儿配方食品不包含添加的MCT。合适地，约0重量％的脂肪是MCT，和/或婴儿配方食品不包含可检测的MCT。合适地，婴儿配方食品不包含MCT。

在优选实施方案中，本发明的eHF：不具有大小为约3000Da或更大的可检测肽；至少约95重量％的肽具有小于约1200Da的分子质量；45重量％-55重量％的肽具有介于240Da与600Da之间的分子质量；基于氨基酸的总重量，游离氨基酸以20重量％-25重量％的浓度存在；并且eHF不包含添加的MCT。

另外的成分

本发明的婴儿配方食品优选还含有被认为是日常饮食所必需的营养显著量的所有维生素和矿物质。已确定某些维生素和矿物质的最低需求。

用于本发明的婴儿配方食品的示例维生素、矿物质和其他营养物质包括维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素E、维生素K、维生素C、维生素D、叶酸、肌醇、烟酸、生物素、泛酸、胆碱、钙、磷、碘、铁、镁、铜、锌、锰、氯、钾、钠、硒、铬、钼、牛磺酸和左旋肉碱。矿物质通常以其盐的形式添加。

本发明的婴儿配方食品可以包含一种或多种类胡萝卜素。

本发明的婴儿配方食品还可以包含至少一种益生菌。术语“益生菌”是指对宿主的健康或良好状态具有有益效果的微生物细胞制剂或微生物细胞组分。具体地，益生菌可改善肠道屏障功能。

优选的益生菌是总体上是安全的益生菌，是产生L(+)乳酸的培养物，并且对于需要保持稳定且有效长达24个月的产品具有可接受的货架期。

用于本发明的婴儿配方食品的益生菌微生物示例包括：酵母，诸如酵母属(Saccharomyces)、德巴利酵母属(Debaromyces)、假丝酵母属(Candida)、毕赤酵母属(Pichia)和球拟酵母属(Torulopsis)；和细菌，诸如双岐杆菌属(Bifidobacterium)、类杆菌属(Bacteroides)、梭状芽胞杆菌属(Clostridium)、梭菌属(Fusobacterium)、蜜蜂球菌属(Melissococcus)、丙酸杆菌属(Propionibacterium)、链球菌属(Streptococcus)、肠球菌属(Enterococcus)、乳球菌属(Lactococcus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、消化链球菌属(Peptostrepococcus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、片球菌属(Pediococcus)、微球菌属(Micrococcus)、明串球菌属(Leuconostoc)、魏斯氏菌属(Weissella)、气球菌属(Aerococcus)、酒球菌属(Oenococcus)和乳杆菌属(Lactobacillus)。

合适的益生菌微生物的具体示例为：酿酒酵母菌(Saccharomyces cereviseae)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、婴儿双岐杆菌(Bifidobacterium infantis)、长双岐杆菌(Bifidobacterium longum)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、消化乳杆菌(Lactobacillus alimentarius)、干酪乳杆菌干酪亚种(Lactobacillus casei subsp.casei)、干酪乳酸杆菌代田株(Lactobacilluscasei Shirota)、弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus)、德氏乳杆菌乳酸亚种(Lactobacillus delbruckii subsp.lactis)、香肠乳杆菌(Lactobacillus farciminus)、加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus(Lactobacillus GG))、清酒乳杆菌(Lactobacillus sake)、乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)、变异微球菌(Micrococcus varians)、乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)、戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)、乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)、嗜盐片球菌(Pediococcus halophilus)、粪链球菌(Streptococcus faecalis)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、肉葡萄球菌(Staphylococcus carnosus)和木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus)。

本发明的婴儿配方食品可还含有可能具有有益效果的其他物质，诸如益生元、乳铁蛋白、纤维、核苷酸、核苷、短链脂肪酸(例如丁酸酯)和/或后生元等。

变应性致敏的减少发生和预防

术语“变态反应”是指免疫系统对通常耐受的物质(变应原)的超敏反应。变态反应可能是由医生检测到的变态反应。变应性疾病的示例包括特应性皮炎、湿疹、食物过敏、哮喘和鼻炎

免疫是正常免疫应答的一部分，其在健康个体中当免疫系统将物质登记为威胁时发生。因此，例如，B细胞然后可产生结合该物质的抗体。

术语“变应性致敏”是指免疫系统对通常耐受的并且在没有变应性应答的情况下通常是无害的因子(称为变应原，例如食物或花粉中的物质)的致敏。

虽然不希望受理论束缚，但当变应原进入身体时，它们可被抗原呈递细胞捕获并呈递给免疫系统的其他细胞，特别是T细胞。在T细胞和B细胞之间相互作用后，B细胞随后可产生变应原特异性抗体(IgE)。随后，IgE抗体一旦释放到血液中，就可结合肥大细胞以及其他免疫细胞诸如嗜碱性粒细胞。然后，致敏的个体可在再次暴露于变应原时产生变应性反应。

因此，变应性致敏可指免疫系统的预激以识别变应原。然后，以这种方式致敏的个体可在再次暴露于变应原时产生变应性反应。

在一些实施方案中，婴儿的变应性致敏的特征可在于在6月龄时大于35kU/L和/或在12月龄时大于53kU/L的总IgE浓度(Martins,T.B.等人(2014)J Allergy Clin Immunol133(2):589-91)。在一些实施方案中，成人中的变应性致敏可表征为大于127KU/L的总IgE水平。本领域技术人员能够容易地测定来自受试者的样品中的IgE浓度，例如使用如实施例中公开的ImmunoCAP Phadia技术。

本发明的婴儿配方食品可用于减少婴儿的变应性致敏的发生和/或预防婴儿的变应性致敏。

如本文所用，“减少变应性致敏的发生”意指婴儿配方食品减少变应性致敏的可能性。

如本文所用，“预防”变应性致敏是指婴儿尚未被致敏，并且婴儿配方食品预防变应性致敏。

术语“婴儿”是指12个月以下的儿童，例如0至6个月大的儿童。

在一些实施方案中，婴儿有发展一种或多种变态反应的风险。例如，婴儿可属于具有一种或多种变态反应史的家庭。

在一个方面，本发明提供了预防或减少婴儿的变应性致敏的发生的方法，该方法包括向婴儿施用本发明的婴儿配方食品。

制造方法

本发明的婴儿配方食品可以任何合适的方式制备。

例如，婴儿配方食品可通过将蛋白质源、碳水化合物源和脂肪源以合适的比例共混在一起而制备。如果使用，则可在此时包含另外的乳化剂。可在此时添加维生素和矿物质，但维生素通常在稍后添加以避免热降解。在共混之前，可将任何亲脂性维生素、乳化剂等溶解于脂肪源中。然后可混入水(优选经受反渗透的水)，以形成液体混合物。可使用可商购获得的液化剂来形成液体混合物。接着可将液体混合物均质化。

随后可对液体混合物进行热处理，以降低细菌载量。这可例如通过蒸汽注入，或使用高压釜或热交换器(例如，板式热交换器)来进行。

接着可将液体混合物冷却和/或均质化。此时可调节均质化的混合物的pH和固体含量。

然后可以将均质化混合物转移进合适的干燥装置(诸如喷雾干燥器或冷冻干燥器)，并且将其转变成粉末。如果优选液体婴儿配方食品，可对该均质化的混合物进行灭菌，然后在无菌条件下将其填充至合适的容器中或者可以先将其填充至容器中并且然后进行蒸馏。

技术人员将理解，在不脱离所公开的本发明范围的前提下，他们可以组合本文所公开的本发明的所有特征。

现将通过非限制性实施例来描述本发明的优选特征和实施方案。

实施例

一些研究使用单变量分析表明，单独考虑的母乳的特定组分与母亲或儿童的疾病状态有关。然而，最近独立地评价母乳HMO组分之间关系的分析方法已显示与变态反应不相关。实施例1确定了变应性致敏保护所需的2FL和LNnt的具体剂量。实施例2证实在动物中需要特定剂量以防止变应性致敏。

实施例1

在本研究中，我们旨在了解人乳低聚糖(HMO)水平与人变应性致敏之间的关联

尽管我们在进行单变量分析时证实了非显著性关联，但提示HMO水平与变应性致敏风险之间没有线性关联；我们发现HMO 2'-岩藻糖基乳糖(2'FL)和乳糖-N-新四糖(LNnT)防止变应性致敏，并且观察到钟形效应，显示在中等剂量下的最佳保护，而较低和较高剂量可能不太有效。

材料和方法

母乳分析(德国队列)

从来自Life Child研究(Seppo,A.E.等人(2017)J Allergy Clin Immunol139(2):708-11e5)的样品中亚选择156个母亲/婴儿对的队列。样品的选择基于三个月时母乳样品的可获得性以及在研究期间的任何时间由母亲完成的变态反应问卷和/或婴儿生命第一年的婴儿的变态反应问卷。

为了本研究的目的，母体变应性致敏被定义为总IgE水平大于127KU/L(Martins,T.B.等人(2014)J Allergy Clin Immunol 133(2):589-91)，并且变态反应被定义为母亲自我报告的哮喘、鼻炎、特应性皮炎、湿疹和/或对特定食物的变应性反应(伴有呕吐、恶心、腹泻、湿疹加重或哮喘症状)。为了本研究的目的，婴儿变应性致敏被定义为在6和12个月时总IgE分别大于35kU/L和53kU/L(Martins,T.B.等人(2014)J Allergy Clin Immunol 133(2):589-91)，以及作为在3个月、6个月或一年时对“医生是否曾诊断您的孩子食物过敏”、“您的孩子是否曾患有湿疹/特应性皮炎”或“您的孩子是否在超过15天期间遭受与瘙痒相关的复发性皮疹”等问题的肯定回答的变态反应风险。使用ImmunoCAP Phadia技术定量母亲和孩子的总IgE。

在该队列中，通过各种问卷获得变态反应和混杂因素诸如社会经济状况。基于将变态反应和母乳组分相关联的可用文献来识别混杂因素，并基于可用数据(分娩方式(分娩)、孩子性别(性别)、出生时的孩子体重(体重)、3个月完全母乳喂养(母乳喂养)、社会经济状况(经济状况)和同胞数(同胞))来选择混杂因素。该队列用作探索性队列。从产后第三个月的哺乳期母亲中挤出母乳、收集并储存在-80℃下(Quante,M.等人(2012)BMC PublicHealth 12:1021)。一个母亲/孩子对由于母乳组分水平的缺失值过多(>50％)而被排除。本研究是根据赫尔辛基宣言并在莱比锡大学伦理委员会(登记号264-10-19042010)的监督下设计的。LIFE Child研究注册于ClinicalTrials.gov，临床试验编号：NCT02550236(Poulain,T.等人(2017)European Journal of Epidemiology 32(2):145-58)。

组分水平评估

进行液相色谱分析，将样品以10,000x g离心5分钟。随后使用含有RF-200荧光计和2通十口高压切换阀的Ultimate 3000-RD UHPLC系统(Thermo Fisher Scientific,Waltham,USA)分析样品。将样品上样到Acquity BEH Glycan和VanGuard BEH酰胺柱(Waters Corporation,Milford,USA)上，在进样器与十口阀之间具有保护柱。柱温为55℃，并且流速为0.5mL/min。该方法的可靠性通过峰值可靠性评估来验证，其中使用所讨论的低聚糖标准品和麦芽三糖对照来验证校准曲线。

总共测量了21种HMO的绝对浓度：2'-岩藻糖基乳糖(2'FL)、3-岩藻糖基乳糖(3'FL)、3'-唾液酸乳糖(3'SL)、6'-唾液酸乳糖(6'SL)、3'-半乳糖基乳糖(3'GL)、6'-半乳糖基乳糖(6'GL)、乳糖-N-四糖(LNT)、乳糖-N-新四糖(LNnT)、乳糖-N-岩藻五糖I(LNFP I)、乳糖-N-岩藻五糖II(LNFP II)、乳糖-N-岩藻五糖III(LNFP III)、乳糖-N-岩藻五糖V(LNFPV)、乳糖-N-新岩藻五糖(LNnFP)、乳糖二岩藻四糖(LDF)、乳糖-N-四糖b(LST b)、乳糖-N-四糖(LST c)、二岩藻基乳糖-N-己糖a(DFLNHa)、二唾液酸乳糖-N-四糖(DSLNT)、单岩藻糖基乳糖-N-己糖(MFLNH III)、乳糖-N-新二岩藻己糖(LNnDFH)和乳糖-N-二岩藻己糖(LNDFH1)。

单变量分析

为了测试HMO与变应性致敏或变态反应之间的关联，完成了比较个体HMO水平与特应性皮炎的发生率的逻辑回归和卡方检验。21种HMO的总和也包括在统计分析中并分类为“总HMO”。

对于统计分析，模型中包括以下混杂变量：性别、分娩模式、父母变态反应、母乳Se和Le状况以及家庭宠物。使用非参数Mann-Whitney-Wilcoxon检验比较变应性和非变应性婴儿之间个体HMO水平的差异。

结果

德国队列中HMO与变态反应之间的关联

基线时研究群体的人口统计学示于表1中。

表1.发现队列总结人口统计数据

表2.按SA状态的发现队列总结人口统计数据。

测量了总共21种HMO水平并呈现于图1中。仅使用医学上诊断和/或致敏的婴儿，在任何HMO水平和医学上诊断的变应性婴儿与非变应性婴儿之间没有发现显著的关联。多次测试的Q值或校正p值均大于0.05。

HMO水平以及与变应性致敏和皮疹风险的关联

然后我们评估了HMO可能与变应性致敏相关的可能性。由于在我们的队列中分析了不到30％的群体的致敏作用，我们将分析扩展至包括具有阳性致敏作用的婴儿以及基于长期皮疹或湿疹而得出具有增加的致敏风险的那些。当观察该扩展群体中2'FL和LNnT水平的分布时，我们发现了非线性分布，表明仅特定剂量的2FL、LNnT可能与变应性致敏风险降低相关(图2)，并且较高剂量不是保护性的。

如图2所示的群体四分位数分析鉴定了与变应性致敏降低相关的母乳中的2'FL和LNnT水平：母乳中低于2.5mg/L的2'FL水平；并且低于0.2g/L的LNnT水平似乎与特别有益的效果相关。

实施例2

在本实施例中，我们旨在证实人乳低聚糖(HMO)对小鼠中变态反应预防的保护作用的钟形效应。

临床前测定

动物研究方案由瑞士的沃州兽医部门(Service Vétérinaire du Canton deVaud')批准。简而言之，从方案的第0周开始，给5周龄雌性BALB/c小鼠喂食补充有0％、0.2％、1％、5％或10％(按重量计)的2'FL和LNnT(2:1重量比)的HMO混合物的饮食。将小鼠背部剃毛并用70％异丙醇溶液(VWR；Nyon,Switzerland)清洗，如下所述测量经皮水分流失(TEWL)。在第3周期间，将2mg/mL的100μL烟曲霉(Aspergillus fumigatus)(Af)蛋白提取物(Greer Laboratories；Lenoir,NC,USA)(致敏组(S.))或100μL 0.9％NaCl溶液(非致敏组(N.S.)；Merck；Zoug,Switzerland)施加到1×1cm无菌纱布(Hartmann；Dermaplast,Chatenois,France)贴片上，并用生物封闭透明敷料(Systagenix；Bioclusive,SanAntonio,Texas,USA,Switzerland)和邦迪牌创可贴(Mefix；Wasquehal,France)固定到皮肤上。随后，再次测量TEWL。在2周的休息期后，再施加第二个相同的贴片一周，随后再次测量TEWL。然后用稀释在0.9％NaCl中的Af鼻内攻击小鼠。随后使用异氟烷麻醉小鼠并在从腹主动脉收集血液后安乐死。

特异性IgG1定量

将九十六孔板(Nunc Maxisorp；VWR)在4℃处用在碳酸盐缓冲液中的50μg/ml的Af蛋白提取物(Greer Laboratories)包被过夜。然后将板用PBS-0.05％吐温(Biorad,Reinach,Switzerland)洗涤，并用PBS-1％BSA(Sigma)在37℃处封闭1小时。将稀释的血清在37℃处温育2小时。洗涤后，将板在37℃处与辣根过氧化物酶(HRP)缀合的山羊抗小鼠IgG1(Southern Biotech,Bioconcept Allschwil,Switzerland)一起温育2小时，然后与HRP底物四甲基联苯胺(TMB)(KPL,Socochim,Lausanne,Switzerland)一起温育。使用1N盐酸(HCl，Merck)终止反应。在450nm处测量吸光度，结果表示为光密度(OD)值。

统计分析

使用JMP Pro 14(SAS Software,Cary,USA)进行统计分析。用GraphPad Prism 6(GraphPad Software,San Diego,USA)绘制图形。对于所有测试，p值>0.05被认为对于关联是显著的。

对于动物实验，使用精确的Wilcoxon非参数统计检验来比较各组。使用软件R2.14.1进行统计分析。p值≤0.05的结果被认为是显著的。数据表示为中值±中值的标准误差(SE)。

HMO对变应性致敏的有益作用

为了证实2'FL和LnNT能够防止变应性致敏，我们使用动物模型来研究2'FL:LNnT混合物的功效。使用烟曲霉在表皮上实现皮肤致敏小鼠模型中动物的致敏。

从这些研究中观察到的特异性IgG随HMO水平的变化证实2'FL和LNnT在1％剂量下对预防变应性致敏特别有效(在皮肤致敏小鼠模型中，图3)，而在较低或较高剂量下功效较低，如钟形曲线所示。

讨论

我们已经显示2'FL和LNnT防止变应性致敏，并且观察到钟形效应，其显示在中等剂量下改善的保护。

在上述说明书中提到的所有出版物均以引用方式并入本文。本发明所公开的用途和方法的各种修改和变型在不脱离本发明范围和实质的情况下对技术人员将是显而易见的。虽然已结合具体优选的实施方案对本发明进行了公开，但是应当理解，受权利要求书保护的本发明不应不当地受限于此类具体实施方案。实际上，对技术人员显而易见的对用于实践本发明所公开的模式的各种修改旨在落在以下权利要求书的范围内。

Claims (15)

1.用于在预防或减少婴儿的变应性致敏的发生中使用的婴儿配方食品，其中所述婴儿配方食品包含0.8-2.5g/L 2'-岩藻糖基乳糖(2'FL)和/或0.05-0.2g/L乳糖-N-新四糖(LNnT)。

2.根据权利要求1所述使用的婴儿配方食品，其中所述婴儿配方食品包含0.8-1.5g/L、1-1.5g/L或约1g/L 2'FL，优选地其中所述婴儿配方食品包含约1g/L 2'FL。

3.根据权利要求1所述使用的婴儿配方食品，其中所述婴儿配方食品包含1.5-2.5g/L、1.5-2g/L、1.6-2g/L或约1.8g/L 2'FL，优选地其中所述婴儿配方食品包含约1.8g/L 2'FL。

4.根据前述权利要求中任一项所述使用的婴儿配方食品，其中所述婴儿配方食品包含0.05-0.15g/L或约0.1g/L LNnT，优选地其中所述婴儿配方食品包含约0.1g/L LNnT。

5.根据前述权利要求中任一项所述使用的婴儿配方食品，其中所述婴儿配方食品包含2'FL和LNnT。

6.根据权利要求5所述使用的婴儿配方食品，其中所述婴儿配方食品包含约1.8g/L 2'FL和约0.1g/L LNnT。

7.根据前述权利要求中任一项所述使用的婴儿配方食品，其中所述婴儿配方食品是深度水解的婴儿配方食品(eHF)或基于氨基酸的婴儿配方食品(AAF)。

8.根据前述权利要求中任一项所述使用的婴儿配方食品，其中所述婴儿配方食品包含蛋白质、碳水化合物和脂肪。

9.根据前述权利要求中任一项所述使用的婴儿配方食品，其中所述婴儿配方食品包含：

(a)1.8-3.2g蛋白质/100kcal；

(b)9-14g碳水化合物/100kcal；和/或

(c)4.0-6.0g脂肪/100kcal。

10.根据前述权利要求中任一项所述使用的婴儿配方食品，其中所述婴儿配方食品包含约2.4g或更少蛋白质/100kcal。

11.根据前述权利要求中任一项所述使用的婴儿配方食品，其中所述婴儿配方食品包含1.8-2.4g蛋白质/100kcal、2.1-2.3g蛋白质/100kcal或2.15-2.25g蛋白质/100kcal，优选地其中所述婴儿配方食品包含约2.2g蛋白质/100kcal。

12.根据前述权利要求中任一项所述使用的婴儿配方食品，其中约30％重量或更少的所述脂肪是中链甘油三酯(MCT)。

13.根据前述权利要求中任一项所述使用的婴儿配方食品，其中所述婴儿配方食品中约25％重量或更少、20％重量或更少、15％重量或更少、10％重量或更少、5％重量或更少或者1％重量或更少的所述脂肪是中链甘油三酯(MCT)。

14.根据前述权利要求中任一项所述使用的婴儿配方食品，其中所述婴儿配方食品不包含添加的MCT。

15.用于预防或减少婴儿的变应性致敏的发生的方法，其中所述方法包括向所述婴儿施用婴儿配方食品，其中所述婴儿配方食品包含0.8-2.5g/L 2'-岩藻糖基乳糖(2'FL)和/或0.05-0.2g/L乳糖-N-新四糖(LNnT)。

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