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CN114630684A - 氨基喹啉化合物、免疫缀合物及其用途 - Google Patents

氨基喹啉化合物、免疫缀合物及其用途 Download PDF

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CN114630684A CN202080073294.4A CN202080073294A CN114630684A CN 114630684 A CN114630684 A CN 114630684A CN 202080073294 A CN202080073294 A CN 202080073294A CN 114630684 A CN114630684 A CN 114630684A
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heterocyclyldiyl
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peg
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R·库迪卡
B·萨菲那
M·周
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Bolt Biotherapeutics Inc
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Abstract

本发明提供了式(I)的免疫缀合物，所述免疫缀合物包含通过与一种或多种氨基喹啉衍生物缀合而连接的抗体。本发明还提供了式(III)的氨基喹啉衍生物中间体组合物，所述氨基喹啉衍生物中间体组合物包含反应性官能团。此类中间体组合物是用于通过接头或连接部分形成所述免疫缀合物的合适基质。本发明还提供了用所述免疫缀合物治疗癌症的方法。

Description

氨基喹啉化合物、免疫缀合物及其用途
相关申请的交叉引用
本非临时申请申请要求2019年9月3日提交的美国临时申请第62/895,379号的优先权权益，所述美国临时申请以引用方式整体并入本文。
技术领域
本发明总体上涉及一种免疫缀合物，所述免疫缀合物包含与一种或多种氨基喹啉分子缀合的抗体。
背景技术
需要用于递送抗体和树突细胞佐剂以到达难以接近的肿瘤和/或以扩大癌症患者和其他受试者的治疗选项的新组合物和方法。本发明提供了此类组合物和方法。
发明内容
本发明总体上涉及免疫缀合物，所述免疫缀合物包含通过缀合至一种或多种氨基喹啉衍生物连接的抗体。本发明还涉及包含反应性官能团的氨基喹啉衍生物中间体组合物。此类中间组合物是用于形成免疫缀合物的合适基质，其中抗体可通过接头或连接部分与氨基喹啉衍生物共价键合。本发明进一步涉及此类免疫缀合物在疾病，特别是癌症的治疗中的用途。
本发明的一个方面是一种免疫缀合物，所述免疫缀合物包含共价连接至接头的抗体，所述接头共价连接至一个或多个氨基喹啉部分。
本发明的另一方面是一种氨基喹啉-接头化合物。
本发明的另一方面是一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括施用治疗有效量的免疫缀合物，所述免疫缀合物包含通过缀合至一个或多个氨基喹啉部分连接的抗体。
本发明的另一方面是包含通过缀合至一个或多个氨基喹啉部分连接的抗体的免疫缀合物用于治疗癌症的用途。
本发明的另一方面是一种通过将一个或多个氨基喹啉部分与抗体缀合来制备免疫缀合物的方法。
具体实施方式
现在将详细参考本发明的某些实施方案，在所附的结构和式中阐明了本发明的实施例。尽管将结合所列举的实施方案来描述本发明，但应理解它们并非旨在将本发明局限于那些实施方案。相反，本发明旨在涵盖所有的替代方案、修改和等效物，所述替代方案、修改和等效物可以被包括在如由权利要求书所界定的本发明范围内。
本领域技术人员将认识到，与本文所述的那些相似或等效的许多方法和材料可用于实践本发明。本发明决不限于所描述的方法和材料。
定义
术语“免疫缀合物”是指通过接头与佐剂部分共价键合的抗体构建体。术语“佐剂”是指能够在暴露于佐剂的受试者中引发免疫应答的物质。短语“佐剂部分”是指如本文所述例如通过接头与抗体构建体共价键合的佐剂。佐剂部分可在与抗体构建体键合时或在将免疫缀合物施用于受试者后从抗体构建体切割(例如，酶促切割)后引发免疫应答。
“佐剂”是指能够在暴露于佐剂的受试者中引发免疫应答的物质。短语“佐剂部分”是指如本文所述例如通过接头与抗体构建体共价键合的佐剂。佐剂部分可在与抗体构建体键合时或在将免疫缀合物施用于受试者后从抗体构建体切割(例如，酶促切割)后引发免疫应答。
术语“Toll样受体”和“TLR”是指高度保守的哺乳动物蛋白家族中的任何成员，所述成员识别病原体相关分子模式并充当先天免疫中的关键信号传导元件。TLR多肽共享包含特征结构，所述特征结构具有富含亮氨酸的重复序列的胞外结构域、跨膜结构域和参与TLR信号传导的胞内结构域。
术语“Toll样受体7”和“TLR7”是指与可公开获得的TLR7序列(例如，GenBank登录号AAZ99026的人TLR7多肽，或GenBank登录号AAK62676的鼠TLR7多肽)共享至少约70％、约80％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更大的序列同一性的核酸或多肽。
术语“Toll样受体8”和“TLR8”是指与可公开获得的TLR7序列(例如，GenBank登录号AAZ95441的人TLR8多肽，或GenBank登录号AAK62677的鼠TLR8多肽)共享至少约70％、约80％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更大的序列同一性的核酸或多肽。
“TLR激动剂”是直接或间接地与TLR(例如，TLR7和/或TLR8)结合以诱导TLR信号传导的物质。任何可检测到的TLR信号传导差异都可指示激动剂刺激或激活TLR。信号传导差异可被表现为例如靶基因表达、信号转导部件的磷酸化、下游组分诸如核因子-κB(NF-κB)的细胞内定位、某些组分(诸如IL-1受体相关激酶(IRAK))与其他蛋白质或细胞内结构的缔合、或诸如激酶(诸如丝裂原活化蛋白激酶(MAPK))的组分的生化活性的变化。
“抗体”是指包含来自免疫球蛋白基因或其片段的抗原结合区(包括互补决定区(CDR))的多肽。术语“抗体”具体地涵盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和表现出所需生物活性的抗体片段。示例性免疫球蛋白(抗体)结构单元包括四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链构成，每一对具有通过二硫键连接的一条“轻”(约25kDa)链和一条“重”链(约50-70kDa)。每条链由被称为免疫球蛋白结构域的结构域组成。这些结构域按大小和功能分为不同的类别，例如轻链和重链上的可变结构域或区域(分别为VL和VH)和轻链和重链上的恒定结构域或区域(分别为CL和CH)。每条链的N端界定了主要负责抗原识别的具有约100至110个或更多个氨基酸的可变区，所述可变区被称为互补位，即抗原结合结构域。轻链被分类为κ或λ。重链被分类为γ、μ、α、δ或ε，它们继而分别定义了免疫球蛋白类别IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。IgG抗体是由四条肽链构成的约150kDa的大分子。IgG抗体含有两条相同的约50kDa的γ类重链和两条相同的约25kDa的轻链，因此是四聚体四元结构。所述两条重链与彼此连接，并通过二硫键各自与一条轻链连接。所得四聚体有两个相同的半部，所述两个相同的半部一起形成Y样形状。叉的每一端都含有一个相同的抗原结合结构域。人体内有四个IgG亚类(IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)，所述四个IgG亚类是按它们在血清中的丰度顺序命名的(即，IgG1是最丰富的)。通常，抗体的抗原结合结构域将在与癌细胞结合的特异性和亲和力方面最为关键。
“抗体构建体”是指包含(i)抗原结合结构域和(ii)Fc结构域的抗体或融合蛋白。
“表位”是指抗原结合结构域所结合(即，在抗原结合结构域的互补位处)的抗原的任何抗原决定簇或表位决定簇。抗原决定簇通常由分子(诸如氨基酸或糖侧链)的化学活性表面基团组成，并且往往具有特定三维结构特征以及特定电荷特征。
术语“Fc受体”或“FcR”是指结合抗体的Fc区的受体。存在三大类Fc受体：(1)与IgG结合的FcγR，(2)与IgA结合的FcαR，和(3)与IgE结合的FcεR。FcγR家族包括几个成员，诸如FcγI(CD64)、FcγRIIA(CD32A)、FcγRIIB(CD32B)、FcγRIIIA(CD16A)和FcγRIIIB(CD16B)。Fcγ受体在对IgG的亲和力方面不同，并且对IgG亚类(例如，IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)也具有不同的亲和力。
“生物仿制药”是指已获批准的抗体构建体，其具有的活性特性类似于例如先前批准的靶向PD-L1的抗体构建体，例如阿特珠单抗(TECENTRIQTM，Genentech,Inc.)、度伐利尤单抗(IMFINZITM，AstraZeneca)和阿维鲁单抗(BAVENCIOTM，EMD Serono,Pfizer)；先前批准的靶向HER2的抗体构建体，例如曲妥珠单抗(HERCEPTINTM，Genentech,Inc.)和帕妥珠单抗(PERJETATM，Genentech,Inc.)；或靶向CEA的抗体，诸如拉贝珠单抗(CEA-CIDETM、MN-14、hMN14、Immunomedics)CAS注册号219649-07-7)。
“改良型生物相似性药物(Biobetter)”是指经批准的抗体构建体，其是对先前批准的抗体构建体(例如阿特珠单抗、度伐利尤单抗、阿维鲁单抗、曲妥珠单抗、帕妥珠单抗和拉贝珠单抗)的改进。改良型生物相似性药物可相对于先前批准的抗体构建体具有一种或多种修饰(例如，改变的聚糖谱或独特的表位)。
“氨基酸”是指可以掺入肽、多肽或蛋白质中的任何单体单元。氨基酸包括天然存在的α-氨基酸及其立体异构体，以及非天然(非天然存在的)氨基酸及其立体异构体。给定氨基酸的“立体异构体”是指具有相同分子式和分子内键但是键和原子的三维排列不同的异构体(例如，L-氨基酸和对应的D-氨基酸)。氨基酸可以被糖基化(例如，N-连接的聚糖、O-连接的聚糖、磷酸聚糖、C-连接的聚糖或糖基磷脂酰肌醇化(glypication))或去糖基化。氨基酸可以在本文中由其通常已知的三字母符号或由IUPAC-IUB生物化学命名委员会推荐的单字母符号来提及。
天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的那些氨基酸，以及后期经修饰的那些氨基酸，例如羟基脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。天然存在的α-氨基酸包括但不限于丙氨酸(Ala)、半胱氨酸(Cys)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、苯丙氨酸(Phe)、甘氨酸(Gly)、组氨酸(His)、异亮氨酸(Ile)、精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)、亮氨酸(Leu)、蛋氨酸(Met)、天冬酰胺(Asn)、脯氨酸(Pro)、谷氨酰胺(Gln)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、缬氨酸(Val)、色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)以及它们的组合。天然存在的α-氨基酸的立体异构体包括但不限于D-丙氨酸(D-Ala)、D-半胱氨酸(D-Cys)、D-天冬氨酸(D-Asp)、D-谷氨酸(D-Glu)、D-苯丙氨酸(D-Phe)、D-组氨酸(D-His)、D-异亮氨酸(D-Ile)、D-精氨酸(D-Arg)、D-赖氨酸(D-Lys)、D-亮氨酸(D-Leu)、D-蛋氨酸(D-Met)、D-天冬酰胺(D-Asn)、D-脯氨酸(D-Pro)、D-谷氨酰胺(D-Gln)、D-丝氨酸(D-Ser)、D-苏氨酸(D-Thr)、D-缬氨酸(D-Val)、D-色氨酸(D-Trp)、D-酪氨酸(D-Tyr)以及它们的组合。
非天然(非天然存在的)氨基酸包括但不限于氨基酸类似物、氨基酸模拟物、合成氨基酸、N-取代的甘氨酸和L或D构型的N-甲基氨基酸，它们以类似于天然存在的氨基酸的方式起作用。例如，“氨基酸类似物”可以是与天然存在的氨基酸具有相同基本化学结构(即，键合至氢的碳、羧基、氨基)但是具有经修饰的侧链基团或经修饰的肽主链的非天然氨基酸，例如高丝氨酸、正亮氨酸、蛋氨酸亚砜和蛋氨酸甲基锍。“氨基酸模拟物”是指具有这样的结构的化合物，所述结构不同于氨基酸的一般化学结构，但其以类似于天然存在的氨基酸的方式起作用。
“接头”是指在化合物或材料中共价键合两个或更多个部分的官能团。例如，连接部分可用于将佐剂部分共价键合到免疫缀合物中的抗体构建体。
“连接部分”是指在化合物或材料中共价键合两个或更多个部分的官能团。例如，连接部分可用于将佐剂部分共价键合到免疫缀合物中的抗体。用于将连接部分连接到蛋白质和其他物质的有用键包括但不限于酰胺、胺、酯、氨基甲酸酯、脲、硫醚、硫代氨基甲酸酯、硫代碳酸酯和硫脲。
“二价”是指含有两个连接点以连接两个官能团的化学部分；多价连接部分可具有用于连接另外的官能团的另外连接点。二价基团可以用后缀“二基”表示。例如，二价连接部分包括二价聚合物部分，诸如二价聚(乙二醇)、二价环烷基、二价杂环烷基、二价芳基和二价杂芳基基团。“二价环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基基团”是指具有两个连接点以共价连接分子或材料中的两个部分的环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基基团。环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基基团可以是取代的或未取代的。环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基基团可以被一个或多个选自卤基、羟基、氨基、烷基氨基、酰氨基、酰基、硝基、氰基和烷氧基的基团取代。
波浪线
Figure BDA0003603486130000071
表示特定化学部分的连接点。如果指定的化学部分存在有两条波浪线
Figure BDA0003603486130000072
则应理解该化学部分可以双向使用，即从左到右或从右到左阅读。在一些实施方案中，存在有两条波浪线
Figure BDA0003603486130000073
的特定部分被认为用作从左到右阅读。
“烷基”是指具有所示碳原子数的直链(straight/linear)或支链饱和脂肪族基团。烷基可包括任何数量的碳，例如一至十二。烷基基团的示例包括但不限于甲基(Me、-CH3)、乙基(Et、-CH2CH3)、1-丙基(n-Pr、正丙基、-CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr、异丙基、-CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu、正丁基、-CH2CH2CH2CH3)、2-甲基-1-丙基(i-Bu、异丁基、-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu、仲丁基、-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(t-Bu、叔丁基、-C(CH3)3)、1-戊基(正戊基、-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3、1-庚基、1-辛基等。所述烷基基团可为取代的或未取代的。“取代的烷基”基团可以被一个或多个选自卤基、羟基、氨基、氧基(＝O)、烷基氨基、酰氨基、酰基、硝基、氰基和烷氧基的基团取代。
术语“烷基二基”是指二价烷基。烷基二基的示例包括但不限于亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2CH2-)、亚丙基(-CH2CH2CH2-)等。烷基二基基团也可以称为“亚烷基”基团。
“烯基”是指具有所示碳原子数和至少一个碳-碳双键sp2的直链(straight/linear)或支链的不饱和脂肪族基团。烯基可包含两个至约12个或更多个碳原子。烯基基团是具有“顺式”和“反式”取向，或者替代地“E”和“Z”取向的基团。示例包括但不限于乙烯基(ethylenyl/vinyl)(-CH＝CH2)、烯丙基(-CH2CH＝CH2)、丁烯基、戊烯基以及它们的异构体。烯基基团可为取代的或未取代的。“取代的烯基”基团可以被一个或多个选自卤基、羟基、氨基、氧基(＝O)、烷基氨基、酰氨基、酰基、硝基、氰基和烷氧基的基团取代。
术语“亚烯基”或“烯基二基(alkenyldiyl)”是指直链或支链二价烃基。示例包括但不限于亚乙烯基(ethylenylene/vinylene)(-CH＝CH-)、烯丙基(-CH2CH＝CH-)等。
“炔基”是指具有所示碳原子数和至少一个碳-碳三键sp的直链(straight/linear)或支链的不饱和脂肪族基团。炔基可包含两个至约12个或更多个碳原子。例如，C2-C6炔基包括但不限于乙炔基(-C≡CH)、丙炔基(炔丙基、-CH2C≡CH)、丁炔基、戊炔基、己炔基以及它们的异构体炔基基团可为取代的或未取代的。“取代的炔基”基团可以被一个或多个选自卤基、羟基、氨基、氧基(＝O)、烷基氨基、酰氨基、酰基、硝基、氰基和烷氧基的基团取代。
术语“亚炔基”或“炔基二基”是指二价炔基。
术语“碳环”、“碳环基”、“碳环环”和“环烷基”是指饱和或部分不饱和的单环、稠合双环或桥接多环体系，其含有3至12个环原子，或所示原子数。饱和单环碳环包括例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环辛基。饱和双环和多环碳环包括例如降冰片烷、[2.2.2]双环辛烷、十氢化萘和金刚烷。碳环基团也可以是部分不饱和的，在所述环中具有一个或多个双键或三键。部分不饱和的代表性碳环基团包括但不限于环丁烯、环戊烯、环己烯、环己二烯(1,3-异构体和1,4-异构体)、环庚烯、环庚二烯、环辛烯、环辛二烯(1,3-异构体、1,4-异构体和1,5-异构体)、降冰片烯和降冰片二烯。
术语“环烷基二基”是指二价环烷基。
“芳基”是指通过从母体芳环体系的单个碳原子上去除一个氢原子而衍生的具有6-20个碳原子(C6-C20)的单价芳烃基团。芳基基团可以是单环的，稠合以形成双环或三环基团，或通过键连接以形成联芳基基团。代表性的芳基基团包括苯基、萘基和联苯基。其他芳基基团包括苄基，该苄基具有亚甲基连接基团。一些芳基基团具有6至12个环成员，诸如苯基、萘基或联苯基。其他芳基基团具有6至10个环成员，诸如苯基或萘基。
术语“亚芳基”或“芳基二基”是指通过从母体芳环体系的两个碳原子上去除两个氢原子而衍生的具有6-20个碳原子(C6-C20)的二价芳烃基团。一些芳基二基基团在示例性结构中表示为“Ar”。芳基二基包括包含稠合到饱和、部分不饱和环或芳族碳环的芳环的双环基团。典型的芳基二基包括但不限于衍生自苯(苯基二基)、取代的苯、萘、蒽、亚联苯基、亚茚基、亚茚满基、1,2-二氢萘、1,2,3,4-四氢萘基等的基团。芳基二基基团也称为“亚芳基”，并且任选地被本文所述的一个或多个取代基取代。
术语“杂环”、“杂环基”和“杂环环”在本文中可互换使用，并且是指饱和或部分不饱和的(即，在环内具有一个或多个双键和/或三键)3至约20个环原子的碳环基团，其中至少一个环原子是选自氮、氧、磷和硫的杂原子，其余环原子是C，其中一个或多个环原子任选地被一个或多个下述取代基独立地取代。杂环可以是具有3至7个环成员(2至6个碳原子和1至4个选自N、O、P和S的杂原子)的单环或具有7至10个环成员(4至9个碳原子和1至6个选自N、O、P和S的杂原子)的双环，例如：双环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]体系。杂环描述于Paquette,Leo A.；“Principles of Modern Heterocyclic Chemistry”(W.A.Benjamin,New York,1968)，特别是第1章、第3章、第4章、第6章、第7章和第9章；“The Chemistry ofHeterocyclic Compounds,A series of Monographs”(John Wiley&Sons,New York,1950至今)，特别是第13卷、第14卷、第16卷、第19卷和第28卷；和J.Am.Chem.Soc.(1960)82:5566中。“杂环基”还包括其中杂环基团与饱和的、部分不饱和的环或芳族碳环或杂环环稠合的基团。杂环环的示例包括但不限于吗啉-4-基、哌啶-1-基、哌嗪基、哌嗪-4-基-2-酮、哌嗪-4-基-3-酮、吡咯烷-1-基、硫代吗啉-4-基、S-二氧代硫吗啉-4-基、氮杂环辛烷-1-基、氮杂环丁烷-1-基、八氢吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基、[1,4]二氮杂环庚烷-1-基、吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢哌喃基、二氢哌喃基、四氢噻喃基、哌啶基、吗啉基、硫吗啉基、噻烷基、哌嗪基、高哌嗪基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、高哌啶基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、氧氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、硫氮杂环庚烷基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、2H-哌喃基、4H-哌喃基、二噁烷基、1,3-二氧戊环基、吡唑啉基、二噻烷基、二硫戊环基、二氢哌喃基、二氢噻吩基、二氢呋喃基、吡唑烷基咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮杂双环[3.1.0]己烷基、3-氮杂双环[4.1.0]庚烷基、氮杂双环[2.2.2]己烷基、3H-吲哚基喹嗪基和N-吡啶基脲。螺杂环基部分也包括在此定义的范围内。螺杂环基部分的示例包括氮杂螺[2.5]辛烷基和氮杂螺[2.4]庚烷基。其中2个环原子被氧基(＝O)部分取代的杂环基的示例是嘧啶酮基和1,1-二氧代-硫代吗啉基。本文的杂环基团任选地独立被一个或多个本文所述的取代基取代。
术语“杂环基二基”是指二价饱和或部分不饱和的(即，在环内具有一个或多个双键和/或三键)3至约20个环原子的碳环基团，其中至少一个环原子是选自氮、氧、磷和硫的杂原子，其余环原子是C，其中一个或多个环原子任选地被一个或多个如所述的取代基独立地取代。
术语“杂芳基”是指具有5元、6元或7元环的单价芳族基团并且包括5-20个原子的稠环体系(其中至少一个稠环体系是芳族的)，含有一个或多个独立地选自氮、氧和硫的杂原子。杂芳基基团的示例是吡啶基(包括例如2-羟基吡啶基)、咪唑基、咪唑并吡啶基、嘧啶基(包括例如4-羟基嘧啶基)、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、四氢异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、哒嗪基、三嗪基、异吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、噻二唑基、呋呫基、苯并呋呫基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基和呋喃并吡啶基。杂芳基基团任选地独立地被一个或多个本文所述的取代基取代。
术语“杂芳基二基”是指具有5元、6元或7元环的二价芳族基团并且包括5-20个原子的稠环体系(其中至少一个稠环体系是芳族的)，含有一个或多个独立地选自氮、氧和硫的杂原子。
在可能的情况下，杂环或杂芳基基团可以是碳键合的(碳连接的)或氮键合的(氮连接的)。举例而非限制，碳键合的杂环或杂芳基在以下位置处键合：吡啶的2、3、4、5或6位；哒嗪的3、4、5或6位；嘧啶的2、4、5或6位；吡嗪的2、3、5或6位；呋喃、四氢呋喃、硫呋喃、噻吩、吡咯或四氢吡咯的2、3、4或5位；噁唑、咪唑或噻唑的2、4或5位；异噁唑、吡唑或异噻唑的3、4或5位；氮丙啶的2或3位；氮杂环丁烷的2、3或4位；喹啉的2、3、4、5、6、7或8位；或异喹啉的1、3、4、5、6、7或8位。
举例而非限制，氮键合的杂环或杂芳基在以下位置进行键合：氮丙啶、氮杂环丁烷、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、吲哚啉、1H-吲唑的1位；异吲哚或异吲哚啉的2位；吗啉的4位；和咔唑或β-咔啉的9位。
术语“卤基”或“卤素”本身或作为另一个取代基的部分，是指氟、氯、溴或碘原子。
术语“羰基”本身或作为另一个取代基的一部分是指C(＝O)或者-C(＝O)-，即，在具有羰基的部分中碳原子与氧双键键合并与另外两个基团键合。
如本文所用，短语“季铵盐”是指已被烷基取代基(例如，C1-C4烷基，诸如甲基、乙基、丙基或丁基)季铵化的叔胺。
术语“治疗(treat/treatment/treating)”是指成功治疗或改善损伤、病理、病症(例如，癌症)或症状(例如，认知障碍)的任何标志，包括任何客观或主观参数，诸如消除；缓解；减轻症状或使症状、损伤、病理或病症对患者来说更可耐受；降低症状进展的速度；减少症状或病症的频率或持续时间；或者，在一些情况下，防止症状发作。症状的治疗或改善可基于任何客观或主观参数；包括例如身体检查的结果。
术语“癌症”、“赘生物”和“肿瘤”在本文中用于指这样的细胞，所述细胞表现出自主的、不受调节的生长，使得所述细胞表现出异常生长表型，所述异常生长表型的特征在于显著丧失对细胞增殖的控制。在本发明的上下文中用于检测、分析和/或治疗的感兴趣的细胞包括癌细胞(例如，来自患有癌症的个体的癌细胞)、恶性癌细胞、转移前癌细胞、转移癌细胞和非转移癌细胞。几乎每种组织的癌症都是已知的。短语“癌症负担”是指受试者中癌细胞的数量或癌症体积。因此，减少癌症负担是指减小受试者中癌细胞的数量或癌细胞体积。如本文所用的术语“癌细胞”是指为癌细胞(例如，来自可以进行治疗的个体的癌症中的任何癌症，例如，从患有癌症的个体中分离的)或来源于癌细胞(例如，癌细胞的克隆)的任何细胞。例如，癌细胞可以来自已建立的癌细胞系，可以是从患有癌症的个体分离的原代细胞，可以是来自从患有癌症的个体分离的原代细胞的子代细胞，等等。在一些实施方案中，该术语还可以指癌细胞的一部分，诸如亚细胞部分、细胞膜部分或癌细胞的细胞裂解物。本领域技术人员已知有许多类型的癌症，包括实体瘤诸如癌、肉瘤、成胶质细胞瘤、黑素瘤、淋巴瘤和骨髓瘤，以及循环癌诸如白血病。
如本文所用，术语“癌症”包括任何形式的癌症，包括但不限于实体瘤癌症(例如，皮肤癌、肺癌、前列腺癌、乳腺癌、胃癌、膀胱癌、结肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肾癌、肝癌、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、平滑肌肉瘤、头颈部鳞状细胞癌、黑素瘤和神经内分泌癌)和液体癌(例如，血液癌)；癌；软组织肿瘤；肉瘤；畸胎瘤；黑素瘤；白血病；淋巴瘤；和脑癌，包括微小残留病，并且包括原发性肿瘤和转移性肿瘤两者。
“PD-L1表达”是指在细胞表面上具有PD-L1受体的细胞。如本文所用，“PD-L1过表达”是指与对应的非癌细胞相比具有更多PD-L1受体的细胞。
“HER2”是指蛋白质人表皮生长因子受体2。
“HER2表达”是指在细胞表面上具有HER2受体的细胞。例如，细胞可以具有在细胞表面上的约20,000至约50,000个HER2受体。如本文所用，“HER2过表达”是指具有大于约50,000个HER2受体的细胞。例如，与对应的非癌细胞(例如，约1百万个或2百万个HER2受体)相比，细胞的HER2受体数量为2、5、10、100、1,000、10,000、100,000或1,000,000倍。估计HER2在约25％至约30％的乳腺癌中过表达。
癌症的“病理学”包括损害患者健康的所有现象。这包括但不限于异常或不可控的细胞生长、转移、干扰邻近细胞的正常功能、以异常水平释放细胞因子或其他分泌产物、抑制或加重炎症或免疫应答、瘤形成、癌前病变、恶性肿瘤，以及侵袭周围或远处的组织或器官，诸如淋巴结。
如本文所用，短语“癌症复发”和“肿瘤复发”及其语法变型是指在癌症诊断后肿瘤或癌细胞的进一步生长。具体地，当癌组织中发生进一步的癌细胞生长时，可能会发生复发。类似地，“肿瘤扩散”发生在肿瘤细胞散布到局部或远处组织和器官时，因此，肿瘤扩散涵盖肿瘤转移。当肿瘤生长局部扩散以通过压迫、破坏或阻止正常器官功能损害受累组织的功能时，就会发生“肿瘤侵袭”。
如本文所用，术语“转移”是指癌性肿瘤在器官或身体部分中的生长，其与原始癌性肿瘤的器官不直接连接。转移应理解为包括微转移，微转移是在与原始癌性肿瘤的器官没有直接连接的器官或身体部分中存在不可检测量的癌细胞。转移也可以定义为一个过程的几个步骤，诸如癌细胞从原始肿瘤部位的脱离，以及癌细胞迁移和/或侵袭到身体的其他部分。
短语“有效量”和“治疗有效量”是指物质诸如免疫缀合物的剂量或量，所述剂量或量的所述物质产生施用其的治疗效应。精确剂量将取决于治疗目的，并且将可由本领域技术人员使用已知技术来确定(参见例如，Lieberman,Pharmaceutical Dosage Forms(第1-3卷,1992)；Lloyd,The Art,Science and Technology of Pharmaceutical Compounding(1999)；Pickar,Dosage Calculations(1999)；Goodman&Gilman’s The PharmacologicalBasis of Therapeutics，第11版(McGraw-Hill,2006)；和Remington:The Science andPractice of Pharmacy,第22版，(Pharmaceutical Press,London,2012))。在癌症的情况下，治疗有效量的免疫缀合物可以减少癌细胞的数量；减小肿瘤大小；抑制(即，在一定程度上减缓并优选停止)癌细胞浸润到外周器官；抑制(即，在一定程度上减缓并优选停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解与癌症相关的症状中的一种或多种症状。到免疫缀合物可阻止生长和/或杀死现有癌细胞的程度，所述免疫缀合物可能是细胞抑制的和/或细胞毒性的。对于癌症治疗，功效可以例如通过评定疾病进展时间(timeto disease progression,TTP)和/或确定响应率(response rate,RR)来衡量
“接受者”、“个体”、“受试者”、“宿主”和“患者”可互换使用并且是指希望诊断、治疗或疗法的任何哺乳动物受试者(例如，人)。用于治疗目的的“哺乳动物”是指任何被归类为哺乳动物的动物，包括人、家畜和农场动物以及动物园动物、赛场动物或宠物动物，诸如如狗、马、猫、牛、绵羊、山羊、猪、骆驼等。在某些实施方案中，哺乳动物是人。
本发明上下文中的短语“协同佐剂”或“协同组合”包括两种免疫调节剂(诸如受体激动剂、细胞因子和佐剂多肽)的组合，相对于单独施用，所述两种免疫调节剂的组合引起对免疫的协同效应。特别地，本文所公开的免疫缀合物包含所要求保护的佐剂和抗体构建体的协同组合。施用后的这些协同组合引发对免疫的更大影响，例如，相对于在不存在其他部分的情况下施用抗体构建体或佐剂时。此外，与单独施用抗体构建体或佐剂时相比，可以施用减少量的免疫缀合物(如通过作为免疫缀合物的一部分施用的抗体构建体的总数或佐剂的总数测量的)。
如本文所用，术语“施用”是指向受试者肠胃外、静脉内、腹膜内、肌内、肿瘤内、病灶内、鼻内或皮下施用、口服施用、作为栓剂施用、局部接触、鞘内施用、或植入缓释装置(例如微量渗透泵)。
如本文用于修饰数值的术语“约”和“大约”表示数值周围的紧密范围。因此，如果“X”是值，则“约X”或“大约X”表示从0.9X至1.1X(例如，从0.95X至1.05X或从0.99X至1.01X)的值。提及“约X”或“大约X”具体表示至少值X、0.95X、0.96X、0.97X、0.98X、0.99X、1.01X、1.02X、1.03X、1.04X和1.05X。因此，“约X”和“大约X”旨在教导和提供对例如“0.98X”的权利要求限制的书面描述支持。
抗体
本发明的免疫缀合物包含抗体。本发明的实施方案的范围包括本文所述的抗体构建体或抗原结合结构域的功能变体。如本文所用的术语“功能变体”是指这样的抗体构建体，所述抗体构建体具有的抗原结合结构域与亲本抗体构建体或抗原结合结构域具有实质或显著序列同一性或相似性，所述功能变体保留抗体构建体或抗原结合结构域(所述功能变体是所述抗体构建体或抗原结合结构域的变体)的生物学活性。功能变体涵盖例如本文所述的抗体构建体或抗原结合结构域(亲本抗体构建体或抗原结合结构域)的那些变体，所述变体保留以与亲本抗体构建体或抗原结合结构域相似程度、相同程度或较高程度地识别表达PD-L1、HER2或CEA的靶细胞的能力。
关于抗体构建体或抗原结合结构域，功能变体可以例如与所述抗体构建体或抗原结合结构域在氨基酸序列上具有至少约30％、约50％、约75％、约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更大同一性。
例如，功能变体可包含亲本抗体构建体或抗原结合结构域的氨基酸序列，所述氨基酸序列具有至少一个保守氨基酸取代。替代地或另外，功能变体可包含亲本抗体构建体或抗原结合结构域的氨基酸序列，所述氨基酸序列具有至少一个非保守氨基酸取代。在这种情况下，优选非保守氨基酸取代不干扰或抑制功能变体的生物学活性。非保守氨基酸取代可增强功能变体的生物学活性，使得与亲本抗体构建体或抗原结合结构域相比，功能变体的生物学活性增加。
本发明的抗体构建体或抗原结合结构域的氨基酸取代优选是保守氨基酸取代。保守氨基酸取代是本领域中已知的，并且包括这样的氨基酸取代，在所述氨基酸取代中一种具有一定的物理和/或化学性质的氨基酸被交换为具有相同或相似化学或物理性质的另一种氨基酸。例如，保守氨基酸取代可以是酸性/带负电荷的极性氨基酸被另一种酸性/带负电荷的极性氨基酸(例如，Asp或Glu)取代、具有非极性侧链的氨基酸被另一种具有非极性侧链的氨基酸(例如，Ala、Gly、Val、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Trp、Cys、Val等)取代、碱性/带正电荷的极性氨基酸被另一种碱性/带正电荷的极性氨基酸(例如，Lys、His、Arg等)取代、具有极性侧链的不带电荷的氨基酸被另一种具有极性侧链的不带电荷的氨基酸(例如，Asn、Gln、Ser、Thr、Tyr、等)取代、具有β-支链侧链的氨基酸被另一种具有β-支链侧链的氨基酸(例如，Ile、Thr和Val)取代、具有芳香族侧链的氨基酸被另一种具有芳香族侧链的氨基酸(例如，His、Phe、Trp和Tyr)取代等。
抗体构建体或抗原结合结构域可以基本上由本文所述的一个或多个特定氨基酸序列组成，使得其他组分(例如，其他氨基酸)不会实质性地改变抗体构建体或抗原结合结构域功能变体的生物活性。
在一些实施方案中，免疫缀合物中的抗体含有经修饰的Fc区，其中所述修饰调节Fc区与一种或多种Fc受体的结合。
在一些实施方案中，免疫缀合物中的抗体(例如，与至少两个佐剂部分缀合的抗体)含有在Fc区中的一种或多种修饰(例如，氨基酸插入、缺失、和/或取代)，与没有所述Fc区中的突变的天然抗体相比，所述一种或多种修饰导致与一种或多种Fc受体(例如，FcγRI(CD64)、FcγRIIA(CD32A)、FcγRIIB(CD32B)、FcγRIIIA(CD16a)、和/或FcγRIIIB(CD16b))的经调节的结合(例如，增加的结合或减少的结合)。在一些实施方案中，免疫缀合物中的抗体含有在Fc区中的一种或多种修饰(例如，氨基酸插入、缺失、和/或取代)，所述一种或多种修饰减少了所述抗体的Fc区与FcγRIIB的结合。在一些实施方案中，免疫缀合物中的抗体含有在所述抗体的Fc区中的一种或多种修饰(例如，氨基酸插入、缺失和/或取代)，与没有所述Fc区中的突变的天然抗体相比，所述一种或多种修饰减少了抗体与FcγRIIB的结合，与此同时维持了与FcγRI(CD64)、FcγRIIA(CD32A)和/或FcRγIIIA(CD16a)的相同结合或具有增加的与其结合。在一些实施方案中，免疫缀合物中的抗体含有在Fc区中的一种或多种修饰，所述一种或多种修饰增加了抗体的Fc区与FcγRIIB的结合。
在一些实施方案中，通过抗体的Fc区中相对于抗体的天然Fc区的突变来提供经调节的结合。突变可以在CH2结构域、CH3结构域或它们的组合中。“天然Fc区”与“野生型Fc区”同义并且包含与自然界中发现的Fc区的氨基酸序列相同或与天然抗体中发现的Fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列(例如，西妥昔单抗)。天然序列人Fc区包括天然序列人IgG1 Fc区、天然序列人IgG2 Fc区、天然序列人IgG3Fc区、和天然序列人IgG4 Fc区，以及它们的天然存在的变体。天然序列Fc包括Fc的各种同种异型(Jefferis等人，(2009)mAbs,1(4):332-338)。
在一些实施方案中，导致与一种或多种Fc受体的经调节的结合的Fc区中的突变可包括以下突变中的一者或多者：SD(S239D)、SDIE(S239D/I332E)、SE(S267E)、SELF(S267E/L328F)、SDIE(S239D/I332E)、SDIEAL(S239D/I332E/A330L)、GA(G236A)、ALIE(A330L/I332E)、GASDALIE(G236A/S239D/A330L/I332E)、V9(G237D/P238D/P271G/A330R)、和V11(G237D/P238D/H268D/P271G/A330R)，和/或下列氨基酸处的一个或多个突变：E233、G237、P238、H268、P271、L328和A330。用于调节Fc受体结合的附加Fc区修饰描述于例如US 2016/0145350、US 7416726和US 5624821中，这些专利的全部内容据此以引用方式并入。
在一些实施方案中，免疫缀合物的抗体的Fc区被修饰以具有与天然未修饰的Fc区相比改变的Fc区糖基化模式。
人免疫球蛋白在每条重链的Cγ2结构域中的Asn297残基处被糖基化。这种N连接的寡糖由核心七糖N-乙酰氨基葡萄糖4甘露糖3(GlcNAc4Man3)构成。已知用内切糖苷酶或PNG酶F去除七糖会导致抗体Fc区的构象变化，这可显著降低对激活FcγR的抗体结合亲和力并导致降低的效应功能。核心七糖通常用半乳糖、二等分GlcNAc、岩藻糖或唾液酸修饰，这些物质不同地影响Fc与激活和抑制FcγR的结合。此外，已证明α2,6-唾液酸化增强体内抗炎活性，而去岩藻糖基化导致改善的FcγRIIIa结合，并使抗体依赖性细胞毒性和抗体依赖性吞噬作用增加10倍。因此，特定的糖基化模式可用于控制炎症性效应功能。
在一些实施方案中，改变糖基化模式的修饰是突变。例如，在Asn297处的取代。在一些实施方案中，Asn297突变为谷氨酰胺(N297Q)。例如，在美国专利7,416,726和美国专利申请公开2007/0014795和2008/0286819中描述了用调节经FcγR调控的信号传导的抗体控制免疫应答的方法，这些专利的全部内容据此以引用方式并入。
在一些实施方案中，免疫缀合物的抗体被修饰以含有具有非天然存在的糖基化模式的经工程化的Fab区域。例如，可以对杂交瘤进行遗传工程化以分泌具有特定突变的非岩藻糖基化mAb、去唾液酸化mAb或去糖基化Fc，所述特定突变使得能够增加FcRγIIIa结合和效应功能。在一些实施方案中，免疫缀合物的抗体经工程化以被非岩藻糖基化(afucosylated)。
在一些实施方案中，将免疫缀合物中抗体的整个Fc区被与不同的Fc区交换，使得抗体的Fab区缀合至非天然Fc区。例如，西妥昔单抗的Fab区，通常包含IgG1 Fc区，可缀合至IgG2、IgG3、IgG4或IgA，或者纳武单抗的Fab区，通常包含IgG4 Fc区，可缀合至IgG1、IgG2、IgG3、IgA1或IgG2。在一些实施方案中，具有非天然Fc结构域的Fc修饰的抗体还包含一种或多种调节所述Fc结构域的稳定性的氨基酸修饰，诸如IgG4 Fc内的S228P突变。在一些实施方案中，具有非天然Fc结构域的Fc修饰的抗体还包含本文所述的一种或多种调节Fc与FcR的结合的氨基酸修饰。
在一些实施方案中，与天然未修饰的抗体相比，调节Fc区与FcR结合的修饰不改变抗体的Fab区与其抗原的结合。在其他实施方案中，与天然未修饰的抗体相比，调节Fc区与FcR结合的修饰还增加抗体的Fab区与其抗原的结合。
在一个示例性实施方案中，本发明的免疫缀合物包含如下抗体构建体，所述抗体构建体包含特异性识别和结合PD-L1的抗原结合结构域。
在一个示例性实施方案中，本发明的免疫缀合物包含如下抗体构建体，所述抗体构建体包含特异性识别和结合HER2的抗原结合结构域。
在一个示例性实施方案中，本发明的免疫缀合物包含如下抗体构建体，所述抗体构建体包含特异性识别和结合CEA的抗原结合结构域。
在某些实施方案中，本发明的免疫缀合物包含抗HER2抗体。在本发明的一个实施方案中，本发明的免疫缀合物的抗HER2抗体包括人源化抗HER2抗体，例如huMAb4D5-1、huMAb4D5-2、huMAb4D5-3、huMAb4D5-4、huMAb4D5-5、huMAb4D5-6、huMAb4D5-7和huMAb4D5-8，如在US 5821337的表3中所述，该专利以引用方式具体并入本文。这些抗体含有人构架区和与HER2结合的鼠抗体(4D5)的互补决定区。人源化抗体huMAb4D5-8也称为曲妥珠单抗，其以商品名HERCEPTINTM(Genentech,Inc.)商购可得。
曲妥珠单抗(CAS 180288-69-1,
Figure BDA0003603486130000211
huMAb4D5-8,rhuMAb HER2,Genentech)是一种重组DNA来源的IgG1κ单克隆抗体，其是鼠抗HER2抗体(4D5)的人源化形式，在基于细胞的测定中以高亲和力(Kd＝5nM)与HER2的胞外结构域选择性结合(US5677171；US 5821337；US 6054297；US 6165464；US 6339142；US 6407213；US 6639055；US6719971；US 6800738；US 7074404；Coussens等人(1985)Science 230:1132-9；Slamon等人(1989)Science244:707-12；Slamon等人(2001)New Engl.J.Med.344:783-792)。
在本发明的一个实施方案中，抗体构建体或抗原结合结构域包含曲妥珠单抗的CDR区。在本发明的一个实施方案中，抗HER2抗体进一步包含曲妥珠单抗的构架区。在本发明的一个实施方案中，抗HER2抗体进一步包含曲妥珠单抗的一个或两个可变区。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的免疫缀合物的抗HER2抗体包括人源化抗HER2抗体，例如人源化2C4，如US 7862817中所述。示例性人源化2C4抗体是帕妥珠单抗(CAS注册号380610-27-5)、PERJETATM(Genentech,Inc.)。帕妥珠单抗是一种HER二聚化抑制剂(HDI)并且用于抑制HER2与其他HER受体(诸如EGFR/HER1、HER2、HER3和HER4)形成活性异二聚体或同二聚体的能力。参见例如Harari和Yarden,Oncogene 19:6102-14(2000)；Yarden和Sliwk owski.Nat Rev Mol Cell Biol 2:127-37(2001)；Sliwkowski Nat St ructBiol 10:158-9(2003)；Cho等人，Nature 421:756-60(2003)；和Malik等人，Pro Am SocCancer Res 44:176-7(2003)。PERJETATM被批准用于治疗乳腺癌。
在本发明的一个实施方案中，抗体构建体或抗原结合结构域包含帕妥珠单抗的CDR区。在本发明的一个实施方案中，抗HER2抗体进一步包含帕妥珠单抗的构架区。在本发明的一个实施方案中，抗HER2抗体进一步包含帕妥珠单抗的一个或两个可变区。
癌胚抗原(CEA、CD66e、CEACAM5)的表达升高已经与瘤形成的各个生物学方面，尤其是肿瘤细胞粘附、转移、细胞免疫机制的阻断以及具有抗凋亡功能有关。CEA也被用作许多癌症的血液标志物。拉贝珠单抗(CEA-CIDETM,Immunomedics,CAS注册号219649-07-7)，也称为MN-14和hMN14，是一种人源化IgG1单克隆抗体并且已被研究用于治疗结直肠癌(Blumenthal,R.等人(2005)Cancer Immunology Immunotherapy 54(4):315-327)。与喜树碱类似物缀合的拉贝珠单抗(拉贝珠单抗govitecan，IMMU-130)靶向癌胚抗原相关细胞粘附分子5(CEACAM5)并且正被在患有复发或难治性转移性结直肠癌的患者中进行研究(Sharkey,R.等人，(2018),Molecular Cancer Therapeutics17(1):196-203；Cardillo,T.等人(2018)Molecular Cancer Therapeutics17(1):150-160)。
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含hMN-14/拉贝珠单抗的可变轻链(VLκ)SEQ ID NO.1(US 6676924)。
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVGTSVAWYQQKPGK APKLLIYWTSTRHTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQ QYSLYRSFGQGTKVEIK SEQ ID NO.1
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含hMN-14/拉贝珠单抗的轻链CDR(互补决定区)或轻链构架(LFR)序列SEQ ID NO.2至SEQ ID NO.8(US 6676924)。
Figure BDA0003603486130000221
Figure BDA0003603486130000231
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含hMN-14/拉贝珠单抗的可变重链(VH)SEQ ID NO.9(US6676924)。
EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSSSGFDFTTYWMSWVRQAPGKGLEWVAEIHPDSSTINYAPSLKDRFTISRDNSKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCASLYFGFPWFAYWGQGTPVTVSS SEQ ID NO.9
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含hMN-14/拉贝珠单抗的重链CDR(互补决定区)或重链构架(HFR)序列SEQ ID NO.10至SEQ IDNO.16(US 6676924)。
Figure BDA0003603486130000232
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含hPR1A3的可变轻链(VLκ)SEQ ID NO.17(US 8642742)。
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASAAVGTYVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRKRGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIK SEQ ID NO.17
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含hPR1A3的轻链CDR(互补决定区)或轻链构架(LFR)序列SEQ ID NO.18至SEQ ID NO.24(US8642742)。
Figure BDA0003603486130000241
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含hPR1A3的重链CDR(互补决定区)或重链构架(HFR)序列SEQ ID NO.25至SEQ ID NO.31(US8642742)。
Figure BDA0003603486130000242
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含hMFE-23的可变轻链(VLκ)SEQ ID NO.32(US 723288)。
ENVLTQSPSSMSASVGDRVNIACSASSSVSYMHWFQQKPGKSPKLWIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYSLTISSMQPEDAATYYCQQRSSYPLTFGGGTKLEIK SEQ ID NO.32
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含hMFE-23的轻链CDR(互补决定区)或轻链构架(LFR)序列SEQ ID NO.33至SEQ ID NO.39(US723288)。
Figure BDA0003603486130000251
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含hMFE-23的可变重链(VH)SEQ ID NO.40(US 723288)。
QVKLEQSGAEVVKPGASVKLSCKASGFNIKDSYMHWLRQGPGQRLEWIGWIDPENGDTEYAPKFQGKATFTTDTSANTAYLGLSSLRPEDTAVYYCNEGTPTGPYYFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO.40
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含hMFE-23的重链CDR(互补决定区)或重链构架(HFR)序列SEQ ID NO.41至SEQ ID NO.47(US723288)。
Figure BDA0003603486130000261
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含SM3E的可变轻链(VLκ)SEQ ID NO.48(US 723288)。
ENVLTQSPSSMSVSVGDRVTIACSASSSVPYMHWLQQKPGKSPKLLIYLTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYSLTISSVQPEDAATYYCQQRSSYPLTFGGGTKLEIK SEQ ID NO.48
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含SM3E的轻链CDR(互补决定区)或轻链构架(LFR)序列SEQ ID NO.49至SEQ ID NO.55(US723288)。
Figure BDA0003603486130000262
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含SM3E的可变重链(VH)SEQ ID NO.56(US 723288)。
QVKLEQSGAEVVKPGASVKLSCKASGFNIKDSYMHWLRQGPGQRLEWIGWIDPENGDTEYAPKFQGKATFTTDTSANTAYLGLSSLRPEDTAVYYCNEGTPTGPYYFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO.56
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含SM3E的重链CDR(互补决定区)或重链构架(HFR)序列SEQ ID NO.57至SEQ ID NO.63(US723288)。
Figure BDA0003603486130000271
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含NP-4/阿西莫单抗的轻链CDR(互补决定区)或轻链构架(LFR)序列SEQ ID NO.64至SEQ ID NO.70。
Figure BDA0003603486130000272
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含NP-4/阿西莫单抗的可变重链(VH)SEQ ID NO.71。
EVKLVESGGGLVQPGGSLRLSCATSGFTFTDYYMNWVRQPPGKALEWLGFIGNKANGYTTEYSASVKGRFTISRDKSQSILYLQMNTLRAEDSATYYCTRDRGLRFYFDYWGQGTTLTVSS SEQ ID NO.71。
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含NP-4的重链CDR(互补决定区)或重链构架(HFR)序列SEQ ID NO.72至SEQ ID NO.78。
Figure BDA0003603486130000281
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含M5A/hT84.66的可变轻链(VLκ)SEQ ID NO.79(US 7776330)。
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRAGESVDIFGVGFLHWYQQKPGKAPKLLIYRASNLESGVPSRFSGSGSRTDFTLTISSLQPEDFATY YCQQTNEDPYTFGQGTKVEIKSEQ ID NO.79
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含M5A/hT84.66的轻链CDR(互补决定区)或轻链构架(LFR)序列SEQ ID NO.80至SEQ ID NO.86(US7776330)。
Figure BDA0003603486130000291
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含M5A/hT84.66的可变重链(VH)SEQ ID NO.87(US 7776330)。
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYMHWVRQAPGKGLEWVARIDPANGNSKYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAPFGYYVSDYAMAYWGQGTLVTVSSSEQ ID NO.87
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含M5A/hT84.66的重链CDR(互补决定区)或重链构架(HFR)序列SEQ ID NO.88至SEQ ID NO.94(US7776330)。
Figure BDA0003603486130000292
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含hAb2-3的可变轻链(VLκ)SEQ ID NO.95(US 9617345)。
DIQMTQSPASLSASVGDRVTITCRASENIFSYLAWYQQKPGKSPKLLVYNTRTLAEGVPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFATYYCQHHYGTPFTFGSGTKLEIK SEQ ID NO.95
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含hAb2-3的轻链CDR(互补决定区)或轻链构架(LFR)序列SEQ ID NO.96至SEQ ID NO.102(US9617345)。
Figure BDA0003603486130000301
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含可变重链(VH)SEQ ID NO.103(US 9617345)。
EVQLQESGPGLVKPGGSLSLSCAASGFVFSSYDMSWVRQTPERGLEWVAYISSGGGITYAPSTVKGRFTVSRDNAKNTLYLQMNSLTSEDTAVYYCAAHYFGSSGPFAYWGQGTLVTVSSSEQ ID NO.103
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含hAb2-3的重链CDR(互补决定区)或重链构架(HFR)序列SEQ ID NO.104至SEQ ID NO.110。
Figure BDA0003603486130000311
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含A240VL-B9VH/AMG-211的可变轻链(VLκ)SEQ ID NO.111(US 9982063)。
QAVLTQPASLSASPGASASLTCTLRRGINVGAYSIYWYQQKPGSPPQYLLRYKSDSDKQQGSGVSSRFSASKDASANAGILLISGLQSEDEADYYCMIWHSGASAVFGGGTKLTVLSEQ ID NO.111
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含A240VL-B9VH/AMG-211的轻链CDR(互补决定区)或轻链构架(LFR)序列SEQ ID NO.112至SEQID NO.118(US 9982063)。
Figure BDA0003603486130000312
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含B9VH的可变重链(VH)SEQ ID NO.119(US 9982063)。
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTVSSYWMHWVRQAPGKGLEWVGFIRNKANGGTTEYAASVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGLRFYFDYWGQGTTVTVSS SEQ IDNO.119
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含重链CDR(互补决定区)或重链构架(HFR)序列SEQ ID NO.120至SEQ ID NO.126(US 9982063)。
Figure BDA0003603486130000321
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含E12VH的可变重链(VH)SEQ ID NO.127(US 9982063)。
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTVSSYWMHWVRQAPGKGLEWVGFILNKANGGTTEYAASVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGLRFYFDYWGQGTTVTVSS SEQ IDNO.127
在本发明的一个实施方案中，靶向CEA的抗体构建体或抗原结合结构域包含重链CDR(互补决定区)或重链构架(HFR)序列SEQ ID NO.128至SEQ ID NO.134(US 9982063)。
Figure BDA0003603486130000331
在一些实施方案中，抗体构建体还包含Fc结构域。在某些实施方案中，抗体构建体是抗体。在某些实施方案中，抗体构建体是融合蛋白。抗原结合结构域可以是单链可变区片段(scFv)。单链可变区片段(scFv)是通过合成肽获得的包含与抗体轻链的V结构域连接的抗体重链的可变(V)结构域的截短的Fab片段，所述单链可变区片段可以使用常规重组DNA技术产生。类似地，二硫键稳定化的可变区片段(dsFv)可以通过重组DNA技术制备。抗体构建体或抗原结合结构域可包含抗PD-L1抗体、抗HER2抗体或抗CEA抗体的抗原结合结构域的一个或多个可变区(例如，两个可变区)，每个可变区包含CDR1、CDR2和CDR3。
在一些实施方案中，免疫缀合物中的抗体含有经修饰的Fc区，其中所述修饰调节Fc区与一种或多种Fc受体的结合。
在一些实施方案中，通过包含能够结合TGFβ1的转化生长因子β1(TGFβ1)受体或其片段来修饰Fc区。例如，受体可以是TGFβ受体II(TGFβRII)。在一些实施方案中，TGFβ受体是人TGFβ受体。在一些实施方案中，IgG具有与TGFβRII胞外域(ECD)的C端融合；例如，并入本文中的US 9676863的SEQ ID NO:9的氨基酸24-159。“Fc接头”可用于将IgG连接至TGFβRII胞外结构域，例如G4S4G Fc接头。Fc接头可以是短的柔性肽，其允许分子的正确三维折叠，与此同时维持与靶标的结合特异性。在一些实施方案中，TGFβ受体的N端融合到抗体构建体的Fc(有或没有Fc接头)。在一些实施方案中，抗体构建体重链的C端融合到TGFβ受体(有或没有Fc接头)。在一些实施方案中，抗体构建体重链的C端赖氨酸残基突变为丙氨酸。
在一些实施方案中，免疫缀合物中的抗体是糖基化的。
在一些实施方案中，免疫缀合物中的抗体是经半胱氨酸工程化的抗体，所述抗体通过在经工程化的半胱氨酸可用于缀合但不干扰免疫球蛋白折叠和装配或改变抗原结合和效应功能的位点处的半胱氨酸取代来提供佐剂、标记或药物部分与抗体的位点特异性缀合(Junutula等人，2008b Nature Biotech.,26(8):925-932；Dornan等人，(2009)Blood114(13):2721-2729；US 7521541；US 7723485；US 2012/0121615；WO 2009/052249)。“经半胱氨酸工程化的抗体”或“经半胱氨酸工程化的抗体变体”是抗体的一个或多个残基被半胱氨酸残基取代的抗体。经半胱氨酸工程化的抗体可以与氨基喹啉佐剂部分缀合，以作为具有均匀化学计量的氨基喹啉-接头化合物(例如，在具有单个经工程化的半胱氨酸位点的抗体中，每个抗体至多2个氨基喹啉部分)。
在一些实施方案中，用于制备表3的免疫缀合物的经半胱氨酸工程化的抗体具有在轻链的149-赖氨酸位点处引入的半胱氨酸残基(LC K149C)。在其他实施方案中，经半胱氨酸工程化的抗体具有在重链的118-丙氨酸位点(EU编号)处引入的半胱氨酸残基(HCA118C)。该位点替代地按顺序编号编号为121，或按Kabat编号编号为114。在其他实施方案中，经半胱氨酸工程化的抗体具有在轻链中根据Kabat编号的G64C或R142C处，或在重链中根据Kabat编号的D101C、V184C或T205C处引入的半胱氨酸残基。
氨基喹啉佐剂化合物
本发明的免疫缀合物包含氨基喹啉佐剂部分。本文所述的佐剂部分是引发免疫应答的化合物(即，免疫刺激剂)。通常，本文所述的佐剂部分是TLR激动剂。TLR是负责启动脊椎动物的先天免疫应答的I型跨膜蛋白。TLR识别来自细菌、病毒和真菌的多种病原体相关分子模式，并作为抵御入侵病原体的第一道防线。由于细胞表达和它们引发的信号传导通路的差异，TLR引发重叠但不同的生物学反应。一旦参与(例如，通过天然刺激或合成TLR激动剂)，TLR就引发信号转导级联，从而导致通过衔接蛋白骨髓分化初级反应基因88(MyD88)激活核因子-κB(NF-κB)和募集IL-1受体相关激酶(IRAK)。IRAK的磷酸化然后导致TNF受体相关因子6(TRAF6)的募集，这导致NF-κB抑制剂I-κB的磷酸化。结果，NF-κB进入细胞核并引发启动子含有NF-κB结合位点的基因(诸如细胞因子)的转录。TLR信号传导的另外调节模式包括对TNF受体相关因子6(TRAF6)的含有TIR结构域的衔接子诱导型干扰素-β(TRIF)依赖性诱导和通过TRIF和TRAF3激活MyD88非依赖性通路，从而导致干扰素反应因子3(IRF3)的磷酸化。同样，MyD88依赖性通路也激活了几个IRF家族成员，包括IRF5和IRF7，而TRIF依赖性通路也激活了NF-κB通路。
通常，本文所述的佐剂部分是TLR7和/或TLR8激动剂。TLR7和TLR8均在单核细胞和树突细胞中表达。在人中，TLR7也在浆细胞样树突细胞(pDC)和B细胞中表达。TLR8主要在骨髓来源的细胞，即单核细胞、粒细胞和骨髓树突细胞中表达。TLR7和TLR8能够检测细胞内“外来”单链RNA的存在，作为应对病毒侵袭的手段。用TLR8激动剂处理表达TLR8的细胞可导致产生高水平的IL-12、IFN-γ、IL-1、TNF-α、IL-6和其他炎性细胞因子。同样，用TLR7激动剂刺激表达TLR7的细胞(诸如pDC)可导致产生高水平的IFN-α和其他炎性细胞因子。TLR7/TLR8参与和所导致的细胞因子产生可激活树突细胞和其他抗原呈递细胞，驱动多种先天性和获得性免疫应答机制，从而导致肿瘤破坏。
本发明的示例性氨基喹啉化合物(AQ)显示在表1中。每种化合物通过质谱法表征并显示出具有所示质量。根据实施例31测量针对表达人TLR7或人TLR8的HEK293 NFKB报告细胞的活性。表1的氨基喹啉化合物证明了TLR8激动剂选择性的令人惊讶和意想不到的特性，其可以预测用于治疗癌症和其他疾患的有用的治疗活性。
表1氨基喹啉化合物(AQ)
Figure BDA0003603486130000361
Figure BDA0003603486130000371
Figure BDA0003603486130000381
氨基喹啉接头化合物
本发明的免疫缀合物是通过将抗体与氨基喹啉-接头化合物缀合来制备的。氨基喹啉-接头化合物包含共价连接至接头单元的氨基喹啉部分。所述接头单元包含影响免疫缀合物的稳定性、渗透性、溶解度和其他药代动力学、安全性和功效特性的官能团和亚基。接头单元包括与抗体的反应性官能团反应(即缀合)的反应性官能团。例如，抗体的亲核基团(诸如赖氨酸侧链氨基)与氨基喹啉-接头化合物的亲电反应性官能团反应以形成免疫缀合物。此外，例如，抗体的半胱氨酸硫醇与氨基喹啉-接头化合物的马来酰亚胺或溴乙酰胺基团反应以形成免疫缀合物。
适用于氨基喹啉-接头化合物的亲电反应性官能团包括但不限于N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯和N-羟基磺基琥珀酰亚胺(磺基-NHS)酯(胺反应性)；碳二亚胺(胺和羧基反应性)；羟甲基膦(胺反应性)；马来酰亚胺(硫醇反应性)；卤代乙酰胺，诸如N-碘代乙酰胺(硫醇反应性)；芳基叠氮化物(伯胺反应性)；氟化芳基叠氮化物(通过碳-氢(C-H)插入的反应性)；五氟苯基(PFP)酯(胺反应性)；四氟苯基(TFP)酯(胺反应性)；亚胺酯(胺反应性)；异氰酸酯(羟基反应性)；乙烯基砜(硫醇、胺和羟基反应)；吡啶基二硫化物(硫醇反应性)；和二苯甲酮衍生物(通过C-H键插入的反应性)。其他试剂包括但不限于Hermanson,Bioconjugate Techniques，第2版，Academic Press,2008中描述的那些。
本发明为免疫缀合物的设计、制备和使用的限制和挑战提供了解决方案。一些接头可能在血流中不稳定，从而在靶细胞中内化之前释放出不可接受的量的佐剂/药物(Khot,A.等人(2015)Bioanalysis7(13):1633–1648)。其他接头可提供在血流中的稳定性，但是细胞内释放效率可能会受到负面影响。提供用于所需细胞内释放的接头通常在血流中稳定性差。或者说，血流稳定性和细胞内释放通常呈负相关。此外，在标准缀合过程中，负载在抗体上的佐剂/药物部分的量(即载药量)、在缀合反应中形成的聚集体的量，以及可获得的最终纯化缀合物的产率是相互关联的。例如，聚集体形成通常与缀合至抗体的佐剂/药物部分及其衍生物的当量数呈正相关。在高载药量下，必须去除所形成的聚集体以用于治疗应用。因此，载药量介导的聚集体形成会降低免疫缀合物产率，并可能使过程放大变得困难。
示例性实施方案包括式III的氨基喹啉-接头化合物：
Figure BDA0003603486130000401
其中R1、R2和R3中的一者连接至L；
R1选自由以下组成的组：
C1-C8烷基；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
R2选自由以下组成的组：
H；
C1-C8烷基；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
R4选自由以下组成的组：C6-C20芳基和C1-C8烷基；
R5选自由以下组成的组：H和C1-C8烷基；
或两个R5基团形成5元或6元杂环基环；并且
R3选自由以下组成的组：H、-C(＝O)NR5R6、和苯基，其中苯基被选自由以下组成的组的一个或多个取代基取代：F、Cl、Br、I、-CN、-CH3、-CF3、-CO2H、-NH2、-NHCH3、-NO2、-OH、-OCH3、-SCH3、-S(O)2CH3、-S(O)3H、和R7；
R6独立地选自由以下组成的组
H；
C1-C8烷基；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C2-C20杂环基)；
-(C2-C20杂环基二基)-*；
-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
--(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH；
-(C1-C20杂芳基二基)-(C2-C20杂环基二基)-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C1-C20杂芳基二基)-NR5-*；
-(C1-C20杂芳基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；以及
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH；
R7选自由以下组成的组：
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-C(＝O)-*；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基)；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基二基)-*；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳基二基)-(C2-C20杂环基二基)-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳基二基)-NR5-*；
-C(＝O)N(R5)2；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-NR5-*；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)N(R5)2；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；和
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH；
其中*表示L的连接点；
L是选自由以下组成的组的接头：
-(PEP)-C(＝O)-(PEG)-C(＝O)-Q；
-NR5-(PEG)-C(＝O)-Q；
-(PEP)-C(＝O)-(PEG)-NR5-(PEG)-C(＝O)-Q；
-(PEP)-C(＝O)-(PEG)-N+(R5)2-(PEG)-C(＝O)-Q；
-C(＝O)-(PEG)-C(＝O)-Q；
-C(＝O)-CH(AA1)-NR5-C(＝O)-(PEG)-C(＝O)-Q；
-(PEP)-C(＝O)-(PEG)-C(＝O)-CH(AA1)-NR5-(PEG)-C(＝O)-Q；
-C(＝O)O-(C1-C12烷基二基)-SS-(PEG)-C(＝O)-Q；
-C(＝O)-(C1-C12烷基二基)-SS-(PEG)-C(＝O)-Q；
-(PEG)-C(＝O)-Q；
-(PEP)-C(＝O)-(C1-C12烷基二基)-C(＝O)-Q；
-(MCgluc)-(C(＝O)-(PEG)-OCH2-(C1-C20杂芳基二基)-CH2CH2OCH2CH2-C(＝O)-Q；
-(PEP)-C(＝O)-(CH2)m-C(＝O)-Q；和
-(PEP)-C(＝O)-(CH2)m-Q；
其中
PEG具有下式：
-(CH2CH2O)n-(CH2)m-；m为1至5的整数，并且n为2至50的整数；
PEP具有下式：
Figure BDA0003603486130000451
其中AA1和AA2独立地选自氨基酸侧链，或AA1或AA2与相邻的氮原子形成5元环脯氨酸氨基酸，并且波浪线表示连接点；
R8选自被-CH2O-C(＝O)-取代，并且任选地被以下基团取代的C6-C20芳基二基和C1-C20杂芳基二基：
Figure BDA0003603486130000452
并且
MCgluc选自以下基团：
Figure BDA0003603486130000453
Figure BDA0003603486130000461
其中n为1至8，并且AA为氨基酸侧链；并且
Q选自由以下组成的组：N-羟基琥珀酰亚胺基、N-羟基磺基琥珀酰亚胺基、马来酰亚胺和被一个或多个独立地选自F、Cl、NO2和SO3 -的基团取代的苯氧基；
其中烷基、烷基二基、芳基、芳基二基碳环基、碳环基二基、杂环基、杂环基二基、杂芳基和杂芳基二基任选地被一个或多个独立地选自以下的基团取代：F、Cl、Br、I、-CN、-CH3、-CH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH2OH、-CH2OCH3、-CH2CH2OH、-C(CH3)2OH、-CH(OH)CH(CH3)2、-C(CH3)2CH2OH、-CH2CH2SO2CH3、-CH2OP(O)(OH)2、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH(CH3)CN、-C(CH3)2CN、-CH2CN、-CH2NH2、-CH2NHSO2CH3、-CH2NHCH3、-CH2N(CH3)2、-CO2H、-COCH3、-CO2CH3、-CO2C(CH3)3、-COCH(OH)CH3、-CONH2、-CONHCH3、-CON(CH3)2、-C(CH3)2CONH2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCOCH3、-N(CH3)COCH3、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(CH3)2CONH2、-N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3、-NO2、＝O、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2OCH3、-OCH2CH2OH、-OCH2CH2N(CH3)2、-O(CH2CH2O)n-(CH2)mCO2H、-O(CH2CH2O)nH、-OP(O)(OH)2、-S(O)2N(CH3)2、-SCH3、-S(O)2CH3、和-S(O)3H。
式III的氨基喹啉-接头化合物的示例性实施方案包括其中PEP具有下式：
Figure BDA0003603486130000471
其中AA1和AA2独立地选自天然存在的氨基酸的侧链。
式III的氨基喹啉-接头化合物的示例性实施方案包括其中AA1或AA2与相邻氮原子形成5元环以形成脯氨酸氨基酸。
式III的氨基喹啉-接头化合物的示例性实施方案包括其中PEP具有下式：
Figure BDA0003603486130000472
式III的氨基喹啉-接头化合物的示例性实施方案包括其中MCgluc具有下式：
Figure BDA0003603486130000473
式III的氨基喹啉-接头化合物的示例性实施方案包括其中AA1和AA2独立地选自天然存在的氨基酸的侧链，包括其中AA1或AA2与相邻的氮原子形成5元环以形成脯氨酸氨基酸。
式III的氨基喹啉-接头化合物的示例性实施方案包括其中AA1和AA2独立地选自H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2(C6H5)、-CH2CH2CH2CH2NH2、-CH2CH2CH2NHC(NH)NH2、-CHCH(CH3)CH3、-CH2SO3H、和-CH2CH2CH2NHC(O)NH2。
式III的氨基喹啉-接头化合物的示例性实施方案包括其中AA1是-CH(CH3)2，并且AA2是-CH2CH2CH2NHC(O)NH2。
式III的氨基喹啉-接头化合物的示例性实施方案包括其中AA1与相邻的氮原子形成脯氨酸氨基酸，并且AA2是-CH(CH3)2。
式III的氨基喹啉-接头化合物的示例性实施方案包括其中AA1和AA2独立地选自GlcNAc天冬氨酸、-CH2SO3H、和-CH2OPO3H。
式III的氨基喹啉-接头化合物的示例性实施方案包括其中R1连接至L。
式III的氨基喹啉-接头化合物的示例性实施方案包括其中R2连接至L。
式III的氨基喹啉-接头化合物的示例性实施方案包括其中R3连接至L。
式III的氨基喹啉-接头化合物的示例性实施方案包括其中R1选自由以下组成的组：
C1-C8烷基；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；和
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
式III的氨基喹啉-接头化合物的示例性实施方案包括其中R2选自由以下组成的组：
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；和
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*。
式III的氨基喹啉-接头化合物的示例性实施方案包括其中R6选自由以下组成的组：
C1-C8烷基；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*。
式III的氨基喹啉-接头化合物的示例性实施方案包括其中R6选自由以下组成的组：
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；以及
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH。
式III的氨基喹啉-接头化合物的示例性实施方案包括其中R7选自由以下组成的组：
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)N(R5)2；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；和
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH。
氨基喹啉-接头化合物的示例性实施方案包括其中L选自由以下组成的组：
-(PEP)-C(＝O)-(PEG)-C(＝O)-Q；
-NR5-(PEG)-C(＝O)-Q；
-C(＝O)-(PEG)-C(＝O)-Q；和
-(PEG)-C(＝O)-Q。
式III的氨基喹啉-接头化合物的示例性实施方案包括其中AQ选自式IIIa：
Figure BDA0003603486130000501
式III的氨基喹啉-接头化合物的示例性实施方案包括其中AQ选自式IIIb：
Figure BDA0003603486130000511
式III的氨基喹啉-接头化合物的示例性实施方案包括其中AQ选自式IIIc：
Figure BDA0003603486130000512
式III的氨基喹啉-接头化合物的示例性实施方案选自表2化合物。每种化合物都通过质谱进行表征，并显示为具有所示质量。表2的氨基喹啉-接头化合物证明了TLR8激动剂选择性的令人惊讶和意想不到的特性，其可以预测用于治疗癌症和其他疾患的有用的治疗活性。
表2式III的氨基喹啉-接头化合物
Figure BDA0003603486130000513
Figure BDA0003603486130000521
Figure BDA0003603486130000531
免疫缀合物
免疫缀合物的示例性实施方案包括共价连接至二价接头的抗体，所述二价接头共价连接至一个或多个氨基喹啉部分，并且所述免疫缀合物具有式I：
Ab-[L-AQ]p I
或其药学上可接受的盐，
其中：
Ab是所述抗体；
AQ是具有式II的氨基喹啉部分：
Figure BDA0003603486130000541
其中R1、R2和R3中的一者连接至L；R1选自由以下组成的组：
C1-C8烷基；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)C(＝O)R5；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)C(＝O)OR5；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)C(＝O)N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C2-C6烯基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C2-C6烯基二基)-N(R5)2；
-(C2-C6烯基二基)-NR5-*；
-(C2-C6炔基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C2-C6炔基二基)-N(R5)2；
-(C2-C6炔基二基)-NR5-*；
-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C1-C20杂芳基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
R2选自由以下组成的组：
H；
C1-C8烷基；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)N(R5)-*；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)C(NR5)＝N-*；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)C(＝O)R5；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)C(＝O)OR5；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)C(＝O)N(R5)2；
-(C2-C6烯基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C2-C6烯基二基)-N(R5)2；
-(C2-C6烯基二基)-NR5-*；
-(C2-C6炔基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C2-C6炔基二基)-N(R5)2；
-(C2-C6炔基二基)-NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-(C2-C20杂环基二基)；
-(C1-C12烷基二基)-(C1-C20杂芳基二基)；
-(C1-C12烷基二基)-(C6-C20芳基二基)；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
R4选自由以下组成的组：C6-C20芳基和C1-C8烷基；
R5选自由以下组成的组：H和C1-C8烷基；
或两个R5基团形成5元或6元杂环基环；并且
R3选自由以下组成的组：H、-C(＝O)NR5R6、和苯基，其中苯基被选自由以下组成的组的一个或多个取代基取代：F、Cl、Br、I、-CN、-CH3、-CF3、-CO2H、-NH2、-NHCH3、-NO2、-OH、-OCH3、-SCH3、-S(O)2CH3、-S(O)3H、和R7；
R6独立地选自由以下组成的组
H；
C1-C8烷基；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C2-C20杂环基)；
-(C2-C20杂环基二基)-*；
-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
--(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH；
-(C1-C20杂芳基二基)-(C2-C20杂环基二基)-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C1-C20杂芳基二基)-NR5-*；
-(C1-C20杂芳基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；以及
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH；
R7选自由以下组成的组：
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-C(＝O)-*；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基)；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基二基)-*；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳基二基)-(C2-C20杂环基二基)-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳基二基)-NR5-*；
-C(＝O)N(R5)2；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-NR5-*；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)N(R5)2；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；和
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH；
其中*表示L的连接点；
L是选自由以下组成的组的接头：
-C(＝O)-(PEG)-C(＝O)-(PEP)-；
-C(＝O)-(PEG)-NR5-；
-C(＝O)-(PEG)-NR5-(PEG)-C(＝O)-(PEP)-；
-C(＝O)-(PEG)-N+(R5)2-(PEG)-C(＝O)-(PEP)-；
-C(＝O)-(PEG)-C(＝O)-；
-C(＝O)-(PEG)-C(＝O)NR5CH(AA1)C(＝O)-；
-C(＝O)-(PEG)-NR5CH(AA1)C(＝O)-(PEG)-C(＝O)-(PEP)-；
-C(＝O)-(PEG)-SS-(C1-C12烷基二基)-OC(＝O)-；
-C(＝O)-(PEG)-SS-(C1-C12烷基二基)-C(＝O)-；
-C(＝O)-(PEG)-；
-C(＝O)-(C1-C12烷基二基)-C(＝O)-(PEP)-；
-C(＝O)-CH2CH2OCH2CH2-(C1-C20杂芳基二基)-CH2O-(PEG)-C(＝O)-(MCgluc)-；和
-(琥珀酰亚胺基)-(CH2)m-C(＝O)-(PEP)-；
其中
PEG具有下式：
-(CH2CH2O)n-(CH2)m-；m为1至5的整数，并且n为2至50的整数；
PEP具有下式：
Figure BDA0003603486130000601
其中AA1和AA2独立地选自氨基酸侧链，或AA1或AA2与相邻的氮原子形成5元环脯氨酸氨基酸，并且波浪线表示连接点；
R8选自被-CH2O-C(＝O)-取代，并且任选地被以下基团取代的C6-C20芳基二基和C1-C20杂芳基二基：
Figure BDA0003603486130000602
并且
MCgluc选自以下基团：
Figure BDA0003603486130000611
其中n为1至8，并且AA为氨基酸侧链；
其中烷基、烷基二基、芳基、芳基二基碳环基、碳环基二基、杂环基、杂环基二基、杂芳基和杂芳基二基任选地被一个或多个独立地选自以下的基团取代：F、Cl、Br、I、-CN、-CH3、-CH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH2OH、-CH2OCH3、-CH2CH2OH、-C(CH3)2OH、-CH(OH)CH(CH3)2、-C(CH3)2CH2OH、-CH2CH2SO2CH3、-CH2OP(O)(OH)2、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH(CH3)CN、-C(CH3)2CN、-CH2CN、-CH2NH2、-CH2NHSO2CH3、-CH2NHCH3、-CH2N(CH3)2、-CO2H、-COCH3、-CO2CH3、-CO2C(CH3)3、-COCH(OH)CH3、-CONH2、-CONHCH3、-CON(CH3)2、-C(CH3)2CONH2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCOCH3、-N(CH3)COCH3、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(CH3)2CONH2、-N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3、-NO2、＝O、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2OCH3、-OCH2CH2OH、-OCH2CH2N(CH3)2、-O(CH2CH2O)n-(CH2)mCO2H、-O(CH2CH2O)nH、-OP(O)(OH)2、-S(O)2N(CH3)2、-SCH3、-S(O)2CH3、和-S(O)3H；并且
p为1至8的整数。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中抗体是具有结合PD-L1的抗原结合结构域的抗体构建体。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中抗体选自由以下组成的组：阿特珠单抗、度伐利尤单抗和阿维鲁单抗，或它们的生物仿制药(biosimilar)或改良型生物相似性药物(biobetter)。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中抗体是具有结合HER2的抗原结合结构域的抗体构建体。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中抗体选自由以下组成的组：曲妥珠单抗和帕妥珠单抗，或它们的生物仿制药或改良型生物相似性药物。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中抗体是具有结合CEA的抗原结合结构域的抗体构建体。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中抗体是拉贝珠单抗或其生物仿制药或改良型生物相似性药物。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中PEP具有下式：
Figure BDA0003603486130000621
其中AA1和AA2独立地选自天然存在的氨基酸的侧链。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中AA1或AA2与相邻氮原子形成5元环脯氨酸氨基酸。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中PEP具有下式：
Figure BDA0003603486130000631
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中MCgluc具有下式：
Figure BDA0003603486130000632
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中AA1和AA2独立地选自天然存在的氨基酸的侧链。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中AA1和AA2独立地选自H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2(C6H5)、-CH2CH2CH2CH2NH2、-CH2CH2CH2NHC(NH)NH2、-CHCH(CH3)CH3、-CH2SO3H、和-CH2CH2CH2NHC(O)NH2。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中AA1是-CH(CH3)2，并且AA2是-CH2CH2CH2NHC(O)NH2。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中AA1与相邻的氮原子形成脯氨酸氨基酸，并且AA2是-CH(CH3)2。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中AA1和AA2独立地选自GlcNAc天冬氨酸、-CH2SO3H、和-CH2OPO3H。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中R1连接至L。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中R2连接至L。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中R3连接至L。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中R1选自由以下组成的组：
C1-C8烷基；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；和
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中R2选自由以下组成的组：
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；和
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中R6选自由以下组成的组：
C1-C8烷基；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中R6选自由以下组成的组：
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；以及
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中R7选自由以下组成的组：
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)N(R5)2；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；和
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中L选自由以下组成的组：
-(PEP)-C(＝O)-(PEG)-C(＝O)-Q；
-NR5-(PEG)-C(＝O)-Q；
-C(＝O)-(PEG)-C(＝O)-Q；和
-(PEG)-C(＝O)-Q。
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中AQ选自式IIa：
Figure BDA0003603486130000661
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中AQ选自式IIb：
Figure BDA0003603486130000662
式I的免疫缀合物的示例性实施方案包括其中AQ选自式IIc：
Figure BDA0003603486130000663
本发明包括式I实施方案的所有合理组合和特征排列。
在某些实施方案中，本发明的免疫缀合物化合物包括具有免疫刺激活性的那些免疫缀合物化合物。本发明的免疫缀合物化合物选择性地将有效剂量的氨基喹啉药物递送至肿瘤组织，由此相对于未缀合的氨基喹啉，可以实现更大的选择性(即，更低的有效剂量)，与此同时提高治疗指数(“治疗窗口”)。
载药量由p表示，即式I的免疫缀合物中每个抗体的氨基喹啉部分的数量。载药(氨基喹啉)量可以在每个抗体1个至约8个药物部分(D)的范围内。式I的免疫缀合物包括与从1个至约8个范围的药物部分缀合的抗体的混合物或集合。在一些实施方案中，可缀合至抗体的药物部分的数量受到反应性或可用的氨基酸侧链残基诸如赖氨酸和半胱氨酸的数量的限制。在一些实施方案中，通过本文所述的方法将游离半胱氨酸残基引入到抗体氨基酸序列中。在此类方面中，p可以是1、2、3、4、5、6、7或8，及其范围，诸如1至8或2至5。在任何此类方面中，p和n是相等的(即，p＝n＝1、2、3、4、5、6、7或8，或介于两者之间的某个范围)。式I的示例性免疫缀合物包括但不限于具有1、2、3或4个工程化的半胱氨酸氨基酸的抗体(Lyon,R.等人(2012)Methods in Enzym.502:123-138)。在一些实施方案中，在不使用工程化的情况下，一个或多个游离半胱氨酸残基已经存在于抗体中，从而形成链内二硫键，在这种情况下，现有的游离半胱氨酸残基可用于将抗体缀合至药物。在一些实施方案中，在抗体缀合之前将所述抗体暴露于还原条件以产生一个或多个游离半胱氨酸残基。
对于一些免疫缀合物，p可能受到抗体上的连接位点数量的限制。例如，在连接为如在本文所述的某些示例性实施方案中的半胱氨酸硫醇时，抗体可以具有仅一个或有限数量的半胱氨酸硫醇基团，或者可以仅具有仅一个或有限数量的充分反应性硫醇基团，药物可连接至所述硫醇基团。在其他实施方案中，抗体中的一个或多个赖氨酸氨基可用于与式II的氨基喹啉-接头化合物缀合并且具有用于与式II的氨基喹啉-接头化合物缀合的反应性。在某些实施方案中，较高的载药量(例如p>5)可导致聚集、不溶性、毒性或丧失某些免疫缀合物化合物的细胞渗透性。在某些实施方案中，免疫缀合物的平均载药量范围为1至约8；约2至约6；或约3至约5。在某些实施方案中，使抗体经受变性条件以展示反应性亲核基团，诸如赖氨酸或半胱氨酸。
免疫缀合物的负载(药物/抗体比率)可以以不同方式控制，例如通过：(i)限制氨基喹啉-接头中间体化合物相对于抗体的摩尔过量，(ii)限制缀合反应时间或温度，和(iii)用于优化的抗体反应性的部分或限制性还原性变性条件。
应当理解的是，在抗体的多于一个亲核基团与药物反应的情况下，则所得产物是具有一个或多个连接至抗体的药物部分的分布的免疫缀合物化合物的混合物。可以通过对抗体特异性并且对药物特异性的双ELISA抗体测定来从混合物计算每个抗体的药物的平均数。可以通过质谱法来鉴定混合物中的单独免疫缀合物分子，并通过HPLC例如疏水性相互作用色谱法来分离(参见例如，McDonagh等人(2006)Prot.Engr.Design&Selection 19(7):299-307；Hamblett等人(2004)Clin.Cancer Res.10:7063-7070；Hamblett,K.J.等人“Effect of drugloading on the pharmacology,pharmacokinetics,and toxicity ofananti-CD30 antibody-drug conjugate,”文摘号624,American Associati on forCancer Research,2004Annual Meeting,2004年3月27-31日，Proceedings of the AACR,第45卷，2004年3月；Alley,S.C.等人“Controlling the location of drug attachmentin antibody-drug conjugates,”文摘号627,American Association for CancerResearch,2004Annual Meeting,2004年3月27-31日，Proceedings of the AA CR,第45卷，2004年3月)。在某些实施方案中，可以通过电泳或色谱法从缀合混合物中分离具有单负载值的均匀的免疫缀合物。
表3显示了式I的免疫缀合物的示例性实施方案。表3的免疫缀合物证明了TLR8激动剂选择性的令人惊讶和出乎意料的性质，其可以预测用于治疗癌症和其他疾患的有用的治疗活性。
表3免疫缀合物(IC)
Figure BDA0003603486130000691
*DAR＝药物(佐剂)与抗体的比率
免疫缀合物的组合物
本发明提供了一种组合物，例如药学或药理学上可接受的组合物或制剂，所述组合物包含多种如本文所述的免疫缀合物和任选的用于其的载体，例如药学或药理学上可接受的载体。组合物中的免疫缀合物可以相同或不同，即组合物可包含具有相同数量的佐剂连接到抗体构建体上的相同位置的免疫缀合物，和/或具有相同数量的氨基喹啉佐剂连接到抗体构建体上的不同位置、具有不同数量的佐剂连接到抗体构建体上的相同位置、或者具有不同数量的佐剂连接到抗体构建体上的不同位置的免疫缀合物。
在一个示例性实施方案中，包含免疫缀合物化合物的组合物包含免疫缀合物化合物的混合物，其中免疫缀合物化合物的混合物中每个抗体的平均载药(氨基喹啉)量为约2至约5。
本发明的免疫缀合物的组合物可以具有约0.4至约10的平均佐剂与抗体构建体比率(DAR)。技术人员将认识到，在包含本发明的多种免疫缀合物的组合物中，与抗体构建体缀合的氨基喹啉佐剂的数量可能因免疫缀合物而异，因此，可以将佐剂与抗体构建体(例如，抗体)的比率测量为平均值，这可以称为药物与抗体的比率(DAR)。佐剂与抗体构建体(例如，抗体)的比率可以通过任何合适的手段评定，所述手段中的许多手段是本领域已知的。
在由缀合反应制备免疫缀合物中的每个抗体的佐剂部分的平均数(DAR)可以通过常规手段(诸如质谱法、ELISA测定和HPLC)来表征。也可以根据p确定组合物中免疫缀合物的数量分布。在一些情况下，均匀的免疫缀合物(其中p为来自具有其它载药量的免疫缀合物的某一值)的分离、纯化和表征可以通过诸如反相HPLC或电泳的手段来实现。
在一些实施方案中，所述组合物还包含一种或多种药学上或药理学上可接受的赋形剂。例如，本发明的免疫缀合物可以配制用于肠胃外施用，例如IV施用或施用到体腔或器官内腔中。或者，可以将免疫缀合物注射到肿瘤内。用于注射的组合物将通常包括免疫缀合物溶解于药学上可接受的载体中的溶液。可采用的可接受的媒介物和溶剂有水和一种或多种盐(诸如氯化钠)的等渗溶液(例如，林格氏溶液(Ringer's solution))。此外，常常可采用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。为了这个目的，可采用任何温和不挥发性油，包括合成的单甘油酯或二甘油酯。此外，脂肪酸(诸如油酸)同样可用于可注射液的制备。这些组合物理想地为无菌的并且通常不含非期望的物质。这些组合物可以通过常规的、众所周知的灭菌技术进行灭菌。所述组合物可含有接近生理条件所需要的药学上可接受的辅助物质，诸如pH调节和缓冲剂、毒性调节剂，例如，乙酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠等。
所述组合物可包含任何合适浓度的免疫缀合物。所述组合物中的免疫缀合物的浓度可以广泛地变化，并且将根据所选的特定施用方式和患者的需求，主要基于流体体积、粘度、体重等进行选择。在某些实施方案中，注射用溶液制剂中免疫缀合物的浓度范围为约0.1％(w/w)至约10％(w/w)。
用免疫缀合物治疗癌症的方法
本发明提供了一种用于治疗癌症的方法。所述方法包括将治疗有效量的如本文所述的免疫缀合物和诸如如本文所述的组合物施用于有需要的受试者，例如患有癌症并且需要治疗所述癌症的受试者。所述方法包括施用治疗有效量的选自表3的免疫缀合物(IC)。
预期本发明的免疫缀合物可用于治疗各种过度增殖性疾病或疾患，例如以肿瘤抗原的过表达为特征的过度增殖性疾病或疾患。示例性的过度增殖性疾患包括良性或恶性实体瘤和血液疾患，诸如白血病和淋巴恶性肿瘤。
在另一方面中，提供了用于用作药剂的免疫缀合物。在某些实施方案中，本发明提供了一种用于在治疗个体的方法中使用的免疫缀合物，所述方法包括向所述个体施用有效量的所述免疫缀合物。在一个此类实施方案中，所述方法还包括向所述个体施用有效量的至少一种例如如下所述的另外的治疗剂。
在另一方面中，本发明提供了免疫缀合物在药剂的生产或制备中的用途。在一个实施方案中，所述药剂用于治疗癌症，所述方法包括向患有癌症的个体施用有效量的所述药剂。在一个此类实施方案中，所述方法还包括向所述个体施用有效量的至少一种例如如下所述的另外的治疗剂。
癌是起源于上皮组织的恶性肿瘤。上皮细胞覆盖身体的外表面，内衬于内腔，并形成腺体组织的衬里。癌的示例包括但不限于腺癌(始于腺(分泌)细胞的癌症，诸如乳腺癌、胰腺癌、肺癌、前列腺癌、胃癌、胃食管连接部癌和结肠癌)肾上腺皮质癌；肝细胞癌；肾细胞癌；卵巢癌；原位癌；导管癌；乳腺癌；基底细胞癌；鳞状细胞癌；移行细胞癌；结肠癌；鼻咽癌；多房囊性肾细胞癌；燕麦细胞癌；大细胞肺癌；小细胞肺癌；非小细胞肺癌；等等。前列腺、胰腺、结肠、脑(通常作为继发性转移)、肺、乳腺和皮肤中均可发现癌。在一些实施方案中，用于治疗非小细胞肺癌的方法包括施用含有能够结合PD-L1的抗体构建体(例如，阿特珠单抗、度伐利尤单抗、阿维鲁单抗、它们的生物仿制药或改良型生物相似性药物)的免疫缀合物。在一些实施方案中，用于治疗乳腺癌的方法包括施用含有能够结合PD-L1的抗体构建体(例如，阿特珠单抗、度伐利尤单抗、阿维鲁单抗、它们的生物仿制药或改良型生物相似性药物)的免疫缀合物。在一些实施方案中，用于治疗三阴性乳腺癌的方法包括施用含有能够结合PD-L1的抗体构建体(例如，阿特珠单抗、度伐利尤单抗、阿维鲁单抗、它们的生物仿制药或改良型生物相似性药物)的免疫缀合物。
软组织肿瘤是一组来源于结缔组织的高度多样化的罕见肿瘤。软组织肿瘤的示例包括但不限于腺泡状软组织肉瘤；血管瘤样纤维组织细胞瘤；软骨粘液样纤维瘤；骨骼软骨肉瘤；骨外粘液样软骨肉瘤；透明细胞肉瘤；促结缔组织增生性小圆细胞瘤；隆突性皮肤纤维肉瘤；子宫内膜间质肿瘤；尤因肉瘤；纤维瘤病(硬纤维瘤)；婴儿型纤维肉瘤；胃肠道间质瘤；骨巨细胞瘤；腱鞘巨细胞瘤；炎性肌纤维母细胞瘤；子宫平滑肌瘤；平滑肌肉瘤；脂肪母细胞瘤；典型脂肪瘤；梭形细胞或多形性脂肪瘤；非典型脂肪瘤；软骨样脂肪瘤；高分化脂肪肉瘤；粘液样/圆细胞脂肪肉瘤；多形性脂肪肉瘤；粘液样恶性纤维组织细胞瘤；高度恶性纤维组织细胞瘤；粘液纤维肉瘤；恶性周围神经鞘瘤；间皮瘤；神经母细胞瘤；骨软骨瘤；骨肉瘤；原始神经外胚层肿瘤；腺泡状横纹肌肉瘤；胚胎型横纹肌肉瘤；良性或恶性神经鞘瘤；滑膜肉瘤；埃文氏瘤(Evan’s tumor)；结节性筋膜炎；韧带样型纤维瘤病；孤立性纤维瘤；隆突性皮肤纤维肉瘤(DFSP)；血管肉瘤；上皮样血管内皮瘤；腱鞘巨细胞瘤(TGCT)；色素沉着绒毛结节性滑膜炎(PVNS)；纤维发育不良；粘液纤维肉瘤；纤维肉瘤；滑膜肉瘤；恶性周围神经鞘瘤；神经纤维瘤；软组织多形性腺瘤；以及来源于成纤维细胞、肌成纤维细胞、组织细胞、血管细胞/内皮细胞和神经鞘细胞的瘤形成。
肉瘤是一种罕见类型的癌症，其起源于间充质来源的细胞，例如身体的骨骼或软组织，包括软骨、脂肪、肌肉、血管、纤维组织或其他结缔或支持组织。不同类型的肉瘤基于癌症形成的位置。例如，骨肉瘤形成于骨骼中，脂肪肉瘤形成于脂肪中，横纹肌肉瘤形成于肌肉中。肉瘤的示例包括但不限于阿斯金瘤；葡萄状肉瘤；软骨肉瘤；尤因氏肉瘤；恶性血管内皮瘤；恶性神经鞘瘤；骨肉瘤；和软组织肉瘤(例如，腺泡状软组织肉瘤；血管肉瘤；囊性肉瘤隆突性皮肤纤维肉瘤(DFSP)；硬纤维瘤；促结缔组织增生性小圆细胞瘤；上皮样肉瘤；骨骼外软骨肉瘤；骨骼外骨肉瘤；纤维肉瘤；胃肠道间质瘤(GIST)；血管外皮细胞瘤；血管肉瘤(更通常称为“血管肉瘤”)；卡波西肉瘤；平滑肌肉瘤；脂肪肉瘤；淋巴管肉瘤；恶性外周神经鞘膜瘤(MPNST)；神经纤维肉瘤；滑膜肉瘤；和未分化多形性肉瘤)。
畸胎瘤是一种生殖细胞肿瘤，其可能包含几种不同类型的组织(例如，可以包括源自以下任何和/或所有三个胚层的组织：内胚层、中胚层和外胚层)，包括例如毛发、肌肉和骨骼。畸胎瘤最常发生于女性的卵巢、男性的睾丸和儿童的尾骨中。
黑素瘤是一种始于黑色素细胞(产生黑色素的细胞)的癌症形式。黑素瘤可能始于痣(皮肤黑素瘤)，但也可能始于其他有色素组织，诸如在眼睛或肠道中。
默克尔细胞癌是一种罕见的皮肤癌，其通常表现为面部、头部或颈部的肉色或蓝红色结节。默克尔细胞癌也称为皮肤的神经内分泌癌。在一些实施方案中，用于治疗默克尔细胞癌的方法包括施用含有能够结合PD-L1的抗体构建体(例如，阿特珠单抗、度伐利尤单抗、阿维鲁单抗、它们的生物仿制药或改良型生物相似性药物)的免疫缀合物。在一些实施方案中，当施用发生时，默克尔细胞癌已经转移。
白血病是从造血组织诸如骨髓开始的癌症，并且会导致大量异常血细胞产生并进入血流。例如，白血病可起源于通常在血流中成熟的骨髓源性细胞。白血病针对疾病发展和进展的有多快速(例如，急性与慢性)以及受影响的白细胞类型(例如，骨髓与淋巴)来命名。骨髓性白血病也称为髓性或成髓细胞性白血病。淋巴细胞白血病也称为成淋巴细胞或淋巴细胞性白血病。淋巴白血病细胞可能会聚集在淋巴结中，所述淋巴结可能变得肿胀。白血病的示例包括但不限于急性骨髓性白血病(AML)、急性成淋巴细胞白血病(ALL)、慢性骨髓性白血病(CML)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)。
淋巴瘤是始于免疫系统细胞的癌症。例如，淋巴瘤可以起源于通常在淋巴系统中成熟的骨髓源性细胞。有两种淋巴瘤的基本类别。一类淋巴瘤是霍奇金淋巴瘤(HL)，其特征是存在一种称为Reed-Sternbe rg细胞的细胞。目前有6种公认的HL类型。霍奇金淋巴瘤的示例包括结节性硬化经典霍奇金淋巴瘤(CHL)、混合细胞CHL、淋巴细胞耗竭型CHL、富含淋巴细胞的CHL和结节性淋巴细胞为主型HL。
另一类淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤(NHL)，其包括一大类不同的免疫系统细胞的癌症。非霍奇金淋巴瘤可进一步分为具有惰性(缓慢生长)病程的癌症和具有侵袭性(快速生长)病程的癌症。目前有61种公认的NHL类型。非霍奇金淋巴瘤的示例包括但不限于AIDS相关淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、伯基特样淋巴瘤(小无裂细胞淋巴瘤)、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、肠病型T细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、肝脾γ-δT细胞淋巴瘤、T细胞白血病、成淋巴细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、鼻T细胞淋巴瘤、小儿淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、转化淋巴瘤、治疗相关T细胞淋巴瘤和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
脑癌包括脑组织的任何癌症。脑癌的示例包括但不限于神经胶质瘤(例如，胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤、室管膜瘤等)、脑膜瘤、垂体腺瘤和前庭神经鞘瘤、原始神经外胚层肿瘤(髓母细胞瘤)。
本发明的免疫缀合物在疗法中可单独使用或与其它剂组合使用。例如，免疫缀合物可以与至少一种另外的治疗剂(诸如化疗剂)共施用。此类联合疗法涵盖组合施用(其中两种或多种治疗剂被包括在同一或分开的制剂中)和单独施用，在此情况下，免疫缀合物的施用可以发生在另外的治疗剂和/或佐剂的施用之前、同时和/或之后。本发明的免疫缀合物也可以与放射疗法组合使用。
本发明的免疫缀合物(和任何另外的治疗剂)可以通过任何合适的手段施用，所述合适的手段包括胃肠外、肺内和鼻内，并且如果需要进行局部治疗，则病灶内施用。胃肠外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。可以通过任何合适的途径，例如通过注射(诸如静脉内或皮下注射)来给药，这部分地取决于施用是短暂还是长期的。本文考虑包括但不限于在各种时间点单次或多次施用、推注施用和脉冲输注的各种给药方案。
已知阿特珠单抗、度伐利尤单抗、阿维鲁单抗、它们的生物仿制药及它们的改良型生物相似性药物可用于治疗癌症，特别是乳腺癌，尤其是三阴性(雌激素受体、孕激素受体和过量HER2蛋白测试呈阴性)乳腺癌、膀胱癌和默克尔细胞癌。本文所述的免疫缀合物可用于治疗如阿特珠单抗、度伐利尤单抗、阿维鲁单抗、它们的生物仿制药及它们的改良型生物相似性药物所用于的相同类型的癌症，尤其是乳腺癌，尤其是三阴性(雌激素受体、孕激素受体和过量HER2蛋白测试呈阴性)乳腺癌、膀胱癌和默克尔细胞癌。
使用任何合适的给药方案，诸如用于阿特珠单抗、度伐利尤单抗、阿维鲁单抗、它们的生物仿制药及它们的改良型生物相似性药物的给药方案，以任何治疗有效量向有需要的受试者施用免疫缀合物。例如，所述方法可包括施用免疫缀合物以向受试者提供约100ng/kg至约50mg/kg的剂量。免疫缀合物的剂量范围可为约5mg/kg至约50mg/kg、约10μg/kg至约5mg/kg、或约100μg/kg至约1mg/kg。免疫缀合物剂量可以是约100μg/kg、200μg/kg、300μg/kg、400μg/kg或500μg/kg。免疫缀合物剂量可以是约1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg或10mg/kg。免疫缀合物剂量也可以在这些范围之外，这取决于特定缀合物以及所治疗癌症的类型和严重程度。施用频率的范围可以从每周一次剂量到多次剂量，或者更频繁。在一些实施方案中，施用免疫缀合物约每月一次到约每周五次。在一些实施方案中，施用免疫缀合物每周一次。
在另一方面，本发明提供了一种用于预防癌症的方法。所述方法包括向受试者施用治疗有效量的免疫缀合物(例如，如上所述的组合物的形式)。在某些实施方案中，受试者易患某种要预防的癌症。例如，所述方法可包括施用免疫缀合物以向受试者提供约100ng/kg至约50mg/kg的剂量。免疫缀合物的剂量范围可为约5mg/kg至约50mg/kg、约10μg/kg至约5mg/kg、或约100μg/kg至约1mg/kg。免疫缀合物剂量可以是约100μg/kg、200μg/kg、300μg/kg、400μg/kg或500μg/kg。免疫缀合物剂量可以是约1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg或10mg/kg。免疫缀合物剂量也可以在这些范围之外，这取决于特定缀合物以及所治疗癌症的类型和严重程度。施用频率的范围可以从每周一次剂量到多次剂量，或者更频繁。在一些实施方案中，施用免疫缀合物约每月一次到约每周五次。在一些实施方案中，施用免疫缀合物每周一次。
本发明的一些实施方案提供了用于治疗如上所述的癌症的方法，其中所述癌症是乳腺癌。乳腺癌可以起源于乳房的不同区域，并且已经表征了多种不同类型的乳腺癌。例如，本发明的免疫缀合物可用于治疗导管原位癌；浸润性导管癌(例如，管状癌；髓样癌；粘液癌；乳头状癌；或乳腺筛状癌)；小叶原位癌；浸润性小叶癌；炎症性乳腺癌；和其他形式的乳腺癌，诸如三阴性(雌激素受体、孕激素受体和过量HER2蛋白测试呈阴性)乳腺癌。在一些实施方案中，用于治疗乳腺癌的方法包括施用含有能够结合HER2(例如，曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、它们的生物仿制药或改良型生物相似性药物)和PD-L1(例如，阿特珠单抗、度伐利尤单抗、阿维鲁单抗、它们的生物仿制药或改良型生物相似性药物)的抗体构建体的免疫缀合物。在一些实施方案中，用于治疗结肠癌肺癌、肾癌、胰腺癌、胃癌和食道癌的方法包括施用含有能够结合CEA或过表达CEA的肿瘤的抗体构建体(例如，拉贝珠单抗、其生物仿制药或改良型生物相似性药物)的免疫缀合物。
在一些实施方案中，癌症易受由TLR7和/或TLR8受体的激动诱导的促炎反应的影响。
实施例
氨基喹啉化合物(AQ)的制备
实施例1N-(5-(2-氨基-3-戊基喹啉-5-基)戊基)乙酰胺，AQ-1的制备
Figure BDA0003603486130000771
将5-(5-氨基戊基)-3-戊基喹啉-2-胺(24.3mg，0.07mmol)、二异丙基乙胺(37μL(微升)，0.21mmol)、乙酸酐(6.7μL，0.07mmol)和0.5mL二甲基甲酰胺(DMF)装入小瓶中。将反应维持2h，然后利用25-75％梯度的乙腈:含有0.1％三氟乙酸(TFA)的水通过反相制备型HPLC纯化。将纯化的级分合并并冻干，以得到28.6mg的AQ-1。LC/MS[M+H]342.25(计算值)；LC/MS[M+H]342.38(实测值)。
实施例2 1-(5-(2-氨基-3-戊基喹啉-5-基)戊基)-3-(3-氰基苯基)脲，AQ-2的制备
Figure BDA0003603486130000781
将5-(5-氨基戊基)-3-戊基喹啉-2-胺(24.3mg，0.07mmol)、二异丙基乙胺(37mL，0.21mmol)、3-氰基异氰酸苯酯(10.1mg，0.07mmol)和1mL DMF装入小瓶中。将反应维持2h，然后利用25-75％梯度的乙腈:含有0.1％三氟乙酸的水通过反相制备型HPLC纯化。将纯化的级分合并并冻干，以得到19.9mg的AQ-2。LC/MS[M+H]444.28(计算值)；LC/MS[M+H]444.84(实测值)。
实施例3(5-(2-氨基-3-戊基喹啉-5-基)戊基)氨基甲酸叔丁酯，AQ-3的制备
Figure BDA0003603486130000782
将5-(5-氨基戊基)-3-戊基喹啉-2-胺(22mg，0.064mmol)、二异丙基乙胺(37μL，0.21mmol)、碳酸二叔丁酯(15μL，0.07mmol)和0.7mL DCM装入小瓶中。将反应维持2h，然后利用25-75％梯度的乙腈:含有0.1％三氟乙酸的水通过反相制备型HPLC纯化。将纯化的级分合并并冻干，以得到16.6mg的AQ-3。LC/MS[M+H]400.30(计算值)；LC/MS[M+H]400.79(实测值)。
实施例4N-(5-(2-氨基-3-戊基喹啉-5-基)戊基)甲酰胺AQ-4的制备
Figure BDA0003603486130000791
将5-(5-氨基戊基)-3-戊基喹啉-2-胺(22mg，0.064mmol)、二异丙基乙胺(37μL，0.21mmol)、碳酸二叔丁酯(15μL，0.07mmol)和0.7mL DCM装入小瓶中。将反应维持2h，然后利用25-75％梯度的乙腈:含有0.1％三氟乙酸的水通过反相制备型HPLC纯化。将纯化的级分合并并冻干，以得到6.4mg的AQ-4。LC/MS[M+H]328.24(计算值)；LC/MS[M+H]328.36(实测值)。
实施例5(1-((3-(2-氨基-3-戊基喹啉-7-基)苯基)磺酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲醇，AQ-5的制备
Figure BDA0003603486130000792
在N2下在25℃向7-溴-3-戊基喹啉-2-胺(0.1g，341.06μmol，1当量)和[1-[3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]磺酰基氮杂环丁烷-3-基]甲醇(144.57mg，409.27μmol(微摩尔)，1.2当量)在二噁烷(3mL)和H2O(0.5mL)中的混合物中加入Pd(dppf)Cl2(24.96mg，34.11μmol，0.1当量)和K2CO3(94.27mg，682.12μmol，2当量)。将混合物在90℃搅拌1小时。LCMS显示反应完全并且主峰如所期望的那样。将混合物真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Welch Xtimate C18 150*25mm*5um；流动相：[水(10mMNH4HCO3)-ACN]；B％：40％-60％,10.5min)纯化以得到呈灰白色固体的AQ-5(98mg，222.95μmol，65.37％产率)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.14(d,J＝2.8Hz,1H),8.01(s,1H),7.72-7.86(m,5H),7.49-7.58(m,1H),6.36(s,2H),4.66(t,J＝5.2Hz,1H),3.78(t,J＝8.2Hz,2H),3.46-3.57(m,2H),3.21(t,J＝5.6Hz,2H),2.58(br t,J＝7.6Hz,2H),2.44-2.48(m,1H),1.60-1.66(m,2H),1.33-1.39(m,4H),0.89(t,J＝6.8Hz,3H)。LC/MS[M+H]439.19(计算值)；LC/MS[M+H]440.2(实测值)。
实施例6 2-氨基-N,N-二丙基喹啉-3-甲酰胺(1.7mg，0.0062mmol，4.3％)的合成。2-氨基-N,N-二丙基喹啉-3-甲酰胺，AQ-6
2-氰基-N,N-二丙基乙酰胺的制备
Figure BDA0003603486130000801
将二丙胺(1.84ml，13.43mmol，2.5当量)和2-氰基乙酸(0.46g，5.37mmol，1当量)在4ml DCM和2ml DMF的混合物中合并。加入HATU(1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐，六氟磷酸盐氮杂苯并三唑四甲基脲鎓)(3.06mg，8.06mmol，1.5当量)，并将反应在室温下搅拌。完成后，将反应混合物浓缩并通过制备型HPLC纯化，以得到呈浅棕色油状物的2-氰基-N,N-二丙基乙酰胺(0.80g，4.76mmol，89％产率)。LC/MS[M+H]169.13(计算值)；LC/MS[M+H]169.09(实测值)。
2-氨基-5-溴-N,N-二丙基喹啉-3-甲酰胺的制备
Figure BDA0003603486130000811
将2-氰基-N,N-二丙基乙酰胺(0.10g，0.59mmol，1当量)、2-氨基-6-溴苯甲醛(0.18g，0.89mmol，1.5当量)和碳酸钾(0.41g，2.97mmol，5当量)在1.5ml二甲亚砜(DMSO)中搅拌过夜。将反应用乙腈稀释，过滤，然后通过HPLC纯化，以得到2-氨基-5-溴-N,N-二丙基喹啉-3-甲酰胺(0.051g，0.14mmol，24％)。LC/MS[M+H]350.09/352.08(计算值)；LC/MS[M+H]350.23/352.18(实测值)。
AQ-6的制备
Figure BDA0003603486130000812
将2-氨基-5-溴-N,N-二丙基喹啉-3-甲酰胺(0.051g，0.14mmol，1当量)和Pd(PPh3)4(8.7mg，0.0075mmol，0.05当量)溶于氰基丁基溴化锌的THF溶液(2.88ml，0.5M，10当量)中。将反应加热至70℃并通过LCMS监测。在起始材料消耗后，将反应浓缩并通过HPLC纯化，得到AQ-6：LC/MS[M+H]272.18(计算值)；LC/MS[M+H]272.24(实测值)。
实施例7 2-氨基-5-(5-氨基戊基)-N,N-二丙基喹啉-3-甲酰胺，AQ-7的合成
Figure BDA0003603486130000821
2-氨基-5-(4-氰基丁基)-N,N-二丙基喹啉-3-甲酰胺，AQ-7a的制备
将2-氨基-5-溴-N,N-二丙基喹啉-3-甲酰胺(0.051g，0.14mmol，1当量)和Pd(PPh3)4(8.7mg，0.0075mmol，0.05当量)溶于氰基丁基溴化锌的THF溶液(2.88ml，0.5M，10当量)中。将反应加热至70℃并通过LCMS监测。在起始材料消耗后，将反应浓缩并通过HPLC纯化。分离AQ-7a作为主要产物(21.4mg，0.061mmol，42％)。LC/MS[M+H]353.23(计算值)；LC/MS[M+H]353.23(实测值)。
2-氨基-5-(5-氨基戊基)-N,N-二丙基喹啉-3-甲酰胺，AQ-7的制备
将2-氨基-5-(4-氰基丁基)-N,N-二丙基喹啉-3-甲酰胺(14.4mg，0.06mmol，1当量)溶解在2ml甲醇中。加入六水合氯化镍(21.4mg，0.06mmol，1当量)，然后加入硼氢化钠(11.5mg，0.30mmol，5当量)。观察到立即形成黑色沉淀，并在环境温度下搅拌放热反应。在通过LCMS发现起始材料消耗后，将反应过滤、浓缩并通过HPLC纯化，以得到AQ-7(4.5mg，0.013mmol，21％)。LC/MS[M+H]357.26(计算值)；LC/MS[M+H]357.42(实测值)。
实施例8 5-(5-(二甲基氨基)戊基)-3-戊基喹啉-2-胺AQ-8的制备
Figure BDA0003603486130000822
向5-(5-氨基戊基)-3-戊基喹啉-2-胺甲酸盐(34.5mg，0.1mmol，1当量)的甲醇(4mL)溶液中加入37％w/w甲醛水溶液(100μL)，然后加入氰基硼氢化钠(25mg，0.4mmol，4当量)。20分钟后，去除溶剂，并将残余物用10％碳酸钠处理10分钟。将粗产物通过反相HPLC纯化，以在去除溶剂后获得AQ-8(14.1mg，0.032mmol，32％)三氟乙酸盐。LC/MS[M+H]328.27(计算值)；LC/MS[M+H]328.84(实测值)。
实施例9A27-(2-氨基-3-戊基喹啉-5-基)-22-甲基-4,7,10,13,16,19-六氧杂-22-氮杂二十七烷酸盐酸盐，AQ-9的制备
Figure BDA0003603486130000831
AQ-9b的制备
向5-(5-氨基戊基)-3-戊基喹啉-2-胺甲酸盐(172mg，0.5mmol，1当量)在THF(2mL)和水(2mL)中的溶液中加入碳酸氢钠(63mg，0.75mmol，1.5当量)的水(1mL)溶液。滴加溶解在THF(1mL)中的二碳酸二叔丁酯(131mg，0.6mmol，1.2当量)溶液。将混合物在室温搅拌45分钟，然后在乙酸乙酯(25mL)与水(25mL)之间分配。将有机层用盐水(25mL)洗涤、然后干燥(Na2SO4)、过滤并浓缩。将粗产物通过快速色谱法(乙酸乙酯/己烷)纯化，以在去除溶剂后获得呈玻璃状固体的(5-(2-氨基-3-戊基喹啉-5-基)戊基)氨基甲酸叔丁酯AQ-9a(161mg，0.4mmol，81％)。LC/MS[M+H]400.29(计算值)；LC/MS[M+H]400.41(实测值)。
向AQ-9a(161mg，0.4mmol，1当量)在无水THF(5mL)中的溶液中加入固体氢化铝锂(76mg，2mmol，5当量)。将混合物加热回流10分钟。在冷却后，加入固体碳酸氢钠(0.5g，6mmol，15当量)，然后缓慢加入水(100μL)，并将所得悬浮液剧烈搅拌5分钟。将悬浮液通过硅藻土塞过滤，并将灰色固体用DCM(20mL)洗涤，以获得呈金色膜的5-(5-(甲基氨基)戊基)-3-戊基喹啉-2-胺AQ-9b(94mg，0.3mmol，75％)。这种材料不经进一步纯化就使用。LC/MS[M+H]400.29(计算值)；LC/MS[M+H]400.41(实测值)。
AQ-9的制备。
Figure BDA0003603486130000841
在-78℃向草酰氯(127mg，1mmol，3.3当量)在DCM(3mL)中的溶液中滴加DMSO(142μL，2mmol，6.6当量)。在-78℃搅拌15分钟后，加入羟基-PEG6-叔丁酯(123mg，0.3mmol，1当量)的DCM溶液。再过15分钟后，加入三乙胺(420μL，3mmol，10当量)。将混合物在-78℃搅拌15分钟，然后升温至室温达30分钟。将这种悬浮液加入到从上一步获得的5-(5-(甲基氨基)戊基)-3-戊基喹啉-2-胺AQ-9b与Na(OAc)3BH(212mg，1mmol，3.3当量)在DMF(2mL)中的混合物中，并将所述混合物用热风枪轻轻加热，然后搅拌30分钟。减压去除溶剂，并将残余物与10％碳酸钠一起搅拌10分钟。将粗产物通过反相HPLC(乙腈/水)纯化，以在去除溶剂后获得27-(2-氨基-3-戊基喹啉-5-基)-22-甲基-4,7,10,13,16,19-六氧杂-22-氮杂二十七烷酸三氟乙酸叔丁酯盐，AQ-9c(103mg，0.013mmol，43％)。LC/MS[M+H]706.49(计算值)；LC/MS[M+H]706.72(实测值)。
向在二噁烷(2mL)中的AQ-9c(103mg，0.015mmol，1当量)中加入3M HCl(2mL)，并将溶液加热至回流30分钟。去除溶剂，将产物27-(2-氨基-3-戊基喹啉-5-基)-22-甲基-4,7,10,13,16,19-六氧杂-22-氮杂二十七烷酸盐酸盐AQ-9通过用乙腈(4×5mL)蒸发干燥，并且不经进一步纯化即使用。LC/MS[M+H]650.43(计算值)；LC/MS[M+H]650.62(实测值)。
实施例10N-[2-[[1-[5-[(2-氨基-3-戊基-喹啉-7-羰基)氨基]-2-吡啶基]哌啶-4-羰基]氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯AQ-10的制备
Figure BDA0003603486130000851
在N2下向N-[2-[[1-(5-氨基-2-吡啶基)哌啶-4-羰基]氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(619.80mg，1.71mmol，2.5当量)、7-溴-3-戊基喹啉-2-胺(200mg，682.12μmol，1当量)和Et3N(207.07mg，2.05mmol，284.83μL,3当量)在DMF(5mL)中的溶液中加入Pd(dppf)Cl2(49.91mg，68.21μmol，0.1当量)。将悬浮液在真空下脱气并用CO吹扫数次。将混合物在CO(50psi)下在80℃搅拌16小时。将混合物真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：WelchXtimate C18 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-60％,10.5min)纯化以得到呈灰色固体的AQ-10(70mg，115.94μmol，17.00％产率)。1H NMR(MeOD 400MHz)δ8.41(d,J＝2.2Hz,1H),8.09(s,1H),7.87-7.97(m,2H),7.69-7.83(m,2H),6.88(d,J＝9.2Hz,1H),4.30(d,J＝13.2Hz,2H),3.13-3.29(m,4H),2.84-2.96(m,2H),2.63-2.74(m,2H),2.38-2.49(m,1H),1.67-1.93(m,5H),1.40-1.46(m,13H),0.91-1.01(m,3H)。LC/MS[M+H]604.4(计算值)；LC/MS[M+H]604.4(实测值)。
实施例11N-[[1-[3-(2-氨基-3-戊基-7-喹啉基)苯基]磺酰基氮杂环丁烷-3-基]甲基]氨基甲酸叔丁酯，AQ-11的制备
Figure BDA0003603486130000861
2-氨基-4-溴苯甲醛AQ-11b的制备
在N2下在15℃向4-溴-2-硝基-苯甲醛AQ-11a(20g，86.95mmol，1当量)在EtOH(200mL)中的混合物中加入HCl(4M，6.52mL，0.3当量)和铁粉(14.57g，260.85mmol，3当量)。将混合物在80℃搅拌2h。TLC显示反应完成。将混合物浓缩并用NaHCO3水溶液将pH调节至8-9。将混合物用EtOAc(60mL×3)萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱(柱高：250mm，直径：100mm，100-200目硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化以得到呈黄色固体的AQ-11b(15g，粗品)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ9.82(s,1H),7.33(d,J＝8.4Hz,1H),6.88(dd,J＝1.6,8.4Hz,1H),6.85(s,1H),6.18(s,2H)。
7-溴-3-戊基-喹啉-2-胺AQ-11c的制备
在15℃向2-氨基-4-溴-苯甲醛AQ-11b(15g，74.99mmol，1当量)和庚腈(12.51g，112.48mmol，15.44mL，1.5当量)在DMSO(80mL)中的混合物中加入t-BuOK(16.83g，149.98mmol，2当量)。将混合物在70℃搅拌4h。将混合物用水稀释且用EtOAc(100mL×3)萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱(柱高：250mm，直径：100mm，100-200目硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化，以得到呈黄色固体的AQ-11c(13.5g，46.04mmol，61.40％产率)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.71(s,1H),7.58-7.53(m,2H),7.26-7.23(m,1H),6.48(s,2H),2.56-2.52(m,2H),1.65-1.56(m,2H),1.35-1.32(m,4H),0.90-0.85(m,3H)
3-戊基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)喹啉-2-胺AQ-11d的制备
在N2下在15℃向7-溴-3-戊基-喹啉-2-胺AQ-11c(0.2g，682.12μmol，1当量)在二噁烷(4mL)中的混合物中加入Pin2B2(207.86mg，818.55μmol，1.2当量)、KOAc(100.42mg，1.02mmol，1.5当量)和Pd(dppf)Cl2(49.91mg，68.21μmol，0.1当量)。将混合物在90℃搅拌2h。LCMS显示反应完成。将混合物过滤并浓缩，以得到呈黑色固体的AQ-11d(0.23g，粗品)。
在N2下在15℃向3-戊基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)喹啉-2-胺AQ-11d(0.23g，675.94μmol，1当量)和N-[[1-(3-溴苯基)磺酰基氮杂环丁烷-3-基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(273.96mg，675.94μmol，1当量)在二噁烷(6mL)中的混合物中加入K2CO3(326.97mg，2.37mmol，3.5当量)、H2O(1mL)和Pd(dppf)Cl2(49.46mg，67.59μmol，0.1当量)。将混合物在90℃搅拌2h。LCMS显示反应完成。将混合物用水稀释且用EtOAc(30mL×3)萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Welch Xtimate C18 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：65％-95％,10.5min)纯化以得到呈淡黄色固体的AQ-11(0.17g，315.57μmol，46.69％产率)。1H NMR(DMSO-d6,399MHz)δ8.14(d,J＝2.8Hz,1H),8.00(s,1H),7.82-7.78(m,2H),7.77-7.73(m,3H),7.52(dd,J＝1.6,8.4Hz,1H),6.34(s,2H),3.76(t,J＝8.4Hz,2H),3.51-3.45(m,2H),3.29(s,2H),2.90(t,J＝6.4Hz,2H),2.67(d,J＝2.0Hz,1H),2.62-2.56(m,2H),1.64(d,J＝7.6Hz,2H),1.36(d,J＝4.0Hz,2H),1.31(s,9H),0.92-0.86(m,3H)。LCMS(ESI)：C29H38N4O4S的计算质量为538.26，m/z实测质量为539.2[M+H]+。
实施例12 7-[3-[3-(氨甲基)氮杂环丁烷-1-基]磺酰基苯基]-3-戊基-喹啉-2-胺AQ-12的制备
Figure BDA0003603486130000881
在15℃向N-[[1-[3-(2-氨基-3-戊基-7-喹啉基)苯基]磺酰基氮杂环丁烷-3-基]甲基]氨基甲酸叔丁酯AQ-11(0.95g，1.76mmol，1当量)在MeOH(2mL)中的混合物中加入乙酰氯(692.15mg，8.82mmol，629.23μL，5当量)。将混合物在50℃搅拌0.5h。LCMS显示反应完成。将混合物用NaHCO3水溶液稀释并将pH调节至8-9。将混合物浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Welch Xtimate C18 100*25mm*3um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：15％-40％,12min)纯化以得到呈白色固体的AQ-12(0.35g，798.02μmol，45.25％产率)。1H NMR(MeOD-d4,400MHz)δ8.26(s,1H),8.18-8.11(m,2H),8.01(d,J＝8.4Hz,1H),7.98-7.92(m,2H),7.88-7.82(m,2H),3.97(t,J＝8.4Hz,2H),3.66(dd,J＝5.6,8.4Hz,2H),3.06(d,J＝7.6Hz,2H),2.77-2.72(m,2H),2.68-2.74(m,1H),1.81-1.73(m,2H),1.52-1.40(m,4H),1.01-0.91(m,3H)。LCMS(ESI)：C24H30N4O2S的计算质量为438.21，m/z实测质量为439.2[M+H]+。
实施例13AQ-13的制备
Figure BDA0003603486130000891
5-溴-1-碘-2-甲基-3-硝基-苯AQ-13b的制备
在N2下在0℃向4-溴-1-甲基-2-硝基-苯AQ-13a(45g，208.30mmol，1当量)在H2SO4(300mL)中的溶液中加入NIS(84.36g，374.94mmol，1.8当量)。将混合物在0℃搅拌1h。TLC表明反应物被完全消耗并且形成了一个新斑点。在剧烈搅拌的同时将混合物倒入冰水(2000mL)中，并用EtOAc(300mL×3)萃取。将有机层用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至100/1)纯化以得到呈白色固体的AQ-13b(54g，157.93mmol，75.82％产率)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.21(d,J＝2.0Hz,1H),7.88(d,J＝2.0Hz,1H),2.55(s,3H)。
5-溴-2-(溴甲基)-1-碘-3-硝基-苯AQ-13c的制备
在N2下在20℃向5-溴-1-碘-2-甲基-3-硝基-苯AQ-13b(53.5g，156.47mmol，1当量)在CCl4(500mL)中的溶液中加入NBS(41.77g，234.70mmol，1.5当量)和过氧化苯甲酰BPO(3.79g，15.65mmol，0.1当量)。将混合物在90℃搅拌24h。TLC表明反应物被完全消耗并且形成了两个新斑点。将混合物过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱(柱高：250mm，直径：100mm，100-200目硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝50/1、10/1)纯化以得到呈白色固体的AQ-13c(24g，57.03mmol，36.45％产率)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.29(d,J＝1.6Hz 1H),8.04(d,J＝2.0Hz,1H),4.82(s,2H)。
4-溴-2-碘-6-硝基-苯甲醛AQ-13d的制备
向5-溴-2-(溴甲基)-1-碘-3-硝基-苯AQ-13c(37g，87.92mmol，1当量)在CH3CN(300mL)中的溶液中加入N-甲基吗啉N-氧化物NMO(20.60g，175.85mmol，18.56mL，2当量)。将混合物在25℃搅拌12h。TLC表明反应物被完全消耗并且形成了一个新斑点。将混合物用水(1000mL)稀释并用EtOAc(300mL×3)萃取。将有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(
Figure BDA0003603486130000901
40g
Figure BDA0003603486130000902
硅胶快速柱，洗脱液为65mL/min的0-50％的乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化以得到呈灰白色固体的AQ-13d(25g，70.24mmol，79.89％产率)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ10.00(s,1H),8.36(d,J＝2.0Hz,1H),8.14(d,J＝2.0Hz,1H)。
2-氨基-4-溴-6-碘-苯甲醛AQ-13e的制备
向4-溴-2-碘-6-硝基-苯甲醛AQ-13d(25g，70.24mmol，1当量)在EtOH(500mL)中的溶液中加入Fe(11.77g，210.73mmol，3当量)，然后在25℃将HCl(12M，1.17mL，0.2当量)在H2O(100mL)中的溶液加入到反应混合物中。将混合物在85℃搅拌1h。TLC表明反应物被完全消耗并且形成了一个新斑点。将反应混合物减压浓缩以去除EtOH，然后向残余物中加入乙酸乙酯(EtOAc)(100mL)和水(100mL)。通过逐渐加入NaHCO3水溶液将pH调节至约8，将混合物过滤并用EtOAc(80mL×3)萃取。将有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(
Figure BDA0003603486130000911
30g
Figure BDA0003603486130000912
硅胶快速柱，洗脱液为100mL/min的0-70％的乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化以得到呈黄色固体的AQ-13e(20g，61.36mmol，87.36％产率)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ10.04(s,1H),7.38(d,J＝1.6Hz,1H),6.84(d,J＝1.6Hz,1H),6.50(br,s,2H)。
7-溴-5-碘-3-戊基-喹啉-2-胺AQ-13f的制备
在25℃向2-氨基-4-溴-6-碘-苯甲醛AQ-13e(17g，52.16mmol，1当量)和庚腈(8.70g，78.24mmol，10.74mL，1.5当量)在DMF(200mL)中的溶液中加入t-BuOK(11.71g，104.32mmol，2当量)。将混合物在70℃搅拌2h。TLC表明反应物被完全消耗并且形成了一个新斑点。将混合物用水(500mL)稀释并用EtOAc(150mL×3)萃取。将有机层用盐水(80mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(
Figure BDA0003603486130000913
20g
Figure BDA0003603486130000914
硅胶快速柱，洗脱液为100mL/min的0-80％的乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化以得到呈黄色固体的AQ-13f(6g，14.32mmol，27.45％产率)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ7.89(d,J＝1.6Hz,1H),7.81(s,1H),7.78(d,J＝1.6Hz,1H),5.43(br,s,2H),2.63-2.52(m,2H),1.81-1.68(m,2H),1.49-1.35(m,4H),1.01-0.89(m,3H)。
(5-(2-氨基-7-溴-3-戊基喹啉-5-基)戊-4-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯AQ-13g的制备
将7-溴-5-碘-3-戊基-喹啉-2-胺AQ-13f(2g，4.77mmol，1当量)、N-戊-4-炔基氨基甲酸叔丁酯(961.93mg，5.25mmol，1.1当量)、Pd(PPh3)2Cl2(167.48mg，238.61μmol，0.05当量)、CuI(181.77mg，954.43μmol，0.2当量)在TEA(7mL)和DMF(20mL)中的混合物脱气，并用N2吹扫3次，然后将所述混合物在N2气氛下在90℃搅拌1h。TLC表明反应物完全消耗。将反应混合物通过加入0℃的H2O(100mL)猝灭，然后用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至0/1)纯化。获得了呈棕色固体的产物AQ-13g(1.6g，3.37mmol，70.67％产率)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.04(s,1H),7.76(s,1H),7.46(d,J＝1.6Hz,1H),4.97(br s,2H),4.73(br s,1H),3.38-3.32(m,2H),2.63-2.57(m,4H),1.93-1.66(m,6H),1.51-1.35(m,11H),0.94(br t,J＝6.8Hz,3H)。
N-[5-[2-氨基-7-[3-[3-(羟甲基)氮杂环丁烷-1-基]磺酰基苯基]-3-戊基-5-喹啉基]戊-4-炔基]氨基甲酸叔丁酯，AQ-13h的制备
将N-[5-(2-氨基-7-溴-3-戊基-5-喹啉基)戊-4-炔基]氨基甲酸叔丁酯AQ-13g(0.6g，1.26mmol，1当量)、[1-[3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]磺酰基氮杂环丁烷-3-基]甲醇(893.46mg，2.53mmol，2当量)、Pd(dppf)Cl2(46.27mg，63.23μmol，0.05当量)、K2CO3(349.58mg，2.53mmol，2当量)在二噁烷(10mL)和H2O(1mL)中的混合物脱气并用N2吹扫3次，然后将所述混合物在N2气氛下在90℃搅拌2h。LC-MS显示AQ-13g被消耗。在LC-MS上显示出了几个新峰，并且检测到了约22％的所需化合物AQ-13h。将反应混合物通过加入0℃的H2O(30mL)猝灭，然后用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至0/1)和(SiO2,EtOAc:MeOH＝1:0至5:1)纯化。获得了呈黄色固体的化合物AQ-13h(0.31g，499.36μmol，39.49％产率)。1H NMR(MeOD,400MHz)δ8.16(s,1H),8.13-8.03(m,2H),7.89-7.85(m,1H),7.83-7.78(m,1H),7.76(s,1H),7.64(d,J＝1.2Hz,1H),4.59(br s,2H),3.88(t,J＝8.4Hz,2H),3.62(dd,J＝6.0,8.0Hz,2H),3.43(d,J＝6.0Hz,2H),2.73-2.54(m,5H),1.87(quin,J＝7.2Hz,2H),1.80-1.69(m,2H),1.44(s,13H),0.97(br t,J＝6.8Hz,3H)。
N-[5-[2-氨基-7-[3-[3-(羟甲基)氮杂环丁烷-1-基]磺酰基苯基]-3-戊基-5-喹啉基]戊基]氨基甲酸叔丁酯，AQ-13i的制备
在N2下向N-[5-[2-氨基-7-[3-[3-(羟甲基)氮杂环丁烷-1-基]磺酰基苯基]-3-戊基-5-喹啉基]戊-4-炔基]氨基甲酸叔丁酯AQ-13h(310mg，499.36μmol，1当量)在MeOH(10mL)中的溶液中加入Pd(OH)2/C(20％，0.1g)。将悬浮液在真空下脱气并用H2吹扫数次。将混合物在H2(50psi)下在25℃搅拌12h。LC-MS显示反应物被完全消耗，并检测到了一个具有所需质量的主峰。将混合物过滤并浓缩，以得到呈黄色油状物的AQ-13i(270mg，432.12μmol，86.53％产率)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.18(s,1H),7.97(br d,J＝7.6Hz,1H),7.93(s,1H),7.89-7.79(m,2H),7.71-7.64(m,1H),7.38(s,1H),5.27-5.14(m,1H),4.60-4.50(m,1H),3.98-3.88(m,2H),3.73-3.65(m,2H),3.62-3.56(m,2H),3.21-3.08(m,2H),3.04(br t,J＝7.6Hz,2H),2.71-2.60(m,3H),1.79-1.74(m,6H),1.58-1.51(m,2H),1.43(s,13H),0.95(br t,J＝7.2Hz,3H)。
[1-[3-[2-氨基-5-(5-氨基戊基)-3-戊基-7-喹啉基]苯基]磺酰基氮杂环丁烷-3-基]甲醇，AQ-13的制备
在20℃向N-[5-[2-氨基-7-[3-[3-(羟甲基)氮杂环丁烷-1-基]磺酰基苯基]-3-戊基-5-喹啉基]戊基]氨基甲酸叔丁酯AQ-13i(150mg，240.06μmol，1当量)在DCM(5mL)中的溶液中加入TFA(1.54g，13.51mmol，1mL，56.26当量)。将混合物在20℃搅拌1h。LC-MS显示AQ-13i仍然存在。在LC-MS上显示出了几个新峰，并且检测到了所需化合物。将反应混合物减压浓缩。将残余物用CH3CN(10mL)和H2O(1mL)溶解，并用0℃的LiOH水溶液调节至pH＝9。将混合物在20℃搅拌1h。将混合物过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(TFA条件：柱：WelchXtimate C18 100*25mm*3um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：15％-45％，12min)纯化。获得了呈白色固体的化合物AQ-13(60mg，93.94μmol，39.13％产率，TFA)。1H NMR(MeOD-d4,400MHz)δ8.36(s,1H),8.14-8.09(m,2H),7.94-7.90(m,1H),7.86-7.80(m,2H),7.68(d,J＝1.6Hz,1H),3.87(t,J＝8.0Hz,2H),3.63(dd,J＝6.0,8.0Hz,2H),3.43(d,J＝6.0Hz,2H),3.17(t,J＝7.6Hz,2H),2.99-2.90(m,2H),2.79(t,J＝7.6Hz,2H),2.64-2.53(m,1H),1.87-1.69(m,6H),1.62-1.52(m,2H),1.50-1.41(m,4H),1.00-0.93(m,3H)。LCMS(ESI)：C29H40N4O3S的计算质量为524.28，m/z实测质量为525.3[M+H]+
实施例14 2-氨基-N-(6-(4-((2-氨基乙基)氨基甲酰基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)-3-戊基喹啉-7-甲酰胺，AQ-14的制备
Figure BDA0003603486130000941
将N-[2-[[1-[5-[(2-氨基-3-戊基-喹啉-7-羰基)氨基]-2-吡啶基]哌啶-4-羰基]氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯AQ-10(65mg，0.11mmol)、0.5mL TFA和1mL DCM装入小瓶中。将反应维持2h，然后利用25-75％梯度的乙腈:含有0.1％三氟乙酸的水通过反相制备型HPLC纯化。将纯化的级分合并并冻干，以得到501mg的AQ-14。LC/MS[M+H]504.31(计算值)；LC/MS[M+H]504.51(实测值)。
实施例15[1-[3-[2-氨基-5-[(1-甲基吡咯烷-2-基)甲基]-3-戊基-7-喹啉基]苯基]磺酰基氮杂环丁烷-3-基]甲醇，AQ-15的制备
Figure BDA0003603486130000951
7-溴-5-[5-(甲基氨基)戊-1-炔基]-3-戊基-喹啉-2-胺AQ-15a的制备
在0℃向(5-(2-氨基-7-溴-3-戊基喹啉-5-基)戊-4-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯AQ-13g(0.59g，1.24mmol，1当量)在THF(18mL)中的溶液中加入LAH(141.58mg，3.73mmol，3当量)。将混合物在75℃搅拌1h。LC-MS显示反应物被消耗。在LC-MS上显示出了几个新峰，并且检测到了所需化合物。将反应混合物通过加入0℃的H2O(0.15mL)猝灭，然后加入0℃的15％NaOH(0.15mL)。将反应在25℃搅拌30min。将混合物通过硅藻土过滤并用THF(10mL×6)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，乙酸乙酯/MeOH＝1/0至1/1)纯化。获得了呈黄色固体的化合物AQ-15a(0.12g，309.00μmol，24.85％产率)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ7.96(s,1H),7.50(s,1H),7.18(d,J＝1.2Hz,1H),4.86-4.81(m,2H),3.71(t,J＝6.0Hz,2H),3.32(t,J＝6.8Hz,2H),2.92(s,3H),2.62-2.53(m,3H),2.00-1.89(m,2H),1.81-1.67(m,6H),0.95-0.91(m,3H)。LC/MS[M+H]388.1/390.1(计算值)；LC/MS[M+H]388.2/390.2(实测值)。
[1-[3-[2-氨基-5-[5-(甲基氨基)戊-1-炔基]-3-戊基-7-喹啉基]苯基]磺酰基氮杂环丁烷-3-基]甲醇AQ-15b的制备
将7-溴-5-[5-(甲基氨基)戊-1-炔基]-3-戊基喹啉-2-胺AQ-15a(120mg，309.00μmol，1当量)、[1-[3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]磺酰基氮杂环丁烷-3-基]甲醇(120.07mg，339.91μmol，1.1当量)、Pd(dppf)Cl2(22.61mg，30.90μmol，0.1当量)和K2CO3(85.42mg，618.01μmol，2当量)在二噁烷(2mL)和H2O(0.2mL)中的混合物脱气并用N2吹扫3次，然后将所述混合物在N2气氛下在90℃搅拌2h。LC-MS显示反应物被消耗。在LC-MS上显示出了几个新峰，并且检测到了所需化合物。将反应混合物通过加入0℃的H2O(10mL)猝灭，然后用EtOAc(10mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，乙酸乙酯/MeOH＝1/0至1/1)纯化。获得了呈黄色油状物的化合物AQ-15b(70mg，130.91μmol，42.37％产率)。LC/MS[M+H]535.3(计算值)；LC/MS[M+H]535.1(实测值)。
AQ-15的制备
在N2下向[1-[3-[2-氨基-5-[5-(甲基氨基)戊-1-炔基]-3-戊基-7-喹啉基]苯基]磺酰基氮杂环丁烷-3-基]甲醇AQ-15b(70mg，130.91μmol，1当量)在MeOH(3mL)中的溶液中加入Pd(OH)2/C(20％，20mg)。将悬浮液在真空下脱气并用H2吹扫数次。将混合物在H2(50psi)下在25℃搅拌12h。将反应混合物过滤，并将滤液减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(中性条件；柱：Welch Xtimate C18 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：48％-68％，10.5min)纯化。获得了呈白色固体的AQ-15(10mg，18.63μmol，14.23％产率)。1H NMR(MeOD-d4,400MHz)δ8.15-8.05(m,2H),8.01(s,1H),7.90-7.84(m,1H),7.83-7.75(m,1H),7.73(s,1H),7.48(s,1H),3.88(t,J＝8.4Hz,2H),3.67-3.56(m,3H),3.43(d,J＝6.4Hz,2H),3.23-3.15(m,1H),2.97-2.88(m,1H),2.71(br t,J＝7.2Hz,3H),2.62-2.49(m,4H),2.43-2.32(m,1H),1.90-1.62(m,5H),1.51-1.38(m,4H),0.96(br t,J＝7.2Hz,3H)。LC/MS[M+H]537.3(计算值)；LC/MS[M+H]537.3(实测值)。
实施例16N-[5-[2-氨基-7-[3-[3-(羟甲基)氮杂环丁烷-1-基]磺酰基苯基]-3-戊基-5-喹啉基]戊-4-炔基]氨基甲酸叔丁酯，AQ-16的制备
Figure BDA0003603486130000971
在25℃向[1-[3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]磺酰基氮杂环丁烷-3-基]甲醇(44.67mg，126.47μmol，1.2当量)和(5-(2-氨基-7-溴-3-戊基喹啉-5-基)戊-4-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯AQ-13g(0.05g，105.39μmol，1当量)在二噁烷(5mL)和H2O(1mL)中的混合物中加入Pd(dppf)Cl2(2.31mg，3.16μmol，0.03当量)和K2CO3(29.13mg，210.78μmol，2当量)。将混合物在90℃搅拌12小时。将反应混合物过滤，并将滤液浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Welch Xtimate C18 150×25mm×5um；流动相：[水(10mMNH4HCO3)-ACN]；B％：58％-88％，10.5min)纯化。获得了呈白色固体的AQ-16(0.024g，37.20μmol，35.30％产率，96.227％纯度)。1H NMR(MeOD,400MHz)δ8.19(s,1H),8.14-8.08(m,2H),7.88(d,J＝8.0Hz,1H),7.81(d,J＝7.6Hz,1H),7.79(s,1H),7.67(s,1H),3.90(t,J＝8.0Hz,2H),3.64(t,J＝6.0Hz,2H),3.44(d,J＝6.4Hz,1H),3.30-3.38(m,2H),2.72-2.62(m,5H),1.94-1.84(m,2H),1.83-1.71(m,2H),1.55-1.31(m,13H),0.99(t,J＝6.8Hz,3H)。LC/MS[M+H]621.3(计算值)；LC/MS[M+H]621.3(实测值)。
实施例17 1-((1-((3-(2-氨基-3-戊基喹啉-7-基)苯基)磺酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)-3-(3-氰基苯基)-2-(2-甲氧基乙基)胍，AQ-17的制备
Figure BDA0003603486130000981
1-(3-氰基苯基)-3-(2-甲氧基乙基)硫脲，AQ-17a的制备
将2-甲氧基乙-1-胺(476mg，2.98mmol)、3-异硫氰酸根苄腈(256μL，2.98mmol)和10mL DCM装入20mL小瓶中。将反应维持4小时，浓缩，然后使用2-10％MeOH:DCM的梯度通过硅胶快速色谱法进行纯化。合并含有产物的级分并浓缩，以得到752mg的AQ-17a。LC/MS[M+H]236.09(计算值)；LC/MS[M+H]236.13(实测值)。
3-((((2-甲氧基乙基)亚氨基)亚甲基)氨基)苄腈，AQ-17b的制备
将59mg的AQ-17a(0.25mmol)、三乙胺(104μL，0.75mmol)和2mL的DCM装入小瓶中。向该小瓶中加入2-氯-1-甲基碘化吡啶鎓(77mg，0.30mmol)。将反应维持三小时。将粗反应减压浓缩，并使用乙酸乙酯:己烷的25-75％梯度通过硅胶快速色谱法纯化，从而得到46mg的所需碳二亚胺AQ-17b。LC/MS[M+H]202.10(计算值)；LC/MS[M+H]202.19(实测值)。
(E)-1-((1-((3-(2-氨基-3-戊基喹啉-7-基)苯基)磺酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)-3-(3-氰基苯基)-2-(2-甲氧基乙基)胍，AQ-17的制备
将AQ-12(9.7mg，0.018mmol)、AQ-17b(3.5mg，0.018mmol)、三乙胺(7.3μL(微升)，0.054mmol)和200μL DMF装入小瓶中。将反应维持2h，然后利用25-75％梯度的乙腈:含有0.1％三氟乙酸的水通过反相制备型HPLC纯化。将纯化的级分合并并冻干，以得到501mg的AQ-17。LC/MS[M+H]640.31(计算值)；LC/MS[M+H]640.55(实测值)。
实施例18 1-(5-(2-氨基-3-戊基喹啉-5-基)戊基)-3-(3-氰基苯基)-2-(2-甲氧基乙基)胍，AQ-18的制备
使用实施例18中针对AQ-17中所述的方法合成AQ-18。LC/MS[M+H]501.33(计算值)；LC/MS[M+H]501.52(实测值)。
实施例19N-(7-溴-3-戊基-2-喹啉基)-N-叔丁氧羰基-氨基甲酸叔丁酯，AQ-19的制备
Figure BDA0003603486130000991
在15℃下向7-溴-3-戊基-喹啉-2-胺(12.5g，42.63mmol，1当量)、Et3N(8.63g，85.27mmol，11.87mL，2当量)和DMAP(520.84mg，4.26mmol，0.1当量)在DCM(200mL)中的混合物中缓慢加入Boc2O(27.91g，127.90mmol，29.38mL，3当量)。将混合物在15℃搅拌2h。TLC显示反应完成。将混合物用水(200mL)稀释且用DCM(100mL×3)萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱(柱高：250mm，直径：100mm，100-200目硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝3/1)纯化以得到呈黄色固体状的N-(7-溴-3-戊基-2-喹啉基)-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(18g，36.48mmol，85.57％产率)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.22(d,J＝2.0Hz,1H),7.99(s,1H),7.70-7.63(m,2H),2.69-2.64(m,2H),1.74-1.70(m,2H),1.42-1.39(m,22H),0.95-0.90(m,3H)。LCMS(ESI)：C24H33BrN2O4的计算质量为492.16，m/z实测质量为493.2[M+H]+。
实施例20((1-((3-(2-氨基-3-戊基喹啉-7-基)苯基)磺酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)氨基甲酸4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)苄酯，AQ-20的制备
Figure BDA0003603486130001001
(2S)-2-[[(1S)-1-[[4-[[1-[3-(2-氨基-3-戊基-7-喹啉基)苯基]磺酰基氮杂环丁烷-3-基]甲基氨基甲酰氧基甲基]苯基]氨基甲酰基]-4-脲基-丁基]氨基甲酰基]-3-甲基丁酸9H-芴-9-基甲酯，AQ-20a的制备
在15℃向7-[3-[3-(氨基甲基)氮杂环丁烷-1-基]磺酰基苯基]-3-戊基-喹啉-2-胺AQ-12(52.57mg，119.87μmol，1当量)和(4-硝基苯基)碳酸[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-芴-9-基甲氧羰基氨基)-3-甲基-丁酰基]氨基]-5-脲基-戊酰基]氨基]苯基]甲酯(91.92mg，119.87μmol，1当量)在DMF(2mL)中的混合物中加入DIEA(30.98mg，239.75μmol，41.76μL，2当量)。将混合物在15℃搅拌0.5h。LCMS显示反应完成。将混合物倒入水(20mL)中，然后过滤以得到呈黄色固体的粗产物AQ-20a(0.12g，114.15μmol，95.23％产率)。
AQ-20的制备
将固体AQ-20a((1-((3-(2-氨基-3-戊基喹啉-7-基)苯基)磺酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)氨基甲酸4-((S)-2-((S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)苄酯(53mg，50μmol，1当量)溶于1:1v/v二乙胺/DMF(3mL)中并用热风枪轻轻加热，直到通过LC/MS发现所有的起始材料已经消失。减压去除溶剂，然后通过用甲苯(5×3mL)重复蒸发来干燥。获得AQ-20，并且不经纯化即用于下一步反应。LC/MS[M+H]844.41(计算值)；LC/MS[M+H]844.63(实测值)。
实施例21 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[5-[2-氨基-7-[3-[3-(羟甲基)氮杂环丁烷-1-基]磺酰基苯基]-3-戊基-5-喹啉基]戊基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸，AQ-21的制备
Figure BDA0003603486130001011
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[5-[2-氨基-7-[3-[3-(羟甲基)氮杂环丁烷-1-基]磺酰基苯基]-3-戊基-5-喹啉基]戊基-甲基-氨基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸叔丁酯，AQ-21a的制备
在25℃向[1-[3-[2-氨基-5-(5-氨基戊基)-3-戊基-7-喹啉基]苯基]磺酰基氮杂环丁烷-3-基]甲醇AQ-13(0.26g，173.43μmol，1当量)在MeOH(5mL)中的溶液中加入3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-氧代乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸叔丁酯(152.10mg，260.14μmol，1.5当量)和AcOH(10.41mg，173.43μmol，9.92μL，1当量)。在加入后，将混合物在25℃搅拌15min，然后在25℃加入NaBH3CN(21.80mg，346.85μmol，2当量)。将所得混合物在25℃搅拌12h。在25℃将甲醛HCHO(84.45mg，1.04mmol，77.48μL，37％纯度，6当量)加入到反应混合物中。在加入后，将混合物在25℃搅拌15min，然后在25℃加入NaBH3CN(21.80mg，346.85μmol，2当量)。将所得混合物在25℃搅拌2h，然后用0℃的NaHCO3水溶液猝灭，并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(中性条件：柱：Welch Xtimate C18 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：55％-85％，10.5min)纯化。获得了呈淡黄色油状物的AQ-21a(80mg，72.24μmol，41.65％产率)。LC/MS[M+H]1107.7(计算值)；LC/MS[M+H]1107.7(实测值)。
AQ-21的制备
在25℃向AQ-21a(60mg，54.18μmol，1当量)在CH3CN(0.5mL)和H2O(0.1mL)中的溶液中加入TFA(185.33mg，1.63mmol，120.34μL，30当量)。将混合物在70℃搅拌1h。LC-MS显示反应物被消耗。在LC-MS上显示出了几个新峰，并且检测到了所需化合物。将反应混合物减压浓缩以得到残余物。将残余物用CH3CN(10mL)和H2O(1mL)溶解，并用0℃的NaHCO3水溶液调节至pH＝8。将混合物在25℃搅拌1h。将混合物用0℃的1N HCl调节至pH＝7。将混合物过滤并减压浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型HPLC(TFA条件：柱：Nano-micro KromasilC18 100*30mm 8um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：20％-40％，10min)纯化。将产物在30℃减压浓缩，然后冻干以得到粗产物，所述粗产物含有约8％的三氟乙酸酯。将粗产物用CH3CN(5mL)和H2O(1mL)溶解，并用0℃的NaHCO3水溶液调节至pH＝8。将混合物在25℃搅拌30min。将混合物用0℃的1N HCl调节至pH＝6，然后减压浓缩以得到残余物。将残余物用CH3CN(5mL×3)洗涤，过滤，并将滤液减压浓缩，然后冻干以得到呈无色油状物的纯AQ-21(25mg，22.98μmol，42.42％产率，HCl)。1H NMR(MeOD-d4,400MHz)δ8.43(s,1H),8.17-8.11(m,2H),7.95(d,J＝7.6Hz,1H),7.88-7.82(m,2H),7.74(s,1H),3.92-3.85(m,2H),3.83-3.78(m,2H),3.74-3.54(m,42H),3.48-3.38(m,4H),3.28-3.18(m,2H),2.91(s,3H),2.85-2.77(m,2H),2.67-2.56(m,1H),2.52(t,J＝6.0Hz,2H),1.92-1.72(m,6H),1.60-1.41(m,6H),1.02-0.93(m,3H)。LC/MS[M+H]1051.6(计算值)；LC/MS[M+H]1051.5(实测值)。
式III的氨基喹啉-接头化合物(AQ-L)的制备
实施例22 28-(2-氨基-3-戊基喹啉-5-基)-22-氧代-4,7,10,13,16,19-六氧杂-23-氮杂二十八烷酸2,3,5,6-四氟苯基酯三氟乙酸盐，AQ-L1的制备
Figure BDA0003603486130001031
AQ-L1b的制备
向双-PEG6-酸、AQ-L1a(68.5mg，0.2mmol，1当量)的乙腈(1mL)溶液中加入2,3,5,6-四氟苯酚(73.1mg，0.44mmol，2.2当量)和二异丙基碳二亚胺DIC(82μL，0.52mmol，2.6当量)的混合物。将所述混合物加热至50℃达15分钟，然后去除溶剂，以获得PEG6-双-(2,3,5,6-四氟苯基)酯AQ-L1b，其不经纯化即使用。
AQ-L1的制备
向5-(5-氨基戊基)-3-戊基喹啉-2-胺甲酸盐(69.1mg，0.2mmol，1当量)的DMF(2mL)溶液中加入二异丙基乙胺(0.14mL，0.8mmol，4当量)，然后加入PEG6-双-(2,3,5,6-四氟苯基)酯AQ-L1b在DMF(2mL)中的溶液，并将所述混合物加热至50℃达45分钟。将粗产物通过反相HPLC(乙腈/水)纯化，以在浓缩后呈黄色糖浆的AQ-L1(0.0914mg，0.098mmol，49％)。LC/MS[M+H]812.40(计算值)；LC/MS[M+H]812.64(实测值)。
实施例23AQ-L2的制备
Figure BDA0003603486130001041
1-((3-氰基苯基)氨基)-1-硫代-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十氧杂-2-氮杂三十五烷-35-酸叔丁酯，AQ-L2b的制备
将1-氨基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30-十氧杂三十三烷酸-33-叔丁酯、AQ-L2a(378mg，0.645mmol)、3-氰基苯基异硫氰酸酯(103mg，0.645mmol)和7mL DCM装入小瓶中。将反应维持2h，然后利用25-75％梯度的乙腈:含有0.1％三氟乙酸的水通过反相制备型HPLC纯化。将纯化的级分合并并冻干，以得到501mg的AQ-L2b。LC/MS[M+H]746.39(计算值)；LC/MS[M+H]746.69(实测值)。
1-((3-氰苯基)亚氨基)-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十氧杂-2-氮杂三十五烷-1-烯-35-酸叔丁酯，AQ-L2c的制备
将107mg的硫脲(0.143mmol)、三乙胺(60μL，0.429mmol)和1.3mL的DCM装入小瓶中。向该小瓶中加入2-氯-1-甲基碘化吡啶鎓(44mg，0.172mmol)。将反应超声处理2min。反应仍然是异质的；加入100ul DMF并将反应搅拌1h，此时通过LCMS发现没有硫脲残留，只有碳二亚胺。将粗反应减压浓缩并与甲苯共沸三次。将粗物质使用25-75％MeCN:乙酸乙酯梯度，通过硅胶快速色谱法纯化，从而以67％的产率得到68.6mg的碳二亚胺AQ-L2c。LC/MS[M+H]712.40(计算值)；LC/MS[M+H]712.67(实测值)。
41-(2-氨基-3-戊基喹啉-5-基)-35-((3-氰基苯基)氨基)4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十氧杂-34,36-二氮杂四十一烷-35-烯酸叔丁酯，AQ-L2d的制备
Figure BDA0003603486130001061
AQ-L2d是根据实施例25中所述的方法，从AQ-L2c和5-(5-氨基戊基)-3-戊基喹啉-2-胺甲酸盐制备的。LC/MS[M+H]1011.64(计算值)；LC/MS[M+H]1011.97(实测值)。
AQ-L2e是根据实施例25中所述的方法，从AQ-L2d制备的。LC/MS[M+Na]977.56(计算值)；LC/MS[M+Na]977.70(实测值)。
AQ-L2是根据实施例25中所述的方法从AQ-L2e制备的。LC/MS[M+H]1103.57(计算值)；LC/MS[M+H]1103.71(实测值)。
实施例24(6S,9S)-1-氨基-6-((4-((((5-(2-氨基-3-戊基喹啉-5-基)戊基)氨基甲酰基)氧基)甲基)苯基)氨基甲酰基)-9-异丙基-1,8,11-三氧代-14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74,77,80,83,86-二十五氧杂-2,7,10-三氮杂八十九烷-89-酸2,3,5,6-四氟苯基酯，AQ-L3的制备
Figure BDA0003603486130001071
AQ-L3a是使用实施例20中所述的程序，从5-(5-氨基戊基)-3-戊基喹啉-2-胺甲酸盐和(4-硝基苯基)碳酸[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-芴-9-基甲氧羰基氨基)-3-甲基-丁酰基]氨基]-5-脲基-戊酰基]氨基]苯基]甲酯制备的。LC/MS[M+H]927.51(计算值)；LC/MS[M+H]927.51(实测值)。
AQ-L3b是使用实施例20中所述的程序制备的。LC/MS[M+H]705.45(计算值)；LC/MS[M+H]705.61(实测值)。
Figure BDA0003603486130001072
AQ-L3是使用实施例24中所述的程序制备的。LC/MS[M+H]2054.40(计算值)；LC/MS[M+H]2054.11(实测值)。
实施例24 27-(2-氨基-3-戊基喹啉-5-基)-22-甲基-4,7,10,13,16,19-六氧杂-22-氮杂二十七烷酸2,3,5,6-四氟苯酯三氟乙酸盐，AQ-L4的制备
Figure BDA0003603486130001081
向AQ-9的盐酸盐(55mg，80μmol，1当量)中加入2,3,5,6-四氟苯酚(67mg，0.40mmol，5当量)和二异丙基碳二亚胺(63μL，0.40mmol，5当量)在乙腈(2.5mL)中的混合物。将混合物用热风枪轻轻加热，然后在室温下搅拌45分钟。将粗产物通过反相HPLC(乙腈/水)纯化，以在去除溶剂后获得AQ-L4(41mg，51μmol，64％)。LC/MS[M+H]798.42(计算值)；LC/MS[M+H]798.66(实测值)。
实施例25(E)-41-(2-氨基-7-(3-((3-(羟甲基)氮杂环丁烷-1-基)磺酰基)苯基)-3-戊基喹啉-5-基)-35-((3-氰基苯基)亚氨基)-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十氧杂-34,36-二氮杂四十一烷酸2,3,5,6-四氟苯酯，AQ-L5的制备
Figure BDA0003603486130001091
将(1-((3-(2-氨基-5-(5-氨基戊基)-3-戊基喹啉-7-基)苯基)磺酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲醇AQ-13(0.1g，0.19mmol，1当量)和1-((3-氰苯基)亚氨基)-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十氧杂-2-氮杂三十五烷-1-烯-35-酸叔丁酯AQ-L2c(0.14g,0.19mmol,1当量)溶于DMF中。加入三乙胺(0.08ml，0.57mmol，3当量)，并将反应在环境温度下搅拌。在胺起始材料消耗后，将反应浓缩并通过HPLC纯化。将分离的叔丁酯产物用最少的TFA吸收10分钟，然后浓缩以得到(E)-41-(2-氨基-7-(3-((3-(羟甲基)氮杂环丁烷-1-基)磺酰基)苯基)-3-戊基喹啉-5-基)-35-((3-氰基苯基)亚氨基)-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十氧杂-34,36-二氮杂四十一烷酸AQ-L5a(0.15g，0.13mmol，67％)。LC/MS[M+H]1180.62(计算值)；LC/MS[M+H]1181.05(实测值)。
AQ-L5的制备
将AQ-L5a(0.15g，0.127mmol，1当量)和四氟苯酚TFP(0.032g，0.19mmol，1.5当量)溶于2ml DMF中。加入可力丁(0.083ml，0.64mmol，5当量)，然后加入1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、EDC-HCl(0.049g，0.25mmol，2当量)。将反应在室温下搅拌直至完全，然后浓缩并通过HPLC纯化以得到AQ-L5(0.063g，0.055mmol，43％)。LC/MS[M+H]1328.61(计算值)；LC/MS[M+H]1329.07(实测值)。
实施例26 39-(2-氨基-7-(3-((3-(羟甲基)氮杂环丁烷-1-基)磺酰基)苯基)-3-戊基喹啉-5-基)-34-甲基-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十氧杂-34-氮杂三十九烷酸2,3,5,6-四氟苯酯，AQ-L6的制备
Figure BDA0003603486130001101
将39-(2-氨基-7-(3-((3-(羟甲基)氮杂环丁烷-1-基)磺酰基)苯基)-3-戊基喹啉-5-基)-34-甲基-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十氧杂-34-氮杂三十九烷酸AQ-21(0.1g，0.095mmol，1当量)和四氟苯酚TFP(0.032g，0.19mmol，2当量)溶于2ml DMF中。加入可力丁(0.063ml，0.48mmol，5当量)，然后加入EDC-HCl(0.036g，0.19mmol，2当量)。将反应在室温下搅拌2小时，然后浓缩并通过HPLC纯化以得到AQ-L6(0.049g，0.040mmol，43％)。LC/MS[M+H]1199.58(计算值)；LC/MS[M+H]1199.98(实测值)。
实施例27(Z)-4-(((1-((3-(2-氨基-3-戊基喹啉-7-基)苯基)磺酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)氨基)-8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-十氧杂-3,5-二氮杂三十八烷-4-烯-38-酸2,3,5,6-四氟苯酯，AQ-L7的制备
Figure BDA0003603486130001111
AQ-L7a是根据实施例23中所述的方法制备的。LC/MS[M+H]673.39(计算值)；LC/MS[M+H]673.91(实测值)。
AQ-L7b是根据实施例23中所述的方法制备的，并且不经进一步纯化就直接用于后续步骤中。
AQ-L7c是根据实施例23中所述的方法制备的。LC/MS[M+H]1077.62(计算值)；LC/MS[M+H]1077.89(实测值)。
AQ-L7d是根据实施例23中所述的方法制备的。LC/MS[M+H]1021.55(计算值)；LC/MS[M+H]1021.77(实测值)。
AQ-L7是根据实施例23中所述的方法制备的。LC/MS[M+H]1169.55(计算值)；LC/MS[M+H]1169.88(实测值)。
实施例28(E)-1-(1-((3-(2-氨基-3-戊基喹啉-7-基)苯基)磺酰基)氮杂环丁烷-3-基)-3-((3-氰基苯基)氨基)-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34-十氧杂-2,4-二氮杂三十七烷-3-烯-37-酸2,3,5,6-四氟苯酯，AQ-L8的制备
Figure BDA0003603486130001121
AQ-L8a是根据实施例23中所述的方法制备的。LC/MS[M+H]1150.61(计算值)；LC/MS[M+H]1150.95(实测值)。
AQ-L8b是根据实施例23中所述的方法制备的。LC/MS[M+H]1094.55(计算值)；LC/MS[M+H]1094.69(实测值)。
AQ-L8是根据实施例23的程序中所述的方法制备的。LC/MS[M+H]1242.54(计算值)；LC/MS[M+H]1242.98(实测值)。
实施例29(6S,9S)-1-氨基-6-((4-(((((1-((3-(2-氨基-3-戊基喹啉-7-基)苯基)磺酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)氨基甲酰基)氧基)甲基)苯基)氨基甲酰基)-9-异丙基-1,8,11-三氧代-14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74,77,80,83,86-二十五氧杂-2,7,10-三氮杂八十九烷-89-酸2,3,5,6-四氟苯基酯，AQ-L9的制备
Figure BDA0003603486130001131
向((1-((3-(2-氨基-3-戊基喹啉-7-基)苯基)磺酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)氨基甲酸4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)苄酯、AQ-20(40mg)在DMF(2mL)中的溶液中加入酸-PEG25-NHS酯(假定66mg，50μmol)和三乙胺(21μL，0.15mmol，3当量)在DMF(1mL)中的溶液。将混合物用热风枪轻轻加热，然后在室温下搅拌30分钟以获得NHS。向粗产物中加入水(1mL)，并将混合物温和加热直至所形成的NHS酯水解。通过蒸发去除溶剂，然后进一步加入和蒸发甲苯(5×4mL)。向粗酸中加入2,3,5,6-四氟苯酚(66mg，0.4mmol)和DIC(50mg，0.4mmol，8当量)和可力丁(48mg，0.4mmol，8当量)在DMF(2mL)中的混合物。将混合物轻轻加热，直到通过LC/MS发现几乎所有的起始材料都已经消失了。将粗产物通过反相HPLC(乙腈/水)纯化，以在去除溶剂后获得AQ-L8(10.9mg，5μmol，10％)。LC/MS[M+H]2193.08(计算值)；LC/MS[M+H]2193.30(实测值)。
实施例30免疫缀合物(IC)的制备
在示例性程序中，使用G-25SEPHADEXTM脱盐柱(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)，将抗体缓冲液交换到pH 8.3的含有100mM硼酸、50mM氯化钠、1mM乙二胺四乙酸的缀合缓冲液中。然后使用缓冲液将洗脱液各自调节至6mg/ml，然后进行无菌过滤。将6mg/ml的抗体预热至30℃并与2-20(例如，7-10)摩尔当量的式II的氨基喹啉-接头化合物快速混合。使反应在30℃进行16小时，通过在pH 7.2的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中平衡的两个连续G-25脱盐柱上运行将免疫缀合物化合物与反应物分离，以提供表3的免疫缀合物(IC)。佐剂-抗体比率(DAR)是通过使用连接到XEVOTMG2-XS TOF质谱仪(Waters Corporation)的ACQUITYTMUPLCH类(Waters Corporation,Milford,Massachusetts)上的C4反相柱进行液相色谱质谱分析来确定的。
对于缀合，可以将抗体溶于本领域已知的不会不利地影响抗体的稳定性或抗原结合特异性的生理缓冲体系中。可以使用磷酸盐缓冲盐水。将氨基喹啉-接头中间体化合物溶于包含至少一种如本文其他地方所述的极性非质子溶剂的溶剂体系中。在一些此类方面中，将氨基喹啉-接头中间体在pH 8Tris缓冲液(例如，50mM Tris)中溶解至约5mM、10mM、约20mM、约30mM、约40mM或约50mM及其范围，诸如约50mM至约50mM、或约10mM至约30mM的浓度。在一些方面中，将氨基喹啉-接头中间体溶于DMSO或乙腈中，或溶于DMSO中。在缀合反应中，将当量过量的氨基喹啉-接头中间体溶液稀释并与冷却的抗体溶液(例如，从约1℃至约10℃)合并。氨基喹啉-接头中间体溶液可以适当地用至少一种极性非质子溶剂和至少一种极性质子溶剂稀释，所述溶剂的示例包括水、甲醇、乙醇、正丙醇和乙酸。在一些特定方面中，将氨基喹啉-接头中间体溶于DMSO中，并在与抗体溶液掺混之前用乙腈和水稀释。氨基喹啉-接头中间体与抗体的摩尔当量可为约1.5:1、约3:1、约5:1、约10:1、约15:1或约20:1，及其范围，诸如约1.5:1至约20:1、约1.5:1至约15:1、约1.5:1至约10:1、约3:1至约15:1、约3:1至约10:1、约5:1至约15:1、或约5:1至约10:1。可以通过本领域已知的方法(诸如LC-MS)适当地监测反应的完全，并且反应通常在约1小时至约24小时内完全。在反应完全后，可向反应混合物中加入试剂以猝灭反应和/或对未反应的抗体硫醇基团封端。合适的封端试剂的一个示例是乙基马来酰亚胺。
在缀合后，可通过本领域已知的纯化方法将免疫缀合物纯化并与未缀合的反应物和/或缀合物聚集体分离，所述纯化方法为例如但不限于尺寸排阻层析、疏水相互作用层析、离子交换层析、色谱聚焦、超滤、离心超滤以及它们的组合。例如，在纯化之前可以稀释免疫缀合物，例如在20mM琥珀酸钠，pH 5中稀释。将经稀释的溶液施加到阳离子交换柱上，然后用例如至少10倍柱体积的20mM琥珀酸钠，pH 5洗涤。缀合物可以用缓冲液如PBS适当地洗脱。
实施例31HEK报告子测定
表达人TLR7或人TLR8的HEK293报告细胞购自Invivogen，并遵循供应商方案进行细胞繁殖和实验。简而言之，使细胞在5％CO2下在补充有10％FBS、博莱霉素(Zeocin)和杀稻瘟素(Blasticidin)的DMEM中生长至80-85％汇合。然后将细胞以4×104个细胞/孔接种在96孔平板中，其中基质含有HEK检测介质和免疫刺激分子。使用酶标仪在620-655nm波长下测量活性。
实施例32体外免疫缀合物活性的评定
该实施例表明本发明的免疫缀合物在引发骨髓活化方面是有效的，并且因此可用于治疗癌症。
人抗原呈递细胞的分离：通过使用含有针对CD14、CD16、CD40、CD86、CD123和HLA-DR的单克隆抗体的ROSETTESEPTM人单核细胞富集混合物(Stem Cell Technologies,Vancouver,Canada)进行密度梯度离心，从自健康献血者(Stanford Blood Center,PaloAlto,California)获得的人外周血中负向选择人骨髓抗原呈递细胞(APC)。随后使用在没有CD16耗竭的情况下含有针对CD14、CD16、CD40、CD86、CD123和HLA-DR的单克隆抗体的EASYSEPTM人单核细胞富集试剂盒(Stem Cell Technologies)，通过负向选择将未成熟的APC纯化至>90％的纯度。
骨髓APC活化测定：将2×105个APC在96孔板(Corning,Corning,NY)中孵育，所述96孔板含有iscove改良杜氏培养基、补充有10％FBS的IMDM(Lonza)、100U/mL青霉素，100μg/mL(微克/毫升)链霉素、2mM L-谷氨酰胺、丙酮酸钠、非必需氨基酸以及在指明的情况下各种浓度的本发明的未缀合的(裸)PD-L1或HER2抗体和免疫缀合物(如根据上面的实施例制备的)。将曲妥珠单抗(抗HER2)和阿维鲁单抗(抗PD-L1)用作抗体构建体。18小时后通过ELISA分析细胞和无细胞上清液，以测量TNFα分泌作为促炎反应的示值读数(readout)。
本文所引用的所有参考文献、包括出版物、专利申请和专利据此以引用方式并入，其程度等同于每个参考文献单独地且具体地被指示为以引用方式并入本文并且以其全文在本文得以陈述。
序列表
<110> 博尔特生物治疗药物有限公司
<120> 氨基喹啉化合物、免疫缀合物及其用途
<130> 17019.003WO1
<140>
<141>
<150> 62/895,379
<151> 2019-09-03
<160> 135
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 1
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ser
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Leu Tyr Arg Ser
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 2
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 2
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 3
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 3
Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ser Val Ala
1 5 10
<210> 4
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 4
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 5
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 5
Trp Thr Ser Thr Arg His Thr
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 6
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
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Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 7
Gln Gln Tyr Ser Leu Tyr Arg Ser
1 5
<210> 8
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 8
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 9
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 9
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Asp Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Glu Ile His Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Ser Leu Tyr Phe Gly Phe Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Pro Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 10
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 10
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Asp Phe Thr
20 25 30
<210> 11
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 11
Thr Tyr Trp Met Ser
1 5
<210> 12
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 12
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 13
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 13
Glu Ile His Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 14
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 14
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe Leu Gln
1 5 10 15
Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Ala Ser
20 25 30
<210> 15
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 15
Leu Tyr Phe Gly Phe Pro Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 16
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 16
Trp Gly Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 17
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 17
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Ala Ala Val Gly Thr Tyr
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Lys Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 18
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 18
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 19
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 19
Lys Ala Ser Ala Ala Val Gly Thr Tyr Val Ala
1 5 10
<210> 20
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 20
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 21
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 21
Ser Ala Ser Tyr Arg Lys Arg
1 5
<210> 22
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 22
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 23
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 23
His Gln Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu Phe Thr
1 5 10
<210> 24
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 24
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 25
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 25
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 26
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 26
Glu Phe Gly Met Asn
1 5
<210> 27
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 27
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 28
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 28
Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 29
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 29
Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 30
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 30
Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 31
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 31
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 32
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 32
Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Asn Ile Ala Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 33
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 33
Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Asn Ile Ala Cys
20
<210> 34
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 34
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His
1 5 10
<210> 35
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 35
Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 36
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 36
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 37
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 37
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Met Gln Pro Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 38
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 38
Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 39
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 39
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 40
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 40
Gln Val Lys Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Ser
20 25 30
Tyr Met His Trp Leu Arg Gln Gly Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Ala Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gly Leu Ser Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Asn Glu Gly Thr Pro Thr Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 41
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 41
Gln Val Lys Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys
20 25 30
<210> 42
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 42
Asp Ser Tyr Met His
1 5
<210> 43
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 43
Trp Leu Arg Gln Gly Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 44
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 44
Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 45
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 45
Lys Ala Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Ala Asn Thr Ala Tyr Leu Gly
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Glu
20 25 30
<210> 46
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 46
Gly Thr Pro Thr Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 47
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 47
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 48
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 48
Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Ser Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ala Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Pro Tyr Met
20 25 30
His Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 49
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 49
Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Ser Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ala Cys
20
<210> 50
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 50
Ser Ala Ser Ser Ser Val Pro Tyr Met His
1 5 10
<210> 51
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 51
Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 52
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 52
Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 53
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 53
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 54
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 54
Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 55
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 55
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 56
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 56
Gln Val Lys Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Ser
20 25 30
Tyr Met His Trp Leu Arg Gln Gly Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Ala Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gly Leu Ser Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Asn Glu Gly Thr Pro Thr Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 57
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 57
Gln Val Lys Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys
20 25 30
<210> 58
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 58
Asp Ser Tyr Met His
1 5
<210> 59
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 59
Trp Leu Arg Gln Gly Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 60
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 60
Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 61
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 61
Lys Ala Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Ala Asn Thr Ala Tyr Leu Gly
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Glu
20 25 30
<210> 62
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 62
Gly Thr Pro Thr Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 63
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 63
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 64
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 64
Gln Thr Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys
20
<210> 65
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 65
Arg Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Ile His
1 5 10
<210> 66
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 66
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Ser Trp Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 67
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 67
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 68
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 68
Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 69
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 69
Gln His Trp Ser Ser Lys Pro Pro Thr
1 5
<210> 70
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 70
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 71
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 71
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Phe Ile Gly Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ser Gln Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Thr Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 72
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 72
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 73
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 73
Asp Tyr Tyr Met Asn
1 5
<210> 74
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 74
Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Gly
1 5 10
<210> 75
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 75
Phe Ile Gly Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 76
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 76
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ser Gln Ser Ile Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Thr Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Thr Arg
20 25 30
<210> 77
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 77
Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 78
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 78
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 79
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 79
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Gly Glu Ser Val Asp Ile Phe
20 25 30
Gly Val Gly Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 80
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 80
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 81
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 81
Arg Ala Gly Glu Ser Val Asp Ile Phe Gly Val Gly Phe Leu His
1 5 10 15
<210> 82
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 82
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 83
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 83
Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 84
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 84
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 85
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 85
Gln Gln Thr Asn Glu Asp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 86
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 86
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 87
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 87
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Pro Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 88
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 88
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys
20 25 30
<210> 89
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 89
Asp Thr Tyr Met His
1 5
<210> 90
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 90
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 91
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 91
Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Ser Lys Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 92
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 92
Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Pro
20 25 30
<210> 93
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 93
Phe Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Tyr Ala Met Ala Tyr
1 5 10
<210> 94
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 94
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 95
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 95
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Phe Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Thr Arg Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 96
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 96
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 97
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 97
Arg Ala Ser Glu Asn Ile Phe Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 98
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 98
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr
1 5 10 15
<210> 99
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 99
Asn Thr Arg Thr Leu Ala Glu
1 5
<210> 100
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 100
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 101
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 101
Gln His His Tyr Gly Thr Pro Phe Thr
1 5
<210> 102
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 102
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 103
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 103
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Arg Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ile Thr Tyr Ala Pro Ser Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala His Tyr Phe Gly Ser Ser Gly Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 104
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 104
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser
20 25 30
<210> 105
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 105
Ser Tyr Asp Met Ser
1 5
<210> 106
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 106
Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Arg Gly Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 107
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 107
Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ile Thr Tyr Ala Pro Ser Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 108
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 108
Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala
20 25 30
<210> 109
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 109
His Tyr Phe Gly Ser Ser Gly Pro Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 110
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 111
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 111
Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Ala Ser Leu Thr Cys Thr Leu Arg Arg Gly Ile Asn Val Gly Ala
20 25 30
Tyr Ser Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Pro Pro Gln Tyr
35 40 45
Leu Leu Arg Tyr Lys Ser Asp Ser Asp Lys Gln Gln Gly Ser Gly Val
50 55 60
Ser Ser Arg Phe Ser Ala Ser Lys Asp Ala Ser Ala Asn Ala Gly Ile
65 70 75 80
Leu Leu Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
85 90 95
Met Ile Trp His Ser Gly Ala Ser Ala Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys
100 105 110
Leu Thr Val Leu
115
<210> 112
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 112
Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Ala Ser Leu Thr Cys
20
<210> 113
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 113
Thr Leu Arg Arg Gly Ile Asn Val Gly Ala Tyr Ser Ile Tyr
1 5 10
<210> 114
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 114
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Pro Pro Gln Tyr Leu Leu Arg
1 5 10 15
<210> 115
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 115
Tyr Lys Ser Asp Ser Asp Lys Gln Gln Gly Ser
1 5 10
<210> 116
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 116
Gly Val Ser Ser Arg Phe Ser Ala Ser Lys Asp Ala Ser Ala Asn Ala
1 5 10 15
Gly Ile Leu Leu Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr
20 25 30
Tyr Cys
<210> 117
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 117
Met Ile Trp His Ser Gly Ala Ser Ala Val
1 5 10
<210> 118
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 118
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
1 5 10
<210> 119
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 119
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 120
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 120
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser
20 25 30
<210> 121
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 121
Ser Tyr Trp Met His
1 5
<210> 122
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 122
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly
1 5 10
<210> 123
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 123
Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 124
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 124
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 125
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 125
Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 126
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 126
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 127
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 127
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Phe Ile Leu Asn Lys Ala Asn Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 128
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 128
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser
20 25 30
<210> 129
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 129
Ser Tyr Trp Met His
1 5
<210> 130
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 130
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly
1 5 10
<210> 131
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 131
Phe Ile Leu Asn Lys Ala Asn Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 132
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
多肽”
<400> 132
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 133
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 133
Asp Arg Gly Leu Arg Phe Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 134
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 134
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 135
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释=“人工序列的描述：合成
肽”
<400> 135
Gly Gly Gly Gly Ser Ser Ser Ser Gly
1 5

Claims (66)

1.一种免疫缀合物，其包含共价连接至二价接头的抗体，所述二价接头共价连接至一个或多个氨基喹啉部分，并且所述免疫缀合物具有式I：
Ab-[L-AQlp I
或其药学上可接受的盐，其中：
Ab是所述抗体；
AQ是具有式II的所述氨基喹啉部分：
Figure FDA0003603486120000011
其中R1、R2和R3中的一者连接至L；
R1选自由以下组成的组：
C1-C8烷基；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)C(＝O)R5；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)C(＝O)OR5；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)C(＝O)N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C2-C6烯基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C2-C6烯基二基)-N(R5)2；
-(C2-C6烯基二基)-NR5-*；
-(C2-C6炔基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C2-C6炔基二基)-N(R5)2；
-(C2-C6炔基二基)-NR5-*；
-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C1-C20杂芳基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
R2选自由以下组成的组：
H；
C1-C8烷基；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)N(R5)-*；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)C(NR5)＝N-*；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)C(＝O)R5；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)C(＝O)OR5；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)C(＝O)N(R5)2；
-(C2-C6烯基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C2-C6烯基二基)-N(R5)2；
-(C2-C6烯基二基)-NR5-*；
-(C2-C6炔基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C2-C6炔基二基)-N(R5)2；
-(C2-C6炔基二基)-NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-(C2-C20杂环基二基)；
-(C1-C12烷基二基)-(C1-C20杂芳基二基)；
-(C1-C12烷基二基)-(C6-C20芳基二基)；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
R4选自由以下组成的组：C6-C20芳基和C1-C8烷基；
R5选自由以下组成的组：H和C1-C8烷基；
或两个R5基团形成5元或6元杂环基环；并且
R3选自由以下组成的组：H、-C(＝O)NR5R6、和苯基，其中苯基被选自由以下组成的组的一个或多个取代基取代：F、Cl、Br、I、-CN、-CH3、-CF3、-CO2H、-NH2、-NHCH3、-NO2、-OH、-OCH3、-SCH3、-S(O)2CH3、-S(O)3H、和R7；
R6独立地选自由以下组成的组：
H；
C1-C8烷基；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C2-C20杂环基)；
-(C2-C20杂环基二基)-*；
-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
--(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH；
-(C1-C20杂芳基二基)-(C2-C20杂环基二基)-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C1-C20杂芳基二基)-NR5-*；
-(C1-C20杂芳基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；以及
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH；
R7选自由以下组成的组：
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-C(＝O)-*；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基)；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基二基)-*；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳基二基)-(C2-C20杂环基二基)-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳基二基)-NR5-*；
-C(＝O)N(R5)2；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-NR5-*；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)N(R5)2；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)C(NR5)＝N-*；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；和
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH；
其中*表示L的连接点；
L是选自由以下组成的组的接头：
-C(＝O)-(PEG)-C(＝O)-(PEP)-；
-C(＝O)-(PEG)-NR5-；
-C(＝O)-(PEG)-NR5-(PEG)-C(＝O)-(PEP)-；
-C(＝O)-(PEG)-N+(R5)2-(PEG)-C(＝O)-(PEP)-；
-C(＝O)-(PEG)-C(＝O)-；
-C(＝O)-(PEG)-C(＝O)NR5CH(AA1)C(＝O)-；
-C(＝O)-(PEG)-NR5CH(AA1)C(＝O)-(PEG)-C(＝O)-(PEP)-；
-C(＝O)-(PEG)-SS-(C1-C12烷基二基)-OC(＝O)-；
-C(＝O)-(PEG)-SS-(C1-C12烷基二基)-C(＝O)-；
-C(＝O)-(PEG)-；
-C(＝O)-(C1-C12烷基二基)-C(＝O)-(PEP)-；
-C(＝O)-CH2CH2OCH2CH2-(C1-C20杂芳基二基)-CH2O-(PEG)-C(＝O)-(MCgluc)-；和
-(琥珀酰亚胺基)-(CH2)m-C(＝O)-(PEP)-；
其中
PEG具有下式：
-(CH2CH2O)n-(CH2)m-；m为1至5的整数，并且n为2至50的整数；
PEP具有下式：
Figure FDA0003603486120000071
其中AA1和AA2独立地选自氨基酸侧链，或AA1或AA2与相邻的氮原子形成5元环脯氨酸氨基酸，并且波浪线表示连接点并且；
R8选自被-CH2O-C(＝O)-取代，并且任选地被以下基团取代的C6-C20芳基二基和C1-C20杂芳基二基：
Figure FDA0003603486120000081
并且
MCgluc选自以下基团：
Figure FDA0003603486120000082
其中n为1至8，并且AA为氨基酸侧链；
其中烷基、烷基二基、芳基、芳基二基碳环基、碳环基二基、杂环基、杂环基二基、杂芳基和杂芳基二基任选地被一个或多个独立地选自以下的基团取代：F、Cl、Br、I、-CN、-CH3、-CH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH2OH、-CH2OCH3、-CH2CH2OH、-C(CH3)2OH、-CH(OH)CH(CH3)2、-C(CH3)2CH2OH、-CH2CH2SO2CH3、-CH2OP(O)(OH)2、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH(CH3)CN、-C(CH3)2CN、-CH2CN、-CH2NH2、-CH2NHSO2CH3、-CH2NHCH3、-CH2N(CH3)2、-CO2H、-COCH3、-CO2CH3、-CO2C(CH3)3、-COCH(OH)CH3、-CONH2、-CONHCH3、-CON(CH3)2、-C(CH3)2CONH2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCOCH3、-N(CH3)COCH3、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(CH3)2CONH2、-N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3、-NO2、＝O、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2OCH3、-OCH2CH2OH、-OCH2CH2N(CH3)2、-O(CH2CH2O)n-(CH2)mCO2H、-O(CH2CH2O)nH、-OP(O)(OH)2、-S(O)2N(CH3)2、-SCH3、-S(O)2CH3、和-S(O)3H；并且
p为1至8的整数。
2.如权利要求1所述的免疫缀合物，其中所述抗体是具有结合PD-L1的抗原结合结构域的抗体构建体。
3.如权利要求2所述的免疫缀合物，其中所述抗体选自由以下组成的组：阿特珠单抗、度伐利尤单抗和阿维鲁单抗，或它们的生物仿制药或改良型生物相似性药物。
4.如权利要求1所述的免疫缀合物，其中所述抗体是具有结合HER2的抗原结合结构域的抗体构建体。
5.如权利要求4所述的免疫缀合物，其中所述抗体选自由以下组成的组：曲妥珠单抗和帕妥珠单抗，或它们的生物仿制药或改良型生物相似性药物。
6.如权利要求1所述的免疫缀合物，其中所述抗体是具有结合CEA的抗原结合结构域的抗体构建体。
7.如权利要求6所述的免疫缀合物，其中所述抗体是拉贝珠单抗或其生物仿制药或改良型生物相似性药物。
8.如权利要求1至7中任一项所述的免疫缀合物，其中PEP具有下式：
Figure FDA0003603486120000101
其中AA1和AA2独立地选自天然存在的氨基酸的侧链。
9.如权利要求1至7中任一项所述的免疫缀合物，其中AA1或AA2与相邻氮原子形成5元环脯氨酸氨基酸。
10.如权利要求1至7中任一项所述的免疫缀合物，其中PEP具有下式：
Figure FDA0003603486120000102
11.如权利要求1至7中任一项所述的免疫缀合物，其中MCgluc具有下式：
Figure FDA0003603486120000103
12.如权利要求1至7中任一项所述的免疫缀合物，其中AA1和AA2独立地选自天然存在的氨基酸的侧链。
13.如权利要求1至7中任一项所述的免疫缀合物，其中AA1和AA2独立地选自H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2(C6H5)、-CH2CH2CH2CH2NH2、-CH2CH2CH2NHC(NH)NH2、-CHCH(CH3)CH3、-CH2SO3H、和-CH2CH2CH2NHC(O)NH2。
14.如权利要求13所述的免疫缀合物，其中AA1是-CH(CH3)2，并且AA2是-CH2CH2CH2NHC(O)NH2。
15.如权利要求1至7中任一项所述的免疫缀合物，其中AA1和AA2独立地选自GlcNAc天冬氨酸、-CH2SO3H、和-CH2OPO3H。
16.如权利要求1至7中任一项所述的免疫缀合物，其中R1连接至L。
17.如权利要求1至7中任一项所述的免疫缀合物，其中R2连接至L。
18.如权利要求1至7中任一项所述的免疫缀合物，其中R3连接至L。
19.如权利要求1至7中任一项所述的免疫缀合物，其中R1选自由以下组成的组：
C1-C8烷基；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；和
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*。
20.如权利要求1至7中任一项所述的免疫缀合物，其中R2选自由以下组成的组：
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；和
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*。
21.如权利要求1至7中任一项所述的免疫缀合物，其中R6选自由以下组成的组：
C1-C8烷基；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*。
22.如权利要求1至7中任一项所述的免疫缀合物，其中R6选自由以下组成的组：
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；以及
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH。
23.如权利要求1至7中任一项所述的免疫缀合物，其中R7选自由以下组成的组：
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)N(R5)2；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；和
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH。
24.如权利要求1至7中任一项所述的免疫缀合物，其中L选自由以下组成的组：
-C(＝O)-(PEG)-C(＝O)-(PEP)-；
-C(＝O)-(PEG)-NR5-；
-C(＝O)-(PEG)-C(＝O)-；和
-C(＝O)-(PEG)-。
25.如权利要求1至7中任一项所述的免疫缀合物，其中AQ选自式IIa：
Figure FDA0003603486120000131
26.如权利要求1至7中任一项所述的免疫缀合物，其中AQ选自式IIb：
Figure FDA0003603486120000141
27.如权利要求1至7中任一项所述的免疫缀合物，其中AQ选自式IIc：
Figure FDA0003603486120000142
28.一种选自表3的免疫缀合物。
29.一种式III的氨基喹啉-接头化合物：
Figure FDA0003603486120000143
其中R1、R2和R3中的一者连接至L；
R1选自由以下组成的组：
C1-C8烷基；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)C(＝O)R5；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)C(＝O)OR5；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)C(＝O)N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C2-C6烯基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C2-C6烯基二基)-N(R5)2；
-(C2-C6烯基二基)-NR5-*；
-(C2-C6炔基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C2-C6炔基二基)-N(R5)2；
-(C2-C6炔基二基)-NR5-*；
-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C1-C20杂芳基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
R2选自由以下组成的组：
H；
C1-C8烷基；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)N(R5)-*；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)C(NR5)＝N-*；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)C(＝O)R5；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)C(＝O)OR5；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)C(＝O)N(R5)2；
-(C2-C6烯基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C2-C6烯基二基)-N(R5)2；
-(C2-C6烯基二基)-NR5-*；
-(C2-C6炔基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C2-C6炔基二基)-N(R5)2；
-(C2-C6炔基二基)-NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-(C2-C20杂环基二基)；
-(C1-C12烷基二基)-(C1-C20杂芳基二基)；
-(C1-C12烷基二基)-(C6-C20芳基二基)；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
R4选自由以下组成的组：C6-C20芳基和C1-C8烷基；
R5选自由以下组成的组：H和C1-C8烷基；
或两个R5基团形成5元或6元杂环基环；并且
R3选自由以下组成的组：H、-C(＝O)NR5R6、和苯基，其中苯基被选自由以下组成的组的一个或多个取代基取代：F、Cl、Br、I、-CN、-CH3、-CF3、-CO2H、-NH2、-NHCH3、-NO2、-OH、-OCH3、-SCH3、-S(O)2CH3、-S(O)3H、和R7；
R6独立地选自由以下组成的组：
H；
C1-C8烷基；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C2-C20杂环基)；
-(C2-C20杂环基二基)-*；
-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
--(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH；
-(C1-C20杂芳基二基)-(C2-C20杂环基二基)-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C1-C20杂芳基二基)-NR5-*；
-(C1-C20杂芳基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；以及
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH；
R7选自由以下组成的组：
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-C(＝O)-*；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基)；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基二基)-*；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-C(＝O)-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳基二基)-(C2-C20杂环基二基)-C(＝O)NR5-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳基二基)-NR5-*；
-C(＝O)N(R5)2；
-C(＝O)NR5-(C1-C20杂芳基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-NR5-*；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)N(R5)2；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；和
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH；
其中*表示L的连接点；
L是选自由以下组成的组的接头：
-(PEP)-C(＝O)-(PEG)-C(＝O)-Q；
-NR5-(PEG)-C(＝O)-Q；
-(PEP)-C(＝O)-(PEG)-NR5-(PEG)-C(＝O)-Q；
-(PEP)-C(＝O)-(PEG)-N+(R5)2-(PEG)-C(＝O)-Q；
-C(＝O)-(PEG)-C(＝O)-Q；
-C(＝O)-CH(AA1)-NR5-C(＝O)-(PEG)-C(＝O)-Q；
-(PEP)-C(＝O)-(PEG)-C(＝O)-CH(AA1)-NR5-(PEG)-C(＝O)-Q；
-C(＝O)O-(C1-C12烷基二基)-SS-(PEG)-C(＝O)-Q；
-C(＝O)-(C1-C12烷基二基)-SS-(PEG)-C(＝O)-Q；
-(PEG)-C(＝O)-Q；
-(PEP)-C(＝O)-(C1-C12烷基二基)-C(＝O)-Q；
-(MCgluc)-(C(＝O)-(PEG)-OCH2-(C1-C20杂芳基二基)-CH2CH2OCH2CH2-C(＝O)-Q；
-(PEP)-C(＝O)-(CH2)m-C(＝O)-Q；和
-(PEP)-C(＝O)-(CH2)m-Q；
其中
PEG具有下式：
-(CH2CH2O)n-(CH2)m-；m为1至5的整数，并且n为2至50的整数；
PEP具有下式：
Figure FDA0003603486120000211
其中AA1和AA2独立地选自氨基酸侧链，或AA1或AA2与相邻的氮原子形成5元环脯氨酸氨基酸，并且波浪线表示连接点并且；
R8选自被-CH2O-C(＝O)-取代，并且任选地被以下基团取代的C6-C20芳基二基和C1-C20杂芳基二基：
Figure FDA0003603486120000212
并且
MCgluc选自以下基团：
Figure FDA0003603486120000213
其中n为1至8，并且AA为氨基酸侧链；并且
Q选自由以下组成的组：N-羟基琥珀酰亚胺基、N-羟基磺基琥珀酰亚胺基、马来酰亚胺和被一个或多个独立地选自F、Cl、NO2和SO3 -的基团取代的苯氧基；
其中烷基、烷基二基、芳基、芳基二基碳环基、碳环基二基、杂环基、杂环基二基、杂芳基和杂芳基二基任选地被一个或多个独立地选自以下的基团取代：F、Cl、Br、I、-CN、-CH3、-CH2CH3、-CH＝CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH2OH、-CH2OCH3、-CH2CH2OH、-C(CH3)2OH、-CH(OH)CH(CH3)2、-C(CH3)2CH2OH、-CH2CH2SO2CH3、-CH2OP(O)(OH)2、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH(CH3)CN、-C(CH3)2CN、-CH2CN、-CH2NH2、-CH2NHSO2CH3、-CH2NHCH3、-CH2N(CH3)2、-CO2H、-COCH3、-CO2CH3、-CO2C(CH3)3、-COCH(OH)CH3、-CONH2、-CONHCH3、-CON(CH3)2、-C(CH3)2CONH2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCOCH3、-N(CH3)COCH3、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(CH3)2CONH2、-N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3、-NO2、＝O、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2OCH3、-OCH2CH2OH、-OCH2CH2N(CH3)2、-O(CH2CH2O)n-(CH2)mCO2H、-O(CH2CH2O)nH、-OP(O)(OH)2、-S(O)2N(CH3)2、-SCH3、-S(O)2CH3、和-S(O)3H。
30.如权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物，其中PEP具有下式：
Figure FDA0003603486120000221
其中AA1和AA2独立地选自天然存在的氨基酸的侧链。
31.如权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物，其中AA1或AA2与相邻氮原子形成5元环以形成脯氨酸氨基酸。
32.如权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物，其中PEP具有下式：
Figure FDA0003603486120000231
33.如权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物，其中MCgluc具有下式：
Figure FDA0003603486120000232
34.如权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物，其中AA1和AA2独立地选自天然存在的氨基酸的侧链。
35.如权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物，其中AA1和AA2独立地选自H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2(C6H5)、-CH2CH2CH2CH2NH2、-CH2CH2CH2NHC(NH)NH2、-CHCH(CH3)CH3、-CH2SO3H、和-CH2CH2CH2NHC(O)NH2。
36.如权利要求35所述的氨基喹啉-接头化合物，其中AA1是-CH(CH3)2，并且AA2是-CH2CH2CH2NHC(O)NH2。
37.如权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物，其中AA1和AA2独立地选自GlcNAc天冬氨酸、-CH2SO3H、和-CH2OPO3H。
38.如权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物，其中R1连接至L。
39.如权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物，其中R2连接至L。
40.如权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物，其中R3连接至L。
41.如权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物，其中R1选自由以下组成的组：
C1-C8烷基；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；和
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*。
42.如权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物，其中R2选自由以下组成的组：
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；和
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*。
43.如权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物，其中R6选自由以下组成的组：
C1-C8烷基；
-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；
-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*。
44.如权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物，其中R6选自由以下组成的组：
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；以及
-(C6-C20芳基二基)-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH。
45.如权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物，其中R7选自由以下组成的组：
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)N(R5)2；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5C(＝NR4)NR5-*；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-N(R5)2；
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-NR5-*；和
-S(＝O)2-(C2-C20杂环基二基)-(C1-C12烷基二基)-OH。
46.如权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物，其中L选自由以下组成的组：
-(PEP)-C(＝O)-(PEG)-C(＝O)-Q；
-NR5-(PEG)-C(＝O)-Q；
-C(＝O)-(PEG)-C(＝O)-Q；和
-(PEG)-C(＝O)-Q。
47.如权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物，其中Q是被一个或多个F取代的苯氧基。
48.如权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物，其中Q是2,3,5,6-四氟苯氧基。
49.如权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物，其中AQ选自式IIIa：
Figure FDA0003603486120000261
50.如权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物，其中AQ选自式IIIb：
Figure FDA0003603486120000262
51.如权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物，其中AQ选自式IIIc：
Figure FDA0003603486120000271
52.如权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物，所述氨基喹啉-接头化合物选自表1。
53.一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的根据权利要求1至7中任一项所述的免疫缀合物。
54.如权利要求53所述的方法，其中所述癌症易受由TLR7和/或TLR8激动诱导的促炎反应影响。
55.如权利要求53所述的方法，其中所述癌症是表达PD-L1的癌症。
56.如权利要求53所述的方法，其中所述癌症是表达HER2的癌症。
57.如权利要求53所述的方法，其中所述癌症是表达CEA的癌症。
58.如权利要求53-57中任一项所述的方法，其中所述癌症选自膀胱癌、尿路癌、尿路上皮癌、肺癌、非小细胞肺癌、默克尔细胞癌、结肠癌、结直肠癌、胃癌、和乳腺癌。
59.如权利要求58所述的方法，其中所述乳腺癌为三阴性乳腺癌。
60.如权利要求58所述的方法，其中所述默克尔细胞癌是转移性默克尔细胞癌。
61.如权利要求58所述的方法，其中所述癌症是过表达HER2的胃癌。
62.如权利要求58所述的方法，其中所述癌症是胃食管连接部腺癌。
63.根据权利要求1至7中任一项所述的免疫缀合物用于治疗癌症的用途。
64.一种制备权利要求1所述的式I的免疫缀合物的方法，其中使权利要求29所述的式III的氨基喹啉-接头化合物与所述抗体缀合。
65.一种权利要求1所述的免疫缀合物，所述免疫缀合物是通过将抗体与权利要求29所述的氨基喹啉-接头化合物缀合来制备的。
66.一种权利要求1所述的免疫缀合物，所述免疫缀合物是通过将抗体与表2的氨基喹啉-接头化合物缀合来制备的。
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