CN114533731B

CN114533731B - 一种氨基吡啶衍生物在制备肌肉萎缩抑制剂中的应用

Info

Publication number: CN114533731B
Application number: CN202210175272.XA
Authority: CN
Inventors: 肖俊杰; 许斌; 李进; 高明春
Original assignee: University of Shanghai for Science and Technology
Current assignee: University of Shanghai for Science and Technology
Priority date: 2022-02-25
Filing date: 2022-02-25
Publication date: 2024-06-04
Anticipated expiration: 2042-02-25
Also published as: CN114533731A

Abstract

本发明提供了一种氨基吡啶衍生物在制备肌肉萎缩抑制剂中的应用，属于药物化学技术领域。在本发明中，所述氨基吡啶衍生物记为化合物SHU00066，化学名称为2‑(4‑氯苯基)‑N‑(吡啶‑2‑基)‑乙酰胺，其含有2‑氨基吡啶骨架，对于肌肉萎缩具有显著的防治效果。实施例的结果显示，所述化合物SHU00066对于血管紧张素II、地塞米松或肿瘤坏死因子‑α诱导的肌肉萎缩具有显著的抑制作用，尤其是对于血管紧张素II诱导的肌肉萎缩具有优异的抑制作用。

Description

一种氨基吡啶衍生物在制备肌肉萎缩抑制剂中的应用

技术领域

本发明涉及药物化学技术领域，尤其涉及一种氨基吡啶衍生物在制备肌肉萎缩抑制剂中的应用。

背景技术

肌肉萎缩可由多种因素引起，其中，心力衰竭患者会由于血管紧张素II(AngII)的上调导致肌肉萎缩，运动训练是治疗心力衰竭引起的肌肉萎缩的唯一方法，而心力衰竭患者运动能力降低，限制了运动疗法的运用，因此亟需揭示运动保护心力衰竭引起的肌肉萎缩的关键效应因子。

肌肉萎缩是当前国际上医学界的难题，其病因还不十分清楚，并且无特效药治疗。有研究指出由于中枢神经元退化，导致肌肉萎缩的进行性麻痹，可使用基因工程药物治疗，激活退化中枢神经元，恢复肌肉功能，但是基因工程药物属高新技术，价格较高，工业化生产有待进一步改进提高。申请人前期的研究发现miR-29b是防治肌肉萎缩的共同靶点，抑制miR-29b可以防治肌肉萎缩的发生。目前市场上miRNA的抑制剂主要是序列互补的经过特殊修饰的寡核苷酸，其应用上主要存在以下困难：结构复杂，难以合成、分离和结构优化；性能上对立体构型的依赖性较高，易被外界条件所影响，保存和运输成本较高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种氨基吡啶衍生物在制备肌肉萎缩抑制剂中的应用，本发明中所述氨基吡啶衍生物对于肌肉萎缩具有显著的防治效果。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种氨基吡啶衍生物在制备肌肉萎缩抑制剂中的应用，所述氨基吡啶衍生物具有式I所示结构：

优选地，所述肌肉萎缩包括血管紧张素II、地塞米松或肿瘤坏死因子-α诱导的肌肉萎缩。

优选地，所述肌肉萎缩抑制剂包括有效成分和药学上可接受的载体，所述有效成分为具有式I所示结构的氨基吡啶衍生物。

优选地，所述肌肉萎缩抑制剂中有效成分的质量含量为70～90％。

优选地，所述药学上可接受的载体包括β-环糊精或牛血清白蛋白。

优选地，所述肌肉萎缩抑制剂的剂型包括注射剂、片剂或胶囊剂。

本发明提供了一种氨基吡啶衍生物在制备肌肉萎缩抑制剂中的应用，在本发明中，所述氨基吡啶衍生物记为化合物SHU00066，化学名称为2-(4-氯苯基)-N-(吡啶-2-基)-乙酰胺，其含有2-氨基吡啶骨架，对于肌肉萎缩具有显著的防治效果。实施例的结果显示，所述化合物SHU00066对于血管紧张素II、地塞米松或肿瘤坏死因子-α诱导的肌肉萎缩具有显著的抑制作用，尤其是对于血管紧张素II诱导的肌肉萎缩具有优异的抑制作用。

此外，本发明所述化合物SHU00066结构简单，合成步骤简单、成本易控、结构性能容易优化，口服性好，有较好的成药优势和市场前景。

附图说明

图1为细胞水平检测SHU00066对血管紧张素II诱导的C2C12肌肉萎缩模型的影响图，n＝4；***，P<0.001；

图2为细胞水平检测SHU00066对地塞米松诱导的C2C12肌肉萎缩模型的影响图；n＝4，***，P<0.001；

图3为细胞水平检测SHU00066对肿瘤坏死因子-α诱导的C2C12肌肉萎缩模型的影响图，n＝4，***，P<0.001；

图4为动物水平检测SHU00066对血管紧张素II诱导的C2C12肌肉萎缩模型的影响图，(A)为小鼠抓力结果，(B)为腓肠肌重量结果，(C)和(D)为小鼠腓肠肌肌纤维横截面积结果，n＝8；*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001。

具体实施方式

本发明通过miR-29b功能逆转实验，发现上调miR-29b能够显著抑制运动对AngII诱导的肌肉萎缩的保护功能，表明miR-29b是介导运动对AngII诱导的肌肉萎缩的保护功能的重要效应因子，并且通过细胞实验验证，筛选出了一种小分子化合物SHU00066，即式I所示氨基吡啶衍生物，其能有效抑制AngII诱导的肌肉萎缩。实施例中通过构建AngII诱导的C2C12肌肉萎缩模型，利用qPCR实验证实了化合物SHU00066对肌肉萎缩的抑制作用。而且，本发明所述化合物SHU00066还对地塞米松(Dex)或肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的肌肉萎缩具有显著的抑制作用。

在本发明中，所述肌肉萎缩抑制剂优选包括有效成分和药学上可接受的载体，所述有效成分为具有式I所示结构的氨基吡啶衍生物。在本发明中，所述肌肉萎缩抑制剂中有效成分的质量含量优选为70～90％，更优选为80～85％。

在本发明中，所述药学上可接受的载体优选包括β-环糊精或牛血清白蛋白。

在本发明中，所述肌肉萎缩抑制剂的剂型优选包括注射剂、片剂或胶囊剂。

下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1化合物SHU00066的制备

将2-(4-氯苯基)乙酸(853mg，5mmol)和二环己基碳化酰亚胺(1.24g，6mmol)溶解于二氯甲烷(6mL)中后，在室温(25℃)条件下加入2-氨基吡啶(564.7mg，6mmol)进行反应(采用TLC监测反应进程，至原料反应完全结束反应)；反应结束后，将所得产物体系进行过滤，将所得滤液旋蒸去除溶剂，将剩余物进行柱层析分离(按体积比计，所用试剂为石油醚：乙酸乙酯＝8：1)，最终得到黄色固体，即为化合物SHU00066，化学名称为2-(4-氯苯基)-N-(吡啶-2-基)-乙酰胺(1.14g，93％)。

核磁数据为：¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ8.23(ddd,J＝4.9,1.9,0.9Hz,1H),8.20(d,J＝8.3Hz,1H),7.98(s,1H),7.73–7.67(m,1H),7.39–7.32(m,2H),7.30–7.25(m,2H),7.03(ddd,J＝7.3,4.9,1.0Hz,1H),3.72(s,2H)；核磁数据与文献报道一致，说明制备得到的化合物具有式I所示结构。

实施例2化合物SHU00066的功能验证

1、血管紧张素II(AngII)诱导的C2C12肌肉萎缩模型与药物处理

C2C12成肌细胞于24孔培养板中培养，2％马血清分化培养基培养4天，诱导C2C12细胞分化成肌管，用2％马血清分化培养基加AngII(0.5μM)与SHU00066(30μM)避光处理细胞48h；48h后，24孔板中细胞用PBS洗2次，用4％PFA固定20min，之后用PBS洗3次，0.5％Triton破膜处理15min，5％BSA封闭2h，MF-20抗体(1:100)孵育4℃过夜。第二天用PBS洗3次，Alexa-488鼠二抗(1:100)孵育2h，PBS洗3次，加入DAPI孵育10min，之后用PBS洗3次，荧光显微镜拍照，利用Image J软件统计至少100个肌管的平均面积。

结果如图1所示，经AngII处理后，化合物SHU00066组肌管直径分别相对于对照组均增长，证明化合物SHU00066能有效抑制AngII诱导的肌肉萎缩。

2、地塞米松(Dex)诱导的C2C12肌肉萎缩模型与药物处理

C2C12成肌细胞于24孔培养板中培养，2％马血清分化培养基培养4天，诱导C2C12细胞分化成肌管，用2％马血清分化培养基加Dex(50μM)与SHU00066(30μM)避光处理细胞48h；48h后，24孔板中细胞用PBS洗2次，用4％PFA固定20min，之后用PBS洗3次，0.5％Triton破膜处理15min，5％BSA封闭2h，MF-20抗体(1:100)孵育4℃过夜。第二天用PBS洗3次，Alexa-488鼠二抗(1:100)孵育2h，PBS洗3次，加入DAPI孵育10min，之后用PBS洗3次，荧光显微镜拍照，利用Image J软件统计至少100个肌管的平均面积。

结果如图2所示，经Dex处理后，化合物SHU00066组肌管直径分别相对于对照组均增长，证明化合物SHU00066能有效抑制Dex诱导的肌肉萎缩。

3、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的C2C12肌肉萎缩模型与药物处理

C2C12成肌细胞于24孔培养板中培养，2％马血清分化培养基培养4天，诱导C2C12细胞分化成肌管，用2％马血清分化培养基加TNF-α(100ng/mL)与SHU00066(30μM)避光处理细胞48h；48h后，24孔板中细胞用PBS洗2次，用4％PFA固定20min，之后用PBS洗3次，0.5％Triton破膜处理15min，5％BSA封闭2h，MF-20抗体(1:100)孵育4℃过夜。第二天用PBS洗3次，Alexa-488鼠二抗(1:100)孵育2h，PBS洗3次，加入DAPI孵育10min，之后用PBS洗3次，荧光显微镜拍照，利用Image J软件统计至少100个肌管的平均面积。

结果如图3所示，经TNF-α处理后，化合物SHU00066组肌管直径分别相对于对照组均增长，证明化合物SHU00066能有效抑制TNF-α诱导的肌肉萎缩。

4、血管紧张素II(AngII)诱导的肌肉萎缩动物模型与药物处理

SHU00066抑制剂溶剂配比：50％PBS+45％PEG300+5％DMSO；注射浓度：25mg/kg/day，腹腔注射，在注射7天后，对照组和运动组的小鼠皮下植入1周型AngII渗透压缓释泵。将血管紧张素II(Selleck，P1085)溶于含有1×PBS和1mM乙酸溶剂中并注入AngII渗透压泵，注意不要产生气泡。将装有AngII溶液的渗透压缓释泵(ALZET，model 2001)在小鼠背部开口，以与身体平行的方向皮下植入对照组和运动组小鼠体内，AngII泵在小鼠体内活化12h后以稳定剂量(1.5μg/kg/min)在小鼠体内释放。埋泵结束后，继续注射SHU00066抑制剂7天，总共注射SHU00066抑制剂14天。结果如图4所示，在AngII处理后，通过称重发现SHU00066组小鼠抓力增加(图4中的A)、腓肠肌质量增加(图4中的B)，分别通过麦胚凝集素(WGA)染色和苏木素-伊红(HE)染色发现SHU00066组小鼠腓肠肌肌纤维横截面积增加(图4中的C和D)。由以上结果可知，化合物SHU00066能够保护AngII诱导的动物肌肉萎缩。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种氨基吡啶衍生物在制备肌肉萎缩抑制剂中的应用，所述氨基吡啶衍生物具有式I所示结构：

式I；

所述肌肉萎缩为血管紧张素II、地塞米松或肿瘤坏死因子-α诱导的肌肉萎缩。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肌肉萎缩抑制剂包括有效成分和药学上可接受的载体，所述有效成分为具有式I所示结构的氨基吡啶衍生物。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述肌肉萎缩抑制剂中有效成分的质量含量为70~90%。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药学上可接受的载体选自β-环糊精或牛血清白蛋白。

5.根据权利要求1~4任一项所述的应用，其特征在于，所述肌肉萎缩抑制剂的剂型选自注射剂、片剂或胶囊剂。