CN114404307B - 一种精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体及其制备方法和应用，该微囊包裹体包括以下原料：复配精氨酸/赖氨酸多肽、甘油、聚甘油基非离子表面活性剂和葡聚糖，余量为水；其中，复配精氨酸/赖氨酸多肽包括红蝎毒素和芋螺毒素肽。该微囊包裹体采用聚甘油基非离子表面活性剂作为载体材料，使复配多肽可以自发地包裹在微囊双分子层中，从而形成高稳定的微囊包裹体结构，复配多肽能起到抗衰、抗皱和抗氧化的效果。该微囊包裹体的制备方法避免了传统脂质体制备所需的赋形剂和增塑剂添加，制备方法简单。该微囊包裹体能便利地稳定分散于不同类型护肤乳液、膏霜、洁面、精华、化妆水等化妆品基质中，制备成为化妆品或护肤品中应用。

Description

一种精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及微囊包裹体技术领域，具体涉及一种精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体及其制备方法和应用。

背景技术

微胶囊技术是指利用天然的或者合成的高分子材料包裹分散的固体微粒、液体或气体物质，形成一种具有半透性或密封囊膜的微小粒子的技术。其中包裹的过程称为微胶囊化，形成的微小粒子称为微胶囊。微胶囊有两个基本组分，包在微胶囊内的物质称为芯材，而外面的“壳”称为壁材。在微胶囊的制备过程中，壁材能使芯材与外界环境隔离，然后在适当条件下再把芯材释放出来。

传统制备微囊的技术有喷雾干燥法、超临界流体法、溶剂扩散法等。但是，喷雾干燥法制备微囊对温度有一定的要求，这会使一些对热敏感的药物发生结构改变，所以这将制约喷雾千燥法的应用范围。超临界流体法制备微囊虽然环保，可以避免有机溶剂的使用，但设备昂贵，参数控制与结构改造技术还未成熟，很难实现工业化大生产。溶剂扩散法制备微囊虽然工艺简便易空，但存在有机溶剂残留问题。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体，采用了聚甘油基非离子表面活性剂形成的类似传统脂质体的双层分子载体结构作为包裹材料包被复配精氨酸/赖氨酸多肽，使得精氨酸/赖氨酸多肽能被皮肤更好地吸收，显著提升渗透性；本发明的目的之二在于提供一种精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体，避免了传统脂质体制备所需的赋形剂和增塑剂添加，制备方法简单；本发明的目的之三在于提供一种精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体的应用，精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体具有良好的化妆品配方配伍性，用于化妆品或护肤品中不会破坏化妆品或护肤品的体系稳定。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体，包括以下按重量份数计的原料：

复配精氨酸/赖氨酸多肽0.002～0.01％、10～30％甘油、0.2～1.5％聚甘油基非离子表面活性剂、0.0001～0.1％的葡聚糖，余量为水；其中，复配精氨酸/赖氨酸多肽包括多肽A和多肽B，多肽A为红蝎毒素，多肽B为芋螺毒素肽。

进一步，所述聚甘油基非离子表面活性剂为聚甘油-10二异硬脂酸酯和/或聚甘油-10月桂酸酯。

再进一步，所述聚甘油基非离子表面活性剂为0.1～1％的聚甘油-10二异硬脂酸酯和0.1～0.5％的聚甘油-10月桂酸酯的组合物。

进一步，所述多肽A和所述多肽B的质量比为(3～9)：1。

再进一步，所述多肽A购自浙江湃肽生物有限公司，型号为ZPC-019S；所述多肽B购自浙江湃肽生物有限公司，型号为ZPC-018S。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现：

上述的精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体的制备方法，包括以下步骤：

1)将复配精氨酸/赖氨酸多肽与聚甘油-10二异硬脂酸酯、聚甘油-10月桂酸酯、甘油、葡聚糖充分搅拌溶解，得到均一的混合溶液。

2)将混合溶液进行包裹辅助处理，得到微囊包裹体水性混悬液，经过除杂后，得到精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体。

进一步，步骤2)中，所述包裹辅助处理为高压脉冲电场辅助、超声波辅助和自由扩散中的一种。优选为高压脉冲电场辅助。

再进一步，步骤2)中，所述包裹辅助处理为高压脉冲电场辅助，高压脉冲电场的技术参数为：场强为0.5kV/cm～2kV/cm、脉冲处理个数为10～60个、物料电导率为2000μS/cm～6000μS/cm。

本发明的目的之三采用如下技术方案实现：

上述的精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体的应用，所述精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体分散于不同类型护肤乳液、膏霜、洁面、精华、化妆水等化妆品基质中，制备成为化妆品或护肤品。

相比现有技术，本发明的有益效果在于：

(1)本发明的微囊包裹体采用聚甘油基非离子表面活性剂作为载体材料，该表面活性剂有亲水端和疏水端，亲水端自主朝外指向有机溶剂，疏水端朝内聚集增溶一部分水形成微囊体，使得该微囊体具有增溶多肽的能力，自主形成双分子层，使复配精氨酸/赖氨酸多肽可以自发地包裹在微囊双分子层中，从而形成高稳定的微囊包裹体结构，添加葡聚糖有助于包裹体的稳定。微囊包裹体中含有的复配精氨酸/赖氨酸多肽在分子机理方面能够分别作用于神经-肌肉传导途径中的突触前端和突触后端。多肽A(红蝎毒素)由26个肽组成的SNAP-25的C端的仿生肽，与SNAP-25蛋白竞争其在突触前端的SNARE复合物种的结合部位，从而高效竞争性抑制SNARE复合物的形成，减少乙酰胆碱(Ach)的释放，从而实现面部肌肉放松来达到淡纹效果。多肽B是一种生物模拟芋螺毒素的μ型芋螺毒素仿生肽，主要作用于神经突触后端，通过限制神经肌肉电流传导，自然地让面部肌肉放松，从而达到淡化皱纹的效果。

(2)本发明的微囊包裹体的制备方法为：采用了非离子表面活性剂形成的类似传统脂质体的双层分子载体结构，混匀后该组合物中的精氨酸/赖氨酸多肽能够自发地包裹于非离子表面活性剂形成的微囊双分子层中，避免了传统脂质体制备所需的赋形剂和增塑剂添加，制备方法简单。

(3)本发明的包裹辅助处理采用高压脉冲电场技术，有效提升了精氨酸/赖氨酸多肽在微囊包裹体中的包裹效率，囊泡型包裹体具有类似皮肤细胞双层磷脂结构类似的结构，使得复配精氨酸/赖氨酸多肽能被皮肤更好地吸收，显著提升渗透性。

(4)本发明的制精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体的平均粒径为100～200nm，复配精氨酸/赖氨酸多肽的平均包封率为10～40％，可便利地稳定分散于不同类型护肤乳液、膏霜、洁面、精华、化妆水等化妆品基质中，制备成为化妆品或护肤品中应用。

附图说明

图1为单一多肽和精氨酸/赖氨酸复配多肽对线虫运动的影响；

图2为单一多肽和精氨酸/赖氨酸复配多肽对兴奋处理后线虫运动的影响；

图3为超滤离心法的流程图。

具体实施方式

下面，结合附图以及具体实施方式，对本发明做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。

一种精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体，包括以下按重量份数计的原料：

复配精氨酸/赖氨酸多肽0.002～0.01％、10～30％甘油、0.1～1％的聚甘油-10二异硬脂酸酯、0.1～0.5％的聚甘油-10月桂酸酯和0.0001～0.1％的葡聚糖，余量为水；其中，复配精氨酸/赖氨酸多肽为质量比(3～9)：1的多肽A和多肽B，所述多肽A购自浙江湃肽生物有限公司，型号为ZPC-019S；所述多肽B购自浙江湃肽生物有限公司，型号为ZPC-018S。

多肽A(红蝎毒素)由26个肽组成的SNAP-25的C端的仿生肽，与SNAP-25蛋白竞争其在突触前端的SNARE复合物种的结合部位，从而高效竞争性抑制SNARE复合物的形成，减少乙酰胆碱(Ach)的释放，从而实现面部肌肉放松来达到淡纹效果，即时和长效改善皱纹功效突出。多肽B是一种生物模拟芋螺毒素的μ型芋螺毒素仿生肽(芋螺毒素肽)，主要作用于神经突触后端，通过限制神经肌肉电流传导，自然地让面部肌肉放松，从而达到淡化皱纹的效果。

实施例1

一种精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体，包括以下按重量份数计的原料：

0.002％复配精氨酸/赖氨酸多肽、10％甘油、0.1％的聚甘油-10二异硬脂酸酯、0.1％的聚甘油-10月桂酸酯和0.0001％的葡聚糖，余量为水；其中，复配精氨酸/赖氨酸多肽为质量比3：1的多肽A和多肽B，所述多肽A为红蝎毒素，购自浙江湃肽生物有限公司，型号为ZPC-019S；所述多肽B为芋螺毒素肽，购自浙江湃肽生物有限公司，型号为ZPC-018S。

上述的精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体的制备方法，包括以下步骤：

1)将复配精氨酸/赖氨酸多肽与聚甘油-10二异硬脂酸酯、聚甘油-10月桂酸酯、甘油、葡聚糖充分搅拌溶解，得到均一的混合溶液。

2)将混合溶液进行高压脉冲电场辅助处理，得到微囊包裹体水性混悬液，经过除杂后，得到精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体。其中，高压脉冲电场的技术参数为：场强为0.5kV/cm、脉冲处理个数为10个、物料电导率为2000μS/cm。

实施例2

一种精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体，包括以下按重量份数计的原料：

0.005％复配精氨酸/赖氨酸多肽、30％甘油、1％的聚甘油-10二异硬脂酸酯、0.5％的聚甘油-10月桂酸酯和0.1％的葡聚糖，余量为水；其中，复配精氨酸/赖氨酸多肽为质量比9：1的多肽A和多肽B，所述多肽A为红蝎毒素，购自浙江湃肽生物有限公司，型号为ZPC-019S；所述多肽B为芋螺毒素肽，购自浙江湃肽生物有限公司，型号为ZPC-018S。

上述的精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体的制备方法，包括以下步骤：

1)将复配精氨酸/赖氨酸多肽与聚甘油-10二异硬脂酸酯、聚甘油-10月桂酸酯、甘油、葡聚糖充分搅拌溶解，得到均一的混合溶液。

2)将混合溶液进行高压脉冲电场辅助处理，得到微囊包裹体水性混悬液，经过除杂后，得到精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体。其中，高压脉冲电场的技术参数为：场强为2kV/cm、脉冲处理个数为60个、物料电导率为6000μS/cm。

实施例3

一种精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体，包括以下按重量份数计的原料：

0.01％复配精氨酸/赖氨酸多肽、20％甘油、0.5％的聚甘油-10二异硬脂酸酯、0.2％的聚甘油-10月桂酸酯和0.005％的葡聚糖，余量为水；其中，复配精氨酸/赖氨酸多肽为质量比5：1的多肽A和多肽B，所述多肽A为红蝎毒素，购自浙江湃肽生物有限公司，型号为ZPC-019S；所述多肽B为芋螺毒素肽，购自浙江湃肽生物有限公司，型号为ZPC-018S。

上述的精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体的制备方法，包括以下步骤：

1)将复配精氨酸/赖氨酸多肽与聚甘油-10二异硬脂酸酯、聚甘油-10月桂酸酯、甘油、葡聚糖充分搅拌溶解，得到均一的混合溶液。

2)将混合溶液进行高压脉冲电场辅助处理，得到微囊包裹体水性混悬液，经过除杂后，得到精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体。其中，高压脉冲电场的技术参数为：场强为1kV/cm、脉冲处理个数为40个、物料电导率为5000μS/cm。

实施例4

实施例4与实施例3的不同之处在于：实施例4的步骤2)中，将混合溶液进行超声波辅助处理，得到微囊包裹体水性混悬液，经过除杂后，得到精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体。其中，超声波辅助处理的温度为40℃，超声功率为500W，时间为10min。其余精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体的配方与制备方法的步骤1)操作均与实施例3相同。

实施例5

实施例5与实施例3的不同之处在于：实施例5的步骤2)中，将混合溶液进行自由扩散辅助处理，得到微囊包裹体水性混悬液，经过除杂后，得到精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体。其中，自由扩散辅助处理的温度为40℃，时间为30min。其余精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体的配方与制备方法的步骤1)操作均与实施例3相同。

对比例1

对比例1与实施例3的不同之处在于：精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体仅含有多肽A，不含有多肽B，其余组分和制备方法均与实施例3相同。

对比例2

对比例2与实施例3的不同之处在于：对比例2的精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体仅含有多肽B，不含有多肽A，其余组分和制备方法均与实施例3相同。

对比例3

对比例3与实施例3的不同之处在于：对比例3只含有复配精氨酸/赖氨酸多肽，不加入甘油、聚甘油-10二异硬脂酸酯、聚甘油-10月桂酸酯、葡聚糖进行微囊包裹。

对比例4

对比例4与实施例3的不同之处在于：对比例4的精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体不含有葡聚糖，其余组分和制备方法均与实施例3相同。

对比例5

对比例5精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体的制备方法是将复配精氨酸/赖氨酸多肽与载体材料，加入适量的无水乙醇使之完全溶解，置于旋转蒸发器中，减压回收乙醇成膜。量取表面活性剂溶液，加入到成膜的圆底烧瓶中，超声一定时间将膜洗下来，得到精氨酸/赖氨酸多肽微囊溶液。其中，载体材料为纯度为95％的菜籽卵磷脂，载体与复合多肽的质量比为2.5：1。表面活性剂溶液为吐温-40。

效果评价与测试

一、不同种类的肽对线虫运动的影响

1、测试的样品肽类：多肽A(红蝎毒素)、多肽B(芋螺毒素肽)、类蛇毒肽和实施例3的复配精氨酸/赖氨酸多肽。

2、空白对照组的设置方法：

(1)将大肠杆菌OP50涂布到线虫NGM培养基上。

(2)将同期化的线虫挑至步骤(1)制备好的培养基上处理3天后，将线虫收集在2mL离心管中，得到3000个/mL的1mL线虫水悬液。

(3)在步骤(2)的线虫水悬液内加入浓度为0.5mg/mL的甲硫酸新斯的明1mL。

(4)甲硫酸新斯的明处理4h后，取线虫液于空白培养基中，观察线虫的行为特征。统计30s内线虫的头部摆动频率，每板统计10条线虫，每组3个平行。

3、试验组的设置方法：

(1)将测试的样品与大肠杆菌OP50混合后，涂布到线虫NGM培养基上，多肽终浓度为5％。

(2)将同期化的线虫挑至步骤(1)制备好的培养基上处理3天后，将线虫收集在2mL离心管中，得到3000个/mL的1mL线虫水悬液。

(3)在步骤(2)的线虫水悬液内加入浓度为0.5mg/mL的甲硫酸新斯的明1mL。

(4)甲硫酸新斯的明处理4h后，取线虫液于空白培养基中，观察线虫的行为特征。统计30s内线虫的头部摆动频率，每板统计10条线虫，每组3个平行。

由图1可知，上述四种肽类均能阻断神经与肌肉间神经冲动的能力，实现肌肉放松的效果。多肽A能抑制线虫头部摆动频率达24.06％；多肽B能抑制线虫头部摆动频率达17.30％；类蛇毒肽能抑制线虫头部摆动频率达9.02％；复配精氨酸/赖氨酸多肽能抑制线虫头部摆动频率达33.08％。

由图2可知，上述四种肽类在兴奋药物作用下能抵御神经与肌肉间神经冲动的能力。多肽A能抑制线虫头部摆动频率达9.72％；多肽B能抑制线虫头部摆动频率达5.80％；类蛇毒肽能抑制线虫头部摆动频率达8.02％；复配精氨酸/赖氨酸多肽能抑制线虫头部摆动频率达17.59％。

二、不同微囊包裹体的制备方法对指标的影响

取实施例3～5和对比例4～5的微囊包裹体，测试其包裹率、粒径、损失率和稳定性，具体如表1。

具体的检测方法如下：

包裹率的测定方法：超滤离心法。如图3所示，超滤离心法是将脂质体放入配有超滤膜的超滤管中，在适宜的转速下离心，游离药物在离心力的作用下可通过超滤膜，而脂质体则被截留，从而实现二者的分离。包裹率+损失率＝100％。

粒径的测量方法：显微镜法。它的基本工作原理是将显微镜放大后的颗粒图像通过CCD摄像头和图形采集卡传输到计算机中，由计算机对这些图像进行边缘识别等处理，计算出每个颗粒的投影面积，根据等效投影面积原理得出每个颗粒的粒径，再统计出所设定的粒径区间的颗粒的数量，就可以得到粒度分布了。

稳定性测定：考察了pH稳定性和热稳定性，分别考察了pH为(0-10)时，水浴温度为0-60°包封率，从而评价其稳定性。

表1不同制备方法制备得到的微囊包裹体的指标数据

组别	包裹率/％	粒径/nm	损失率/％	稳定性
					实施例3	93.15±5.64	26.54±2.06	6.8±2.45	++++
实施例4	62.18±1.95	39.84±1.64	37.01±1.94	+++
					实施例5	29.16±4.62	67.95±6.94	70.99±2.3	+++
对比例4	34.76±8.94	69.78±2.66	65.24±1.49	+
					对比例5	46.81±5.91	50.16±1.24	54.16±0.97	+++

由表1可知，实施例3的包裹率最高，且实施例3的微囊包裹体的包裹率和粒径数据均优于实施例4和实施例5，说明采用高压脉冲电场技术辅助处理包裹与超声波处理和自由扩散相比，更有效提升复配精氨酸/赖氨酸多肽在微囊包裹体中的包裹效率，使得精氨酸/赖氨酸多肽能被皮肤更好地吸收，显著提升渗透性。对比例4中由于没有葡聚糖，包裹率和包裹体稳定性降低。对比例5采用传统的脂质体溶剂扩散法来制备微囊溶液，但包裹率和包裹稳定性均低于实施例3，说明聚甘油基非离子表面活性剂的复配精氨酸/赖氨酸多肽的自发性包裹能力比传统的卵磷脂类脂质体更好，这是因为非离子表面活性剂具有“两亲”结构，即亲水基团与疏水(亲油)基团，亲水基团自主的朝向水溶剂，疏水基团朝内聚集增溶一部分水形成囊泡体，微囊体具有增溶多肽的能力，从而形成具有高稳定性结构的囊泡包裹体形态。

三、微囊包裹体的细胞增殖功效测试

样品：实施例3、对比例1～3的产品

细胞增殖试验步骤：用培养基将细胞悬液稀释至我们需要的浓度4*104cfu/ml，用30-300μl的排枪吸取100μl的细胞悬液加入细胞板中，同时在细胞板最外围加入等量的PBS，铺好板后在细胞板的上盖上做好标记，标记内容为：细胞名称、操作者姓名、试验名称、日期。放入二氧化碳培养箱中进行孵育12h。待细胞贴壁后，细胞铺板面积大约为30％～40％时，将培养基吸出，每孔加入100μL无血清培养基，在细胞板的上盖上做好标记，放入二氧化碳培养箱中孵育16h。孵育16h后，细胞的铺板面积约为60％～65％，测试样品若是溶液需用滤器进行过滤，用无血清培养基对测试样品进行稀释，最高浓度为母液稀释的10倍，然后依次对半稀释，共5个浓度，加入96孔板中，每孔加入100μl，设置3个复孔，测试样品若是粉末或较稠膏体，需先用合适溶剂将样品稀释至合适浓度后重复以上操作。同时设置空白组，阳性对照组(含10％FBS)。每个样品都需要做溶剂对照，溶剂的稀释浓度要与样品的稀释浓度相同。在细胞板的上盖上做好标记，标记内容为：加样品时的时间，并将不同的样品区域标识清楚。放入二氧化碳培养箱中孵育48h，并定期在显微镜下观察细胞形态和数量。孵育结束后拿入超净工作台用吸液器除去孔中的培养基，将超净台的灯关掉保持避光状态，用培养基将CCK-8溶液稀释10倍，倒入加样槽内，用排枪吸取100μl加入细胞板中，准确记录好时间，将细胞板放入二氧化碳培养箱中孵育0.5h，开盖放入酶标仪中在450nm波长下进行测定吸光度。

细胞抗氧化法操作步骤：用培养基将HepG2细胞稀释，至其细胞密度为6×105个/mL，混匀后往96孔板(黑板)每孔加入100μL，其中边缘空中加入100m L PBS，放置培养箱中孵育24h后，移去培养基PBS清洗一次并往每孔加入100μL样品，在培养箱中孵育1h后PBS进行冲洗，每孔继续加入100μL600μM ABAP(用氧化培养基稀释)，之后即刻在酶标仪进行读数，酶标仪设置参数为：37℃，激发波长485nm，发射波长535nm，每5min记录一次数据，共记录12次。可以得出样品对细胞的抗氧化效果。数据如表2。

表2各组的成品抗氧化效果数据

由表2可知，对比例1只含有多肽A，对比例2只含有多肽B，两者的细胞增值率和细胞抗氧化能力都远低于实施例3，说明实施例3采用特定的多肽A和多肽B复合，能有效提升抗衰、紧致和抗氧化的能力，复配的两种精氨酸/赖氨酸多肽分别针对负责面部肌肉收缩的神经传导途径的前突触和后突触上的不同作用靶点，活性更好。

对比例3的复合多肽没有经过微囊处理，细胞增值率和细胞抗氧化也同样低于实施例3。这是因为实施例3是采用聚甘油基非离子表面活性剂制备得到的微囊包裹体，稳定性更好，透皮吸收率更高。

四、人体功效测试

1、淡纹功效测试方法：将实施例3、对比例1～3的成品作为原料分别打入基础配方中，进行志愿者试用，使用前后对比，进行皱纹占比的对比。

2、受试者

(1)签订知情同意书，自愿参加本测试所有的受试者都依照当地法规、规程接受口头和纸质的知情同意。知情同意解释了研究的性质、目的和参与研究的潜在风险，并强调参与测试的自愿性，受试者可以随时出于任何理由退出研究。所有的受试者都可以就研究进行提问，在签署前给与充分的时间考虑。所有的知情同意签署必须是在研究开始前进行。

(2)入选标准：中国健康人群，年龄25岁-45岁(试验开始时刻)，受试者应当对常用化妆品不敏感，受试者近三个月来没有参加别的临床研究。

(3)受试者信息：人数：20人/组，共5组；最小年龄：21周岁；最大年龄：41周岁；平均年龄：27.17周岁；标准差：4.73周岁。

3、数据分析方法

应用SPSS软件进行统计学分析，如果数据呈正态分布，应用t检验的方法分析测试样品前后皮肤数据变化的差异性，如果数据呈非正态分布，应用秩和检验进行相应统计分析。根据上述统计分析结果做出测试样品是否有效的结论，双侧检验，检验水准α＝0.05。Δ差值即为使用样品前皮肤本底值与使用样品后即时的皮肤数值间的差值。变化率即相对使用前的变化率。

4、测试流程

1)测试当天不得使用粉底、防晒、隔离以及彩妆类的产品，清水清洗受试部位，恒温恒湿环境下(21.0℃±1.0℃；湿度：50％±10％)静坐30min；

2)在使用样品前和使用28天安排受试者数据采集，每次使用皮肤测试仪器进行皮肤参数和图像采集；

3)测试结束后受试者完成调查问卷；

4)应用SPSS软件进行统计学分析，分析测试样品使用前后数据的变化。根据计算结果做出是否有效的结论。

5、皱纹面积占比分析

皱纹面积占比，其值越小，说明皱纹面积越小，皱纹面积减少越多，样品淡化皱纹效果越好。数据如表3所示。

表3各组样品皱纹面积占比均值数据

由表3可知，实施例3与对比例1～2相比，抗皱的效果明显更好，由此验证了复配多肽比单一的多肽A和多肽B，具有更好的生物活性，具有更显著的淡纹，紧致，提拉的护肤功效。实施例3与对比例3相比，实施例3经过包裹处理，微囊包裹体更容易进入角质层，快速渗透表皮层直达真皮层，在真皮层内缓慢释放，延长护肤效力。

上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。

Claims (3)

1.一种精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体，其特征在于，包括以下按重量百分比计的原料：

复配精氨酸/赖氨酸多肽0.002～0.01％、10～30％甘油、0.2～1.5％聚甘油基非离子表面活性剂、0.0001～0.1％的葡聚糖，余量为水；其中，复配精氨酸/赖氨酸多肽由多肽A和多肽B组成，所述多肽A购自浙江湃肽生物有限公司，型号为ZPC-019S；所述多肽B购自浙江湃肽生物有限公司，型号为ZPC-018S，所述多肽A和所述多肽B的质量比为(3～9)：1，所述聚甘油基非离子表面活性剂为0.1～1％的聚甘油-10二异硬脂酸酯和0.1～0.5％的聚甘油-10月桂酸酯的组合物，所述包裹体的制备方法包括以下步骤：

1)将复配精氨酸/赖氨酸多肽与聚甘油-10二异硬脂酸酯、聚甘油-10月桂酸酯、甘油、葡聚糖充分搅拌溶解，得到均一的混合溶液；

2)将混合溶液进行包裹辅助处理，得到微囊包裹体水性混悬液，经过除杂后，得到精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体，所述包裹辅助处理为高压脉冲电场辅助，高压脉冲电场的技术参数为：场强为0.5kV/cm～2kV/cm、脉冲处理个数为10～60个、物料电导率为2000μS/cm～6000μS/cm。

2.权利要求1所述的精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体的应用，其特征在于，将所述精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体分散于不同类型护肤乳液、膏霜、洁面、化妆水的化妆品基质中，制备成为化妆品。

3.权利要求1所述的精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体的应用，其特征在于，将所述精氨酸/赖氨酸多肽微囊包裹体分散于精华的化妆品基质中，制备成为化妆品。

Images