[go: up one dir, main page]

CN114381529B - Actr10与ca125联合在卵巢癌检测中的应用和试剂盒 - Google Patents

Actr10与ca125联合在卵巢癌检测中的应用和试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN114381529B
CN114381529B CN202210261981.XA CN202210261981A CN114381529B CN 114381529 B CN114381529 B CN 114381529B CN 202210261981 A CN202210261981 A CN 202210261981A CN 114381529 B CN114381529 B CN 114381529B
Authority
CN
China
Prior art keywords
ovarian cancer
actr10
model
diagnosis
subject
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202210261981.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN114381529A (zh
Inventor
汪付兵
王家亮
邓伟
黄梦飞
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Chengran Biology Technology Co ltd
Original Assignee
Shanghai Chengran Biology Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Chengran Biology Technology Co ltd filed Critical Shanghai Chengran Biology Technology Co ltd
Priority to CN202210261981.XA priority Critical patent/CN114381529B/zh
Publication of CN114381529A publication Critical patent/CN114381529A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114381529B publication Critical patent/CN114381529B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • G—PHYSICS
    • G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
    • G16H—HEALTHCARE INFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR THE HANDLING OR PROCESSING OF MEDICAL OR HEALTHCARE DATA
    • G16H50/00—ICT specially adapted for medical diagnosis, medical simulation or medical data mining; ICT specially adapted for detecting, monitoring or modelling epidemics or pandemics
    • G16H50/20—ICT specially adapted for medical diagnosis, medical simulation or medical data mining; ICT specially adapted for detecting, monitoring or modelling epidemics or pandemics for computer-aided diagnosis, e.g. based on medical expert systems
    • G—PHYSICS
    • G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
    • G16H—HEALTHCARE INFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR THE HANDLING OR PROCESSING OF MEDICAL OR HEALTHCARE DATA
    • G16H50/00—ICT specially adapted for medical diagnosis, medical simulation or medical data mining; ICT specially adapted for detecting, monitoring or modelling epidemics or pandemics
    • G16H50/30—ICT specially adapted for medical diagnosis, medical simulation or medical data mining; ICT specially adapted for detecting, monitoring or modelling epidemics or pandemics for calculating health indices; for individual health risk assessment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Data Mining & Analysis (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Primary Health Care (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Databases & Information Systems (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了ACTR10与CA125联合在卵巢癌检测中的应用和试剂盒，涉及医学诊断领域。本发明公开ACTR10和CA125联合用于卵巢癌辅助诊断和/或用于卵巢癌风险筛查的试剂盒的制备，同时提高了诊断的灵敏度和特异性，将卵巢癌诊断的有效性提升到了较高水平。

Description

ACTR10与CA125联合在卵巢癌检测中的应用和试剂盒
技术领域
本发明涉及医学诊断领域，具体而言，涉及ACTR10与CA125联合在卵巢癌检测中的应用和试剂盒。
背景技术
卵巢癌目前是死亡率最高的妇科肿瘤，其晚期患者的5年生存期约为20%，而当患者的卵巢癌在早期被发现并进行治疗，其5年生存期约超过了90%。通过筛查发现早期卵巢癌是降低该病死亡率的重要途径。肿瘤抗原125(缩写为CA125)和阴道超声成像检查是目前最常用的卵巢癌早筛方式。但CA125在卵巢癌的早期诊断中没有明显作用，几乎近50%的早期卵巢癌患者(I期)的CA125没有显著升高。此外，CA125的升高还伴随着假阳性结果，例如其他常见的妇科疾病以及肿瘤(如膀胱癌和肝癌)中也会出现CA125的升高。虽然阴道超声可对卵巢和周围器官进行成像，但是目前仍然难以将绝经前的卵巢肿瘤与功能性囊肿区分开来。另外多项临床随机对照试验证实，同时使用肿瘤标志物CA125和阴道超声对卵巢癌进行早期筛查并没有显著降低该肿瘤的死亡率。因此，对于女性的健康管理和临床对卵巢癌早期诊断的需求在于更为理想的方法学进行早筛早诊。更为理想的方法学应该具有一些必要特点，如方法学易于操作、具有性价比、经临床验证具有高度敏感和特异性。
游离DNA(cfDNA)目前也尝试用于卵巢癌的早期诊断。与健康个体相比，上皮性卵巢癌患者的cfDNA含量显著高于健康个体。但cfDNA检测早期卵巢癌的灵敏度仅为55%。卵巢癌患者的cfDNA含量随着肿瘤的进展也升高，其诊断的敏感性为88.9%。由于cfDNA浓度在多种肿瘤患者的循环系统内均有所升高，因此用cfDNA浓度诊断早期卵巢癌不具有特异性。
除了cfDNA以外，多项研究表明循环的 miRNA 在卵巢癌中有特定的表达。相比于健康个体，卵巢癌患者血液中游离的 let-7 表达量降低，而 miR-205 的表达量升高。然而，多项研究发现miR-205 的表达量升高在其他类型肿瘤患者血液内发现类似情况，如子宫内膜癌和鳞状细胞肺癌。由于cfDNA和游离miRNA不具有组织特异性，卵巢癌早筛与诊断的重点方向转为细胞外囊泡来源核酸和蛋白的检测。
细胞外囊泡是由细胞分泌的，可以在血液、尿液等体液中循环。这类囊泡携带母细胞来源的信号分子，肿瘤细胞分泌的囊泡可以在肿瘤发生的微环境内运输重要信号分子，促进肿瘤的进展和转移。因此，通过检测囊泡信号分子用于肿瘤早筛与诊断是目前科学研究与产业转化的重点。
通过分离血清、血浆中总囊泡或者特定类别的囊泡，并检测囊泡中miRNA的表达量是基于囊泡对卵巢癌诊断的现有技术方案。
但此类技术方案的诊断灵敏度和特异性不够理想，仍需提高。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供ACTR10与CA125联合在卵巢癌检测中的应用和试剂盒。本发明首次将ACTR10与CA125联合作为标志物组，用于到卵巢癌的诊断中，出人意料地同时提高了诊断的灵敏度和特异性，将卵巢癌诊断的有效性提升到了较高水平。
本发明是这样实现的：
第一方面，本发明提供标志物组的检测试剂在制备试剂盒中的应用，所述标志物组包括ACTR10和CA125；所述试剂盒用于卵巢癌辅助诊断和/或用于卵巢癌风险筛查。
ACTR10蛋白（肌动蛋白相关蛋白10）参与多种细胞功能，包括内质网到高尔基体的转运、溶酶体和内体的向心运动、纺锤体形成、染色体运动、核定位和轴突发生。ACTR10是dynactin复合物的亚基。多项研究表明是 dynactin 结合膜囊泡（如高尔基体或晚期内体）的结构域，但尚未有ACTR10与卵巢癌生物学相关方面的报道。
本发明创造性地将ACTR10与CA125联合，作为标志物组，用于到卵巢癌辅助诊断和/或用于卵巢癌风险筛查，可以同时将诊断灵敏度和特异性提高到较高水平，大幅提高卵巢癌诊断的有效性。
可选地，在一些实施方案中，所述试剂盒包括使用说明书，所述使用说明书记载有卵巢癌辅助诊断模型和/或卵巢癌风险筛查模型；
其中，所述卵巢癌辅助诊断模型为：
OCS1=K1×CCA125-K2×CACTR10；其中，K1取值为0.3-0.4，K2取值为0.6-0.7，OCS1为诊断模型阈值；
所述卵巢癌风险筛查模型为：
OCS2=K3×CACTR10–K4×CCA125；其中，K3取值为0.7-0.8，K4取值为0.4-0.5，OCS2为筛查模型阈值；
在上述两个模型中，CCA125代表受试者CA125的浓度值，CACTR10代表受试者ACTR10的浓度值。
可选地，在一些实施方案中，K1的取值可以是0.31、0.32、0.33、0.34、0.35、0.36、0.37、0.38、0.39和0.40中的任意一者或任意两者之间的范围。
可选地，在一些实施方案中，K1的取值是0.38。
可选地，在一些实施方案中，K2的取值可以是0.61、0.62、0.63、0.64、0.65、0.66、0.67、0.68、0.69和0.70中的任意一者或任意两者之间的范围。
可选地，在一些实施方案中，K2的取值是0.66。
可选地，在一些实施方案中，K3的取值可以是0.71、0.72、0.73、0.74、0.75、0.76、0.77、0.78、0.79和0.80中的任意一者或任意两者之间的范围。
可选地，在一些实施方案中，K3的取值是0.78。
可选地，在一些实施方案中，K4的取值可以是0.41、0.42、0.43、0.44、0.45、0.46、0.47、0.48、0.49和0.50中的任意一者或任意两者之间的范围。
可选地，在一些实施方案中，K4的取值是0.41。
可选地，在一些实施方案中，所述CA125的浓度反映的是受试者的血浆中的CA125浓度，单位为U/毫升；所述ACTR10的浓度反映的是受试者的血浆囊泡中的ACTR10浓度，单位为U/毫升。
可选地，在一些实施方案中，所述卵巢癌为I期卵巢癌。
可选地，在一些实施方案中，所述检测试剂包括但不限于适用于如下任意一种方法以实现所述标志物组的检测：化学发光法、流式荧光法、单分子阵列法、酶联免疫、胶体金、电化学发光和量子点技术方法。
第二方面，本发明提供一种用于卵巢癌辅助诊断和/或用于卵巢癌风险筛查的系统，所述系统包括信息获取模块、计算模块和诊断模块；
其中，所述信息获取模块用于执行获取受试者检测信息的操作，所述检测信息包括CA125的浓度信息和ACTR10的浓度信息；
所述计算模块用于执行将所述检测信息代入计算模型计算阈值的操作；
所述诊断模块用于执行根据所述阈值和CA125的浓度信息判断所述受试者的健康状况的操作。
可选地，在一些实施方案中，所述计算模型为卵巢癌辅助诊断模型或卵巢癌风险筛查模型；
其中，所述卵巢癌辅助诊断模型为：
OCS1=K1×CCA125-K2×CACTR10；其中，K1取值为0.3-0.4，K2取值为0.6-0.7，OCS1为诊断模型阈值；
所述卵巢癌风险筛查模型为：
OCS2=K3×CACTR10–K4×CCA125；其中，K3取值为0.7-0.8，K4取值为0.4-0.5，OCS2为筛查模型阈值；
在上述两个模型中，CCA125代表受试者CA125的浓度值，CACTR10代表受试者ACTR10的浓度值。
可选地，在一些实施方案中，K1的取值可以是0.31、0.32、0.33、0.34、0.35、0.36、0.37、0.38、0.39和0.40中的任意一者或任意两者之间的范围。
可选地，在一些实施方案中，K1的取值是0.38。
可选地，在一些实施方案中，K2的取值可以是0.61、0.62、0.63、0.64、0.65、0.66、0.67、0.68、0.69和0.70中的任意一者或任意两者之间的范围。
可选地，在一些实施方案中，K2的取值是0.66。
可选地，在一些实施方案中，K3的取值可以是0.71、0.72、0.73、0.74、0.75、0.76、0.77、0.78、0.79和0.80中的任意一者或任意两者之间的范围。
可选地，在一些实施方案中，K3的取值是0.78。
可选地，在一些实施方案中，K4的取值可以是0.41、0.42、0.43、0.44、0.45、0.46、0.47、0.48、0.49和0.50中的任意一者或任意两者之间的范围。
可选地，在一些实施方案中，K4的取值是0.41。
可选地，在一些实施方案中，所述CA125的浓度反映的是受试者的血浆中的CA125浓度，单位为U/毫升；所述ACTR10的浓度反映的是受试者的血浆囊泡中的ACTR10浓度，单位为U/毫升。
可选地，在一些实施方案中，当所述受试者为具有妇科症状的受试者时，所述计算模型为卵巢癌辅助诊断模型，所述诊断模块按如下条件进行判断：
若CCA125≥35且4.7＜OCS1＜27.8，或CCA125＜35且-11＜OCS1＜10.3，则判断所述受试者为I期卵巢癌。
卵巢癌辅助诊断模型受试者通常为妇科门诊患者，有可以描述清晰的妇科症状，例如患者主诉症状如食欲缺乏、腹胀、腹痛或消瘦等非特异性的症状。
可选地，在一些实施方案中，当所述受试者无明显妇科症状的受试者时，所述计算模型为卵巢癌风险筛查模型，所述诊断模块按如下条件进行判断：
若CCA125＜35且-10.4＜OCS2＜12.8，则判断所述受试者为I期卵巢癌。若CCA125≥35，则不适用该模型。
卵巢癌风险筛查模型的受试者通常为常规体检女性，没有明显的妇科症状，且CA125的浓度指标小于35U/毫升。
CA125浓度小于35U/毫升的受试者往往也存在I期卵巢癌患者，导致仅依靠CA125单一指标造成假阴性。本发明将ACTR10联合CA125能够提高卵巢癌诊断准确率。可选地，在一些实施方案中，所述诊断系统还包括结果显示模块，所述结果显示模块用于显示所述诊断模块得出的诊断结论。
可选地，在一些实施方案中，所述结果显示模块通过屏幕显示、声音播报或打印的方式显示诊断结果。
第三方面，本发明提供一种用于卵巢癌辅助诊断和/或用于卵巢癌风险筛查的试剂盒，其包括标志物组的检测试剂，所述标志物组包括ACTR10和CA125。
可选地，在一些实施方案中，所述试剂盒包括使用说明书，所述使用说明书记载有卵巢癌辅助诊断模型和/或卵巢癌风险筛查模型；
其中，所述卵巢癌辅助诊断模型为：
OCS1=K1×CCA125-K2×CACTR10；其中，K1取值为0.3-0.4，K2取值为0.6-0.7，OCS1为诊断模型阈值；
所述卵巢癌风险筛查模型为：
OCS2=K3×CACTR10–K4×CCA125；其中，K3取值为0.7-0.8，K4取值为0.4-0.5，OCS2为筛查模型阈值；
在上述两个模型中，CCA125代表受试者CA125的浓度值，CACTR10代表受试者ACTR10的浓度值。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为实施例1中采用化学发光方法检测ACTR10在I期卵巢癌患者和非卵巢癌个体的表达结果。
图2为实施例1中采用流式荧光方法检测ACTR10在I期卵巢癌患者和非卵巢癌个体的表达结果。
图3为实施例2中采用化学发光法检测不同癌患者中的ACTR10的表达结果。
图4为实施例3中100名妇科门诊患者应用卵巢癌辅助诊断模型得到的ROC曲线。
图5为实施例4中200名健康体检女性应用卵巢癌风险筛查模型得到的ROC曲线。
图6为ACTR10的检测流程图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
ACTR10在I期卵巢癌患者和非卵巢癌个体的表达差异检测
ACTR10由不同的检测方法均可以检测I期卵巢癌患者和非卵巢癌个体的表达差异。
通过化学发光方法检测ACTR10浓度，结果见图1：I期卵巢癌患者的平均值是16.2U/毫升（即每毫升血浆含有16.2U ACTR10蛋白），卵巢良性疾病患者的平均值是33.3 U/毫升，两组统计学检验的p值小于0.0001。健康个体的平均值是39.01 U/毫升，I期卵巢癌患者组和健康个体组统计学检验的p值小于0.0001。
通过流式荧光方法检测ACTR10浓度，结果见图2：I期卵巢癌患者的平均值是15.8U/毫升，卵巢良性疾病患者的平均值是26.6 U/毫升，两组统计学检验的p值小于0.0001。健康个体的平均值是33.99 U/毫升，I期卵巢癌患者组和健康个体组统计学检验的p值小于0.0001。
不同的检测方法，均体现了ACTR10在I期卵巢癌患者和非卵巢癌个体间存在表达差异。
实施例2
ACTR10不同癌患者中的表达检测
ACTR10在卵巢癌患者血浆囊泡中具有特异性表达。现有技术方案中，检测囊泡中若干miRNA的方法，会影响卵巢癌诊断的特异性。相同的miRNA在多种肿瘤中都有表达量升高的情况。
本实施例通过化学发光法检测不同癌患者中的ACTR10，结果见图3：ACTR10在女性常见的其他肿瘤患者或良性疾病患者血浆囊泡中并未见显著差异；在乳腺癌、乳腺良性囊性增生、宫颈癌、宫颈良性平滑肌瘤和相应的健康个体中，ACTR10的浓度并未存在显著差异，各组的平均值分别为：32.65，32.32，33.37，30.94，35.73U/毫升。
实施例3
ACTR10与CA125联合用于早期卵巢癌的辅助诊断。
入组100名妇科门诊患者。入组标准为CA125在35U至100U/毫升，腹部有不适症状，阴道超声提示有卵巢占位病变等但尚未进行腹腔镜检查。用化学发光平台对上述100名女性血浆囊泡中ACTR10检测并结合CA125数值代入卵巢癌辅助诊断模型：OCS1=0.38×CCA125-0.66×CACTR10，CCA125代表受试者血浆中CA125的浓度值，CACTR10代表受试者血浆囊泡中ACTR10的浓度值；判断方式：若CCA125≥35（即CA125浓度≥35U/毫升）且4.7＜OCS1＜27.8，或CCA125＜35且-11＜OCS1＜10.3，则判断受试者为I期卵巢癌。
根据100个模型结果是否在4.7至27.8区间，得到符合入组标准的女性是否患有I期卵巢癌的结果。根据卵巢癌诊疗指南，对100名患者进行随访至有明确的临床诊断结果。将临床诊断结果与卵巢癌辅助诊断模型结果比较，分析得到ROC曲线，见图4。
从该曲线中可以看出，单独CA125或单独ACTR10的指标用于辅助诊断I期卵巢癌均有局限，而通过卵巢癌辅助诊断模型，将ACTR10与CA125联合，对I期卵巢癌进行辅助诊断的灵敏度达到94.7%，同时，相应的特异性达到85.9%，综合准确性更是达到了88.5%。
实施例4
ACTR10与CA125联合用于卵巢癌筛查的风险管理。入组年龄在30-60岁之间女性200名，CA125浓度检查结果均小于35U/毫升。
用化学发光平台对上述200名女性血浆囊泡中ACTR10检测并结合CA125数值，代入到卵巢癌风险筛查模型：OCS2=0.78×CACTR10–0.41×CCA125；CCA125代表受试者血浆中CA125的浓度值，CACTR10代表受试者血浆囊泡中ACTR10的浓度值；判断方式：若CCA125＜35且-10.4＜OCS2＜12.8，则判断受试者为I期卵巢癌。若CA125浓度≥35U/毫升不适用该模型。
根据200个模型结果是否在-10.4至12.8区间，得到无任何症状的入组女性是否有I期卵巢癌风险的结果。对提示风险的女性做6个月随访至有明确的临床诊断结果，如无任何卵巢疾病，卵巢良性病变和I期卵巢癌。将临床诊断结果与6个月前的OCS2模型结果比较，分析得到ROC曲线，见图5。
从该曲线中发现，单独CA125或单独ACTR10的指标用于筛查I期卵巢癌均有局限，而通过OCS2模型对I期卵巢癌进行筛查的灵敏度高达96.6%，相应的特异性更是达到了90.7%，综合准确性高达94.2%。
对比例1
现有文献1（Exosomal microRNAs as tumor markers in epithelial ovariancancer）显示四个血浆总囊泡来源的miRNA(miR-21、miR-100、miR-200b和miR-320)可以用于卵巢癌的早期诊断。通过Taqman microRNA array和Taqman real time PCR的方法，发现并确定miR-200b具有最高的灵敏度64%和特异性86%，高于目前卵巢癌标志物CA125对I期卵巢癌诊断有效性仅有50%。
对比例2
现有文献2（Serum exosomal miRNA-145 and miRNA-200c as promisingbiomarkers for preoperative diagnosis of ovarian carcinomas）显示血清囊泡中的miRNA(miR-145和miR-200c)在高级别卵巢癌患者中高表达，两个miRNA通过Taqman荧光PCR方法单独检测，或各自与现有的卵巢癌标志物CA125联合检测用于诊断能够提升灵敏度，CA125+miR-145+miR-200c联合的诊断灵敏度达到100%但特异性仅有55%。说明血清囊泡miRNA与CA125联合用于卵巢癌诊断可以提升诊断有效性。但该研究中不仅仅是对I期卵巢癌的诊断，还包含了更多的II到IV期卵巢癌患者，无法有效实现早期诊断。
综上，目前通过囊泡的方法学用于卵巢癌诊断的问题是局限于对miRNA的检测，无论是检测单个miRNA还是多个miRNA，以及与现有卵巢癌标志物CA125联合诊断，都无法在灵敏度和特异性上同时超过85%。现有技术方案中是将卵巢癌与非卵巢癌进行鉴别，并非针对I期卵巢癌与非卵巢癌的鉴别诊断，此外，现有技术方案中用于卵巢癌诊断的多个miRNA在其他肿瘤中也会具有较高的表达量，从而影响诊断卵巢癌的特异性。
通过上述实施例和对比例，可以看出，本发明首次将ACTR10与CA125联合，实现了早期卵巢癌(I期)与卵巢良性疾病以及早期卵巢癌(I期)与健康个体的鉴别诊断，从而实现临床上对卵巢癌的辅助诊断以及健康个体的卵巢癌风险管理；
在灵敏度和特异性上同时超过85%度，大大地提高了卵巢癌诊断的有效性，具有优秀诊断准确度；
不同于现有技术方案只能对囊泡中miRNA进行PCR检测，本发明中的ACTR10蛋白检测可以通过化学发光、流式荧光、单分子阵列等多种检测平台实现，确保临床有多种方法对卵巢癌风险个人进行诊断。
上述实施例中ACTR10蛋白的检测参考如下步骤进行，流程图见图6：
1、用EDTA-Na抗凝管分离静脉血4毫升，放置室温不超过4小时，放置4度冰箱不超过12小时。
2、将抗凝管以3000×g，4℃离心15分钟，分离抗凝管上层约2毫升血浆。
3、将血浆以10000×g，4℃离心15分钟，保留上层约1.8毫升血浆。
4、以超速离心法、排阻色谱法或商业化试剂盒法分离血浆总囊泡，分离后的囊泡可以直接进行蛋白提取或长期保存于-80度冰箱：
4.1 超速离心法
4.1.1 将3中1.8毫升血浆加入2.2毫升磷酸缓冲液至4毫升，以100000×g，4℃离心60分钟，去除上层约3.6毫升溶液，并加入1毫升磷酸缓冲液将离心管底部沉淀重悬；
4.1.2 将重悬后的溶液再次以100000×g，4℃离心60分钟，去除上层溶液只保留沉淀，并加入200微升磷酸缓冲液将离心管底部沉淀重悬得到小细胞外囊泡。
4.2 排阻色谱法
4.2.1 将2中2毫升血浆用0.8微米过滤器进行过滤，并将过滤后的血浆以10000×g，4℃离心15分钟，保留上层约1.5毫升血浆；
4.2.2 将1.5毫升血浆加入活化后的色谱柱，并持续加入磷酸缓冲液至10毫升，用离心管收集经过色谱柱3.5至5毫升的溶液，该体积部分的溶液为小细胞外囊泡。
4.3 商业化试剂盒法
4.3.1 市售的商业化试剂盒法分离血浆囊泡的原理多为通过亲水性聚合物与血浆中的囊泡进行孵育，在孵育过程中聚合物的亲水性显著降低囊泡在溶液中的溶解性导致血浆中的囊泡发生聚集，再通过离心得到聚集的囊泡沉淀。Thermofisher(试剂盒名称是总外泌体分离试剂盒(来自血浆)，货号是4484450)、SBI、Norgen等试剂供应商均有血浆囊泡分离试剂盒，本发明以Norgen的血清/血浆囊泡分离试剂盒为例(试剂盒名称是Plasma/Serum Exosome Purification Mini Kit，货号是57400)。
4.3.2 将3中1.8毫升血浆加入2.2毫升磷酸缓冲液混合均匀至4毫升溶液，并加入ExoC缓冲液100微升；
4.3.3 在混匀的4.1毫升溶液中加入200微升SlurryE溶液并涡旋振荡10秒钟，并将溶液垂直静置5分钟；
4.3.4 静置后的溶液再次涡旋振荡10秒钟，并以1500×g，室温离心2分钟后去除上层溶液至保留沉淀；
4.3.5 向沉淀加入200微升ExoR缓冲液并涡旋振荡10秒后，室温静置5分钟，并再次涡旋振荡10秒钟，并以300×g，室温离心2分钟；
4.3.6 将溶液加入0.2微米过滤器，并以5000×g，室温离心1分钟收集经过过滤器的溶液，该溶液为小细胞外囊泡。
5、向每毫升囊泡溶液中加入200微升的RIPA裂解液，并用移液器吹洗混匀溶液并将装有溶液的离心管放置于冰上15分钟进行蛋白的提取。
6、提取后的溶液以10000×g，4度离心15分钟后保留上层溶液，囊泡的蛋白存在于上层溶液内。该蛋白溶液可以直接用于下游蛋白分析或长期保存于-80度冰箱。
7、以化学发光法、流式荧光法或单分子阵列法对ACTR10进行检测：
7.1 化学发光法，市售的商业化全自动化学发光免疫分析仪均可对ACTR10蛋白进行检测，本发明中以雅培i2000SR型号为例。
7.1.1 仪器开机前常规检查，确认无误后开机并确认仪器状态；
7.1.2 装载免疫反应所需试剂，包括分离液、反应底物、反应杯和样本针清洗液；
7.1.3 反应前对仪器进行校准测试和质控测试，确认无误后进行样本检测；
7.1.4 囊泡蛋白样本检测，将待测样本放入样本架，并放置于样本放入区，输入第一个和最后一个样本的位置，确认后点击开始并等待仪器读取反应数值并导出。
7.2 流式荧光法，市售的主流流式荧光仪均可对ACTR10蛋白进行检测，本发明中以Luminex200型号为例。
7.2.1 打开主机、XY平台、SD以及配套电脑，并打开Luminex控制程序，进行仪器自检确认是否正常；
7.2.2 执行仪器校准程序，在程序指定位置加入校准试剂、纯水和校正微球，执行校准程序并保存结果；
7.2.2 完成仪器校准后，开仓放置铜板并加热，并将杂交板放在铜板上，设置检测ACTR10所需的试剂留存程序文件；
7.2.3 添加分析ACTR10蛋白的模板，并依次计算生成原始荧光值和校准后的浓度值并导出。
7.3 需要注意的是，除了上述两种方法以外，常见的蛋白检测技术平台同样可以对ACTR10浓度进行测定，包括不限于酶联免疫、胶体金、电化学发光和量子点技术方法。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.标志物组的检测试剂在制备试剂盒中的应用，其特征在于，所述标志物组包括ACTR10和CA125；所述试剂盒用于卵巢癌辅助诊断和/或用于卵巢癌风险筛查。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括使用说明书，所述使用说明书记载有卵巢癌辅助诊断模型和/或卵巢癌风险筛查模型；
其中，所述卵巢癌辅助诊断模型为：
OCS1=K1×CCA125-K2×CACTR10；其中，K1取值为0.3-0.4，K2取值为0.6-0.7，OCS1为诊断模型阈值；
所述卵巢癌风险筛查模型为：
OCS2=K3×CACTR10–K4×CCA125；其中，K3取值为0.7-0.8，K4取值为0.4-0.5，OCS2为筛查模型阈值；
在上述两个模型中，CCA125代表受试者CA125的浓度值，CACTR10代表受试者ACTR10的浓度值。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述CA125的浓度反映的是受试者的血浆中的CA125浓度，单位为U/毫升；所述ACTR10的浓度反映的是受试者的血浆囊泡中的ACTR10浓度，单位为U/毫升。
4.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述卵巢癌为I期卵巢癌。
5.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述检测试剂适用于如下任意一种方法以实现所述标志物组的检测：化学发光法、流式荧光法、单分子阵列法、酶联免疫、胶体金、电化学发光和量子点技术方法。
6.一种用于卵巢癌辅助诊断和/或用于卵巢癌风险筛查的系统，其特征在于，所述系统包括信息获取模块、计算模块和诊断模块；
其中，所述信息获取模块用于执行获取受试者检测信息的操作，所述检测信息包括CA125的浓度信息和ACTR10的浓度信息；
所述计算模块用于执行将所述检测信息代入计算模型计算阈值的操作；所述计算模型为卵巢癌辅助诊断模型或卵巢癌风险筛查模型；
其中，所述卵巢癌辅助诊断模型为：
OCS1=K1×CCA125-K2×CACTR10；其中，K1取值为0.3-0.4，K2取值为0.6-0.7，OCS1为诊断模型阈值；
所述卵巢癌风险筛查模型为：
OCS2=K3×CACTR10–K4×CCA125；其中，K3取值为0.7-0.8，K4取值为0.4-0.5，OCS2为筛查模型阈值；
在上述两个模型中，CCA125代表受试者CA125的浓度值，CACTR10代表受试者ACTR10的浓度值；所述CA125的浓度反映的是受试者的血浆中的CA125浓度，单位为U/毫升；所述ACTR10的浓度反映的是受试者的血浆囊泡中的ACTR10浓度，单位为U/毫升
所述诊断模块用于执行根据所述阈值和CA125的浓度信息判断所述受试者的健康状况的操作；
当所述受试者为具有妇科症状的受试者时，所述计算模型为卵巢癌辅助诊断模型，所述诊断模块按如下条件进行判断：
若CCA125≥35且4.7＜OCS1＜27.8，或CCA125＜35且-11＜OCS1＜10.3，则判断所述受试者为I期卵巢癌；
当所述受试者为无明显妇科症状的受试者时，所述计算模型为卵巢癌风险筛查模型，所述诊断模块按如下条件进行判断：
若CCA125＜35且-10.4＜OCS2＜12.8，则判断所述受试者为I期卵巢癌。
7.根据权利要求6所述的系统，其特征在于，所述诊断系统还包括结果显示模块，所述结果显示模块用于显示所述诊断模块得出的诊断结论。
8.根据权利要求7所述的系统，其特征在于，所述结果显示模块通过屏幕显示、声音播报或打印的方式显示诊断结果。
9.一种用于卵巢癌辅助诊断和/或用于卵巢癌风险筛查的试剂盒，其特征在于，其包括标志物组的检测试剂，所述标志物组包括ACTR10和CA125。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括使用说明书，所述使用说明书记载有卵巢癌辅助诊断模型和/或卵巢癌风险筛查模型；
其中，所述卵巢癌辅助诊断模型为：
OCS1=K1×CCA125-K2×CACTR10；其中，K1取值为0.3-0.4，K2取值为0.6-0.7，OCS1为诊断模型阈值；
所述卵巢癌风险筛查模型为：
OCS2=K3×CACTR10–K4×CCA125；其中，K3取值为0.7-0.8，K4取值为0.4-0.5，OCS2为筛查模型阈值；
在上述两个模型中，CCA125代表受试者CA125的浓度值，CACTR10代表受试者ACTR10的浓度值。
CN202210261981.XA 2022-03-16 2022-03-16 Actr10与ca125联合在卵巢癌检测中的应用和试剂盒 Active CN114381529B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210261981.XA CN114381529B (zh) 2022-03-16 2022-03-16 Actr10与ca125联合在卵巢癌检测中的应用和试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210261981.XA CN114381529B (zh) 2022-03-16 2022-03-16 Actr10与ca125联合在卵巢癌检测中的应用和试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114381529A CN114381529A (zh) 2022-04-22
CN114381529B true CN114381529B (zh) 2022-06-10

Family

ID=81206425

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210261981.XA Active CN114381529B (zh) 2022-03-16 2022-03-16 Actr10与ca125联合在卵巢癌检测中的应用和试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114381529B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103575891A (zh) * 2012-08-03 2014-02-12 河南生生医疗器械有限公司 一种综合检测he4、ca125的试剂盒及其应用
CN106442993A (zh) * 2016-09-10 2017-02-22 天津大学 基于胰蛋白酶荧光底物检测卵巢癌肿瘤标志物ca125的酶联免疫试剂盒制备方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8288110B2 (en) * 2006-12-04 2012-10-16 Perkinelmer Health Sciences, Inc. Biomarkers for detecting cancer
WO2012174282A2 (en) * 2011-06-16 2012-12-20 Caris Life Sciences Luxembourg Holdings, S.A.R.L. Biomarker compositions and methods
SG10201703022SA (en) * 2012-10-12 2017-06-29 Agency Science Tech & Res Method of prognosis and stratification of ovarian cancer
CN204514921U (zh) * 2015-04-28 2015-07-29 殷晓燕 一种用于检测晚期卵巢癌外周血清ca125的分析装置
CN108008132B (zh) * 2017-12-04 2020-05-08 北京惠中医疗器械有限公司 一种联合检测卵巢癌肿瘤标志物he4和ca125的试剂盒及其制备方法和应用
CN111521807B (zh) * 2020-07-02 2020-10-27 北京信诺卫康科技有限公司 Spondin 1和CA125联合用作早期卵巢癌生物标志物以及试剂盒
CN111735949B (zh) * 2020-07-17 2023-07-21 北京信诺卫康科技有限公司 Wnt7a和CA125联合用作早期卵巢癌生物标志物以及试剂盒

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103575891A (zh) * 2012-08-03 2014-02-12 河南生生医疗器械有限公司 一种综合检测he4、ca125的试剂盒及其应用
CN106442993A (zh) * 2016-09-10 2017-02-22 天津大学 基于胰蛋白酶荧光底物检测卵巢癌肿瘤标志物ca125的酶联免疫试剂盒制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN114381529A (zh) 2022-04-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109576370B (zh) 用于膀胱癌诊断和复发监控的生物标志物及检测试剂盒
CN111826466B (zh) 乙型肝炎感染患者或携带者外泌体miRNA分子标志物组合及筛查试剂盒
CN104651513B (zh) 一种痛风血清miRNAs生物标志物及其表达量的检测方法
CN111748629A (zh) 一种用于胰腺癌早期诊断的生物标志物的检测试剂
CN105861672A (zh) 一种人体外周血游离DNA中septin9基因甲基化检测试剂盒及检测方法
CN114686593A (zh) 与乳腺癌有关的外泌体SmallRNA及其应用
CN109735612A (zh) 川崎病冠状动脉瘤并发症的生物分子标志物及其试剂盒
CN107586839A (zh) 循环肿瘤细胞多种标志物联合检测试剂盒及其应用
CN106834470A (zh) miRNA在制备癌症诊断试剂盒中的用途
CN105400882A (zh) 一种适用于后纵韧带骨化诊断的血清miRNA标志物及应用
CN114381529B (zh) Actr10与ca125联合在卵巢癌检测中的应用和试剂盒
CN108728543B (zh) 检测肺癌脑转移的miRNA组合及含有该组合的试剂盒
CN112143796A (zh) Card16做为分子标识用于结核的诊断与鉴别
CN116064792B (zh) 一种用于结直肠癌诊断的多基因dna甲基化联合检测试剂盒及应用
CN110628907A (zh) 一组胆囊癌血浆外泌体microRNAs标记物及其应用
CN111748635B (zh) 胆管癌的miRNA标记物及其应用
CN107904310A (zh) 用于大肠癌诊断的尿液microRNA生物标志物、试剂盒及其应用
CN114921558B (zh) 血清中hsa_circ_0044235水平作为乳腺癌诊断标志物的应用
CN115747333B (zh) 一种肿瘤标记物检测试剂盒和检测分析系统及其应用
CN115820857B (zh) 一种鉴别胃癌前病变和胃癌及诊断胃癌的试剂盒
CN108504736A (zh) 检测orm1基因表达量的系统在诊断结核病中的应用
CN110004231A (zh) 肾癌外泌体标志物组及其应用
CN118581222B (zh) 一种用于大肠癌诊断的基因组合标志物及其应用
CN118222703B (zh) 生物标志物在制备诊断活动性结核病的产品中的应用及诊断活动性结核病的试剂盒
CN116024328A (zh) 外泌体中miRNA在制备神经退行性疾病鉴别诊断及早筛试剂盒中的用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant