CN114354781A

CN114354781A - 一种同时测定食品中5种非法添加物的方法

Info

Publication number: CN114354781A
Application number: CN202111537290.XA
Authority: CN
Inventors: 邹品田; 陈艳萍; 覃孙良
Original assignee: Guangxi Guilin Ruide Detection Authentication Technology Co ltd
Current assignee: Guangxi Guilin Ruide Detection Authentication Technology Co ltd
Priority date: 2021-12-15
Filing date: 2021-12-15
Publication date: 2022-04-15

Abstract

本发明公开了一种同时测定食品中5种非法添加物的方法，属于食品检测技术领域。所述同时测定食品中5种非法添加物的方法，包括如下步骤：步骤1：样品前处理；步骤2：净化处理；步骤3：非法添加物测定。本发明的方法，具有灵敏度高、重复性好、检出限低和准确性高的优点，可同时实现食品中5种非法添加物的检测。

Description

一种同时测定食品中5种非法添加物的方法

技术领域

本发明涉及一种同时测定食品中5种非法添加物的方法，属于食品检测技术领域。

背景技术

食品非法添加物是指国家食品安全标准中规定添加范围之外而添加到食品中的物质，包括生产经营中违法添加的非食用物质以及超量超范围使用食品添加剂的行为。食品中非法添加物存在的主要隐患是剂量不明确、配伍关系不确切、来源不明和杂质不清晰等，为筛查的目标选择带来了难度，需要建立灵敏、专属性好的分析方法，对食品中非法掺入的添加物进行鉴别检测。

截至目前，我国已制定公布303部食品安全国家标准，覆盖6000余项食品安全指标。食品安全标准是强制执行的标准。标准明确了食品添加剂的品种、使用范围、用量。国家非常重视食品安全监督管理工作，因此非法添加物含量测定方法的研究开发，已引起了食品检测领域工作者的高度关注。

目前，气相色谱法串联质谱法和超高效液相色谱串联质谱法等方法，由于具有高灵敏度、重现性好、检出限低和高通量快速检测的优点，备受广大食品检测领域工作者的欢迎。食品样品成分较为复杂，因此快速地进行样品前处理，有效地消除杂质干扰，是获得样品分析准确结果的前提。为进一步提高非法添加物含量测定方法的准确度，有必要提供一种更为快速、准确和高灵敏的食品中非法添加物的检测方法，以解决现有技术的不足。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，是提供一种同时测定食品中5种非法添加物的方法。

本发明解决上述问题的技术方案如下：一种同时测定食品中5种非法添加物的方法，包括如下步骤：

步骤1：样品前处理

准确称取2g±0.1g待测食品，置于50mL离心管中，先加入两种同位素内标工作液，再加入5mL蒸馏水，振荡混匀，再加入15mL色谱级乙腈，涡旋振荡后，加入8g无水硫酸镁和1.0g无水醋酸钠并迅速振摇，再涡旋振荡，离心，取上清液，即为待净化溶液；

步骤2：净化处理

吸取1.5mL步骤1的待净化溶液，加入300mg吸附净化试剂，涡旋振荡后，再离心，取上清液，过滤后，取滤液，即为上机溶液；

步骤3：非法添加物测定

取步骤2的上机溶液，用三重四级杆液质联用仪测定得到5种非法添加物的含量。

本发明的同时测定食品中5种非法添加物的方法的原理说明：

本发明的步骤1中，采用改进的样品前处理方法，缩短了样品的前处理时间，提高了分析效率，简化了操作流程。

本发明的步骤2中，采用改进的吸附净化试剂，可以达到快速净化的效果。

本发明的步骤3中，采用三重四级杆液质联用仪进行快速定性定量检测，具有灵敏度度高、检出限低等优势。

综上，本发明的待测食品通过水溶解分散后，乙腈进行提取，盐析分层，采用快速净化方式，最后进行检测定量分析。

本发明的同时测定食品中5种非法添加物的方法的有益效果是：

1、本发明的方法，具有灵敏度高、重复性好、检出限低和准确性高的优点，可同时实现食品中5种非法添加物的检测。

2、本发明的方法，操作简单，成本低廉，市场前景广阔，适合规模化推广应用。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。

进一步，步骤1中，所述离心管为聚四氟乙烯具塞离心管。

采用上述进一步的有益效果是：聚四氟乙烯具塞离心管耐高低温性，以及耐腐蚀性、耐绝缘性。

进一步，步骤1中，所述两种同位素内标工作液为吗啡-D3和可待因-D3，体积均为100μL。

采用上述进一步的有益效果是：采用内标法定量，能够校准和消除由于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，可以提高分析结果的准确度。

进一步，步骤1中，所述振荡混匀的时间均为1min。

采用上述进一步的有益效果是：采用上述参数，混匀的效果更好。

进一步，步骤1中，当所述食品为酱油类时，在加入所述15mL色谱级乙腈前，需加入10mL蒸馏水。

采用上述进一步的有益效果是：因为酱油类食品比较粘稠，在加入乙腈前，先加入蒸馏水，便于样品的充分分散。

进一步，步骤1中，所述涡旋振荡的时间均为1min。

进一步，步骤1中，所述离心的转速为4000r/min，时间为5min。

采用上述进一步的有益效果是：采用上述参数，离心的效果更好。

进一步，步骤2中，所述吸附净化试剂由60mg的乙二胺-N-丙基硅烷、120mg的C₁₈粉末和120mg硫酸镁组成。

采用上述进一步的有益效果是：在样品前处理的净化中，可以通过加入吸附剂用于吸附样品中的部分基质，能够有效降低基质效应。其中，乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)是键合在硅胶上面的，主要用来去除油脂，长链脂肪酸和蜡质等干扰。C₁₈粉末为反相吸附剂，可以有效去色素类、甾醇类等非极性杂质。硫酸镁主要为吸水作用，使乙腈层析。采用上述原料组成的吸附净化试剂，吸附净化的效果更好。

进一步，步骤2中，所述涡旋振荡的时间为1mim。

采用上述进一步的有益效果是：采用上述参数，吸附的效果更好。

进一步，步骤2中，所述离心的转速为4000r/min，时间为2min。

采用上述进一步的有益效果是：采用上述参数，离心的效果更好

进一步，步骤2中，所述过滤采用孔径为0.22μm的滤膜。

采用上述进一步的有益效果是：采用上述参数的滤膜，过滤的效果更好。

进一步，步骤3中，所述三重四级杆液质联用仪的测定参数为：

(1)色谱条件：

色谱柱：BEH HILIC亲水柱，规格为2.1mm×100mm，1.7μm，柱温：35℃；洗针溶液：乙腈和水按体积比为10:90的混合液；流动相A为0.1％甲酸乙腈，流动相B为含体积分数为0.1％甲酸和10mmol/L甲酸胺的水溶液；流速为0.3mL/min；进样量为1μL；梯度洗脱为:0min-1min，流动相中流动相A和流动相B的体积比为95:5；1min-3min，流动相中流动相A和流动相B的体积比为75:25；3min-6min，流动相中流动相A和流动相B的体积比为95:5；柱压为1000bar；

(2)质谱条件

离子化方式：电喷雾电离；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测。

采用上述进一步的有益效果是：离子参数均为采用电喷雾电离的方式将母离子分子量进行碰撞打碎，其中通过优化不同的碰撞能量，使子离子的响应值及灵敏度更高。

进一步，步骤3中，所述5种非法添加物是指罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因。

采用上述进一步的有益效果是：上述5种物质均为食品中非法添加风险系数高的指标，对上述5种物质同时进行检测，更能进一步反应食品的安全情况，从而建立快速、准确的检测方法。

其中罂粟碱、那可丁和蒂巴因采用外标法定量，吗啡和可待因采用内标法定量。

附图说明

图1本发明的实施例中罂粟碱的MRM色谱图。

图2本发明的实施例中那可丁的MRM色谱图。

图3本发明的实施例中吗啡的MRM色谱图。

图4本发明的实施例中可待因的MRM色谱图。

图5本发明的实施例中蒂巴因的MRM色谱图。

图6本发明的实施例中可待因-D3的MRM色谱图。

图7本发明的实施例中吗啡-D3的MRM色谱图。

具体实施方式

以下结合具体附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

本实施例采用的主要试剂和材料：

乙腈(色谱级)；甲酸(质谱级)；甲醇(质谱级)；甲酸铵(HCOONH₄)；氢氧化钠(NaOH)；无水硫酸镁(MgSO₄)；无水醋酸钠(CH₃COONa)；盐酸罂粟碱、吗啡、那可丁、磷酸可待因和蒂巴因标准品：纯度不少于98％；内标物质：吗啡-D3和可待因-D3。

本实施例采用的主要仪器：

液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)；分析天平：感量0.1mg和0.01g；离心机：最大转速为10000r/min；超声波机；浓缩仪。

本实施例同时测定酱料中5种非法添加物的方法，包括如下步骤：

步骤1：样品前处理

准确称取2g±0.1g待测酱油，置于50mL聚四氟乙烯具塞离心管中，先加入100μL吗啡-D3内标工作液和100μL可待因-D3内标工作液，再加入5mL蒸馏水，振荡混匀，加入10mL蒸馏水，再加入15mL色谱级乙腈，涡旋振荡1min后，加入8g无水硫酸镁和1.0g无水醋酸钠并迅速振摇，再涡旋振荡1min，采用转速为4000r/min离心5min，取上清液，即为待净化溶液。

步骤2：净化处理

吸取1.5mL步骤1的待净化溶液，加入300mg吸附净化试剂，涡旋振荡1mim后，再采用转速为4000r/min，离心为2min，取上清液，过孔径为0.22μm的滤膜后，取滤液，即为上机溶液。其中，所述吸附净化试剂由60mg的乙二胺-N-丙基硅烷、120mg的C₁₈粉末和120mg硫酸镁组成。

步骤3：非法添加物测定

取步骤2的上机溶液，用三重四级杆液质联用仪测定，分别得到5种非法添加物的含量。三重四级杆液质联用仪的测定参数为：

(1)色谱条件：

(2)质谱条件

罂粟碱的MRM色谱图如图1所示；吗啡的MRM色谱图如图2所示；那可丁的MRM色谱图如图3所示；可待因的MRM色谱图如图4所示；蒂巴因的MRM色谱图如图5所示。吗啡-D3的MRM色谱图。可待因-D3的MRM色谱图，如图6所示。吗啡-D3的MRM色谱图，如图7所示。

质谱仪检测参数条件：各非法添加物组分监测离子对、定量离子对、碰撞能量见表1：

表1 5种非法添加物母离子、定量及定性离子表

检测方法证实

通过一系列的比对分析实验，各物质出峰及分离度均能满足要求。具体方法证实数据如下：

(1)线性：标准工作曲线

标准溶液浓度范围内呈线性回归方程的相关系数大于0.99，方程及相关系数见表2。

表2

序号	名称	线性回归方程	R<sup>2</sup>
				1	罂粟碱	y＝38812.7X-18595.9	0.9958
2	那可丁	y＝34064.8X-27655.8	0.9931
				3	吗啡	y＝1.7395X-0.0008	0.9982
4	可待因	y＝1.3668X+0.0060	0.9997
				5	蒂巴因	y＝17950.8X-12827.1	0.9964

(2)回收率

样品中低浓度加标回收率,回收率在60％-120％，满足相关标准要求，具体数据如表3所示。

表3

(3)检出限/定量限

方法检出限/定量限实验结果如表4所示。由表4可知，本发明的方法具有较高的灵敏度。

表4

序号	名称	检出限	定量限
				1	罂粟碱	3.5	11.5
2	那可丁	12.3	40.5
				3	吗啡	3.5	11.5
4	可待因	12.3	40.5
				5	蒂巴因	3.5	11.5

在前处理及检测条件碰撞电压改进前，罂粟碱、那可丁、吗啡、可待因和蒂巴因的检出限分别为8μg/kg、40μg/kg、8μg/kg、40μg/kg和8μg/kg。改进后，罂粟碱、那可丁、吗啡、可待因和蒂巴因的检出限分别为3.5μg/kg、12.3μg/kg、3.5μg/kg、12.3μg/kg和3.5μg/kg。由此可见，本发明大大提高了目标物的检出限值，对于低含量的非法添加检测更灵敏。

由此可见，本发明的方法，具有灵敏度高、重复性好、检出限低和准确性高的优点，可同时实现食品中5种非法添加物的检测。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种同时测定食品中5种非法添加物的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：样品前处理

步骤2：净化处理

步骤3：非法添加物测定

2.根据权利要求1所述的同时测定食品中5种非法添加物的方法，其特征在于，步骤1中，所述离心管为聚四氟乙烯具塞离心管；所述两种同位素内标工作液为吗啡-D3和可待因-D3，体积均为100μL。

3.根据权利要求1所述的同时测定食品中5种非法添加物的方法，其特征在于，步骤1中，所述振荡混匀的时间均为1min。

4.根据权利要求1所述的同时测定食品中5种非法添加物的方法，其特征在于，步骤1中，当所述食品为酱油类时，在加入所述15mL色谱级乙腈前，需加入10mL蒸馏水。

5.根据权利要求1所述的同时测定食品中5种非法添加物的方法，其特征在于，步骤1中，所述涡旋振荡的时间均为1min；所述离心的转速为4000r/min，时间为5min。

6.根据权利要求1所述的同时测定食品中5种非法添加物的方法，其特征在于，步骤2中，所述吸附净化试剂由60mg的乙二胺-N-丙基硅烷、120mg的C₁₈粉末和120mg硫酸镁组成。

7.根据权利要求1所述的同时测定食品中5种非法添加物的方法，其特征在于，步骤2中，所述涡旋振荡的时间为1mim；所述离心的转速为4000r/min，时间为2min。

8.根据权利要求1所述的同时测定食品中5种非法添加物的方法，其特征在于，步骤2中，所述过滤采用孔径为0.22μm的滤膜。

9.根据权利要求1所述的同时测定食品中5种非法添加物的方法，其特征在于，步骤3中，所述三重四级杆液质联用仪的测定参数为：

(1)色谱条件：

(2)质谱条件

10.根据权利要求1所述的同时测定食品中5种非法添加物的方法，其特征在于，步骤3中，所述5种非法添加物是指罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因。