CN114315805A - 芳环并环状内脂类硫代乙内酰脲化合物及制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种芳环并环状内脂类硫代乙内酰脲化合物及制备方法和用途，结构如式I所示，式中，各取代基的定义如说明书和权利要求书中所述。本发明的化合物对雄激素受体具有优异的拮抗活性，能够作为雄激素受体拮抗剂用于前列腺癌患者的治疗。
Description
技术领域
本发明涉及药物学领域，涉及药物合成和药理学领域。更具体而言，涉及芳环并环状内脂类硫代乙内酰脲化合物及其制备方法和应用，尤其是用于前列腺癌患者的治疗。
背景技术
前列腺癌(Prostate Cancer,PCa)是男性泌尿生殖系统常见的恶性肿瘤，是美国男性第二大致死性的癌症。在我国随着人口老龄化以及饮食结构的变化，前列腺癌患者的发病率和死亡率近年来上升趋势明显，并且随着年龄的增加其发病率升高。据2019年国家癌症中心发布的全国癌症统计数据显示，前列腺癌已位居我国男性癌症发病率第六位，每年新增约6万例。与欧美发达国家相比，我国多数前列腺癌患者确诊时已属于中晚期，死亡率明显高于发达国家，因此，我国前列腺癌的防治形势更为严峻。
雄激素受体信号通路的过度活化是导致前列腺癌发生发展的根本原因。因此靶向该信号通路成为治疗前列腺癌的标准治疗手段。但是前期的雄激素剥夺疗法(ADT)在治疗一段时间后会产生耐药，发展成为去势抵抗前列腺癌(CRPC)。而最终发展成为CRPC大部分是由于雄激素受体(AR)的过表达、雄激素受体配体结合域的点突变以及剪切变异体的存在，因此AR成为治疗前列腺癌的重要靶点。
AR属于核受体(nuclear receptor)超家族，由四个功能域组成。N-末端域，是最不保守的区域，它包括一个转录激活域(AF1)，负责在配体非依赖模式下，调节基因转录。与N-末端域相邻的是DNA结合域(DBD)，由2个锌指结构基元组成，介导AR结合到DNA特定基因的识别元件上，是最保守的区域。连接着DBD和配体结合域(LBD)的是短而灵活的铰链序列，包含一个核定位信号区，负责激活后的核定位。C-末端配体结合域，包含第二激活功能域(AF-2)，介导AR配体依赖性的转录激活，蛋白与蛋白相互作用，招募共活化因子。正常状态下，未活化的雄激素受体位于细胞质中并与热休克蛋白结合(HSPs)，当与二氢睾酮(DHT)结合后，随之与HSPs蛋白分离，其构象发生改变，使AR环化并形成活化的二聚体结构；在共活化因子(coactivators)的作用下二聚体进入细胞核与靶基因的雄激素反应元件(AREs)结合，诱导靶基因的转录。对细胞的生长、增殖和分化产生相应的生物效应。
AR拮抗剂通过与内源性的雄激素竞争性的结合到雄激素受体的配体结合域，起到抑制雄激素受体活性，进而抑制前列腺癌细胞增殖的作用。根据其化学结构，可分为甾体类AR拮抗剂和非甾体类AR拮抗剂。甾体类AR拮抗剂是由羟孕酮的衍生物合成而来，其代表药物为醋酸环丙孕酮，但是因为甾体类药物有许多缺点，比如肝脏毒性、男性乳房症、干扰性欲、心血管系统副作用和较低的治疗效率，限制了他们在临床上的应用，而非甾体类药物抗雄激素的活性较好，不存在甾体类药物的激素样副作用，所以在临床上更为常用。
传统的AR拮抗剂目前有两代。第一代代表性的药物有：氟他胺、比卡鲁胺、尼鲁米特。第二代代表性的药物有：恩杂鲁胺、阿帕他胺等。随着第一代AR拮抗剂在临床上的使用，雄激素受体LBD的877位苏氨酸突变为丙氨酸(T877A)及741位色氨酸突变为亮氨酸或半胱氨酸(W741L/C)，可分别导致氟他胺和比卡鲁胺失去拮抗活性转变为受体激动剂，这也是去势抵抗前列腺癌发生的主要原因。因此新型的AR拮抗剂如恩杂鲁胺、阿帕他胺增强了与突变雄激素受体的结合能力，使得雄激素受体不能与共活化物结合，从而用于去势抵抗前列腺癌患者的治疗。但是恩杂鲁胺仅有中等强度的雄激素受体拮抗活性，因此还需要开发对AR拮抗活性更强、抗肿瘤活性更强的雄激素受体拮抗剂，进一步提高临床治疗前列腺癌的效果。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新型AR拮抗剂，该系列化合物具有更强的AR拮抗活性和抗肿瘤活性。
本发明的第一方面，提供一种通式(I)所示的化合物，或其水合物、溶剂化物、对映异构体、非对映异构体、外消旋体或其药学上可接受的盐，
其中，n为0、1、2或3；A为CH或者N；B为CH、CX或者N；X的数量为0-3个，在出现处各自独立为羟基、氨基、氰基、NO2、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基或C1-6卤代烷基；
R1和R2各自独立地为取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C1-6烷氧基、取代或未取代的C3-6环烷基或氢；或者R1、R2和与它们相连的碳原子一起形成取代或未取代的3-8元环烷基、取代或未取代的4-6元杂环烷基；所述取代是指被选自下组的一个或多个基团取代：羟基、氨基、巯基、卤素、氰基、NO2、CF3；所述杂环烷基的杂原子选自：O、N或S。
在另一优选例中，所述化合物具有如下结构：
在另一优选例中，所述化合物具有如下结构：
在另一优选例中，n为0或1。在另一优选例中，X为F、Cl或者CF3。
在另一优选例中，R1和R2各自独立地为取代或未取代的C1-4烷基、取代或未取代的C3-6环烷基或氢；或者R1、R2和与它们相连的碳原子一起形成取代或未取代的3-6元环烷基、取代或未取代的4-6元氧杂环烷基；所述取代是指被选自下组的一个或多个基团取代：羟基、氨基、巯基、卤素、氰基、NO2、CF3。
在另一优选例中，氧杂环烷基包含1、2或3个氧原子，较佳为1-2个氧原子，更加为1个氧原子。
在另一优选例中，所述化合物选自：
在另一优选例中，通式(I)的芳环并环状内脂类硫代乙内酰脲化合物与有机碱或无机碱形成的药学上可接受的盐或者与有机酸或无机酸形成药学上可接受的盐。所述药学上可接受的盐非限制性地包括碱金属和碱土金属盐，如钠盐，钾盐，镁盐，钙盐等；铵盐；无机酸盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、硝酸盐、硫酸盐、磷酸盐等；有机酸盐，如甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、苯甲酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、烷基磺酸盐(如甲基磺酸盐、乙基磺酸盐等)、芳基磺酸盐(如苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐等)等。
本发明的通式(I)化合物，其光学异构体或其药学上可接受的盐还可以是溶剂合物的形式存在，例如水合物、醇合物、酮合物等，这些溶剂合物也包含在本发明的范围内。
本发明的第二方面，提供第一方面的化合物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(i)中间体IV与酮发生Strecker反应得到化合物V；
(ii)化合物V与中间体I-1在强碱作用下发生关环反应，紧接着进行酸性水解得到终产物通式(I)所示的化合物；
各式中，X、n、R1、R2、A和B的定义如前所述。
在另一优选例中，关环反应在强碱作用下进行。在另一优选例中，所述强碱为氢化钠、LiHMDS(双(三甲基硅基)氨基锂)、NaHMDS(双(三甲基硅基)氨基钠)或KHMDS(双(三甲基硅基)氨基钾)，最佳强碱为LiHMDS。
在另一优选例中，所述水解为酸性水解。在另一优选例中，在稀盐酸或稀硫酸存在下水解。
在另一优选例中，所述制备方法包括以下步骤：
a.将中间体IV溶于各种脂肪酮或者环酮(丙酮、环丁酮、环戊酮或环己酮)中，在TMSCN(三甲基氰硅烷)存在下于40℃反应两个小时，得到中间体V。反应的温度为rt-60℃，最佳反应温度为40℃。
b.将中间体IV溶于超干的四氢呋喃溶剂中于-78℃下搅拌，然后缓慢滴加强碱，滴加完毕后于-78℃搅拌半小时，紧接着将中间体I-1溶于超干的四氢呋喃缓慢加入到体系中，接着在室温下反应一个小时。
c.上一步得到的亚胺化合物在质子性极性溶剂中酸性条件下于80℃进行水解得到最终的化合物I。此处的质子性极性溶剂中可以是：甲醇、乙醇，最佳溶剂为甲醇；此处的酸性条件可以是：稀盐酸、稀硫酸，以2N盐酸为最佳。
n、A、B、X、R1、R2定义如前。
在另一优选例中，中间体I-1则可以通过原料VI与硫光气反应得到：
其中A定义如前所述。
在另一优选例中，将原料VI溶于极性溶剂中于室温下搅拌，然后缓慢滴加硫光气，滴加完毕后于室温下反应2-4小时即可得到中间体I-1。此处的极性溶剂可以是：水、二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺，以水为溶剂反应最佳。
本发明中，制备方法的条件，例如反应物、溶剂、碱、所用化合物的量、反应温度、反应所需时间等不限于所描述的。本发明化合物还可以任选将在本说明书中描述的或本领域已知的各种合成方法组合起来而方便地制得，这样的组合可由本发明所属领域的技术人员容易的进行。
本发明的第三方面，提供一种药物组合物，包含：第一方面所述的通式(I)所示的化合物，或其水合物、溶剂化物、对映异构体、非对映异构体、外消旋体或其药学上可接受的盐；和药学上可接受的载体。
本发明的第四方面，提供第一方面所述的通式(I)所示的化合物或第三方面所述的药物组合物用途，用于制备雄激素受体拮抗剂；或用于制备预防和/或治疗雄激素受体相关疾病的药物。
在另一优选例中，所述雄激素受体相关疾病选自：前列腺癌、去势抵抗前列腺癌、乳腺癌、骨质疏松症、消化系统疾病。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。说明书中所揭示的各个特征，可以被任何提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
本申请的发明人经过广泛而深入地研究，设计、合成了一系列芳环并环状内脂类硫代乙内酰脲化合物，结构通式如式I所示，体外雄激素受体拮抗活性测试和LNCaP以及LNCaP/AR细胞增殖抑制活性测试结果表明，该类化合物是更加安全有效的雄激素受体拮抗剂，能用于前列腺癌患者的治疗。在此基础上，完成了本发明。
术语
在本发明中，除非特别指出，所用术语具有本领域技术人员公知的一般含义。
在本发明中，所述卤素为F、Cl、Br或I。
在本发明中，术语“C1-C6”是指具有1、2、3、4、5或6个碳原子，“C1-C4”是指具有1、2、3或4个碳原子，依此类推。“3-8元”是指具有3-8个环原子，依此类推。
在本发明中，术语“烷基”表示饱和的线性或支链烃部分，例如术语“C1-C6烷基”是指具有1至6个碳原子的直链或支链烷基，非限制性地包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和已基等；优选乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。
在本发明中，术语“烷氧基”表示-O-(C1-6烷基)基团。例如术语“C1-C6烷氧基”是指具有1至6个碳原子的直链或支链烷氧基，非限制性地包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基和丁氧基等。
在本发明中，术语“环烷基”表示饱和的环状烃基部分，例如术语“C3-C8环烷基”是指在环上具有3至8个碳原子的环状烷基，非限制性地包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基等。术语“C3-C6环烷基”具有类似的含义。
在本发明中，术语“杂环烷基”表示包含至少一个环杂原子(例如N，O或S)的环状基团，例如呋喃基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、咪唑基、噻唑基、吡啶基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、嘧啶基、四氢吡啶基、吡咯啉基、二氢吡啶基、二氢呋喃基、二氢噻吩基、吡喃基。
除非另外说明，本文所述的烷基、环烷基、杂环烷基为取代的和未取代的基团，可能的取代基包括，但不限于：羟基、氨基、硝基、腈基、卤素、C1-C6烷基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、C3-C20环烷基、C3-C20环烯基、C1-C20杂环烷基、C1-C20杂环烯基、C1-C6烷氧基、芳基、杂芳基、杂芳氧基、C1-C10烷基氨基、C1-C20二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、C1-C10烷基氨磺酰基、芳基氨磺酰基、C1-C10烷基亚氨基、C1-C10烷基磺基亚氨基、芳基磺基亚氨基、巯基、C1-C10烷硫基、C1-C10烷基磺酰基、芳基磺酰基、酰基氨基、氨酰基、氨基硫代酰基、胍基、脲基、氰基、酰基、硫代酰基、酰氧基、羧基和羧酸酯基。另一方面，环烷基、杂环烷基、杂环烯基、芳基和杂芳基也可互相稠合。
本发明中，所述取代为单取代或多取代，所述多取代为二取代、三取代、四取代、或五取代。所述二取代就是指具有两个取代基，依此类推。
药物组合物
本发明还提供了一种药物组合物，它包含安全有效量范围内的活性成分，以及药学上可接受的载体。
本发明所述的“活性成分”是指本发明所述的式I化合物。
本发明所述的“活性成分”和药物组合物用于制备治疗雄激素受体相关疾病药物。本发明所述的“活性成分”和药物组合物可用作雄激素受体拮抗剂。所述雄激素受体相关疾病选自：前列腺癌、去势抵抗前列腺癌、乳腺癌、骨质疏松症、消化系统疾病。
“安全有效量”指的是：活性成分的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg活性成分/剂，更佳地，含有10-200mg活性成分/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个药片。
“药学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的活性成分以及它们之间相互掺和，而不明显降低活性成分的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如
)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。
本发明的活性成分或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)等。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性成分外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。
除了活性成分外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
本发明化合物可以单独给药，或者与其他治疗药物(如抗肿瘤药)联合给药。
使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选20～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件(如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress，1989)中所述的条件)或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
下面的具体实施例，其目的是使本领域的技术人员能更清楚地理解和实施本发明。它们不应该被认为是对本发明范围的限制，而只是本发明的示例性说明和典型代表。本领域技术人员应该理解，形成本发明化合物还有其他的合成路径，下面提供的是非限制性的实施例。
使用薄层色谱法(TLC)在硅胶F-254TLC板上监测所有反应。使用硅胶(200-300目)进行柱色谱。化合物的结构是通过核磁共振(NMR)来确定的。测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)或氘代氯仿(CDCl3)。1H和13C NMR的测定是通过Bruker 400，Bruker 500或Bruker600NMR光谱仪。化学位移(δ)以百万分之一(ppm)表示，耦合常数(J)以赫兹(Hz)表示。质谱的测定是用Finnigan MAT95质谱仪获得电子电离(EI)质谱、用Krats MS 80质谱仪上获得电喷雾电离(ESI)质谱，以1290-6545UHPLC-QTOF药物小分子结构解析高分辨质谱仪获得高分辨质谱。通过分析型高效液相色谱法(PLATISIL ODS 250mm×4.6mm，粒径5μm)，以乙腈/水为流动相，将所有最终化合物纯化至>95％的纯度。
实施例1：4-(4,4-二甲基-5-氧代-3-(1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-2-硫代咪唑烷-1-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物1)
5-氨基异苯并呋喃-1(3H)-酮(22)
将硫酸铜(35mg，0.22mmol，0.007当量)溶于1.5mL水中，然后将锌粉(5.5g，84.11mmol，2.8当量)加入到溶液中，然后添加20％氢氧化钠溶液12.75g，在冰浴中搅拌反应几分钟后，再加入5-氨基异吲哚啉-1,3-二酮(5.00g，30.84mmol，1当量)。将反应混合物在60℃搅拌4h，TLC监测表明反应完成。将反应冷却至室温进行抽滤，然后将滤饼用少量水洗涤以获得滤液，然后用浓盐酸将pH调节至3-4，此时大量沉淀出固体，进行抽滤，得到黄色固体。将其溶于10mL水和10mL浓盐酸中，缓慢将温度升至100℃反应1h，将体系冷却至室温后用20％氢氧化钠溶液将pH调节至8-9。此时，大量固体沉淀出来，进行抽滤得到粉红色固体，将其置于50℃的真空干燥箱中，最终得到3.2g固体，产率为69.58％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.45(d,J＝8.4Hz,1H),6.67(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),6.59(d,J＝1.8Hz,1H),6.26(s,2H),5.16(s,2H).
2-甲基-2-((1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)氨基)丙腈(23)
将22(0.5g，3.35mmol，1当量)溶于2mL丙酮中，然后依次加入氯化锌(46mg，0.33mmol，0.1当量)和三甲基硅氰(1.26mL，10.06mmol，3当量)于40℃反应2h。待TLC板监测反应完全后，将反应体系浓缩，然后用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(30％-60％乙酸乙酯/石油醚)，得到所需产物。获得白色固体576mg，产率78.22％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.63(d,J＝9.0Hz,0H),7.18(s,0H),6.97(d,J＝2.1Hz,0H),6.96–6.94(m,0H),5.29(s,0H),1.72(s,1H).
4-异硫氰基-2-(三氟甲基)苯甲腈(24)
将硫光气(0.45mL，5.91mmol，1.1当量)溶解于20mL水中于室温下搅拌，然后将4-氨基-2-三氟甲基苯甲腈(1g，5.37mmol，1当量)分批加入到溶液中。将反应混合物在室温下搅拌4h，TLC监测表明反应完全。然后将溶液用二氯甲烷进行萃取，有机相用用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(0-10％乙酸乙酯/石油醚)，得到所需产物。获得浅黄色油状物898mg，产率为73.25％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.87(d,J＝8.3Hz,1H),7.61(d,J＝2.1Hz,1H),7.51(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H).
4-(4,4-二甲基-5-氧代-3-(1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-2-硫代咪唑烷-1-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物1)
将23(300mg，1.39mmol，1当量)溶于无水四氢呋喃中于-78℃下搅拌，然后逐滴滴加1M双(三甲基硅基)氨基锂的THF溶液(1.39mL，1.39mmol，1当量)。滴加完毕后，将混合物在-78℃下搅拌0.5h，然后将溶解在无水四氢呋喃中的24(380mg，1.66mmol，1.2当量)缓慢加入其中。紧接着将反应混合物移至室温搅拌1h，TLC监测表明反应完全。然后直接向反应体系中加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(30％-60％乙酸乙酯/石油醚)，得到初步的亚胺化合物。随后向得到的化合物中加入8mL甲醇和5mL 2N盐酸在80℃下搅拌2h。待反应完全后，用乙酸乙酯进行萃取，有机相用用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(30％-100％乙酸乙酯/石油醚)，得到所需产物。得到白色固体36mg，收率为4.85％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(d,J＝8.3Hz,1H),8.33(d,J＝1.9Hz,1H),8.12(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),8.07(d,J＝8.1Hz,1H),7.75(dd,J＝1.8,0.8Hz,1H),7.63(dd,J＝8.1,1.7Hz,1H),5.52(s,2H),1.56(s,6H).
实施例2：5-(4,4-二甲基-5-氧代-3-(1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-2-硫代咪唑烷-1-基)-3-(三氟甲基)吡啶甲腈(化合物2)
5-异硫氰基-3-(三氟甲基)吡啶甲腈(25)
将硫光气(0.489mL，6.4mmol，1.2当量)溶解于20mL水中于室温下搅拌，将5-氨基-3-(三氟甲基)氰基吡啶(1g，5.37mmol，1当量)分批次加入溶液中。将反应混合物在室温搅拌4h，TLC监测表明反应完全。然后将溶液用二氯甲烷进行萃取，有机相用用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(0-10％乙酸乙酯/石油醚)，得到所需产物。最终得到淡黄色油状物540mg，产率44.09％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.76(d,J＝2.3Hz,1H),7.88(d,J＝2.3Hz,1H).
5-(4,4-二甲基-5-氧代-3-(1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-2-硫代咪唑烷-1-基)-3-(三氟甲基)吡啶甲腈(化合物2)
按照合成化合物1的方法来合成化合物2，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.28(d,J＝2.0Hz,1H),8.85(d,J＝2.0Hz,1H),8.08(d,J＝8.1Hz,1H),7.76(d,J＝1.7Hz,1H),7.62(dd,J＝8.1,1.7Hz,1H),5.52(s,2H),1.58(s,7H).
实施例3：4-(4,4-二甲基-5-氧代-3-(1-氧代异吡喃-6-基)-2-硫代咪唑烷-1-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物3)
4-氨基-2-溴苯甲酸甲酯(26)
将2-溴-4-硝基苯甲酸甲酯(10g，38.46mmol，1当量)溶于80mL乙醇和20mL水中，于室温下搅拌几分钟，然后依次将Fe(6.44g，115.3mmol，3当量)和NH4Cl(8.23g，153.8mmol，4当量)加入到溶液中，并缓慢升温至70℃。将反应混合物在70℃搅拌5.5h，TLC监测表明反应完成。然后用硅藻土过滤溶液，得到滤液，并用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤并浓缩，得到所需产物。最终得到8.05g白色固体，产率90.99％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.64(d,J＝8.6Hz,1H),6.87(d,J＝2.2Hz,1H),6.55(dd,J＝8.6,2.2Hz,1H),6.17(s,2H),3.73(s,3H).
4-((叔丁氧羰基)氨基)-2-乙烯基苯甲酸甲酯(28)
将26(844mg，3.67mmol，1当量)，4-二甲氨基吡啶(4-二甲氨基吡啶)(45mg，0.367mmol，0.1当量)和三乙胺(1.53mL，11.01mmol，3当量)溶于无水四氢呋喃中，于室温下搅拌，然后将二碳酸二叔丁酯(1.68mL，7.34mmol，2当量)逐滴加入到溶液中。待反应完毕后，将反应溶液减压浓缩，然后用乙酸乙酯进行萃取，收集有机相，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(10％-15％乙酸乙酯/石油醚)得到混合物，最终得到淡黄色油状物523mg，用于下一步。
将上一步得到的化合物置于微波管中，加入5mL DMF溶解，然后加入三丁基(乙烯基)锡(0.5mL，1.72mmol，1.5当量)和四(三苯基膦)钯(0.13g，0.11mmol，0.1当量)。将反应体系置于微波中持续反应2.5h(100W,110℃)。待反应结束后将体系冷却至室温，用乙酸乙酯进行萃取，有机相用用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(0-10％乙酸乙酯/石油醚)，得到所需产物。最终获得白色固体570mg。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.75(s,0H),7.79(d,J＝6.4Hz,0H),7.78(s,0H),7.51(dd,J＝8.7,2.2Hz,0H),7.44(dd,J＝17.5,10.9Hz,0H),5.59(dd,J＝17.4,1.4Hz,0H),5.34(dd,J＝10.9,1.4Hz,0H),3.79(s,0H),1.49(s,1H).
4-((叔丁氧羰基)氨基)-2-(2-羟乙基)苯甲酸甲酯(29)
将28(570mg，2.06mmol，1当量)溶于无水四氢呋喃中于冰浴中搅拌，然后将0.5M9-硼双环[3.3.1]壬烷9-硼双环[3.3.1]壬烷的THF溶液(20mL，10.3mmol，5当量)置于恒压滴液漏斗中，缓慢滴加到体系中。待滴加完毕后移走冰浴于室温下反应，搅拌12小时，然后向体系中加入1N氢氧化钠(1mL)和30％H2O2(1.8mL)。接着将反应混合物在室温下搅拌2h，TLC监测表明反应完成。然后旋转蒸发浓缩溶液，用乙酸乙酯进行萃取。有机相用用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(20％-50％乙酸乙酯/石油醚)，得到所需产物。最终获得无色油状物267mg，产率为43.98％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.68(s,1H),7.75(d,J＝8.7Hz,1H),7.44(d,J＝2.2Hz,1H),7.40(dd,J＝8.6,2.2Hz,1H),3.78(s,3H),3.54(td,J＝7.2,5.4Hz,3H),3.08–3.00(m,2H),1.48(s,9H).
6-氨基异吡喃-1-酮(30)
将29(276mg，0.934mmol，1当量)溶于9mL二氧六环和3mL水中于室温下搅拌，然后向溶液中加入0.5mL 2N盐酸，并将体系缓慢升温至100℃，搅拌反应2h。待TLC监测反应完成后，将混合物冷却至室温，并用饱和NaHCO3溶液调节反应体系至中性，然后用乙酸乙酯进行萃取。有机相用用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(30％-60％乙酸乙酯/石油醚)，得到所需产物。最终得到白色固体70mg，产率为45.90％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.58(d,J＝8.5Hz,1H),6.51(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),6.37(d,J＝2.2Hz,1H),6.14(s,2H),4.34(t,J＝6.0Hz,2H),2.84(t,J＝6.0Hz,2H).
2-甲基-2-((1-氧代异吡喃-6-基)氨基)丙腈(31)
按照合成化合物23的方法来合成化合物31，得到咖啡色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.74(d,J＝8.6Hz,1H),7.06(s,1H),6.81(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),6.69(d,J＝2.3Hz,1H),4.41(t,J＝6.0Hz,2H),2.96(t,J＝6.0Hz,2H),1.70(s,6H).
4-(4,4-二甲基-5-氧代-3-(1-氧代异吡喃-6-基)-2-硫代咪唑烷-1-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物3)
按照合成化合物1的方法来合成化合物3，得到白色固体。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝8.2Hz,1H),8.32(d,J＝2.0Hz,1H),8.14–8.09(m,2H),7.48(d,J＝6.9Hz,2H),4.58(t,J＝6.0Hz,2H),3.17(t,J＝6.0Hz,2H),1.55(s,6H).
实施例4：4-(4,4-二甲基-5-氧代-3-(7-氧代-5,7-二氢呋喃[3,4-b]吡啶-3-基)-2-硫代咪唑烷-1-基-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物4)
3-甲基-5-硝基吡啶甲酸甲酯(32)
将3-甲基吡啶甲酸甲酯(5g，33.08mmol，1当量)溶解于超干二氯甲烷中，在氮气保护下于冰浴搅拌，然后将四丁基硝酸铵(11g，36.13mmol，1.1当量)和三氟乙酸酐(4.6mL，33mmol,1当量)溶解于无水二氯甲烷，缓慢加入到溶液中搅拌2小时。然后将反应混合物在室温下搅拌10h，TLC监测反映完全后将溶液浓缩，用乙酸乙酯萃取，有机相用用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(10％-15％乙酸乙酯/石油醚)得到所需产物。最终得到白色固体3.79g，产率58.41％。1HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ9.33–9.30(m,1H),8.44(dq,J＝2.2,0.7Hz,1H),4.05(s,3H),2.73(t,J＝0.7Hz,3H).
3-溴甲基-5-硝基吡啶甲酸甲酯(33)
将32(2.96g，15.09mmol，1当量)和N-溴代丁二酰亚胺(4.03g，22.63mmol，1.5当量)溶解于四氯化碳溶液中，在氩气保护下于室温搅拌，然后将偶氮二异丁腈(246mg，1.5mmol，0.1当量)加入到反应体系中。接着将反应缓慢加热至80℃并搅拌11.5h。待TLC监测反应完成后，将混合物减压浓缩并通过硅胶色谱法纯化(10％-20％乙酸乙酯/石油醚)，得到所需产物。最终得到1.84g白色固体，产率44.33％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ9.41(d,J＝2.4Hz,1H),8.71(d,J＝2.4Hz,1H),4.97(s,2H),4.09(s,3H).
3-硝基呋喃并[3,4-b]吡啶-7(5H)-酮(34)
将33(3.27g，11.89mmol，1当量)溶于20mL二氧六环和7mL水中，并在100℃下搅拌，在该温度下搅拌反应12h，TLC监测反应完全后，将溶液冷却至室温，用乙酸乙酯进行萃取，有机相用用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(20％-50％乙酸乙酯/石油醚)，得到所需产物。最终得到浅黄色固体880mg，产率为41.10％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.58(dd,J＝2.3,0.9Hz,1H),9.03(dd,J＝2.3,0.8Hz,1H),5.56(t,J＝0.8Hz,2H).
3-氨基呋喃并[3,4-b]吡啶-7(5H)-酮(35)
将34(0.88g，4.89mmol，1当量)溶解于无水甲醇中于室温下搅拌，然后将Pd/C(26mg，0.244mmol，0.05当量)添加到该溶液中。将反应体系在氢气保护下于室温搅拌8h，TLC监测表明反应完成。然后用硅藻土过滤除去Pd/C，得到滤液，接着减压浓缩滤液并通过硅胶色谱法纯化(0-5％甲醇/二氯甲烷)，得到所需产物。最终获得浅黄色固体343mg，收率为46.76％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.10(d,J＝2.4Hz,1H),6.95(d,J＝2.4Hz,1H),6.52(s,2H),5.23(s,2H).
2-甲基-2-((7-氧代-5,7-二氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-基)氨基)丙腈(36)
按照合成化合物23的方法来合成化合物36，得到浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.33(d,J＝2.6Hz,0H),7.55(s,0H),7.37(d,J＝2.6Hz,0H),5.35(s,0H),1.73(s,1H).
4-(4,4-二甲基-5-氧代-3-(7-氧代-5,7-二氢呋喃[3,4-b]吡啶-3-基)-2-硫代咪唑烷-1-基-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物4)
按照合成化合物1的方法来合成化合物4，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.90(d,J＝2.0Hz,1H),8.44(d,J＝8.2Hz,1H),8.32(dd,J＝15.0,2.0Hz,2H),8.13(d,J＝8.0Hz,1H),5.56(s,2H),1.60(s,6H).
实施例5：4-(7-氧代-4-(1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-5-硫代-4,6-二氮杂螺[2.4]庚-6-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物5)
5-溴异苯并呋喃-1(3H)-酮(37)
将22(2g，13.41mmol，1当量)溶解在3mL 47％氢溴酸溶液中于冰浴下搅拌几分钟，然后将亚硝酸钠(1.02g，14.74mmol，1.1当量)溶解在一些水中逐滴添加到反应液中。待反应1h后，将溶于3mL 47％HBr溶液的CuBr(2.11g，14.74mmol，1.1当量)逐滴加入到溶液中，然后将反应混合物在室温下搅拌3h，TLC监测表明反应完成。然后用乙酸乙酯进行萃取，有机相用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(0-20％乙酸乙酯/石油醚)，得到所需产物。最终得到1.38g的粉红色固体，产率48.31％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.81(d,J＝8.5Hz,1H),7.70(dtd,J＝4.8,1.7,0.8Hz,2H),5.33(s,2H).
1-((1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)氨基)环丙烷羧酸甲酯(38)
将37(400mg，1.88mmol，1当量)，1-氨基环丙烷-1-羧酸(380mg，3.76mmol，2当量)，K2CO3(777mg，5.64mmol，3当量)，碘化亚铜(215mg，1.12mmol，0.6当量)和N-N-二甲基甘氨酸盐酸盐(210mg，1.5mmol，0.8当量)溶解在二甲亚砜中，并用氩气保护，然后将反应缓慢升温至120℃反应15小时，TLC监测表明反应完成。然后将体系冷却至室温，向该体系中加入一些水，用乙酸乙酯进行萃取，收集水相，然后用2N盐酸将溶液PH调节至约6。紧接着将溶液用乙酸乙酯进行萃取，将有机相用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，减压浓缩投入下一步。
将收集的化合物溶于无水DMF中，然后将K2CO3(777mg，5.64mmol，3当量)加入到该溶液中，搅拌一段时间后加入碘甲烷(0.24mL，3.76mmol，2当量)，在30℃下搅拌4h。TLC监测反应完全后，加入冰水进行淬灭，紧接着用乙酸乙酯进行萃取，有机相用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(30-50％乙酸乙酯/石油醚)，得到所需产物。最终得到浅黄色固体135mg，产率为29.08％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.60(s,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,1H),6.74(dd,J＝8.5,2.0Hz,1H),6.68(d,J＝1.9Hz,1H),5.22(s,2H),3.59(d,J＝1.1Hz,2H),1.55(d,J＝4.5Hz,2H),1.14(d,J＝4.3Hz,2H).
4-(7-氧代-4-(1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-5-硫代-4,6-二氮杂螺[2.4]庚-6-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物5)
将38(100mg，0.4mmol，1当量)溶于无水四氢呋喃中于-78℃下搅拌，然后将1M双(三甲基硅基)氨基锂的THF溶液(0.4mL，0.4mmol，1当量)逐滴加入到溶液中，将混合物在-78℃下搅拌0.5h，然后将溶解在无水四氢呋喃中的24(111mg，0.486mmol，1.2当量)缓慢加入到溶液中。待滴加完毕后，将反应混合物在室温下搅1h，TLC监测表明反应完全。然后直接加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(30-60％乙酸乙酯/石油醚)，得到所需产物。最终获得白色固体57mg，产率31.78％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(d,J＝8.3Hz,1H),8.31(d,J＝1.9Hz,1H),8.11(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),8.04(d,J＝8.1Hz,1H),7.73(d,J＝1.6Hz,1H),7.64(dd,J＝8.1,1.7Hz,1H),5.50(s,2H),1.65–1.58(m,2H),1.47–1.41(m,2H).
实施例6：4-(8-氧代-5-(1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-6-硫代-5,7-二氮杂螺[3.4]辛-7-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物6)
1-((1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)氨基)环丁烷甲腈(39)
按照合成化合物23的方法来合成化合物39，得到浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.73–7.63(m,1H),6.78(dd,J＝8.3,2.0Hz,0H),6.68(d,J＝1.9Hz,0H),5.28(s,1H),2.79(ddt,J＝12.7,8.4,5.1Hz,1H),2.40(ddd,J＝12.4,9.4,7.5Hz,1H),2.17–2.01(m,1H).
4-(8-氧代-5-(1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-6-硫代-5,7-二氮杂螺[3.4]辛-7-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物6)
按照合成化合物1的方法来合成化合物6，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝8.3Hz,1H),8.28(s,1H),8.10(dd,J＝8.5,5.8Hz,2H),7.79(s,1H),7.65(d,J＝8.1Hz,1H),5.55(s,2H),2.66(t,J＝10.1Hz,3H),2.50–2.41(m,2H),2.04–1.91(m,1H),1.55(dd,J＝11.0,5.8Hz,1H).
实施例7：4-(4-氧代-1-(1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-2-硫代-1,3-二氮杂螺[4.4]壬-3-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物7)
1-((1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)氨基)环戊烷甲腈(40)
按照合成化合物23的方法来合成化合物40，得到浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.63(d,J＝8.3Hz,1H),7.32(s,1H),6.91(dd,J＝11.5,2.8Hz,2H),5.28(s,2H),2.35(dt,J＝14.2,7.2Hz,2H),2.23–2.13(m,2H),1.80(td,J＝8.4,7.0,5.0Hz,4H).
4-(4-氧代-1-(1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-2-硫代-1,3-二氮杂螺[4.4]壬-3-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物7)
按照合成化合物1的方法来合成化合物7，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝8.3Hz,1H),8.32(d,J＝1.9Hz,1H),8.11(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),8.06(d,J＝8.1Hz,1H),7.82(s,1H),7.68(dd,J＝8.1,1.7Hz,1H),5.52(s,2H),2.33(dt,J＝14.0,6.8Hz,2H),2.19(dt,J＝13.8,6.0Hz,2H),1.78–1.65(m,2H),1.43–1.30(m,2H).
实施例8：4-(4-氧代-1-(1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-2-硫代-1,3-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物8)
1-((1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)氨基)环己烷甲腈(41)
按照合成化合物23的方法来合成化合物41，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.63–7.58(m,1H),7.10(s,1H),7.00–6.94(m,2H),5.27(s,2H),2.51(p,J＝1.8Hz,1H),2.42–2.33(m,2H),1.80–1.61(m,4H),1.57–1.47(m,2H),1.37–1.25(m,1H).
4-(4-氧代-1-(1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-2-硫代-1,3-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物8)
按照合成化合物1的方法来合成化合物8，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(d,J＝8.3Hz,1H),8.31(d,J＝1.8Hz,1H),8.13–8.09(m,1H),8.07(d,J＝8.1Hz,1H),7.69(s,1H),7.55(d,J＝8.1Hz,1H),5.52(s,2H),2.43(d,J＝12.8Hz,2H),2.00–1.84(m,2H),1.67–1.45(m,5H),0.98(d,J＝13.5Hz,1H).
实施例9：4-(4-氧代-1-(1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基-2-硫代-7-氧杂-1,3-二氮杂螺[4.4]壬-3-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物9)
3-((1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)氨基)四氢呋喃-3-腈(42)
按照合成化合物23的方法来合成化合物42，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.65(d,J＝8.2Hz,1H),7.59(s,1H),6.90(d,J＝8.4Hz,2H),5.30(s,2H),4.33(d,J＝9.3Hz,1H),4.00(dd,J＝8.8,5.4Hz,2H),3.97–3.87(m,1H),2.74(ddd,J＝12.9,8.0,6.6Hz,1H),2.45(ddd,J＝13.2,7.6,5.7Hz,1H).
4-(4-氧代-1-(1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基-2-硫代-7-氧杂-1,3-二氮杂螺[4.4]壬-3-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物9)
按照合成化合物1的方法来合成化合物9，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(d,J＝8.3Hz,1H),8.29(d,J＝1.8Hz,1H),8.10(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),8.05(d,J＝8.1Hz,1H),7.86(d,J＝1.6Hz,1H),7.72(dd,J＝8.2,1.6Hz,1H),5.52(s,2H),4.41(d,J＝10.6Hz,1H),3.98(d,J＝10.6Hz,1H),3.75(q,J＝7.8Hz,1H),3.49(q,J＝7.5Hz,1H),2.59(p,J＝6.8Hz,2H).
实施例10：4-(4-氧代-1-(1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基-2-硫代-8-氧杂-1,3-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物10)
4-((1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)氨基)四氢-2H-吡喃-4-腈(43)
按照合成化合物23的方法来合成化合物43，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.63(d,J＝8.3Hz,1H),7.26(s,1H),6.99(d,J＝8.6Hz,2H),5.28(s,2H),3.91(dt,J＝12.5,4.0Hz,2H),3.60(ddd,J＝12.4,10.0,2.3Hz,2H),2.45–2.36(m,2H),1.90(ddd,J＝13.7,10.0,3.9Hz,2H).
4-(4-氧代-1-(1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基-2-硫代-8-氧杂-1,3-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物10)
按照合成化合物1的方法来合成化合物10，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.43(d,J＝8.3Hz,1H),8.32(d,J＝1.9Hz,1H),8.13(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),8.09(d,J＝8.1Hz,1H),7.70(d,J＝1.6Hz,1H),7.56(dd,J＝8.0,1.7Hz,1H),5.53(s,2H),4.00–3.87(m,2H),3.80(dd,J＝11.6,4.9Hz,2H),2.43(d,J＝13.2Hz,2H),1.80(td,J＝12.9,5.2Hz,2H).
实施例11：5-(8-氧代-5-(1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-6-硫代-2-氧杂-5,7-二氮杂螺[3.4]辛-7-基)-3-(三氟甲基)吡啶甲腈(化合物11)
3-((1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)氨基)氧杂环丁烷-3-腈(44)
按照合成化合物23的方法来合成化合物44，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.96(s,1H),7.68(d,J＝8.4Hz,1H),6.74(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),6.62(d,J＝2.0Hz,1H),5.29(s,2H),5.14(d,J＝6.9Hz,2H),4.71(d,J＝6.9Hz,2H).
按照合成化合物1的方法来合成化合物11，得到白色固体。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.18(d,J＝2.1Hz,1H),8.58(d,J＝2.1Hz,1H),8.05(d,J＝8.2Hz,1H),8.02(d,J＝1.7Hz,1H),7.90(dd,J＝8.1,1.8Hz,1H),5.50(s,2H),3.74(d,J＝11.4Hz,2H),3.66(d,J＝11.4Hz,2H).
实施例12：5-(4-氧代-1-(1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-2-硫代-7-氧杂-1,3-二氮杂螺[4.4]壬-3-基)-3-(三氟甲基)吡啶甲腈(化合物12)
3-((1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)氨基)四氢呋喃-3-腈(45)
按照合成化合物23的方法来合成化合物45，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.65(d,J＝8.2Hz,1H),7.59(s,1H),6.90(d,J＝8.4Hz,2H),5.30(s,2H),4.33(d,J＝9.3Hz,1H),4.04–3.88(m,3H),2.74(ddd,J＝12.9,8.0,6.6Hz,1H),2.45(ddd,J＝13.2,7.6,5.7Hz,1H).
5-(4-氧代-1-(1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-2-硫代-7-氧杂-1,3-二氮杂螺[4.4]壬-3-基)-3-(三氟甲基)吡啶甲腈(化合物12)
按照合成化合物1的方法来合成化合物12，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.24(d,J＝2.0Hz,0H),8.78(d,J＝2.1Hz,0H),8.06(d,J＝8.1Hz,0H),7.87(d,J＝1.6Hz,0H),7.72(dd,J＝8.1,1.7Hz,0H),4.42(d,J＝10.6Hz,0H),4.01(d,J＝10.5Hz,1H),3.81–3.71(m,0H),3.51(q,J＝7.5Hz,0H),2.70–2.53(m,1H).
实施例13：5-(4-氧代-1-(1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-2-硫代-1,3-二氮杂螺[4.4]壬-3-基)-3-(三氟甲基)吡啶甲腈(化合物13)
按照合成化合物1的方法来合成化合物13，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.27(d,J＝2.1Hz,0H),8.83(d,J＝2.1Hz,0H),8.07(d,J＝8.1Hz,0H),7.82(dd,J＝1.7,0.8Hz,1H),7.67(dd,J＝8.1,1.7Hz,1H),5.53(s,1H),2.36(dt,J＝13.6,6.6Hz,1H),2.25–2.14(m,1H),1.73(q,J＝6.4Hz,1H),1.38(dt,J＝18.3,9.7Hz,1H).
实施例14：5-(4-氧代-1-(1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-2-硫代-1,3-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-(三氟甲基)吡啶甲腈(化合物14)
按照合成化合物1的方法来合成化合物14，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.27(d,J＝2.0Hz,1H),8.84(d,J＝2.1Hz,1H),8.07(d,J＝8.1Hz,1H),7.69(d,J＝1.6Hz,1H),7.54(dd,J＝8.1,1.7Hz,1H),5.52(s,2H),2.43(d,J＝12.5Hz,2H),1.99–1.84(m,3H),1.57(ddd,J＝29.8,13.9,4.5Hz,6H).
实施例15：5-(4-氧代-1-(7-氧代-5,7-二氢呋喃[3,4-b]吡啶-3-基)-2-硫代-1,3-二氮杂螺[4.4]壬-3-基)-3-(三氟甲基)吡啶甲腈(化合物15)
1-((7-氧代-5,7-二氢呋喃[3,4-b]吡啶-3-基)氨基)环戊烷甲腈(46)
按照合成化合物23的方法来合成化合物46，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(d,J＝2.5Hz,1H),7.66(s,1H),7.31(d,J＝2.5Hz,1H),5.34(s,2H),2.38(dt,J＝13.7,7.1Hz,2H),2.25–2.11(m,3H),1.87–1.74(m,5H).
5-(4-氧代-1-(7-氧代-5,7-二氢呋喃[3,4-b]吡啶-3-基)-2-硫代-1,3-二氮杂螺[4.4]壬-3-基)-3-(三氟甲基)吡啶甲腈(化合物15)
按照合成化合物1的方法来合成化合物15，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.31–9.22(m,1H),8.97–8.87(m,1H),8.86–8.80(m,1H),8.41–8.33(m,1H),5.57(s,2H),2.39(dt,J＝13.8,6.6Hz,2H),2.21(dt,J＝14.0,6.5Hz,3H),1.73(dt,J＝16.5,8.4Hz,2H),1.49–1.35(m,2H).
实施例16：4-(4-氧代-1-(1-氧代异吡喃-6-基)-2-硫代-1,3-二氮杂螺[4.4]壬-3-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物16)
1-((1-氧代异吡喃-6-基)氨基)环戊烷甲腈(47)
按照合成化合物23的方法来合成化合物47，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.75(d,J＝8.6Hz,1H),7.17(s,1H),6.77(dd,J＝8.7,2.3Hz,1H),6.63(d,J＝2.0Hz,1H),4.41(t,J＝6.0Hz,2H),2.96(t,J＝6.0Hz,2H),2.40–2.28(m,2H),2.16(dt,J＝13.0,6.2Hz,2H),1.84–1.73(m,4H).
4-(4-氧代-1-(1-氧代异吡喃-6-基)-2-硫代-1,3-二氮杂螺[4.4]壬-3-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物16)
按照合成化合物1的方法来合成化合物16，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝8.3Hz,0H),8.30(s,0H),8.10(dd,J＝8.0,4.5Hz,1H),7.53(d,J＝10.4Hz,1H),4.57(t,J＝6.0Hz,1H),3.16(t,J＝6.1Hz,1H),2.38–2.28(m,1H),2.18(dt,J＝13.9,6.8Hz,1H),1.72(s,1H),1.37(d,J＝27.7Hz,1H).
实施例17：4-(3-(7-氟-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-4,4-二甲基-5-氧代-2-硫代咪唑烷-1-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物17)
4-溴-3-氟-5-甲基苯胺(48)
将3-氟-5-甲基苯胺(10g，79.91mmol，1当量)溶于30mL超干DMF中，于冰浴下搅拌几分钟，然后将N-溴代丁二酰亚胺(14.93g，83.9mmol，1.05当量)分批次加入到溶液中，加入完毕后在冰浴下搅拌半小时后移至室温过夜反应。TLC监测表明反应完成，然后向体系中加入一定量水，并用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(0-10％乙酸乙酯/石油醚)，得到所需产物。最终获得白色固体6.8g，产率为41.71％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ6.39(dq,J＝2.6,0.9Hz,1H),6.33(dd,J＝10.1,2.6Hz,1H),3.73(s,2H),2.34(d,J＝0.7Hz,3H).
(4-溴-3-氟-5-甲基苯基)氨基甲酸叔丁酯(49)
将48(4.8g，23.52mmol，1当量)溶于超干四氢呋喃中，于冰浴下搅拌几分钟，然后将4-二甲氨基吡啶(287mg，2.35mmol，0.1当量)，三乙胺(9.8mL，70.56mmol，3当量)依次加入到溶液中，加入完毕后在冰浴下搅拌半小时后缓慢滴加二碳酸二叔丁酯二碳酸二叔丁酯(10.8mL，47.04mmol,2当量)，待滴加完毕后移至室温过夜反应。TLC监测表明反应完成，然后向体系中加入一定量水，并用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(0-5％乙酸乙酯/石油醚)，得到所需产物。最终获得黄色固体4.55g，产率为63.59％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.21(dd,J＝10.5,2.5Hz,1H),6.99–6.95(m,1H),6.70(s,1H),2.36(s,3H),1.52(s,9H).
(3-氟-5-甲基-4-乙烯基苯基)氨基甲酸叔丁酯(50)
将49(4.55g，14.96mmol，1当量)置于微波管中，加入8mL DMF溶解，然后加入三丁基(乙烯基)锡(6mL，22.44mmol，1.5当量)和四(三苯基膦)钯(0.846g，1.5mmol，0.1当量)。将反应体系置于微波中持续反应3h(100W,110℃)。待反应结束后将体系冷却至室温，用乙酸乙酯进行萃取，有机相用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(0-10％乙酸乙酯/石油醚)，得到所需产物。最终获得白色固体2.77g，产率为73.68％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.13(dd,J＝12.9,2.2Hz,1H),6.91–6.87(m,1H),6.62(dd,J＝17.9,11.8Hz,1H),6.52(s,1H),5.72(dt,J＝17.9,1.7Hz,1H),5.49(dt,J＝11.8,1.9Hz,1H),2.34(s,3H),1.54(s,9H).
(3-氟-4-甲酰基-5-甲基苯基)氨基甲酸叔丁酯(51)
将50(2.77g，11.02mmol，1当量)溶于20mL丙酮和5mL水中于室温下搅拌，然后加入二水合锇酸钾(0.4g，1.1mmol，0.1当量)和高碘酸钠(7g，33.06mmol，3当量)。将反应体系于室温持续反应8h，TLC监测反应完全。然后用乙酸乙酯进行萃取，有机相用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(0-10％乙酸乙酯/石油醚)，得到所需产物。最终获得黄色固体1.017g，产率为36.43％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.39(s,1H),7.36(dd,J＝13.4,2.1Hz,1H),6.94(s,1H),6.86–6.83(m,1H),2.60(s,3H),1.54(s,9H).
4-((叔丁氧羰基)氨基)-2-氟-6-甲基苯甲酸(52)
将化合物亚氯酸钠(3.2g，36mmol，9当量)和二水合磷酸二氢钠(4.3g，28mmol，7当量)溶于10mL水中，然后缓慢加入到46(1g，4mmol，1当量)的叔丁醇溶液中，接着加入5mL 2-甲基-2-丁烯并在室温下过夜反应。TLC分析表明反应完成。然后将溶液浓缩，然后加入一些水，并用乙酸乙酯进行萃取，有机相用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，浓缩直接投入下一步反应。
4-((叔丁氧羰基)氨基)-2-氟-6-甲基苯甲酸甲酯(53)
将52(0.929g，3.45mmol，1当量)溶于超干DMF中于室温下搅拌，然后加入碳酸钾(0.952g，6.9mmol，2当量)搅拌一段时间后，加入碘甲烷(0.7mL，10.35mmol，3当量)。将反应体系于室温持续反应5h，TLC监测反应完全。然后加入少量水进行淬灭，接着用乙酸乙酯进行萃取，有机相用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(0-10％乙酸乙酯/石油醚)，得到所需产物。最终获得无色油状物365mg，产率为37.34％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.20(dd,J＝12.1,2.1Hz,1H),6.91(t,J＝1.4Hz,1H),6.63(s,1H),3.92(d,J＝0.6Hz,3H),2.41(s,3H),1.54(d,J＝0.7Hz,9H).
2-(溴甲基)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟苯甲酸甲酯(54)
将53(0.365g，1.29mmol，1当量)溶于四氯化碳中于室温下搅拌，然后加入偶氮二异丁氰(25mg，0.129mmol，0.1当量)和N-溴代丁二酰亚胺(275mg，1.55mmol，1.2当量),并用氩气进行保护，将反应体系缓慢升温至78℃持续反应10h，TLC监测反应完全。然后将反应体系冷却至室温，直接向体系中加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(0-10％乙酸乙酯/石油醚)，得到所需产物。最终获得黄色油状物310mg，产率为66.43％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.32(dd,J＝12.1,2.1Hz,1H),7.17(d,J＝2.1Hz,1H),6.79(s,1H),4.68(s,2H),3.96(d,J＝0.6Hz,3H),1.53(d,J＝1.6Hz,9H).
5-氨基-7-氟异苯并呋喃-1(3H)-酮(55)
将54(0.31g，0.85mmol，1当量)溶于9mL二氧六环和3mL水中于室温下搅拌，然后加入1mL 2N盐酸，将体系缓慢升温至100℃过夜反应。TLC分析表明反应完成。然后将溶液浓缩，然后加入一些水，并用乙酸乙酯进行萃取，有机相用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(30-60％乙酸乙酯/石油醚)，得到所需产物。最终获得黄色固体75mg，产率为52.43％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.57(s,2H),6.42(d,J＝1.5Hz,1H),6.36(dd,J＝12.1,1.6Hz,1H),5.17(s,2H).
2-((7-氟-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)氨基)-2-甲基丙腈(56)
按照合成化合物23的方法来合成化合物56，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.46(s,1H),6.79(d,J＝1.7Hz,1H),6.63(dd,J＝12.3,1.7Hz,1H),5.30(s,1H),1.72(s,6H).
4-(3-(7-氟-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-4,4-二甲基-5-氧代-2-硫代咪唑烷-1-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物17)
按照合成化合物1的方法来合成化合物17，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(d,J＝8.3Hz,1H),8.33(d,J＝1.9Hz,1H),8.12(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),6.75(d,J＝1.8Hz,1H),6.53(d,J＝1.8,1H),5.52(s,2H),1.54(s,6H).
实施例18：4-(4,4-二甲基-5-氧代-3-(7-氧代-5,7-二氢呋喃[3,4-b]吡啶-3-基)-2-硫代咪唑烷-1-基-2-(三氟甲基)苯甲腈盐酸盐(化合物18)
将4(0.31g，0.85mmol，1当量)溶于乙酸乙酯中于室温下搅拌，然后加入1mL 4M盐酸的1,4-二氧六环溶液。整个体系在室温下搅拌过夜，发现有少量固体析出。然后直接减压浓缩溶剂，再用石油醚和乙酸乙酯进行打浆。然后进行过滤，得到白色固体18.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.90(d,J＝2.0Hz,1H),8.44(d,J＝8.1Hz,1H),8.32(d,J＝14.8Hz,2H),8.13(d,J＝8.4Hz,1H),5.57(s,2H),1.60(s,6H).
实施例19：4-(3-(8-氟-1-氧代异色满-6-基)-4,4-二甲基-5-氧代-2-硫代氧杂咪唑啉-1-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物19)
1-溴-3-氟-2-甲基-5-硝基苯(57)
将2-氟-1-甲基-4-硝基苯(20g，128.93mmol，1当量)装入封管中，然后将铁粉(0.87g，15.47mmol，0.12当量)和液溴(45.6g，283.6mmol，2.2当量)依次加入到封管，在油浴锅中缓慢升温到90℃反应100h,TLC监测表明反应完成，然后将体系冷却至室温，并将其倒入到冰水中，用饱和亚硫酸钠溶液进行淬灭，淬灭完成后用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(石油醚)，得到所需产物。最终获得黄色油状物5.5g，产率为18.23％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.26(s,1H),7.89(d,J＝8.5Hz,1H),2.45(d,J＝1.8Hz,3H).
2-溴-6-氟-4-硝基苯甲酸甲酯(58)
将57(5g，21.37mmol，1当量)溶于100mL叔丁醇和80mL水中于室温下搅拌，然后加入四丁基氯化铵(356mg，1.07mmol，0.05当量)和高锰酸钾(17g，106.8mmol，5当量),紧接着将反应体系缓慢升温至80℃反应12h。待反应结束后将体系冷却至室温，用乙酸乙酯进行萃取，收集水相，然后用2N盐酸调节PH至弱酸性，再用乙酸乙酯进行萃取，收集有机相，有机相用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，直接将有机相旋转浓缩干燥，将其溶于超干DMF中，依次加入碳酸钾(1.271g,9.21mmol,2当量)和碘甲烷(0.86mL,13.82mmol,3当量)于35℃反应3h，TLC分析表明反应完成。然后加入一些水进行淬灭，并用乙酸乙酯进行萃取，有机相用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(石油醚)，得到所需产物。最终获得白色固体686mg，产率为11.6％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.32(d,J＝1.1Hz,1H),8.00(d,J＝8.3Hz,1H),4.04(s,4H).
4-氨基2-溴-6-氟苯甲酸甲酯(59)
将58(680mg，2.45mmol，1当量)溶于12mL乙醇和3mL水中，于室温下搅拌几分钟，然后依次将铁粉(409mg，7.35mmol，3当量)和氯化铵(523mg，9.8mmol，4当量)加入到溶液中，并缓慢升温至75℃。将反应混合物在75℃搅拌3h，TLC监测表明反应完成。然后用硅藻土过滤溶液，得到滤液，并用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和盐水洗2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤并浓缩，得到所需产物。最终得到400mg白色固体，产率65.93％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ6.68(d,J＝1.3Hz,1H),6.36(dd,J＝12.7,2.0Hz,1H),6.21(s,2H),3.78(s,3H).
4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氟-6-乙烯基苯甲酸甲酯(61)
将59(400mg，1.61mmol，1当量)，4-二甲氨基吡啶(20mg，0.161mmol，0.1当量)和三乙胺(0.67mL，4.83mmol，3当量)溶于无水四氢呋喃中，于室温下搅拌，然后将二碳酸二叔丁酯(0.92mL，3.22mmol，2当量)逐滴加入到溶液中。待反应完毕后，将反应溶液减压浓缩，然后用乙酸乙酯进行萃取，收集有机相，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(10％-15％乙酸乙酯/石油醚)得到混合物，最终得到淡黄色油状物549mg，用于下一步。
将上一步得到的化合物置于微波管中，加入5mL DMF溶解，然后加入三丁基(乙烯基)锡(0.54mL，1.75mmol，1.5当量)和四(三苯基膦)钯(0.18g，0.15mmol，0.1当量)。将反应体系置于微波中持续反应2.5h(100W,110℃)。待反应结束后将体系冷却至室温，用乙酸乙酯进行萃取，有机相用用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(0-10％乙酸乙酯/石油醚)，得到所需产物。最终获得无色油状物225mg，两步的收率为47.24％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.33(d,J＝11.9Hz,1H),7.22(s,1H),6.93(dd,J＝17.4,10.9Hz,1H),6.82(s,1H),5.72–5.66(m,1H),5.37(d,J＝10.9Hz,1H),3.92(s,3H),1.53(s,10H).
4-((叔丁氧羰基)氨基)-2-氟-6-(2-羟乙基)苯甲酸甲酯(62)
将61(225mg，0.76mmol，1当量)溶于无水四氢呋喃中于冰浴中搅拌，然后将0.5M9-硼双环[3.3.1]壬烷的THF溶液(7.6mL，3.8mmol，5当量)置于恒压滴液漏斗中，缓慢滴加到体系中。待滴加完毕后移走冰浴于室温下反应，搅拌12小时，然后向体系中加入1N氢氧化钠(1mL)和30％双氧水(1.5mL)。接着将反应混合物在室温下搅拌2h，TLC监测表明反应完成。然后旋转蒸发浓缩溶液，用乙酸乙酯进行萃取。有机相用用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(20％-35％乙酸乙酯/石油醚)，得到所需产物。最终获得无色油状物75mg，产率为31.42％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.68(s,1H),7.75(d,J＝11.9Hz,1H),7.44(s,1H),3.87(s,3H),3.54(td,J＝7.2,5.4Hz,3H),3.08–3.00(m,2H),1.48(s,9H).
6-氨基-8-氟异吡喃-1-酮(63)
将62(75mg，0.24mmol，1当量)溶于9mL二氧六环和3mL水中于室温下搅拌，然后向溶液中加入0.5mL 2N盐酸，并将体系缓慢升温至100℃，搅拌反应2h。待TLC监测反应完成后，将混合物冷却至室温，并用饱和碳酸氢钠溶液调节反应体系至中性，然后用乙酸乙酯进行萃取。有机相用用饱和盐水洗涤2次，经无水Na2SO4干燥后，过滤，向有机相加入硅胶浓缩并通过自动过柱机进行纯化(30％-60％乙酸乙酯/石油醚)，得到所需产物。最终得到白色固体6mg，产率为13.84％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ6.42(s,2H),6.24(t,J＝6.1Hz,2H),4.30(t,J＝5.9Hz,2H),2.84(t,J＝5.8Hz,2H).
2-甲基-2-((8-氟-1-氧代异吡喃-6-基)氨基)丙腈(64)
按照合成化合物23的方法来合成化合物64，得到黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.74(d,J＝8.6Hz,1H),7.06(s,1H),6.24(t,J＝6.1Hz,2H),4.41(t,J＝6.0Hz,2H),2.96(t,J＝6.0Hz,2H),1.63(s,6H).
4-(3-(8-氟-1-氧代异色满-6-基)-4,4-二甲基-5-氧代-2-硫代氧杂咪唑啉-1-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物19)
按照合成化合物1的方法来合成化合物19，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(d,J＝8.3Hz,1H),8.33(d,J＝1.9Hz,1H),8.12(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),6.78(d,J＝1.8Hz,1H),6.66(d,J＝1.8,1H),4.58(t,J＝6.0Hz,0H),3.17(t,J＝6.0Hz,0H),1.63(s,1H).
实施例20：4-(1-(8-氟-1-氧代异色满-6-基)-4-氧代-2-硫代-1,3-二氮杂螺[4.4]壬基-3-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物20)
1-((8-氟-1-氧代异色满-6-基)氨基)环戊烷-1-腈(65)
按照合成化合物23的方法来合成化合物65，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.29(t,J＝8.9Hz,1H),7.13(dd,J＝8.6,2.8Hz,1H),6.21(s,1H),4.41(t,J＝6.0Hz,2H),2.96(t,J＝6.0Hz,2H),2.40–2.28(m,2H),2.16(dt,J＝13.0,6.2Hz,2H),1.84–1.73(m,4H).
4-(1-(8-氟-1-氧代异色满-6-基)-4-氧代-2-硫代-1,3-二氮杂螺[4.4]壬基-3-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物20)
按照合成化合物1的方法来合成化合物20，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝8.3Hz,1H),8.30(s,1H),8.10(dd,J＝8.0,4.5Hz,1H),δ7.29(t,J＝8.9Hz,1H),7.13(dd,J＝8.6,2.8Hz,1H),4.57(t,J＝6.0Hz,1H),3.16(t,J＝6.1Hz,1H),2.38–2.28(m,1H),2.18(dt,J＝13.9,6.8Hz,1H),1.72(s,1H),1.37(d,J＝27.7Hz,1H).
实施例21：4-(1-(7-氟-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-4-氧代-2-巯基-1,3-二氮杂螺[4.4]壬基-3-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物21)
1-((7-氟-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)氨基)环戊烷-1-腈(66)
按照合成化合物23的方法来合成化合物66，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.29(t,J＝8.9Hz,1H),7.13(dd,J＝8.6,2.8Hz,1H),6.21(s,1H),5.26(s,2H),2.39–2.29(m,2H),2.16(dd,J＝13.1,6.2Hz,2H),1.84–1.73(m,4H).
4-(1-(7-氟-1-氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-基)-4-氧代-2-巯基-1,3-二氮杂螺[4.4]壬基-3-基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(化合物21)
按照合成化合物1的方法来合成化合物21，得到白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝8.3Hz,1H),8.32(d,J＝1.9Hz,1H),8.11(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),δ7.29(t,J＝8.9Hz,1H),7.13(dd,J＝8.6,2.8Hz,1H),5.52(s,2H),2.33(dt,J＝14.0,6.8Hz,2H),2.19(dt,J＝13.8,6.0Hz,2H),1.78–1.65(m,2H),1.43–1.30(m,2H).
生物活性测试
1.雄激素受体的拮抗活性测试
将HEK293细胞在含10％胎牛血清(FBS)的DMEM中于5％CO2，37℃培养。接着用胰蛋白酶消化细胞并计数。然后用含有5ng雄激素受体克隆，100ng pGL4.36载体和315nLfugene的opti-MEM制备10uL/孔转染溶液。将细胞悬浮液用不含苯酚红的DMEM稀释，并添加10％透析FBS和1％GlutaMax，并与转染溶液混合以达到444,444细胞/毫升。将该稀释的细胞悬浮液以90μL(40,000个细胞/孔)的体积接种到96孔板中，然后将板孵育24小时。接着加入10μL药物溶液(包括梯度稀释的化合物或DMSO)，然后将板孵育30分钟。将10nL DHT(最终浓度为1.5nM)添加到平板的每个孔中，然后将平板在37℃，5％CO2下孵育。孵育24小时后，将100μL Steady-Glo添加到板的每个孔中，在室温下摇动板20分钟，并在Envision上读取板。IC50定义为引起50％荧光素酶表达抑制的药物浓度，由剂量反应曲线确定。
以恩杂鲁胺(Enzalutamide)为阳性对照，代表性化合物的雄激素受体拮抗活性如表1所示：
表1、代表性化合物的雄激素受体拮抗活性
| 化合物编号 | AR拮抗活性IC<sub>50</sub>(nM) |
| 1 | 148.6 |
| 3 | 195.5 |
| 7 | 80.65 |
| 8 | 95.23 |
| 9 | 238.8 |
| 10 | 140.9 |
| 13 | 63.84 |
| 14 | 93.27 |
| 16 | 134.6 |
| 恩杂鲁胺 | 454.6 |
由表1可知，本发明化合物对雄激素受体具有显著优于恩杂鲁胺的拮抗活性，特别是化合物16、14、8、7、13雄性激素受体拮抗活性分别比恩杂鲁胺提高了3、5、5、6、7倍，说明本发明化合物会成为比恩杂鲁胺活性更强的抗肿瘤药物。
2.细胞增殖抑制活性测试
将LNCaP细胞在添加有10％胎牛血清(FBS)的RPMI-1640中于5％CO2，37℃培养。然后用胰蛋白酶消化细胞并使用自动细胞计数器对细胞密度进行计数。将细胞悬浮液在生长培养基中稀释至所需密度。接着将该细胞悬浮液以100μL的体积接种到384孔板中，然后将板在37℃，5％CO2下孵育24小时。向每个孔中加入10μL等分试样的药物溶液(包括4倍浓度梯度稀释的化合物或DMSO)，并在37℃，5％CO2培养箱中培养6天。测量前将测定板平衡至室温。
在每个孔中加入40uL
试剂。在轨道振荡器上混合2分钟，以诱导细胞裂解。在室温下孵育60分钟以稳定发光信号。并读取Envision板上的板。IC50定义为引起50％细胞生长抑制的药物浓度，由剂量反应曲线确定。
以恩杂鲁胺(Enzalutamide)为阳性对照，代表性化合物对LNCaP细胞(表达T877AAR)的增殖抑制活性如表2所示：
表2、代表性化合物对LNCaP细胞的增殖抑制活性
| 化合物编号 | IC<sub>50</sub>/nM(LNCaP) |
| 1 | 287.60 |
| 3 | 160.70 |
| 7 | 271.60 |
| 8 | 273.50 |
| 16 | 224.20 |
| 恩杂鲁胺 | 428.00 |
综上所述，本发明化合物展现出较好的治疗前列腺癌体外活性。对于AR拮抗活性，本发明代表性化合物的效力是对照药恩杂鲁胺的2-7倍。在对于第一代AR拮抗剂耐药的LNCaP细胞增殖抑制试验中，本发明代表性化合物的效力都要强于对照药，是恩杂鲁胺的1.5-2.7倍。这些数据表明本发明化合物将会是AR拮抗活性更强、抗肿瘤活性更强的新一代雄激素受体拮抗剂，对临床前列腺癌患者会有更好的作用。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (10)
1.一种通式(I)所示的化合物，或其水合物、溶剂化物、对映异构体、非对映异构体、外消旋体或其药学上可接受的盐，
其中
n为0、1、2或3；
A为CH或者N；
B为CH、CX或者N；
X的数量为0-3个，在出现处各自独立为羟基、氨基、氰基、NO2、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基或C1-6卤代烷基；
R1和R2各自独立地为取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C1-6烷氧基、取代或未取代的C3-6环烷基或氢；或者R1、R2和与它们相连的碳原子一起形成取代或未取代的3-8元环烷基、取代或未取代的4-6元杂环烷基；所述取代是指被选自下组的一个或多个基团取代：羟基、氨基、巯基、卤素、氰基、NO2、CF3；所述杂环烷基的杂原子选自：O、N或S。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物具有如下结构：
A、R1和R2的定义如权利要求1所述。
3.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物具有如下结构：
X、A、R1和R2的定义如权利要求1所述。
4.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，n为0或1。
5.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，X为F、Cl或者CF3。
6.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R1和R2各自独立地为取代或未取代的C1-4烷基、取代或未取代的C3-6环烷基或氢；或者R1、R2和与它们相连的碳原子一起形成取代或未取代的3-6元环烷基、取代或未取代的4-6元氧杂环烷基；所述取代是指被选自下组的一个或多个基团取代：羟基、氨基、巯基、卤素、氰基、NO2、CF3。
7.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物为：
8.如权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(i)中间体IV与酮发生Strecker反应得到化合物V；
(ii)化合物V与中间体I-1发生关环反应，紧接着进行水解得到终产物通式(I)所示的化合物；
各式中，X、n、R1、R2、A和B的定义如权利要求1所述。
9.一种药物组合物，其特征在于，包含：如权利要求1所述的通式(I)所示的化合物，或其水合物、溶剂化物、对映异构体、非对映异构体、外消旋体或其药学上可接受的盐；和
药学上可接受的载体。
10.如权利要求1所述的通式(I)所示的化合物或权利要求9所述的药物组合物用途，其特征在于，用于制备雄激素受体拮抗剂；或用于制备预防和/或治疗雄激素受体相关疾病的药物。
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2020
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20220412 |