CN114288276A - 一种抗炎羊膜敷贴及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗炎羊膜敷贴及其制备方法，其制备方法包括以下步骤：制备脱细胞羊膜；分别制备脂肪干细胞和脂肪组织血管基质，然后将脂肪干细胞和油加入脂肪组织血管基质中，混合至有絮凝物出现，离心，弃去下层肿胀液以及上层油脂，制得凝胶样基质；将凝胶样基质涂抹于脱细胞羊膜的粗糙面侧，制得。该抗炎羊膜敷贴可有效解决现有的敷贴存在的创口恢复慢的问题。
Description
技术领域
本发明涉及敷贴技术领域，具体涉及一种抗炎羊膜敷贴及其制备方法。
背景技术
创面愈合是指由于致伤因子的作用造成组织缺失后，局部组织通过再生、修复、重建，进行修补的一系列病理生理过程。本质上是机体对各种有害因素作用所致的组织细胞损伤的一种固有的防御性适应性反应。这种再生修复表现于丧失组织结构的恢复上，也能不同程度地恢复其功能。
然而，丢失的组织细胞的修复可以是原来组织细胞的“完全复原”称之为“再生”，也可以是由非特异性的结缔组织增生来替代原有的组织细胞，形成“不完全复原”称之为“修复”，不过，这两种不同的结果，其过程却是相同的。正常情况下，有些组织和细胞会不断地消耗、老化和死亡，又不断地由同种细胞分裂增生加以补充，称之为生理性再生，如表皮的脱落与更新，又如血细胞周期性的凋亡与补充，其特征是再生后的细胞完全保持了原有的结构与功能，故称之为完全性再生。而损伤所致的组织细胞丢失后的再生，称之为病理性再生或修复性再生。当创面浅表、组织细胞丢失轻微，则可由同种组织细胞分裂增生来补充，使之具有同样的结构和功能，形成完全性病理性再生，见于表皮基底膜完整的创面如皮肤擦伤以及I度烧伤等。但当组织细胞缺失较多时，则机体修复时常由另一种替代组织即结缔组织来填补，使之失去原有组织的结构和功能，形成不完全性病理性再生。临床上绝大多数是这种类型的再生。现有的敷料一般只能发挥消炎的作用，无法加速创口愈合，且无法预防疤痕形成。
发明内容
针对现有技术中的上述不足，本发明提供了一种抗炎羊膜敷贴及其制备方法，该抗炎羊膜敷贴可有效解决现有的敷贴存在的创口恢复慢的问题。
为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种抗炎羊膜敷贴的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备脱细胞羊膜；
(2)分别制备脂肪干细胞和脂肪组织血管基质，然后将脂肪干细胞和油脂加入脂肪组织血管基质中，混合至有絮凝物出现，离心，弃去下层肿胀液以及上层油脂，制得凝胶样基质；
(3)将步骤(2)中凝胶样基质涂抹于步骤(1)中脱细胞羊膜的粗糙面侧，制得。
进一步地，步骤(1)中脱细胞羊膜通过如下方法制得：从洗净的胎盘上剥离获得羊膜，将羊膜用过氧乙酸/氯化钠混合溶液净化处理，然后将羊膜进行灭活后洗净，得灭活羊膜，向灭活羊膜中加入蛋白酶液消化后洗净，然后将洗净的灭活羊膜于过氧乙酸中浸泡灭菌，制得。
进一步地，步骤(2)中脂肪干细胞通过如下方法制得：将清洗后的脂肪组织离心，弃去上层油脂，然后将脂肪组织培养至融合度为50-70％，消化后进行传代培养，待细胞融合度长至70-80％时，向其中加入脂多糖进行诱导培养，然后去除培养基，制得。
进一步地，将培养至P3-P6代的细胞中加入脂多糖进行诱导培养20-30h。
进一步地，脂多糖在培养基中的浓度为0.5-1μg/ml。
进一步地，步骤(2)中脂肪组织血管基质通过如下方法制得：用多侧孔吸脂管进行吸脂，吸脂收获的脂肪置于冰水浴中静置，收集上层脂肪，将收集的脂肪组织离心，收集中间层的脂肪组织，然后将收集的中间层脂肪组织进行乳糜化处理，过滤去除结缔组织，制得。
进一步地，将收集的脂肪组织于1000-1400g的离心力作用下离心2-4min。
进一步地，步骤(2)中于1800-2200g离心力作用下离心2-4min。
进一步地，步骤(2)中的凝胶样基质中脂肪间充质干细胞的浓度为1×105-9×105个/ml。
本发明所产生的有益效果为：
本发明中通过将胎盘中的羊膜进行处理后作为敷贴的基质，羊膜具有防水透气性好，生物相容性高等作用，贴敷后可有效避免创口感染，贴敷后无需进行物理性去除，可被机体吸收，从而避免了对出创口造成二次伤害。
本发明中羊膜的粗糙面具有多孔隙结构，能够为脂肪间充质干细胞和脂肪组织血管基质提供支撑和能量供给，便于细胞进行附着生长，提高脂肪间充质干细胞和脂肪组织血管基质活性，进而通过脂肪间充质干细胞和脂肪组织血管基质促进伤口愈合，加速伤口愈合时间，预防疤痕的形成，同时还能实现缓释作用，保证功效的持久性。
本申请中，在脂肪间充质干细胞制备过程中，通过向其中加入脂多糖，通过脂多糖对脂肪间充质干细胞进行诱导，使得脂肪间充质干细胞更适合出创口的炎症环境，提高脂肪间充质干细胞的成活时间，提高该敷贴的使用时效。
本申请中加入油脂主要是促进絮凝，打破乳糜的稳定状态，从而分离出乳糜态脂肪组织中的脂肪油脂，提高脂肪间充质干细胞和脂肪组织血管基质的浓度，进而提高治疗效果。
具体实施方式
实施例1
一种抗炎羊膜敷贴，其制备方法包括以下步骤：
(1)制备脱细胞羊膜；具体为：从洗净的胎盘上剥离获得羊膜，将羊膜用过氧乙酸/氯化钠混合溶液净化处理，过氧乙酸/氯化钠混合溶液中过氧乙酸的体积浓度为0.1％，氯化钠的质量浓度为0.8mol/l，然后将羊膜进行灭活后洗净，得灭活羊膜，向灭活羊膜中加入胰蛋白酶液中于35℃条件下消化150min后洗净，胰蛋白酶溶液的质量浓度为0.25％，胰蛋白酶溶液的用量为0.17ml/cm2，将洗净的灭活羊膜用去垢液(Triton X-100)于35℃条件下振荡清洗5h，然后将洗净的灭活羊膜于体积浓度为0.1％的过氧乙酸中浸泡5h灭菌，制得；
(2)分别制备脂肪干细胞和脂肪组织血管基质，然后将脂肪干细胞和油脂加入脂肪组织血管基质中，混合至有絮凝物出现，于1800g的离心力作用下离心2min，弃去下层肿胀液以及上层油脂，制得凝胶样基质，其中，脂肪间充质干细胞的浓度为1×105个/ml；
脂肪组织血管基质通过如下方法制得：用直径为3mmd的多侧孔吸脂管进行吸脂，吸取收获的脂肪置于冰水浴中静置8min，收集上层脂肪，将收集的脂肪组织于1000g的离心力作用下离心2min，收集中间层的脂肪组织，然后将收集的中间层脂肪组织置于连接有两个内径为2.4mm鲁尔连接器的注射器中，反复推注对脂肪组织进行乳糜化处理，用NanoTransfer过滤器过滤去除结缔组织，制得；
脂肪干细胞通过如下方法制得：将清洗后的脂肪组织于18℃，2000rpm/min的速度离心10min，弃去上层油脂，然后将脂肪组织培养至融合度为50％，消化后进行传代培养，取P3代的细胞，待其融合度长至70％时，向其中加入脂多糖，使脂多糖的浓度达到0.5μg/ml进行诱导培养20h，然后去除培养基，制得；
(3)将步骤(2)中凝胶样基质涂抹于步骤(1)中脱细胞羊膜的粗糙面侧，制得。
实施例2
一种抗炎羊膜敷贴，其制备方法包括以下步骤：
(1)制备脱细胞羊膜；具体为：从洗净的胎盘上剥离获得羊膜，将羊膜用过氧乙酸/氯化钠混合溶液净化处理，过氧乙酸/氯化钠混合溶液中过氧乙酸的体积浓度为0.1％，氯化钠的质量浓度为1.2mol/l，然后将羊膜进行灭活后洗净，得灭活羊膜，向灭活羊膜中加入胰蛋白酶液中于39℃条件下消化220min后洗净，胰蛋白酶溶液的质量浓度为0.4％，胰蛋白酶溶液的用量为0.25ml/cm2，将洗净的灭活羊膜用去垢液(Triton X-100)于40℃条件下振荡清洗6h，然后将洗净的灭活羊膜于体积浓度为0.1％的过氧乙酸中浸泡6h灭菌，制得；
(2)分别制备脂肪干细胞和脂肪组织血管基质，然后将脂肪干细胞和油脂加入脂肪组织血管基质中，混合至有絮凝物出现，于2200g的离心力作用下离心2-4min，弃去下层肿胀液以及上层油脂，制得凝胶样基质，其中，脂肪间充质干细胞的浓度为1×105个/ml；
脂肪组织血管基质通过如下方法制得：用直径为3mmd的多侧孔吸脂管进行吸脂，吸取收获的脂肪置于冰水浴中静置12min，收集上层脂肪，将收集的脂肪组织于14000g的离心力作用下离心4min，收集中间层的脂肪组织，然后将收集的中间层脂肪组织置于连接有两个内径为2.4mm鲁尔连接器的注射器中，反复推注对脂肪组织进行乳糜化处理，用NanoTransfer过滤器过滤去除结缔组织，制得；
脂肪干细胞通过如下方法制得：将清洗后的脂肪组织于22℃，4000rpm/min的速度离心15min，弃去上层油脂，然后将脂肪组织培养至融合度为70％，消化后进行传代培养，取P6代的细胞，待其融合度长至80％时，向其中加入脂多糖，使脂多糖的浓度达到1μg/ml进行诱导培养30h，然后去除培养基，制得；
(3)将步骤(2)中凝胶样基质涂抹于步骤(1)中脱细胞羊膜的粗糙面侧，制得。
实施例3
一种抗炎羊膜敷贴，其制备方法包括以下步骤：
(1)制备脱细胞羊膜；具体为：从洗净的胎盘上剥离获得羊膜，将羊膜用过氧乙酸/氯化钠混合溶液净化处理，过氧乙酸/氯化钠混合溶液中过氧乙酸的体积浓度为0.1％，氯化钠的质量浓度为1mol/l，然后将羊膜进行灭活后洗净，得灭活羊膜，向灭活羊膜中加入胰蛋白酶液中于37℃条件下消化200min后洗净，胰蛋白酶溶液的质量浓度为0.3％，胰蛋白酶溶液的用量为0.2ml/cm2，将洗净的灭活羊膜用去垢液(Triton X-100)于37℃条件下振荡清洗5h，然后将洗净的灭活羊膜于体积浓度为0.1％的过氧乙酸中浸泡5h灭菌，制得；
(2)分别制备脂肪干细胞和脂肪组织血管基质，然后将脂肪干细胞和油脂加入脂肪组织血管基质中，混合至有絮凝物出现，于2000g的离心力作用下离心3min，弃去下层肿胀液以及上层油脂，制得凝胶样基质，其中，脂肪间充质干细胞的浓度为1×105个/ml；
脂肪组织血管基质通过如下方法制得：用直径为3mmd的多侧孔吸脂管进行吸脂，吸取收获的脂肪置于冰水浴中静置10min，收集上层脂肪，将收集的脂肪组织于12000g的离心力作用下离心3min，收集中间层的脂肪组织，然后将收集的中间层脂肪组织置于连接有两个内径为2.4mm鲁尔连接器的注射器中，反复推注对脂肪组织进行乳糜化处理，用NanoTransfer过滤器过滤去除结缔组织，制得；
脂肪干细胞通过如下方法制得：将清洗后的脂肪组织于20℃，3000rpm/min的速度离心10min，弃去上层油脂，然后将脂肪组织培养至融合度为70％，消化后进行传代培养，取P4代的细胞，待其融合度长至75％时，向其中加入脂多糖，使脂多糖的浓度达到1μg/ml进行诱导培养25h，然后去除培养基，制得；
(3)将步骤(2)中凝胶样基质涂抹于步骤(1)中脱细胞羊膜的粗糙面侧，制得。
对比例1
一种抗炎羊膜敷贴，其制备方法包括以下步骤：
(1)制备脱细胞羊膜；具体为：从洗净的胎盘上剥离获得羊膜，将羊膜用过氧乙酸/氯化钠混合溶液净化处理，过氧乙酸/氯化钠混合溶液中过氧乙酸的体积浓度为0.1％，氯化钠的质量浓度为1mol/l，然后将羊膜进行灭活后洗净，得灭活羊膜，向灭活羊膜中加入胰蛋白酶液中于37℃条件下消化200min后洗净，胰蛋白酶溶液的质量浓度为0.3％，胰蛋白酶溶液的用量为0.2ml/cm2，将洗净的灭活羊膜用去垢液(Triton X-100)于37℃条件下振荡清洗5h，然后将洗净的灭活羊膜于体积浓度为0.1％的过氧乙酸中浸泡5h灭菌，制得；
(2)分别制备脂肪干细胞和脂肪组织血管基质，然后将脂肪干细胞和油脂混合，制得基质；
脂肪干细胞通过如下方法制得：将清洗后的脂肪组织于20℃，3000rpm/min的速度离心10min，弃去上层油脂，然后将脂肪组织培养至融合度为70％，消化后进行传代培养，取P4代的细胞，待其融合度长至75％时，向其中加入脂多糖，使脂多糖的浓度达到1μg/ml进行诱导培养25h，然后去除培养基，制得；
(3)将步骤(2)中基质涂抹于步骤(1)中脱细胞羊膜的粗糙面侧，制得。
对比例2
一种抗炎羊膜敷贴，其制备方法包括以下步骤：
(1)制备脱细胞羊膜；具体为：从洗净的胎盘上剥离获得羊膜，将羊膜用过氧乙酸/氯化钠混合溶液净化处理，过氧乙酸/氯化钠混合溶液中过氧乙酸的体积浓度为0.1％，氯化钠的质量浓度为1mol/l，然后将羊膜进行灭活后洗净，得灭活羊膜，向灭活羊膜中加入胰蛋白酶液中于37℃条件下消化200min后洗净，胰蛋白酶溶液的质量浓度为0.3％，胰蛋白酶溶液的用量为0.2ml/cm2，将洗净的灭活羊膜用去垢液(Triton X-100)于37℃条件下振荡清洗5h，然后将洗净的灭活羊膜于体积浓度为0.1％的过氧乙酸中浸泡5h灭菌，制得；
(2)分别制备脂肪干细胞和脂肪组织血管基质，然后将脂肪干细胞和油脂加入脂肪组织血管基质中，混合至有絮凝物出现，于2000g的离心力作用下离心3min，弃去下层肿胀液以及上层油脂，制得凝胶样基质；
脂肪组织血管基质通过如下方法制得：用直径为3mmd的多侧孔吸脂管进行吸脂，吸取收获的脂肪置于冰水浴中静置10min，收集上层脂肪，将收集的脂肪组织于12000g的离心力作用下离心3min，收集中间层的脂肪组织，然后将收集的中间层脂肪组织置于连接有两个内径为2.4mm鲁尔连接器的注射器中，反复推注对脂肪组织进行乳糜化处理，用NanoTransfer过滤器过滤去除结缔组织，制得；
脂肪干细胞通过如下方法制得：将清洗后的脂肪组织于20℃，3000rpm/min的速度离心10min，弃去上层油脂，然后将脂肪组织培养至融合度为70％，消化后进行传代培养，取P4代的细胞，待其融合度长至75％时进行消化，然后去除培养基，制得；
(3)将步骤(2)中凝胶样基质涂抹于步骤(1)中脱细胞羊膜的粗糙面侧，制得。
试验例
一、超脉冲CO2点阵激光术后修复
寻找轻至中度痤疮后凹陷性瘢痕，并接受超脉冲CO2点阵激光治疗的患者120例，其中男性60例，女性60例，年龄18-40岁。随机分成四组，每组20人，其中三组志愿测试实施例，两组志愿测试对比例，另一组测试对比例。术后，其中三组的分别采用实施例1-3的敷料每天外敷20min，连续使用10天；其中两组分别采用对比例1-2的敷料每天外敷20min，剩余一组作为空白组，不使用敷料，而是采用自制的冷水冰袋进行冷敷，同样每天外敷209min，连续使用10天。试验期间，患者均要求术后严格防晒，每组均正常用盐酸霉素眼膏外用2次/天，连续三天。
在试验的第5天，根据验证反应进行评分，按程度从1分-5分进行评分，1分表示无红斑、水肿、灼热感；5分表示明显的红斑、水肿及灼热、灼痛。试验结果见表1所示，所示的得分为每组20人的平均分。
表1炎症反应评分
| 试验组 | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 对比例1 | 对比例2 | 空白组 |
| 平均分 | 1.5 | 1.6 | 1.6 | 3.1 | 2.9 | 3.5 |
告知志愿者记录创面结痂时间，第一处痂皮脱落时间和全部痂皮脱落时间，统计并计算出每组20人的平均时间，具体结果见表2：
表2：平均结痂和脱痂时间
| 试验组 | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 对比例1 | 对比例2 | 空白组 |
| 创面结痂时间 | 0.9 | 1.1 | 1.2 | 1.4 | 1.3 | 1.5 |
| 第一处脱痂时间 | 4.2 | 4.5 | 4.4 | 4.9 | 4.8 | 5.3 |
| 全部脱痂时间 | 5.1 | 5.8 | 6.0 | 7.2 | 6.8 | 7.9 |
通过表1和表2中的数据可以看出，实施例1-3中的敷料对于创面的抗炎效果及修复时间更快。
二、痤疮疤痕修复
征集60例痤疮患者进行疤痕修复试验，其中男性30例，女性30例，年龄18-35岁。随机分成6组，每组10人，其中三组志愿者测试实施例1-3中的敷料，其中两组测试对比例1-2中的敷料，剩余一组作为空白组，使用市售的普通敷料。测试时每天外敷疤痕20min，连续使用15天。
志愿者根据皮损形态进行评分，按红斑/色素程度从0分-5分进行评分，其中0分表示自然光线下观察，无肉眼可见红斑/色素沉着；3分表示自然光线下观察，中度红斑/色素沉着，颜色较红/黄褐色；5分表示自然光线下观察，中度红斑/色素沉着，颜色鲜红/深褐色。
痤疮疤痕修复的评分结果见表3，所示分值为每组的平均值。
表3痤疮疤痕修复效果评分
| 试验组 | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 对比例1 | 对比例2 | 空白组 |
| 治疗前 | 4.8 | 5.0 | 4.7 | 4.5 | 4.6 | 4.3 |
| 治疗第5天 | 3.0 | 3.5 | 3.3 | 3.9 | 3.6 | 4.3 |
| 治疗第10天 | 2.1 | 2.3 | 2.3 | 3.1 | 2.8 | 3.5 |
| 治疗第15天 | 0.9 | 1.2 | 1.5 | 2.5 | 2.1 | 3.0 |
通过表3中的数据可以看出，本申请实施例1-3中的敷料能够有效促进创口愈合，减少色斑沉积，减少疤痕形成。
Claims (9)
1.一种抗炎羊膜敷贴的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)制备脱细胞羊膜；
(2)分别制备脂肪干细胞和脂肪组织血管基质，然后将脂肪干细胞和油脂加入脂肪组织血管基质中，混合至有絮凝物出现，离心，弃去下层肿胀液以及上层油脂，制得凝胶样基质；
(3)将步骤(2)中凝胶样基质涂抹于步骤(1)中脱细胞羊膜的粗糙面侧，制得。
2.如权利要求1所述的抗炎羊膜敷贴的制备方法，其特征在于，步骤(1)中脱细胞羊膜通过如下方法制得：从洗净的胎盘上剥离获得羊膜，将羊膜用过氧乙酸/氯化钠混合溶液净化处理，然后将羊膜进行灭活后洗净，得灭活羊膜，向灭活羊膜中加入蛋白酶液消化后洗净，然后将洗净的灭活羊膜于过氧乙酸中浸泡灭菌，制得。
3.如权利要求1所述的抗炎羊膜敷贴的制备方法，其特征在于，步骤(2)中脂肪干细胞通过如下方法制得：将清洗后的脂肪组织离心，弃去上层油脂，然后将脂肪组织培养至融合度为50-70％，消化后进行传代培养，待细胞融合度长至70-80％时，向其中加入脂多糖进行诱导培养，然后去除培养基，制得。
4.如权利要求3所述的抗炎羊膜敷贴的制备方法，其特征在于，将培养至P3-P6代的细胞中加入脂多糖进行诱导培养20-30h。
5.如权利要求3所述的抗炎羊膜敷贴的制备方法，其特征在于，脂多糖在培养基中的浓度为0.5-1μg/ml。
6.如权利要求1所述的抗炎羊膜敷贴的制备方法，其特征在于，步骤(2)中脂肪组织血管基质通过如下方法制得：用多侧孔吸脂管进行吸脂，吸脂收获的脂肪置于冰水浴中静置，收集上层脂肪，将收集的脂肪组织离心，收集中间层的脂肪组织，然后将收集的中间层脂肪组织进行乳糜化处理，过滤去除结缔组织，制得。
7.如权利要求6所述的抗炎羊膜敷贴的制备方法，其特征在于，将收集的脂肪组织于1000-1400g的离心力作用下离心2-4min。
8.如权利要求1所述的抗炎羊膜敷贴的制备方法，其特征在于，步骤(2)中于1800-2200g离心力作用下离心2-4min。
9.权利要求1-8任一项所述的方法制得的抗炎羊膜敷贴。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115518193A (zh) * | 2022-09-23 | 2022-12-27 | 青岛大学 | 一种鱼皮胶原蛋白/svf光交联复合水凝胶及其制备方法与应用 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105647859A (zh) * | 2016-03-25 | 2016-06-08 | 秦方园 | 人脐带间充质干细胞与羊膜构建细胞移植片的方法 |
| CN105688287A (zh) * | 2016-01-26 | 2016-06-22 | 深圳爱生再生医学科技有限公司 | 用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片及其制备方法 |
| CN106178134A (zh) * | 2016-07-14 | 2016-12-07 | 鲁峰 | 一种含高度浓缩的脂肪来源干细胞和细胞外基质的脂肪移植材料及其纯物理制备方法和应用 |
| CN107904206A (zh) * | 2017-11-17 | 2018-04-13 | 张家港澳洋医院有限公司 | 一种脂多糖诱导肿瘤细胞生成肿瘤干细胞的用途和方法 |
| CN110946879A (zh) * | 2018-09-26 | 2020-04-03 | 成都清科生物科技有限公司 | 一种包含疏松层的脱细胞生物羊膜及其制备方法 |
| CN115282065A (zh) * | 2022-08-11 | 2022-11-04 | 顾帅 | 一种含间充质干细胞外泌体的冻干粉及其制备方法和应用 |
| CN115651899A (zh) * | 2022-10-28 | 2023-01-31 | 深圳市俊元生物科技有限公司 | 一种分离制备脂肪源干细胞的方法 |
-
2021
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Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105688287A (zh) * | 2016-01-26 | 2016-06-22 | 深圳爱生再生医学科技有限公司 | 用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片及其制备方法 |
| CN105647859A (zh) * | 2016-03-25 | 2016-06-08 | 秦方园 | 人脐带间充质干细胞与羊膜构建细胞移植片的方法 |
| CN106178134A (zh) * | 2016-07-14 | 2016-12-07 | 鲁峰 | 一种含高度浓缩的脂肪来源干细胞和细胞外基质的脂肪移植材料及其纯物理制备方法和应用 |
| CN107904206A (zh) * | 2017-11-17 | 2018-04-13 | 张家港澳洋医院有限公司 | 一种脂多糖诱导肿瘤细胞生成肿瘤干细胞的用途和方法 |
| CN110946879A (zh) * | 2018-09-26 | 2020-04-03 | 成都清科生物科技有限公司 | 一种包含疏松层的脱细胞生物羊膜及其制备方法 |
| CN115282065A (zh) * | 2022-08-11 | 2022-11-04 | 顾帅 | 一种含间充质干细胞外泌体的冻干粉及其制备方法和应用 |
| CN115651899A (zh) * | 2022-10-28 | 2023-01-31 | 深圳市俊元生物科技有限公司 | 一种分离制备脂肪源干细胞的方法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| SHAO-CHUN WU等: "Increased Angiogenesis by Exosomes Secreted by Adipose- Derived Stem Cells upon Lipopolysaccharide Stimulation", INT. J. MOL. SCI., pages 8877 * |
| ZHAO-JUN WANG: "Lipopolysaccharides can protect mesenchymal stem cells (MSCs) from oxidative stress-induced apoptosis and enhance proliferation of MSCs via Toll-like receptor(TLR)-4 and PI3K/Akt", CELL BIOLOGY INTERNATIONAL, pages 665 * |
| 鞠晓军等: "人脱细胞羊膜复合脂肪源性干细胞修复大鼠 全层皮肤缺损的实验研究", 中国修复重建外科杂志, vol. 24, no. 2, pages 143 - 149 * |
| 马继中: "羊膜负载脂肪来源干细胞修复大鼠皮肤缺损的实验研究", 万方 * |
| 黄蓉、范金财: "脂肪组织来源细胞再生技术在整形修复领域中的研究进展", 分子生物医学, vol. 26, no. 19, pages 3774 - 3779 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115518193A (zh) * | 2022-09-23 | 2022-12-27 | 青岛大学 | 一种鱼皮胶原蛋白/svf光交联复合水凝胶及其制备方法与应用 |
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