CN114199832A - 一种抗体检测试剂、检测方法及应用 - Google Patents
一种抗体检测试剂、检测方法及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114199832A CN114199832A CN202010957315.0A CN202010957315A CN114199832A CN 114199832 A CN114199832 A CN 114199832A CN 202010957315 A CN202010957315 A CN 202010957315A CN 114199832 A CN114199832 A CN 114199832A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antibody
- detection reagent
- antibody detection
- fluorescence
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 52
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 49
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 37
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 25
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 claims description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 13
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 12
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 10
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 claims description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 3
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 3
- OBYNJKLOYWCXEP-UHFFFAOYSA-N 2-[3-(dimethylamino)-6-dimethylazaniumylidenexanthen-9-yl]-4-isothiocyanatobenzoate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](C)C)C=C2OC2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC(N=C=S)=CC=C1C([O-])=O OBYNJKLOYWCXEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000012099 Alexa Fluor family Substances 0.000 claims description 2
- 241001116389 Aloe Species 0.000 claims description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 2
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 claims description 2
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 claims description 2
- 235000011399 aloe vera Nutrition 0.000 claims description 2
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 claims description 2
- KRVSOGSZCMJSLX-UHFFFAOYSA-L chromic acid Substances O[Cr](O)(=O)=O KRVSOGSZCMJSLX-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000010432 diamond Substances 0.000 claims description 2
- CMMUKUYEPRGBFB-UHFFFAOYSA-L dichromic acid Chemical compound O[Cr](=O)(=O)O[Cr](O)(=O)=O CMMUKUYEPRGBFB-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- AWJWCTOOIBYHON-UHFFFAOYSA-N furo[3,4-b]pyrazine-5,7-dione Chemical compound C1=CN=C2C(=O)OC(=O)C2=N1 AWJWCTOOIBYHON-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229960002523 mercuric chloride Drugs 0.000 claims description 2
- LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L mercury dichloride Chemical compound Cl[Hg]Cl LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 claims description 2
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000012285 osmium tetroxide Substances 0.000 claims description 2
- 229910000489 osmium tetroxide Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 claims description 2
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N picric acid Chemical compound OC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 2
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 2
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 208000023345 Autoimmune Diseases of the Nervous System Diseases 0.000 claims 1
- -1 anti-quencher Substances 0.000 claims 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 claims 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 14
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 13
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 8
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 7
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 7
- HOKKHZGPKSLGJE-GSVOUGTGSA-N N-Methyl-D-aspartic acid Chemical compound CN[C@@H](C(O)=O)CC(O)=O HOKKHZGPKSLGJE-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 4
- 208000035362 autoimmune disorder of the nervous system Diseases 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 101100298998 Caenorhabditis elegans pbs-3 gene Proteins 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 208000030767 Autoimmune encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 208000036647 Medication errors Diseases 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000019771 cognition Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 231100000225 lethality Toxicity 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 108010054624 red fluorescent protein Proteins 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6486—Measuring fluorescence of biological material, e.g. DNA, RNA, cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
本发明提供了一种抗体检测试剂、检测方法及应用，该试剂包括孔板试剂、荧光标记的二抗、磷酸盐缓冲液。通过不同色系的荧光及荧光组合，应用于判定样本中是否含有目标抗体，从而提高了抗体检测的准确性、灵敏度、特异性。
Description
技术领域
本发明属于免疫检测领域，具体涉及一种抗体检测试剂、检测方法及应用。
背景技术
自身免疫性疾病（AID）是身体任何一个器官或组织都有可能发生，因其在早期缺乏特异性，通常病人初诊不是在免疫科，而是在其他科室，这些科室的临床医生可能因对AID缺乏足够的认识，所以在临床诊断上容易导致误诊。
神经系统自身免疫性疾病是自身免疫性疾病中的一大类重要疾病，主要累及青中年人群，并具有免疫疾病的复杂性和神经系统疾病的高致死、致残性的特点，因而受到临床医师和研究者的高度关注。但由于神经系统自身抗体种类繁多，作用机制各异，导致患者的临床表现复杂，容易造成认识上的混乱。
目前，自身免疫性疾病的确诊需要多种检测手段，除临床、病理、影像等检测外，自身抗体检测在AID诊断中有着不可替代的作用，在符合临床、病理、影像等相关疾病的特征的情况下，抗体检测已成为确定AID最重要的手段。神经系统自身抗体的试剂盒常用的原理是采用间接免疫荧光法制备，间接免疫荧光法保留了原基质的完整抗原谱，因而可同时检测大量抗体，获得较高的检测效率。但是目前的检测手段是采用荧光标记抗体，通过将阳性与阴性样品的信号强度对比明显，利用显微镜观测组织或细胞内荧光的分布，在荧光信号较低的情况下仅通过一种荧光观察容易导致误判，从而导致用药错误或者延误患者及时治疗。
发明内容
为解决上述抗体检测中存在的问题，提高抗体检测的灵敏度和准确性，本发明提供了一种抗体检测试剂、检测方法及应用。通过不同色系的荧光及荧光组合，判定不同色系的荧光斑点是否叠加以及荧光特征是否一致，应用于判定样本中是否含有目标抗体，从而提高了抗体检测的准确性、灵敏度、特异性。
一种抗体检测试剂，该试剂包括孔板试剂、荧光标记的二抗、磷酸盐缓冲液（PBS），其特征在于所述的孔板试剂包括表达荧光蛋白基因的细胞；荧光标记的二抗与表达荧光蛋白基因的细胞中的所述的荧光为不同色系的荧光。
进一步的，所述的孔板试剂还包括未表达荧光蛋白基因的细胞，其与表达荧光蛋白基因的细胞位于不同的区域。
进一步的，所述的表达荧光蛋白基因的细胞和未表达荧光蛋白基因的细胞分别固定在孔板上的加样孔中上。
进一步的，所述的荧光标记的二抗中的使用的荧光物选自异硫氰酸荧光素、罗丹明、四甲基罗丹明异硫氰酸盐、Texas Red、藻红蛋白、碘化丙啶、Alexa Fluor系列、Dylight系列、iFluor系列。
进一步的，所述的一种抗体检测试剂的制备方法包括：
1）表达荧光蛋白基因载体质粒构建；
2）表达荧光蛋白基因的细胞的制备；
3）细胞孔板制备。
进一步的，所述的细胞孔板制备包括：
1）在孔板上的加样孔中上培养细胞；
2）将培养好的细胞去除培养基，使用磷酸盐缓冲液清洗；
3）加入固定液将细胞固定；
4）将固定好的细胞使用封闭液封闭，干燥。
进一步的，所述的固定液选自醛类、甲醇、乙醇、丙酮、四氧化锇、苦味酸、氯仿、铬酸、升汞、重铬酸中的一种或或多种制备成的溶液。
进一步的，所述的封闭液选自聚乙二醇类、BSA、SlowFade Diamond、SlowFadeGold、甘油、石蜡、明胶、芦荟凝胶、防淬灭剂、矿物油中的一种或多种。
一种抗体检测试剂的检测方法，所述的检测方法包括如下步骤：
1）准备血清、血浆或脑脊液样本，取稀释后样本加入孔板上的加样孔内；
2）37℃温育或者4℃过夜；
3）用PBS洗涤；
4）将PBS充分沥干，取荧光标记二抗加入孔板上的加样孔内，37℃温育；
5）用PBS洗涤；
6）向加样孔内加入PBS；
7）将孔板置于荧光显微镜下镜检。
一种抗体检测试剂的应用，所述的一种抗体检测试剂应用于自身免疫性疾病抗体检测试剂的制备，所述的抗体检测试剂可用于制备检测一种抗体或同时检测两种及两种以上的抗体试剂。
进一步的，该抗体检测试剂利用荧光显微镜观察在第一发射波长、第二发射波长下不同色系的荧光斑点及荧光斑点组合，通过判定不同色系的发出荧光斑点的位置能否重叠以及荧光特征是否一致，应用于判定样本中是否含有目标抗体。
进一步的，所述抗体检测试剂应用于自身免疫性疾病抗体检测试剂的制备，优选应用于神经系统自身免疫性疾病抗体检测试剂的制备。
本发明至少具有以下有益效果：
1）本发明提供了一种抗体检测试剂、检测方法及应用。2）通过本发明制备抗体检测试剂能够检测人体内的抗体，尤其是自身免疫性抗体，该检测试剂的特异性强、灵敏度高、实验结果重复性好，能够进行推广应用，这在临床上具有极其重要的意义。3）此外，本发明针对现有技术在荧光信号较低的情况下容易导致误判的问题，本发明通过将细胞表达荧光蛋白，再加入荧光标记的二抗，通过观察绿色荧光细胞的位置与发出红色荧光细胞的位置能够重叠以及荧光特征，降低在荧光信号较低的情况仅通过一种荧光下容易导致误判的问题。4）检测试剂为孔板形式，孔板上的加样孔为固定式或可拆卸式的，可根据样本的数量多少选择不同的孔板进行检测，减少浪费。
附图说明
图1-图2：血清样本用抗NMDA受体抗体试剂检测在显微镜下荧光图（样本中含有抗NMDA受体抗体）。
图3-图4：血清样本用抗NMDA受体抗体试剂检测在显微镜下荧光图（样本中不含有抗NMDA受体抗体）。
具体实施方式
本发明的其他目的、特征和优点将从以下详细描述中变得明显。但是，应当理解的是，详细描述和具体实施例仅为解释性目的而给出，因为在阅读该详细说明后，在本发明的精神和范围内所作出的各种改变和修饰，对于本领域技术人员来说将变得显而易见。
本发明实施例通过制备抗N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体抗体检测试剂，以及利用该检测试剂检测体内抗NMDA受体抗体，从而判定体内是否含有抗NMDA受体抗体，为临床医生诊断自身免疫性脑炎提供依据。本实施例中使用的表达荧光NMDA蛋白基因载体质粒构建是委托其他生物科技公司进行的构建。
其中实施例中采用红色色系的荧光和绿色色系的荧光，其中所述的mCherry发出红色荧光，Dylight 488发出绿色荧光。其中细胞制备用荧光也可以采用绿色荧光，而标记荧光采用红色；只要保证二者荧光色差肉眼容易区别开即可。
实施例1：表达mCherry荧光抗NMDA受体蛋白基因的细胞的制备
1）利用大肠杆菌扩增mCherry载体质粒，并用试剂盒纯化得到纯化后的质粒；
2）使用磷酸钙转染法将质粒转入细胞进行表达；
3）在载体质粒表达48小时后将细胞固定。
实施例2：检测抗NMDA受体抗体试剂的制备
1）在96孔板上培养细胞，在显微镜下观察细胞生长情况，待细胞涨至近100%；
2）去除培养基，使用1×PBS清洗；
3）加入50µl的4%多聚甲醛固定液将细胞固定60min，弃去固定液，加入50µl的1×PBS洗涤2次；
4）加入50µl的5%BSA封闭液封闭20min，弃去封闭液，加入50µl的1×PBS洗涤2次，干燥。
实施例3：抗NMDA受体抗体试剂用于样品的检测检测
实施例2中制备得到的试剂用于抗NMDA受体抗体检测的方法如下：
1）准备血清样本，取稀释后样本30µl-40µl加入96孔板上的加样孔内；
2）37℃温育1小时或者4℃过夜；
3）1×PBS洗涤3次，每次3分钟；
4）将1×PBS充分沥干，取30µl-40µl取30µl-40µl荧光Dylight 488标记的山羊抗人二抗加入孔板上的加样孔内，37℃温育30分钟；
5）1×PBS洗涤3次，每次3分钟；
6）反应区内加入30µl-40µl的1×PBS；
7）将孔板置于荧光显微镜下镜检。
实施例4：应用显微镜判读样本中抗NMDA受体抗体
1）利用荧光显微镜分别在518nm波长、610nm波长下观察发出的荧光斑点，通过观察是否发出绿色荧光斑点；
2）将发出绿色荧光斑点的位置、特征与发出红色荧光斑点的位置进行比对是否重叠；
3）如果发出绿色荧光斑点的位置与发出红色荧光斑点的位置能够重叠，并且特征基本一致，可以判定样本中含有NMDA目标抗体；
4）如果不能发出绿色荧光斑点；或发出绿色荧光斑点的位置与发出红色荧光斑点的位置不能重叠；或发出绿色荧光斑点的位置与发出红色荧光斑点的位置能够重叠，但是特征差别较大；可以判定样本中不含有NMDA目标抗体。
图1红色荧光斑点与图2绿色荧光斑点的位置重叠而且特征基本一致，说明样本中含有目标抗体抗—NMDA受体抗体；图3红色荧光斑点的位置在图4中没有荧光斑点，说明样本中不含有目标抗体—抗NMDA受体抗体。
本说明书公开的所有技术特征都可以任何组合方式进行组合。本发明所公开的每个特征也可以被其它具有相同、相等或相似作用的特征所替换。因此，除非特殊说明，所公开的每一特征仅仅是一系列相等或相似特征的实例。
此外，从上述描述中，本领域技术人员可从本发明中很容易清楚本发明的关键特征，在不脱离本发明的精神及范围的情况下，可对本发明进行修改以适应各种不同的使用目的及条件，因此这类修改也旨在落入所附权利要求书的范围内。
Claims (12)
1.一种抗体检测试剂，该试剂包括孔板试剂、荧光标记的二抗、磷酸盐缓冲液，其特征在于所述的孔板试剂包括表达荧光蛋白基因的细胞；荧光标记的二抗与表达荧光蛋白基因的细胞中的所述的荧光为不同色系的荧光。
2.如权利要求1所述的一种抗体检测试剂，其特征在于所述的孔板试剂还包括未表达荧光蛋白基因的细胞，其与表达荧光蛋白基因的细胞位于不同的区域。
3.如权利要求2所述的一种抗体检测试剂，其特征在于所述的表达荧光蛋白基因的细胞和未表达荧光蛋白基因的细胞分别固定在孔板上的加样孔中上。
4.如权利要求1所述的一种抗体检测试剂，其特征在于所述的荧光标记的二抗中的使用的荧光物选自异硫氰酸荧光素、罗丹明、四甲基罗丹明异硫氰酸盐、Texas Red、藻红蛋白、碘化丙啶、Alexa Fluor系列、Dylight系列、iFluor系列。
5.如权利要求1-4任一项所述的一种抗体检测试剂，其特征在于所述的孔板试剂的制备方法包括：
1）表达荧光蛋白基因载体质粒构建；
2）表达荧光蛋白基因的细胞的制备；
3）细胞孔板制备。
6.如权利要求5所述的一种抗体检测试剂，其特征在于所述的细胞孔板制备包括：
1）在孔板上的加样孔中上培养细胞；
2）将培养好的细胞去除培养基，使用磷酸盐缓冲液清洗；
3）加入固定液将细胞固定；
4）将固定好的细胞使用封闭液封闭，干燥。
7.如权利要求6所述的一种抗体检测试剂，其特征在于所述的固定液选自醛类、甲醇、乙醇、丙酮、四氧化锇、苦味酸、氯仿、铬酸、升汞、重铬酸中的一种或或多种制备成的溶液。
8.如权利要求6所述的一种抗体检测试剂，其特征在于所述的封闭液选自聚乙二醇类、BSA、SlowFade Diamond、SlowFade Gold、甘油、石蜡、明胶、芦荟凝胶、防淬灭剂、矿物油中的一种或多种。
9.一种抗体检测方法，其特征在于，该检测方法包括如下步骤：
1）准备血清、血浆或脑脊液样本，取稀释后样本加入孔板上的加样孔内；
2）37℃温育或者4℃过夜；
3）用PBS洗涤；
4）将PBS充分沥干，取荧光标记二抗加入孔板上的加样孔内，37℃温育；
5）用PBS洗涤；
6）向加样孔内加入PBS；
7）将孔板置于荧光显微镜下镜检。
10.一种抗体检测试剂的应用，其特征在于如权利要求1-4、6-9任一项所述的一种抗体检测试剂应用于自身免疫性疾病抗体检测试剂的制备，所述的抗体检测试剂可用于制备检测一种抗体或同时检测两种及两种以上的抗体试剂。
11.如权利要求10所述的一种抗体检测试剂的应用，其特征在于该抗体检测试剂利用荧光显微镜观察在第一发射波长、第二发射波长下不同色系的荧光斑点及荧光斑点组合，通过判定不同色系的发出荧光斑点的位置能否重叠以及荧光特征是否一致，应用于判定样本中是否含有目标抗体。
12.如权利要求10所述的一种抗体检测试剂的应用，其特征在于所述的应用优选应用于神经系统自身免疫性疾病抗体检测试剂的制备。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010957315.0A CN114199832A (zh) | 2020-09-17 | 2020-09-17 | 一种抗体检测试剂、检测方法及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010957315.0A CN114199832A (zh) | 2020-09-17 | 2020-09-17 | 一种抗体检测试剂、检测方法及应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114199832A true CN114199832A (zh) | 2022-03-18 |
Family
ID=80644508
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010957315.0A Pending CN114199832A (zh) | 2020-09-17 | 2020-09-17 | 一种抗体检测试剂、检测方法及应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114199832A (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020168657A1 (en) * | 2001-02-02 | 2002-11-14 | Chen Lan Bo | Rare event detection system |
| CN106318974A (zh) * | 2016-08-29 | 2017-01-11 | 南方医科大学南方医院 | 细胞固定工艺及通过该工艺制备aqp4抗体检测试剂盒 |
| CN107109423A (zh) * | 2014-06-05 | 2017-08-29 | 武汉友芝友生物制药有限公司 | 用于生产双特异性抗体的细胞的制备和挑选 |
-
2020
- 2020-09-17 CN CN202010957315.0A patent/CN114199832A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020168657A1 (en) * | 2001-02-02 | 2002-11-14 | Chen Lan Bo | Rare event detection system |
| CN107109423A (zh) * | 2014-06-05 | 2017-08-29 | 武汉友芝友生物制药有限公司 | 用于生产双特异性抗体的细胞的制备和挑选 |
| CN106318974A (zh) * | 2016-08-29 | 2017-01-11 | 南方医科大学南方医院 | 细胞固定工艺及通过该工艺制备aqp4抗体检测试剂盒 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101587043B (zh) | 从生物体液样本中富集与检测稀有细胞的整合方法 | |
| CA2905954C (en) | Methods of detecting donor-specific antibodies and systems for practicing the same | |
| CN108445232B (zh) | Nf-l在神经梅毒脑脊液检测中的应用 | |
| CN110873711B (zh) | 一种基于全自动化学发光分析仪的血清tk1检测试剂盒 | |
| KR20230079354A (ko) | 단백질 또는 프로테옴의 존재 및/또는 농도 및/또는 양을 확인하는 방법 | |
| CN102313813B (zh) | 从生物体液样本中富集与检测稀有细胞的整合方法 | |
| CN114689860A (zh) | 一种抗nmdar抗体检测试剂 | |
| CN114199832A (zh) | 一种抗体检测试剂、检测方法及应用 | |
| CN114199833A (zh) | 一种抗体检测试剂、检测方法及应用 | |
| CN108414741B (zh) | 一种免疫组合物在制备膜性肾病无创检测用试剂中的用途 | |
| US20040265917A1 (en) | Methods of measuring the ability of a test compound to inactivate a biological target in cells of a subject | |
| CN114689862A (zh) | 抗nmdar抗体检测试剂 | |
| CN114689861A (zh) | 一种脑炎联检试剂 | |
| CN114689863A (zh) | 脑炎联检试剂 | |
| CN108414478A (zh) | 一种生物样品的检测方法 | |
| US20220196663A1 (en) | Reagents and Methods for Cancer Detection, Prognosis, and Therapeutic Monitoring | |
| CN108646030B (zh) | 一种大动脉炎检测的生物标志物面板及其用途 | |
| US10036746B2 (en) | Method for the diagnosis of neuromyelitis optica | |
| KR101503323B1 (ko) | 나노프로브를 이용한 자가면역질환 진단용 말초 혈액 세포 내 활성 기질 금속 단백질 분해효소의 정량화 방법 | |
| CN114924075B (zh) | 基于聚焦阵列蛋白芯片筛选用于贲门腺癌诊断的生物标志物及其应用 | |
| CN114689866A (zh) | 一种视神经脊髓炎抗体检测试剂 | |
| CN114689859A (zh) | 一种膜性肾病抗体检测试剂 | |
| US11231422B2 (en) | Methods and kits for predicting the risk of having or developping hepatocellular carcinoma in patients suffering from cirrhosis | |
| CN114689864A (zh) | 膜性肾病抗体检测试剂 | |
| CN114689837A (zh) | 与毛细血管内皮细胞的移植相关抗原致敏状态有关的培养物、其用途及包含其的检测试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |