CN114196586B - 一株蒙氏肠球菌及其在发酵中草药中的应用 - Google Patents
一株蒙氏肠球菌及其在发酵中草药中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114196586B CN114196586B CN202111560461.0A CN202111560461A CN114196586B CN 114196586 B CN114196586 B CN 114196586B CN 202111560461 A CN202111560461 A CN 202111560461A CN 114196586 B CN114196586 B CN 114196586B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- strain
- astragalus
- enterococcus
- chinese herbal
- fermentation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 title abstract description 15
- 241000520134 Enterococcus mundtii Species 0.000 title abstract description 13
- 235000006533 astragalus Nutrition 0.000 abstract description 39
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 abstract description 31
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 abstract description 29
- 241001061264 Astragalus Species 0.000 abstract description 24
- 210000004233 talus Anatomy 0.000 abstract description 23
- 241000045403 Astragalus propinquus Species 0.000 abstract description 16
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 abstract description 12
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 abstract description 12
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 abstract description 12
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 abstract description 12
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 abstract description 12
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 abstract description 12
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 abstract description 12
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 abstract description 12
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 abstract description 12
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 abstract description 12
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 abstract description 10
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 abstract description 9
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 3
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 abstract 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 12
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 7
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 6
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 4
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 4
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000009636 Huang Qi Substances 0.000 description 3
- QMNWISYXSJWHRY-YLNUDOOFSA-N astragaloside IV Chemical compound O1[C@H](C(C)(O)C)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@]2(C)CC[C@]34C[C@]4(CC[C@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO4)O)C4(C)C)[C@H]4[C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)C[C@H]3[C@]2(C)C[C@@H]1O QMNWISYXSJWHRY-YLNUDOOFSA-N 0.000 description 3
- QMNWISYXSJWHRY-BCBPIKMJSA-N astragaloside IV Natural products CC(C)(O)[C@@H]1CC[C@@](C)(O1)[C@H]2[C@@H](O)C[C@@]3(C)[C@@H]4C[C@H](O[C@@H]5O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]5O)[C@H]6C(C)(C)[C@H](CC[C@@]67C[C@@]47CC[C@]23C)O[C@@H]8OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]8O QMNWISYXSJWHRY-BCBPIKMJSA-N 0.000 description 3
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 3
- PFKIBRPYVNVMRU-UHFFFAOYSA-N cyclosieversioside F Natural products CC(C)(O)C1COC(C)(C1)C2C(O)CC3(C)C4CC(OC5OC(CO)C(O)C(O)C5O)C6C(C)(C)C(CCC67CC47CCC23C)OC8OCC(O)C(O)C8O PFKIBRPYVNVMRU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 3
- BNGXYYYYKUGPPF-UHFFFAOYSA-M (3-methylphenyl)methyl-triphenylphosphanium;chloride Chemical compound [Cl-].CC1=CC=CC(C[P+](C=2C=CC=CC=2)(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)=C1 BNGXYYYYKUGPPF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N Bioquercetin Natural products CC1OC(OCC(O)C2OC(OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 229940040526 anhydrous sodium acetate Drugs 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- -1 diamine citrate Chemical class 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N eriodictyol 7-O-rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C=C3C(C(C(O)=C(O3)C=3C=C(O)C(O)=CC=3)=O)=C(O)C=2)O1 IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 2
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 2
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 2
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N quercetin rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 2
- IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N rutin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@@H]1OC[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N 0.000 description 2
- ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N rutin Natural products CC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5 ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000005493 rutin Nutrition 0.000 description 2
- 229960004555 rutoside Drugs 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 2
- YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N triammonium citrate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[NH4+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUCIJNAGGSZNQT-JHSLDZJXSA-N (R)-amygdalin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H](C#N)C=2C=CC=CC=2)O1 XUCIJNAGGSZNQT-JHSLDZJXSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AEQDJSLRWYMAQI-UHFFFAOYSA-N 2,3,9,10-tetramethoxy-6,8,13,13a-tetrahydro-5H-isoquinolino[2,1-b]isoquinoline Chemical compound C1CN2CC(C(=C(OC)C=C3)OC)=C3CC2C2=C1C=C(OC)C(OC)=C2 AEQDJSLRWYMAQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- QWIZNVHXZXRPDR-UHFFFAOYSA-N D-melezitose Natural products O1C(CO)C(O)C(O)C(O)C1OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O QWIZNVHXZXRPDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 229920002488 Hemicellulose Polymers 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 239000000980 acid dye Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 229940089837 amygdalin Drugs 0.000 description 1
- YZLOSXFCSIDECK-UHFFFAOYSA-N amygdalin Natural products OCC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC(C#N)c3ccccc3 YZLOSXFCSIDECK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003471 anti-radiation Effects 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- 229940107666 astragalus root Drugs 0.000 description 1
- 238000010923 batch production Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- DLRVVLDZNNYCBX-ZZFZYMBESA-N beta-melibiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-ZZFZYMBESA-N 0.000 description 1
- 239000011942 biocatalyst Substances 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004531 blood pressure lowering effect Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000002934 diuretic Substances 0.000 description 1
- 230000001882 diuretic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 210000001842 enterocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229930186222 escin Natural products 0.000 description 1
- 229940011399 escin Drugs 0.000 description 1
- YGHHWSRCTPQFFC-UHFFFAOYSA-N eucalyptosin A Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(OC(C#N)C=2C=CC=CC=2)OC(CO)C(O)C1O YGHHWSRCTPQFFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003832 immune regulation Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 229930013686 lignan Natural products 0.000 description 1
- 150000005692 lignans Chemical class 0.000 description 1
- 235000009408 lignans Nutrition 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- QWIZNVHXZXRPDR-WSCXOGSTSA-N melezitose Chemical compound O([C@@]1(O[C@@H]([C@H]([C@@H]1O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O)CO)CO)[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O QWIZNVHXZXRPDR-WSCXOGSTSA-N 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- ZAOCWQZQPKGTRN-UHFFFAOYSA-N nitrous acid;sodium Chemical compound [Na].ON=O ZAOCWQZQPKGTRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 1
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000004460 silage Substances 0.000 description 1
- 239000000176 sodium gluconate Substances 0.000 description 1
- 235000012207 sodium gluconate Nutrition 0.000 description 1
- 229940005574 sodium gluconate Drugs 0.000 description 1
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000001256 steam distillation Methods 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
- C12P33/20—Preparation of steroids containing heterocyclic rings
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明属于微生物领域，涉及一株蒙氏肠球菌，特别是指一株蒙氏肠球菌及其在发酵中草药中的应用。其保藏编号为CCTCC NO:M 20211504，分类名为Enterococcus mundtii MY‑YD‑1，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2021年11月29日，保藏地址为中国.武汉.武汉大学。将此菌株用于传统中草药黄芪的发酵，能够大幅提高黄芪中有效成分黄芪多糖、黄酮类及皂苷类化合物的释放量。借助菌株发酵中草药是提高其活性成分的有效方法。本发明的蒙氏肠球菌MY‑YD‑1菌株发酵黄芪性能好，活性成分产量高，未来可用于小规模及大规模的工业生产，从而带来很强的经济效益。
Description
技术领域
本发明属于微生物领域，涉及一株蒙氏肠球菌，特别是指一株蒙氏肠球菌（
Enterococcus mundtii）及其在发酵中草药中的应用。
背景技术
黄芪是豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根，是一种历史悠久的传统中药，中医临床上常用的大宗中药材，其常与其他中药组成方剂，用来发挥抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、抗辐射损伤、心血管保护、免疫调节、肝肾保护、调节血糖、降血脂、降压、利尿等作用。不仅如此，其在食品、保健品、化妆品等行业具有广泛的应用前景。黄芪中的主要成分为黄芪多糖、黄酮类、皂苷类、氨基酸等，此外，黄芪中还含有生物碱类、木脂素类、甾醇类和微量元素等，具有很高的应用价值。运用传统方法如压榨法、水蒸气蒸馏法、溶剂提取法等直接提取黄芪中的有效成分，其产出量低，不能得到充分利用。
中药发酵是以微生物或酶为生物催化剂，对中药或中药提取物进行生物转化，使中药成为快速利用、定量疗效的新型药物。中药发酵可以提高中药有效成分的含量，增强疗效并可能产生新的活性成分，同时改善中药口感及减轻中药毒副作用。目前，利用益生菌发酵中药的报道较多，以往的多项研究也说明了利用发酵技术可以使黄芪活性成分得到较大程度的释放。牛是一种草食性动物，其分解纤维素、半纤维素的能力很强，这可能因为其胃肠道中含有大量具有木质纤维素酶等水解酶的菌株有关；而中草药中也含有大量木质纤维素及其他含糖基天然产物，药效与其有效成分的释放量高低相关。通过喂食中草药，有望在牛粪中分离培养得到水解提高黄芪等中草药活性成分的相关菌株，用于发酵黄芪等中草药，从而提高黄芪中黄芪多糖、黄酮类、皂苷类等有效成分的含量。
因此，本领域有待于利用菌株分离、培养、鉴定和发酵等技术来提高黄芪中有效成分的含量。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明公开了一株蒙氏肠球菌（
Enterococcus mundtii）及其在发酵中草药中的应用，其分离自一头六个月大、健康的西门塔尔牛的粪便物。并将其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号CCTCC NO:M 20211504，分类名为分类名为
Enterococcus mundtii MY-YD-1，保藏时间2021年11月29日，保藏地址为中国.武汉.武汉大学。
上述的蒙氏肠球菌在发酵中草药高产黄芪多糖中的应用。
上述的蒙氏肠球菌在发酵中草药高产总黄酮中的应用。
上述的蒙氏肠球菌在发酵中草药高产总皂苷中的应用。
优选的，所述中草药为黄芪。
包含所述的蒙氏肠球菌的发酵菌剂。
进一步，所述的发酵菌剂的制备方法，步骤为：将蒙氏肠球菌接入MRS培养基进行斜面培养，所得培养物再进行发酵培养，所得产物为发酵菌剂。
优选的，所述蒙氏肠球斜面培养的接种量为103 CFU。
优选的，所述斜面培养的条件为：温度37℃，厌氧培养，时间为24h，pH值为6.0-6.4。
优选的，所述发酵培养的条件为：温度37℃，厌氧培养，转速100r/min，时间为48小时，pH值为6.0-6.4。
本发明具有以下有益效果：
1、本发明从河南省卫辉市太公镇郭坡村和唐庄镇唐庄村中，采集了西门塔尔（9头）、夏洛莱（2头）、黑白花（1头）共三个品种12头牛的粪便样本，通过培养组学的方法，从中培养并筛选出了一株蒙氏肠球菌（
Enterococcus mundtii）MY-YD-1菌株，并利用其发酵黄芪产多糖、黄酮类和皂苷类化合物，较对照组产量分别提高了72.6%，37.5%，和51.1%，具有良好的应用和开发前景。
2、本发明的菌株具有发酵黄芪性能好，安全性高，黄芪多糖、黄酮类和皂苷类化合物产量高的特点。可用于制备和生产黄芪的活性成分。本发明实用性强，操作简便，对发酵设备及生产条件没有特殊要求，利用一般发酵厂的设备和生产条件即可生产，投资少、见效快、效益高，不但适合于小批量的生产，还适合于大规模的生产，具有广阔的实际应用前景。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明的蒙氏肠球菌（
Enterococcus mundtii）MY-YD-1菌株的菌落形态图。
图2为本发明的蒙氏肠球菌（
Enterococcus mundtii）MY-YD-1菌株的生长曲线图。
图3为菌株MY-YD-1发酵黄芪前后活性成分含量对比图。
图4为菌株MY-YD-1发酵黄芪过程中总多糖含量变化图。
图5为菌株MY-YD-1发酵黄芪过程中总黄酮含量变化图。
图6为菌株MY-YD-1发酵黄芪过程中总皂苷含量变化图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
牛粪来源的菌株的分离和培养：
（1）样本采集与处理
准备12支无菌的10mL的玻璃材质的样品收集管，在河南省卫辉市太公镇郭坡村、唐庄镇唐庄村和唐庄镇山彪村共3个村庄中，采集了西门塔尔（9头）、夏洛莱（2头）、黑白花（1头）共三个品种12头牛的粪便样本。这些牛所食用的饲料有全价精料、全株青贮、干草、玉米、麦麸以及牧生元（发酵中药）。采集并准确称取上述12头牛各0.5g的粪便样本，分别加入9.5mL的样品稀释液（0.9 %质量浓度的生理盐水），加入编号分别为1-1、1-2、1-3、2-1、2-2、2-3、3-1、3-2、3-3、4-1、4-2、4-3的样品收集管中快速振荡混匀。分别稀释到10-5、10-6、10-7三个倍数。
MRS琼脂培养基
蛋白胨10g/L，牛肉浸粉5g/L，酵母浸粉4g/L，葡萄糖20g/L，吐温-1ml/L，磷酸氢二钾2g/L，无水乙酸钠5g/L，柠檬酸铵2g/L，硫酸镁0.2g/L，硫酸锰0.05g/L，琼脂粉20g/L，加超纯水至1L，调pH到6.0-6.4。121℃，高压蒸汽灭菌20min。
（2）菌株分离与纯化
取100μL上述梯度稀释过的混悬液用涂布棒快速均匀涂布到MRS琼脂培养基中，用封口膜封口，放入厌氧罐中，厌氧罐中放入一包产气厌氧袋，保证无氧环境。37℃培养24h。
挑取上述琼脂培养基上的典型菌落，接种到装有5ml的MRS液体培养基的厌氧管中，37℃培养24h。固体和液体MRS培养基反复接种5次。
MRS液体培养基
蛋白胨10g/L，牛肉浸粉5g/L，酵母浸粉4g/L，葡萄糖20g/L，吐温-1mL/L，磷酸氢二钾2g/L，无水乙酸钠5g/L，柠檬酸铵2g/L，硫酸镁0.2g/L，硫酸锰0.05g/L，加超纯水至1L，调pH到6.0-6.4。121℃，高压蒸汽灭菌20min。
（3）菌株的冻存
总共分离培养得到了12个菌株，对最后一次培养的菌液进行保种，分别取300μL的甘油（50%，v/v）和700μL的菌液，装入保种管，编号，放入-80℃冻存。
实施例2
筛选能提高黄芪活性成分含量的菌株
黄芪饮片为蒙古黄芪。黄芪经自然干燥、粉碎至60目，保存待用。
（1）菌株的复苏、传代
配制MRS培养基，高压备用。将冻存的12个分离菌株，按照2%的比例，即将1mL菌液接种到已经配制好的50mLMRS液体培养基中，37℃厌氧培养24h。经复苏的菌株继续按照2%的比例接种到新的MRS液体培养基中，如此传至第4代。
（2）发酵培养基的配制、发酵
配制12组发酵培养基各2L，并设置3个重复，以200g生药黄芪根为对照组，比较用各个菌株发酵前后黄芪主要成分的含量变化，各组培养基均在121℃条件下高压灭菌20min。
分别将上述传至第4代的12个分离菌株按照5％的接菌量接到发酵培养基中，在37℃、pH为5.6的发酵条件下发酵48h。
（3）粗多糖、总黄酮及总皂苷的提取与测定
分别在发酵24小时前每隔2小时、24小时后每隔4小时取样，将其发酵产物采用冷冻干燥机冻干，冻干粉干燥保存。冻干粉中黄芪成分与总重量之比为4：6。对照组生药黄芪根称取与冻干粉中黄芪成分相等的重量，与冻干粉一同测定。
a. 粗多糖的提取及测定
标准曲线的制作：准确称取干燥至恒重的葡萄糖20mg，置于100mL容量瓶中，加纯水制成0.2mg/mL的葡萄糖溶液。分别吸取1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0和13.0mL置于25mL容量瓶中，加水稀释至刻度线。分别准确吸取2.0mL置于具塞试管中，加入5%苯酚1.0mL，摇匀，室温下静置10min，沸水浴15min，冷却。在490nm处测定吸光度。
分别取三组黄芪的发酵冻干粉14.25g及发酵前样品10g溶于纯水中，3000r/min离心10min，将上清液分装在50mL离心管中。将离心后的残渣继续加纯水，沸水浴1.5h，离心，取上清液，合并两次上清液即得黄芪粗提液。将黄芪粗提液浓缩至黏稠状态，加入95% 乙醇过夜。离心，用20mL纯水充分溶解沉淀，200倍稀释。准确吸取稀释液2mL于具塞试管中，加入5%新鲜配置的苯酚溶液1mL，摇匀。再加入5mL浓硫酸，沸水浴15min，室温静置10min，冷却，在490nm处测定吸光度。
b. 总黄酮的提取及测定
标准曲线的制作：准确称取经105℃干燥的芦丁对照品5mg，置于25mL容量瓶中，加入乙醇7.5mL，经水浴微热使其溶解，待冷却后，加蒸馏水稀释至刻度线，摇匀，即得0.2mg/mL标准溶液。准确称取0、0.4、0.8、1.2、1.6和2.0mL芦丁标准溶液，分别放入10mL容量瓶中，分别加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4和0mL30%乙醇溶液，加入5%亚硝酸钠0.5mL，摇匀，放置6min。加入10%硝酸铝溶液0.5mL，放置6min，加入4%氢氧化钠溶液4.0mL，以蒸馏水稀释至刻度线。摇匀后放置15min，在510nm处测定吸光度。
将按照上述方法制得的黄芪粗提液浓缩至10mL，准确吸取2mL于10mL容量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液0.5mL，摇匀，放置6min。加入10%硝酸铝溶液0.5mL，放置6min。加入4%氢氧化钠溶液4.0mL，摇匀。加入30%乙醇至刻度线，放置15min，在510nm处测定吸光度。
c. 总皂苷的提取及测定
标准曲线的制作：准确称取黄芪甲苷5mg置于25mL容量瓶中，加入甲醇，定容至刻度线，溶解摇匀，即得0.2mg/mL黄芪甲苷溶液。分别吸取0.1、0.2、0.4、0.6和0.8mL黄芪甲苷标准品加入干燥的试管中，水浴蒸发多余甲醇，加入5%香草醛－冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，于60℃恒温水浴中加热15min，取出。流水冷却2min，加冰醋酸5mL，摇匀，以相应试剂为空白对照，在590mL处测吸光度。
准确吸取黄芪浓缩液0.2mL于干燥的试管中，水浴蒸发上清液，加入新鲜配制的5%香草醛－冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，在60℃水浴中加热15min，取出。流水冷却2min，加人冰醋酸5mL，摇匀，在590nm处测定吸光度。
经测定，用菌株MY-YD-1发酵过的黄芪发酵液，主要活性成分的含量明显高于其他11个菌株，其中总多糖为14.5mg/mL（图3，组1），发酵过程中含量变化（图4）；总黄酮为0.11mg/mL（图3，组3），发酵过程中含量变化（图5）；总皂苷的含量为0.68 ml/mL（图3，组5），发酵过程中含量变化（图6）；未经发酵的对照组黄芪中总多糖为8.4 mg/mL（图3，组2），总黄酮为0.08mg/mL（图3，组4），总皂苷的含量为0.45ml/mL（图3，组6）。
经过上述一系列实验证明，菌株MY-YD-1用于发酵黄芪使其主要活性成分总多糖、总黄酮、总皂苷的产量分别提高了72.6%，37.5%，和51.1%；如运用到生产和生活中，将会带来巨大的经济价值。
实施例3
包含菌株MY-YD-1的发酵菌剂的制备实施例
将菌株MY-YD-1（接种量为103CFU）接入MRS培养基斜面进行培养：时间：16-24小时，环境：厌氧发酵，温度：36.5-37.5℃，初始pH：6.0-6.4。
MRS斜面培养基成分为：1%蛋白胨，1%牛肉浸膏，0.5%酵母粉，0.2%枸橼酸二胺，2%葡萄糖，0.5%乙酸钠，0.2%磷酸氢二钾，0.0058%的MgSO4·7H2O，0.025%的MnSO4·4H2O，0.1%（v/v）的吐温-80，pH为6.2，3%琼脂。
将上步得到的培养物（接种量为103 CFU）为接入一级或二级种子培养基培养：时间24-48小时，环境：厌氧发酵，温度：36.5-37.5℃，转速100r/min，初始pH：6.0-6.4，培养后得到发酵菌剂。
种子培养基成分为：1%蛋白胨，1%牛肉浸膏，0.5%酵母粉，0.2%枸橼酸二胺，2%葡萄糖，0.5%乙酸钠，0.2%磷酸氢二钾，0.0058%的MgSO4·7H2O，0.025%的MnSO4·4H2O，0.1%（v/v）的吐温-80，pH为6.2。
实施例4
菌株MY-YD-1的鉴定
（1）PCR扩增16S rDNA
1）扩增模板的获得。另取1mL的上述最后一次培养得到的菌株的菌液于1.5mL的EP管中，10000 g转速离心1min，弃去培养基，加入1mL的灭菌超纯水，重悬，再次10000 g转速离心1min，弃去上清液，重复3遍，最后加入0.2mmol/L的溶菌酶1mL，重悬，在振荡器上振荡20min，得到用于PCR扩增的模板。
2）PCR体系为50μL，其中Mix为25μL，模板为1μL，引物27F为1μL（10 μM），引物1492R为1μL（10 μM），ddH2O为22μL。
所用引物为27F（5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCA-3’）,SEQ ID NO：2和1492R（5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’）,SEQ ID NO：3。扩增片段长度约1500bp。
3）PCR条件
DNA双链在95℃，5min的条件下预变性；95℃，30s变性；55℃，30s，复火；72℃，70s延伸，并循环27次，最后72℃下保持10min。
（2）琼脂糖凝胶电泳
称取0.8g琼脂糖溶于80mL的1*TAE溶液中，微波炉加热2min溶解后，加入8μL核酸染料；注胶凝固后，每个点样孔加样3-5μL；于220V电压下运行10min；胶板在UV下观察图像，挑选条带清晰的PCR产物送北京擎科生物科技有限公司进行测序。
（3）16S rDNA序列分析鉴定
经北京擎科生物科技有限公司测序，得到菌株MY-YD-1的16S rDNA序列如SEQ IDNO.1所示，并采用BLAST分析工具(blast.ncbi.nlm.nih.gov)与GenBank/EMBL/DDBJ数据库比对，经分析鉴定，菌株MY-YD-1为蒙氏肠球菌（
Enterococcus mundtii）。
（4）该菌菌落图如图1所示，菌落特征为：呈球状，MRS琼脂培养基上菌落为白色，菌落大小0.5mm-0.8mm，凸起，光滑，湿润，不透明。
（5）该菌生理生化反应特性：溶血试验出现溶血，生化鉴定出现苦杏仁昔、纤维二糖、七叶灵、果糖、半乳糖、葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、甘露糖、蜜二糖、棉子糖、水杨昔、蔗糖和海藻糖的阳性反应乳糖、接触酶、氧化酶、阿拉伯糖、葡萄糖酸钠、松三糖鼠李糖、核糖、山梨醇和木糖的阴性反应。
（6）菌株MY-YD-1生长曲线的绘制：
取第4代菌株MY-YD-1接种到50 mL的MRS液体培养基中，在100r/min 、37 ℃条件下厌氧培养0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24h，取出，根据需要稀释后测吸光度，设置三个平行重复，绘制菌的生长曲线，如图2所示。
依据形态特征、生理生化特征等微生物学特性及其遗传特性16S rDNA将该菌鉴定为蒙氏肠球菌（
Enterococcus mundtii）。该蒙氏肠球菌（
Enterococcus mundtii）已保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCCNO:M 20211504，保藏日期为2021年11月29日，命名为MY-YD-1。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
<110> 郑州大学
河南牧一动物药业有限公司
河南现代发酵技术研究院有限公司
<120> 一株蒙氏肠球菌及其在发酵中草药中的应用
<141> 2021-12-20
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1457
<212> DNA
<213> Enterococcus mundtii
<400> 1
cggggtgtgc tataatgcaa gtcgaacgct tcttttccca ccggagcttg ctccaccggg 60
aaaagaggag tggcgaacgg gtgagtaaca cgtgggtaac ctgcccatca gaaggggata 120
acacttggaa acaggtgcta ataccgtata acaatcgaaa ccgcatggtt tcgttttgaa 180
aggcgcttta cggtgccgct gatggatgga cccgcggtgc attagctagt tggtgaggta 240
acggctcacc aaggccacga tgcatagccg acctgagagg gtgatcggcc acattgggac 300
tgagacacgg cccaaactcc tacgggaggc agcagtaggg aatcttcggc aatggacgaa 360
agtctgaccg agcaacgccg cgtgagtgaa gaaggttttc ggatcgtaaa actctgttgt 420
tagagaagaa caagggtgag agtaactgtt caccccttga cggtatctaa ccagaaagcc 480
acggctaact acgtgccagc agccgcggta atacgtaggt ggcaagcgtt gtccggattt 540
attgggcgta aagcgagcgc aggcggtttc ttaagtctga tgtgaaagcc cccggctcaa 600
ccggggaggg tcattggaaa ctgggagact tgagtgcaga agaggagagt ggaattccat 660
gtgtagcggt gaaatgcgta gatatatgga ggaacaccag tggcgaaggc ggctctctgg 720
tctgtaactg acgctgaggc tcgaaagcgt ggggagcaaa caggattaga taccctggta 780
gtccacgccg taaacgatga gtgctaagtg ttggagggtt tccgcccttc agtgctgcag 840
ctaacgcatt aagcactccg cctggggagt acgaccgcaa ggttgaaact caaaggaatt 900
gacgggggcc cgcacaagcg gtggagcatg tggtttaatt cgaagcaacg cgaagaacct 960
taccaggtct tgacatcctt tgaccactct agagatagag cttccccttc gggggcaaag 1020
tgacaggtgg tgcatggttg tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca 1080
acgagcgcaa cccttattgt tagttgccat catttagttg ggcactctag caagactgcc 1140
ggtgacaaac cggaggaagg tggggatgac gtcaaatcat catgcccctt atgacctggg 1200
ctacacacgt gctacaatgg gaagtacaac gagtcgcgaa gtcgcgaggc taagctaatc 1260
tcttaaagct tctctcagtt cggattgtag gctgcaactc gcctacatga agccggaatc 1320
gctagtaatc gcggatcagc acgccgcggt gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc 1380
ccgtcacacc acgagagttt gtaacacccg aagtcggtga ggtaaccttt ttggagccag 1440
ccgcctaacg ggcaata 1457
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 未知(Unknown)
<400> 2
agagtttgat cctggctca 19
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> 未知(Unknown)
<400> 3
ggttaccttg ttacgactt 19
Claims (7)
1.一株蒙氏肠球菌（Enterococcus mundtii），其保藏编号为CCTCC M 20211504，分类名为Enterococcus mundtii MY-YD-1，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2021年11月29日，保藏地址为中国.武汉.武汉大学。
2.权利要求1所述的蒙氏肠球菌在发酵中草药中的应用，其特征在于：所述中草药为黄芪。
3.包含权利要求1所述的蒙氏肠球菌的发酵菌剂。
4.权利要求3所述的发酵菌剂的制备方法，其特征在于，步骤为：将蒙氏肠球菌接入MRS培养基进行斜面培养，所得培养物再进行发酵培养，所得产物为发酵菌剂。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述蒙氏肠球斜面培养的接种量为103CFU。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述斜面培养的条件为：温度37℃，厌氧培养，时间为24h，pH值为6.0-6.4。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述发酵培养的条件为：温度37℃，厌氧培养，转速100r/min，时间为48小时，pH值为6.0-6.4。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111560461.0A CN114196586B (zh) | 2021-12-20 | 2021-12-20 | 一株蒙氏肠球菌及其在发酵中草药中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111560461.0A CN114196586B (zh) | 2021-12-20 | 2021-12-20 | 一株蒙氏肠球菌及其在发酵中草药中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114196586A CN114196586A (zh) | 2022-03-18 |
| CN114196586B true CN114196586B (zh) | 2023-04-11 |
Family
ID=80655428
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111560461.0A Active CN114196586B (zh) | 2021-12-20 | 2021-12-20 | 一株蒙氏肠球菌及其在发酵中草药中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114196586B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115216421B (zh) * | 2022-04-21 | 2023-03-14 | 广东海洋大学 | 一株特呈岛蜡样芽孢杆菌1号菌株及其在提升中药提取物产率中的应用 |
| CN118421745B (zh) * | 2024-06-05 | 2025-03-18 | 云南农业大学 | 一种蒙氏肠球菌在产生二氢哇巴因中的应用 |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102731651A (zh) * | 2006-06-06 | 2012-10-17 | 克鲁塞尔荷兰公司 | 针对肠球菌和金黄色葡萄球菌具有杀伤活性的人结合分子及其应用 |
| CA2879272A1 (en) * | 2012-07-16 | 2014-01-23 | Robert G.K. DONALD | Saccharides and uses thereof |
| CN104911131A (zh) * | 2015-06-18 | 2015-09-16 | 郑州大学 | 一株蒙氏肠球菌及其在低温青贮中的应用 |
| CN105120870A (zh) * | 2013-03-22 | 2015-12-02 | 赫尔普百治疗有限公司 | 包含齐多夫定和多粘菌素的组合 |
| CN105637084A (zh) * | 2013-10-17 | 2016-06-01 | 株式公司染色体创药研究所 | 新型乳酸菌、以新型乳酸菌作为有效成分的天然免疫活化剂以及含有新型乳酸菌的饮食品 |
| CN106170286A (zh) * | 2014-01-30 | 2016-11-30 | 赫尔普百治疗有限公司 | 用于治疗微生物感染的齐多夫定组合疗法 |
| WO2018136708A1 (en) * | 2017-01-19 | 2018-07-26 | Yale University | Compositions and methods of treeating autoimmune disease by reducing enterococcus |
| CN110022937A (zh) * | 2016-07-12 | 2019-07-16 | 赫尔普百治疗有限公司 | 包含齐多夫定和碳青霉烯的组合 |
| CN112218633A (zh) * | 2018-04-30 | 2021-01-12 | 赫尔普百治疗有限公司 | 包含齐多夫定和抗微生物化合物的组合 |
-
2021
- 2021-12-20 CN CN202111560461.0A patent/CN114196586B/zh active Active
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102731651A (zh) * | 2006-06-06 | 2012-10-17 | 克鲁塞尔荷兰公司 | 针对肠球菌和金黄色葡萄球菌具有杀伤活性的人结合分子及其应用 |
| CA2879272A1 (en) * | 2012-07-16 | 2014-01-23 | Robert G.K. DONALD | Saccharides and uses thereof |
| CN105120870A (zh) * | 2013-03-22 | 2015-12-02 | 赫尔普百治疗有限公司 | 包含齐多夫定和多粘菌素的组合 |
| CN105637084A (zh) * | 2013-10-17 | 2016-06-01 | 株式公司染色体创药研究所 | 新型乳酸菌、以新型乳酸菌作为有效成分的天然免疫活化剂以及含有新型乳酸菌的饮食品 |
| CN106170286A (zh) * | 2014-01-30 | 2016-11-30 | 赫尔普百治疗有限公司 | 用于治疗微生物感染的齐多夫定组合疗法 |
| CN104911131A (zh) * | 2015-06-18 | 2015-09-16 | 郑州大学 | 一株蒙氏肠球菌及其在低温青贮中的应用 |
| CN110022937A (zh) * | 2016-07-12 | 2019-07-16 | 赫尔普百治疗有限公司 | 包含齐多夫定和碳青霉烯的组合 |
| WO2018136708A1 (en) * | 2017-01-19 | 2018-07-26 | Yale University | Compositions and methods of treeating autoimmune disease by reducing enterococcus |
| CN112218633A (zh) * | 2018-04-30 | 2021-01-12 | 赫尔普百治疗有限公司 | 包含齐多夫定和抗微生物化合物的组合 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Assessment of the physicochemical properties and bacterial composition of Lactobacillus plantarum and Enterococcus faecium-fermented Astragalus membranaceus using single molecule, real-time sequencing technology;Hongxing Qiao et al;《Scientific Reports》;第第8卷卷;第1-10页 * |
| 西藏青贮用乳酸菌筛选分离及应用研究进展;鲍宇红;《畜牧与饲料科学Animal》;第第41卷卷(第第6期期);第37-42页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114196586A (zh) | 2022-03-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN114196586B (zh) | 一株蒙氏肠球菌及其在发酵中草药中的应用 | |
| CN115418337B (zh) | 一株木质素降解菌及其在水稻秸秆微贮中的应用 | |
| CN113862164A (zh) | 一株高蛋白酿酒酵母及其应用 | |
| CN107227273A (zh) | 凝结芽孢杆菌及其制备l‑乳酸的应用 | |
| CN112553284A (zh) | 一种自然共生的混合培养物降解粗饲料生产柠檬酸的方法 | |
| CN102334605A (zh) | 一种直投式丁酸梭菌发酵剂及其制备方法 | |
| CN106834140A (zh) | 一种厌氧真菌及用其发酵小麦秸秆生产乙醇的方法 | |
| CN114032187B (zh) | 西藏酸奶来源的马克斯克鲁维酵母菌株及其应用 | |
| CN111449239B (zh) | 一种灵芝菌发酵沙棘籽粕的功能性食品添加物及其制备方法 | |
| CN117305124B (zh) | 一株产刺五加苷e的刺五加内生真菌hasz1及其应用 | |
| CN112877257A (zh) | 一株地衣芽孢杆菌及其应用 | |
| CN117757640A (zh) | 根霉菌nx-2及其应用 | |
| CN103571779A (zh) | 一种发酵生产环磷腺苷的发酵培养基、菌株及生产方法 | |
| CN111690568A (zh) | 枯草芽孢杆菌及其在发酵处理亚麻籽饼脱毒方面的应用 | |
| CN115089672B (zh) | 一种饲用发酵中药口服液的制备方法 | |
| CN111826327A (zh) | 一株耐受高浓度茶渣的短小芽孢杆菌bp-09及其应用 | |
| CN109929774A (zh) | 一株芽孢杆菌及其在制备5-氨基乙酰丙酸中的应用 | |
| CN111363700B (zh) | 一株地衣芽孢杆菌及其应用 | |
| CN114854617A (zh) | 高产四甲基吡嗪的解淀粉芽孢杆菌及其固态发酵模拟方法 | |
| CN113403230A (zh) | 一株转化人参皂苷Rf为Rh1的拉恩氏菌HGS-393菌株及用途 | |
| CN116836872B (zh) | 一种枯草芽孢杆菌多糖类α-淀粉酶抑制剂及其应用 | |
| CN110591922B (zh) | 一种梨囊鞭菌及其发酵秸秆生产氢气的方法和应用 | |
| CN102533571B (zh) | 一种热带假丝酵母突变菌株及其应用 | |
| CN110777086B (zh) | 草乳杆菌及在低温青贮饲料发酵过程中的应用 | |
| CN113444646B (zh) | 一株产β-石竹烯的霉菌及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |