CN114181217B

CN114181217B - 吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物及其盐和在制备抗癌药物中的应用

Info

Publication number: CN114181217B
Application number: CN202210019208.2A
Authority: CN
Inventors: 李宝林; 席玮玮; 张娅玲; 王伟; 苗筱婉; 闫潇玉; 王子涵
Original assignee: Shaanxi Normal University
Current assignee: Shaanxi Normal University
Priority date: 2022-01-10
Filing date: 2022-01-10
Publication date: 2022-12-27
Anticipated expiration: 2042-01-10
Also published as: CN114181217A

Abstract

本发明公开了一类吡唑并[1,5‑a][1,3,5]三嗪衍生物及其盐和在制备抗癌药物中的应用，该衍生物的结构式为

式中R'为苯并噻吩‑3‑基或1‑甲基吲哚‑3‑基；R为‑NHCH₂CH₂R”二乙氨基乙氧基、N,N,N'‑三甲基乙二氨基、4‑(2‑甲氧基乙基)哌嗪基、哌嗪基、二乙氨基、4‑甲基哌嗪基、4‑丙烯酰基哌嗪基或

其中R”为二乙氨基、吗啉基、4‑甲基哌嗪基或吡咯烷基，R¹为丙烯酰氨基、4‑(二甲氨基)丁‑2‑烯酰氨基或N‑甲基吡咯烷‑2‑基亚氨基；R²为氟、甲氧基、二甲氨基、吗啉基、二乙氨基、硫代吗啉基、4‑甲基哌嗪基、N,N,N'‑三甲基乙二氨基中一种或两种；n为1或2。本发明吡唑并[1,5‑a][1,3,5]三嗪衍生物及其盐对人癌细胞的增殖均具有明显的抑制作用，可用于制备抗癌药物。

Description

吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物及其盐和在制备抗癌药物中的应用

技术领域

本发明属于抗癌药物技术领域，具体涉及一类新型的吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物及其盐，以及它们在制备抗癌药物中的用途。

背景技术

据全球最新报告，癌症发病率排名第一的是肺癌，而肺癌患者中约80％～85％归类到非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)。过去对于NSCLC治疗方法有手术治疗、放射治疗、化学治疗等。这些治疗方法在杀死癌细胞的同时，还对患者的身体有着不可逆的伤害。随着社会和科学的发展，癌症治疗手段不断改进，由对细胞的毒性攻击治疗已发展到针对癌细胞的靶向治疗，使药物的毒副作用大为降低，疗效明显提高。靶向治疗药物进入体内后能特异地与致癌靶点相结合而发挥作用，使癌细胞特异性死亡，而不会波及癌周围的正常组织细胞。这一方法成为癌治疗研究中的热点。在众多的癌靶标中，表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor，EGFR)酪氨酸激酶(tyrosine kinase，TK)是目前效果明显且前景广阔的癌症治疗靶点之一。

EGFR TK的过度表达和异常活化，使得细胞过度繁殖，导致癌症的发生。抑制EGFRTK的活性，可阻断癌细胞增殖的信号转导通路，使癌细胞凋亡。因此，一系列的EGFR TK抑制剂被发现，并被用于癌症的治疗，且取得了良好的疗效。这些EGFR TK抑制剂可竞争性抑制三磷酸腺苷(ATP)与酪氨酸激酶结合，抑制酪氨酸激酶的活性，达到抑制癌细胞增殖的作用。目前已经上市且疗效比较好的小分子酪氨酸激酶抑制剂有吉非替尼(Gefitinib)、拉帕替尼(Lapatinib)、奥斯替尼(Osimertinib)和罗西替尼(Rociletinib)等药物，虽然这些药物在治疗癌症的过程中起到了良好的作用，但长时间使用会产生不同程度的耐药性，使得药效降低。因此，发现新的低毒、高效的癌症治疗药物，仍非常必要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一类新的具有抗癌活性的吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物及其盐，以及这些化合物在制备抗癌药物中的用途。

解决上述技术问题所提供的吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪类化合物的结构式如下所示：

式中R'为苯并噻吩-3-基、1-甲基吲哚-3-基中任意一种；R为-NHCH₂CH₂R”、二乙氨基乙氧基、N,N,N'-三甲基乙二氨基、4-(2-甲氧基乙基)哌嗪基、哌嗪基、二乙氨基、4-甲基哌嗪基、4-丙烯酰基哌嗪基、

中任意一种，其中R”为二乙氨基、吗啉基、4-甲基哌嗪基、吡咯烷基中任意一种，R¹为丙烯酰氨基、4-(二甲氨基)丁-2-烯酰氨基、N-甲基吡咯烷-2-基亚氨基中任意一种；R²为连接于苯环任意位置的取代基，R²选自氟、甲氧基、二甲氨基、吗啉基、二乙氨基、硫代吗啉基、4-甲基哌嗪基、N,N,N'-三甲基乙二氨基中任意一种或两种，n为1或2。

上述的吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物的盐为吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物分别与盐酸、硫酸、磷酸、对甲基苯磺酸、马来酸、富马酸、甲酸、乙酸和苯甲酸形成的盐。所述盐优选吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物与对甲基苯磺酸反应生成的吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物的对甲基苯磺酸盐。

上述的吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物及其盐进一步优选化合物1～36中的任意一种，化合物1：2-(2-二乙氨基乙氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物2：2-(2-吗啉基乙氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物3：2-(2-(4-甲基哌嗪基)乙氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物4：2-(4-(2-甲氧基乙基)哌嗪基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物5：2-(4-甲基哌嗪基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物6：2-哌嗪基-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物7：2-(4-丙烯酰基哌嗪基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物8：2-(4-甲基哌嗪基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪对甲基苯磺酸盐；化合物9：2-(2-吡咯烷基乙氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物10：2-(2-二乙氨基乙氧基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物11：2-(2-二乙氨基乙氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物12：2-(2-吗啉基乙氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物13：2-(4-(2-甲氧基乙基)哌嗪基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物14：2-(4-甲基哌嗪基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物15：2-哌嗪基-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物16：2-(4-丙烯酰基哌嗪基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物17：2-(2-吡咯烷基乙氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物18：2-二乙氨基-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物19：2-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物20：2-(3-丙烯酰氨基-4-(4-甲基哌嗪基)苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物21：2-(3-丙烯酰氨基-4-二乙氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物22：2-(3-丙烯酰氨基-4-吗啉基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物23：2-(3-丙烯酰氨基-4-硫代吗啉基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物24：2-(3-丙烯酰氨基-4-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物25：2-(3-丙烯酰氨基-4-吗啉基苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物26：2-(3-丙烯酰氨基-4-(4-甲基哌嗪基)苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物27：2-(3-丙烯酰氨基-4-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物28：2-(3-(4-二甲氨基丁-2-烯酰氨基)-4-二甲氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物29：2-(3-(4-二甲氨基丁-2-烯酰氨基)-4-二甲氨基苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物30：2-(3-丙烯酰氨基-4-二甲氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物31：2-(3-(4-二甲氨基丁-2-烯酰氨基)-4-氟苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物32：2-(3-(4-二甲氨基丁-2-烯酰氨基)-4-氟苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物33：2-(3-丙烯酰氨基-4-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)-6-甲氧基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物34：2-(3-丙烯酰氨基-4-二甲氨基-6-甲氧基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物35：2-(3-(4-二甲氨基丁-2-烯酰氨基)-4-氟-6-甲氧基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪；化合物36：2-(3-(N-甲基吡咯烷-2-基)亚氨基-4-氟-6-甲氧基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪。化合物1～36对应的化学结构式如下：

本发明吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物1～19合成中，均是先以异硫氰酰甲酸乙酯和2H-3-氨基吡唑为初始原料，经两步反应生成1H-3H-吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-酮母核，然后与CH₃I反应生成2-甲硫基-3H-吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-酮，再在N,N-二乙基苯胺存在下与POCl₃反应生成2-甲硫基-4-氯吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其反应式如下：

R'为苯并噻吩-3-基时，2-甲硫基-4-氯吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪和苯并噻吩-3-硼酸在三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd₂(dba)₃)和2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯(X-Phos)的存在下，于K₂CO₃水溶液和甲苯形成的混合体系中进行Suzuki偶联反应生成2-甲硫基-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其反应式如下：

R'为1-甲基吲哚-3-基时，2-甲硫基-4-氯吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪和1-甲基吲哚以AlCl₃为催化剂于乙二醇二甲醚中，64℃下进行反应生成2-甲硫基-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其反应式如下：

进一步通过2-甲硫基-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪或2-甲硫基-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪与间氯过氧苯甲酸(m-CPBA)于二氯甲烷中室温下分别进行氧化反应，生成中间体2-甲磺酰基-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪或2-甲磺酰基-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其反应式如下：

式中R'为苯并噻吩-3-基或1-甲基吲哚-3-基。

当R为-NHCH₂CH₂R”时，是由所获得的中间体2-甲磺酰基-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪或2-甲磺酰基-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪分别与2-二乙氨基乙胺、2-吗啉基乙胺、2-(4-甲基哌嗪基)乙胺、2-吡咯烷基乙胺于二氧六环中反应生成，其反应式如下：

反应式中的R”为二乙氨基、吗啉基、4-甲基哌嗪基、吡咯烷基中的任意一种。

当R为二乙氨基乙氧基时，是由所获得的中间体2-甲磺酰基-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪与2-二乙氨基乙醇在金属钠的存在下于二氧六环中反应生成，其反应式如下：

当R为N,N,N'-三甲基乙二氨基、4-(2-甲氧基乙基)哌嗪基、哌嗪基、二乙氨基、4-甲基哌嗪基时，是由所获得的中间体2-甲磺酰基-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪或2-甲磺酰基-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪分别与N,N,N'-三甲基乙二胺、4-(2-甲氧基乙基)哌嗪、哌嗪、二乙胺、N-甲基哌嗪于二氧六环中反应生成。

当R为4-丙烯酰基哌嗪基时，是由上述反应获得的2-哌嗪基-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪或2-哌嗪基-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪与丙烯酰氯进行酰基化反应生成。

本发明吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物20～36合成中，当R为

时，其合成过程中均先以化合物I(1-甲基吲哚-3-甲酸或苯并噻吩-3-甲酸)与草酰氯的作用生成化合物II；化合物II与硫氰酸钾反应生成化合物III；化合物III和5-氨基-1H-吡唑反应生成硫脲类化合物IV，其反应式如下：

在氯化汞和三乙胺(或氢化钠)存在下，获得的硫脲类化合物IV与3-硝基苯胺的衍生物

于N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中在加热条件下反应生成化合物V；化合物V在水合肼或者铁粉的作用下进行硝基的还原，得到化合物VI；化合物VI和酰氯在室温下进行酰基化反应得到最终的目标化合物吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物VII，其反应式如下：

在化合物VI与酰氯进行的酰基化反应中，若加入N-甲基吡咯烷酮时，在生成酰基化产物的同时会生成结构式VII中R¹为N-甲基吡咯烷-2-基亚氨基的化合物36。

本发明吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物及其盐对人癌细胞的增殖具有明显的抑制作用，可用于制备抗癌药物。其按常规药用制剂，与药学上可接受的载体按照各种制剂的常规制备工艺制成，可以是片剂、颗粒剂、胶囊剂和针剂等。其中所述癌为皮肤鳞状癌、结肠癌、肺癌中任意一种。

本发明的有益效果如下：

本发明吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物及其盐的合成方法简单，对人皮肤鳞状癌细胞A431、人结肠癌细胞SW480、人非小细胞肺癌细胞A549、人肺癌细胞NCI-H1975等的增殖具有明显的抑制作用，可用于制备抗癌药物，既可以独自用药，也可与其它药物联合使用。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明的保护范围不仅限于这些实施例。

下面实施例中所用的试剂均为分析纯。化合物结构鉴定所用的核磁共振数据由Bruker Avance 600超导核磁共振仪、Bruker Avance 400超导核磁共振仪测定，以TMS作为内标；红外光谱数据采用Bruker Tensor 2733红外光谱仪测定；熔点采用X-6显微熔点测定仪(北京泰克仪器有限公司)测定(温度未进行校正)；质谱数据用Bruker Esquire3000plus质谱仪测定。

合成反应中所用的2-甲硫基-4-氯吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪根据下述方法合成：

在冰浴条件下，将5.9g(0.07mol)2H-3-氨基吡唑、50mL二氯甲烷加入圆底烧瓶中，缓慢加入30mL含9.3g(0.07mol)异硫氰酰甲酸乙酯的二氯甲烷溶液，再加入80mL二氯甲烷稀释，搅拌2h，减压蒸除溶剂得淡黄色固体。将得到的淡黄色固体用147mL 2mol/L的NaOH水溶液溶解，搅拌2h后加入211mL 2mol/L的H₂SO₄水溶液，立即产生白色沉淀，搅拌充分后过滤，干燥滤饼得到白色固体产物1H-3H-吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-酮10.6g，产率90.6％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):13.47(s,1H),12.72(s,1H),7.88(br s,1H),5.90(br s,1H)。

称取1.0g(5.9mmol)1H-3H-吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-酮于烧瓶中，加入25mL乙醇使固体溶解，再加入6.4mL 2mol/L的NaOH水溶液，搅拌下缓慢加入0.9g(6.2mmol)CH₃I，2h后过滤，滤饼用39.6mL水溶解，再加入3.9mL 2mol/L的H₂SO₄水溶液，立即产生白色沉淀，搅拌充分后过滤，干燥滤饼得到白色固体2-甲硫基-3H-吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-酮0.8g，产率74.5％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):12.88(s,1H),7.98(d,J＝1.8Hz,1H),6.36(d,J＝1.8Hz,1H),2.54(s,3H)。

称取547mg(3mmol)2-甲硫基-3H-吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-酮于烧瓶中，加入5mL POCl₃和175μL N,N-二乙基苯胺，在110℃条件下加热回流4h。冷却后减压蒸馏除去溶剂，加入25mL甲苯溶解残留物，用饱和氯化钠水溶液洗涤有机相2次后用旋转蒸发仪蒸除溶剂得到2-甲硫基-4-氯吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪521mg，其产率为86.6％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):8.15(d,J＝2.1Hz,1H),6.50(d,J＝2.1Hz,1H),2.60(s,3H)。

下面实施例1～10中所用的2-甲磺酰基-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪的合成方法如下：

称取2-甲硫基-4-氯吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪441mg(2.2mmol)、苯并噻吩-3-硼酸263mg(1.5mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯34mg(0.037mmol)、2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯70mg(0.15mmol)于烧瓶中，在氮气氛围中加入5.8mL 2mol/L的K₂CO₃水溶液和15mL甲苯，在60℃条件下反应12h。反应结束后，用旋转蒸发仪蒸除溶剂，经硅胶柱色谱分离(乙酸乙酯:石油醚＝1:45，V/V)，得到淡黄色固体2-甲硫基-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪342mg，其产率为78.2％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.96(s,1H),9.09(d,J＝8.3Hz,1H),8.18(d,J＝2.1Hz,1H),7.95(d,J＝8.1Hz,1H),7.57(t,J＝7.3Hz,1H),7.48(t,J＝7.3Hz,1H),6.52(d,J＝2.1Hz,1H),2.70(s,3H)。

称取2-甲硫基-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪298mg(1mmol)于圆底烧瓶中、加入15mL二氯甲烷，在冰浴条件下，缓慢加入344mg(2mmol)间氯过氧苯甲酸，然后在环境温度下搅拌4h。TLC监测反应，待反应完全后，再加入15mL二氯甲烷稀释，用2mol/L的NaOH水溶液洗涤2次，再饱和氯化钠溶液洗涤2次后浓缩，残留物经硅胶柱色谱分离(二氯甲烷)得到淡黄色固体2-甲磺酰基-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪238mg，产率为72.0％，结构表征数据为：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm):10.27(s,1H),9.29(d,J＝8.0Hz,1H),8.48(d,J＝2.3Hz,1H),7.97(d,J＝8.0Hz,1H),7.65(m,1H),7.53(m,1H),7.01(d,J＝2.3Hz,1H),3.48(s,3H)。

下面实施例11～19中所用的2-甲磺酰基-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪的合成方法如下：

称取2-甲硫基-4-氯吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪482mg(2.4mmol)、AlC1₃ 160mg(1.2mmol)和1-甲基吲哚262mg(2.0mmol)于圆底烧瓶中。在氮气氛围中加入10mL乙二醇二甲醚(DME)，在64℃条件下反应12h。反应完全后，将反应混合物冷却至室温，过滤，滤饼用20mL甲醇洗3次，有机相合并，浓缩至干。残留物经硅胶柱色谱分离(二氯甲烷)得到淡黄色固体2-甲硫基-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪532mg，产率为90.1％，结构表征数据为：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.16(s,1H),8.71(d,J＝6.7Hz,1H),8.00(brs,1H),7.29(m,3H),6.31(br s,1H),3.83(s,3H),2.62(s,3H)。

称取2-甲硫基-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪431mg(1.5mmol)于圆底烧瓶中，用15mL二氯甲烷溶解，在冰浴条件下，缓慢加入511mg(3mmol)间氯过氧苯甲酸，然后在环境温度下搅拌4h。加入15mL二氯甲烷稀释，用2mol/L的NaOH水溶液洗2次，再饱和氯化钠溶液洗2次后浓缩，残留物经硅胶柱色谱分离(二氯甲烷)得到淡黄色固体2-甲磺酰基-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪377mg，产率为79.0％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.46(s,1H),8.92(d,J＝8.1Hz,1H),8.38(br s,1H),7.53–7.39(m,3H),6.89(br s,1H),4.04(s,3H),3.51(s,3H)。

下面实施例20～36中所用的1-甲基吲哚-3-甲酰基-吡唑-5-基硫脲和苯并噻吩-3-甲酰基-吡唑-5-基硫脲的合成按下述方法进行：

称取1-甲基吲哚-3-甲酸876mg(5.0mmol)于圆底烧瓶中，加入15mL二氯甲烷、催化量的DMF(2滴)，在氮气氛围中冰浴条件下缓慢加入草酰氯0.6mL，滴加完毕后，室温搅拌4h，蒸除溶剂，残留物中加25mL干燥的丙酮和硫氰酸钾729mg(7.5mmol)，室温下搅拌2h后蒸除溶剂，加入二氯甲烷50mL，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤2次，再用饱和氯化钠水溶液洗涤2次，有机相用无水硫酸钠干燥后蒸干，再用二氯甲烷溶解，加入5-氨基-1H-吡唑374mg(4.5mmol)，搅拌4h。滤出固体，干燥后得到1-甲基吲哚-3-甲酰基-吡唑-5-基硫脲960mg，产率为72.0％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):13.53(s,1H),12.75(s,1H),11.10(s,1H),8.76(s,1H),8.19(d,J＝7.8Hz,1H),7.73(s,1H),7.60(d,J＝8.1Hz,1H),7.35–7.31(m,1H),7.28(t,J＝7.1Hz,1H),7.10(s,1H),3.89(s,3H)。

用等物质量的苯并噻吩-3-甲酸替换上述1-甲基吲哚-3-甲酰基-吡唑-5-基硫脲合成方法中的1-甲基吲哚-3-甲酸，其它步骤与其相同，得苯并噻吩-3-甲酰基-吡唑-5-基硫脲1.0g，产率为73.5％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):13.17(s,1H),12.81(s,1H),11.69(s,1H),8.97(s,1H),8.43(d,J＝8.0Hz,1H),8.12(d,J＝8.0Hz,1H),7.76(s,1H),7.54(t,J＝7.6Hz,1H),7.49(t,J＝7.4Hz,1H),7.11(s,1H)。

实施例1

称取2-甲磺酰基-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪100mg(0.3mmol)和2-二乙氨基乙胺251mg(1.5mmol)于圆底烧瓶中，加入5mL二氧六环，在110℃下加热回流4h。减压蒸除溶剂，经硅胶柱色谱分离(甲醇:二氯甲烷＝1:40，V/V)，得到淡黄色固体化合物1：2-(2-二乙氨基乙氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪90mg，产率为81.8％，结构表征数据为：m.p.79.2–80.0℃；HRMS(C₁₉H₂₂N₆S)m/z[M+H]⁺:367.1691(计算值367.1699)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.66(br s,1H),8.89(br s,1H),7.96(s,1H),7.90(s,1H),7.49(s,1H),7.42(s,1H),6.11(s,1H),6.05(s,1H),3.57(brs,2H),2.74(br s,2H),2.61(br s,4H),1.05(br s,6H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):156.37,152.36,150.00,146.88,139.96,139.55,137.38,125.56,125.25,125.14,124.78,122.54,92.00,51.37,46.74,39.10,11.70；IR ν_max(KBr)cm^-1:3274,3102,2964,2921,1625,1522,1452,1270,908,761,726。

实施例2

用等物质量的2-吗啉基乙胺替换实施例1中的2-二乙氨基乙胺，其它步骤与实施例1相同，得到淡黄色固体化合物2：2-(2-吗啉基乙氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪92mg，产率为80.7％，结构表征数据为：m.p.137.0–138.4℃；HRMS(C₁₉H₂₀N₆OS)m/z[M+H]⁺:381.1492(计算值381.1492)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.71(s,1H),8.93(s,1H),8.01(d,J＝1.4Hz,1H),7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.58–7.51(m,1H),7.51–7.43(m,1H),6.15(s,1H),5.90(s,1H),3.76(d,J＝4.0Hz,4H),3.65(br s,2H),2.70(t,J＝5.7Hz,2H),2.55(br s,4H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):156.27,152.25,150.15,147.04,140.00,139.60,137.33,125.42,125.27,125.21,124.67,122.64,92.07,66.93,57.02,53.42,37.89；IR ν_max(KBr)cm^-1:3261,3033,2886,1618,1455,1260,911,732。

实施例3

用等物质量的2-(4-甲基哌嗪基)乙胺替换实施例1中的2-二乙氨基乙胺，其它步骤与实施例1相同，得到淡黄色固体化合物3：2-(2-(4-甲基哌嗪基)乙氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪82mg，产率为69.5％，结构表征数据为：m.p.140.7–141.3℃；HRMS(C₂₀H₂₂N₇S)m/z[M+H]⁺:394.1809(计算值394.1808)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.70(s,1H),8.90(s,1H),7.98(s,1H),7.92(d,J＝7.6Hz,1H),7.49(t,J＝7.0Hz,1H),7.43(t,J＝6.8Hz,1H),6.13(s,1H),5.98(s,1H),3.63(br s,2H),2.91–2.53(m,10H),2.42(s,3H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):156.22,152.19,150.13,147.00,140.07,139.57,137.30,125.43,125.28,125.22,124.66,122.63,92.11,56.28,54.44,51.69,45.06,38.16；IR ν_max(KBr)cm^-1:3267,3014,2962,2933,1625,1358,1141,899,770。

实施例4

用等物质量的1-(2-甲氧基乙基)哌嗪替换实施例1中的2-二乙氨基乙胺，其它步骤与实施例1相同，得到淡黄色油状物化合物4：2-(4-(2-甲氧基乙基)哌嗪基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪81mg，产率为68.6％，结构表征数据为：HRMS(C₂₀H₂₂N₆OS)m/z[M+H]⁺:395.1650(计算值395.1649)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.69(s,1H),8.80(d,J＝8.2Hz,1H),7.98(d,J＝1.9Hz,1H),7.92(d,J＝8.0Hz,1H),7.50(t,J＝7.6Hz,1H),7.43(t,J＝7.6Hz,1H),6.10(d,J＝1.9Hz,1H),4.03(br s,4H),3.56(t,J＝5.4Hz,2H),3.38(s,3H),2.69–2.55(m,6H)；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ(ppm):155.72,152.43,149.71,147.24,139.97,139.62,137.39,125.28,125.22,125.13,125.05,122.70,91.59,70.06,58.99,58.03,53.44,44.26；IR ν_max(KBr)cm^-1:3065,2968,1610,1447,1358,1236,870,772。

实施例5

用等物质量的N-甲基哌嗪替换实施例1中的2-二乙氨基乙胺，其它步骤与实施例1相同，得到淡黄色固体化合物5：2-(4-甲基哌嗪基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪81mg，产率为77.1％，结构表征数据为：m.p.112.8–113.7℃；HRMS(C₁₈H₁₈N₆S)m/z[M+H]⁺:351.1390(计算值351.1386)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.69(s,1H),8.82(d,J＝8.2Hz,1H),8.00(d,J＝2.0Hz,1H),7.96(d,J＝8.0Hz,1H),7.54–7.52(m,1H),7.47–7.45(m,1H),6.12(d,J＝2.0Hz,1H),4.03(br s,4H),2.63–2.49(m,4H),2.37(s,3H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):155.72,152.39,149.68,147.22,140.02,139.60,137.37,125.25,125.19,125.11,125.04,122.69,91.62,54.91,46.22,44.34；IR ν_max(KBr)cm^-1:3106,3061,2886,1618,1545,1512,1447,1301,1243,991,723。

实施例6

用等物质量的哌嗪替换实施例1中的2-二乙氨基乙胺，其它步骤与实施例1相同，得到淡黄色固体化合物6：2-哌嗪基-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪83mg，产率为82.2％，结构表征数据为：m.p.143.3–145.2℃；HRMS(C₁₇H₁₆N₆S)m/z[M+H]⁺:337.1234(计算值337.1230)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.69(s,1H),8.81(d,J＝8.2Hz,1H),8.00(d,J＝2.0Hz,1H),7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.52(t,J＝7.6Hz,1H),7.45(t,J＝7.6Hz,1H),6.12(d,J＝2.0Hz,1H),3.98(br s,4H),3.05–2.97(m,4H),1.81(s,1H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):155.84,152.45,149.71,147.25,139.97,139.64,137.40,125.27,125.25,125.13,125.04,122.71,91.58,46.08,45.61；IR ν_max(KBr)cm^-1:3456,3102,2887,1538,1530,1444,1305,1245,873,727。

实施例7

称取2-哌嗪基-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪81mg(0.24mmol)、三乙胺29mg(0.29mmol)于圆底烧瓶中，加入二氯甲烷10mL，在冰浴条件下缓慢滴加丙烯酰氯22mg(0.24mmol)，然后在环境温度下搅拌1h。反应结束后减压蒸除溶剂，经硅胶柱色谱分离(甲醇:二氯甲烷＝1:35，V/V)，得到淡黄色固体化合物7：2-(4-丙烯酰基哌嗪基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪66mg，产率为70.2％，结构表征数据为：m.p.147.4–148.8℃；HRMS(C₂₀H₁₈N₆OS)m/z[M+H]⁺:391.1333(计算值391.1336)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.74(s,1H),8.79(d,J＝8.2Hz,1H),8.03(d,J＝2.0Hz,1H),7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.52(t,J＝7.6Hz,1H),7.46(t,J＝7.6Hz,1H),6.63(dd,J＝16.8,10.6Hz,1H),6.37(dd,J＝16.8,1.4Hz,1H),6.15(d,J＝2.0Hz,1H),5.77(dd,J＝10.6,1.4Hz,1H),4.04(br s,4H),3.86(br s,2H),3.72(br s,2H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):165.68,155.63,152.17,149.94,147.44,140.46,139.64,137.31,128.51,127.29,125.37,125.25,125.00,124.91,122.80,92.00,45.58,44.50,44.23,41.81；IR ν_max(KBr)cm^-1:3463,3024,2886,1731,1609,1439,1244,911,732。

实施例8

称取2-(4-甲基哌嗪基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪77mg(0.22mmol)、对甲基苯磺酸一水合物42mg(0.22mmol)于圆底烧瓶中，加入甲醇5mL，70℃下加热回流1h后冷却结晶，析出淡黄色固体，抽滤，干燥得到淡黄色固体化合物8：2-(4-甲基哌嗪基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪对甲基苯磺酸盐76mg，产率为66.1％，结构表征数据为：m.p.147.4–148.8℃；¹H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.81(s,1H),9.74(s,1H),8.71(d,J＝8.2Hz,1H),8.24(s,1H),8.20(d,J＝8.0Hz,1H),7.59(t,J＝7.5Hz,1H),7.54(t,J＝7.5Hz,1H),7.49(d,J＝7.4Hz,2H),7.11(d,J＝7.4Hz,2H),6.28(s,1H),3.58–3.12(m,8H),2.86(s,3H),2.28(s,3H)；¹³C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ(ppm):155.48,151.88,150.09,148.29,146.22,141.78,139.55,138.08,137.27,128.52,126.14,125.97,125.83,125.08,124.51,123.70,92.45,52.46,42.90,41.91,21.24；IR ν_max(KBr)cm^-1:3016,2964,2834,1616,1358,1158,761,675,562。

实施例9

用等物质量的2-吡咯烷基乙胺替换实施例1中的2-二乙氨基乙胺，其它步骤与实施例1相同，得到淡黄色固体化合物9：2-(2-吡咯烷基乙氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪92mg，产率为84.4％，结构表征数据为：m.p.123.7–124.6℃；HRMS(C₁₉H₂₀N₆S)m/z[M+H]⁺:365.1538(计算值365.1543)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.69(s,1H),8.90(d,J＝7.9Hz,1H),7.95(s,1H),7.87(d,J＝7.8Hz,1H),7.45(t,J＝7.4Hz,1H),7.39(t,J＝7.4Hz,1H),6.23(s,1H),6.11(s,1H),3.65(br s,2H),2.81(br s,2H),2.63(brs,4H),1.80(br s,4H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):156.27,152.29,150.05,146.83,140.04,139.51,137.34,125.66,125.33,125.19,124.68,122.52,92.00,54.63,54.04,40.01,23.54；IR ν_max(KBr)cm^-1:3268,3001,2911,1626,1577,1366,1252,902,731。

实施例10

称取2-二乙氨基乙醇140mg(1.2mmol)、金属钠28mg(1.2mmol)于圆底烧瓶中，加入二氧六环5mL，室温搅拌1h，然后缓慢加入2-甲磺酰基-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪100mg(0.3mmol)，在110℃下加热回流4h。反应结束后冷却至室温，加入10mL乙醇猝灭反应，减压蒸除溶剂，经硅胶柱色谱分离(甲醇:二氯甲烷＝1:40，V/V)，得到淡黄色固体化合物10：2-(2-二乙氨基乙氧基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪74mg，产率为67.2％，结构表征数据为：m.p.61.4–62.8℃，HRMS(C₁₉H₂₁N₅OS)m/z[M+H]⁺:368.1537(计算值368.1540)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.90(s,1H),9.05(d,J＝8.2Hz,1H),8.07(d,J＝1.7Hz,1H),7.85(d,J＝7.9Hz,1H),7.47(t,J＝7.6Hz,1H),7.38(t,J＝7.6Hz,1H),6.32(d,J＝1.7Hz,1H),4.53(t,J＝6.4Hz,2H),2.93(t,J＝6.4Hz,2H),2.63(q,J＝7.0Hz,4H),1.04(t,J＝7.0Hz,6H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):159.93,151.72,151.37,147.40,141.69,139.34,137.32,126.02,125.69,125.38,124.41,122.47,94.29,66.37,51.07,47.84,11.89；IR ν_max(KBr)cm^-1:3105,2902,1634,1577,1366,1243,903,732。

实施例11

称取2-甲磺酰基-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪164mg(0.5mmol)和2-二乙氨基乙胺268mg(2.0mmol)于圆底烧瓶中，加入10mL二氧六环，在110℃下加热回流4h。减压蒸除溶剂，经硅胶柱色谱分离(甲醇:二氯甲烷＝1:25，V/V)，得到淡黄色固体化合物11：2-(2-二乙氨基乙氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪144mg，产率为79.1％，结构表征数据为：m.p.151.6–152.5℃；HRMS(C₂₀H₂₅N₇)m/z[M+H]⁺:364.2242(计算值364.2244)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.26(s,1H),8.81(s,1H),7.97(s,1H),7.36–7.29(m,3H),6.08(s,1H),6.02(s,1H),3.95(s,3H),3.74(br s,2H),2.98(brs,2H),2.82(br s,4H),1.91(br s,6H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):156.99,151.99,151.37,146.03,139.73,137.21,127.44,123.35,123.13,122.30,109.91,105.18,91.39,67.14,57.23,53.45,37.99,33.75；IR ν_max(KBr)cm^-1:3499,3016,2964,1608,1538,1358,1167,761,675,562。

实施例12

用等物质量的2-吗啉基乙胺替换实施例11中的2-二乙氨基乙胺，其它步骤与实施例11相同，得到米黄色固体化合物12：2-(2-吗啉基乙氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪158mg，产率为83.5％，结构表征数据为：m.p.187.4–188.9℃；HRMS(C₂₀H₂₅N₇O)m/z[M+H]⁺:378.2035(计算值378.2037)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.26(s,1H),8.81(s,1H),7.97(s,1H),7.49–7.38(m,3H),6.08(s,1H),6.02(s,1H),3.95(s,3H),3.74(br s,2H),2.98(br s,2H),2.82(br s,4H),1.91(br s,4H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):156.99,151.99,151.37,146.03,139.73,137.21,127.44,123.35,123.13,122.30,109.91,105.18,91.39,67.14,57.23,53.45,37.99,33.75；IR ν_max(KBr)cm^-1:3482,2921,2868,1625,1538,1435,1374,769,622。

实施例13

用等物质量的1-(2-甲氧基乙基)哌嗪替换实施例11中的2-二乙氨基乙胺，其它步骤与实施例11相同，得到米黄色化合物13：2-(4-(2-甲氧基乙基)哌嗪基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪137mg，产率为69.8％，结构表征数据为：m.p.119.3–120.4℃；HRMS(C₂₁H₂₅N₇O)m/z[M+H]⁺:392.2189(计算值392.2193)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.31(s,1H),8.67(d,J＝5.6Hz,1H),8.00(s,1H),7.47(d,J＝7.1Hz,1H),7.42–7.40(m,2H),6.10(s,1H),4.12(br s,4H),3.97(s,3H),3.64(br s,2H),3.43(s,3H),2.72(brs,6H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):156.41,152.11,150.95,146.26,139.86,137.23,127.36,123.31,122.71,122.35,110.01,105.70,91.11,69.95,59.04,58.08,53.51,44.14,33.79；IR ν_max(KBr)cm^-1:2968,2911,2853,1627,1545,1479,1382,1114,854,764,626。

实施例14

用等物质量的N-甲基哌嗪替换实施例11中的2-二乙氨基乙胺，其它步骤与实施例11相同，得到米黄固体化合物14：2-(4-甲基哌嗪基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪130mg，产率为74.7％，结构表征数据为：m.p.221.5–223.1℃；HRMS(C₁₉H₂₁N₇)m/z[M+H]⁺:348.1924(计算值348.1931)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.23(s,1H),8.63–8.50(m,1H),7.91(d,J＝2.0Hz,1H),7.42–7.35(m,1H),7.35–7.30(m,2H),6.01(d,J＝2.0Hz,1H),4.04(br s,4H),3.89(s,3H),2.58(br s,4H),2.36(s,3H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):156.47,152.09,150.89,146.21,139.85,137.20,127.35,123.27,122.69,122.31,109.97,105.69,91.09,55.02,46.28,44.34,33.73；IR ν_max(KBr)cm^-1:2918,2862,1627,1528,1415,1374,1114,862,772,626。

实施例15

用等物质量的哌嗪替换实施例11中的2-二乙氨基乙胺，其它步骤与实施例11相同，得到米黄色固体化合物15：2-哌嗪基-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪112mg，产率为67.1％，结构表征数据为：m.p.173.4–175.0℃；HRMS(C₁₈H₁₉N₇)m/z[M+H]⁺:334.1772(计算值334.1775)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.25(s,1H),8.62(d,J＝7.2Hz,1H),7.96(s,1H),7.44–7.32(m,3H),6.07(s,1H),3.99(br s,4H),3.89(s,3H),3.02(br s,4H),1.84(s,1H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):156.56,152.12,150.86,146.19,139.82,137.19,127.35,123.25,122.69,122.29,109.95,105.71,91.03,46.14,45.60,33.71；IR ν_max(KBr)cm^-1:3456,3105,2911,2902,1642,1569,1366,1252,903,732。

实施例16

用等物质量的2-(哌嗪基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例7中的2-(哌嗪基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例7相同，得到淡黄色固体化合物16：2-(4-丙烯酰基哌嗪基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪48mg，产率为51.6％，结构表征数据为：m.p.219.9–221.5℃；HRMS(C₂₁H₂₁N₇O)m/z[M+H]⁺:388.1878(计算值388.1880)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.31(s,1H),8.70–8.55(m,1H),8.00(d,J＝1.9Hz,1H),7.52–7.42(m,1H),7.42–7.36(m,2H),6.66(dd,J＝16.8,10.6Hz,1H),6.38(dd,J＝16.8,1.4Hz,1H),6.11(s,1H),5.77(dd,J＝10.6,1.4Hz,1H),4.08(br s,4H),3.96(s,3H),3.88(br s,2H),3.75(br s,2H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):165.66,156.29,151.81,151.12,146.38,140.12,137.26,128.31,127.43,127.32,123.41,122.59,122.46,110.09,105.56,91.39,45.67,44.51,44.19,41.87,33.79；IR ν_max(KBr)cm^-1:3064,2903,1780,1634,1528,1431,1243,1211,886,739。

实施例17

用等物质量的2-吡咯烷基乙胺替换实施例11中的2-二乙氨基乙胺，其它步骤与实施例11相同，得到米黄色固体化合物17：2-(2-吡咯烷基乙氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪141mg，产率为77.9％，结构表征数据为：m.p.181.3–182.1℃；HRMS(C₂₀H₂₃N₇)m/z[M+H]⁺:362.2081(计算值362.2088)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.23(s,1H),8.80(d,J＝6.1Hz,1H),7.95(d,J＝1.6Hz,1H),7.47–7.37(m,1H),7.38–7.35(m,2H),6.07(s,1H),6.01(s,1H),3.91(s,3H),3.75(br s,2H),2.95(br s,2H),2.79(br s,4H),1.88(br s,4H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):157.11,152.07,151.32,145.94,139.69,137.18,127.49,123.29,123.26,122.25,109.81,105.34,100.01,54.86,53.99,40.45,33.70,23.57；IR ν_max(KBr)cm^-1:3457,2972,2852,1607,1530,1427,1116,882,744,622。

实施例18

用等物质量的二乙胺替换实施例11中的2-二乙氨基乙胺，其它步骤与实施例11相同，得到淡黄色固体化合物18：2-二乙氨基-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪130mg，产率为81.2％，结构表征数据为：m.p.134.1–134.6℃；HRMS(C₁₈H₂₀N₆)m/z[M+H]⁺:321.1817(计算值321.1822)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.28(s,1H),8.72(d,J＝8.7Hz,1H),7.96(s,1H),7.40(s,1H),7.38–7.34(m,2H),6.07(s,1H),3.89(br s,4H),3.82(s,3H),1.35(br s,6H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):156.00,152.58,150.60,145.92,139.62,137.16,127.53,123.13,122.76,122.09,109.84,105.95,90.53,42.38,33.65,13.52；IR ν_max(KBr)cm^-1:2972,2852,1608,1530,1434,1383,1106,890,744,631。

实施例19

用等物质量的N,N,N'-三甲基乙二胺替换实施例11中的2-二乙氨基乙胺，其它步骤与实施例11相同，得到淡黄色固体化合物19：2-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪132mg，产率为75.4％，结构表征数据为：m.p.129.8–130.3℃；HRMS(C₁₉H₂₃N₇)m/z[M+H]⁺:350.2084(计算值350.2088)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.15(s,1H),8.66(t,J＝6.9Hz,1H),7.91(d,J＝2.1Hz,1H),7.44–7.09(m,3H),6.03(s,1H),3.89(br s,2H),3.76(s,3H),3.28(s,3H),2.62(d,J＝6.1Hz,2H),2.33(s,6H)；¹³CNMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):156.02,152.07,151.05,146.31,139.94,137.23,127.35,123.31,122.54,122.35,110.03,105.67,91.17,47.23,33.76,27.10；IR ν_max(KBr)cm^-1:3057,2943,2894,1618,1530,1472,1236,886,739。

实施例20

1、称取4-氟-3-硝基苯胺2.0g(12.8mmol)、N-甲基哌嗪1.9g(19.1mmol)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)2.5g(19.1mmol)于圆底烧瓶中，加入25mL乙腈，在回流温度下反应12h。蒸除溶剂后残留物经硅胶柱色谱分离(甲醇:二氯甲烷＝1:20，V/V)，得到橙红色固体4-(4-甲基哌嗪基)-3-硝基苯胺2.6g，产率为86.6％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.08(d,J＝8.3Hz,1H),7.00(d,J＝2.2Hz,1H),6.81(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),3.73(s,2H),2.97(br s,4H),2.55(br s,4H),2.34(s,3H)。

2、称取1-甲基吲哚-3-甲酰基-吡唑-5-基硫脲507mg(1.7mmol)、4-(4-甲基哌嗪基)-3-硝基苯胺400mg(1.7mmo)、氯化汞459mg(1.7mmol)、三乙胺325mg(3.4mmol)于圆底烧瓶中，加入10mLDMF，在氮气氛围中130℃反应12h。反应结束后，冷却至室温，抽滤除不溶物，滤液加入乙酸乙酯稀释后用饱和氯化钠水溶液洗涤3次，收集有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，经硅胶柱色谱分离(甲醇:二氯甲烷＝1:200，V/V)，得到橙红色固体2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-硝基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪263mg，产率为32.3％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.24(s,1H),8.68(d,J＝7.6Hz,1H),8.28(d,J＝2.4Hz,1H),8.02(d,J＝2.0Hz,1H),7.75(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.43–7.29(m,4H),7.19(d,J＝8.8Hz,1H),6.22(d,J＝2.0Hz,1H),3.90(s,3H),3.16–3.01(m,4H),2.60(d,J＝3.9Hz,4H),2.37(s,3H)。

3、称取2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-硝基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪200mg(0.41mmol)、铁粉140mg(2.5mmol)、氯化铵16mg(0.29mmol)于圆底烧瓶中，加入4mL乙醇、8mL四氢呋喃和4mL水，在80℃下加热回流4h。反应结束后，冷却至室温，抽滤除不溶物，滤液减压蒸除溶剂，残留物用二氯甲烷溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗涤2次，收集有机相，有机相用无水硫酸钠干燥、浓缩，经硅胶柱色谱分离(甲醇:二氯甲烷＝1:200，V/V)，得到棕黄色固体2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪106mg，产率为57.0％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.30(s,1H),8.79(s,1H),8.02(s,1H),7.44–7.36(m,4H),7.06–7.04(m,2H),6.95(s,1H),6.20(s,1H),4.12(s,2H),3.96(s,3H),2.98(br s,4H),2.64(br s,4H),2.39(s,3H)。

4、称取2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪106mg(0.23mmol)、三乙胺36mg(0.35mmol)于圆底烧瓶中，加入二氯甲烷溶液15mL，在冰浴条件下缓慢加入丙烯酰氯25mg(0.28mmol)，室温下搅拌1h。待反应完全后，加入15mL饱和碳酸氢钠水溶液猝灭反应，分液。有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，收集有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经硅胶柱色谱分离(甲醇:二氯甲烷＝1:40，V/V)，得到黄色固体化合物20：2-(3-丙烯酰氨基-4-(4-甲基哌嗪基)苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪52mg，产率为44.4％，结构表征数据为:m.p.137.1–138.7℃；HRMS(C₂₈H₂₉N₉O)m/z[M+H]⁺:508.2565(计算值508.2568)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.22(s,1H),8.86(s,1H),8.76(dd,J＝5.8,2.8Hz,1H),8.51(s,1H),8.00(br s,2H),7.46–7.30(m,4H),7.25(d,J＝8.6Hz,1H),6.41(d,J＝16.9Hz,1H),6.31(dd,J＝16.9,10.2Hz,1H),6.22(d,J＝1.8Hz,1H),5.79(d,J＝10.2Hz,1H),3.89(s,3H),2.93(br s,4H),2.62(s,3H),2.40(br s,4H).¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):163.32,154.25,151.34,151.19,146.06,139.85,137.17,136.78,136.15,133.74,132.01,127.34,126.99,123.47,123.41,122.38,121.35,115.26,110.73,109.80,105.07,92.76,56.06,52.48,46.15,33.72；IR ν_max(KBr)cm^-1:3553,3380,3024,2932,1670,1587,1514,1459,1377,1075,864,745。

实施例21

1、称取4-氟-3-硝基苯胺0.78g(5.0mmol)、二乙胺1.80g(25.0mmol)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)1.94g(15mmol)于圆底烧瓶中，加入25mL乙腈，在56℃下反应12h。蒸除溶剂后残留物经硅胶柱色谱分离(二氯甲烷)，得到红褐色固体4-二乙氨基-3-硝基苯胺528mg，产率为50.5％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.09(d,J＝8.7Hz,1H),7.01(d,J＝2.6Hz,1H),6.83(dd,J＝8.7,2.6Hz,1H),3.81–3.79(m,4H),2.95–2.92(m,6H)。

2、用等物质量的4-(二乙氨基)-3-硝基苯胺替换实施例20步骤2中的4-(4-甲基哌嗪基)-3-硝基苯胺，其它步骤与实施例20步骤2相同，得到橙红色体2-(4-二乙氨基-3-硝基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪399mg，产率为51.4％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.20(s,1H),8.64(d,J＝7.6Hz,1H),8.16(s,1H),8.01(d,J＝1.6Hz,1H),7.66(dd,J＝8.8,1.9Hz,1H),7.41(s,1H),7.36–7.27(m,3H),7.20(d,J＝8.8Hz,1H),6.20(d,J＝1.6Hz,1H),3.86(s,3H),3.10(q,J＝7.1Hz,4H),1.08(t,J＝7.1Hz,6H)。

3、用等物质量的2-(4-二乙氨基-3-硝基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例20步骤3中的2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-硝基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例20步骤3相同，得到黄绿色固体2-(4-二乙氨基-3-氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪128mg，产率为73.5％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.29(s,1H),8.78(d,J＝7.7Hz,1H),8.02(d,J＝2.0Hz,1H),7.43(d,J＝8.0Hz,1H),7.40–7.30(m,3H),7.11–6.99(m,2H),6.96(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),6.20(d,J＝2.0Hz,1H),4.22(s,2H),3.95(s,3H),2.96(q,J＝7.1Hz,4H),1.03(t,J＝7.1Hz,6H)。

4、用等物质量的2-(4-二乙氨基-3-氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例20步骤4中的2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例20步骤4相同，得到黄色固体化合物21：2-(3-丙烯酰氨基-4-二乙氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪52mg，产率为46.8％，结构表征数据为：m.p.109.1–110.8℃；HRMS(C₂₇H₂₈N₈O)m/z[M+H]⁺:481.2461(计算值481.2495)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.20(s,1H),9.16(d,J＝17.2Hz,1H),8.72(s,1H),8.57(s,1H),8.06(d,J＝7.9Hz,1H),7.99(s,1H),7.38–7.31(m,4H),7.22(d,J＝8.6Hz,1H),6.41(d,J＝16.9Hz,1H),6.31(dd,J＝16.9,10.1Hz,1H),6.22(s,1H),5.75(d,J＝10.1Hz,1H),3.85–3.78(m,3H),2.94(q,J＝7.1Hz,4H),0.98(t,J＝7.1Hz,6H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):163.33,154.24,151.26,151.20,145.99,139.82,137.12,136.97,136.77,133.77,132.10,127.33,126.82,123.47,123.41,123.34,122.31,114.87,109.97,109.74,105.05,92.71,50.07,33.64,13.09；IRν_max(KBr)cm^-1:3298,2968,2923,1670,1596,1514,1459,1367,1230,1158,1065,965,864,773,736。

实施例22

1、用等物质量的吗啉替换实施例20步骤1中的N-甲基哌嗪，其它步骤与实施例20步骤1相同，得到橙红色固体4-吗啉基-3-硝基苯胺2.6g，产率为91.0％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.09(d,J＝8.7Hz,1H),7.01(d,J＝2.6Hz,1H),6.83(dd,J＝8.7,2.6Hz,1H),3.81–3.79(m,4H),2.95–2.92(m,4H)。

2、用等物质量的4-吗啉基-3-硝基苯胺替换实施例20步骤2中的4-(4-甲基哌嗪基)-3-硝基苯胺，其它步骤与实施例20步骤2相同，得到橙红色体2-(3-硝基-4-吗啉基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪219mg，产率为27.2％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.35(s,1H),8.76(d,J＝7.5Hz,1H),8.41(d,J＝2.6Hz,1H),8.09(d,J＝2.1Hz,1H),7.84(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),7.47(d,J＝7.5Hz,1H),7.43–7.36(m,2H),7.29(s,1H),7.26(d,J＝8.8Hz,1H),6.29(d,J＝2.1Hz,1H),3.99(s,3H),3.92–3.85(m,4H),3.15–3.02(m,4H)。

3、用等物质量的2-(3-硝基-4-吗啉基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例20步骤3中的2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-硝基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例20步骤3相同，得到黄绿色固体2-(3-氨基-4-吗啉基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪121mg，产率为67.0％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.51(s,1H),9.35(s,1H),9.00(d,J＝5.1Hz,1H),8.13(d,J＝2.1Hz,1H),7.65(d,J＝8.1Hz,1H),7.41–7.37(m,1H),7.34(t,J＝7.4Hz,1H),7.27(s,1H),7.06(d,J＝7.6Hz,1H),6.92(d,J＝8.5Hz,1H),6.17(d,J＝2.1Hz,1H),4.88(s,2H),4.02(s,3H),3.84–3.62(m,4H),2.96–2.70(m,4H)。

4、用等物质量的2-(3-氨基-4-吗啉基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例20步骤4中的2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例20步骤4相同，得到黄色固体化合物22：2-(3-丙烯酰氨基-4-吗啉基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪51mg，产率为44.7％，结构表征数据为:m.p.169.3–171.3℃；HRMS(C₂₇H₂₆N₈O₂)m/z[M+H]⁺:495.2258(计算值495.2251)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.27(s,1H),8.85(s,1H),8.83–8.74(m,1H),8.52(s,1H),8.05(d,J＝7.9Hz,1H),8.02(d,J＝1.4Hz,1H),7.50–7.37(m,3H),7.30(s,1H),7.25(d,J＝7.1Hz,1H),6.42(d,J＝16.9Hz,1H),6.31(dd,J＝16.9,10.2Hz,1H),6.24(d,J＝1.4Hz,1H),5.81(d,J＝10.2Hz,1H),3.94(s,3H),3.89(s,4H),2.90(s,4H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):163.31,154.21,151.34,151.16,146.06,139.87,137.17,137.05,135.85,133.76,131.91,127.35,127.15,123.46,123.40,122.37,121.38,115.19,110.80,109.81,105.06,92.80,67.77,52.94,33.71；IR ν_max(KBr)cm^-1:3289,2976,2940,1670,1596,1523,1359,1230,1157,911,764,736。

实施例23

1、用等物质量的硫代吗啉替换实施例20步骤1中的N-甲基哌嗪，其它步骤与实施例20步骤1相同，得到橙红色固体4-硫代吗啉基-3-硝基苯胺2.0g，产率为65.3％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.17(d,J＝8.7Hz,1H),6.85(d,J＝2.7Hz,1H),6.78(dd,J＝8.7,2.7Hz,1H),5.49(s,2H),3.08–2.95(m,4H),2.70–2.59(m,4H)。

2、用等物质量的4-硫代吗啉基-3-硝基苯胺替换实施例20步骤2中的4-(4-甲基哌嗪基)-3-硝基苯胺，其它步骤与实施例20步骤2相同，得到橙红色体2-(3-硝基-4-硫代吗啉基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪249mg，产率为30.2％。

3、用等物质量的2-(3-硝基-4-硫代吗啉基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例20步骤3中的2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-硝基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例20步骤3相同，得到黄绿色固体2-(3-氨基-4-硫代吗啉基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪112mg，产率为61.5％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.49(s,1H),9.35(s,1H),9.00(s,1H),8.13(d,J＝2.0Hz,1H),7.65(d,J＝8.1Hz,1H),7.39(t,J＝7.2Hz,1H),7.34(t,J＝7.4Hz,1H),7.25(s,1H),7.05(d,J＝7.5Hz,1H),6.91(d,J＝8.4Hz,1H),6.17(d,J＝2.0Hz,1H),4.87(s,2H),4.02(s,3H),3.02(br s,4H),2.80(br s,4H)。

4、用等物质量的2-(3-氨基-4-硫代吗啉基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例20步骤4中的2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例20步骤4相同，得到米黄色固体化合物23：2-(3-丙烯酰氨基-4-硫代吗啉基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪63mg，产率为53.9％，结构表征数据为：m.p.221.4–223.4℃；HRMS(C₂₇H₂₆N₈OS)m/z[M+H]⁺:511.2022(计算值511.2023)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.22(s,1H),8.76–8.75(m,2H),8.49(s,1H),8.03(d,J＝8.2Hz,1H),8.01(d,J＝1.9Hz,1H),7.40–7.35(m,3H),7.34(s,1H),7.20(d,J＝8.6Hz,1H),6.42(d,J＝16.9Hz,1H),6.29(dd,J＝16.9,10.1Hz,1H),6.23(d,J＝1.9Hz,1H),5.80(d,J＝10.1Hz,1H),3.89(s,3H),3.20–3.02(m,4H),2.83(br s,4H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):163.28,154.19,151.34,151.15,146.06,139.88,137.18,137.05,133.56,131.90,127.35,127.18,123.46,123.41,122.39,121.83,115.09,115.07,110.67,109.81,105.06,92.82,54.81,33.73,29.71；IRν_max(KBr)cm^-1:3453,3035,2901,1660,1605,1523,1447,1367,1312,965,882,773,736。

实施例24

1、用等物质量的N,N,N'-三甲基乙二胺替换实施例20步骤1中的N-甲基哌嗪，其它步骤与实施例20步骤1相同，得到红褐色固体4-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)-3-硝基苯胺2.6g，产率为84.8％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.08(d,J＝8.7Hz,1H),6.95(d,J＝2.8Hz,1H),6.79(dd,J＝8.7,2.8Hz,1H),3.71(s,2H),3.09–2.99(m,2H),2.72(s,3H),2.46–2.35(m,2H),2.20(s,6H)。

2、用等物质量的4-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)-3-硝基苯胺替换实施例20步骤2中的4-(4-甲基哌嗪基)-3-硝基苯胺，其它步骤与实施例20步骤2相同，得到橙红色体2-(3-硝基-4-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪318mg，其率为38.5％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.29(s,1H),8.72(d,J＝7.5Hz,1H),8.28(s,1H),8.04(d,J＝1.8Hz,1H),7.73(d,J＝8.0Hz,1H),7.43(d,J＝7.9Hz,1H),7.40–7.31(m,3H),7.21(d,J＝8.8Hz,1H),6.24(d,J＝1.8Hz,1H),3.94(s,3H),3.32–3.24(m,2H),2.85(s,3H),2.64–2.58(m,2H),2.33(s,6H)。

3、用等物质量的2-(3-硝基-4-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例20步骤3中的2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-硝基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例20步骤3相同，得到黄绿色固体2-(3-氨基-4-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪105mg，产率为56.4％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.29(s,1H),8.83–8.75(m,1H),8.02(d,J＝2.1Hz,1H),7.44(d,J＝7.2Hz,1H),7.40–7.35(m,2H),7.31(d,J＝2.2Hz,1H),7.05–7.03(m,2H),6.93(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),6.20(d,J＝2.1Hz,1H),3.95(s,3H),3.05(t,J＝6.5Hz,2H),2.70(s,3H),2.59–2.53(m,2H),2.38(br s,6H)。

4、用等物质量的2-(3-氨基-4-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例20第四步中的2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例20第四步相同，得到黄色固体化合物24：2-(3-丙烯酰氨基-4-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪59mg，其产率为50.5％。结构表征数据为：m.p.121.3–123.3℃；HRMS(C₂₈H₃₁N₉O)m/z[M+H]⁺:510.2725(计算值510.2724)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.96(s,1H),9.21(s,1H),8.76(s,1H),8.58(s,1H),8.02–7.90(m,2H),7.43(s,1H),7.36(s,3H),7.22(s,1H),6.67–6.53(m,1H),6.46(d,J＝16.2Hz,1H),6.21(s,1H),5.73(d,J＝7.4Hz,1H),3.87(s,3H),2.98(br s,2H),2.67(s,3H),2.57(br s,2H),2.40(s,6H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):164.22,154.29,151.34,151.17,146.04,139.86,137.17,136.94,136.86,135.70,132.04,127.35,126.97,123.48,123.41,122.47,122.40,115.28,111.55,109.79,105.07,92.68,77.29,77.08,76.87,56.38,54.91,44.54,43.42,33.71；IR ν_max(KBr)cm^-1:3474,2986,2932,1670,1597,1459,1358,974,874,773。

实施例25

1、该步骤与实施例22步骤1相同。

2、称取苯并噻吩-3-甲酰基-吡唑-5-基硫脲845mg(2.8mmol)、4-吗啉基-3-硝基苯胺624mg(2.8mmol)、氯化汞759mg(2.8mmol)、三乙胺566mg(5.6mmol)于圆底烧瓶中，加入15mL DMF，在氮气氛围中130℃反应12h。反应结束后，冷却至室温，抽滤除去不溶物，滤液用乙酸乙酯稀释后用饱和氯化钠水溶液洗涤3次，收集有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经硅胶柱色谱分离(甲醇:二氯甲烷＝1:200～1:100，V/V)，得到橙红色体2-(3-硝基-4-吗啉基苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪742mg，产率为56.0％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.83(s,1H),8.86(d,J＝8.0Hz,1H),8.32(d,J＝2.2Hz,1H),8.09(d,J＝2.1Hz,1H),7.91(d,J＝7.5Hz,1H),7.77(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.50(s,1H),7.48–7.42(m,2H),7.18(d,J＝8.8Hz,1H),6.30(d,J＝2.1Hz,1H),3.88–3.82(m,4H),3.07–3.00(m,4H)。

3、用等物质量的2-(3-硝基-4-吗啉基苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例20步骤3中的2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-硝基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例20步骤3相同，得到黄绿色固体2-(3-氨基-4-吗啉基苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪110mg，产率为60.5％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.83(s,1H),8.96(d,J＝8.1Hz,1H),8.07(d,J＝2.1Hz,1H),7.96(d,J＝8.0Hz,1H),7.52(t,J＝7.5Hz,1H),7.47(t,J＝7.4Hz,1H),7.36(d,J＝2.1Hz,1H),7.14(s,1H),7.03(d,J＝8.4Hz,1H),6.97(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),6.28(d,J＝2.1Hz,1H),4.13(s,2H),3.88(br s,4H),3.05–2.83(m,4H)。

4、用等物质量的2-(3-氨基-4-吗啉基苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例20步骤4中的2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例20步骤4相同，得到黄色固体化合物25：2-(3-丙烯酰氨基-4-吗啉基苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪93mg，产率为81.3％，结构表征数据为：m.p.131.8–132.8℃；HRMS(C₂₆H₂₃N₇O₂S)m/z[M+H]⁺:498.1710(计算值498.1707)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.88(s,1H),9.00(d,J＝8.2Hz,1H),8.84(s,1H),8.54(s,1H),8.07(d,J＝2.0Hz,1H),8.05(d,J＝8.0Hz,1H),7.94(d,J＝8.0Hz,1H),7.55(t,J＝7.6Hz,1H),7.47(t,J＝7.6Hz,1H),7.43(s,1H),7.25(s,1H),6.42(d,J＝16.9Hz,1H),6.34–6.26(m,2H),5.81(d,J＝10.3Hz,1H),3.89(br s,4H),2.90(br s,4H)；¹³CNMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):163.38,153.50,151.47,150.05,147.06,140.98,139.46,137.28,136.56,136.18,133.83,131.81,127.32,125.85,125.43,125.30,124.45,122.52,121.48,115.14,110.88,93.47,67.73,52.93；IR ν_max(KBr)cm^-1:3482,3102,2947,1674,1592,1512,1358,908,848,770。

实施例26

1、该步骤与实施例20步骤1相同。

2、用等物质量的4-(4-甲基哌嗪基)-3-硝基苯胺替换实施例25步骤2中的4-吗啉基-3-硝基苯胺，其它步骤与实施例25步骤2相同，得到橙红色固体2-(3-硝基-4-(4-甲基哌嗪基)苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪843mg，产率为61.8％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.86(s,1H),8.91(d,J＝6.6Hz,1H),8.34(s,1H),8.10(s,1H),7.95(d,J＝7.0Hz,1H),7.80(d,J＝7.7Hz,1H),7.58–7.43(m,2H),7.35(s,1H),7.23(d,J＝8.1Hz,1H),6.33(s,1H),3.10(br s,4H),2.61(br s,4H),2.37(s,3H)。

3、用等物质量的2-(3-硝基-4-(4-甲基哌嗪基)苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例20步骤3中的2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-硝基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例20步骤3相同，得到棕黄色固体2-(3-氨基-4-(4-甲基哌嗪基)苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪111mg，产率为59.3％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.82(s,1H),8.95(d,J＝8.2Hz,1H),8.06(d,J＝2.0Hz,1H),7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.52(t,J＝7.5Hz,1H),7.47(t,J＝7.4Hz,1H),7.33(d,J＝1.6Hz,1H),7.13(s,1H),7.04(d,J＝8.4Hz,1H),6.96(dd,J＝8.4,1.9Hz,1H),6.27(d,J＝1.9Hz,1H),4.10(s,2H),2.97(br s,4H),2.61(brs,4H),2.38(s,3H).

4、用等物质量的2-(3-氨基-4-(4-甲基哌嗪基)苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例20步骤4中的2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例20步骤4相同，得到黄色固体化合物26：2-(3-丙烯酰氨基-4-(4-甲基哌嗪基)苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪52mg，产率为44.6％，结构表征数据为：m.p.136.1–137.2℃；HRMS(C₂₇H₂₆N₈OS)m/z[M+H]⁺:511.2025(计算值511.2023)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.89(s,1H),9.02(d,J＝8.2Hz,1H),8.86(s,1H),8.52(s,1H),8.07(d,J＝2.1Hz,1H),8.04(d,J＝8.0Hz,1H),7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.57(t,J＝7.6Hz,1H),7.49(t,J＝7.2Hz,1H),7.37(s,1H),7.28(d,J＝8.7Hz,1H),6.42(d,J＝17.0Hz,1H),6.37–6.23(m,2H),5.81(d,J＝9.6Hz,1H),2.94(br s,4H),2.64(br s,4H),2.40(s,3H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):163.39,153.56,151.53,150.07,147.06,140.92,139.47,137.30,136.56,136.28,133.86,131.92,127.13,125.86,125.45,125.31,124.49,122.53,121.47,115.17,110.76,93.44,56.07,52.51,46.18；IR ν_max(KBr)cm^-1:3394,3107,2964,1640,1568,1373,1142,1093,959,775。

实施例27

1、该步骤与实施例24步骤1相同。

2、用等物质量的4-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)-3-硝基苯胺替换实施例25步骤2中的4-吗啉基-3-硝基苯胺，其它步骤与实施例25步骤2相同，得到橙红色体2-(3-硝基-4-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪578mg，产率为42.3％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.86(s,1H),8.92(d,J＝8.2Hz,1H),8.29(d,J＝1.8Hz,1H),8.10(d,J＝2.0Hz,1H),7.96(d,J＝7.9Hz,1H),7.74(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H),7.52(t,J＝7.5Hz,1H),7.48(t,J＝7.5Hz,1H),7.27(s,1H),7.21(d,J＝8.9Hz,1H),6.32(d,J＝2.0Hz,1H),3.42–3.13(m,2H),2.87(s,3H),2.67–2.47(m,2H),2.28(s,6H)。

3、用等物质量的2-(3-硝基-4-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例20步骤3中的2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-硝基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例20步骤3相同，得到黄绿色固体2-(3-氨基-4-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪129mg，产率为68.4％。

4、用等物质量的2-(3-氨基-4-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例20步骤4中的2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例20步骤4相同，得到黄色固体化合物27：2-(3-丙烯酰氨基-4-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪80mg，产率为68.4％，结构表征数据为：m.p.102.9–103.6℃；HRMS(C₂₇H₂₈N₈OS)m/z[M+H]⁺:513.2167(计算值513.2180)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):10.31(s,1H),9.89(s,1H),9.03(d,J＝8.2Hz,1H),8.57(d,J＝2.5Hz,1H),8.07(d,J＝2.1Hz,1H),8.06(s,1H),7.96(d,J＝8.0Hz,1H),7.59(t,J＝7.5Hz,1H),7.49(t,J＝7.1Hz,1H),7.38(s,1H),7.29(d,J＝8.6Hz,1H),6.47(dd,J＝16.9,1.4Hz,1H),6.35(s,1H),6.31(d,J＝2.1Hz,1H),5.74(dd,J＝10.2,1.4Hz,1H),2.89(br s,2H),2.74(s,3H),2.32(br s,2H),2.28(s,6H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):164.07,153.57,151.58,150.00,147.00,140.88,139.44,137.47,137.31,136.19,136.07,131.99,126.81,125.91,125.46,125.30,124.50,122.73,122.49,115.03,111.39,93.36,57.35,45.53,43.25,29.71；IR ν_max(KBr)cm^-1:3440,3065,2911,1675,1602,1521,1252,878,739。

实施例28

1、用等物质量的4-二甲氨基-3-硝基苯胺替换实施例20步骤2中的4-(4-甲基哌嗪基)-3-硝基苯胺，其它步骤与实施例20步骤2相同，得到橙红色体2-(3-硝基-4-二甲氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪197mg，产率为27.0％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.22(s,1H),8.65(d,J＝7.2Hz,1H),8.23(s,1H),8.00(d,J＝1.8Hz,1H),7.69(d,J＝7.6Hz,1H),7.36–7.27(m,4H),7.05(d,J＝8.9Hz,1H),6.19(d,J＝1.8Hz,1H),3.88(s,3H),2.87(s,6H)。

2、用等物质量的2-(3-硝基-4-二甲氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例20步骤3中的2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-硝基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例20步骤3相同，得到黄绿色固体2-(3-氨基-4-二甲氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪71mg，产率为44.6％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.24(s,1H),8.74(d,J＝7.5Hz,1H),8.01(t,J＝4.0Hz,1H),7.39–7.31(m,3H),7.30(d,J＝2.2Hz,1H),7.14(s,1H),7.03(d,J＝8.3Hz,1H),6.94(dd,J＝8.3,2.0Hz,1H),6.18(d,J＝2.0Hz,1H),4.12(s,2H),3.89(s,3H),2.69(s,6H)。

3、称取反式-4-二甲氨基巴豆酸盐酸盐58mg(0.35mmol)于圆底烧瓶中，加入催化量的DMF(1滴)、四氢呋喃4mL，在氮气氛围中冰浴条件下缓慢加入草酰氯0.3mL，滴加完毕后在环境温度下反应1.5h，底物完全溶解成暗红色，酰氯制备完成。将反应混合物减压蒸除溶剂，再向其中加入无水四氢呋喃4mL、含2-(3-氨基-4-二甲氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪71mg(0.18mmol)的N-甲基吡咯烷酮(NMP)溶液3mL，在室温下继续搅拌3h。将反应混合物用2mol/L氢氧化钠水溶液调pH约为9，用3×15mL的乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥、过滤浓缩，残留物经硅胶柱色谱分离(甲醇:二氯甲烷＝1:20，V/V)，得到黄绿色固体化合物28：2-(3-(4-二甲氨基丁-2-烯酰氨基)-4-二甲氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪12mg，产率为13.6％，结构表征数据为：m.p.134.7–136.3℃；HRMS(C₂₈H₃₁N₉O)m/z[M+H]⁺:510.2729(计算值510.2724)；¹HNMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.21(s,1H),8.76–7.74(m,2H),8.50(s,1H),7.99(s,2H),7.41–7.31(m,4H),7.24(d,J＝8.6Hz,1H),6.97(dt,J＝15.2,5.9Hz,1H),6.25–6.20(m,2H),3.88(s,3H),3.16(d,J＝5.6Hz,2H),2.65(s,6H),2.31(s,6H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):163.39,154.34,151.35,151.26,146.05,141.39,139.81,137.94,137.19,136.35,136.22,133.92,127.38,126.72,123.51,123.41,122.41,120.69,110.86,109.79,105.12,92.72,60.25,45.43,45.28,33.74；IR ν_max(KBr)cm^-1:3456,2943,2853,1675,1585,1512,1366,1236,926,862,772,739。

实施例29

1、用等物质量的4-二甲氨基-3-硝基苯胺替换实施例25步骤2中的4-吗啉基-3-硝基苯胺，其它步骤与实施例25步骤2相同，得到橙红色固体2-(3-硝基-4-二甲氨基苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪265mg，产率为21.9％，结构表征数据为：¹HNMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.75(s,1H),8.74(s,1H),8.16(s,1H),8.00(d,J＝0.8Hz,1H),7.81(d,J＝3.2Hz,1H),7.64–7.51(m,2H),7.37–7.30(m,2H),6.95(d,J＝8.7Hz,1H),6.19(s,1H),2.83(s,6H)。

2、用等物质量的2-(3-硝基-4-二甲氨基苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例20步骤3中的2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-硝基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例20步骤3相同，得到黄绿色固体2-(3-氨基-4-二甲氨基苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪75mg，产率为45.6％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.81(s,1H),8.93(d,J＝8.4Hz,1H),8.05(d,J＝2.0Hz,1H),7.94(d,J＝7.9Hz,1H),7.49(d,J＝7.6Hz,1H),7.45(dd,J＝11.0,3.9Hz,1H),7.28(d,J＝1.4Hz,1H),7.18(s,1H),7.02(d,J＝8.4Hz,1H),7.00–6.89(m,1H),6.26(d,J＝2.0Hz,1H),4.11(s,2H),2.68(s,6H)。

3、用等物质量的2-(3-氨基-4-二甲氨基苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例28步骤3中的2-(3-氨基-4-二甲氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例28步骤3相同，得到黄绿色固体化合物29：2-(3-(4-二甲氨基丁-2-烯酰氨基)-4-二甲氨基苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪31mg，产率为33.7％，结构表征数据为：m.p.168.8–170.4℃；HRMS(C₂₇H₂₈N₈OS)m/z[M+H]⁺:513.2180(计算值513.2180)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.87(s,1H),9.00(d,J＝7.8Hz,1H),8.76(s,1H),8.52(s,1H),8.06(s,1H),8.00(s,1H),7.93(d,J＝7.8Hz,1H),7.54(d,J＝7.4Hz,1H),7.47(s,2H),7.24(s,1H),6.97(d,J＝15.3Hz,1H),6.29(s,1H),6.21(d,J＝15.3Hz,1H),3.16(d,J＝4.4Hz,2H),2.66(s,6H),2.31(s,6H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):163.49,153.62,151.58,150.02,147.01,141.67,140.86,139.45,138.32,137.31,135.85,133.98,126.56,125.90,125.44,125.29,124.51,122.49,120.77,115.10,110.94,93.36,60.27,45.47,45.24,29.7；IR ν_max(KBr)cm^-1:3585,3110,2938,1642,1512,1366,1150,908,778。

实施例30

1、该步骤与实施例28步骤1相同。

2、该步骤与实施例28步骤2相同。

3、用等物质量的2-(3-氨基-4-二甲氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例20步骤4中的2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例20步骤4相同，得到黄色固体化合物30：2-(3-丙烯酰氨基-4-二甲氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪50mg，产率为48.1％，结构表征数据为：m.p.199.8–200.3℃；HRMS(C₂₅H₂₄N₈O)m/z[M+H]⁺:453.2141(计算值453.2164)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.26(s,1H),8.83–8.77(m,2H),8.51(s,1H),8.02–8.01(m,2H),7.44–7.38(m,3H),7.27(s,1H),7.26(d,J＝2.4Hz,1H),6.44(d,J＝16.9Hz,1H),6.35(dd,J＝16.9,10.5Hz,1H),6.24(d,J＝2.0Hz,1H),5.78(d,J＝10.5Hz,1H),3.94(s,3H),2.67(s,6H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl3)δ(ppm):163.46,154.29,151.23,145.99,139.81,137.96,137.12,136.39,133.71,131.93,127.33,127.16,123.47,123.34,122.33,122.31,120.65,115.27,110.94,109.75,105.05,92.70,45.26,33.68；IR ν_max(KBr)cm^-1:3301,3041,2938,1669,1607,1521,1357,933,864,761,735。

实施例31

1、称取4-氟-3-硝基苯胺1.6g(10mmol)、活性炭1.5g和FeCl₃·6H₂O 0.1g于圆底烧瓶中，加入无水乙醇25mL，升温至70℃，然后缓慢将2.9mL 80％水合肼滴加到反应体系中，在70℃下反应1h。抽滤、收集滤液，干燥后浓缩得到黄绿色固体4-氟-3-氨基苯胺1.2g，产率为95.0％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):6.74(t,J＝9.7Hz,1H),6.22–5.70(m,2H),3.67(s,2H),3.40(s,2H)。

2、称取1-甲基吲哚-3-甲酰基-吡唑-5-基硫脲599mg(2.0mmol)、4-氟-3-氨基苯胺376mg(3.0mmol)、氯化汞815mg(2.0mmol)、三乙胺607mg(6.0mmol)于圆底烧瓶中，加入15mLDMF，在氮气氛围中100℃反应12h。反应结束后，冷却至室温，抽滤除不溶物，收集滤液在150℃下回流12h。反应结束后，冷却至室温，加入乙酸乙酯稀释后用饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残留物经硅胶柱色谱分离(二氯甲烷)，得到黄绿色固体2-(3-氨基-4-氟苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪150mg，产率为20.1％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.29(s,1H),8.75(d,J＝7.1Hz,1H),8.03(s,1H),7.44–7.43(m,2H),7.39–7.35(m,2H),7.07(s,1H),6.98(t,J＝9.6Hz,1H),6.86(s,1H),6.21(s,1H),3.95(s,3H),3.81(s,2H)。

3、用等物质量的2-(3-氨基-4-氟苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例28步骤3中的2-(3-氨基-4-二甲氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例28步骤3相同，得到黄褐色固体化合物31：2-(3-(4-二甲氨基丁-2-烯酰氨基)-4-氟苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪45mg，产率为51.3％，结构表征数据为：m.p.202.6–204.3℃；HRMS(C₂₇H₂₅FN₈O)m/z[M+H]⁺:485.2204(计算值485.2208)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.24(s,1H),8.74(d,J＝4.8Hz,1H),8.48(s,1H),8.01(s,1H),7.93(s,1H),7.55(s,1H),7.40–7.36(m,3H),7.29(s,1H),7.11(t,J＝9.8Hz,1H),7.03–6.98(m,1H),6.21(s,1H),6.18(d,J＝15.3Hz,1H),3.90(s,3H),3.14(d,J＝5.7Hz,2H),2.30(s,6H)；¹³C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.95,154.55,151.05(d,³J_C-F＝4Hz),150.67(d,¹J_C-F＝242Hz),146.72,142.21,140.66,137.47,136.72,127.20,126.31,126.23(d,³J_C-F＝13Hz),123.94,123.67,122.56,116.81,116.21,115.60(d,²J_C-F＝20Hz),111.14,104.35,100.00,92.53,60.19,45.57,33.95；IR ν_max(KBr)cm^-1:3439,2947,1670,1560,1357,1150,968,847,770。

实施例32

1、该步骤与实施例31步骤1相同。

2、用等物质量的苯并噻吩-3-甲酰基-吡唑-5-基硫脲替换实施例31步骤2中的1-甲基吲哚-3-甲酰基-吡唑-5-基硫脲，其它步骤与实施例31步骤2相同，得到橙红色固体2-(3-氨基-4-氟苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪127mg，产率为16.7％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.84(s,1H),8.94(d,J＝8.1Hz,1H),8.08(s,1H),7.96(d,J＝7.9Hz,1H),7.53(t,J＝7.5Hz,1H),7.48(t,J＝7.5Hz,1H),7.43(d,J＝7.9Hz,1H),7.12(s,1H),7.06–6.92(m,1H),6.89(s,1H),6.29(s,1H),3.83(s,2H)。

3、用等物质量的2-(3-氨基-4-氟苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例28步骤3中的2-(3-氨基-4-二甲氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例28步骤3相同，得到黄褐色固体化合物32：2-(3-(4-二甲氨基丁-2-烯酰氨基)-4-氟苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪23mg，产率为26.1％，结构表征数据为：m.p.205.5–207.4℃；HRMS(C₂₅H₂₅FN₇OS)m/z[M+H]⁺:488.1659(计算值488.1663)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.81(s,1H),8.88(s,1H),8.48(s,1H),8.01(s,1H),7.93–7.80(m,2H),7.68–7.64(m,2H),7.44–7.40(m,2H),7.05–6.98(m,2H),6.22(s,1H),6.16(d,J＝13.7Hz,1H),3.09(br s,2H),2.26(s,6H)；¹³CNMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):163.56,153.52,151.38,149.99,149.29(d,¹J_C-F＝240Hz),147.03,143.36,140.97,139.40,137.24,135.30(d,⁴J_C-F＝2Hz),126.56(d,³J_C-F＝11Hz),125.81,125.36(d,³J_C-F＝15Hz),124.42,122.47,115.55,115.51,114.92(d,²J_C-F＝20Hz),113.04,113.02,93.39,60.26,45.49；IR ν_max(KBr)cm^-1:3447,3081,2918,1642,1537,1431,1252,1219,991,878,739。

实施例33

1、称取4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺931mg(5.0mmol)、N,N,N’-三甲基乙二胺766mg(7.5mmol)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)969mg(7.5mmol)于圆底烧瓶中，加入20mL乙腈，在回流温度下反应12h。蒸干溶剂，残留物经硅胶柱色谱分离(甲醇:二氯甲烷＝1:15，V/V)，得到红褐色固体4-(N,N,N’-三甲基乙二氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯胺985mg，产率为73.4％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.24(s,1H),6.59(s,1H),3.89(s,3H),3.76(s,2H),3.18–3.08(m,2H),2.79(s,3H),2.51–2.43(m,2H),2.21(s,6H)。

2、称取1-甲基吲哚-3-甲酰基-吡唑-5-基硫脲755mg(2.5mmol)、氢化钠150mg(6.2mmol)、4-(N,N,N’-三甲基乙二氨基)-2-甲氧基-3-硝基苯胺677mg(2.5mmol)、氯化汞685mg(2.5mmol)于圆底烧瓶中，加入10mLDMF，在60℃下反应24h。反应结束后，冷却至室温，抽滤除去不溶物，滤液中加入氧化钙420mg(7.5mmol)在150℃下加热回流12h。反应结束后冷却至室温，用乙酸乙酯稀释后再用饱和氯化钠水溶液洗涤3次，收集有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，经硅胶柱色谱分离(甲醇:二氯甲烷＝1:40，V/V)，得到橙红色固体2-(2-甲氧基-4-(N,N,N’-三甲基乙二氨基)-5-硝基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪439mg，产率为34.3％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.27(s,1H),9.23(s,1H),8.77–8.73(m,1H),8.03(d,J＝2.1Hz,1H),7.51(s,1H),7.45–7.33(m,3H),6.68(s,1H),6.27(d,J＝2.1Hz,1H),4.01(s,3H),3.93(s,3H),3.36–3.25(m,2H),2.89(s,3H),2.61–2.53(m,2H),2.28(s,6H)。

3、称取2-(2-甲氧基-4-(N,N,N’-三甲基乙二氨基)-5-硝基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪439mg(0.85mmol)、活性炭94mg和FeCl₃·6H₂O 5mg于圆底烧瓶中，加入无水乙醇25mL，升温至70℃，然后缓慢将0.5mL 80％水合肼滴加到反应体系中，反应1h。抽滤、收集滤液，有机相干燥后浓缩，经硅胶柱色谱分离(甲醇:二氯甲烷＝1:20，V/V)，得到2-(2-甲氧基-4-(N,N,N’-三甲基乙二氨基)-5-氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪298mg，产率为72.1％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.29(s,1H),8.84(dd,J＝6.3,2.5Hz,1H),8.16(s,1H),8.02(d,J＝2.0 Hz,1H),7.66(s,1H),7.51–7.33(m,3H),6.72(s,1H),6.22(d,J＝2.0Hz,1H),3.96(s,3H),3.89(s,3H),3.13(t,J＝6.3Hz,2H),2.71(s,3H),2.67(br s,2H),2.49(s,6H)。

4、用等物质量的2-(2-甲氧基-4-(N,N,N’-三甲基乙二氨基)-5-氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例20步骤4中的2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例20步骤4相同，得到黄色固体化合物33：2-(3-丙烯酰氨基-4-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)-6-甲氧基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪53mg，产率为42.7％，结构表征数据为：m.p.251.7–252.9℃；HRMS(C₂₉H₃₃N₉O₂)m/z[M+H]⁺:540.2820(计算值540.2830)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):10.10(s,1H),9.68(s,1H),9.29(s,1H),8.80(dd,J＝5.7,3.0 Hz,1H),8.02(d,J＝2.1Hz,1H),7.61(s,1H),7.42(dd,J＝5.9,3.0Hz,1H),7.38–7.32(m,2H),6.82(s,1H),6.42(d,J＝16.1Hz,1H),6.35(d,J＝1.5Hz,1H),6.31(dd,J＝17.0,10.2Hz,1H),5.68(dd,J＝10.2,1.2Hz,1H),3.94(s,3H),3.92(s,3H),2.93–2.85(m,2H),2.72(s,3H),2.33–2.29(m,2H),2.27(s,6H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):163.28,154.20,151.41,151.36,146.10,145.34,139.81,137.25,136.47,132.49,129.54,127.41,126.12,125.77,123.43,123.26,122.20,112.34,109.77,105.34,104.64,93.23,57.49,56.63,56.13,45.58,43.46,33.73；IR ν_max(KBr)cm^-1:3431,3055,2930,1685,1607,1538,1374,1150,770,545。

实施例34

1、称取4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺1.0g(5.4mmol)、二甲胺的四氢呋喃溶液818μL(6.0mmol)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)1.0mL(6.0mmol)于圆底烧瓶中，加入25mL四氢呋喃，在50℃下反应12h。减压蒸除溶剂，经硅胶柱色谱分离(甲醇:二氯甲烷＝1:20，V/V)，得到深褐色油状物4-二甲氨基-2-甲氧基-5-硝基苯胺793mg，产率为69.5％，结构表征数据为：¹HNMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.35(d,J＝3.9Hz,1H),6.46(d,J＝2.8Hz,1H),3.92(s,3H),3.71(s,2H),2.83(s,6H)。

2、称取1-甲基吲哚-3-甲酰基-吡唑-5-基硫脲830mg(2.77mmol)、4-二甲氨基-2-甲氧基-5-硝基苯胺650mg(3.0mmol)、氯化汞816mg(3.0mmol)、三乙胺607mg(6.0mmol)于圆底烧瓶中，加入15mLDMF，在氮气氛围中100℃反应12h。反应结束后，冷却至室温，抽滤除不溶物，滤液中加入氧化钙453mg(8.1mmol)在150℃下加热回流10h。反应结束后冷却至室温，用乙酸乙酯稀释后再用饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，经硅胶柱色谱分离(甲醇:二氯甲烷＝1:100，V/V)，得到橙红色固体2-(4-二甲氨基-2-甲氧基-5-硝基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪391mg，产率为30.8％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.32(s,1H),9.28(s,1H),8.82–8.75(m,1H),8.05(d,J＝2.0Hz,1H),7.50(s,1H),7.47–7.43(m,1H),7.43–7.34(m,2H),6.52(s,1H),6.29(d,J＝2.0Hz,1H),4.04(s,3H),3.97(s,3H),2.94(s,6H)。

3、用等物质量的2-(4-二甲氨基-2-甲氧基-5-硝基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例33步骤3中的2-(2-甲氧基-4-(N,N,N’-三甲基乙二氨基)-5-硝基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例33步骤3相同，得黄绿色固体2-(4-二甲氨基-2-甲氧基-5-氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪309mg，产率为84.9％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.26(s,1H),8.83(d,J＝6.8Hz,1H),8.13(s,1H),8.01(d,J＝1.6Hz,1H),7.61(s,1H),7.45–7.33(m,3H),6.71(s,1H),6.20(s,1H),3.93(s,3H),3.90(s,3H),3.88(s,2H),2.69(s,6H)。

4、用等物质量的2-(4-二甲氨基-2-甲氧基-5-氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例20步骤4中的2-(4-(4-甲基哌嗪基)-3-氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例20步骤4相同，得到黄色固体化合物34：2-(3-丙烯酰氨基-4-二甲氨基-6-甲氧基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪65mg，产率为58.4％，结构表征数据为：m.p.213.4–214.8℃；HRMS(C₂₆H₂₆N₈O₂)m/z[M+H]⁺:483.2243(计算值483.2251)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.58(s,1H),9.25(s,1H),8.82–8.72(m,1H),8.48(s,1H),8.01(d,J＝2.0Hz,1H),7.55(s,1H),7.45–7.37(m,1H),7.37–7.28(m,2H),6.78(s,1H),6.46–6.27(m,3H),5.72(d,J＝10.8Hz,1H),3.92(s,3H),3.90(s,3H),2.66(s,6H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):162.93,154.23,151.39,151.34,146.07,145.55,139.84,137.90,137.22,132.26,127.37,126.69,126.34,125.43,123.39,123.26,122.19,112.55,109.79,105.26,102.77,93.12,56.12,45.03,33.71；IR ν_max(KBr)cm^-1:3430,3068,2938,1676,1607,1547,1374,1158,770,545。

实施例35

1、用等物质量的4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺替换实施例31步骤1中的4-氟-3-硝基苯胺，其它步骤与实施例31步骤1相同，得到粗品黄绿色固体4-氟-2-甲氧基-5-氨基苯胺1.4g，其粗产率为89.7％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):6.48(dd,J＝11.9,3.3Hz,1H),6.12(dd,J＝8.9,3.3Hz,1H),3.68(s,3H),3.37(s,3H)。

2、用等物质量的4-氟-2-甲氧基-5-氨基苯胺替换实施例33步骤2中的4-(N,N,N’-三甲基乙二氨基)-2-甲氧基-3-硝基苯胺，其它步骤与实施例33步骤2相同，得到米黄色固体2-(4-氟-2-甲氧基-5-氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪85mg，产率为8.4％，结构表征数据为：¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.30(s,1H),8.83(dd,J＝5.9,3.0Hz,1H),8.28(d,J＝9.6Hz,1H),8.04(d,J＝2.0Hz,1H),7.60(s,1H),7.49–7.36(m,3H),6.69(d,J＝11.8Hz,1H),6.23(d,J＝2.0Hz,1H),3.97(s,3H),3.89(s,3H),3.56(s,2H)。

3、用等物质量的2-(4-氟-2-甲氧基-5-氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪替换实施例28步骤3中的2-(3-氨基-4-二甲氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪，其它步骤与实施例28步骤3相同。所得粗产物经柱色谱分离得黄褐色固体化合物35：2-(3-(4-二甲氨基丁-2-烯酰氨基)-4-氟-6-甲氧基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪32mg(产率为34.8％)和化合物36：2-(3-(N-甲基吡咯烷-2-基)亚氨基-4-氟-6-甲氧基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪7mg(产率为8.0％)。化合物35的结构表征数据为：m.p.169.7–170.8℃；HRMS(C₂₇H₂₇FN₈O₂)m/z[M+H]⁺:515.2303(计算值515.2314)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.32(br s,1H),9.29(s,1H),8.82–8.74(m,1H),8.03(d,J＝2.0Hz,1H),7.53(s,1H),7.46–7.41(m,1H),7.41–7.34(m,2H),7.23(s,1H),7.04–6.93(m,1H),6.73(d,J＝11.7Hz,1H),6.29(s,1H),6.16(d,J＝15.3Hz,1H),3.95(s,3H),3.93(s,3H),3.12(d,J＝4.5Hz,2H),2.29(s,6H)；¹³C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.83,155.65,153.19(d,¹J_C-F＝244Hz),151.49,151.09,150.74,150.69,146.82,141.90,140.65,137.45,127.14,125.95,123.99(d,⁴J_C-F＝3Hz),123.62,122.51,122.13,118.13(d,³J_C-F＝13Hz),111.21,104.33,100.78(d,²J_C-F＝25Hz),91.92,60.26,56.76,45.62,33.97；IR ν_max(KBr)cm^-1:3422,3059,2938,1676,1616,1538,1374,1158,769,553；化合物36的结构表征数据为：m.p.104.3–105.7℃；HRMS(C₂₇H₂₇FN₈O₂)m/z[M+H]⁺:485.2204(计算值485.2214)；¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.30(s,1H),8.83(d,J＝8.1Hz,1H),8.28(d,J＝9.2Hz,1H),8.03(s,1H),7.61(s,1H),7.49–7.37(m,3H),6.72(d,J＝11.6Hz,1H),6.22(s,1H),3.97(s,3H),3.94(s,3H),3.43(t,J＝6.9Hz,2H),3.07(s,3H),2.53(t,J＝7.8Hz,2H),2.02–1.93(m,2H)；¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ(ppm):164.68,154.17,151.31,150.78(d,¹J_C-F＝238Hz),146.02,144.28,144.27,144.23,139.80,137.20,127.37,124.62,124.60(d,⁴J_C-F＝2Hz),123.29,122.38,116.29,109.82,105.18,99.36(d,²J_C-F＝27Hz),92.56,56.29,51.85,33.74,31.71,28.34,19.68；IR ν_max(KBr)cm^-1:3062,2952,1617,1519,1423,1372,894,767。

实施例36

本发明吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物及其盐在制备抗癌药物中的应用，具体试验情况如下：

1、细胞株

人结肠癌细胞SW480、人非小细胞肺癌细胞A549、人皮肤鳞状癌细胞A431和人肺癌细胞NCI-H1975均购自中国科学院上海细胞库。

2、试剂和材料

MTT(MPBIO)、96孔细胞培养板、胎牛血清(Gibco)、DMEM(Dulbecco’s ModifiedEagle Medium powder,high glucose,Gibco BRL,Gibco)、青霉素、链霉素(碧云天)、胰蛋白酶消化液(碧云天)、酶标仪(PEEnspire)。

3、实验步骤

(1)细胞培养

实验中癌细胞SW480、A549、A431和NCI-H1975所用细胞培养基为含有10％(v/v)胎牛血清、100units/mL青霉素、100μg/mL链霉素和2mmol/LL-谷氨酰胺的DMEM培养基。细胞被置于饱和湿度、37℃、5％CO₂温箱中培养。每隔2～3天传代一次。

(2)抗癌活性检测

化合物1～36对癌细胞的生长抑制活性利用MTT法进行测定。分别取对数生长期的人癌细胞，用0.25％的胰蛋白酶消化液消化、离心、重悬后计数，制备细胞悬液，调整细胞悬液浓度为2.0×10⁴～5×10⁴个/mL。取细胞悬液接种于96孔培养板中(100μL/孔)，置饱和湿度、37℃和5％CO₂培养箱中培养24h。用细胞培养基稀释受试化合物至所需浓度，加入已接种人癌细胞的96孔培养板中(100μL/孔)，DMSO终浓度为0.5％，置于培养箱中培养72h。将MTT加入96孔板中(20μL/孔)，培养箱中反应4h。吸弃孔内液体，加入DMSO(150μL/孔)，摇床上震荡10min，使甲臜完全溶解。然后用酶标仪测定570nm波长处的吸光度(OD值)，630nm波长处的吸光度作为参比，以相应溶剂作为对照，计算细胞生长抑制率。

受试化合物对癌细胞生长抑制率的计算方式如下：

癌细胞生长抑制率％＝[1-(ODs-OD_NC)/(OD_PC-OD_NC)]×100％

其中：OD_S表示样品孔的吸光度值(细胞+待测化合物+MTT)；OD_PC表示对照孔的吸光度值(细胞+DMSO+MTT)；OD_NC表示调零孔的吸光度值(细胞培养基+DMSO+MTT)；ODs＝OD_570s-OD_630s；OD_PC＝OD_570PC-OD_630PC；OD_NC＝OD_570NC-OD_630NC。

受试化合物对癌细胞生长抑制曲线的拟合及IC₅₀的计算：采用Graphpad Prism5拟合受试化合物对癌细胞生长的抑制曲线，并得出IC₅₀值。每组设置3个复孔，至少重复3次。

4、实验结果

表1受试化合物抑制癌细胞增殖的活性[IC₅₀(μmol/L)]

表1中的数据表明，本发明化合物至少对所试的四种癌细胞中的一种具有明显的抗增殖活性，大多数化合物对所测试的四种癌细胞均表现良好的抗增殖活性，特别是化合物24、28、31、32、33对所测试的四种癌细胞具有突出的增殖抑制活性。这些表明本发明吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物及其盐具有抗癌活性，可用于抗癌药物的制备。

Claims

1.吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物及其盐，其特征在于该衍生物的结构式如下：

中任意一种，其中R”为二乙氨基、吗啉基、4-甲基哌嗪基、吡咯烷基中任意一种，R¹为丙烯酰氨基、4-(二甲氨基)丁-2-烯酰氨基、N-甲基吡咯烷-2-基亚氨基中任意一种；R²为连接于苯环任意位置的取代基，R²选自氟、甲氧基、二甲氨基、吗啉基、二乙氨基、4-甲基哌嗪基、N,N,N'-三甲基乙二氨基中任意一种或两种，n为1或2。

2.根据权利要求1所述的吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物及其盐，其特征在于：所述的盐为吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物分别与盐酸、硫酸、磷酸、对甲基苯磺酸、马来酸、富马酸、甲酸、乙酸和苯甲酸形成的盐。

3.根据权利要求2所述的吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物及其盐，其特征在于：所述的盐为吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物与对甲基苯磺酸形成的盐。

4.根据权利要求1所述的吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物，其特征在于该衍生物为下列化合物1～36中任意一种：

化合物1：2-(2-二乙氨基乙氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物2：2-(2-吗啉基乙氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物3：2-(2-(4-甲基哌嗪基)乙氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物4：2-(4-(2-甲氧基乙基)哌嗪基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物5：2-(4-甲基哌嗪基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物6：2-哌嗪基-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物7：2-(4-丙烯酰基哌嗪基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物8：2-(4-甲基哌嗪基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪对甲基苯磺酸盐

化合物9：2-(2-吡咯烷基乙氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物10：2-(2-二乙氨基乙氧基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物11：2-(2-二乙氨基乙氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物12：2-(2-吗啉基乙氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物13：2-(4-(2-甲氧基乙基)哌嗪基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物14：2-(4-甲基哌嗪基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物15：2-哌嗪基-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物16：2-(4-丙烯酰基哌嗪基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物17：2-(2-吡咯烷基乙氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物18：2-二乙氨基-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物19：2-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物20：2-(3-丙烯酰氨基-4-(4-甲基哌嗪基)苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物21：2-(3-丙烯酰氨基-4-二乙氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物22：2-(3-丙烯酰氨基-4-吗啉基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物24：2-(3-丙烯酰氨基-4-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物25：2-(3-丙烯酰氨基-4-吗啉基苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物26：2-(3-丙烯酰氨基-4-(4-甲基哌嗪基)苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物27：2-(3-丙烯酰氨基-4-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物28：2-(3-(4-二甲氨基丁-2-烯酰氨基)-4-二甲氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物29：2-(3-(4-二甲氨基丁-2-烯酰氨基)-4-二甲氨基苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物30：2-(3-丙烯酰氨基-4-二甲氨基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物31：2-(3-(4-二甲氨基丁-2-烯酰氨基)-4-氟苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物32：2-(3-(4-二甲氨基丁-2-烯酰氨基)-4-氟苯氨基)-4-(苯并噻吩-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物33：2-(3-丙烯酰氨基-4-(N,N,N'-三甲基乙二氨基)-6-甲氧基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物34：2-(3-丙烯酰氨基-4-二甲氨基-6-甲氧基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物35：2-(3-(4-二甲氨基丁-2-烯酰氨基)-4-氟-6-甲氧基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

化合物36：2-(3-(N-甲基吡咯烷-2-基)亚氨基-4-氟-6-甲氧基苯氨基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪

。

5.权利要求1所述的吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物及其盐在制备抗癌药物中的用途。

6.根据权利要求5所述的吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪衍生物及其盐在制备抗癌药物中的用途，其特征在于：所述癌为结肠癌、肺癌、皮肤鳞状癌中任意一种。