CN113874376A

CN113874376A - 作为磷酸肌醇3-激酶抑制剂的异色烯衍生物

Info

Publication number: CN113874376A
Application number: CN202080034539.2A
Authority: CN
Inventors: M·比亚杰蒂; P·龙奇; C·费奥莱里; P·布鲁诺
Original assignee: Chiesi Farmaceutici SpA
Current assignee: Chiesi Farmaceutici SpA
Priority date: 2019-04-04
Filing date: 2020-03-24
Publication date: 2021-12-31
Also published as: KR20210149077A; IL286937A; AR118588A1; PT3947384T; SI3947384T1; DK3947384T3; ES2970530T3; MA55479A; CA3135309A1; TW202102504A; JP2022526973A; HRP20240130T1; WO2020200918A1; PL3947384T3; SG11202110801XA; EP3947384B1; US20220175784A1; HUE065052T2; PH12021552402A1; AU2020252904A1

Abstract

本发明涉及抑制磷酸肌醇3‑激酶(PI3K)的式(I)化合物，涉及包含它们的药物组合物，及其在治疗与PI3K酶有关的障碍中的治疗用途

Description

作为磷酸肌醇3-激酶抑制剂的异色烯衍生物

技术领域

本发明涉及抑制磷酸肌醇(phosphoinositide)3-激酶(在下文中称作PI3K)的化合物；具体地，本发明涉及是异色烯衍生物的化合物、制备这样的化合物的方法、含有它们的药物组合物及其治疗用途。

更具体地，本发明的化合物是PI3K I类的活性或功能的抑制剂，且更具体地，它们是I类PI3K的ΡΙ3Kα、ΡΙ3Kβ、ΡΙ3Kδ和/或ΡΙ3Kγ同种型的活性或功能的抑制剂。

因此，本发明的化合物可以用于治疗许多与PI3K酶机制相关的障碍，例如呼吸性疾病，包括哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)和咳嗽。

背景技术

在生物化学中，激酶是将磷酸基团从高能供体分子(诸如ATP)转移至特定底物上(即被称作磷酸化的过程)的酶类型。具体地，PI3K酶是可以在肌醇环的3'-羟基基团处将磷酸肌醇(PI)磷酸化的脂质酶激酶(Panayotou等人,Trends Cell Biol 2:358-60(1992))。众所周知，位于质膜中的PI可以作为信号传递级联中的第二信使通过含有普列克底物蛋白-同源性(PH)、FYVE、PX和其它磷脂-结合结构域的船坞蛋白质起作用(Vanhaesebroeck B等人,Annu.Rev.Biochem 70,535-602,2001；Katso R等人,Annu.Rev.Cell Dev.Biol.17,615-675,2001)。

因此，PI可以作为许多细胞过程中的第二信使起作用，包括信号转导、膜运输和转运的调节、细胞骨架组构、细胞存活和死亡以及许多另外的功能。

PI可以通过两种经甘油磷酸接头连接至细胞溶质肌醇环的脂肪酸结合细胞膜的脂质双层。PI肌醇环可以被PI3K酶磷酸化，从而导致细胞生长、存活和增殖的调节。由于该原因，由PI3K酶实现的PI磷酸化是与哺乳动物细胞表面受体活化相关的大部分相关信号转导事件之一(Cantley LC,Science 296,1655-7,2002；Vanhaesebroeck B等人,Annu.Rev.Biochem 70,535-602,2001)。

基于序列同源性、结构、结合配偶体、活化模式和底物优先性，已经将PI3K酶分成3类：I类PI3K、II类PI3K和III类PI3K(Vanhaesebroeck B等人,Exp.Cell Res.253(1),239-54,1999；和Leslie NR等人,Chem.Rev.101(8),2365-80,2001)。

I类PI3K将磷酸肌醇-(4,5)-二磷酸(PI(4,5)P2)转化成磷酸肌醇-(3,4,5)-三磷酸(PI(3,4,5)P3)，后者作为第二信使起作用。由PI(3,4,5)P3的细胞内水平的增加活化的信号传递级联通过5’-特异性的和3’-特异性的磷酸酶的作用被负调节(Vanhaesebroeck B等人,Trends Biochem.Sci.22(7),267-72,1997；Katso R等人,Annu.Rev.CellDev.Biol.17,615-75,2001；和Toker A,Cell.Mol.Life Sci.59(5),761-79,2002)。

II类PI3K酶是最近鉴定的PI3K类型且它们的确切功能仍然不清楚。

III类PI3K酶由单一家族成员组成，所述家族成员在结构上与I类PI3K酶相关并且似乎在胞吞作用和囊泡运输中是重要的。但是，一些证据表明III类PI3K可能涉及免疫细胞过程，诸如吞噬作用和Toll-样受体(TLR)信号传递。

I类PI3K酶可以基于其活化机制进一步分入IA类和IB类。

更详细地，IA类PI3K酶包含3种密切相关的同种型：PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kδ，而IB类仅包含PI3Kγ同种型。这些酶是由被称作p110的催化亚基组成的异源二聚体，具有4种类型：alpha(α)、beta(β)、delta(δ)和gamma(γ)同种型，它们在组成上与调节亚基相关。前2种p110同种型(α和β)普遍存在地表达且参与细胞分化和增殖。结果，PI3Kα和PI3Kβ酶已经作为新化疗剂的开发靶标被广泛地研究。

另外，p110δ和p110γ同种型主要在白细胞中表达且在免疫应答的活化中是重要的，诸如白细胞迁移、B和T细胞活化和肥大细胞脱颗粒。因此，PI3Kδ和PI3Kγ同种型在炎症性呼吸性疾病中是非常相关的。

目前，本领域已知的PI3K酶的抑制剂衍生物通常会抑制所述同种型(α、β、δ和γ同种型)，且它们可以通过作用于所述特定同种型在不同疾病中所起的各个作用。

因此，已经广泛地开发了IA类抑制剂对一种特定PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kδ和PI3Kγ同种型相对于另一种的比活性测定，以便分辨用于治疗与PI3K酶机制相关的障碍的合适特性。这类障碍可以包括，例如，呼吸性疾病，其选自特发性慢性咳嗽、咳嗽-变异性哮喘(cough-variant asthma)、与胸部肿瘤(thoracic tumour)或肺癌相关的咳嗽、病毒性或病毒后咳嗽、上气道咳嗽综合征(UACS)或滴鼻后咳嗽(post nasal drip cough)；或与酸和非酸的胃食管反流病相关的咳嗽、哮喘、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、间质性肺病、特发性肺纤维化(IPF)。

考虑到由PI3K酶介导的病理学应答的数量，持续需要可以用于治疗多种障碍和特别是呼吸性疾病的PI3K酶的抑制剂。因此，本发明涉及新化合物，其是I类PI3K酶的PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kδ和PI3Kγ同种型的抑制剂，由于上述原因，它们经常可以具有治疗上所需的特征。

关于呼吸性疾病的治疗，在现有技术中已知一些化合物作为PI3K抑制剂具有活性。例如WO 2015/193263、WO 2016/038140、WO 2016/166239和WO 2017/134053公开了吲嗪、哒嗪酮、色烯和吡唑衍生物作为磷酸肌醇3-激酶抑制剂。WO 2015/091685是相同申请人的共同未决的申请，其公开了异香豆素(isocumarine)和异色烯化合物衍生物。

即使现有技术的化合物表现出抑制PI3K的活性，本发明的化合物也是有效的PI3K抑制剂，在亚纳摩尔范围内在酶促体外测定中具有活性，且此外在PI3Kδ抑制的THP-1细胞模型中也表现出高活性。

此外，根据本发明的化合物在OVA试验中显示出持久的体内活性(作用持续时间)。

发明内容

本发明涉及充当磷酸肌醇3-激酶的抑制剂的式(I)的化合物

其中R、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆如下面在发明的详细描述中所报道，涉及其制备方法，包含与一种或多种药学上可接受的载体混合的它们(单独的或与一种或多种活性成分组合)的药物组合物。

在一个方面本发明涉及用于用作药物的本发明的化合物。

在一个方面本发明涉及本发明的化合物用于制备药物的用途。

在另一个方面，本发明提供了本发明的化合物用于制备药物的用途，所述药物用于预防和/或治疗以磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)酶活动过度为特征和/或其中需要抑制PI3K活性(且具体地通过δ或者δ和γ酶同种型二者相对于α和β同种型的选择性抑制)的任何疾病。

此外，本发明提供了一种用于预防和/或治疗其中需要PI3K酶抑制的任何疾病、优选呼吸性疾病的方法，所述方法包括给需要这种治疗的患者施用治疗有效量的本发明的化合物。

具体地，本发明的化合物优选地用于预防和/或治疗以炎症性气道阻塞为特征的呼吸道疾病，例如，咳嗽、哮喘、COPD和IPF。

本发明的另一个方面提供了合适的吸入装置，其包含本发明化合物的药物组合物，所述吸入装置可分别选自单次剂量或多次剂量干粉吸入器(DPI)、喷雾器和特别是软雾雾化器。

本发明的另一个方面提供了一种试剂盒，其包含单独的或与一种或多种活性成分组合的本发明化合物的药物组合物以及可以是单次剂量或多次剂量干粉吸入器或喷雾器的装置。

发明详述

定义

本文中使用的术语“药学上可接受的盐”表示式(I)的化合物的衍生物，其中如下适当地修饰母体化合物：用常规地认为药学上可接受的任意碱或酸，将可能存在的任意游离酸性或碱性基团转化成对应的加成盐。

所述盐的合适例子因此可以包括碱性残基诸如氨基基团的无机酸或有机酸加成盐以及酸性残基诸如羧基基团的无机碱或有机碱加成盐。

可以适当地用于制备本发明中的盐的无机碱的阳离子包含碱金属或碱土金属(诸如钾、钠、钙或镁)的离子。

通过使作为碱起作用的主要化合物与无机酸或有机酸反应以形成盐而得到的那些盐包括，例如，盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、樟脑磺酸、乙酸、草酸、马来酸、富马酸、琥珀酸和柠檬酸的盐。

本文中使用的术语“卤素原子”包括氟、氯、溴和碘，优选氯或氟。

术语“(C₁-C_x)烷基”(其中x是大于1的整数)表示直链或支链烷基，其中组成碳原子的数目是在1至x的范围内。特别优选的烷基是甲基、乙基、正丙基、异丙基和叔丁基。

表述“(C₁-C_x)卤代烷基”表示上面定义的“(C₁-C_x)烷基”基团，其中一个或多个氢原子被一个或多个卤素原子替代，所述卤素原子可以彼此相同或不同。

所述(C₁-C_x)卤代烷基的例子因而可以包括卤代的、多卤代的和全卤代的烷基，例如三氟甲基或二氟甲基。

通过类比，术语“(C₁-C_x)羟基烷基”或“(C₁-C_x)氨基烷基”表示上面定义的“(C₁-C_x)烷基”基团，其中一个或多个氢原子分别被一个或多个羟基(OH)或氨基替代。

在本说明书中，除非另外提供，否则氨基烷基的定义包括被一个或多个(NR₁R₂)取代的烷基。

参考如上定义的取代基R₁和R₂，在这里进一步解释，当R₁和R₂与它们所连接的氮原子一起形成5-6元杂环残基时，所述杂环残基中的至少一个另外的环碳原子可以被至少一个杂原子(例如N、NH、S或O)替换，或可以带有至少一个-氧代(＝O)取代基。所述杂环残基可能在所述环中的可用点上(即在碳原子上，或在可用于取代的杂原子上)进一步任选地取代。因而，所述杂环残基的例子是1-吡咯烷基、1-哌啶基、1-哌嗪基、4-吗啉基、哌嗪-4-基-2-酮、4-甲基哌嗪-1-基。

本发明涉及一类作为磷酸肌醇3激酶(PI3K)的抑制剂起作用的化合物。

所述类别的化合物抑制I类PI3K的活性或功能，且更具体地，它们是I类PI3K的ΡΙ3Kα、ΡΙ3Kβ、ΡΙ3Kγ和/或ΡΙ3Kδ同种型的活性或功能的抑制剂衍生物。

本发明涉及式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

每个R当存在时独立地选自：OR₇、卤素、(C₁-C₆)烷基；

R₁和R₂相同或不同，在每次出现时独立地为(C₁-C₆)烷基,

R₃和R₄相同或不同，在每次出现时独立地为H或(C₁-C₆)烷基；

或者

R₁和R₂与它们所连接的氮原子一起形成5或6元杂环残基，其中所述杂环残基中的至少一个另外的环碳原子任选地被至少一个杂原子(例如N、NH、S或O)替换且任选地带有至少一个-氧代(＝O)取代基；所述杂环残基进一步任选地被(C₁-C₆)烷基取代，且R₃和R₄是H；

或者

R₃和R₂一起形成包含N原子的5或6元杂环残基；所述杂环残基进一步任选地被(C₁-C₆)烷基取代，R₁是(C₁-C₆)烷基且R₄是H；

R₅是OR₇；

R₆选自：H、OR₇、(C₁-C₆)烷基、(C₁-C₆)卤代烷基、(C₁-C₆)羟基烷基；

R₇选自：H、(C₁-C₆)烷基；

p是0或在1-4范围内的整数，优选地是0或1，甚至更优选地当p是1时，R是卤素。

本领域技术人员显而易见，式(I)的化合物含有至少一个立体中心(stereogeniccenter)，即在式(Ia)中由用星号(*)标记的碳原子表示，且因此作为光学立体异构体存在。

根据本发明的化合物具有这样的至少一个立体中心，它们可以相应地作为对映异构体存在。在根据本发明的化合物具有两个或更多个立体中心的情况下，它们可以另外作为非对映异构体存在。应当理解，在本发明范围内包括所有这样的单一对映异构体、非对映异构体及其任何比例的混合物(因此也被称作外消旋体或外消旋的化合物)。在确定时基于Cahn-Ingold-Prelog命名法则基于基团的优先性指定作为立体中心的碳(*)的绝对构型(R)或(S)。

化合物的化学名称中的术语“(R)和/或(S)”意图仍然在范围内包括一种或另一种对映异构体或在手性碳(*)上的对映异构体(R)和(S)的任何比例的掺合物。

在化合物的化学名称中没有说明绝对构型的情况下，术语“单一”对映异构体、非对映异构体意在指示，通过分离方法(例如色谱法)或立体控制合成，获得了超过95％的对映异构体富集(e.e.％)，因此即使没有指定绝对构型，也能分离得到单一对映异构体。当使用手性色谱方法时，纯的异构体(对映异构体或非对映异构体)在化合物名称中指示为“第一洗脱的”、“第二洗脱的”对映异构体或非对映异构体，提供色谱峰的方法和保留时间以及对应于个体化的单一对映异构体或非对映异构体的ee％。

在一个优选的实施方案中，本发明涉及如上定义的式(Ia)的化合物，其中所述化合物为一种单一或另一种对映异构体的形式，各自以纯形式通过分离方法(例如色谱法)或立体控制合成获得，即至少95％、优选地超过99％的对映异构体富集。

因而，在一个优选的实施方案中，对于式(I)化合物，参考式(Ia)中用星号(*)标记的碳原子所表示的立体中心，绝对构型是(R)或(S)。

在另一个优选的实施方案中，在本发明中描述的式(I)的化合物作为对映异构体或非对映异构体的混合物存在。

第一组优选的化合物是式(Ib)的化合物或其药学上可接受的盐

其中关于式(I)：

R₁和R₂与它们所连接的氮原子一起形成4-甲基哌嗪-1-基；

R₃和R₄是H；且

R、R₅、R₆和p如上面所定义。

在该组化合物中特别优选的是至少一种选自以下的化合物

另一组优选的化合物是式(Ic)的化合物或其药学上可接受的盐

其中，关于式(I)：

R₃和R₂一起形成包含N原子的5元杂环残基；所述杂环残基进一步被作为甲基的(C₁-C₆)烷基取代；R₁是作为甲基的(C₁-C₆)烷基，且R₄是H；且

R、R₅、R₆和p如上面所定义。

在该组化合物中特别优选的是至少

进一步优选的化合物组是式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R₁和R₂是作为甲基的(C₁-C₆)烷基，

R₃和R₄独立地是H或作为甲基的(C₁-C₆)烷基；且

R、R₅、R₆和p如上面所定义。

在该组化合物中特别优选的是至少一种选自在下表中列出的那些化合物：

R是-H；

R₅是-OH；

R₆是H；

R₁、R₂、R₃和R₄如上面所定义。

根据优选的实施方案中，本发明涉及至少一种选自在下表中列出的那些化合物：

以及任何比例的对映异构体或非对映异构体混合物或其单一对映异构体或单一非对映异构体和药学上可接受的盐和溶剂化物。

根据本发明优选的盐选自

(R)和/或(S)-3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮氢溴酸盐；

(R)和/或(S)-3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮盐酸盐；

(R)和/或(S)-3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮半1,5-萘二磺酸盐；

(R)和/或(S)-3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮半硫酸盐；

(R)和/或(S)-3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮甲苯磺酸盐；

(R)和/或(S)-3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮甲磺酸盐；

(R)和/或(S)-3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮2-萘磺酸盐；

(R)和/或(S)-3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮羟乙基磺酸盐；

(R)和/或(S)-3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮马来酸盐；

(R)和/或(S)-3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮乙磺酸盐；

(R)和/或(S)-3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮半扑酸盐；

(R)和/或(S)-3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮昔萘酸盐(xinafoate)；

(R)和/或(S)-3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮水杨酸盐；

(R)和/或(S)-3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮苯甲酸盐。

根据本发明的其它优选的盐选自

(R)和/或(S)-3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲基氨基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮氢溴酸盐；

(R)和/或(S)-3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲基氨基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮盐酸盐；

(R)和/或(S)-3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲基氨基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮甲磺酸盐；

(R)和/或(S)-3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲基氨基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮2-萘磺酸盐；

(R)和/或(S)-3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲基氨基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮马来酸盐；

(R)和/或(S)-3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲基氨基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮乙磺酸盐。

在一个实施方案中，本发明提供了一种用于治疗呼吸性障碍(respiratorydisorder)的方法，所述方法包括给有此需要的患者施用有效量的根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐。

在一个方面，本发明涉及用于用作药物的式(I)的化合物。

在一个方面，本发明提供了本发明的化合物用于制备药物的用途。

根据下面显示的方案中详细描述的程序，使用普遍已知的方法，通常可以制备式(I)的化合物，其包括上文列出的所有化合物。

方案

方案1

方案1提供了用于制备实施例1和2的合成途径。通过交叉偶联反应，诸如Suzuki交叉偶联，可以将式(VII)的中间体化合物转化成中间体(VIII)。通过在有还原剂(例如三乙酰氧基硼氢化钠)存在下用合适的胺(诸如1-甲基哌嗪或二甲胺)还原胺化，可以将中间体(VIII)(其中R’是甲酰基)转化成对应的胺。通过用合适的卤化剂(例如PBr₃)促进的羟基取代，可以从中间体(III)制备中间体(IV)，其中X是合适的离去基团(Lg)诸如卤化物原子。通过使中间体(IV)与合适的亲核体诸如式(V)的基于氮的亲核体(其中R”是被保护的羟基吡啶例如甲氧基吡啶)反应，可以制备中间体(VI)。化合物(VI)可以在酸性条件下去保护以得到式(I)的化合物，其中R₃、R₄是H，R₆是H，R₅是-OH且R是H。借助于手性分离，可以从式(I)的对应外消旋化合物制备一般结构(Ia)的化合物。

方案2

通过使用与方案1中所述类似的方法，如在方案2中所述可以合成实施例3-7和4a。可以从中间体(VII)和式(IX)(其中R”’是甲酰基或被保护的甲酰基)的适当的合成的硼酸或酯(例如频哪醇酯)制备通式(IIa)的中间体，其中(R)p是至少一种如上定义的合适的取代基。可以如下将中间体(IIa)转化成中间体(X)，其中X代表合适的Lg诸如卤化物原子：与PBr₃反应，并随后与商购可得的3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺反应以产生中间体(XI)。可以如下从中间体(XI)制备中间体(XII)，其中(R)p是如上的合适的取代基且R₄＝R₃＝H：通过众所周知的程序将醛官能团去保护，随后在有还原剂例如三乙酰氧基硼氢化钠存在下用合适的胺例如1-甲基哌嗪或二甲胺还原胺化(方案2、步骤4a、b)。在本发明的另一个实施方案中，根据方案2、步骤5a-c，可以如下从中间体(VII)制备中间体(XII)，其中R₁＝R₂＝R₄＝H且R₃是合适的(C₁-C₆)烷基取代基：与合适的商购可得的硼酸或合成的硼酸酯进行Suzuki偶联，随后通过与PBr₃反应将OH转化成Lg诸如卤化物原子，和最后用商购可得的3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺进行亲核取代。在步骤5以后得到的一些化合物可能含有被保护的氨基，其可以在众所周知的程序下去保护，且通过还原胺化进行甲基化以产生中间体(XII)(方案2、步骤6a、b)。借助于与商购可得的5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-醇的Suzuki偶联，可以将中间体(XII)转化成通式(I)的化合物，其中R₆是H，R₅是OH。借助于手性分离，可以从式(I)的对应外消旋化合物制备一般结构(Ia)的化合物。例如借助于色谱分离从对应的非对映异构体混合物制备对映异构纯的实施例4a。

在一个具体的方面，本发明涉及式(II)的化合物

其中

当R＝H、R₃和R₄＝H、K＝R”＝甲氧基(metoxy)吡啶时；p、R₁和R₂如上面所定义(对应于在方案1中的化合物(VI))。

在另一个方面，本发明涉及式(II)的化合物作为中间体在如上所述的式(I)的化合物的制备中的用途

其中

当R＝H、R₃和R₄＝H、K＝R”＝甲氧基吡啶时；p、R₁和R₂如上面所定义(对应于在方案1中的化合物(VI))

或者

当K＝I时；p、R、R₁、R₂、R₃、R₄如上面所定义(对应于在方案2中的化合物(XII))。

在其中式(II)的化合物经历去保护或偶联的后续步骤、随后最终手性分离步骤的方法中，式(II)的化合物作为中间体在式(I)的化合物的制备中的用途是特别有用的。

本发明的化合物是激酶活性、特别是PI3-激酶活性的抑制剂。一般而言，为PI3K抑制剂的化合物可以用于治疗许多障碍。

在一个实施方案中，通过本发明的化合物可以治疗的障碍是选自以下的呼吸性疾病：咳嗽诸如特发性慢性咳嗽、咳嗽-变异性哮喘、与胸部肿瘤或肺癌相关的咳嗽、病毒性或病毒后咳嗽、上气道咳嗽综合征(UACS)、滴鼻后咳嗽、与胃食管反流病(酸和非酸反流)相关的咳嗽、哮喘、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)和间质性肺病(诸如特发性肺纤维化(IPF))。

在另一个实施方案中，所述障碍选自哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)。

在另一个实施方案中，所述障碍选自特发性肺纤维化(IPF)、咳嗽和慢性咳嗽。

本发明的治疗方法包括给有此需要的患者施用有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。本文所用的“有效量”在涉及式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或其它药学活性剂时是指这样的化合物的量：其足以治疗患者的病症、但是足够低以避免严重的副作用，尽管如此它可以由技术人员常规地确定。式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可以一次性地或根据定量施用方案施用，其中在不同的时间间隔施用多次剂量，持续指定的时间段。典型日剂量可以根据所选择的具体施用途径而变化。

本发明还提供了与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂(例如在Remington’s Pharmaceutical Sciences Handbook,XVII Ed.,Mack Pub.,N.Y.,U.S.A.中描述的那些)混合的式(I)化合物的药物组合物。

可以根据患者需要施用本发明的化合物和它们的药物组合物，例如，口服、经鼻、肠胃外(皮下、静脉内、肌内、胸骨内和输注)、吸入、直肠、阴道、外用(topically)、局部(locally)、透皮和眼给药。

可以将各种固体口服剂型用于施用本发明的化合物，包括如下固体剂型：片剂、软胶囊(gelcaps)、胶囊剂、胶囊形片剂(caplet)、颗粒剂、锭剂和整装散剂(bulk powder)。可以将本发明的化合物单独施用，或与各种药学上可接受的载体、稀释剂(诸如蔗糖、甘露醇、乳糖、淀粉)和已知的赋形剂组合施用，所述赋形剂包括助悬剂、增溶剂、缓冲剂、粘合剂、崩解剂、防腐剂、着色剂、调味剂、润滑剂等。定时释放胶囊剂、片剂和凝胶剂在本发明的化合物的给药中也是有利的。

还可将各种液体口服剂型用于施用本发明的化合物，包括水溶液剂和非水溶液剂、乳剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。这样的剂型还可以含有合适的已知的惰性稀释剂诸如水和合适的已知的赋形剂诸如防腐剂、润湿剂、甜味剂、调味剂、以及用于乳化和/或悬浮本发明的化合物的试剂。例如，可以以等渗无菌溶液的形式静脉内注射本发明的化合物。其它制剂也是可能的。

对于治疗呼吸道疾病，根据本发明的化合物优选地通过吸入来施用。

可吸入的制备物(preparation)包括可吸入的散剂、含有推进剂的定量气雾剂或不含推进剂的可吸入制剂，并且可以通过合适的吸入装置施用，所述吸入装置可以各自选自干粉吸入器、增压定量吸入器或喷雾器。

对于作为干粉给药，可以使用根据现有技术已知的单或多剂量吸入器。在该情况下，该粉末可以填充在明胶、塑料或其它胶囊、药筒(cartridges)或泡罩包中或在贮库(reservoir)中。可以将稀释剂或载体(例如乳糖)或适于改善可呼吸分数(respirablefraction)的任意其它添加剂加入到粉末化的本发明的化合物中。

包含推进气体(如氢氟烷烃)的吸入气雾剂可以包含溶液或分散形式的本发明的化合物。推进剂驱动的制剂还可以包含其它成分，例如共溶剂、稳定剂或任选的其它赋形剂。

包含本发明化合物的不含推进剂的可吸入制剂可以是在水性(aqueous)、醇性或水醇性(hydroalcoholic)介质中的溶液或混悬剂形式，且它们可通过从现有技术已知的喷射或超声雾化器或通过软薄雾雾化器例如

(Boehringer IngelheimPharmaceuticals的注册商标)来递送(Wachtel,H.,Kattenbeck,S.,Dunne,S.等人.PulmTher(2017)3:19.https://doi.org/10.1007/s41030-017-0040-8)。

根据一个特别优选的实施方案，本发明的组合物是干粉制剂的形式，其中存在的载体包含一种或多种药学上可接受的赋形剂的细颗粒和/或粗颗粒，并且进一步任选地存在具有润滑或抗粘着性能的添加剂。

优选地，载体粗颗粒具有被包含在30至500微米之间的质量直径。

载体通常为选自葡萄糖、阿拉伯糖、麦芽糖、蔗糖、右旋糖和乳糖的结晶糖，或选自甘露醇、麦芽糖醇、拉克替醇和山梨醇的多元醇；且添加剂材料选自氨基酸、水溶性表面活性剂、润滑剂和助流剂。

优选地，载体颗粒是α-乳糖或β-乳糖的颗粒，甚至更优选地是α-乳糖一水合物的颗粒。

本发明的另一个优选的实施方案是一种干粉吸入器装置，其填充有如上定义的干粉制剂形式的药物制剂。

进一步优选的实施方案是包含如上定义的药物制剂和干粉吸入器装置的试剂盒。

根据已知方法，例如在WO0053157A1和WO 96/23485中描述的那些，可以制备根据本发明的干粉制剂。

根据一个替代的优选实施方案，本发明的组合物是无推进剂的药物制剂形式，其用于通过喷雾向肺施用，其中，所述化合物或其盐溶解或悬浮在含水媒介物中，所述含水媒介物(aqueous vehicle)任选地包含另外的药学上可接受的赋形剂。

因而，进一步优选的实施方案是包含药物制剂和喷雾器的试剂盒，所述药物制剂是如上所述的本发明化合物的溶液或混悬剂。

本发明的化合物可以作为唯一的活性剂或与其它药物活性成分组合施用，所述其它药物活性成分包括目前用于治疗呼吸性障碍并且技术人员已知的那些。

本发明的化合物的剂量取决于多种因素，包括要治疗的具体疾病、症状的严重性、给药途径、剂量间隔频率、使用的具体化合物、化合物的效力、毒理学特性和药代动力学特性。

下列实施例举例说明本发明，而不限制其范围。

中间体和实施例的制备

用Structure To Name Enterprise 10.0 Cambridge Software生成化合物的化学名称。

缩写

Et₂O＝乙醚；Et₃N＝三乙胺；DCE＝1,2-二氯乙烷；TEA＝三乙胺；DCC＝N,N'-二环己基碳二亚胺；HOBt＝羟基苯并三唑；HATU＝(二甲基氨基)-N,N-二甲基(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)甲亚胺鎓(methaniminium)六氟磷酸盐；HBTU＝N,N,N′,N′-四甲基-O-(1H-苯并三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸盐，O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐；EDC＝1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐；DMAP＝4-二甲基氨基吡啶；DMF＝二甲基甲酰胺；EtOAc＝乙酸乙酯；RT＝室温；THF＝四氢呋喃；DCM＝二氯甲烷；MeOH＝甲醇；EtOH＝乙醇；LHMDS＝双(三甲基硅烷基)氨基锂；m-CPBA＝间氯过氧苯甲酸；TFA＝三氟乙酸；LC-MS＝液相色谱法/质谱法；HPLC＝高压液相色谱法；MPLC＝中压液相色谱法；SFC＝超临界流体色谱法；dppf＝1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁；X-Phos-Pd-G2＝氯(2-二环己基膦基-2′,4′,6′-三异丙基-1,1′-联苯)[2-(2′-氨基-1,1′-联苯)]钯(II)；S-Phos-Pd-G2＝氯(2-二环己基膦基-2′,6′-二甲氧基-1,1′-联苯)[2-(2′-氨基-1,1′-联苯)]钯(II)；DIEA或DIPEA＝N,N-二异丙基乙胺；MeCN＝乙腈；MTBE＝叔丁基甲基醚；Ac2O＝乙酸酐；AcCl＝乙酰氯；HBTU＝N,N,N′,N′-四甲基-O-(1H-苯并三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸盐,O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐；TBDMSCl＝叔丁基(氯)二甲基硅烷；DMSO＝二甲基亚砜；BoC2O＝二碳酸二叔丁酯；UPLC＝超高效液相色谱法。

一般实验细节

在运行于400MHZ(质子频率)的Varian MR-400波谱仪上进行¹H-NMR谱，所述Varian MR-400波谱仪配有：用于反向检测的自屏蔽Z-梯度线圈5mm 1H/nX宽带探头，氘数字锁定通道单元、具有发射机偏移频移的正交数字检测单元，或在AgilentVNMRS-500上，或在Bruker Avance 400波谱仪上。将化学位移报告为相对于作为内部标准品的三甲基硅烷(TMS)的以ppm为单位的δ值。偶合常数(J值)以赫兹(Hz)为单位给出，且使用以下缩写报告多重性(s＝单峰，d＝双峰，t＝三重峰，q＝四重峰，m＝多重峰，br.s＝宽峰，nd＝未确定)。

LC/UV/MS分析方法

估计LC/MS保留时间受+0.5min的实验误差的影响。可以在以下条件下记录LCMS：二极管阵列DAD色谱迹线，可以在与以正和/或负电子喷射ES电离模式运行的MicromassZQ^TM或Waters SQD单个四极质谱仪偶联的UPLC/PDA/MS Acquity^TM系统上和/或与以正和/或负ES电离模式运行的ZQ^TM单个四极质谱仪偶联的以分析模式使用的Fractionlynx系统上获取质量色谱图和质谱图。在低pH条件下或在高pH条件下运行使用的质量控制方法。

方法1.Aquity UPLC-QDa质谱仪，具有维持在40℃的C18-反相柱(50×2.1mmAcquity CSH with 1.7μm颗粒尺寸)，洗脱使用A:95/5水/乙腈+0.05％甲酸；B:95/5乙腈/水+0.05％甲酸。

梯度：

检测-MS,UV PDA

MS电离方法-电喷射(正/负离子)。

方法2,低pH条件.柱:Acquity UPLC BEH C18,1.7μm,2.1x50mm，柱温度为40℃；流动相溶剂A为milliQ水+0.1％HCOOH，流动相溶剂B为MeCN+0.1％HCOOH。流速为1mL/min。梯度表位t＝0min 97％A-3％B,t＝1.5min 0.1％A-99.9％B,t＝1.9min0.1％0.1％A-99.9％B和t＝2min 97％A-3％B。紫外检测范围为210-350nm和ES+/ES-范围为100＝1000amu。

方法3,低pH条件.柱:Acquity CSH C18,1.7μm,2.1x50mm，柱温度为40℃；流动相溶剂A为milliQ水+0.1％HCOOH，流动相溶剂B为MeCN+0.1％HCOOH。流速为1mL/min。梯度表位t＝0min 97％A-3％B,t＝1.5min 0.1％A-99.9％B,t＝1.9min 0.1％0.1％A-99.9％B和t＝2min 97％A-3％B。紫外检测范围为210-350nm和ES+/ES-范围为100＝1000amu。

方法4.Aquity UPLC-QDa质谱仪，具有维持在40℃的C18-反相柱(50×2.1mmAcquity CSH with 1.7μm颗粒尺寸)，洗脱使用A:95/5水/乙腈+0.05％甲酸；B:95/5乙腈/水+0.05％甲酸。

梯度：

检测-MS,UV PDA

MS电离方法-电喷射(正/负离子)。

方法5，高pH条件.柱:Acquity UPLC BEH C18,1.7μm,2.1x50mm，柱温度为40℃；流动相溶剂A为10mM NH₄HCO₃水溶液，用氨调至pH＝10，流动相溶剂B为MeCN。流速为1mL/min。梯度表位t＝0min 97％A-3％B,t＝1.5min 0.1％A-99.9％B,t＝1.9min 0.1％0.1％A-99.9％B和t＝2min 97％A-3％B。紫外检测范围为210-350nm和ES+/ES-范围为100＝1000amu。

手性化合物的手性分析

通过在配备6-位切换阀、DAD和CD检测器的HPLC Agilent 1100上的手性HPLC分析，确定手性化合物的对映异构体过量。使用下述方法：

方法A1,柱:Chiralpak IC(25x0.46cm),5μm；流动相:正己烷/(乙醇/二氯甲烷90/10％(v/v)+0.1％异丙胺)80/10％v/v；流速:1.0mL/min；DAD:220nm。

方法A2,柱:Whelk 0-1(R,R)(25x0.46cm),10μm；流动相:正己烷/(2-丙醇/甲醇1/1+0.1％异丙胺)30/70％v/v；流速:1.0mL/min；DAD:220nm。

方法A3,柱:Chiralpak AD-H(25x0.46cm),5μm；流动相:正己烷/(乙醇+0.1％异丙胺)75/25％v/v；流速:1.0mL/min；DAD:220nm。

方法A4,柱:Chiralpak AD-H(25x0.46cm),5μm；流动相:(2-丙醇+0.1％异丙胺)32％；流速:2.5mL/min；DAD:220nm。

使用预填充的硅胶或反相柱(cartridge)(由Biotage提供)，使用Isolera MPLC系统(由Biotage制造)进行快速色谱法。已经从立体化学纯的起始原料(例如95％ee)制备以下实施例中描述的许多化合物。在指出的情况下，实施例中的化合物的立体化学基于下述假设指定：贯穿任意随后的反应条件，维持在起始原料的拆分立体中心处的绝对构型。在下面的操作中，在每种起始原料后面，有时提供了对化合物编号的提及。这仅仅为了辅助熟练的化学家而提供。所述起始原料不一定已经从提及的批次制备。当提及使用“类似的”或“相似的”操作时，本领域技术人员会明白，这样的操作可能包含微小变化，例如反应温度、试剂/溶剂量、反应时间、后处理条件或色谱纯化条件。

中间体的制备：

中间体A1:3-(3-(1-羟基乙基)-1-氧代-1H-异色烯-4-基)苯甲醛

在500mL 3-颈圆底烧瓶中放入(3-甲酰基苯基)硼酸(1g,6.67mmol)、4-溴-3-(1-羟基乙基)-1H-异色烯-1-酮(在WO 2015091685中的中间体A2)(2.15g,8.00mmol)和磷酸钾水合物(4.61g,20.01mmol)，然后加入THF(50mL)和水(50mL)。用氩气鼓泡10min，然后加入XPhos-Pd-G2(0.367g,0.467mmol)。继续鼓泡另外10min，并然后将棕色浑浊混合物在氩气氛下搅拌过夜。将混合物倒入300mL水中，然后用200mL EtOAc萃取2次。将有机相经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗制物通过色谱法(SNAP 340g)纯化，用己烷\EtOAc混合物洗脱，剩下作为树胶状(gummy)固体的3-(3-(1-羟基乙基)-1-氧代-1H-异色烯-4-基)苯甲醛(0.110g,0.374mmol,6％收率)。

UPLC-MS:1.45min,295.1.06[M+H]+,方法4。

中间体A2:4-[4-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-基)苯基]-3-(1-羟基乙基)-1H-异色烯-1-酮

步骤1.2-氯-5-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲醛(中间体A2.1)

将5-溴-2-氯苯甲醛(1.50g,6.83mmol)、双(频哪醇合)二硼(bis(pinacolato)diboron)(2.08g,8.20mmol)、乙酸钾(1.34g,13.66mmol)和Pd(dppf)Cl₂(0.150g,0.205mmol)在无水1,4-二

烷(22.5mL)中的混合物在N₂下在100℃加热过夜。冷却至室温以后，将反应混合物用AcOEt稀释，穿过硅藻土垫过滤，并在真空下除去溶剂。残余物2-氯-5-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲醛(6.83mmol理论值)不经进一步纯化，而是原样用在后续步骤中。

UPLC-MS:0.86min,267.06[M+H]+,方法2。

步骤2.2-[4-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(中间体A2.2)

将2-氯-5-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲醛(中间体A2.1)(粗制物，6.83mmol理论值)和频哪醇(3.23g,27.32mmol)的混合物溶解在25.0mL甲苯中。然后加入对甲苯磺酸一水合物(0.065g,0.342mmol)，并将混合物在90℃加热5h。然后加入对甲苯磺酸一水合物(0.100g,0.526mmol)，并将混合物在90℃加热过夜。将混合物在真空中浓缩，并将残余物溶解在20mL异丙醇中。然后，缓慢地加入30mL水。加入后，固体沉淀，并将它通过过滤进行收集以得到作为棕色固体残余物的2-[4-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(2.24g,6.11mmol,89％)。

UPLC-MS:1.53min,367.11[M+H]+,方法2。

步骤3.4-[4-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-基)苯基]-3-(1-羟基乙基)-1H-异色烯-1-酮

使用4-溴-3-(1-羟基乙基)-1H-异色烯-1-酮(在WO 2015091685中的中间体A2)(1g,3.72mmol)、2-[4-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(中间体A2.2)(1.24g,3.38mmol)、K₃PO₄(2.153g,10.14mmol)和XPhos-Pd-G2(0.133g,0.169mmol)，以与中间体A1类似的方式制备标题化合物。后处理以后，将残余物通过在100g硅胶Biotage SNAP柱上的快速色谱法(洗脱液：5-50％的在环己烷中的AcOEt梯度)纯化。蒸发适当级分，得到作为灰白色固体的4-[4-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-基)苯基]-3-(1-羟基乙基)-1H-异色烯-1-酮(0.458g,1.067mmol,32％收率)。

UPLC-MS:1.19min,429.3[M+H]+,方法3。

中间体A3:(2R)-2-{3-[3-(1-羟基乙基)-1-氧代-1H-异色烯-4-基]苯基}吡咯烷-1-甲酸酯

步骤1.(2R)-2-(3-溴苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(中间体A3.1)

在0℃和在氮气氛下向(2S)-2-(3-溴苯基)吡咯烷盐酸盐(1.00g,3.81mmoI)在DCM(12mL)中的搅拌溶液中加入TEA(0.58mL,4.19mmol)，随后逐份加入Boc₂O(1.08g,4.95mmol)在DCM(4mL)中的溶液。然后移去冰浴，并将得到的反应混合物在室温搅拌过夜，将混合物用DCM稀释，用饱和NaHCO₃水溶液洗涤，经Na₂SO₄干燥并在减压下浓缩。将粗制物质通过硅胶上的快速色谱法(Snap 25，用100/0-90/10的Cy/EA洗脱)纯化，得到(2R)-2-(3-溴苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.15g,3.53mmol,92％)。

UPLC-MS:1.32min,327.1[M+H]+,方法3。

步骤2.(2R)-2-[3-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(中间体A3.2)

将(2R)-2-(3-溴苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(中间体A3.1)(1.15g,3.53mmol)、双(频哪醇合)二硼(1.34g,5.28mmol)、乙酸钾(0.70g,7.10mmol)和Pd(dppf)Cl₂(0.080g,0.11mmol)在无水1,4-二

烷(13mL)中的混合物在盖帽瓶中在100℃摇动6h。加入另外的双(频哪醇合)二硼(0.32g,1.26mmol)、AcOK(0.21g,2.14mmol)和Pd(dppf)Cl₂(0.024g,0.033mmol)，并将混合物在100℃摇动另外5h。将反应混合物用EtOAc稀释，过滤并在减压下除去溶剂。将粗制物质通过硅胶上的快速色谱法(Snap 50，用100/0-90/10的Cy/EA洗脱)纯化，得到作为带白色的蜡状固体的(2R)-2-[3-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.23g,3.29mmol,93％)。

UPLC-MS:1.41min,374.3[M+H]+,方法3。

步骤3.4(2R)-2-{3-[3-(1-羟基乙基)-1-氧代-1H-异色烯-4-基]苯基}吡咯烷-1-甲酸叔丁酯

使用4-溴-3-(1-羟基乙基)-1H-异色烯-1-酮(在WO 2015091685中的中间体A2)(1.33g,4.94mmol)、(2R)-2-[3-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]吡咯烷-1-甲酸酯(中间体A3.2)(1.23g,3.29mmol)、K₃PO₄(2.10g,9.87mmol)和X-Phos-Pd(巴豆基)Cl(0.11g,0.16mmol)，以与中间体A1类似的方式制备标题化合物。后处理以后，将残余物通过在55g硅胶-NH Biotage SNAP柱上的快速色谱法(洗脱液：0-35％的在环己烷中的AcOEt梯度)纯化。蒸发适当级分，得到作为深色油的4(2R)-2-{3-[3-(1-羟基乙基)-1-氧代-1H-异色烯-4-基]苯基}吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.89g,2.04mmol,62％)。

UPLC-MS:1.19min,436.3[M+H]+,方法3。

中间体A4:4-[4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-基)苯基]-3-(1-羟基乙基)-1H-异色烯-1-酮

步骤1.2-[4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(中间体A4.1)

将4-氟-3-甲酰基苯基硼酸(1.5g,8.93mmol)和频哪醇(4.22g,35.73mmol)的混合物溶解在30mL甲苯中。然后加入对甲苯磺酸一水合物(0.085g,0.45mmol)，并将混合物在90℃加热4h。将混合物冷却至室温。将形成的固体滤出，并将母液在真空中浓缩以剩下油状残余物，其在静置后结晶。将该固体悬浮于30mL ⁱPrOH中并在70℃加热以帮助溶解。冷却后，逐滴加入12mL水，以使化合物结晶。加入以后，将稠浆料在布氏漏斗上过滤。将滤饼用水洗涤和在减压下干燥。从母液中沉淀第二固体，并将它通过在布氏漏斗上过滤进行回收，并将滤饼用水洗涤。将两份固体一起在减压下干燥以得到作为灰白色固体的2-[4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(3.07g,8.76mmol,98％收率)。

UPLC-MS:1.44min,351.2[M+H]+,方法3。

步骤2.4-[4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-基)苯基]-3-(1-羟基乙基)-1H-异色烯-1-酮

使用4-溴-3-(1-羟基乙基)-1H-异色烯-1-酮(在WO 2015091685中的中间体A2)(2.83g,10.51mmol)、2-[4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(中间体A4.1)(3.07g,8.76mmol)、K₃PO₄(5.58g,26.28mmol)和XPhos-Pd-G2(0.345g,0.438mmol)，以与中间体A1类似的方式制备标题化合物。后处理以后，将残余物通过在100g硅胶Biotage SNAP柱上的快速色谱法(洗脱液：0-35％的在环己烷中的AcOEt梯度)纯化。蒸发适当级分，得到作为浅黄色固体的4-[4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-基)苯基]-3-(1-羟基乙基)-1H-异色烯-1-酮(1.79g,4.34mmol,50％收率)。

UPLC-MS:1.23min,413.2[M+H]+,方法3。

中间体A5:4-(3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-基)苯基)-3-(1-羟基乙基)-1H-异色烯-1-酮

步骤1.2-[3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(中间体A5.1)

将3-氟-5-甲酰基苯基硼酸(1g,5.95mmol)和频哪醇76-09-5(2.8g,23.8mmol)的混合物溶解在甲苯(20mL)中。然后加入对甲苯磺酸一水合物(0.057g,0.3mmol)，并将混合物在90℃加热4h。将混合物冷却至室温。将它在真空下浓缩以得到作为浅黄色油的2-[3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(粗制物质)。原样用于下一步。

UPLC-MS:1.48min,351.3[M+H]+,方法3。

步骤2.4-(3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-基)苯基)-3-(1-羟基乙基)-1H-异色烯-1-酮

使用4-溴-3-(1-羟基乙基)-1H-异色烯-1-酮(在WO 2015091685中的中间体A2)(1.9g,7.14mmol)、2-[3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-基)苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(中间体A5.1)(5.95理论mmol)、K₃PO₄(3.8g,17.85mmol)和XPhos-Pd-G2(0.236g,0.3mmol)，以与中间体A1类似的方式制备标题化合物。后处理以后，将残余物通过110g硅胶-NH SNAP柱上的快速色谱法(从Cy至30％EtOAc的洗脱液)纯化。将它通过25g硅胶SNAP柱(从Cy至30％EtOAc的洗脱液)再次纯化以得到作为白色泡沫的4-(3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-基)苯基)-3-(1-羟基乙基)-1H-异色烯-1-酮(0.250g,0.61mmol,9％)。

UPLC-MS:1.22min,413.3[M+H]+,方法3。

中间体A6:4-(3-(1-(二甲基氨基)乙基)苯基)-3-(1-羟基乙基)-1H-异色烯-1-酮

使用4-溴-3-(1-羟基乙基)-1H-异色烯-1-酮(在WO 2015091685中的中间体A2)(1.62g,6.03mmol)、(3-(1-(二甲基氨基)乙基)苯基)硼酸(970mg,5.02mmol)、K₃PO₄(3.47g,15.1mmol)和XPhos-Pd-G2(0.277g,0.35mmol)，以与中间体A1类似的方式制备标题化合物。后处理以后，将残余物用H₂O\MeCN\HCOOH 95:5:0.1％和MeCN\H₂O\HCOOH 95:5:0.1％通过色谱法纯化以得到4-(3-(1-(二甲基氨基)乙基)苯基)-3-(1-羟基乙基)-1H-异色烯-1-酮(0.356g,粗制物质)。

UPLC-MS:0.45min,338.2[M+H]+,方法1。

中间体B1:3-(1-羟基乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮

在250mL圆底烧瓶中，将3-(3-(1-羟基乙基)-1-氧代-1H-异色烯-4-基)苯甲醛(中间体A1)(0.500g,1.699mmol)溶解在DCM(20mL)中，加入1-甲基哌嗪(0.582mL,5.10mmol)，随后加入乙酸(0.292mL,5.10mmol)。然后逐份加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.800g,8.49mmol)。将混合物倒入DCM和饱和NaHCO₃水溶液的混合物(100mL/100mL)中，并观察到泡腾。将有机相在真空下浓缩，并将得到的粗制物质通过RP色谱法(Biotage Isolera,60gC18柱，在10个柱体积中0-50％的B在A中的溶液的梯度洗脱；A:95:5水/乙腈+0.1％HCOOH,B:5:95水/乙腈+0.1％HCOOH；流速30ml/min)纯化，以得到3-(1-羟基乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮(0.482g,1.274mmol,75％收率)。

UPLC-MS:0.73min,379.1[M+H]+,方法1。

按照与化合物B1类似的程序，从下面报告的合适试剂开始，可以制备在下表中出现的中间体B2。

中间体C1:3-(1-溴乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮

将3-(1-羟基乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮(中间体B1)(0.482g,1.274mmol)溶解在无水DCM(20mL)中，然后缓慢地加入1M的三溴膦在DCM中的溶液(2.55mL,2.55mmol)。将混合物在室温搅拌。将反应通过加入60mL饱和NaHCO₃水溶液进行淬灭(气体形成)，并用60mL DCM萃取，在真空下浓缩有机相，以得到作为红色油的3-(1-溴乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮(粗制物质)。

UPLC-MS:1.07min,441.0[M]+和442.9[M+2]+,方法4。

按照与化合物C1类似的程序，从下面报告的合适中间体(Int.)开始，可以制备在下表中出现的中间体C2-C7。

中间体D1:3-(1-(4-氨基-3-(5-甲氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮

在250mL圆底烧瓶中，将3-(5-甲氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.463g,1.912mmol)和碳酸钾(0.528g,3.82mmol)悬浮于无水DMF(15mL)中，并将混合物在60℃加热15min，然后加入溶解在5mL无水DMF中的3-(1-溴乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮(中间体C1)。2小时以后，加入0.200g 3-(5-甲氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺和额外量的K₂CO₃，并继续在40℃加热3h。将反应用饱和NaHCO₃水溶液淬灭，并用40mL DCM萃取，然后浓缩以剩下棕色油，将其通过RP色谱法(Biotage Isolera,60g C18柱,在10个柱体积中0-50％的B在A中的溶液的梯度洗脱；A:95:5水/乙腈+0.1％HCOOH,B:5:95水/乙腈+0.1％HCOOH)纯化，剩下作为黄色油的3-(1-(4-氨基-3-(5-甲氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮(0.342g,0.567mmol,45％收率)。

UPLC-MS:0.60min,603.2[M+H]+,方法1。

按照与化合物D1类似的程序，从下面报告的合适中间体(Int.)开始，可以制备在下表中出现的中间体D2。

中间体E1a:3-(1-{4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基}乙基)-4-[4-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-基)苯基]-1H-异色烯-1-酮

将3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.311g,1.19mmol)和K₂CO₃(0.47g,3.4mmol)悬浮于DMF(10mL)中并将混合物在60℃搅拌30min。然后缓慢地加入溶解在DMF(5mL)中的3-(1-溴乙基)-4-[4-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-基)苯基]-1H-异色烯-1-酮(中间体C3)(0.557g,1.13mmol)，并将混合物在60℃维持90min。将反应物冷却至室温，并然后加入AcOEt和水。分离各相，并将水层用EtOAc萃取。将合并的有机层用水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥并在减压下除去溶剂。将残余物通过100g Biotage SNAP KP-Sil柱上的快速色谱法纯化，用50-100％的在环己烷中的AcOEt梯度洗脱，以得到标题化合物3-(1-{4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基}乙基)-4-[4-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-基)苯基]-1H-异色烯-1-酮(0.379g,0.564mmol,50％收率)。

UPLC-MS:1.3min,671.2[M+H]+,方法3。

按照与化合物E1a类似的程序，从下面报告的合适中间体(Int.)开始，可以制备在下表中出现的中间体E2a-E5a。

中间体E1b:5-[3-(1-{4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基}乙基)-1-氧代-1H-异色烯-4-基]-2-氯苯甲醛

将3-(1-{4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基}乙基)-4-[4-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环戊烷-2-基)苯基]-1H-异色烯-1-酮(0.379g,0.565mmol)溶解在CH₃CN(5mL)中，并然后加入1N HCl_水溶液(5mL)。将得到的悬浮液在室温搅拌过夜。将悬浮液中的固体通过在布氏漏斗上过滤进行回收。将得到的滤饼用乙醚洗涤几次直到pH结果为中性，并将它在高真空下干燥。得到作为白色固体的化合物5-[3-(1-{4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基}乙基)-1-氧代-1H-异色烯-4-基]-2-氯苯甲醛(0.32g,0.56mmol,99％收率)并不经进一步纯化地用于下一步。

UPLC-MS:1.06min,572.1[M+H]+,方法3。

按照与化合物E1b类似的程序，从下面报告的合适中间体(Int.)开始，可以制备在下表中出现的中间体E3b-E4b。

中间体E1c:3-(1-{4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基}乙基)-4-{4-氯-3-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-1H-异色烯-1-酮

向5-[3-(1-{4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基}乙基)-1-氧代-1H-异色烯-4-基]-2-氯苯甲醛(中间体F1)(0.150g,0.26mmol)在DCM/二

烷/CH₃CN(10mL/2mL/2mL)中的搅拌悬浮液中，加入2M的二甲胺在THF中的溶液(0.212mL,0.39mmol)。将该悬浮液在室温搅拌30min。然后加入Na(OAc)₃BH(0.110g,0.52mmol)并将混合物在室温搅拌过夜。加入另外的1.5当量的2M的二甲胺在THF中的溶液(0.212mL,0.39mmol)，随后加入2当量的Na(OAc)₃BH(0.110g,0.52mmol)。将混合物在室温反应2h。将混合物用饱和NaHCO₃水溶液淬灭，将产物用DCM(3x)萃取，并用水(1x)洗涤。使合并的有机层穿过分相器并在真空下除去溶剂。将残余物通过在25g Biotage硅胶柱上的柱色谱法纯化，使用0-10％的MeOH在DCM中的梯度作为洗脱液。得到作为白色固体的期望化合物3-(1-{4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基}乙基)-4-{4-氯-3-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-1H-异色烯-1-酮(0.105.2g,0.175mmol,67％收率)。

UPLC-MS:0.48-0.53min,568.3[M+H]+,方法3。

按照与化合物E1c类似的程序，从下面报告的合适试剂开始，可以制备在下表中出现的中间体E3c-E4c。

中间体E7:3-(1-{4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基}乙基)-4-{3-[(2R)-吡咯烷-2-基]苯基}-1H-异色烯-1-酮盐酸盐

将(2R)-2-{3-[3-(1-{4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基}乙基)-1-氧代-1H-异色烯-4-基]苯基}吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(中间体E2a)(0.224g,0.330mmol)溶解在1.25M的HCl在MeOH中的溶液(5mL)中，并将混合物在38℃摇动4h。将溶剂在减压下除去以得到作为白色固体的3-(1-{4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基}乙基)-4-{3-[(2R)-吡咯烷-2-基]苯基}-1H-异色烯-1-酮盐酸盐(0.212g,粗制物)。将该物质不经进一步纯化地用于下一步。

UPLC-MS:1.03min,579.2[M+H]+,方法5。

中间体E8:3-(1-{4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基}乙基)-4-{3-[(2R)-1-甲基吡咯烷-2-基]苯基}-1H-异色烯-1-酮

向3-(1-{4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基}乙基)-4-{3-[(2R)-吡咯烷-2-基]苯基}-1H-异色烯-1-酮盐酸盐(中间体E6)(0.212g,粗制物)在DCM(4mL)中的搅拌悬浮液中，加入37重量％甲醛水溶液(61μL,0.825mmol)，随后加入DIPEA(63μL,0.363mmol)和乙酸(1滴)。将混合物在室温搅拌30分钟。然后加入Na(OAc)₃BH(0.084g,0.396mmol)并将混合物在室温搅拌过夜。将混合物用饱和NaHCO₃水溶液淬灭，并用DCM萃取。将有机相穿过疏水分相器过滤，并将溶剂在减压下除去。将粗制物通过快速色谱法(Biotage SP1,25gKP-Sil-柱，从100:0至90:10的DCM/MeOH作为洗脱液)纯化。蒸发适当级分，得到作为灰白色固体的3-(1-{4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基}乙基)-4-{3-[(2R)-1-甲基吡咯烷-2-基]苯基}-1H-异色烯-1-酮(0.142g,0.24mmol,73％收率)。

UPLC-MS:1.16min,593.3[M+H]+,方法5。

化合物的制备

对比实施例1:3-(1-(4-氨基-3-(3-氟-5-羟基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮,第二洗脱的对映异构体。

将外消旋体3-(1-(4-氨基-3-(3-氟-5-羟基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮(在WO 2015091685中的实施例142)(0.110g,0.16mmol)溶解在MeOH/DCM 1/1(10mL)中并通过手性制备型色谱法进行手性拆分。条件：柱:Chiralpak IC(25x2.0 cm),5μm；流动相:正己烷/(乙醇/二氯甲烷9/1+0.1％异丙胺)82/18％v/v；流速18mL/min；DAD检测:220nm；环(loop)：500μl；注射:6.5mg/注射。将含有第二洗脱的对映异构体的级分蒸发至干燥以得到标题3-(1-(4-氨基-3-(3-氟-5-羟基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮(0.031g,0.056mmol)。

手性HPLC(方法A1),

Rt 13.8min(第二洗脱的对映异构体),e.e.>99％。

UPLC-MS:0.63-0.66,606.4[M+H]+,方法3。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.15-10.24(m,1H),8.19-8.28(m,1H),8.07(s,1H),7.73-7.80(m,1H),7.58-7.67(m,1H),7.25-7.50(m,3H),6.85-7.00(m,3H),6.78-6.84(m,1H),6.63-6.70(m,1H),5.66-5.81(m,1H),3.23-3.60(m,2H),1.99-2.48(m,11H),1.74-1.89(m,3H)。

第一洗脱的对映异构体的分析数据

手性HPLC(方法A1),

Rt 12.0min(第一洗脱的对映异构体),e.e.>99％,

纯的对映异构体的UPLC和¹H NMR分析在所有方面都是可重叠的。

实施例1:3-{1-[4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}-1H-异色烯-1-酮盐酸盐

在配备磁力搅拌器的500mL圆底烧瓶中，将3-(1-(4-氨基-3-(5-甲氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮(中间体D1)(0.342g,0.567mmol)悬浮于DCM(10mL)中，然后加入1M的BBr₃在DCM中的溶液(5mL,5.00mmol)。将混合物搅拌24h，然后加入MeOH(20mL)和小量2M HCl。然后将溶液在真空下浓缩并通过RP色谱法(Biotage Isolera,60g C18柱,在10个柱体积中0-50％的B在A中的溶液的梯度洗脱；A:95:5水/乙腈+0.1％HCOOH,B:5:95水/乙腈+0.1％HCOOH，流速20ml/min)纯化，以得到期望产物3-{1-[4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}-1H-异色烯-1-酮盐酸盐(0.093g,0.149mmol,26％收率)。

UPLC-MS:0.52min,589.0[M+H]+,方法1。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.39(br.s.,1H),9.87-10.49(m,1H),8.05-8.32(m,5H),7.72-7.81(m,1H),7.59-7.67(m,1H),6.67-7.53(m,8H),5.66-5.84(m,1H),3.34-3.63(m,2H),2.24-2.92(s,11H),1.75-1.92(m,3H)。

实施例3:3-{1-[4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{4-氯-3-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-1H-异色烯-1-酮

将3-(1-{4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基}乙基)-4-{4-氯-3-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-1H-异色烯-1-酮(中间体E1c)(0.105g,0.175mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-醇(0.077g,0.35mmol)和K₃PO₄(0.113g,0.53mmol)在THF/水3:1(体积:8mL)中的混合物通过用N₂鼓泡5min除氧，然后加入SPhos-Pd-G2(0.025g,0.035mmol)并将混合物在85℃加热3h。将混合物冷却至室温并在水和DCM之间分配。将水相用DCM(3x)萃取，将合并的有机层用水(1x)洗涤，穿过分相器并在减压下除去溶剂。使用0-25％的MeOH在DCM中的梯度作为洗脱液，将得到的粗制物通过在11gBiotage硅胶-NH柱上的快速色谱法纯化。得到作为微黄色固体的期望产物3-{1-[4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{4-氯-3-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-1H-异色烯-1-酮(0.068g,0.12mmol,68％收率)。

UPLC-MS:0.61min,601.2[M+H]+,方法3。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 8.18-8.25(m,3H),8.05-8.10(m,1H),7.73-7.79(m,1H),7.58-7.66(m,1H),7.30-7.58(m,3H),6.85-7.03(m,2H),5.71-5.79(m,1H),3.13-3.22(m,2H),2.01-2.25(m,6H),1.80-1.87(m,3H)。

按照与化合物1类似的程序，从下面报告的合适中间体(Int.)开始，制备在下表中出现的实施例2。按照与化合物3类似的程序，从下面报告的合适中间体(Int.)开始，制备在下表中出现的实施例4-7。

实施例1a:3-{1-[4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}-1H-异色烯-1-酮,第一洗脱的对映异构体。

将外消旋体3-{1-[4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}-1H-异色烯-1-酮盐酸盐(实施例1)(0.122g,0.195mmol)用MeOH稀释，并穿过PL-HCO3MP树脂柱(5g)以得到游离碱(0.080g)，将其溶解在MeOH(5mL)中并通过手性制备型色谱法进行手性拆分。条件：柱:Whelk 01(R,R)(25x2.1cm),10μm；流动相:正己烷/(2-丙醇/甲醇1/1+0.1％异丙胺)30/70％v/v；流速17mL/min；DAD检测:220nm；环：300μl；注射:4.8mg/注射。将含有第一洗脱的对映异构体的级分蒸发至干燥以得到标题化合物3-{1-[4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}-1H-异色烯-1-酮(0.021g,0.036mmol)。

手性HPLC(方法A2),

Rt 8.7min(第一洗脱的对映异构体),e.e.>99％

UPLC-MS:0.48-0.54,589.4[M+H]+,方法3。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.84-10.55(m,1H),8.02-8.36(m,4H),7.72-7.81(m,1H),7.57-7.67(m,1H),7.25-7.52(m,4H),6.87-7.01(m,2H),6.53-7.88(m,2H),5.64-5.83(m,1H),3.13-3.62(m,2H),2.00-2.47(m,11H),1.76-1.88(m,3H)。

第二洗脱的对映异构体的分析数据

手性HPLC(方法A2),

Rt 10.0min(第二洗脱的对映异构体),e.e.＝97.4％

按照随同指定的方法和条件，在欧洲同步加速器辐射设备(EuropeanSynchrotron Radiation Facility，ESRF)的晶体学束线(beamline)ID29上进行单晶X-射线衍射分析(D.de Sanctis,A.Beteva,H.Caserotto,F.Dobias,J.Gabadinho,T.Giraud,A.Gobbo,M.Guijarro,M.Lentini,B.Lavault,；T.Mairs,S.McSweeney,S.Petitdemange,V.Rey-Bakaikoa,J.Surr,P.Theveneau,G.A.Leonard,C.Mueller-Dieckmann,J.Sync.Rad.2012,19,455-461)：用在EtOH/H₂O 6％(内部溶剂)和EtOAc(外部溶剂)中的蒸汽扩散实验得到单晶。用快速读出Pilatus 6M-F像素检测器(Dectris LTD)记录衍射数据。用

波长的单色辐射，应用旋转晶体方法使用Oxford冷冻系统在100K进行数据收集。通过在程序ShelxT中实现的双空间算法求解结构，并使用程序SHELXL-2016/6进行细化。从在

收集的数据获得Flack参数(S.Parsons,H.D.Flack,T.Wagner,ActaCryst.2013,B69,249-259)作为Flack x＝0.07(18)；并且将实施例1a的第一洗脱的对映异构体的绝对构型指定为S。该测定用于确认此处报道的结构的绝对构型：

(S)-3-{1-[4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}-1H-异色烯-1-酮,第一洗脱的对映异构体(实施例1a的标题化合物)。

(R)-3-{1-[4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}-1H-异色烯-1-酮,第二洗脱的对映异构体。

实施例2a:3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲基氨基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮,第一洗脱的对映异构体。

将外消旋体3-{1-[4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-1H-异色烯-1-酮盐酸盐(实施例2)(0.228g,0.400mmol)用MeOH稀释并穿过PL-HCO3 MP树脂柱(5g)以得到游离碱(0.110g)，将其溶解在乙醇/甲醇/正己烷1/1/1(10mL)中并通过手性制备型色谱法进行手性拆分。条件：柱:Chiralpak AD-H(25x2.0cm),5μm；流动相:正己烷/(乙醇+0.1％异丙胺)75/25％v/v；流速20mL/min；DAD检测:220nm；环：2500μl；注射:27mg/注射。将含有第一洗脱的对映异构体的级分蒸发至干燥以得到标题化合物3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲基氨基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮(0.040g,0.075mmol)。

手性HPLC(方法A3),

Rt 6.4min(第一洗脱的对映异构体),e.e.>99％。

UPLC-MS:0.46-0.50,534.3[M+H]+,方法3。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.16(bs,1H),8.18-8.30(m,3H),8.04-8.12(m,1H),7.72-7.81(m,1H),7.57-7.68(m,1H),7.43-7.53(m,1H),7.25-7.40(m,4H),6.82-7.04(m,3H),5.67-5.83(m,1H),3.16-3.49(m,2H),1.97-2.25(m,6H),1.78-1.87(m,3H)。

第二洗脱的对映异构体的分析数据

手性HPLC(方法A3),

Rt 14.6min(第二洗脱的对映异构体),e.e.>99％

实施例4a:3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((R)-1-甲基吡咯烷-2-基)苯基)-1H-异色烯-1-酮,第一洗脱的非对映异构体。

将3-{1-[4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(2R)-1-甲基吡咯烷-2-基]苯基}-1H-异色烯-1-酮(实施例4)(0.050g,0.089mmol)溶解在1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇(2.5mL)中并通过手性制备型色谱法进行手性拆分。条件：柱:Chiralpak AD-H(25x2.0cm),5μm；流动相:(乙醇+0.1％异丙胺)15％；流速46mL/min；DAD检测:220nm；环：600μl；注射:12mg/注射。将含有第一洗脱的非对映异构体的级分蒸发至干燥以得到标题化合物3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((R)-1-甲基吡咯烷-2-基)苯基)-1H-异色烯-1-酮(0.017g,0.03mmol)。

手性HPLC(方法A4),

Rt 3.3min(第一洗脱的非对映异构体),d.e.＝98.5％,

UPLC-MS:0.70min,560.5[M+H]+,方法5。

¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm 8.29-8.35(m,1H),8.22-8.28(m,1H),8.15-8.21(m,1H),8.03-8.12(m,1H),7.65-7.74(m,1H),7.56-7.63(m,1H),7.18-7.55(m,4H),6.76-6.99(m,2H),5.88-6.00(m,1H),2.85-3.28(m,2H),1.54-2.46(m,11H)。

第二洗脱的非对映异构体的分析数据

手性HPLC(方法A4),

Rt 7.0min(第二洗脱的非对映异构体),d.e.＝96.2％。

UPLC-MS:0.70min,560.5[M+H]+,方法5。

¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm 8.30-8.35(m,1H),8.24-8.29(m,1H),8.17-8.21(m,1H),8.04-8.13(m,1H),7.66-7.75(m,1H),7.56-7.64(m,1H),7.17-7.55(m,4H),6.74-7.06(m,2H),5.83-6.03(m,1H),2.94-3.29(m,2H),1.70-2.45(m,11H)。

盐筛选实施例

按照例如描述于Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use,2011(P.Heinrich Stahl,Camille G.Wermuth(编)中的已知的成盐方法，制备本发明的特别优选的盐。

从实施例1a的(S)对映异构体化合物制备在下表中报告的盐，并且使用所述通常已知的成盐方法同样获得来自(R)对映异构体的盐。

作为一个例子，通过将300mg游离碱溶解在丙酮(9mL)中并在约20℃搅拌约2小时，然后在50℃搅拌约30分钟以实现游离碱完全溶解，得到马来酸盐。然后在20℃加入马来酸(1.02当量)。将浆料在650rpm约20℃搅拌过夜。将样品在注射器式滤器(孔隙率20μL，PTFE玻璃料)上过滤并在室温在真空下干燥直至达到恒重(3小时)(产率＝86％)。

一些进一步优选的盐报告在下表中，其从实施例2a的(S)对映异构体化合物制备，并且使用所述通常已知的成盐方法同样获得来自(R)对映异构体的盐。

上面列出的盐以固体形式获得，它们中的大部分是基本上无定形固态；一些特别优选的盐呈现结晶固态。

本发明化合物的药理学活性.

在无细胞测定中体外测定PI3K酶抑制活性

人重组蛋白PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ和PI3Kδ购自Millipore Ltd(Billerica,MA)。将化合物以0.5mM溶解在DMSO中，并根据生产商的说明书使用ADP-Glo^TM激酶测定(Promega,Madison WI)在不同浓度下测试它们对PI3K的活性。

简而言之，在384-孔白色平板(Greiner Bio-One GmbH,Frickenhausen)中进行激酶反应。给每个孔加载0.1μl试验化合物和2.5μl 2x反应缓冲液(40mM Tris pH7.5,0.5mMEGTA,0.5mM Na₃VO₄,5mMβ-甘油磷酸盐,0.1mg/ml BSA,1mM DTT)，其含有50μM PI和PS底物(L-α-磷脂酰肌醇钠盐和L-α-磷脂酰-L-丝氨酸,Sigma-Aldrich,密苏里州圣路易斯)和PI3K重组蛋白(PI3Kγ0.25ng/μl,PI3Kδ1ng/μl,PI3Kα0.125ng/μl,PI3Kβ1ng/μl)。

通过向每个孔加入2.5μl 2x ATP溶液(终浓度：PI3KγATP 30μM；PI3KδATP 80μM；PI3KαATP 50μM；PI3KβATP 100μM)并在室温温育60min，开始反应。随后，将每个激酶反应与5μl ADP-Glo^TM试剂一起温育40分钟，以耗尽未消耗的ATP。然后，将激酶检测试剂(10μl)添加到每个孔中以将ADP转化为ATP，并允许使用萤光素酶/萤光素反应测量新合成的ATP。温育60分钟后，使用Wallac

多标签读数器(PerkinElmer,Waltham MA)测量发光信号。

在用于Microsoft Excel(Microsoft,Redmont,WA)的XLfit(IDBS,Guilford,UK)中使用四参数逻辑模型进行曲线拟合和IC50计算。

在下面提供了结果。

表1a：对比实施例的无细胞测定中PI3K酶抑制活性的体外测定结果；转载自WO2015091685。

其中根据以下，关于它们对PI3K-α、-β、-γ和-δ的抑制活性，根据效力将化合物分类：

+++:IC50<10Nm

++:IC50在10-1000nM的范围内

+:IC50>1000nM

本发明的化合物是有效的δ抑制剂，在酶测定中具有δIC50<2nM，如下表1b中所报告。

在THP-1测定中体外测定PI3Kδ酶抑制活性

通过评价在THP-1细胞上内源性表达的PI3Kδ-AKT途径的抑制，确定化合物对活细胞中PI3激酶的抑制活性。将来自T75烧瓶的THP-1细胞悬浮液(0.4-1.0x10⁶/mL)离心，并将细胞沉淀物以1.5x10⁶个细胞/mL重新悬浮在饥饿培养基中。在测定之前如下制备细胞平板：分配3x10⁵个细胞/孔，并在37℃温育24小时。将试验化合物在DMSO中1:3系列稀释，并然后在化合物培养基中进一步1:100稀释。将饥饿的THP-1细胞与试验化合物溶液或媒介物一起在37℃预温育60分钟。然后用2.5ng/mL的巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)或刺激培养基(基础pAKT水平的对照)刺激细胞10分钟。然后裂解细胞，并使用Cisbio p-Ser473 AKTHTRF测定试剂盒测量磷酸化AKT的量。通过添加补充的裂解缓冲液，结束刺激。在室温摇动细胞板30分钟以完成细胞裂解，随后加入HTRF缀合物并在室温温育另外4小时。缀合物与pAKT发生反应，导致HTRF信号增加，其使用带有HRTF读出协议的Envision平板读数器测量。使用逻辑四参数方程拟合比率数据以确定IC₅₀。IPI-145化合物用作药理学标准品。

如下表1b中报告的，本发明的化合物显示出关于PI3K-δ亚基低于4nM的细胞IC50(THP-1 IC₅₀ nM)值。

**细胞/酶活性＝THP-1 IC₅₀ nM/δKi nM

**细胞/酶活性＝THP-1 IC₅₀ nM/δKi nM

卵白蛋白(OVA)诱导的大鼠肺嗜酸性粒细胞增多症的大鼠模型的方案(WET施用-盐水溶液)

动物

雄性Brown Norway大鼠(在抵达时6周龄)购自Charles River LaboratoriesItaly(Calco,Lecco)。在使用前，使动物适应当地动物饲养所条件(室温：20-24℃；相对湿度：40-70％)至少5天，自由获取标准大鼠饲料和自来水。本文所述的所有动物方案均经Chiesi Farmaceutici的动物实验的内部动物福利委员会和卫生部批准后进行，并符合欧洲指令2010/63UE和意大利D Lgs 26/2014(授权号198-PR)。

致敏和变应原暴露

通过连续3天腹膜内注射含有在1mL盐水中的OVA(1mg/大鼠)和Al(OH)₃(100mg/大鼠)的悬浮液，使雄性Brown-Norway大鼠致敏；两周后，通过变应原的气溶胶施用诱导气道炎症。具体地，将动物暴露于OVA溶液(1％在盐水中)的气溶胶，其诱导炎症细胞在气道中的大量涌入，主要以嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞为代表。简而言之，将大鼠限制在有机玻璃管中，引入吸入室并通过仅鼻子吸入暴露于雾化溶液30分钟。将吸入室连接到Medel Pro雾化器，该雾化器在吸入室中以大约3.3l/min的流速产生雾化溶液。将对照动物暴露于雾化盐水。

用试验化合物处理

为了评估抗炎作用持续时间(DoA)，在OVA攻击前2或12小时以在0.03μmol/kg至1μmol/kg范围内的不同剂量气管内地(i.t.)施用试验化合物。从上述剂量-响应研究确定每种试验化合物的ED80。ED80是达到80％抑制时的剂量。

对于试验化合物或媒介物的气管内施用，用异氟烷或七氟烷(4％在氧气中)麻醉动物，并将喉镜向前移入口腔以观察气管并引导PE100插管直接插入气管并定位在分叉上方1-2mm。将化合物重新悬浮在含有0.2％吐温80的盐水(蒸馏水+0.5％NaCl)中，并以0.5ml/kg的体积局部滴注到气管中。

支气管肺泡灌洗和细胞计数

在暴露于OVA或盐水气溶胶后24小时，如前所述用异氟烷或七氟烷麻醉动物，并通过从腹主动脉放血处死。通过用溶液A[汉克平衡盐溶液(HBSS)×10,100ml；乙二胺四乙酸(EDTA)100mM,100mL；4-(2-羟基-乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)1mM,10mL；蒸馏水,790mL]的3个等分试样(各4ml)轻轻洗涤肺，得到支气管肺泡灌洗液(BALF)。BALF的常规回收在动物之间没有显著差异，回收了约80％的滴注体积(9.5-10.5mL)。

将所得BALF在4℃在800×g离心10分钟。将沉淀物重新悬浮在1.5mL的体积中，并在2小时内使用自动化的细胞计数器(Dasit,Sysmex)进行总细胞计数和分类细胞计数。从1μl BALF的细胞数目乘以用于重新悬浮细胞沉淀物的体积，计算每只动物的细胞计数。

数据分析

在OVA攻击前12小时以对应于ED80的0.1μmol/kg剂量施用的本发明化合物在抑制BALF中的嗜酸性粒细胞募集方面表现出持久的效力，优于(superior of)45％。使用下式计算抑制百分比：

％抑制＝100×((化合物处理的OVA攻击的个体值-媒介物处理的OVA攻击的平均值)-(媒介物处理的OVA攻击的平均值-媒介物处理的盐水攻击的平均值))/(媒介物处理的OVA攻击的平均值-媒介物处理的盐水攻击的平均值)。

对于每组治疗，从8-10只大鼠计算平均值。

与本发明的化合物相比，在WO2015091685中的相应化合物确实被发现不持久或不太持久。

表1c:OVA-试验的结果.

*＊*ns＝不显著的

*＊＊*J Aerosol Med Pulm Drug Deliv.2018年2月；31(1):61-70.doi:10.1089/jamp.2017.1369.2017年8月2日电子公开.

卵白蛋白(OVA)诱导的大鼠肺嗜酸性粒细胞增多症的大鼠模型的方案

(作为干粉施用)

材料和方法

动物

雄性Brown Norway大鼠(在抵达时6周龄)购自Charles River LaboratoriesItaly(Calco,Lecco)。在使用前，使动物适应当地动物饲养所条件(室温：20-24℃；相对湿度：40-70％)至少5天，自由获取标准大鼠饲料和自来水。本文所述的所有动物方案均经Chiesi Farmaceutici的动物实验的内部动物福利委员会和卫生部批准后进行，并符合欧洲指令2010/63UE和意大利D.Lgs 26/2014。

致敏和变应原暴露

通过连续3天腹膜内注射含有在1mL盐水的OVA(1mg/大鼠)和Al(OH)₃(100mg/大鼠)的悬浮液，使雄性Brown-Norway大鼠致敏。两周后，通过吸入的抗原诱导气道炎症。将动物暴露于OVA溶液(1％在盐水中)的气溶胶，其诱导炎症细胞(主要是嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞)在气道中的大量涌入。简而言之，将大鼠限制在有机玻璃管中，并通过仅鼻子吸入暴露于吸入室的内容物30分钟。将吸入室连接到Medel Pro雾化器，该雾化器以大约3.3l/min的流速产生气雾化的卵白蛋白，其在室内循环。将媒介物对照处理的动物暴露于气雾化的盐水。

用试验化合物处理

为了评估抑制效能和作用持续时间(DoA)，在OVA攻击前12小时通过气管内途径施用试验化合物。

对于试验化合物或媒介物的气管内施用，用七氟烷(4％在氧气中)麻醉动物，并将喉镜向前移入口腔以观察气管并引导干粉PennCentury装置直接插入气管并定位在分叉上方1-2mm。将作为干粉施用的试验化合物微粉化，并与0.2％w/w硬脂酸镁/Respitose SV003以0.233％、0.755％、7.75％强度(strength)(对应于0.03–0.1-1.0μmol/kg的剂量)掺合，注射重量为10mg/kg。对照动物接受10mg/kg媒介物掺合物(0.2％w/w硬脂酸镁/RespitoseSV003)。从上述剂量-响应研究确定每种试验化合物的ED80。

在自发阶段吸气期间，将化合物干粉吹入气道中，空气体积为4mL。

支气管肺泡灌洗和细胞计数

将所得BALF在4℃在800×g离心10分钟。将源自相同动物的沉淀物合并并且重新悬浮在1.5mL的体积中，并在2小时内使用自动化的细胞计数器(Dasit,Sysmex)进行总细胞计数和分类细胞计数。从1μl BALF的细胞数目乘以用于重新悬浮细胞沉淀物的体积，计算每只动物的细胞计数。

数据分析

所有数据均表示为平均值±均值标准差。使用单因素方差分析(ANOVA)对原始数据进行统计分析，然后使用Dunnett氏事后检验与OVA致敏的、OVA攻击的组进行对比。根据下式对比药物处理的动物和媒介物处理的OVA攻击的对照动物，计算细胞募集抑制的药物诱发的个体值：

％抑制＝{100％×((化合物处理的OVA攻击的个体值-媒介物处理的OVA攻击的对照平均值)-(媒介物处理的OVA攻击的对照平均值-媒介物处理的盐水攻击的对照平均值))/(媒介物处理的OVA攻击的对照平均值-媒介物处理的盐水攻击的对照平均值)}]。

对于每组处理，从8-10只大鼠计算平均值。

基于个体抑制数据，通过对数线性回归分析计算ED₅₀值和95％置信限。使用GraphPad软件7.0版进行统计分析，p<0.05被认为是具有统计显著性水平。

结果

测试了实施例1a化合物的马来酸盐的抗炎作用持续时间，其在OVA攻击前2和12小时通过PennCentury气管内地施用。1μmol/kg剂量表现出显著抑制(总细胞募集的％抑制：84.1±5.5，p<0.01；嗜酸性粒细胞募集的％抑制：79.3±8.4，p<0.01)。

总之，数据证实，根据本发明的化合物作为抗炎药是有效的，能够抑制炎症细胞的肺部积聚并且具有延长的作用持续时间。

当在OVA暴露前12小时作为DPI制剂(干粉方案)施用时，1μmol/kg剂量的本发明化合物在抑制大鼠肺气道中的嗜酸性粒细胞募集方面表现出显著且持久的效力，显示等于或超过50％、甚至优选地等于或超过70％的抑制％。

因此，本发明的化合物是有效的PI3K抑制剂，在亚纳摩尔范围内在酶促体外测定中具有活性(δK_i<1nM)，并且在PI3Kδ抑制的THP-1细胞模型中也表现出高活性(THP-1IC₅₀<4nM，优选地≤3nM)。值得注意的是，该活性在细胞测定中得以保持，从酶促测定到细胞测定的活性减少低于或等于10倍；优选地等于或低于3.5倍。

THP-1IC₅₀≤10xδK_i；优选地THP-1IC₅₀≤3.5xδK_i；

此外，在抗炎DoA的实验中，在OVA攻击前12小时以0.1μmol/kg(本发明的试验化合物的ED80)的剂量作为悬浮液施用的根据本发明的化合物表现出持久的抗炎效力，优于45％。按照相同的实验方案，在OVA攻击前12小时以1umol/kg(ED80)的剂量作为DPI制剂施用的根据本发明的化合物在抑制肺气道中的细胞募集方面仍保持显著和持久的抗炎作用；在干粉方案中表现出持久的抗炎效力，具有等于或超过50％、甚至优选地等于或超过70％的抑制％。

Claims

1.式(I)的化合物及其药学上可接受的盐：

其中：

每个R当存在时独立地选自：OR₇、卤素、(C₁-C₆)烷基；

R₁和R₂相同或不同，在每次出现时独立地为(C₁-C₆)烷基，

或者

R₁和R₂与它们所连接的氮原子一起形成5或6元杂环残基，其中所述杂环残基中的至少一个另外的环碳原子任选地被至少一个选自N、NH、S或O的杂原子替换且任选地带有至少一个-氧代(＝O)取代基；所述杂环残基进一步任选地被(C₁-C₆)烷基取代，且R₃和R₄是H；

或者

R₅是OR₇；

R₇选自：H、(C₁-C₆)烷基；

p是0或在1-4范围内的整数。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中参考式(Ia)中用星号(*)标记的碳原子所表示的立体中心，在碳(*)处的绝对构型是(S)或(R)：

3.根据权利要求1或2中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐

其中：

R₁和R₂与它们所连接的氮原子一起形成4-甲基哌嗪-1-基基团；

R₃和R₄是H；

R、R₅、R₆和p如在权利要求1中所定义。

4.根据权利要求1或2中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐

其中：

R₃和R₂一起形成包含N原子的5元杂环残基；所述杂环残基进一步被作为甲基的(C₁-C₆)烷基取代；R₁是作为甲基的(C₁-C₆)烷基且R₄是H；且

R、R₅、R₆和p如上面所定义。

5.根据权利要求1或2中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐

其中：

R₁和R₂是作为甲基的(C₁-C₆)烷基，

R₃和R₄独立地是H或作为甲基的(C₁-C₆)烷基；且

R、R₅、R₆和p如在权利要求1中所定义。

6.根据权利要求1-5中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R是-H；

R₅是-OH；

R₆是H。

7.根据权利要求1或2中的任一项所述的化合物，所述化合物选自以下列表：

3-{1-[4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}-1H-异色烯-1-酮；

3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((二甲基氨基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮；

3-{1-[4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{4-氯-3-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-1H-异色烯-1-酮；

3-{1-[4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{3-[(2R)-1-甲基吡咯烷-2-基]苯基}-1H-异色烯-1-酮；

3-{1-[4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-{4-氟-3-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}-1H-异色烯-1-酮；

3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-氟-5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮；

3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-(1-(二甲基氨基)乙基)苯基)-1H-异色烯-1-酮

或其药学上可接受的盐。

8.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物选自以下列表：

(R)和/或(S)-3-(1-(4-氨基-3-(5-羟基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-1H-异色烯-1-酮昔萘酸盐；

9.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物选自以下列表：

10.药物组合物，其包含与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合的如在权利要求1-9中的任一项中定义的化合物。

11.药物组合物，其包含与一种或多种活性成分组合的如在权利要求1-9中的任一项中定义的化合物。

12.根据权利要求1-9中的任一项所述的化合物，其用于用作药物。

13.如在权利要求1-9中的任一项中定义的化合物，其用于治疗与PI3K酶机制有关的呼吸性障碍，所述呼吸性障碍选自特发性慢性咳嗽、咳嗽-变异性哮喘、与胸部肿瘤或肺癌相关的咳嗽、病毒性或病毒后咳嗽、上气道咳嗽综合征(UACS)、滴鼻后咳嗽、与胃食管反流病(酸和非酸反流)相关的咳嗽、哮喘、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)和间质性肺病。

14.用于根据权利要求13所述的用途的化合物，其中所述与PI3K酶机制有关的障碍是哮喘或慢性阻塞性肺病COPD。

15.用于根据权利要求13所述的用途的化合物，其中所述与PI3K酶机制有关的障碍是特发性肺纤维化(IPF)、咳嗽和慢性咳嗽。

16.式(II)的化合物

其中

当R不存在时，p＝0，R₃和R₄是H，K＝R”是甲氧基吡啶；且R₁和R₂如在权利要求1中所定义。

17.式(II)的化合物作为中间体在制备权利要求1所描述的式(I)的化合物中的用途，

其中

当R不存在时，p＝0，R₃和R₄是H，K＝R”是甲氧基吡啶；且R₁和R₂如在权利要求1中所定义，

或者

当K＝I时；p、R、R₁、R₂、R₃、R₄如在权利要求1中所定义。

18.方法，其中根据权利要求18使用的式(II)的化合物经历去保护或偶联的后续步骤；任选地随后进行最终手性分离步骤以得到根据权利要求1所述的化合物。

19.呈干粉形式的根据权利要求10所述的用于吸入的药物制剂，其中存在的载体包含一种或多种药学上可接受的赋形剂的粗颗粒，并且进一步任选地存在具有润滑或抗粘着性能的添加剂。

20.根据权利要求19所述的药物制剂，其中所述粗颗粒具有被包含在30-500微米之间的质量直径。

21.干粉吸入器装置，其填充了如在权利要求19或20中定义的药物制剂。

22.试剂盒，其包含如在权利要求19或20中定义的药物制剂和干粉吸入器装置。

23.呈不含推进剂的药物制剂的形式的根据权利要求10所述的用于吸入的药物制剂，其中所述化合物或其盐溶解或悬浮在含水媒介物中，所述媒介物任选地包含其它药学上可接受的赋形剂。

24.试剂盒，其包含如在权利要求23中定义的药物制剂和喷雾器。