CN113826000A - 用于颗粒尺寸测量中修正的方法及设备 - Google Patents
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Abstract
本公开描述了一种用于颗粒尺寸测量中修正的方法及设备，在一些实施例中，方法包括以下步骤：(1)在卡盒设备中测量目标颗粒和参考颗粒的信号；(2)分析测量的信号以获取目标颗粒信号信息和参考颗粒信号信息；并且(3)通过参考颗粒的信号信息修正目标颗粒信号信息以确定目标颗粒尺寸信息。在其它实施例中，装置包括卡盒和分析仪。分析仪配置用于接收卡盒进入到分析仪，测量目标颗粒和参考颗粒的信号，分析测量的信号以获得信号信息，并确定目标颗粒的尺寸信息。
Description
本权利要求申请优先权基于美国申请临时申请号62/839090申请日2019年4月26日，其通过整体引用成为本公开的组成部分。
技术领域
本公开一般涉及医药和细胞计数，更具体而言，本公开涉及用于颗粒尺寸测量的设备及其方法。
背景技术
颗粒有多种类型，例如，固相颗粒(例如微粒等)、液相颗粒(例如液滴等)、和生物颗粒(例如细胞和蛋白质等)。颗粒的尺寸信息(例如颗粒的直径和颗粒的体积等)跨诸如医疗保健和环境检测的广泛行业而确定。如各种类型的样品(例如液态样品，气态样品和生物样品等)包含可以测量和分析的颗粒。例如：医疗保健专业人员经常使用体液样品(例如血、淋巴液、汗、眼泪、精液、唾液、以及尿等)。
各种类型的信号(例如：光学，声学以及电信号等)可以用于确定颗粒的尺寸信息。光信号在很多技术中使用，例如分光光度法，动态光散射，激光衍射，流式细胞计数。其中，流式细胞计数广泛使用于确定颗粒尺寸信息。通常，流式细胞计数使用入射光束照亮的流动室。颗粒样品流通过流动室，并且测量该通过颗粒的信号(例如：光散射和荧光等)。该测量信号可用于分析样品颗粒尺寸信息的各个方面，诸如单个颗粒的尺寸、多个颗粒的尺寸、多个颗粒的平均尺寸、以及多个颗粒的尺寸分布。
在医疗保健方面，血细胞的尺寸信息常被用于导引医疗决策。例如全血细胞计数(CBC)的实验室检查，红细胞(RBCs)，血小板(PLTs)和白细胞的尺寸信息常用流式细胞计数来确定。被确定的尺寸信息包括但不限于单个红细胞的尺寸，多个红细胞的平均尺寸(即平均红细胞体积，MCV)，多个红细胞的尺寸分布(即红细胞分布宽度，RDW)，红细胞在血液中的体积百分比(即红细胞压积，HCT)，多个血小板的平均尺寸(即平均血小板体积，MPV)，多个血小板的尺寸分布(即血小板分布宽度，PDW)，以及血小板在血液中的体积百分比(即血小板浓度)等。
近年来，诸如即时检测的新医疗保健应用如需要用于颗粒尺寸测量的新方法和设备。这些新方法和设备经常使用一次性流控卡盒和分析仪来测量，例如，包含卡盒和分析仪的设备可应用流式细胞计数以确定颗粒的尺寸信息。包含颗粒的样品装入具有流动室的卡盒中，并且卡盒置于分析仪中。该分析仪通过入射光束照亮流动室，测量来自于流经流动室的颗粒的信号并分析其尺寸信息。
然而，使用卡盒和分析仪进行尺寸测量有很多挑战。试举一例，当卡盒置于分析仪中时，卡盒中的流动室和分析仪的入射光束之间的对齐会不时变化。这种对齐的变化引起信号测量的变化并导致相同颗粒在不同时间段分析的尺寸的信息不一致。再举一例，当颗粒通过流动室时，其在流动室中的定位会变化。当流动室的横截面尺寸大于颗粒时，或当没有鞘流聚焦这些颗粒时，定位的变化可为显著。定位的变化引起信号测量的变化并导致相同颗粒不同时间段分析尺寸信息的不一致。
美国专利5,084,394描述了一种使用参考微珠调整流式细胞计数的方法，但是没有教导使用参考颗粒来修正目标颗粒的尺寸。美国专利5,747,349描述了一种使用流式细胞计数的方法和微粒以确定分析物浓度的方法，但没有教导颗粒的尺寸测量。美国专利号7,688,427描述了使用流式细胞计数以测量卡盒中颗粒尺寸的方法，但是没有教导使用参考颗粒的尺寸修正。美国专利号7,641,856描述了一种使用校正卡盒以调整流式细胞计数的方法，但是没有教导使用参考颗粒来修正目标颗粒尺寸。
发明内容
以下给出本发明的简化概要，以提供对本发明一些方面的基本理解。本概要不是本发明的广泛概述，本概要不旨在识别关键要素或描绘本发明的范围。其唯一目的是以简化形式呈现本发明的一些概念，作为在别处呈现的更详细描述的前奏。
在一些实施例中，本公开提供包括以下步骤的方法。(1)测量来自于卡盒设备中目标颗粒和参考颗粒的信号。该卡盒设备接收到分析仪中以执行信号的测量，并且当目标颗粒和参考颗粒流过卡盒设备的流动室时，测量来自于目标颗粒和参考颗粒的信号。(2)分析测量到的信号以获得目标颗粒的信号信息和参考颗粒的信号信息。(3)由参考颗粒的信号信息以修正目标颗粒的信号信息来确定目标颗粒的尺寸信息。
可选地，该参考颗粒具有已知的尺寸。
可选地，测量两种或两种以上类型的信号以将目标颗粒的信号信息与和参考颗粒的信号信息加以区分。
可选地，测量到的信号包括光信号、电信号、声信号、磁信号或者这些信号的混合。该光信号包括前向散射信号、荧光信号或这些信号的混合。
可选地，所获得的信号信息包括峰高、峰宽、峰面积、平均峰高、平均峰面积、峰高分布、峰宽分布、峰面积分布，峰高分布宽度、或这些信息的混合。
可选地，确定的尺寸信息包括颗粒直径、颗粒体积、平均颗粒直径、平均颗粒体积、颗粒直径分布、颗粒体积分布、或这些信息的混合。
可选地，流动室是无鞘流流动室。
可选地，在目标颗粒进入流动室之前，参考颗粒存储于在卡盒设备中。
可选地，参考颗粒和目标颗粒在流经流动室前在卡盒设备中形成样品混合物。
可选地，卡盒进一步包含配置以标记目标颗粒的荧光染料或表面活性剂。样品混合物包括：(a)荧光染料、参考颗粒和目标颗粒的组合，或(b)表面活性剂、参考颗粒和目标颗粒的组合。
可选地，目标颗粒为血细胞。
可选地，确定的尺寸信息包括清单中的至少一项：该清单包括：平均红细胞体积(MCV)、红细胞分布宽度(RDW)、红细胞压积(HCT)、平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、血小板计数、单核细胞平均尺寸、以及包括血细胞的样品的单核细胞宽度分布。
在另一些实施例中，本公开提供了包括卡盒和分析仪的设备。该分析仪配置以：接收卡盒到其中，当目标颗粒和参考颗粒流经卡盒中的流动室时测量来自于目标颗粒和参考颗粒信号，分析所测量的信号以获得目标颗粒的信号信息和参考颗粒的信号信息，并由通过参考颗粒的信号信息修正目标颗粒的信号信息来确定目标颗粒的尺寸。
可选地，参考颗粒具有已知的尺寸。
可选地，卡盒包括参考颗粒并配置以形成目标颗粒和参考颗粒的样品混合物。
可选地，卡盒进一步包括配置以标记目标颗粒的荧光染料或表面活性剂。卡盒配置以形成：(a)目标颗粒、参考颗粒和荧光染料的样品混合物，或(b)目标颗粒、参考颗粒和表面活性剂的样品混合物。
可选地，流动室是无鞘流流动室。
可选地，测量的信号包括光信号、电信号、声信号、磁信号或这些信号的混合。光信号包括前向散射信号、荧光信号或这些信号的混合。
可选地，确定的尺寸信息包括颗粒直径、颗粒体积、平均颗粒直径、平均颗粒体积、颗粒直径分布、颗粒体积分布、峰高分布宽度或这些信息的混合。
可选地，目标颗粒是血细胞。
附图说明
参考以下附图对本公开示出的实施例进行详细描述。
图1为根据本公开实施例通过参考颗粒修正目标颗粒来确定目标颗粒尺寸信息的方法的方框图。
图2A示出根据本公开实施例具有用以测量颗粒尺寸信息的分析仪和卡盒的设备。
图2B为示出图2A所示设备实施的流程的方框图。
图3A示出根据本公开的实施例测量来自于流动室中颗粒的光学信号的示例。
图3B示出根据本公开的实施例分析光学信号以获得信号信息的示例。
图4A示出根据本公开实施例不同尺寸的目标颗粒和参考颗粒在流经流动室被入射光束照亮并产生光学前向散射信号(FS)的示例。
图4B示出根据本公开实施例获得光学前向散射信号(FS)峰高和峰数作为信号信息的示例。
图4C示出根据本公开实施例通过绘制前向散射(FS)峰高与前向散射(FS)峰值频率的直方图将目标颗粒的信号信息区分于参考颗粒的信号信息的示例。
图5A示出根据本发明实施例，类似尺寸的目标颗粒和参考颗粒在被入射光束照亮时流经流动室并产生前向散射信号(FS)和荧光(FL)信号的示例。
图5B示出根据本公开实施例获得前向散射(FS)峰高、荧光峰高和其数目作为信号信息的示例。
图5C示出根据本公开实施例通过绘制荧光峰高对于前向散射(FS)峰高的散点图将目标颗粒的信号信息区分于参考颗粒的信号信息的示例。
图6A示出根据本公开实施例，入射光束与流动室对齐时测量流动室中目标颗粒和参考颗粒的示例。
图6B示出根据本公开实施例，入射光束与流动室错位时测量流动室中目标颗粒和参考颗粒的示例。
图7A示出根据本公开实施例，当所有颗粒流经流动室中心时测量流动室中多个目标颗粒和多个参考颗粒的示例。
图7B示出根据本公开实施例使用前向散射(FS)峰高直方图将目标颗粒尺寸信息区分于参考颗粒尺寸信息的示例。
图7C示出根据本公开实施例，当颗粒在流经流动室中各种位置测量流动室多个目标颗粒和多个参考颗粒的示例。
图7D示出根据本公开实施例使用前向散射(FS)峰高直方图将目标颗粒尺寸信息区分于参考颗粒尺寸信息的示例。
图8示出根据本公开实施例通过从参考颗粒修正来确定血细胞尺寸信息的方法的方框图。
图9A示出根据本公开实施例通过从参考颗粒修正来确定血细胞尺寸信息的示例，其中流控卡盒接收到具有血细胞和参考颗粒(例如：微珠)的样品。
图9B示出根据本公开实施例用于通过从参考颗粒修正来确定血细胞尺寸信息的流控卡盒另一示例，其中流控卡盒包含参考颗粒(例如:微珠)、接收具有血细胞的样品、并形成血细胞和参考颗粒的样品混合物。
图9C示出根据本公开实施例用于通过从参考颗粒修正来确定血细胞尺寸信息的流控卡盒的另一示例，其中流控卡盒包含具有参考颗粒(例如微珠)的试剂、接收有血细胞的样品、并形成血细胞和参考颗粒的样品混合物。
图9D示出根据本公开实施例用于通过从参考颗粒修正来确定血细胞尺寸信息的流控卡盒的另一示例，其中流控卡盒包含具有参考颗粒(例如微珠)的试剂以及表面活性剂。
图10A-10C示出根据本公开实施例通过修正确定血细胞尺寸信息的示例，其中目标颗粒为红细胞(RBCs)，且参考颗粒为微珠。
图11A-11C示出根据本公开实施例通过修正来确定血细胞尺寸信息的另一示例，其中目标颗粒为血小板(PLTs)，且参考颗粒为微珠。
图12A-12B示出根据本公开实施例通过修正来确定血细胞尺寸信息的另一示例，其中目标颗粒为红细胞(RBCs)和血小板(PLTs)，且参考颗粒为微珠。
图13A-13C示出根据本公开实施例通过修正来确定血细胞尺寸信息的示例，其中卡盒包含具有微珠的试剂和表面活性剂。
图14A-14B示出根据本公开实施例通过修正来确定血细胞尺寸信息的示例，其中流控卡盒包含具有微珠的试剂和荧光染料。
具体实施方式
下面参照附图描述本公开的一些非限制性实施例。该描述的实施例仅仅是本发明的部分，而非全部实施例。本领域的一般技术人员基于本公开实施例所获得的所有其他实施例应落入本公开的范围。
在各种实施例中，本公开提供了确定目标颗粒尺寸信息的方法。该方法包括:测量卡盒内目标颗粒和参考颗粒的信号；分析所测信号以获得目标颗粒的信号信息和参考颗粒的信号信息；通过使用参考颗粒的信号信息修正目标颗粒的信号信息来确定目标颗粒的尺寸信息。在各种实施例中，该方法还包括将目标颗粒的信号信息区分于参考颗粒的信号信息。在一些实施例中，分析仪执行这些步骤中的一个或多个(例如测量信号、分析被测信号和确定尺寸信息)。在某些实施例中，该分析仪配置用于接收卡盒，并且该方法进一步包括接收卡盒到分析仪中。
在各种实施例中，本公开提供了确定目标颗粒尺寸信息的方法。所述方法包括:接收卡盒进入分析仪；使用分析仪测量卡盒中来自于目标颗粒和参考颗粒的信号；分析所测信号以获得目标颗粒的信号信息和参考颗粒的信号信息；利用参考颗粒的信号信息修正目标颗粒的信号信息，来确定目标颗粒的尺寸信息。在各种实施例中，该方法还包括将目标颗粒的信号信息区分于参考颗粒的信号信息。
在各种实施例中，本公开提供了用于确定目标颗粒尺寸信息的设备。该设备包括:卡盒和分析仪。分析仪配置用于:接收卡盒进入分析仪；测量卡盒来自于目标颗粒和参考颗粒的信号，分析所测量的信号以获得目标颗粒的信号信息和参考颗粒的信号信息；利用参考颗粒的信号信息修正目标颗粒的信号信息来确定目标颗粒的尺寸信息。在各种实施例中，分析仪进一步配置用于将目标颗粒的信号信息区分与参考颗粒的信号信息。在一些实施例中，分析仪还配置用于测量两种或两种以上类型的信号以将目标颗粒信号信息区分于参考颗粒的信号信息。
在各种实施例中，卡盒包括配置用于目标颗粒和参考颗粒流经的流动室。在各种实施例中，当目标颗粒和参考颗粒流经卡盒中的流动室时，测量来自于目标颗粒和参考颗粒的信号。在各种实施例中，卡盒配置以形成目标颗粒和参考颗粒的样品混合物。
在各种实施例中，卡盒包括参考颗粒，并配置以形成目标颗粒和参考颗粒的样品混合物。在各种实施例中，卡盒包括多个参考颗粒。在各种实施例中，该卡盒包括两种或更多种类型的参考颗粒。例如，与简单具有一个尺寸、一种荧光强度和一种荧光团相比，参考颗粒可具有各种尺寸、各种荧光强度和各种荧光团。
在各种实施例中，卡盒还包括表面活性剂，并配置以形成目标颗粒、参考颗粒和表面活性剂的样品混合物。在各种实施例中，卡盒还包括荧光染料，并配置以形成目标颗粒、参考颗粒和荧光染料的样品混合物。
在各种实施例中，卡盒还包括配置以标记目标颗粒的荧光染料或表面活性剂。卡盒配置以形成:(a)目标颗粒、参考颗粒和荧光染料的样品混合物，或(b)目标颗粒、参考颗粒和表面活性剂的样品混合物。
在各种实施例中，在目标颗粒和参考形成样品混合物之后测量来自于目标颗粒和参考颗粒的信号。在各种实施例中，在目标颗粒和参考颗粒和表面活性剂形成样品混合物后测量来自于目标颗粒和参考颗粒的信号。
在各种实施例中，在目标颗粒和参考颗粒形成样品混合物后测量来自于目标颗粒和参考颗粒的信号。在各种实施例中，在目标颗粒、参考颗粒和荧光染料形成样品混合物后，测量来自于目标颗粒和参考颗粒的信号。测量来自目标颗粒的信号包括荧光强度信号。
在各种实施例中，所测信号包括光信号、电信号、声信号或磁信号、或其组合。在各种实施例中，光信号包括前向散射信号、或荧光信号、或其组合。在一些实施例中，测量两种或更多种类型的信号以将目标颗粒的信号信息区分于参考颗粒的信号信息。
在各种实施例中，所获得的信号信息包括峰高、峰宽、峰面积、平均峰高、平均峰宽、平均峰面积、峰高分布、峰宽分布、或峰面积分布、或其组合。
在各种实施例中，所确定的尺寸信息包括颗粒直径、颗粒体积、平均颗粒直径、平均颗粒体积、颗粒直径的分布、或颗粒体积的分布、或其组合。
在各种实施例中，参考颗粒具有已知的尺寸。
在各种实施例中，目标颗粒是血细胞。在各种实施例中，确定的尺寸信息包括选自列表中的至少一项:平均微粒体积(MCV)、红细胞分布宽度(RDW)、红细胞压积(HCT)、平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)，以及包括血细胞样品的血小板压积。
图1示出了确定颗粒尺寸信息的方法的非限制性示例。首先在步骤S101中，测量来自于具有颗粒的样品的信号。再者在步骤S102中，分析该信号以获得颗粒的信号信息。其三在步骤S103中，将目标颗粒的信号信息区分于参考颗粒的信号信息。其四在步骤S104中，利用参考颗粒的信号信息修正目标颗粒的信号信息以确定目标颗粒的尺寸信息。
图2A示出了用于确定颗粒尺寸信息的设备的非限制性示例。该设备可包括卡盒200和分析仪201。分析仪201接收卡盒，测量卡盒内来自于颗粒的信号、分析信号以获得信号信息、并利用信号信息确定颗粒的尺寸信息。在本例中，分析仪201具有如图2B所示三个模块。接收模块202接收卡盒200到分析仪201中。侦测模块203侦测卡盒200中的来自于颗粒的信号。分析模块204分析由侦测模块203侦测到的信号以获得信号信息，将目标颗粒的信号信息区分于参考颗粒的信号信息，并确定目标颗粒的尺寸信息。
图3A示出如何测量卡盒中来自于颗粒的信号的非限制性示例。该卡盒包括流动室，其中该流动室的部分由来自于分析仪的入射光束照射。当具有颗粒的样品流经流动室的被照射区域时，分析仪的侦测模块测量包含通过颗粒尺寸信息的光信号。该被测信号发送至分析仪的分析模块。当颗粒流经照射区域时，可在测量信号中侦测到峰。当多个颗粒流经照射区域时，测量信号中可以侦测到多个峰值。可用于确定尺寸信息的光学信号的非限制示例可能包括前向散射光、侧向散射光和荧光等。如一例，当使用正向散射光时，较大的颗粒比较小的颗粒散射更多的入射光，并产生更高强度的的信号峰。如另一例，当使用荧光时，较大的颗粒比较小的颗粒含有更多的发出荧光的荧光团并产生更高强度的信号峰。可用于确定尺寸信息的各种其他类型的信号可包括但不限于电信号(如阻抗)、声信号和磁信号等。
图3B示出了如何分析被测信号并从被测信号中获得信号信息的非限制性示例。峰数N(本例中，N＝1)和峰高h可获取为通过颗粒的信号信息。还可以获得的其他信号信息可能包括但不限于峰的面积大小、峰的宽度和半高宽等。
图4A-4C示出了如何测量信号、分析信号以获得信号信息、以及将目标颗粒的信号信息区分于参考颗粒的信号信息的非限制性实施例。用于接收样品的卡盒可以包括流动室，并且当卡盒放置在分析仪中时，流动室的一部分被来自分析仪的入射光束照射。当具有颗粒的样品通过流动室的被照射区域时，分析仪中的侦测模块测量前向散射信号(图4A)。该前向散射信号发送到分析仪的分析模块。每个通过流动室被照射区域的颗粒对应于前向散射信号的峰值。前向散射峰数N和每个前向散射峰高(hi,i＝1,2,3,…,N)可以获得为通过颗粒的信号信息(图4B)。为了将参考颗粒的信号信息区分于目标颗粒的信号信息，可获取前向散射峰的频率对于前向散射峰高的直方图(图4C)。可通过设置峰高的阈值来将直方图中的两个族群彼此区分。由于本例中的参考颗粒的尺寸小于目标颗粒的尺寸，峰高小于阈值的族群识别为参考颗粒。该族群中的峰数Nr每个峰高度(hr(j),j＝1,2,3,…,Nr)可以获取为参考颗粒的信号信息。此外，诸如参考颗粒平均前向散射(FS)峰高hr(avg)的信号信息可以按照如下的等式(1)来计算。
同时，峰高大于阈值的族群识别为目标颗粒。该族群中的峰数Nt和每个峰高(ht(k),k＝1,2,3,…,Nt)可获取为目标颗粒的信号信息。类似地，目标颗粒前向散射(FS)平均峰高ht(avg)可由以下等式(2)计算。
图5A-5C显示了如何测量信号、分析信号以获得信号信息、以及将目标颗粒的信号信息区分于参考颗粒的信号信息的另一个非限制性示例。用于接收样品的卡盒可包括流动室，并且当卡盒被放置在分析仪中时，流动室的一部分被来自分析仪的入射光束照射。当具有颗粒的样品通过流动室的被照射区域时，分析仪中的侦测模块同时测量前向散射信号(FS)和荧光(FL)信号(图5A)。所测得的前向散射信号(FS)和测得的荧光信号(FL)都发送到分析仪中的分析模块。每对前向散射(FS)信号中的峰和荧光(FL)信号中的峰对应于通过流动室被照射区域的颗粒，前向散射(FS)信号中的前向散射(FS)峰数NFS和每个前向散射(FS)峰高(hi,i＝1,2,3,…,NFS)可以获取为前向散射信号(FS)信息，荧光(FL)信号中的荧光(FL)峰数NFL和每个荧光(FL)峰的高度(li,i＝1,2,3,…,NFL,NFL＝NFS)可以获取为荧光信号信息(图5B)。可以获得测量颗粒的荧光(FL)峰高li对于前向散射(FS)峰高hi的散点图(图5C)。在本例中，可以通过在该散点图中设置荧光(FL)峰高的阈值来区分两个族群，荧光((FL)峰高大于阈值的族群来自于参考颗粒，因为在本例中参考颗粒具有比目标颗粒更高的荧光(FL)强度。该群体中的前向散射(FS)峰数Nr和每个前向散射(FS)峰高(hr(j),j＝1,2,3,…,Nr)可获取为参考颗粒的光前向散射信号信息。另外，参考颗粒的平均前向散射(FS)峰高hr(avg)可以通过上述等式(1)获得。同时，荧光(FL)峰高小于阈值的另一个族群来自于目标颗粒。该族群中前向散射(FS)峰数Nt和每个前向散射(FS)峰高(ht(k),k＝1,2,3,…,Nt)可获取为目标颗粒的前向散射(FS)信号信息。类似地，目标颗粒的平均前向散射(FS)峰高ht(avg)可以通过上述等式(2)获得。
图6A-6B示出确定目标颗粒直径Dt的方法的一些非限制性示例。在图6A中，目标颗粒和参考颗粒流经流动室并被入射光束照射，在本例中，入射光束与流动室的中心对齐。测量和分析前向散射(FS)信号以获得目标颗粒的前向散射(FS)峰高ht和参考颗粒的前向散射(FS)峰高hr，目标颗粒的直径Dt可以通过示于下面等式(3)的参考颗粒的hr修正目标颗粒的ht来确定，其中Dr是参考颗粒的已知直径。
在图6B中，目标颗粒和参考颗粒通过流动室并被入射光束照射。在本例中，入射光束与流动室的中心错位。测量和分析前向散射(FS)信号以获得目标颗粒的前向散射(FS)峰高ht’和参考颗粒的前向散射(FS)峰高hr’。本例中的目标颗粒的直径Dt’可以通过示于等式(4)的参考颗粒的hr’修正目标颗粒的ht’来确定，其中Dr是参考颗粒的已知直径。
图6B中所测得的ht’可能与图6A中所测得的ht不同，因为图6B中的入射光束与流动室的中心错位。例如，当入射光束在光束中心具有较高的强度而在光束边缘具有较低的强度时，图6B中所测得的ht’小于图6A中所测得的ht。当前向散射(FS)峰高用于确定目标颗粒的直径而不使用本公开中所述的参考颗粒时，ht’和ht之间的差异可能导致相同目标颗粒直径的测量结果不一致。当卡盒被接收进入到分析仪中时，可能会频繁发生错位并因此导致测量不一致。可以使用本公开所述的方法来减少或避免这种不一致性。例如，当图6A和图6B的修正如下列等式(5)中所示相同时，所确定的直径Dt可能等于Dt’。这可以通过使参考颗粒和目标颗粒通过流动室的相同位置来实现。
图7A–7D示出确定多个目标颗粒的平均尺寸或体积的方法的一些非限制性示例Vt(avg)。在图7A中，当多个目标颗粒和参考颗粒通过用入射光束照射的流动室时，所有颗粒对齐于流动室的中心。测量和分析前向散射(FS)信号，并且前向散射(FS)峰数N和每个前向散射信号(FS)峰高(hi,i＝1,2,3,…,N)可获取为通过颗粒的信号信息。可以获得前向散射(FS)峰频率对于前向散射(FS)峰高的直方图(图7B)。可通过在直方图中设置前向散射信号(FS)峰高阈值来区分两个族群。峰高小于阈值的族群被识别为参考颗粒，并且峰数Nr和每个峰高(hr(j),j＝1,2,3,…,Nr)可获取为参考颗粒的信号信息。参考颗粒的平均前向散射(FS)峰高hr(avg)可通过等式(1)获得。同时，将峰高大于阈值的另一族群识别为目标颗粒，并且其峰数Nt和每个峰高(ht(k),k＝1,2,3,…,Nt)可获取为目标颗粒的信号信息。目标颗粒的平均前向散射(FS)峰高ht(avg)可通过等式(2)获得。因此，目标颗粒的平均体积Vt(avg)可以通过如下面等式(6)中所示的用hr(avg)修正ht(avg)来确定，其中Vr(avg)是参考颗粒的已知平均体积。
当流动室具有大于颗粒尺寸的横截面尺寸或没有鞘流聚焦颗粒时，难以保持所有颗粒对齐于流动室中心。相反，颗粒将在不同位置通过流动室。如图7C所示，当目标颗粒和参考颗粒在通过流动室各个位置时，测量前向散射(FS)信号，并且前向散射信号(FS)峰数N和每个前向散射(FS)峰高(hi’,i＝1,2,3,…,N)可获取为信号信息。可以获得峰频率对于前向散射(FS)峰高的直方图(图7D)，并且通过设置前向散射信号(FS)峰高的阈值来区分两个族群。峰高小于阈值的族群被识别为参考颗粒，并且峰数Nr’和每个峰高(hr(j)’,j＝1,2,3,…,Nr’)可获取为参考颗粒的信号信息，参考颗粒的平均前向散射(FS)hr(avg)’峰高可通过等式(1)获得，同时，峰高大于阈值的另一族群被识别为目标颗粒，并且该族群中的峰数Nt’和每个峰高(ht(k)’,k＝1,2,3,…,Nt’)可获取为目标颗粒的信号信息。目标颗粒的平均前向散射(FS)峰高ht(avg)’可通过等式(2)获得。由此，目标颗粒的平均体积Vt(avg)’可以通过如下面等式(7)中所示的hr(avg)’修正ht(avg)’来确定，其中Vr(avg)是参考颗粒的已知平均体积。
当并非所有颗粒都对齐于流动室的中心或入射光束具有不均匀强度(例如，光束中心附近的强度较高，边缘附近的强度较低)时，图7D中测量的ht(avg)’可能不同于图7B中测量的ht(avg)，当平均前向散射(FS)峰高用于确定目标颗粒的平均体积而不使用本公开所述的参考颗粒时，ht(avg)或ht(avg)’之间的差异可能导致相同目标颗粒平均体积的测量不一致，当流动室的具有大于颗粒的横截面尺寸或没有鞘流聚焦颗粒时，这种错位可能会频繁发生，并导致测量不一致。可以使用本公开所述的方法来减少或避免这种不一致性。例如，确定的体积Vt(avg)可以等于Vt(avg)’，如以下等式(8)所示。这可以通过使多个参考颗粒和目标颗粒通过流动室来实现。
当存在多个颗粒时，其通过不同位置的概率可由流速分布确定，对于参考颗粒和目标颗粒，流速分布可能相同。
除了上面讨论的峰高和平均峰高外，各种其他类型的信号信息(例如，峰宽、峰面积、峰高分布和峰高分布宽度)也可用于修正，以确定目标颗粒的尺寸信息。例如，如图7B所示，参考颗粒族群的前向散射(FS)峰高分布为Fr(x)，且目标颗粒族群的前向散射(FS)峰高分布为Ft(x)。目标颗粒的直径分布Gt(x)可通过使用Fr(x)校正Ft(x)来确定，如以下等式(9)所示，其中符号Deconv{}表示去卷积的数学运算。也可使用包括但不限于傅里叶变换的其它方法计算去卷积结果。
Gt(x)＝Deconv{Ft(x),Fr(x)} (9)
类似地，如图7D所示，参考颗粒族群的前向散射(FS)峰高分布为Fr’(x)，目标颗粒族群的前向散射(FS)峰高分布为Ft’(x)。目标颗粒的直径分布Gt’(x)可通过使用Fr’(x)修正Ft(x)来确定，如以下面等式(10)所示。
Gt′(x)＝Deconv{Ft′(x),Fr′(x)} (10)
与上述讨论类似，当存在多个目标颗粒和参考颗粒以确保满足以下等式(11)的要求时，确定的目标颗粒直径分布相等，如以下等式(12)所示。
Gt′ (x)＝Gt(x) (12)
这意味着使用描述于此的方法，对于相同目标颗粒在不同场景下的确定的直径分布是一致的。
图8示出了确定血细胞尺寸信息的方法。首先，在S801中，卡盒接收具有血细胞的样本，并将卡盒放置在如图2所述的分析仪中。其次在S802中，分析仪测量来自于卡盒中血细胞和参考颗粒的信号。第三步在S803中，对信号进行分析以获得信号信息。第四步在S804中，将血细胞的信号信息区分于参考颗粒的信号信息。第五步在S805中，可以通过用参考颗粒的信号信息修正血细胞的信号信息来确定血细胞的大小信息。确定的尺寸信息的示例可包括但不限于红细胞(RBC)的尺寸、多个红细胞(RBC)的平均尺寸(即平均红细胞体积(MCV))、多个红细胞(RBC)的尺寸分布(即红细胞分布宽度(RDW))、血液中红细胞(RBC)的体积百分比(即红细胞压积HCT)、多个血小板的平均体积(即平均血小板体积(MPV))、血液中血小板(PLT)体积百分比(即血小板压积)等。
图9A示出了描述于此的流控卡盒的非限制性示例。所述流控卡盒可包括：配置用于接收样品的第一腔室901，通过流体导管903与第一腔室901流体连接的流动室902，以及通过流体导管905与流动室902流体连接的第二腔室904.接收到第一腔室901的样品可离开第一腔室901并进入流动室902以被入射光束照射。分析仪可测量和分析来自流动室中样品的信号。流出流动室902的样品可收集于第二腔室904中。可施加气动压力到第一腔室901，以驱动样品进入流动室902进行信号测量。作为气动压力的替代，可以使用各种其他类型的驱动机构，这些驱动机构的非限制性示例可包括但不限于重力、毛细管力、电泳和离心力等。在本例中，具有目标颗粒(例如血细胞)和参考颗粒的样品可接收进入第一个腔室901。
图9B示出了描述于此的流控卡盒的另一个非限制性示例。在本例中，第一腔室901包含参考颗粒906(例如：微珠)。具有目标颗粒(例如血细胞)的样品可接收进入到第一腔室901中并与参考颗粒906混合以形成样品混合物。然后在流动室902中测量该样品混合物。
图9C示出描述于此流控卡盒的另一个非限制性示例。在本例中，第一腔室901包含具有参考颗粒(例如：微珠)的试剂907。首先，可在流动室902中测量具有参考颗粒的试剂907并将其收集到第二腔室904中。其次，具有目标颗粒的样品(例如：血细胞)可接收进入到第一腔室901中，然后测量于流动室902中。测量来自于具有参考颗粒的试剂907的信号，并测量来自于具有目标颗粒(例如：血细胞)的样品的另一信号。
图9D示出描述于此的流控卡盒的另一个非限制性示例。在本例中，第一腔室901包含具有参考颗粒(例如：微珠)试剂908和表面活性剂。表面活性剂的示例可包括但不限于十二烷基三甲基氯化铵、十二烷基三甲基氯化铵、十二烷基硫酸钠等。
图10A–10C示出了确定血细胞尺寸信息的方法的非限制性示例。在本例中，血细胞为红细胞(RBC)，参考颗粒为微珠。首先，如图9B所述，具有多个红细胞(RBC)的样品接收进入到流控卡盒中，并与流控卡盒中的微珠形成样品混合物。流控卡盒放置于分析仪中。当包括红细胞(RBC)和微珠的样品混合物流通过流动室时，分析仪同时测量前向散射(FS)和荧光(FL)信号(图10A)。每对前向散射(FS)峰和荧光(FL)峰代表在样品混合物流中侦测到的红细胞(RBC)或微珠。前向散射(FS)峰数NFS和每个前向散射(FS)峰高(hi,i＝1,2,3,…,NFS)可获取为该前向散射(FS)信号的信号信息。荧光(FL)峰数NFL和每个荧光(FL)峰高(li,i＝1,2,3,…,NFL,NFL＝NFS)可获取为该荧光(FL)信号的信号信息。可以获得荧光(FL)峰高li对于前向散射(FS)峰高hi的散点图(图10B)。通过在散点图中设置荧光(FL)峰高的阈值使得两个族群可以相互区分。荧光(FL)峰高大于阈值的族群来自微珠。这是通过使用微珠的荧光强度比红细胞强加以实现的。该族群中前向散射(FS)峰数Nbead和每个前向散射信号峰高(hbead(j),j＝1,2,3,…Nbead)可获取为微珠的前向散射(FS)信号信息。此外，可根据以下等式(13)计算微珠的平均前向散射(FS)峰高hbead(avg)。
同时，另一个荧光(FL)峰高小于阈值的族群是红细胞(RBC)。该族群中前向散射(FS)峰数NRBC和每个前向散射(FS)峰高(hRBC(k),k＝1,2,3,…,NRBC)可获取为红细胞(RBC)的前向散射(FS)信号信息。类似地，可根据以下等式(14)计算红细胞的平均前向散射(FS)峰高hRBC(avg)。
样品的平均红细胞体积(MCV)可通过以下所示等式(15)使用hbead(avg)来修正hRBC(avg)来计算，其中a是平均红细胞体积(MCV)预定校正曲线1已知常数(图10C)。
此外，样品的红细胞压积HCT可按以下等式(16)所示来确定，其中Vs是接收到流控卡盒中的样品的已知体积。
图11A–11C示出确定血细胞尺寸信息的方法的另一个非限制性示例。在本例中，血细胞为血小板(PLT)且参考颗粒为微珠。首先，如图9B所述，将具有多个血小板(PLT)的样品接收到流控卡盒中，并与流控卡盒中的微珠形成样品混合物。流控卡盒放置在分析仪中。当包括血小板(PLT)和微珠的样品混合物流通过流动室时，分析仪同时测量前向散射(FS)和荧光(FL)信号(图11A)。每对前向散射信号峰和荧光峰代表样品混合物流中的血小板或微珠。前向散射(FS)峰数NFS和每个前向散射(FS)峰高(hi,i＝1,2,3,…,NFS)可获取为该前向散射(FS)信号的信号信息。荧光(FL)峰的数目NFL和每个荧光(FL)峰高(li,i＝1,2,3,…,NFL,NFL＝NFS)可获取为该荧光(FL)信号的信号信息。可以获得荧光(FL)峰高li和前向散射(FS)峰高hi的散点图(图11B)。通过在散点图中设置荧光(FL)峰高阈值，可以区分两个族群。荧光(FL)峰高大于阈值的族群来自微珠，因为用于流控卡盒中的微珠具有比血小板(PLT)更高的荧光强度。该族群中前向散射(FS)峰数Nbead和每个前向散射(FS)峰高(hbead(j),j＝1,2,3,…,Nbead)可获取为微珠的前向散射(FS)信息。此外，可通过等式(13)获得微珠的平均前向散射(FS)峰高hbead(avg)。同时，荧光(FL)峰高小于阈值的其他族群来自血小板(PLT)。该族群中前向散射(FS)峰数NPLT和每个前向散射(FS)峰高(hPLT(k),k＝1,2,3,…,NPLT)可获取为血小板的前向散射(FS)信号信息。类似地，可根据以下等式(17)计算血小板(PLTs)平均前向散射峰高hPLT(avg)。
样品的平均血小板压积(MPV)可以根据以下等式(18)通过hbead修正hPLT(avg)来计算，其中b是平均血小板压积(MPV)预定校正曲线2已知常数(图11C)。
此外，利用进入流控卡盒的样品的已知体积Vs，可由以下等式(19)确定样品的血小板压积(Plateletcrit)
图12A–12B示出确定血细胞尺寸信息的方法的再一个非限制性示例。在本例中，血细胞为红细胞(RBCs)和血小板(PLTs)，而参考颗粒为微珠。首先，如图9B所示，具有多个红细胞和血小板的样品接收进入到流控卡盒中，并与流控卡盒中的微珠形成样品混合物。流控卡盒放置在分析仪中。当具有红细胞(RBC)、血小板(PLT)和微珠的样品混合物流通过流动室时，分析仪同时测量前向散射(FS)信号和荧光(FL)信号(图12A)。每对前向散射(FS)峰和荧光(FL)峰对应于样品混合物流中的红细胞、血小板或微珠。前向散射(FS)峰数NFS和每个前向散射(FS)峰高(h(i),i＝1,2,3,…,NFS)作为信号信息。荧光(FL)峰数NFL和每个荧光(FL)峰高(l(i),i＝1,2,3,…,NFL)可获取为信号信息。可以获得荧光(FL)峰高l(i)和前向散射(FS)峰高h(i)的散点图(图12B)。通过在散点图中设置前向散射(FS)峰高阈值1和荧光(FL)峰高阈值2，可以将三个族群彼此区分开来。前向散射(FS)峰高大于阈值1且荧光(FL)峰高小于阈值2的族群来自红细胞(RBC)。前向散射(FS)峰高小于阈值1的族群来自血小板(PLT)。前向散射(FS)峰高大于阈值1且荧光(FL)峰高大于阈值2的族群来自微珠。这种分离是通过使用尺寸大于血小板而荧光强度大于红细胞的微珠实现的。红细胞族群中前向散射(FS)峰数NRBC和每个前向散射(FS)峰高(hRBC(j)j＝1,2,3,…,NRBC)可获取为红细胞(RBC)的前向散射(FS)信号信息。此外，可通过等式(14)获得红细胞(RBC)的平均前向散射(FS)峰高hRBC(avg)。血小板(PLT)族群中前向散射(FS)峰数NPLT和每个前向散射(FS)峰高(hPLT(k),k＝1,2,3,…,NPLT)可获取为血小板(PLT)的前向散射(FS)信号信息。此外，可通过等式(17)获得微珠的平均前向散射(FS)峰高hPLT(avg)，微珠族群中前向散射(FS)峰数Nbead和每个前向散射信号峰高(hbead(m),m＝1,2,3,…,Nbead)可获取为微珠的前向散射(FS)信息。此外，可通过等式(13)获得微珠的平均前向散射(FS)峰高hbead(avg)。因此，可使用等式(15)确定样品的平均红细胞体积(MCV)，且可使用等式(16)确定样品的红细胞压积(HCT)。同时，可使用等式(18)确定样品的平均血小板压积(MPV)，且可使用等式(19)确定样品的血小板压积。
图13A–13B示出确定血细胞尺寸信息的方法的又再一个非限制性示例。在本例中，血细胞为红细胞(RBC)和血小板(PLT)，而参考颗粒为微珠。首先，如图9D所示，具有多个红细胞(RBC)和血小板(PLT)的样品接收进入到流控卡盒中，并与流控卡盒中的微珠和表面活性剂形成样品混合物。表面活性剂用于两个目的。首先，它有助于防止微珠在流控卡盒中储存和在流动室中测量期间聚集。第二，它将红细胞(RBC)从双凹面形状变为球形，且因此在流动室中测量球形红细胞(RBC)(图13A)。将流控卡盒放置在分析仪中。当具有红细胞(RBC)、血小板(PLT)和微珠的样品混合物流通过流动室时，分析仪同时测量前向散射(FS)信号和荧光(FL)信号。每对前向散射(FS)峰和荧光(FL)峰对应于样品混合物流中的红细胞(RBC)、血小板(PLT)或微珠。前向散射信号(FS)峰数NFS和每个前向散射(FS)峰高(h(i),i＝1,2,3,…,NFS)可获取为前向散射(FS)信号信息。荧光(FL)峰数NFL和每个荧光(FL)峰高(l(i),i＝1,2,3,…,NFL)可获取为荧光(FL)信号信息。可以获得荧光(FL)峰高l(i)和前向散射(FS)峰高h(i)的散点图(图13B)。
为了比较，可不使用表面活性剂获得来自于从相同样品中的另一散点图(图13C)。在图13C中而不是在图13B中的微珠颗粒族群群有旁瓣，该旁瓣是由于没有表面活性剂的微珠聚集引起的。此外，图13B中来自于球形红细胞(RBC)的前向散射(FS)信号具有比图13C中来自于双面凹的红细胞(RBC)的前向散射(FS)信号更大前向散射(FS)峰高，因此，图13B中阈值2可以实现比图13C中的阈值3更清晰的红细胞(RBC)与微珠的分离。此外，球形红细胞(RBC)的前向散射(FS)峰高具有比双凹面红细胞(RBC)的前向散射信号(FS)峰高更窄的分布，在确定诸如平均红细胞体积(MCV)和红细胞压积(HCT)等的血细胞尺寸信息时，可获得更准确的红细胞信号(RBC)信息。
表1示出了使用或不使用本公开所述方法测量的血细胞尺寸信息的比较。对含有红细胞(RBC)的样品进行三次重复测量。平均红细胞体积(MCV)和红细胞压积(HCT)遵循图10A-10C中所示的示例确定。如表1所示，计算三个重复测量的变异系数(CV)。使用公开的方法，红细胞压积(HCT)测量的变异系数(CV)从9.3％降至0.9％。使用所公开的方法，平均红细胞体积(MCV)测量的变异系数CV从5.1％降至1.5％。这些结果表明，可以使用本公开所述的方法更准确地确定血细胞的尺寸信息。
表1
图14A–14B示出了确定血细胞尺寸信息的方法的另一个示例。在本例中，血细胞为白细胞(WBC)，而参考颗粒为微珠。首先，如图9C所示，具有多个白细胞(WBC)的样品接收进入到流控卡盒中。样品接收进入到包含具有微珠的试剂907以及荧光染料的腔室901中，荧光染料用于通过与绑定核酸来选择性标记白细胞(WBC)。荧光染料的示例可包括但不限于吖啶橙、碱性橙21等。然后将流控卡盒放入分析仪中。分析仪提供一种启动方法，以驱动卡盒中的流体传输。使用该驱动方法，接收到的样品和试剂907在腔室901中形成样品混合物。样品混合物在流动室902中进一步传输和测量，流动室902可以是无鞘流流动室，其中前向(FS)信号和荧光(FL)信号由分析仪同时测量(图14A)。
在图14A中，每对前向散射(FS)峰和荧光(FL)峰对应于样品混合流中的白细胞(WBC)或微珠。与图13B中的示例类似，可通过设置前向散射信号阈值、荧光(FL)阈值或其前向散射(FS)与荧光(FL)的组合来区分微珠族群与白细胞(WBC)族群。同时，可由不同水平的前向散射(FS)和荧光(FL)将白细胞(WBC)区分为包括淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞的亚族群。微珠的平均前向散射(FS)和荧光(FL)峰高FSbead(avg)和FLbead(avg)可获得于测量信号。微珠的该信号信息随后可用于修正血细胞的尺寸信息。例如，单核细胞亚族群的平均前向散射(FS)和荧光(FL)峰高FSMON(avg)和FLMON(avg)可根据以下等式(20)和(21)进行修正。
在上述等式(20)和(21)中，FS’MON(avg)和FL’MON(avg)是单核细胞亚族群的修正峰高。FS’MON(avg)可用于单核细胞尺寸的定量测量，因为前向光散射(FS)强度与细胞尺寸成正比。FL’MON(avg)也可用于单核细胞尺寸的定量测量。
(Susan A.Moore,Cell size specific binding of the fluorescentdyecalcofluor to budding yeast,Biochimica at BiophysicaActa,Vol.1035,
1990,Pages 206-213).
对于如图14B所示另一个例子，单核细胞亚族群在前向散射(FS)和荧光(FL)峰高的分布宽度、FSMON(width)和FLMON(width可根据以下等式(22)和(23)进行修正
在上述等式(22)和(23)中，FS’MON(width)和FL’MON(width)是单核细胞亚族群在前向散射(FS)和荧光(FL)峰高中的修正分布宽度。类似地，它们可以用作单核细胞的尺寸测量，例如单核细胞的单核细胞分布宽度(MDW)。
诸如单核细胞的平均尺寸和单核细胞分布宽度(MDW)的单核细胞的尺寸测量，已显示出微有用的临床生物标记物(美国专利申请：US2019/0324035A1)。然而，测量对分析仪的性能漂移非常敏感，例如单核细胞测量中激光光斑和流动室之间的对准漂移。因此，需要定期经常进行系统校准以保持测量精度。通过使用诸如微珠的参考颗粒测量来修正单核细胞的测量值，可以避免系统校准的负担，并使在诸如医院急诊室的及时诊疗场所测量这种临床生物标记物成为可能。
在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以对所示的各种部件以及未示出的部件进行多种不同的布置。描述本发明的实施例的意图是说明性的而不是限制性的。对于本领域技术人员来说，不偏离其范围的替代实施例将变得显而易见。本领域技术人员可在不脱离本发明范围的情况下开发实施上述改进的替代方法。应当理解，某些特征和子组合是实用的，可以在不参考其他特征和子组合的情况下使用，并且在权利要求的范围内考虑。除非另有说明，否则不需要按照所述的特定顺序执行各种图中列出的所有步骤。
Claims (20)
1.一种方法包括步骤：测量卡盒设备中来自于目标颗粒和参考颗粒的信号，其中将所述卡盒设备接收进入到分析仪中以执行所述信号的所述测量，以及当所述目标颗粒和所述参考颗粒流经所述卡盒设备中的流动室时，测量来自于所述目标颗粒和所述参考颗粒的所述信号；分析所述测量信号，以获得所述目标颗粒的信号信息和所述参考颗粒的信号信息；以及通过用所述参考颗粒的所述信号信息修正所述目标颗粒的所述信号信息来确定所述目标颗粒的尺寸信息。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述参考颗粒具有已知的尺寸。
3.根据权利要求1所述的方法，其中测量两种或更多种类型的信号，以将所述目标颗粒的所述信号信息区分于所述参考颗粒的所述信号信息。
4.根据权利要求1所述的方法，其中：测量的所述信号包括光信号、电信号、声信号、磁信号或其组合；并且所述光信号包括前向散射信号、荧光信号或其组合。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所获得的所述信号信息包括峰高、峰宽、峰面积、平均峰高、平均峰宽、平均峰面积、峰高分布、峰宽分布、峰面积分布、峰高分布宽度或其组合。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所确定的所述尺寸信息包括颗粒直径、颗粒体积、平均颗粒直径、平均颗粒体积、颗粒直径分布、颗粒体积分布或其组合。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述流动室是无鞘流流动室。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述参考颗粒和所述目标颗粒在流过所述流动室之前在所述卡盒设备中形成样品混合物。
9.根据权利要求1所述的方法，其中：所述卡盒进一步包含配置用于标记所述目标颗粒的荧光染料或表面活性剂；所述样品混合物包括：(a)所述荧光染料、所述参考颗粒和所述目标颗粒的组合，或(b)所述表面活性剂、所述参考颗粒和所述目标颗粒的组合。
10.根据权利要求1所述的方法,其中所述目标颗粒是血细胞。
11.根据权利要求1所述的方法,其中所确定的所述尺寸信息包括列表的至少一个项目，所述列表包括：包含血细胞的样本的平均红细胞体积(MCV)、红细胞分布宽度(RDW)、红细胞压积(HCT)、平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、血小板压积、单核细胞平均大小、以及单核细胞宽度分布(MWD)。
12.根据权利要求9所述的方法，其中所述表面活性剂配置用于将所述目标颗粒改变为球形，并且所述荧光染料配置用于标记所述目标颗粒。
13.根据权利要求1所述的方法，其中通过所述参考颗粒信号信息修正所述目标颗粒信号信息的所述步骤进一步包括通过所述参考颗粒信号峰对所述目标颗粒信号峰进行除法求值的步骤。
14.根据权利要求13所述的方法，其中：
所述目标颗粒的所述信号峰为选自于包含所述目标颗粒的前向散射峰高和所述目标颗粒的荧光峰高的集合；以及
所述参考颗粒的所述信号峰为选自于包含所述参考颗粒的前向散射峰高和所述参考颗粒的荧光峰高的集合。
15.根据权利要求1所述的方法，其中通过所述参考颗粒信号信息修正目标颗粒信号信息的所述步骤进一步包括通过多个参考颗粒的平均信号峰对多个目标颗粒的平均信号峰进行除法求值的步骤。
16.根据权利要求15所述的方法，其中：
所述多个目标颗粒的所述平均信号峰为选自于包含所述多个目标颗粒的平均前向散射峰高和所述多个目标颗粒的平均荧光峰高的集合；以及
所述多个参考颗粒的所述平均信号峰为选自于包含所述多个参考颗粒的平均前向散射峰高和所述多个参考颗粒的平均荧光峰高的集合。
17.根据权利要求1所述的方法，其中通过所述参考颗粒的信号信息修正所述目标颗粒的所述信号信息的所述步骤包括通过多个参考颗粒平均信号峰对多个目标颗粒分布宽度进行除法求值的步骤。
18.根据权利要求17所述的方法，其中：
所述多个目标颗粒的所述分布宽度为选自于包含所述目标颗粒的前向散射峰高的分布宽度和所述目标颗粒荧光峰高的分布宽度的集合；以及
所述多个参考颗粒的所述平均信号峰为选自于包含平均前向散射峰高和平均荧光峰高的集合。
19.根据权利要求1所述的方法，其中通过所述参考颗粒的信号信息修正所述目标颗粒的所述信号信息的所述步骤进一步包括多个参考颗粒的平均信号峰来对所述目标颗粒的信号峰进行除法求值的步骤。
20.根据权利要求19所述的方法，其中：
所述目标颗粒的所述信号峰为选自于包含所述目标颗粒的前向散射峰高和所述目标颗粒的荧光峰高的集合；以及
所述多个参考颗粒的所述平均信号峰为选自于包含所述多个参考颗粒的平均前向散射峰高和所述参考颗粒的平均荧光峰高的集合。
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