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CN113616620B - 安罗替尼白蛋白纳米颗粒及其制备方法和用途、及包含其的制剂 - Google Patents

安罗替尼白蛋白纳米颗粒及其制备方法和用途、及包含其的制剂 Download PDF

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CN113616620B
CN113616620B CN202110923366.6A CN202110923366A CN113616620B CN 113616620 B CN113616620 B CN 113616620B CN 202110923366 A CN202110923366 A CN 202110923366A CN 113616620 B CN113616620 B CN 113616620B
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Abstract

本发明提出了一种安罗替尼白蛋白纳米颗粒及其制备方法和用途、及包含其的制剂，所述安罗替尼白蛋白纳米颗粒，包括安罗替尼或其药学上可接受的盐和至少一种白蛋白，其中纳米颗粒的平均粒径不超过1微米。本发明还提供了一种安罗替尼白蛋白纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：混合：一种有机溶剂，将安罗替尼或其盐溶解在其中，与水或水性溶液、以及白蛋白混合；从上述混合物中除去溶剂得到安罗替尼或其盐的白蛋白纳米颗粒。本发明所提出了包括安罗替尼白蛋白纳米颗粒的制剂，重现性好、粒径小且分布均匀，并且水溶性好，在肿瘤微环境中实现化学键的缓慢断裂与药物的高效释放，从而实现提高安罗替尼药效、降低安罗替尼毒副作用的效果。

Description

安罗替尼白蛋白纳米颗粒及其制备方法和用途、及包含其的 制剂
【技术领域】
本发明涉及药物制剂的技术领域，特别是一种安罗替尼白蛋白纳米颗粒及其制备方法和用途、及包含其的制剂。
【背景技术】
安罗替尼是我国自主研发的一种小分子多靶点络氨酸激酶抑制剂。研究表明它能有效抑制VEGFR、PDGFR、FGFR、c-Kit等激酶，具有抗肿瘤血管生成和抑制肿瘤生长的作用。化学名称：1-[[[4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基-6-甲氧基喹啉-7-基]氧基]甲基]环丙胺。目前市场上使用的制剂为盐酸安罗替尼片，商品名为福可维。
白蛋白是哺乳动物最常见的血浆蛋白，由肝脏细胞生产，通常溶解于血浆中。它作为一种内源性蛋白，不会引起机体的免疫反应，并且具有良好的水溶性、生物相容性和生物稳定性等优点。
【发明内容】
本发明的目的是提供了一种重现性好、粒径小且分布均匀，水溶性好的安罗替尼白蛋白纳米制剂，能够实现提高安罗替尼药效、降低安罗替尼毒副作用的效果。
为实现上述目的，本发明提出了一种安罗替尼白蛋白纳米颗粒，包括安罗替尼或其盐和至少一种白蛋白，其中纳米颗粒的平均粒径不超过1微米，所述其盐为安罗替尼药学上可接受的盐。
作为优选，纳米颗粒中的一部分安罗替尼或其盐与所述至少一种白蛋白结合，另一部分安罗替尼被所述至少一种白蛋白包被。
作为优选，所述白蛋白选自人血清白蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白、α-20巨球蛋白中的一种或者多种。
纳米颗粒中安罗替尼或其盐与白蛋白的质量比为10:1-1:50，优选的，所述安罗替尼或其盐与白蛋白的质量比为10:1-1:10。
作为优选，所述纳米颗粒中不含有表面活性剂。
作为优选，所述纳米颗粒中不含有磷脂、蓖麻油及其衍生物。
作为优选，所述纳米颗粒还包括交联剂，所述的交联剂包括化学交联剂和生物交联剂，所述的化学交联剂包括但不限于戊二醛、乙酸酐、二缩水甘油基乙醚、辛二亚氨酸甲酯、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺等；在本发明的一些实施方案中，所述纳米颗粒还进一步含有生物交联剂，所述的生物交联剂包括但不限于京尼平。
在本发明的一些实施方案中，所述的颗粒为纳米粒；在一些实施方案中，所述颗粒的平均粒径为10nm～1000nm；在本发明的一些实施方案中，所述颗粒的平均粒径为50nm～500nm；在本发明的一些实施方案中，所述颗粒的平均粒径为100nm～300nm；在本发明的一些实施方案中，所述颗粒的平均直径粒径为100nm～200nm；在本发明的一些实施方案中，所述颗粒的平均粒径不超过200nm；在本发明的一些实施方案中，所述颗粒的平均粒径为10nm-100nm；在本发明的一些实施方案中，所述颗粒的平均粒径不超过100nm；在一些实施方案中，包封率为50～95％。
在一些实施方案中，所述的纳米颗粒的PDI＜0.2；在一些实施方案中，所述的纳米颗粒的PDI＜0.1。
本发明的纳米颗粒可按照本领域公知的方法来制备，包括但不限于反溶剂法、盐析法、溶剂挥发法以及纳米技术等。所述的反溶剂法可以是例如分别配制安罗替尼溶液与白蛋白溶液后进行混合搅拌，视需要加入适量交联剂，最后透析冻干得到纳米颗粒。所述的盐析法可以是例如将安罗替尼溶液与白蛋白溶液于盐溶液(例如磷酸氢二钠溶液)迅速混合，而后与加热的去离子水混合，并搅拌固化，视需要降温，最后使用中空纤维柱超滤浓缩提纯并冻干。所述的溶剂蒸发法可以是例如通过溶剂蒸发技术从不同条件下制备水包油乳剂中形成药理活性物质的纳米颗粒。此外，也可通过高切变力(如超声、高压匀浆或类似条件)，然后在减压中蒸发以产生一种由白蛋白包被的安罗替尼或其盐，所允许的蒸发方法包括但不限于旋转式蒸发器、薄膜蒸发器、喷雾干燥机、冷冻干燥机，超滤也可以用来除去溶剂。也可以不需要高切变力，仅仅通过选择可自发形成微乳剂的物质即可形成纳米颗粒。
本发明还提供了一种安罗替尼白蛋白纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：A)混合：
i)一种有机溶剂，安罗替尼或其盐溶解在其中；和
ii)水或水性溶液；和
iii)白蛋白；
B)从A)的混合物中除去溶剂得到安罗替尼或其盐的白蛋白纳米颗粒。
作为优选，上述制备方法具体包括以下步骤：
(a)将安罗替尼溶解于有机溶剂中，得到安罗替尼溶液；
(b)将白蛋白溶解于水中，得到白蛋白溶液；
(c)将步骤(a)与步骤(b)所得到的溶液混合，加入适量交联剂，搅拌；
(d)将步骤(c)混合物经离心、洗涤、脱水处理，得到安罗替尼白蛋白纳米颗粒。
作为优选，步骤(a)中的有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、三氯甲烷、四氢呋喃、哌啶中的一种或多种。
作为优选，步骤(a)中的安罗替尼溶液浓度为0.01-100mg/mL。
作为优选，所述白蛋白为人血清白蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白中的一种或多种。
作为优选，步骤(b)中的白蛋白溶液浓度为0.01-100mg/mL。
作为优选，步骤(c)中安罗替尼溶液与白蛋白溶液的用量体积比为1:100—100:1。
作为优选，所述交联剂为京尼平、戊二醛、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺中的一种或多种。
在一些实施方案中，步骤(c)中的交联剂为京尼平。
在一些实施方案中，步骤(c)中的交联剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，EDC·HCl与NHS的用量摩尔比为1-10:1。
在一些实施方案中，步骤(c)中的交联剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，EDC·HCl与NHS的用量摩尔比为5:1。
在一些实施方案中，步骤(c)中的交联剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，EDC·HCl与NHS的用量摩尔比为10:1。
在一些实施方案中，步骤(c)中的温度为0-100℃。
在一些实施方案中，步骤(c)中持续搅拌时间为1-24h。
作为优选，步骤(d)中的脱水处理选自真空干燥、冷冻干燥、喷雾干燥、减压蒸馏中的任意一种。
本发明还提供了一种安罗替尼白蛋白纳米颗粒的用途，用于制备药物组合物，所述颗粒的平均粒径不超过1微米。在一些实施方案中，其中一部分安罗替尼或其盐与所述至少一种白蛋白结合，而其它部分被所述至少一种白蛋白包被。其中所述药物组合物适合全身给予患者，具有降低的毒性。
本发明还提供了一种安罗替尼或其盐在用于制备药学上可接受的药物组合物中的用途，其中所述药物组合物包括安罗替尼或其盐与至少一种白蛋白的纳米颗粒，所述颗粒的平均粒径不超过1微米。
在一些实施方案中，所述药物组合物是通过口服、肌肉内、静脉内、腹腔内或吸入给药。
在一些实施方案中，所述药物组合物用于治疗胃肠道间质瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、乳腺癌、肾癌、甲状腺髓样癌、食管鳞癌、结肠癌或肝癌。
本发明还提供了一种冻干制剂，包括上述安罗替尼或其盐与至少一种白蛋白的纳米颗粒，其中所述颗粒的平均直径不超过1微米，在一些实施方案中，一部分安罗替尼或其盐与至少一种白蛋白结合，而其它部分被所述白蛋白包被。其中所述冻干制剂适合于通过重构向需要的患者给予安罗替尼或其盐，并且所述制剂包括安罗替尼或其盐的颗粒，平均直径不超过1微米。在本发明的一些实施方案中，所述冻干制剂中还进一步含有冷冻保护剂，包括但不限于甘露醇、蔗糖、氨基乙酸等。
本发明还提供了一种重构制剂，含有上述的冻干制剂和水或水性溶液；在一些实施方案中，包括一部分与至少一种白蛋白结合而其它部分被至少一种白蛋白包被的安罗替尼或其盐，其中所述制剂适合于向需要的患者给予安罗替尼或其盐，且所述制剂，加盐水重构后获得安罗替尼或其盐的颗粒的胶体溶液。
所述的冻干制剂复溶时，可加入水、缓冲液(例如磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、碳酸盐缓冲液)、氨基酸溶液、维生素溶液、碳水化合物的溶液(例如5％葡萄糖溶液)或者盐水(例如生理盐水、0.9％氯化钠注射液)。
上述所得的冻干制剂，加入水性介质后可快速复溶，在室温下可稳定放置，优选的，在室温下放置10-20天仍保持稳定，粒径和包封率没有明显变化。纳米颗粒的结构稳定，且安全有效。
所述的水性溶液包括但不限于缓冲液(例如磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、碳酸盐缓冲液)、氨基酸溶液、维生素溶液、碳水化合物的溶液(例如5％葡萄糖溶液)或者盐水(例如生理盐水、0.9％氯化钠注射液)。
本发明还提供了一种液体制剂，包括安罗替尼或其盐与至少一种白蛋白的纳米颗粒，所述颗粒的平均粒径不超过1微米；在一些实施方案中，所述安罗替尼或其盐的一部分与所述白蛋白结合而其它部分被所述白蛋白包被，其中所述制剂含有水、白蛋白和安罗替尼或其盐，其中所述制剂包括安罗替尼或其盐的颗粒，平均直径不超过1微米。在本发明的一些实施方案中，所述液体制剂中还进一步含有冷冻保护剂，包括但不限于甘露醇、蔗糖、氨基乙酸等。
在一些实施方案中，所述的液体制剂以少于250mL的体积给药；在一些实施方案中，所述的液体制剂以少于150mL的体积给药；在一些实施方案中，所述的液体制剂以少于60mL的体积给药。
再一方面，本发明提供了一种降低安罗替尼毒副作用和/或提高疗效的方法，所述方法包括将所述的安罗替尼或其盐以药学上可接受的药物组合物全身性地给予有需要的患者。
本发明中，所述的毒副作用包括但不限于高血压、手足皮肤反应、乏力、腹泻、口腔黏膜炎、口咽疼痛、皮疹、咳嗽、声音嘶哑、甲状腺功能减退和咯血。
再一方面，本发明提供了所述纳米颗粒或药物组合物在制备胃肠道间质瘤药物中的用途。所述的胃肠道基质瘤包括但不限于原发性胃肠道间质瘤和/或继发性胃肠道间质瘤。在一些实施方案中，所述的胃肠道间质瘤包括低危型胃肠道间质瘤、中危型胃肠道间质瘤和/或高危型胃肠道间质瘤。在一些实施方案中，所述的胃肠道间质瘤为纺锤细胞型胃肠道间质瘤、上皮样细胞型胃肠道间质瘤和/或两者兼有型胃肠道间质瘤。
本发明的有益效果：本发明提供了一种重现性好、粒径小且分布均匀，水溶性好的安罗替尼白蛋白纳米制剂，在肿瘤微环境中实现化学键的缓慢断裂与药物的高效释放，从而实现提高安罗替尼药效、降低安罗替尼毒副作用的效果。同时因为白蛋白可优先被肿瘤组织摄取以及纳米制剂在体内所具有的EPR效应，都能促使安罗替尼白蛋白在肿瘤组织的富集。安罗替尼白蛋白纳米制剂制备工艺简单，适合工业化生产。
本发明的特征及优点将通过实施例结合附图进行详细说明。
【附图说明】
图1中，A图为安罗替尼白蛋白纳米颗粒的粒径分布图，B图为72h的粒径变化图；
图2为安罗替尼白蛋白纳米颗粒的TEM图；
图3为不同环境下安罗替尼白蛋白纳米颗粒的药物释放行为；
图4为体外抗肿瘤活性的结果，即不同投药比的安罗替尼白蛋白纳米颗粒对胃肠道间质瘤细胞的杀伤作用；
图5为体外生物毒性评价，即不同投药比的安罗替尼白蛋白纳米颗粒对正常肝细胞的生物毒性；
图6为体内抗肿瘤活性评价结果，其中A图为给药结束后各组所取的肿瘤图片；B图为荷瘤鼠给药过程中肿瘤体积变化曲线图；
图7为体内生物安全性评价结果，即荷瘤鼠给药过程中体重变化曲线图。
【具体实施方式】
下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细阐述。应理解，这些实施例仅用于说明本
发明而不用于限制本发明的范围。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。
实施例1
安罗替尼白蛋白纳米颗粒的制备，具体步骤如下：
(a)首先配制安罗替尼溶液，将安罗替尼充分溶解于二甲基亚砜中，得到浓度为0.01mg/mL的安罗替尼溶液；
(b)同时配制白蛋白溶液，将人血清白蛋白溶解于超纯水中，得到浓度为0.01mg/mL的白蛋白溶液；
(c)将安罗替尼溶液与白蛋白溶液中进行混合搅拌，调节温度在20℃并迅速加入京尼平进行进一步反应，搅拌反应12h；
(d)将步骤(c)得到的反应混合物分装至离心管进行8000rpm离心10min，用超纯水和乙醇洗涤3次，进一步在室温下超纯水中进行透析，然后在-20℃冰箱进行冰冻后置于冻干机中冷冻干燥，最后得到的产物即为安罗替尼白蛋白纳米颗粒；
(e)所述京尼平与白蛋白用量的摩尔比为1：1；
(f)所述的安罗替尼白蛋白纳米颗粒形态近球形，粒径＜200nm。
实施例2
安罗替尼白蛋白纳米颗粒的制备，具体步骤如下：
(a)首先配制安罗替尼溶液，将安罗替尼充分溶解于二甲基亚砜中，得到浓度为40mg/mL的安罗替尼溶液；
(b)同时配制白蛋白溶液，将牛血清白蛋白溶解于超纯水中，得到浓度为40mg/mL的白蛋白溶液；
(c)将安罗替尼溶液与白蛋白溶液中进行混合搅拌，调节温度在40℃并迅速加入京尼平进行进一步反应，搅拌反应24h；
(d)将步骤(c)得到的反应混合物分装至离心管进行10000rpm离心15min，用超纯水和乙醇洗涤3次，进一步在室温下超纯水中进行透析，然后在-20℃冰箱进行冰冻后置于冻干机中冷冻干燥，最后得到的产物即为安罗替尼白蛋白纳米颗粒；
(e)所述京尼平与白蛋白用量的摩尔比为2：1；
(f)所述的安罗替尼白蛋白纳米颗粒形态近球形，粒径＜200nm。
实施例3
安罗替尼白蛋白纳米颗粒的制备，具体步骤如下：
(a)首先配制盐酸安罗替尼溶液，将盐酸安罗替尼充分溶解于甲醇中，得到浓度为0.01mg/mL的安罗替尼溶液；
(b)同时配制白蛋白溶液，将人血清白蛋白溶解于超纯水中，得到浓度为0.01mg/mL的白蛋白溶液；
(c)将安罗替尼溶液与白蛋白溶液中进行混合搅拌，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)进行进一步反应，调节温度在30℃，搅拌反应2h；
(d)将步骤(c)得到的反应混合物分装至离心管进行5000rpm离心10min，用超纯水洗涤3次，进一步在室温下超纯水中进行透析，然后在-20℃冰箱进行冰冻后置于冻干机中冷冻干燥，最后得到的产物即为安罗替尼白蛋白纳米颗粒；
(e)所述EDC·HCl与NHS总用量与白蛋白用量的摩尔比为5：1；
(f)所述EDC·HCl与NHS的用量摩尔比为5：1；
(g)所述的安罗替尼白蛋白纳米颗粒形态近球形，粒径＜200nm。
实施例4
安罗替尼白蛋白纳米颗粒的制备，具体步骤如下：
(a)首先配制盐酸安罗替尼溶液，将盐酸安罗替尼充分溶解于超纯水中，得到浓度为100mg/mL的安罗替尼溶液；
(b)同时配制白蛋白溶液，将牛血清白蛋白溶解于超纯水中，得到浓度为100mg/mL的白蛋白溶液；
(c)将安罗替尼溶液与白蛋白溶液中进行混合搅拌，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)进行进一步反应，调节温度在35℃，搅拌反应5h；
(d)将步骤(c)得到的反应混合物分装至离心管进行7000rpm离心8min，用超纯水洗涤3次，进一步在室温下超纯水中进行透析，然后在-20℃冰箱进行冰冻后置于冻干机中冷冻干燥，最后得到的产物即为安罗替尼白蛋白纳米颗粒；
(e)所述EDC·HCl与NHS总用量与白蛋白用量的摩尔比为10：1；
(f)所述EDC·HCl与NHS的用量摩尔比为10：1；
(g)所述的安罗替尼白蛋白纳米颗粒形态近球形，粒径＜200nm。
结果如图1所示。
由图1的A图中粒径分布图可以看出，实施例操作下的安罗替尼白蛋白纳米颗粒粒径约为190nm，且粒径分布均一，继续监测72h内纳米颗粒的粒径变化，则显示颗粒基本处于稳定状态，如图1的B图所示；在图2的TEM图片中，安罗替尼白蛋白纳米颗粒为近球状，由Image J软件分析球状粒子(n＝100)的直径约为170nm，符合略小于水合粒径的状态。以上结果均证实了安罗替尼白蛋白纳米颗粒的合成。
实验分析
1、药物释放行为
选用与人体血液以及细胞器(如溶酶体和线粒体)的pH相对应的PBS溶液，pH分别为7.4和5.0，以及是否具有谷胱甘肽(GSH)，来模拟安罗替尼白蛋白纳米颗粒在血液以及胃肠道间质瘤部位药物的释放情况。具体如下：
(a)将安罗替尼白蛋白纳米颗粒放入预先准备好的透析袋中，袋子中分别装入1mL的pH为5.0和7.4、有无GSH的PBS溶液，留有1/3的空隙，密封；
(b)将透析袋分别放入装有上述9mL的PBS的离心管中，放在转速为80rpm、温度为37℃的摇床中避光震荡，记透析体积为V0，离心管中理论药物浓度为C0；
(c)分别在不同的时间点从离心管中取出V＝9mL的液体，加入到棕色小瓶中，每瓶1mL，设置三个平行，用HPLC测试其峰面积，同时将等量的PBS补加入到离心管中。通过读出的数值，根据药物相应的标准曲线求出溶液中药物浓度(μg/mL)，分别记C1、C2……Cn，求出药物累积释放量R(％)对时间的曲线；
(d)R(％)＝((Cn×V0+(Cn-1+Cn-2+……+C1)×V)/(C0×V0))×100。
如图3所示，安罗替尼白蛋白纳米颗粒在pH为7.4、无GSH的PBS中释药缓慢，24h只释放约20.2％的药物；在pH为5.0、有GSH的PBS中能够较快地释药，24h几乎完全释放药物；结果表明，安罗替尼白蛋白纳米颗粒能够在血液循环过程中只释放一小部分药物，大部分药物仍然存在于纳米颗粒中，而在其被递送到肿瘤细胞后，在该环境下纳米颗粒发生裂解，药物能够实现完全释放。因此该纳米颗粒能够一定程度增加肿瘤部位的药物含量，同时降低药物对正常细胞的毒副作用。
2、体外抗肿瘤活性评价
采用CCK-8法检测评价纳米颗粒体外抗肿瘤活性：
(a)以胃肠道间质瘤细胞GIST-882为模型，将细胞接种于96孔培养板里，每孔细胞数为3000-5000个，在37℃、5％CO2的培养箱中培养过夜；
(b)待细胞完全贴壁后，将每孔的培养液置换含有不同投药比的安罗替尼白蛋白纳米颗粒的新培养基，在37℃恒温、5％CO2的培养箱中培养24/48h；
(c)培养结束后，每孔加入CCK-8试剂，在37℃继续孵育1-4h；
(d)将孔板置于酶标仪中并于450nm波长处检测每孔的吸光度值，各组数据与对照组数据的比值作为其在该作用条件下对GIST细胞的杀伤效果。
如图4所示，不同投药比的安罗替尼白蛋白纳米颗粒与GIST-882细胞孵育后，采用CCK-8法检测细胞活性。随着孵育时间的增长，细胞活力呈现不断下降地趋势。并且，各组细胞的活力排序为，10:1组>5:1组>1:1组>游离安罗替尼组，说明在体外游离的安罗替尼对肿瘤细胞的杀伤作用最大，而1:1与5:1投药比的安罗替尼白蛋白组也能达到几乎相当的杀伤能力，10:1组则略弱一些。即安罗替尼白蛋白纳米颗粒对胃肠道间质瘤细胞具有杀伤作用，能够抑制细胞的生长繁殖。
3、体外生物毒性评价
采用CCK-8法检测评价纳米颗粒体外生物毒性：
(a)以肝细胞LO-2为模型，将细胞接种于96孔培养板里，每孔细胞数为3000-5000个，在37℃、5％CO2的培养箱中培养过夜；
(b)待细胞完全贴壁后，将每孔的培养液置换含有不同投药比的安罗替尼白蛋白纳米颗粒的新培养基，在37℃恒温、5％CO2的培养箱中培养24/48h；
(c)培养结束后，每孔加入CCK-8试剂，在37℃继续孵育1-4h；
(d)将孔板置于酶标仪中并于450nm波长处检测每孔的吸光度值，各组数据与对照组数据的比值作为其在该作用条件下对肝细胞的生物毒性。
如图5所示，以空白对照组为基准，各组的细胞活力排序为：10：1组>5：1组>1：1组>游离安罗替尼组；即游离安罗替尼组对正常肝细胞的生物毒性最大，10：1组对正常肝细胞的生物毒性相对最小。因此白蛋白对安罗替尼的修饰能够降低安罗替尼药物的生物毒性，提高其生物安全性。
4、纳米颗粒的体内抗肿瘤活性的评价
选用12只移植胃肠道间质瘤细胞的雌性裸鼠，随机均分为3组，分别为白蛋白组、安罗替尼组和安罗替尼白蛋白纳米颗粒组，小鼠体重约为20g。待各组平均肿瘤体积长至约50mm3后开始进行第一次给药，之后每隔2-3天给药一次，给药组的荷瘤鼠尾静脉注射5-10mg/kg的安罗替尼以及相应浓度的安罗替尼白蛋白纳米颗粒，对照组注射相同体积的白蛋白，共给药3-6次。每天用游标卡尺测量肿瘤的大小，称量荷瘤鼠的重量，记录荷瘤鼠的生存状态。
如图6和图7所示，相较于生理盐水空白对照组，单独作用的白蛋白对瘤组织几乎没有作用，而抗肿瘤药物安罗替尼能够明显地抑制胃肠道间质瘤的生长，证明安罗替尼适合用于治疗胃肠道间质瘤。同时安罗替尼白蛋白纳米颗粒则具有更佳的抑瘤效果，可以显著地抑制胃肠道间质瘤的生长，并且生物毒性相对较弱，即新型安罗替尼白蛋白纳米制剂能够在体内发挥纳米颗粒的靶向作用，进一步提升药效与生物安全性。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，这些等价形式不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (1)

1.一种安罗替尼白蛋白纳米颗粒的制备，其特征在于：具体步骤如下：
(a)首先配制安罗替尼溶液，将安罗替尼充分溶解于二甲基亚砜中，得到浓度为0.01mg/mL的安罗替尼溶液；
(b)同时配制白蛋白溶液，将人血清白蛋白溶解于超纯水中，得到浓度为0.01mg/mL的白蛋白溶液；
(c)将安罗替尼溶液与白蛋白溶液中进行混合搅拌，调节温度在20℃并迅速加入京尼平进行进一步反应，搅拌反应12h；
(d)将步骤(c)得到的反应混合物分装至离心管进行8000 rpm离心10 min，用超纯水和乙醇洗涤3次，进一步在室温下超纯水中进行透析，然后在-20℃冰箱进行冰冻后置于冻干机中冷冻干燥，最后得到的产物即为安罗替尼白蛋白纳米颗粒；
(e)所述京尼平与白蛋白用量的摩尔比为1：1；
(f)所述的安罗替尼白蛋白纳米颗粒形态近球形，粒径＜200nm；纳米颗粒中的一部分安罗替尼或其盐与所述至少一种白蛋白结合，另一部分安罗替尼被所述至少一种白蛋白包被。
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