CN113425730B

CN113425730B - 三萜及其二聚体类化合物在制备治疗蛋白酪氨酸磷酸酶1b所介导疾病的药物中的用途

Info

Publication number: CN113425730B
Application number: CN202110505718.6A
Authority: CN
Inventors: 胡金锋; 熊娟; 江维; 姜春筱
Original assignee: Taizhou University
Current assignee: Taizhou University
Priority date: 2021-05-10
Filing date: 2021-05-10
Publication date: 2022-10-21
Anticipated expiration: 2041-05-10
Also published as: CN113425730A

Abstract

本申请公开一种三萜及其二聚体类化合物在制备治疗蛋白酪氨酸磷酸酶1B所介导疾病药物中的用途，本申请保护性地采集少许华东黄杉植物样品(其枝叶，易再生)，分离出7种三萜及其二聚体类化合物，然后对上述分离得到的三萜及其二聚体类化合物进行了蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)抑制活性实验，实验结果表明这类化合物均具有显著的抑制活性，可用于制成预防、延缓或治疗由PTP1B介导的疾病，特别是II型糖尿病和肥胖症的药物或是作为该类药物的先导化合物。

Description

三萜及其二聚体类化合物在制备治疗蛋白酪氨酸磷酸酶1B所介导疾病的药物中的用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种三萜及其二聚体类化合物及其制备和在制备治疗蛋白酪氨酸磷酸酶1B所介导疾病药物中的用途。

背景技术

蛋白酪氨酸磷酸酶(protein-tyrosine phosphatases，PTPs)家族是一类受体类胞质信号转导酶，通过使其底物酪氨酸残基发生去磷酸化(Kim et al.,Int.J.Mol.Sci.2018,19:2708)，从而调控多种细胞的代谢进程，维持机体稳态。蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)是一种典型的非跨膜酪氨酸磷酸酶，是胰岛素信号的负性转导因子。胰岛素抵抗，尤其是脂肪组织和肌肉中的胰岛素抵抗与2型糖尿病(T2DM)的发生有密切关系(Minoura et al.,Eur.J.Pharmacol.2005,519:182-190；Kim et al.,J.Clin.Invest.2000,105:1791-1797)。

随着全球化、现代化和人类生活方式的改变，糖尿病和肥胖的发病率逐年上升(Xiao et al.,Curr.Med.Chem.2015,22:23-38)。根据国际糖尿病联合会(IDF)的数据，全世界约有4.51亿人受到糖尿病的影响，到2045年，估计有6.93亿人患有糖尿病(Cho etal.,Diabetes Res.Clin.Pract.2018,138:271-281)。胰岛素的产生和/或功能受到干扰会导致糖尿病的发生(American Diabetes Association,Classification and diagnosisof diabetes,Diabetes Care 2015，40:S11-S24)。PTP1B是蛋白质酪氨酸磷酸酶(PTPs)的重要成员，对胰岛素代谢途径具有负调控作用。PTP1B的过度表达可能导致胰岛素受体磷酸化的降低(Kenner et al.,Mol.Cell.Biochem.1998,182:101-108)，且研究表明PTP1B基因的突变会导致糖尿病的发生(Meshkani et al.,Clin.Chem.2007,53:1585-1592)。因此，PTP1B被视为治疗糖尿病和肥胖症等相关疾病的重要的药物靶点(Johnson et al.,Nat.Rev.Drug.Discov.2002,1:696–709)。开发PTP1B的特异性抑制剂，对治疗2型糖尿病和肥胖症具有良好的应用前景。

此外，在乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌的研究中，都能检测到PTP1B的过表达，并且在肿瘤发展的各个阶段都能检测到PTP1B的过表达(Kenneth et al.,Mol.Cell.Biol.1998,18,2965–2975；Weiner et al.,J.Natl.Cancer Inst.1996,86,372–378)，说明PTP1B与很多重要的肿瘤形成信号通路都密切相关。因此，PTP1B抑制剂可用于治疗或预防癌症或在癌症发展时用于减缓其进展。

天然产物(特别是源于植物的天然产物)历来是发现具有新颖结构和新作用机制的创新药物的重要来源(Newman et al.,J.Nat.Prod.2020,83:770–803)。植物有效成分具有骨架多样、结构新颖、多靶点、低毒副作用等特色；它们往往是经过自然法则选择进化的，能够与生物大分子有效结合，表现出良好的活性。因此，从植物来源的活性成分中筛选和发现新型、高效的PTP1B抑制剂具有重要的研究价值。

发明内容

本申请提供一种三萜及其二聚体类化合物及其在制备预防或治疗蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B介导疾病的药物中的用途，对蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B有很好的抑制作用，可用于制备治疗糖尿病、肥胖症及其他PTP1B介导疾病的药物中应用。

三萜及其二聚体类化合物在制备蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B抑制剂中的应用，所述三萜及其二聚体类化合物的结构式为如式(I)～式(Ⅶ)所示结构式中一种：

三萜及其二聚体类化合物在制备预防、延缓或治疗由蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B介导疾病的药物中的应用，所述三萜及其二聚体类化合物的结构式为如式(I)～式(Ⅶ)所示结构式中一种：

三萜及其二聚体类化合物在制备预防、延缓或治疗糖尿病、肥胖症及其并发症的药物中的应用，所述三萜及其二聚体类化合物的结构式为如式(I)～式(Ⅶ)所示结构式中一种：

本申请还提供结构式如式(I)～式(Ⅳ)任一所示的化合物：

如前所述式(I)～(Ⅶ)的化合物，可从植物如华东黄杉中提取分离，也可通过人工合成制备。

本申请提供一种三萜及其二聚体类化合物的制备方法，包括：

取干燥的华东黄杉枝叶粉碎机粉碎；用90％甲醇浸渍提取，提取液经减压浓缩成浸膏，加水混悬后，先后用石油醚和乙酸乙酯萃取，其中的乙酸乙酯萃取部分经分离纯化后分别得到结构式如式(I)～(Ⅶ)所示的化合物：

可选的，所述分离纯化包括反复进行的硅胶柱色谱分离、Sephadex LH-20凝胶色谱分离及反相半制备高效液相色谱分离。

具体的，所述分离纯化包括：

(1)所述乙酸乙酯萃取部分经硅胶柱层析并以石油醚：乙酸乙酯体积比10:1-0:1梯度洗脱，分开收集洗脱组分；

(2)对石油醚：乙酸乙酯为6:1的洗脱组分经MCI柱色谱并以水：甲醇体积比50:50-0:100梯度洗脱，分开收集洗脱液；然后对水：甲醇体积比为10:90的洗脱组分依次进行Sephadex LH-20凝胶色谱分离和反相半制备高效液相色谱分离，分别得到结构式如式(Ⅵ)和式(Ⅶ)所示的化合物；

对石油醚：乙酸乙酯体积比为2:1的洗脱组分经MCI柱色谱并以水：甲醇体积比为40:60-0:100梯度洗脱，分开收集洗脱液；然后对水：甲醇体积比为20:80的洗脱组分依次进行Sephadex LH-20凝胶色谱分离和反相半制备高效液相色谱分离，得到结构式如式(Ⅳ)所示的化合物；对水：甲醇体积比为0:100的洗脱组分依次进行Sephadex LH-20凝胶色谱分离和反相半制备高效液相色谱分离，分别得到结构式如式(II)和式(III)所示的化合物；

对石油醚：乙酸乙酯体积比为1:1的洗脱组分经MCI柱色谱并以水：甲醇体积比为40:60-0:100梯度洗脱，分开收集洗脱液；然后对水：甲醇体积比为20:80的洗脱组分依次进行Sephadex LH-20凝胶色谱分离和反相半制备高效液相色谱分离，得到结构式如式(V)所示的化合物；然后对水：甲醇体积比为0:100的洗脱组分依次进行Sephadex LH-20凝胶色谱分离和反相半制备高效液相色谱分离，得到结构式如式(I)所示的化合物。

在通过植物提取确定上述化合物的结构后，其他的制备方法中，也可通过人工合成。

与现有技术相比，本申请至少具有如下有益效果之一：

(1)首次发现从华东黄杉枝叶提取、分离得到的四个新的三萜及其二聚体类化合物sinensisin O(I),sinensisin S(II),sinensisin R(III),sinensisin I(IV),以及三个已知结构的三萜类化合物3-oxolanost-9(11)-ene-24S,25-diol(V)，3β-hydroxycycloartane-26-acid(VI)和cycloartane-3β,26-diol(Ⅶ)，均可作为PTP1B抑制剂，对开发成为具有预防或治疗由PTP1B介导的相关疾病，如糖尿病、肥胖症的药物，具有广阔的应用前景。

(2)上述三个已知结构化合物为首次从华东黄杉中制备得到，且在已有文献中也未有关于所述化合物具有PTP1B抑制活性及在相关疾病中的应用报道。

(3)本申请的化合物具有显著的PTP1B抑制活性。

附图说明

图1为3-oxolanost-9(11)-ene-24S,25-diol(V)的¹H NMR谱图；

图2为3β-hydroxycycloartane-26-acid(VI)的¹H NMR谱图；

图3为cycloartane-3β,26-diol(Ⅶ)的¹H NMR谱图。

具体实施方式

下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本申请的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本申请的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本申请。

天然产物(特别是源于植物的天然产物)历来是发现具有新颖结构和新作用机制的创新药物的重要来源，华东黄杉(Pseudotsuga gaussenii Flous)隶属松科(Pinaceae)云杉属(Pseudotsuga)植物，是一种常绿乔木，成年后高达40余米。该植物主要分布于我国安徽东南部，浙江西北部与江西德兴，一般生于海拔600-1500米的丘陵山坡与谷地。目前其化学成分和药理活性尚未有任何报道。基于现有技术的现状和基础，本申请的发明人保护性地采集少许华东黄杉植物样品(其枝叶，易再生)研发其在制药中的新用途。

本申请取干燥的华东黄杉枝叶，粉碎机粉碎；用90％甲醇浸渍提取，提取液经减压浓缩成浸膏，加水混悬后，先后用石油醚和乙酸乙酯萃取，其中的乙酸乙酯萃取部分经分离纯化后分别得到结构式如式(I)～(Ⅶ)所示的化合物：

然后对上述分离得到的三萜及其二聚体类化合物进行了蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)抑制活性实验，实验结果表明这类化合物均具有显著的抑制活性，可用于制成预防、延缓或治疗由PTP1B介导的疾病，特别是II型糖尿病和肥胖症的药物或是作为该类药物的先导化合物。

以下以具体的实施例进行说明：

下述制备例中，比旋光测试通过JASCO P-1020旋光仪完成；紫外和红外光谱数据分别通过Shimadzu UV-2550紫外光谱仪和Nicolet AVATAR 360型红外光谱仪获得；NMR用Bruker Avance II 600型仪测定；ESI-MS由Agilent 1100Series LC/MSD G1946D型仪测定；HR-ESI-MS由AB Sciex TripleTOF 5600型仪测定；所使用的硅胶和薄层板为烟台康比诺公司生产Sephadex LH-20凝胶为瑞士GE Healthcare Bio-Sciences公司生产；半制备HPLC为Waters e2695，配备2998PDA和2424蒸发光散射双检测器以及x-Bridge ODS(5μm,250×10mm)半制备柱；所有试剂均为上海国药集团化学试剂有限公司生产。

实施例1：三萜及其二聚体类化合物的制备

取华东黄杉枝叶600g，粉碎后用90％甲醇室温冷浸提取5次，合并提取液，减压浓缩，得浸膏126g。浸膏用水分散后依次用石油醚与乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯部分21g。乙酸乙酯部分经100-200目硅胶柱层析，以石油醚：乙酸乙酯10:1-0:1梯度(具体梯度比值依次为10:1、8:1、6:1、4:1、2:1、1:1、1:2、0:1，每个梯度洗脱剂用量为2-3倍柱体积)洗脱，收集所得下柱液，通过TLC薄层色谱进行显色检识，合并具有相同斑点的下柱液，得到10个组分(Fr.1-Fr.10)。

组分Fr.3(即洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝6:1的洗脱组分)经过MCI柱色谱，采用水：甲醇(50:50-0:100,v/v,依次为50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100梯度)洗脱；然后对10:90(水：甲醇)洗脱组分先采用Sephadex LH-20(纯甲醇为洗脱剂，下柱液收集后经TLC薄层色谱检识，合并具有相同斑点的组分，得到4个亚组份，Fr.3.A.1-Fr.3.A.4)分离，再对4个亚组份分别经过半制备型HPLC进一步分离纯化(MeOH:H₂O,96:4，v/v,3mL/min)，从其中的亚组分2(Fr.3.A.2)中分别得到化合物3β-hydroxycycloartane-26-acid(VI)(1.4mg,t_R＝12.3min)和cycloartane-3β,26-diol(Ⅶ)(1.6mg,t_R＝13.2min)(氢谱谱图见图2和图3)。

组分Fr.5(对应石油醚：乙酸乙酯＝2:1的洗脱组分)继续过MCI柱色谱，采用水：甲醇(40:60-0:100,v/v,依次为40:60、30:70、20:80、10:90、0:100)洗脱；对20:80(水：甲醇)洗脱组分采用Sephadex LH-20进一步纯化(纯甲醇为洗脱剂，下柱液收集后经TLC薄层色谱检识，合并具有相同斑点的组分，得到3个亚组份，Fr.5.A.1-Fr.5.A.3)，然后对3个亚组份分别经过半制备型HPLC进一步分离纯化(MeOH:H₂O(含0.05％TFA),90:10,v/v,3mL/min)，从其中的亚组分3(Fr.5.A.3)中分离得到化合物sinensisin I(IV)(2.0mg,t_R＝22.6min)；对0:100(水：甲醇)洗脱组分采用Sephadex LH-20进一步纯化(纯甲醇为洗脱剂，下柱液收集后经TLC薄层色谱检识，合并具有相同斑点的组分，得到3个亚组份，Fr.5.B.1-Fr.5.B.3)，然后对3个亚组份分别经过半制备型HPLC进一步分离纯化(MeOH:H₂O,97:3,v/v,3mL/min)，从其中的亚组分1(Fr.5.B.1)中分别得到化合物sinensisin S(II)(1.8mg,t_R＝22.3min)和sinensisin R(III)(1.2mg,t_R＝28.6min)。

组分Fr.6(对应石油醚：乙酸乙酯＝1:1的洗脱组分)继续过MCI柱色谱，采用水：甲醇(40:60-0:100,v/v,依次为40:60、30:70、20:80、10:90、0:100)洗脱；对20:80(水：甲醇)洗脱组分采用Sephadex LH-20进一步纯化(纯甲醇为洗脱剂，下柱液收集后经TLC薄层色谱检识，合并具有相同斑点的组分，得到5个亚组份，Fr.6.A.1-Fr.6.A.5)，然后对5个亚组份分别经过半制备型HPLC进一步分离纯化(MeOH:H₂O,87:13,v/v,3mL/min)，从其中的亚组分4(Fr.6.A.4)中得到化合物3-oxolanost-9(11)-ene-24S,25-diol(V)(1.2mg,t_R＝16.9min)(氢谱谱图见图1)。对0:100(水：甲醇)洗脱组分采用Sephadex LH-20进一步纯化(纯甲醇为洗脱剂，下柱液收集后经TLC薄层色谱检识，合并具有相同斑点的组分，得到3个亚组份，Fr.6.B.1-Fr.6.B.3)，然后对3个亚组份分别经过半制备型HPLC进一步分离纯化(MeOH:H₂O,96:4,v/v,3mL/min)，从其中的亚组分2(Fr.6.B.2)中得到sinensisin O(I)(1.3mg,t_R＝19.4min)。

化合物3-oxolanost-9(11)-ene-24S,25-diol(V)，3β-hydroxycycloartane-26-acid(VI)和cycloartane-3β,26-diol(Ⅶ)依据与文献(Wada et al.,Planta Med.2001,67:659–664；Takahashi et al.Chem.Pham.Bull.1975,23:538–542.)数据(MS、¹H NMR、比旋光)对比，最终确证其结构。经鉴定，化合物sinensisin O(I)、sinensisin S(II)和sinensisin R(III)为新的三萜二聚体类化合物，化合物sinensisin I(IV)为新的三萜化合物，光谱及理化数据如下：

Sinensisin O(I):白色无定形粉末；[α]²⁰ _D+41(c 0.08,CHCl₃)；UV(MeOH)λ_max(logε)202(4.07)nm；IR(KBr)ν_max 3439,2942,2868,1589,1387,1185,1078,756cm^-1；¹H NMR(600MHz,CDCl₃):δ1.70(m,H-1a),1.22(m,H-1b),2.01(ddd,J＝14.1,2.8,2.8Hz,H-2a),1.67(m,H-2b),3.23(dd,J＝11.8,4.3Hz,H-3),1.03(m,H-5),1.67(m,H-6a),1.50(m,H-6b),1.66(m,H-7a),1.40(m,H-7b),2.19(d,J＝11.0Hz,H-8),5.23(d,J＝5.8Hz,H-11),2.09(d,J＝17.1Hz,H-12a),1.92(m,H-12b),1.32(2H,m,H-15),1.92(m,H-16a),1.31(m,H-16b),1.59(m,H-17),0.67(3H,s,H₃-18),1.05(3H,s,H₃-19),1.58(m,H-20),0.91(3H,d,J＝6.5Hz,H₃-21),1.47(2H,m,H-22),1.77(2H,m,H-23),3.37(br d,J＝10.3Hz,H-24),4.24,4.17(d,J＝11.3Hz,H-26),1.19(3H,s,H₃-27),1.00(3H,s,H₃-28),0.83(3H,s,H₃-29),0.75(3H,s,H₃-30),1.81(m,H-1′a),1.50(m,H-1′b),2.01(ddd,J＝14.1,2.8,2.8Hz,H-2′a),1.72(m,H-2′b),3.44(t,J＝2.6Hz,H-3′),1.33(m,H-5′),1.59(m,H-6′a),1.47(m,H-6′b),1.66(m,H-7′a),1.40(m,H-7′b),2.19(d,J＝11.0Hz,H-8′),5.27(d,J＝5.7Hz,H-11′),2.09(d,J＝17.5Hz,H-12′a),1.92(m,H-12′b),1.32(2H,m,H-15′),1.92(m,H-16′a),1.31(m,H-16′b),1.61(m,H-17′),0.67(3H,s,H₃-18′),1.07(3H,s,H₃-19′),1.58(m,H-20′),0.91(3H,d,J＝6.5Hz,H₃-21′),1.47(2H,m,H-22′),1.77(2H,m,H-23′),3.14(t,J＝5.3Hz,H-24′),1.55(3H,s,H₃-27′),0.97(3H,s,H₃-28′),0.89(3H,s,H₃-29′),0.76(3H,s,H₃-30′).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃):δ36.1(C-1),27.8(C-2),78.9(C-3),39.1(C-4),52.5(C-5),21.4(C-6),28.2(C-7),41.8(C-8),148.5(C-9),39.4(C-10),114.9(C-11),37.1(C-12),44.3(C-13),47.0(C-14),33.9(C-15),28.1(C-16),50.9(C-17),14.4(C-18),22.3(C-19),36.4(C-20),18.2(C-21),32.6(C-22),28.3(C-23),77.6(C-24),73.6(C-25),69.6(C-26),20.8(C-27),18.5(C-28),28.0(C-29),15.7(C-30),30.5(C-1′),25.2(C-2′),76.2(C-3′),37.8(C-4′),46.7(C-5′),21.2(C-6′),28.0(C-7′),41.8(C-8′),148.5(C-9′),39.3(C-10′),114.5(C-11′),37.1(C-12′),44.3(C-13′),47.1(C-14′),33.9(C-15′),28.0(C-16′),50.8(C-17′),14.4(C-18′),22.1(C-19′),36.0(C-20′),18.5(C-21′),33.6(C-22′),25.7(C-23′),62.9(C-24′),57.5(C-25′),171.7(C-26′),13.5(C-27′),28.3(C-28′),22.5(C-29′),18.5(C-30′)；HRESIMS[M+Na]⁺m/z 953.7166(calcd for C₆₀H₉₈O₇Na,953.7205,Δ＝–4.1ppm).

Sinensisin S(II):白色无定形粉末；[α]²⁰ _D－9(c 0.10,CHCl₃)；UV(MeOH)λmax(logε)202(3.77)nm；IR(KBr)ν_max 3446,2957,2920,2848,1581,1384,771cm^-1；¹H NMR(600MHz,CDCl₃):δ1.59(m,H-1a),1.47(m,H-1b),1.72(m,H-2a),1.66(m,H-2b),3.48(brs,H-3),5.60(d,J＝5.8Hz,H-6),2.40(dd,J＝19.0,7.6Hz,H-7a),1.82(m,H-7b),1.76(d,J＝7.9Hz,H-8),2.27(d,J＝12.5Hz,H-10),1.65(m,H-11a),1.41(m,H-11b),1.81(m,H-12a),1.50(m,H-12b),1.21(m,H-15a),1.12(m,H-15b),1.88(m,H-16a),1.31(m,H-16b),1.48(m,H-17),0.86(3H,s,H₃-18),0.92(3H,s,H₃-19),1.48(m,H-20),0.91(3H,d,J＝6.4Hz,H₃-21),1.14(m,H-22a),0.97(m,H-22b),1.41(2H,m,H-23),3.35(dd,J＝10.1,2.0Hz,H-24),1.15(3H,s,H₃-26),1.16(3H,s,H₃-27),1.03(3H,s,H₃-28),1.14(3H,s,H₃-29),0.81(3H,s,H₃-30),1.59(m,H-1′a),1.47(m,H-1′b),1.72(m,H-2′a),1.66(m,H-2′b),3.48(br s,H-3′),5.60(d,J＝5.8Hz,H-6′),2.37(dd,J＝19.0,7.6Hz,H-7′a),1.82(m,H-7′b),1.76(d,J＝7.9Hz,H-8′),2.27(d,J＝12.5Hz,H-10′),1.65(m,H-11′a),1.41(m,H-11′b),1.81(m,H-12′a),1.50(m,H-12′b),1.21(m,H-15′a),1.12(m,H-15′b),1.88(m,H-16′a),1.31(m,H-16′b),1.48(m,H-17′),0.84(3H,s,H₃-18′),0.92(3H,s,H₃-19′),1.48(m,H-20′),0.89(3H,d,J＝6.4Hz,H₃-21′),1.14(m,H-22′a),0.97(m,H-22′b),1.41(2H,m,H-23′),3.26(dd,J＝6.8,2.0Hz,H-24′),1.16(3H,s,H₃-26′),1.17(3H,s,H₃-27′),1.03(3H,s,H₃-28′),1.14(3H,s,H₃-29′),0.81(3H,s,H₃-30′).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃):δ21.1(C-1),28.9(C-2),76.6(C-3),41.4(C-4),141.2(C-5),121.4(C-6),24.4(C-7),43.6(C-8),34.5(C-9),37.8(C-10),32.3(C-11),30.5(C-12),46.2(C-13),49.2(C-14),34.7(C-15),28.0(C-16),50.5(C-17),15.4(C-18),27.9(C-19),36.3(C-20),18.9(C-21),34.0(C-22),28.2(C-23),78.7(C-24),79.0(C-25),21.1(C-26),23.0(C-27),27.3(C-28),25.4(C-29),17.8(C-30),21.1(C-1′),28.9(C-2′),76.6(C-3′),41.4(C-4′),141.2(C-5′),121.5(C-6′),24.4(C-7′),43.6(C-8′),34.5(C-9′),37.8(C-10′),32.3(C-11′),30.4(C-12′),46.2(C-13′),49.2(C-14′),34.7(C-15′),28.0(C-16′),50.1(C-17′),15.3(C-18′),28.0(C-19′),36.8(C-20′),18.7(C-21′),33.8(C-22′),30.8(C-23′),78.5(C-24′),73.4(C-25′),24.2(C-26′),27.1(C-27′),27.2(C-28′),25.4(C-29′),17.8(C-30′)；HRESIMS[M+Na]⁺m/z925.7623(calcd for C₆₀H₁₀₂O₅Na,925.7619,Δ＝+0.4ppm).

Sinensisin R(III)：白色无定形粉末；[α]²⁰ _D+33(c 0.10,CHCl₃)；UV(MeOH)λ_max(logε)202(4.23)nm；IR(KBr)ν_max 3459,2942,2868,1731,1464,1379,1285,1180,1100,759cm^-1；¹H NMR(600MHz,CDCl₃):δ1.81(m,H-1a),1.50(m,H-1b),2.01(ddd,J＝14.1,2.8,2.8Hz,H-2a),1.72(m,H-2b),2.82(br s,H-3),1.33(m,H-5),1.59(m,H-6a),1.47(m,H-6b),1.66(m,H-7a),1.40(m,H-7b),2.18(d,J＝11.0Hz,H-8),5.26(d,J＝5.9Hz,H-11),2.07(d,J＝16.4Hz,H-12a),1.92(m,H-12b),1.32(2H,m,H-15),1.92(m,H-16a),1.31(m,H-16b),1.61(m,H-17),0.65(3H,s,H₃-18),1.07(3H,s,H₃-19),1.58(m,H-20),0.91(3H,d,J＝6.2Hz,H₃-21),1.47(2H,m,H-21),1.77(2H,m,H-22),4.76(dd,J＝10.5,1.8Hz,H-24),3.41,3.26(d,J＝11.1Hz,H-26),1.09(3H,s,H₃-27),0.94(3H,s,H₃-28),0.88(3H,s,H₃-29),0.74(3H,s,H₃-30),3.32(3H,s,OCH₃),1.59(m,H-1′a),1.47(m,H-1′b),2.01(ddd,J＝14.1,2.8,2.8Hz,H-2′a),1.72(m,H-2′b),3.44(t,J＝2.7Hz,H-3′),1.33(m,H-5′),1.60(m,H-6′a),1.47(m,H-6′b),1.66(m,H-7′a),1.40(m,H-7′b),2.18(d,J＝11.0Hz,H-8′),5.23(d,J＝5.9Hz,H-11′),2.07(d,J＝17.1Hz,H-12′a),1.92(m,H-12′b),1.32(2H,m,H-15′),1.92(m,H-16′a),1.31(m,H-16′b),1.61(m,H-17′),0.66(3H,s,H₃-18′),1.07(3H,s,H₃-19′),1.58(m,H-20′),0.91(3H,d,J＝6.2Hz,H₃-21′),1.47(2H,m,H-22′),1.77(2H,m,H-23′),3.10(t,J＝5.8Hz,H-24′),1.53(3H,s,H₃-27′),0.97(3H,s,H₃-28′),0.89(3H,s,H₃-29′),0.75(3H,s,H₃-30′).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃):δ30.8(C-1),25.2(C-2),85.9(C-3),38.1(C-4),47.1(C-5),21.2(C-6),27.9(C-7),41.9(C-8),148.7(C-9),39.4(C-10),114.2(C-11),37.1(C-12),44.3(C-13),47.2(C-14),33.9(C-15),28.0(C-16),50.8(C-17),14.4(C-18),22.2(C-19),36.3(C-20),18.2(C-21),33.1(C-22),20.4(C-23),78.1(C-24),73.2(C-25),66.7(C-26),17.9(C-27),28.4(C-28),22.9(C-29),18.5(C-30),57.0(OMe),30.5(C-1′),25.2(C-2′),76.3(C-3′),37.9(C-4′),46.7(C-5′),21.3(C-6′),28.0(C-7′),41.9(C-8′),148.7(C-9′),39.4(C-10′),114.6(C-11′),37.1(C-12′),44.3(C-13′),47.3(C-14′),33.9(C-15′),28.0(C-16′),50.9(C-17′),14.4(C-18′),22.1(C-19′),36.0(C-20′),18.4(C-21′),32.5(C-22′),25.7(C-23′),62.9(C-24′),57.4(C-25′),173.1(C-26′),13.5(C-27′),28.4(C-28′),22.5(C-29′),18.5(C-30′)；HRESIMS[M+Na]⁺m/z 967.7366(calcdfor C₆₁H₁₀₀O₇Na,967.7361,Δ＝+0.5ppm).

Sinensisin I(IV)：白色无定形粉末；[α]²⁰ _D–35(c 0.10,CHCl₃)；UV(MeOH)λ_max(logε)206(4.33)nm；IR(KBr)ν_max 3319,2935,2855,1683,1467,1389,1215,1182,1145,1065,1028,759cm^-1；¹H NMR(600MHz,CDCl₃):δ1.80(ddd,J＝13.4,4.0,3.7Hz,H-1a),0.95(m,H-1b),1.62(m,H-2a),1.58(m,,H-2b),3.21(dd,J＝10.8,4.9Hz,H-3),0.73(m,H-5),1.51(m,H-6a),1.41(m,H-6b),1.63(m,H-7a),1.11(m,H-7b),0.88(m,H-9),1.42(2H,m,H-11),2.02(ddd,J＝17.9,5.9,5.8Hz,H-12a),1.91(m,H-12b),1.65(m,H-13),5.31(t,J＝3.2Hz,H-15),1.41(m,H-16a),1.21(m,H-16b),1.33(dd,J＝11.3,6.0Hz,H-17),1.59(m,H-19a),1.15(m,H-19b),1.62(m,H-20a),1.58(m,H-20b),3.21(dd,J＝10.8,4.9Hz,H-21),0.98(s,H₃-23),0.76(s,H₃-24),0.76(s,H₃-25),0.91(s,H₃-26),1.96(d,J＝12.8Hz,H-27a),1.58(m,H-27b),0.87(s,H₃-28),0.87(s,H₃-29),1.00(s,H₃-30).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃):δ37.5(C-1),27.4(C-2),79.1(C-3),38.5(C-4),55.5(C-5),18.6(C-6),45.0(C-7),36.2(C-8),56.6(C-9),38.9(C-10),30.7(C-11),24.3(C-12),52.1(C-13),136.1(C-14),122.7(C-15),23.2(C-16),40.1(C-17),36.2(C-18),32.8(C-19),27.1(C-20),79.6(C-21),38.6(C-22),28.1(C-23),15.4(C-24),15.6(C-25),21.4(C-26),60.5(C-27),22.3(C-28),14.9(C-29),27.7(C-30)；HRESIMS[M+H]⁺m/z 443.3886(calcd for C₃₀H₅₁O₂,443.3884,Δ＝+0.6ppm)。

实施例2：蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制活性测定

实验方法：采用分子生物学的方法，构建基因重组的hGST-PTP1B-BL21E.coli人类PTP1B工程菌，经纯化后的hGST-PTP1B重组蛋白能水解底物para-Nitrophenyl Phosphate(pNPP)的磷脂键，得到的脱磷酸产物pNP在波长405nm处有很强的光吸收，因此可通过直接检测405nm处光吸收的变化以观察酶活性变化以及化合物对酶活性的抑制情况。

初筛选择对应化合物浓度为20μg/mL时对PTP1B酶活性的百分抑制率进行考察，试验结果表明sinensisin O(I),sinensisin S(II),sinensisin R(III),sinensisin I(IV),3-oxolanost-9(11)-ene-24S,25-diol(V),3β-hydroxycycloartane-26-acid(VI),cycloartane-3β,26-diol(Ⅶ)的抑制率分别为77％,55％,51％,91％,73％,88％和60％。

进一步测定IC₅₀值：样品临用前溶于DMSO配成合适浓度，3倍稀释，7个稀释度，三复孔，取2μL样品溶液加入到标准的测活体系(30nM GST-hPTP1B,2mM pNPP,50mM 3-吗啉丙磺酸(MOPS)，pH 6.5,2mM DTT,1mM EDTA,2％DMSO)。反应温度为30℃，在VERSAmax上动态测量405nm处的光吸收，时间为3min，其动力学曲线一级反应的斜率作为酶的活性指标。

以相对活性对化合物浓度作图，经公式v/v₀＝100/(1+b*[I]/IC₅₀)拟合得到IC₅₀值，实验重复三次，结果取三次的平均值。测试数据所下表1所示：

表1.测试化合物抑制PTP1B活性数据

测试结果表明上述7个三萜及其二聚体类化合物均表现出显著的抑制活性，表明本发明所述化合物可用于制备治疗糖尿病、肥胖症及其并发症的药物或是作为该类药物的先导化合物。

以上所述实施例仅表达了本申请的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范围。因此，本申请专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims

1.三萜及其二聚体类化合物在制备蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B抑制剂中的应用，所述三萜及其二聚体类化合物的结构式为如式(I)～式(V)所示结构式中一种或多种组合：

2.三萜及其二聚体类化合物在制备预防、延缓或治疗蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B介导疾病的药物中的应用，所述三萜及其二聚体类化合物的结构式为如式(I)～式(V)所示结构式中一种或多种组合：

3.三萜及其二聚体类化合物在制备预防、延缓或治疗糖尿病、肥胖症及其并发症的药物中的应用，所述三萜及其二聚体类化合物的结构式为如式(I)～式(V)所示结构式中一种或多种组合：

4.结构式如式(I)～式(III)任一所示的化合物：

5.一种三萜及其二聚体类化合物的制备方法，其特征在于，包括：

取干燥的华东黄杉枝叶，粉碎机粉碎；用90％甲醇浸渍提取，提取液经减压浓缩成浸膏；加水混悬后，先后用石油醚和乙酸乙酯萃取，其中的乙酸乙酯萃取部分经分离纯化后分别得到结构式如式(I)～式(Ⅶ)所示的化合物：

所述分离纯化包括：

6.一种蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B抑制剂，其特征在于，以如式(I)～式(III)所述化合物中的一种或多种组合为活性成分：

7.一种用于预防、延缓或治疗糖尿病、肥胖症及其并发症的药物组合物，其特征在于，包括治疗有效量的如式(I)～式(III)所示化合物中的一种或多种组合和药学上可接受的药物辅料：

8.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，还包括赋形剂；如式(I)～式(III)所示化合物中的一种或多种组合与赋形剂制成片剂、丸剂、胶囊剂或颗粒。