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CN113087718A - 噻吩并嘧啶酮类化合物及其医药应用 - Google Patents

噻吩并嘧啶酮类化合物及其医药应用 Download PDF

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CN113087718A CN202010022368.3A CN202010022368A CN113087718A CN 113087718 A CN113087718 A CN 113087718A CN 202010022368 A CN202010022368 A CN 202010022368A CN 113087718 A CN113087718 A CN 113087718A
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Abstract

本发明涉及噻吩并嘧啶酮类化合物及其医药应用。本发明属于医药领域，具体涉及式I所示的化合物、其可药用盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物。本发明还涉及式I所示的化合物、其可药用盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物的医药用途。本发明化合物能用于抑制去泛素化酶USP7活性，还能用于预防或治疗与USP7调节相关疾病或病症(例如癌症)。

Description

噻吩并嘧啶酮类化合物及其医药应用
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及噻吩并嘧啶酮类化合物，还涉及该类化合物的医药应用。
背景技术
泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system，UPS)是一种细胞中基本的生理调控过程，通过一系列级联反应，蛋白质被泛素化修饰后，被蛋白酶降解。UPS的异常与肿瘤、神经退行性疾病、病毒感染等疾病密切相关。目前主要针对UPS系统中的蛋白酶、E1活化酶、E2 结合酶、E3连接酶以及去泛素化酶(deubiquitinases,DUBs)五类靶点来开发药物。
去泛素化酶能够特异性地切断在泛素碳末端的甘氨酸残基与靶蛋白间形成的异肽键，使泛素脱离靶蛋白，使得靶蛋白被免于降解、重新定位或者活化等。
目前人体内存在近100种DUBs，其中泛素特异性蛋白酶 (ubiquitin-specificproteases，USPs)是DUBs的最大家族成员，包括约85个成员，属于半胱氨酸蛋白酶家族中的一种异肽酶[1]。目前发现已经有超过40种USPs家族成员与肿瘤的发生、发展相关。
USP7定位于细胞核，是UPS中的一种关键性去泛素化酶，能够特异性地切断在泛素碳末端和靶蛋白间形成的异肽键，使泛素脱离靶蛋白，使得靶蛋白被免于降解、重新定位或者活化等[2]。
USP7在人体组织分布广泛，在神经发育、细胞周期调控、表观遗传调控、DNA损伤修复以及免疫反应中扮演重要角色。已有研究表明 USP7在肝细胞癌、多发性骨髓瘤、结肠癌、肺癌、前列腺癌、膀胱癌等癌细胞中存在过度表达的情况，且这种过度表达与肿瘤侵袭和不良预后直接相关[3]。
USP7的底物种类丰富，且大多数为与细胞周期调控、免疫应答、细胞凋亡以及DNA损伤修复等相关的蛋白，如MDM2、p53、ERCC6、 Foxp3、PTEN和FOXO4等[4]。在一些肿瘤细胞中MDM2过度表达， USP7能保护MDM2免于泛素化，MDM2与p53蛋白结合之后促进 p53蛋白泛素化并降解，促进肿瘤生长。
USP7亦可通过直接调控肿瘤抑制蛋白(例如p53、PTEN、FOXO4、 p114ARF、p16INK4)和肿瘤促进蛋白(例如N-MYC、REST)的表达，上调肿瘤相关因子(例如HIF-1)表达，以及调控肿瘤相关信号通路(例如SHH信号通路、Wnt/β-catenin信号通路、雄激素受体信号通路、DNA损伤修复信号通路)，而发挥促肿瘤作用[5]。
此外，USP7还通过调控Treg细胞上游信号分子(如转录因子 FOXP3和表观遗传调控因子Tip60)，上调Treg细胞活性，抑制Teff 细胞(CD8+T细胞)活性，从而发挥肿瘤免疫监视逃逸的作用[6]。
开发USP7的抑制剂是肿瘤研究领域的热点之一。目前，针对USP7 靶点全球范围内仍无药物上市，在研化合物全部处于临床前研究阶段。
虽然Hybrigenics SA、Forma Therapeutics,Inc.、Les Laboratoires Servier、Almac Discovery Limited等公司对USP7抑制剂均有相应研究并有相关专利公布，但本领域仍然亟需新的USP7抑制剂，特别是具有高活性以及其他优异性能的USP7抑制剂。
发明内容
本发明通过大量研究，我们惊喜地发现了一种噻吩并嘧啶酮类化合物，其对去泛素化酶USP7的活性具有较强抑制作用，能用于预防或治疗与USP7调节相关的疾病或病症(例如癌症)。在此基础上，本发明还提供了噻吩并嘧啶酮类化合物的医药用途。
本发明的第一方面涉及式I所示的化合物或其药学可接受的盐、酯、溶剂化物(例如水合物)、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物：
Figure BDA0002361263240000031
其中，
R1选自氢、C1-6烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基、
Figure BDA0002361263240000032
卤素和氰基，其中，所述C1-6烷基、C6-10芳基和5-10元杂芳基各自独立地任选被如下的一个或多个基团所取代：氢、卤素、氰基、-ORa、-NRbRc、 -C1-6亚烷基-NRbRc、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、任选地被卤代的C1-6烷基、-C(O)R6、-COOR7、-C(O)NRbRc、-S(O)qR8、-S(O)qNRbRc、- O-C2-6亚烷基-NRbRc、-NRa-C2-6亚烷基-NRbRc；
R2选自氢、卤素、氰基、任选地被卤代的C1-6烷基、C3-8环烷基；
R3选自-C(O)R9、-COOR10、-C(O)NReRf、-S(O)qR11和-S(O)qNReRf；
A环和B环各自独立的选自C3-8环烷基、C3-8环烯基、3-8元杂环烷基、3-8元杂环烯基、C6-10芳基和5-10元杂芳基；
Figure BDA0002361263240000033
中，r个R基团为相同基团或不同基团，m个R4基团为相同基团或不同基团；
R选自氢、任选地被卤代的C1-6烷基、卤素和氰基；
R4选自氢、氧代基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、 3-8元杂环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基、-ORa、-NRbRc、卤素、氰基、-C(O)R6、-COOR7、-C(O)NRbRc、-O-C2-6亚烷基-NRbRc和-NRd- C2-6亚烷基-NRbRc，其中，所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、C6-10芳基和5-10元杂芳基各自独立地任选被如下的一个或多个基团所取代：氢、卤素、氰基、C1-6烷基、羟基、氨基、-N(C1-6烷基)2、-NH(C1-6烷基)；
Ra、Rb、Rc和Rd各自独立地选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、3-8 元杂环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基、-C(O)R6和-S(O)qR8，其中，所述C1-6烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、C6-10芳基和5-10元杂芳基各自独立地任选被如下的一个或多个基团所取代：氢、卤素、羟基、氨基、氰基、任选地被卤代的C1-6烷基、C3-8环烷基；或者，Rb、Rc与它们所连接的氮原子形成3-6元杂环基；
R6、R7和R8各自独立地选自氢、C1-6烷基和C3-8环烷基，其中，所述C1-6烷基和C3-8环烷基各自独立地任选被如下的一个或多个基团所取代：氢、卤素、氰基、氨基、羟基；
R9、R10、R11、Re和Rf各自独立地选自氢、C1-6烷基、C2-6烯基、 C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基，或者，Re、 Rf与它们所连接的氮原子形成3-6元杂环基；其中，所述C1-6烷基、C2-6烯基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和3-6 元杂环各自独立地任选被如下的一个或多个取代基所取代：氢、氰基、卤素、-OH、C1-6烷氧基、-NRgRh、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基，并且，所述取代基中的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、 C6-10芳基和5-10元杂芳基各自独立地任选被下述的一个或多个基团所取代：氢、卤素、氰基、任选地被卤代的C1-6烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基；
Rg、Rh各自独立地选自氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C3-8环烷基、3-8 元杂环烷基；
m选自0、1、2、3、4、5、6、7和8；
q选自1和2；
r选自0、1、2和3。
本发明式I中，
Figure BDA0002361263240000041
表示：A环上基团可以被r个R基团所取代，r个R基团可以取相同基团或不同基团；B环上基团可以被m 个R4基团所取代，m个R4基团可以取相同基团或不同基团。
本发明第一方面的一些实施方式中，R1选自C1-6烷基、C6-10芳基和
Figure BDA0002361263240000051
其中，所述C1-6烷基和C6-10芳基各自独立地任选被如下的一个或多个取代基所取代：氢、卤素、氰基、-ORa、-NRbRc、-C1-6亚烷基-NRbRc。
本发明第一方面的一些实施方式中，R1选自C1-6烷基、C6-10芳基和
Figure BDA0002361263240000052
其中，所述C1-6烷基和C6-10芳基各自独立地任选被如下的一个或多个基团所取代：氢、卤素、-ORa、-C1-6亚烷基-NRbRc；
A环和B环各自独立的选自C6-10芳基、5-10元杂芳基、3-8元杂环烯基、3-8元杂环烷基、C3-8环烯基和C3-8环烷基；
R选自氢、任选地被卤代的C1-6烷基、卤素和氰基(优选地，R选自氢和卤素)；
r选自0、1和2；
R4选自氢、-NRbRc、C1-6烷基和-ORa；m选自0、1和2；
Ra、Rb和Rc各自独立地选自氢和C1-6烷基。
本发明第一方面的一些实施方式中，R1选自C1-6烷基、C6-10芳基和
Figure BDA0002361263240000053
其中，所述C1-6烷基和C6-10芳基各自独立地任选被如下的一个或多个基团所取代：氢、羟基、NH2-C1-6亚烷基-、卤素、氨基、氰基；
A环和B环各自独立的选自C3-8环烷基、C3-8环烯基、3-8元杂环烷基、3-8元杂环烯基、C6-10芳基和5-10元杂芳基；
R选自氢、任选地被卤代的C1-6烷基、卤素和氰基；
R4选自氢、氨基、C1-6烷基-NH-、(C1-6烷基)2N-、任选地被卤代的C1-6烷基、氧代基、C3-8环烷基、羟基和氰基；
m选自0、1、2和3；
r选自0、1和2。
本发明第一方面的一些实施方式中，R1选自C1-6烷基、C6-10芳基和
Figure BDA0002361263240000061
其中，所述C6-10芳基任选地被如下的一个或多个基团所取代：氢、羟基、NH2-C1-6亚烷基-、卤素、氨基、氰基；
A环和B环各自独立的选自C6-10芳基、5-10元杂芳基、3-8元杂环烯基、3-8元杂环烷基、C3-8环烯基和C3-8环烷基(优选地，A环和 B环各自独立的选自C6-10芳基、5-10元杂芳基、3-8元杂环烷基和C3-8环烷基)；
R选自氢、任选地被卤代的C1-6烷基、卤素和氰基(优选地，R选自氢和卤素)；
r选自0、1和2；
R4选自氢、氨基、C1-6烷基-NH-、(C1-6烷基)2N-、C1-6烷基和羟基；
m选自0、1和2。
本发明第一方面的一些实施方式中，R1选自C1-6烷基、C6-10芳基和
Figure BDA0002361263240000062
其中，所述C6-10芳基任选地被如下的一个或多个基团所取代：羟基、NH2-C1-6亚烷基-、卤素；
A环和B环各自独立地选自C6-10芳基、5-10元杂芳基、3-8元杂环烯基、3-8元杂环烷基、C3-8环烯基和C3-8环烷基(优选地，A环和 B环各自独立的选自C6-10芳基、5-10元杂芳基、3-8元杂环烷基和C3-8环烷基)；
R选自氢、任选地被卤代的C1-6烷基、卤素和氰基(优选地，R选自氢和卤素)；
r选自0、1和2；
R4选自氢、氨基、C1-6烷基-NH-、(C1-6烷基)2N-、C1-6烷基和羟基；
m选自0、1和2。
本发明第一方面的一些实施方式中，R1选自C1-6烷基、C6-10芳基和
Figure BDA0002361263240000071
其中，所述C6-10芳基任选地被如下的一个或多个基团所取代：羟基、NH2-C1-6亚烷基-、卤素；
A环为C6-10芳基；
B环选自5-10元杂芳基、3-8元杂环烯基、3-8元杂环烷基、C3-8环烯基和C3-8环烷基。
本发明第一方面的一些实施方式中，R1选自C1-6烷基、C6-10芳基和
Figure BDA0002361263240000072
其中，所述C6-10芳基任选地被如下的一个或多个基团所取代：羟基、NH2-C1-6亚烷基-、卤素；
A环为苯基；
B环选自吡唑基、3-吡咯啉基、吡咯烷基、环戊烯基和环戊烷基，优选地，B环选自吡唑基、吡咯烷基和环戊烷基；
R选自氢和卤素；
r选自0、1和2；
R4选自氢、氨基、C1-6烷基-NH-、(C1-6烷基)2N-、C1-6烷基和羟基；
m选自0、1和2。
本发明第一方面的一些实施方式中，R1选自甲基、苯基和
Figure BDA0002361263240000073
其中，所述苯基任选地被如下的一个或多个基团所取代：卤素、羟基和 NH2-CH2-；
A环为苯基；
B环选自吡唑基、3-吡咯啉基、吡咯烷基、环戊烯基和环戊烷基；
R选自氢和卤素，优选地，R选自氢、F和Cl；
r选自0和1；
R4选自氢、氨基、CH3-NH-、(CH3)2N-、甲基和羟基；
m选自0、1和2。
本发明第一方面的一些实施方式中，R1选自被如下的一个或多个取代基任选取代的苯基：氢、氟、氯、-OH、-CH2NH2。
本发明第一方面的一些实施方式中，R1为
Figure BDA0002361263240000081
其中，A环选自C6-10芳基和5-10元杂芳基；R选自氢、任选地被卤代的C1-6烷基和卤素；r选自1、2和3。
本发明第一方面的一些实施方式中，R1为
Figure BDA0002361263240000082
其中，A环为 C6-10芳基；R选自氢、任选地被卤代的C1-6烷基和卤素；r选自1、2和 3。
本发明第一方面的一些实施方式中，R1为
Figure BDA0002361263240000083
其中，A环为 C6-10芳基；R选自氢和卤素；r选自1、2和3。
本发明第一方面的一些实施方式中，R1为
Figure BDA0002361263240000084
其中，A环为苯环；R选自氢、氟和氯；r选自1和2。
本发明第一方面的一些实施方式中，R1为
Figure BDA0002361263240000085
其中，B环选自C3-8环烷基、3-8元杂环烷基和5-10元杂芳基；R4选自氢、任选地被卤代的C1-6烷基、氧代基、-OH、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、 C3-8环烷基和氰基；m选自1、2和3。
本发明第一方面的一些实施方式中，R1为
Figure BDA0002361263240000091
其中，B环选自C3-8环烷基、3-8元杂环烷基和5-10元杂芳基；R4选自氢、任选地被卤代的C1-6烷基、-OH、-NH2、-NH(C1-6烷基)和-N(C1-6烷基)2；m选自 1、2和3。
本发明第一方面的一些实施方式中，R1为
Figure BDA0002361263240000092
其中，B环选自C4-6环烷基、4-6元杂环烷基和5-10元杂芳基；R4选自氢、甲基、- NH2、-NHCH3、-OH和-N(CH3)2；m选自1和2。
本发明第一方面的一些实施方式中，R1为
Figure BDA0002361263240000093
其中，B环选自吡唑基、3-吡咯啉基、吡咯烷基、环戊烯基和环戊烷基；R4选自氢、甲基、-NH2、-NHCH3、-OH和-N(CH3)2；m选自1和2。
本发明第一方面的一些实施方式中，R1为
Figure BDA0002361263240000094
其中，B环为吡咯烷基；R4选自氢、甲基、-NH2、-NHCH3、-OH和-N(CH3)2；m选自1和2。
本发明第一方面的一些实施方式中，R1选自甲基、
Figure BDA0002361263240000095
Figure BDA0002361263240000096
Figure BDA0002361263240000101
本发明第一方面的一些实施方式中，R1选自甲基、
Figure BDA0002361263240000102
Figure BDA0002361263240000103
本发明第一方面的一些实施方式中，R1选自C6-10芳基和
Figure BDA0002361263240000111
其中，所述C6-10芳基任选被如下的一个或多个基团所取代：卤素和-C1-6亚烷基-NRbRc；
A环和B环各自独立的选自C6-10芳基、3-8元杂环烯基、3-8元杂环烷基、C3-8环烯基和C3-8环烷基；
R选自氢和卤素；r选自0、1和2；
R4选自氢、-NRbRc、C1-6烷基和-ORa；m选自0、1和2；
Ra、Rb和Rc各自独立地选自氢和C1-6烷基。
本发明第一方面的一些实施方式中，R1选自C6-10芳基和
Figure BDA0002361263240000112
其中，所述C6-10芳基任选地被如下的一个或多个基团所取代：卤素和 NH2-C1-6亚烷基-；
A环和B环各自独立的选自C6-10芳基、3-8元杂环烯基、3-8元杂环烷基、C3-8环烯基和C3-8环烷基；
R选自氢和卤素；r选自0、1和2；
R4选自氢、氨基、C1-6烷基-NH-、(C1-6烷基)2N-、C1-6烷基和羟基；m选自0、1和2。
本发明第一方面的一些实施方式中，R1选自苯基和
Figure BDA0002361263240000113
其中，所述苯基任选地被如下的一个或多个基团所取代：卤素和NH2-CH2-；
A环为苯基；
B环选自3-吡咯啉基、吡咯烷基、环戊烯基和环戊烷基；
R选自氢和卤素；r选自0和1；
R4选自氢、氨基、CH3-NH-、(CH3)2N-、甲基和羟基；m选自0、 1和2。
本发明第一方面的一些实施方式中，R1选自
Figure BDA0002361263240000114
Figure BDA0002361263240000121
本发明第一方面的一些实施方式中，R2选自氢、卤素、任选地被卤代的C1-6烷基和C3-8环烷基。
本发明第一方面的一些实施方式中，R2选自氢、氟、甲基、三氟甲基；优选地，R2为氢。
本发明第一方面的一些实施方式中，R3选自-C(O)R9和-C(O)NReRf； R9、Re、Rf各自独立地选自氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C3-8环烷基和3- 8元杂环烷基，其中，所述C1-6烷基、C2-6烯基、C3-8环烷基和3-8元杂环烷基各自独立地任选被如下的一个或多个取代基所取代：卤素、任选地被卤代的C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基和5-10元杂芳基；并且，所述C6-10芳基和5-10元杂芳基各自独立地任选被下述的一个或多个基团所取代：氢、卤素、任选地被卤代的C1-6烷基。
本发明第一方面的一些实施方式中，R3为-C(O)R9；R9选自氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C3-8环烷基和3-8元杂环烷基，其中，所述C1-6烷基、 C2-6烯基、C3-8环烷基和3-8元杂环烷基各自独立地任选地被如下的一个或多个取代基所取代：卤素、任选地被卤代的C1-6烷基、C3-8环烷基、 C6-10芳基和5-10元杂芳基；并且，所述C6-10芳基和5-10元杂芳基各自独立地任选被下述的一个或多个基团所取代：氢、卤素、任选地被卤代的C1-6烷基。
本发明第一方面的一些实施方式中，R3为-C(O)R9；R9选自氢、C1-6烷基、C2-6烯基和C3-8环烷基，其中，所述C1-6烷基、C2-6烯基和C3-8环烷基各自独立地任选被如下的一个或多个取代基所取代：卤素、C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基和5-10元杂芳基；并且，所述取代基中的C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基和5-10元杂芳基各自独立地任选被下述的一个或多个基团所取代：氢、卤素、C1-6烷基。
本发明第一方面的一些实施方式中，R3为-C(O)R9；R9选自氢、C1-6烷基和C2-6烯基，其中，所述C1-6烷基和C2-6烯基各自独立地任选被如下的一个或多个取代基所取代：卤素、C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基和5-10元杂芳基；并且，所述取代基中的C1-6烷基、C3-8环烷基、 C6-10芳基和5-10元杂芳基各自独立地任选被下述的一个或多个基团所取代：氢、卤素、C1-6烷基。
本发明第一方面的一些实施方式中，R3为-C(O)R9；R9为被如下的一个或多个取代基任选取代的C1-6烷基：卤素、任选地被卤代的C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基，其中，所述C6-10芳基和5- 10元杂芳基各自独立地任选被选自氢、卤素和任选地被卤代的C1-6烷基中的一个或多个基团取代。
本发明第一方面的一些实施方式中，R3为-C(O)R9；R9为被如下的一个或多个取代基任选取代的C1-6烷基：任选地被卤代的C1-6烷基、 C3-8环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基，其中，所述C6-10芳基和5-10 元杂芳基各自独立地任选被一个或多个卤素所取代。
本发明第一方面的一些实施方式中，R3为-C(O)R9；R9为被如下的一个或多个取代基任选取代的C1-6烷基：甲基、二氟甲基、三氟甲基、环丙基、任选地被卤代的苯基(例如被一个氟取代的苯基)、任选地被卤代的吡唑基(例如被一个氟或氯取代的吡唑基)。
本发明第一方面的一些实施方式中，R3为C(O)R9，R9选自下列基团：
Figure BDA0002361263240000131
本发明第二方面涉及式Ⅱ所示的化合物、其可药用盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物：
Figure BDA0002361263240000141
其中，
R1、R2的定义如本发明第一方面中所述；
R13为O；
R14选自C6-10芳基和5-8元杂芳基，其中，C6-10芳基和5-8元杂芳基各自独立地任选被如下的一个或多个取代基所取代：氢、卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、氰基；
R15选自H、C1-6烷基和C3-8环烷基，其中，C1-6烷基和C3-8环烷基各自独立地任选被如下的一个或多个取代基所取代：卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、氰基；
n选自1、2、3、4、5和6；优选地，n选自1、2和3，更优选n为1。
本发明第二方面的一些实施方式中，R14选自C6-10芳基和5-8 元杂芳基，其中，C6-10芳基和5-8元杂芳基各自独立地任选被一个或多个卤素所取代。
本发明第二方面的一些实施方式中，R14选自C6-10芳基和5-8 元含氮杂芳基，其中，C6-10芳基和5-8元含氮杂芳基任选地被一个或多个卤素所取代。
本发明第二方面的一些实施方式中，R14选自苯基和吡唑基，其中，所述苯基和吡唑基各自独立地任选被一个或多个卤素所取代。
本发明第二方面的一些实施方式中，R14选自苯基、
Figure BDA0002361263240000142
Figure BDA0002361263240000151
本发明第二方面的一些实施方式中，R15选自C1-6烷基和C3-8环烷基，其中，C1-6烷基任选地被一个或多个卤素所取代。
本发明第二方面的一些实施方式中，R15选自甲基、二氟甲基、三氟甲基和环丙基。
本发明第二方面的一些实施方式中，R15选自甲基、二氟甲基和环丙基。
本发明第二方面的一些实施方式中，R1选自甲基、
Figure BDA0002361263240000152
Figure BDA0002361263240000153
Figure BDA0002361263240000161
R2选自氢、氟、甲基和三氟甲基；
R14选自苯基、
Figure BDA0002361263240000162
R15选自甲基、二氟甲基和环丙基；且
n选自1、2和3。
本发明第一方面的一些实施方式中，所述化合物选自下表中的化合物1～44。
本发明第二方面的一些实施方式中，所述化合物选自下表中的化合物1～44，R1、R14和R15如表中所示，R2为H，R13为O，n为1。
Figure BDA0002361263240000163
Figure BDA0002361263240000171
Figure BDA0002361263240000181
Figure BDA0002361263240000191
Figure BDA0002361263240000201
Figure BDA0002361263240000211
本发明所述化合物中的任意原子可以被其同位素替代。例如12C可被其同位素13C或14C替代；1H可被2H(D，氘)或3H(T，氚)替代等。本发明包括的化合物中任意原子经其同位素替换后得到的同位素标记的化合物。
本发明第三方面涉及一种药物组合物，其包含本发明第一或第二方面所述的化合物其可药用盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物，以及可选的药用辅料。
本发明第三方面的一些实施方式中，所述药物组合物为片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂、硬糖剂、散剂、喷雾剂、乳膏剂、软膏剂、栓剂、凝胶剂、糊剂、洗剂、软膏剂、水性混悬剂、可注射溶液剂、酏剂或糖浆剂。
本发明第三方面的一些实施方式中，药物组合物可通过胃肠外、局部、静脉内、口服、皮下、动脉内、真皮内、经皮、直肠、颅内、腹膜内、鼻内、肌内途径或作为吸入剂给药，还可通过医药领域技术人员熟知的所有使用形式施用给药。本发明所述化合物或其可药用盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物可根据给药途径配成各种适宜的剂型。
本发明第三方面的一些实施方式中，所述药物组合物还包含抑制去泛素化酶USP7活性的其它有效成分或者预防或治疗癌症的其它有效成分。
本发明第三方面的一些实施方式中，所述药物组合物还包含预防或治疗与去泛素化酶USP7调节相关疾病或病症的其它药物活性成分。
本发明第三方面的一些实施方式中，所述与去泛素化酶USP7调节相关疾病或病症选自癌症、神经退行性疾病(例如阿尔兹海默氏症、帕金森症)、糖尿病、骨和关节病、关节炎炎性病症、骨质疏松症、免疫病症、心血管疾病、局部缺血性疾病、病毒性感染性疾病及细菌性感染性疾病。
本发明第三方面的一些实施方式中，所述药物组合物或适宜的剂型可以含有0.01mg至1000mg的本发明化合物。
本发明第四方面还涉及一种药品，包括本发明第一或第二方面所述的化合物其可药用盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物、或者本发明第三方面所述的药物组合物，以及可选的产品包装(例如产品包装包括产品说明书)。
本发明第五方面涉及一种在体外抑制去泛素化酶USP7活性或者在体外抑制肿瘤细胞增殖的方法，包括将有效量的本发明第一或第二方面所述的化合物、其可药用盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物或者本发明第三方面所述的药物组合物作用于受试体。
本发明第六方面涉及本发明第一方面或第二方面所述的化合物、其可药用盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物或者本发明第三方面所述的药物组合物在制备去泛素化酶USP7抑制剂或者在制备预防或治疗与去泛素化酶 USP7调节相关疾病或病症的药物中的用途。
本发明第六方面的一些实施方式中，所述与去泛素化酶USP7调节相关疾病或病症选自癌症、神经退行性疾病、糖尿病、骨和关节病、关节炎炎性病症、骨质疏松症、免疫病症、心血管疾病、局部缺血性疾病、病毒性感染性疾病及细菌性感染性疾病。
本发明第六方面的一些实施方式中，所述癌症选自肝细胞癌、多发性骨髓瘤、结肠癌、肺癌、前列腺癌和膀胱癌中的至少一种。
本发明第七方面涉及一种预防或治疗与去泛素化酶USP7调节相关疾病或病症的方法，包括给予有需求的受试者以有效量的本发明第一或第二方面所述的化合物、其可药用盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物或者本发明第三方面所述的药物组合物。
本发明第七方面的一些实施方式中，所述与去泛素化酶USP7调节相关疾病或病症选自癌症、神经退行性疾病、糖尿病、骨和关节病、关节炎炎性病症、骨质疏松症、免疫病症、心血管疾病、局部缺血性疾病、病毒性感染性疾病及细菌性感染性疾病。
本发明第七方面的一些实施方式中，所述癌症选自肝细胞癌、多发性骨髓瘤、结肠癌、肺癌、前列腺癌和膀胱癌中的至少一种。
本发明第一或第二方面所述的化合物、其可药用盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物或者本发明第三方面所述的药物组合物，用于抑制去泛素化酶USP7活性，或者用于预防或治疗与去泛素化酶USP7调节相关疾病或病症。
本发明第一或第二方面的一些实施方式中，所述与去泛素化酶 USP7调节相关疾病或病症选自癌症、神经退行性疾病、糖尿病、骨和关节病、关节炎炎性病症、骨质疏松症、免疫病症、心血管疾病、局部缺血性疾病、病毒性感染性疾病及细菌性感染性疾病。
本发明第一或第二方面的一些实施方式中，所述癌症选自肝细胞癌、多发性骨髓瘤、结肠癌、肺癌、前列腺癌和膀胱癌中的至少一种。
本发明第一或第二方面中所述化合物可使用下文所述方法、合成有机化学领域中的己知合成方法或其公知的变化方式来合成。优选的方法包括但不限于下文所述方法。
制备本发明第一或第二方面中所述化合物的方法，其包括：
Figure BDA0002361263240000231
步骤一：化合物a与化合物e反应，得到化合物b；
步骤二：化合物b经脱保护反应脱去保护基PG，得到化合物c；
步骤三：化合物c与化合物f反应，得到化合物d；
步骤四：化合物d与化合物g发生偶联反应，得到式I即本发明第一或第二方面中所述的化合物。
其中，R1、R2、R3的定义如本发明第一方面中所述；X选自卤素和 -OTf，优选地，X为氯或溴；PG选自C1-6烷基氧羰基、卤素取代C1-6烷基氧羰基、C2-6烯基-烷氧羰基、Cbz、苄基和9-芴甲氧羰基，优选地， PG选自Boc；R17选自羟基和卤素，优选羟基；R18选自硼酸、C1-6烷基取代的硼酸和被一个或多个甲基取代的五元氧杂硼烷。
本发明制备方法的一些实施方式中，步骤一中所述反应在有机溶剂中进行，所述有机溶剂选自DMSO、DMF、DMA、醇类(例如甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇)、醚类(例如苯甲醚、乙醚、THF、1,4-二氧六环等)、卤代烃(例如二氯甲烷、氯仿、四氯化碳)和乙腈，优选DMSO、DMF。
本发明制备方法的一些实施方式中，步骤一中所述反应在碱的存在下进行，所述碱选自三乙胺、DIPEA、吡啶、NMM、DMAP、醋酸钠、醋酸钾、醋酸铵、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸铯、磷酸钾、氢氧化钾、氢氧化钠，优选地，所述碱选自碳酸钾、碳酸铯和吡啶。
本发明制备方法的一些实施方式中，步骤一中所述反应在0℃～200℃条件下进行，优选在50℃～150℃条件下进行。
本发明制备方法的一些实施方式中，步骤二中所述脱保护反应在溶剂中进行，所述溶剂选自水、DMF、DMA、N-甲基吡咯烷酮、醇类 (例如甲醇、乙醇、异丙醇等)、醚类(例如乙醚、THF、1,4-二氧六环等)、卤代烃(例如二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1,2-二氯乙烷等)、乙腈和乙酸乙酯，优选二氯甲烷、甲醇、四氢呋喃。
本发明制备方法的一些实施方式中，步骤二中所述脱保护反应在酸存在下进行，所述酸选自三氟乙酸、盐酸、盐酸/1,4-二氧六环溶液、盐酸/乙酸乙酯溶液、氢溴酸。
本发明制备方法的一些实施方式中，步骤二中所述脱保护反应在温度为0℃～50℃条件下进行，优选在0℃～25℃条件下进行。
本发明制备方法的一些实施方式中，步骤三中所述缩合反应在有机溶剂中进行，所述有机溶剂选自卤代烃类(例如二氯甲烷、氯仿、1,2- 二氯乙烷等)、腈类(例如乙腈等)、N-甲基吡咯烷酮、DMF、DMA、1,4- 二氧六环、DMSO及它们的任意组合，优选二氯甲烷、DMF。
本发明制备方法的一些实施方式中，步骤三中所述缩合反应在缩合剂存在下进行，所述缩合剂选自氯甲酸乙酯、氯甲酸异丙酯、HATU、 HBTU、EEDQ、DEPC、DCC、DIC、EDC、BOP、PyAOP和PyBOP，优选地，所述缩合剂为HATU、EDC。
本发明制备方法的一些实施方式中，步骤三中所述缩合反应在碱的存在下进行，所述的碱选自三乙胺、DIPEA、NMM和DMAP，优选 DIPEA。
本发明制备方法的一些实施方式中，步骤三中所述缩合反应在温度为0℃～100℃条件下进行，优选在15℃～50℃条件下进行。
本发明制备方法的一些实施方式中，步骤四所述偶联反应在有机溶剂中进行，所述有机溶剂选自卤代烃类(例如二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷等)、甲醇、乙醇、DMF、乙腈、醚类(例如乙二醇二甲醚、四氢呋喃、1,4-二氧六环)、芳烃类(例如甲苯、苯、二甲苯)、水及它们的任意组合，优选1,4-二氧六环/水、甲苯/水。
本发明制备方法的一些实施方式中，步骤四所述偶联反应在碱的存在下进行，所述碱为有机碱或无机碱；优选地，所述有机碱选自三乙胺、DIPEA、NMM、叔丁醇钠、醋酸钾、醋酸钠，所述无机碱选自碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸铯、磷酸钾、磷酸二氢钾；优选地，所述无机碱选自碳酸钾、磷酸钾、醋酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠。
本发明制备方法的一些实施方式中，步骤四所述偶联反应在催化剂催化下进行，所述催化剂选自四三苯基膦钯、醋酸钯、Pd2(dba)3、 Pd(PPh3)2Cl2、Pd(PPh3)2Cl2二氯甲烷络合物、Pd(dppf)Cl2和 Pd(amphos)Cl2，优选为四三苯基膦钯、Pd(dppf)Cl2、Pd(amphos)Cl2。
本发明制备方法的一些实施方式中，步骤四所述偶联反应在0℃～200℃条件下进行，优选在50℃～150℃条件下进行。
本发明涵盖本发明化合物的所有可能的结晶形式或多晶型物，其可为单一多晶型物或多种多晶型物的任意比例的混合物。
本发明的化合物或其药学上可接受的盐还可以形成溶剂合物，例如醇合物等。
本发明的化合物还可以是前药或以或可在体内代谢变化后释放出所述活性成分的形式。选择和制备适当的前药衍生物是本领域技术人员公知技术。
本发明的化合物还可以是化学保护的形式，所述保护基可保护在化合物的活性基团(如氨基)上，所述保护基可在体内代谢释放出活性成分。选择和制备适当的化学保护的形式是本领域技术人员公知技术。
还应当理解，本发明的某些化合物可以游离形式存在用于治疗，或适当时，以其药学上可接受的衍生物形式存在。根据在本发明中，药学上可接受的衍生物包括但不限于，药学上可接受的盐、溶剂合物、代谢物或前药，在将它们向需要其的患者给药后，能够直接或间接提供本发明的化合物或其代谢物或残余物。
本发明的化合物可以水合物或溶剂合物的形式存在，其中本发明的化合物包含作为所述化合物晶格的结构要素的极性溶剂，特别是例如水、甲醇或乙醇。极性溶剂特别是水的量可以化学计量比或非化学计量比存在。
在本发明的范围内还包括本发明化合物的代谢物，即在给药药物时体内形成的化合物。
本发明中，如无特别说明，其中：
术语“烷基”定义为直链或支链的饱和脂肪族烃基。例如，术语“C1-6烷基”指具有1至6个碳原子的直链或支链的基团(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基或正己基)，其任选地被一个或多个(诸如1至3个)适合的取代基如卤素取代(此时该基团被称作“卤代烷基”，例如-CF3、-C2F5、-CHF2、-CH2F、-CH2CF3、 -CH2Cl或-CH2CH2CF3等)。
术语“环烷基”指饱和单环或双环烃基，诸如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基。例如，如本文中所使用，术语“C3-8环烷基”指具有3至8个成环碳原子的饱和单环或双环烃基(例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基)，其任选地被一个或多个 (诸如1至3个)适合的取代基取代，例如甲基取代的环丙基。
术语“环烯基”是指含有至少一个碳-碳双键的不饱和的非芳族单环或多环(诸如双环)烃环。例如，如本文中所使用，术语“C3-8环烯基”指具有3至8个碳原子的至少具有一个碳-碳双键的不饱和的非芳族单环或多环(诸如双环)烃环，其任选地被一个或多个(诸如1至3个)适合的取代基取代，例如甲基取代的环丁烯基。
术语“烷氧基”指通过氧原子连接至母体分子部分的如上文所定义的“烷基”或“环烷基”，例如C1-6烷氧基、C1-3烷氧基或C3-8环烷氧基，例如是甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、环丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、环丁氧基、戊氧基、异戊氧基或正己氧基，或它们的异构体。
术语“杂环烷基”指饱和的单环或双环基团，其在环中具有2、3、 4、5、6、7、8或9个碳原子和一个或多个(例如一个、两个、三个或四个)选自C(＝O)、O、S、N、S(＝O)、S(＝O)2的含杂原子的基团；所述杂环烷基可以通过所述碳原子中的任一个或杂原子(如果存在的话)与分子的其余部分连接。例如如本文中所使用，术语3-8元杂环烷基、5-6 元杂环烷基或3-7元杂环烷基为在环中具有3-8个、5-6个或3-7个环原子，并且其中包含至少一个可以相同或不同的杂原子(所述杂原子是例如氧、氮或硫)。例如但不限于环氧乙烷基、氮丙啶基、氮杂环丁烷基(azetidinyl)、氧杂环丁烷基(oxetanyl)、四氢呋喃基、吡咯烷基、吡咯烷酮基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基、四氢吡喃基。
术语“杂环烯基”是指含有至少一个碳-碳双键的不饱和的非芳族单环或多环(诸如双环)基团，其在环中具有2、3、4、5、6、7、8或9个碳原子和一个或多个(例如一个、两个、三个或四个)选自C(＝O)、O、 S、N、S(＝O)、S(＝O)2的含杂原子的基团；所述杂环烯基可以通过所述碳原子中的任一个或杂原子(如果存在的话)与分子的其余部分连接。例如如本文中所使用，术语3-8元杂环烯基为在环中具有3-8个环原子，并且其中包含至少一个可以相同或不同的杂原子(所述杂原子是例如氧、氮或硫)。例如二氧杂环戊烯基(dioxolinyl)。
术语“芳基”指具有共轭π电子系统的全碳单环或稠合环多环芳族基团。例如，如本文中所使用，术语“C6-10芳环”意指含有6至10个碳原子的芳族基团，诸如苯基或萘基。芳基任选地被1或多个(诸如1至 3个)适合的取代基取代，例如被烷基(-CH3、-C2H5)、卤素(F、Cl、Br)取代。
术语“杂芳基”指单环、双环或三环芳族环系统，其具有5、6、8、 9、10、11、12、13或14个环原子，例如具有5-10个环原子，特别是 1或2或3或4或5或6或9或10个碳原子，且其包含至少一个可以相同或不同的杂原子(所述杂原子是例如氧、氮或硫)，并且，另外在每一种情况下可为苯并稠合的。例如，如本文中所使用，术语“5-10元杂芳基”意指具有5-10个环原子的单环、双环或三环芳族环系统，并且其中包含至少一个可以相同或不同的杂原子(所述杂原子是例如氧、氮或硫)。特别地，杂芳基选自噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、等以及它们的苯并衍生物；或吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基等，以及它们的苯并衍生物。杂芳基任选地被1或多个(诸如1至3 个)适合的取代基取代，例如被烷基(-CH3、-C2H5)、卤素(F、Cl、 Br)取代。如本文中所使用，术语“卤代”或“卤素”基团定义为包括F、 Cl、Br或I。
术语“卤素”是指氟、氯、溴、碘。
术语“C1-6亚烷基”是指C1-6烷基上去掉一个氢原子剩下的二价基团，其中“C1-6烷基”定义如上所述。例如C1-4亚烷基、C1-2亚烷基、 C1亚烷基、C2亚烷基、C3亚烷基、C4亚烷基、C5亚烷基、C6亚烷基。
术语“巯基”又称氢硫基或硫醇基，结构式为-SH。
术语“氰基”中的碳原子和氮原子通过三键连接，结构式为-CN。
术语“硝基”是指硝酸分子中去掉一个羟基后剩下的基团，结构式为 -NO2。
术语“烯基”是指含有至少一个碳-碳双键并且其一个氢原子被键代替的脂肪烃基团。烯基可以是直链或支链烯基，并且含有大约2至大约 15个碳原子。例如本文中“C2-6烯基”为含有2至6个碳原子的烯基。烯基的非限制性例子包括乙烯基，丙烯基，正丁烯基，3-甲基丁-2-烯基，正戊烯基，辛烯基和癸烯基。烯基可以是未取代的烯基，也可以是被一个或多个相同或不同的取代基取代的烯基，每个取代基独立地选自卤素，烯基，炔基，芳基，环烷基，氰基，羟基，-O-烷基，-O-芳基，-亚烷基-O-烷基，烷硫基，-NH2，-NH(烷基)，-N(烷基)2，-NH(环烷基)，-O-C(O)-烷基，-O-C(O)-芳基，-O-C(O)-环烷基，-C(O)OH和-C(O)O- 烷基。
术语“炔基”是指具有一个或多个C≡C三键的烃基。所述炔基具有但不限于2-18个碳原子，例如其具有2-10个碳原子，例如2-6个碳原子。本文的“低级炔基”是指碳数较少的炔基，例如其具有2-8个碳原子，例如2-6个碳原子，例如2-4个碳原子。本文的炔基实例包括但不限于乙炔基、2-丙炔基、2-丁炔基和1,3-丁二炔基等。本文定义的炔基出现数字范围时，例如“C2-6炔基”是指可由2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子或6个碳原子构成的炔基基团，本文的炔基也涵盖未指定数字范围的情况。
术语“氨基”是指取代或未取代的“-NH2”。例如，代表性氨基包括- NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHC1-3烷基、-N(C1-3烷基)2等。除非另有指示，含有氨基部分的本发明化合物可以包括其被保护的衍生物。适合氨基部分的保护基团包括乙酰基、叔丁氧羰基、苄氧羰基等。
术语“取代的”指所指定的原子上的一个或多个(例如一个、两个、三个或四个)氢被从所指出的基团的选择代替，条件是未超过所指定的原子在当前情况下的正常原子价并且所述取代形成稳定的化合物。取代基和/或变量的组合仅仅当这种组合形成稳定的化合物时才是允许的。
术语“任选被…取代”指任选地被特定的基团、原子团取代或部分取代或未取代。
当某一基团被描述为“任选地被一个或多个取代基取代”，则该基团可(1)未被取代或(2)被取代。如果某一基团上的碳被描述为任选地被一个或多个取代基取代，则碳上的一个或多个氢(至存在的任何氢的程度) 可单独和/或一起被独立地选择的取代基取代或未取代。如果某一基团上的氮被描述为任选地被一个或多个取代基取代，则氮上的一个或多个氢(至存在的任何氢的程度)可各自被独立地选择的取代基取代或未取代。
当取代基的键显示为穿过环中连接两个原子的键时，则这样的取代基可键连至该可取代的环中的任一成环原子。
术语“立体异构体”表示由于至少一个不对称中心形成的异构体。在具有一个或多个(例如一个、两个、三个或四个)不对称中心的化合物中，其可产生外消旋体、外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单独的非对映异构体。特定个别分子也可以几何异构体(顺式/反式)存在。类似地，本发明的化合物可以两种或更多种处于快速平衡的结构不同的形式的混合物(通常称作互变异构体)存在。互变异构体的代表性实例包括酮-烯醇互变异构体、苯酚-酮互变异构体、亚硝基-肟互变异构体、亚胺-烯胺互变异构体等。要理解，本申请的范围涵盖所有这样的以任意比例(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、 95％、96％、97％、98％、99％)的异构体或其混合物。
术语“药学上可接受的”是指物质或组合物必须与构成制剂的其他组分和/或用其治疗的哺乳动物在化学和/或毒理学上相容。
术语“药学上可接受的盐”包括与药学上可以接受的无机酸或者有机酸、或者无机碱或有机碱形成的常规盐。
适合的盐的综述参见Stahl及Wermuth的“Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use”(Wiley-VCH, 2002)。用于制备本发明的化合物的药学上可接受的盐的方法为本领域技术人员已知的。
术语“药物组合物”包括包含治疗有效量的本发明的化合物的产品，以及直接地或间接地由本发明的化合物的组合产生的任何产品。
术语“有效量”是指足以实现所需治疗效果的量，例如，实现减轻与待治疗疾病相关的症状的量。
术语“治疗”表示本发明化合物的任何给药，包括：
(1)在可能有疾病倾向、但是尚未经历或显示疾病病理学或症状学的动物中防止疾病发生；
(2)在正在经历或显示疾病病理学或症状学的动物中抑制疾病(也就是阻止病理学和/或症状学的进一步发展)；或者
(3)在正在经历或显示疾病病理学或症状学的动物中改善疾病(也就是逆转病理学和/或症状学)。
“治疗”目的是减轻或消除所针对的疾病状态或病症。如果受试者按照本文所述方法接受了治疗量的化合物、其光学异构体或其药学上可接受的盐或其药物组合物，该受试者一种或多种指征和症状表现出可观察到的和/或可检测出的降低或改善，则受试者被成功地“治疗”了。还应当理解，所述的疾病状态或病症的治疗的不仅包括完全地治疗，还包括未达到完全地治疗，但实现了一些生物学或医学相关的结果。
术语“室温”是指20℃±5℃。
术语“约”在用于修饰某一数值或数值范围时，是指包括该数值或数值范围以及该数值或数值范围的本领域技术人员可接受的误差范围，例如该误差范围为±10％、±5％、±4％、±3％、±2％、±1％、±0.5％等。
本发明取得了如下的有益效果：
本发明化合物或药物组合物对去泛素化酶USP7的活性有较强抑制作用，可用于预防或治疗与USP7调节相关的疾病或病症，特别是癌症。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可在市场上购买获得的常规产品。
在常规的合成法以及实施例、和中间体合成例中，各缩写的意思如下表所示。
Figure BDA0002361263240000321
Figure BDA0002361263240000331
以下实施例中记载的化合物结构通过核磁共振(1H NMR)或质谱 (MS)来确定，核磁共振、质谱的仪器及操作条件如下：
(1)核磁共振(1H NMR)的测定仪器为Bruker 400MHz核磁共振仪。测定溶剂为氘代甲醇(Methanol-d4)、氘代氯仿(CDCl3)、六氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)、氘代水(D2O)。内标物质为四甲基硅烷(TMS)。
核磁共振(NMR)图谱中的缩写代表的含义如下：
s：单峰(singlet)；d：二重峰(doublet)；t：三重峰(triplet)；q：四重峰(quartet)；dd：双二重峰(double doublet)；qd：四二重峰(quartet doublet)；ddd：双双二重峰(double double doublet)；ddt：双双三重峰 (double double triplet)；dddd：双双双二重峰(double double double doublet)；m：多重峰(multiplet)；br：宽峰(broad)；δ：化学位移；J：偶合常数；Hz：赫兹。
将全部δ值用ppm值表示。
(2)质谱(MS)的测定仪器为Agilent(ESI)质谱仪，型号为Agilent 6120B。
以下实施例使用的制备薄层色谱采用烟台新诺化工有限公司生产的薄层层析硅胶板(厚度为1mm，规格为200x 200mm，粘结剂为羧甲基纤维素钠)，检测仪器为ZF-20D暗箱式紫外分析仪，检测波长为254nm、365nm。
以下实施例使用的制备型高效液相色谱的仪器及操作条件为：
方法A：
色谱柱：Waters SunFire Prep C18 OBD 5μm 19×150mm；
流动相A：乙腈；流动相B：水(含有0.05wt％甲酸)；
Figure BDA0002361263240000341
方法B：
色谱柱：Waters SunFire Prep C18 OBD 5μm 19×150mm；
流动相A：乙腈；流动相B：水(含有0.05wt％甲酸)；
Figure BDA0002361263240000342
方法C：
色谱柱：Waters SunFire Prep C18 OBD 5μm 19×150mm；
流动相A：乙腈；流动相B：水(含有0.05wt％甲酸)；
Figure BDA0002361263240000343
方法D：
色谱柱：Waters SunFire Prep C18 OBD 5μm 19×150mm；
流动相A：乙腈；流动相B：水(含有0.05wt％甲酸)；
Figure BDA0002361263240000344
方法E：
色谱柱：Waters SunFire Prep C18 OBD 5μm 19×150mm；
流动相A：乙腈；流动相B：水(含有0.05wt％甲酸)；
Figure BDA0002361263240000351
方法F：
色谱柱：Waters XBridge Prep C18 OBD 5μm 19×150mm；
流动相A：乙腈；流动相B：水(含有0.05wt％甲酸)；
Figure BDA0002361263240000352
方法G：
色谱柱：Waters SunFire Prep C18 OBD 5μm 19×150mm；
流动相A：乙腈；流动相B：水(含有0.05wt％三氟乙酸)；
Figure BDA0002361263240000353
方法I：
色谱柱：Waters SunFire Prep C18 OBD 5μm 19×150mm；
流动相A：乙腈；流动相B：水(含有0.05wt％甲酸)；
Figure BDA0002361263240000354
方法J：
色谱柱：Waters SunFire Prep C18 OBD 5μm 19×150mm；
流动相A：乙腈；流动相B：水(含有0.05wt％三氟乙酸)；
Figure BDA0002361263240000361
方法K：
色谱柱：Waters SunFire Prep C18 OBD 5μm 19×150mm；
流动相A：乙腈；流动相B：水(含有0.05wt％甲酸)；
Figure BDA0002361263240000362
方法L：
色谱柱：Waters SunFire Prep C18 OBD 5μm 19×150mm；
流动相A：乙腈；流动相B：水(含有0.05wt％甲酸)；
Figure BDA0002361263240000363
方法M：
色谱柱：Waters SunFire Prep C18 OBD 5μm 19×150mm；
流动相A：乙腈；流动相B：水(含有0.05wt％三氟乙酸)；
Figure BDA0002361263240000364
方法N：
色谱柱：Waters SunFire Prep C18 OBD 5μm 19×150mm；
流动相A：乙腈；流动相B：水(含有0.05wt％三氟乙酸)；
Figure BDA0002361263240000371
方法O：
色谱柱：Waters XBridge Prep C18 OBD 5μm 19×150mm；
流动相A：乙腈；流动相B：水(含有0.05wt％甲酸)；
Figure BDA0002361263240000372
方法P：
色谱柱：Waters SunFire Prep C18 OBD 5μm 19×150mm；
流动相A：乙腈；流动相B：水(含有0.05wt％甲酸)；
Figure BDA0002361263240000373
实施例一 (R)-3-((4-羟基-1-(3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)-7-(1H-吲唑-6- 基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物1)的合成
Figure BDA0002361263240000374
步骤一：(R)-7-溴-3-((4-羟基-1-(3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物1-2)的合成
室温下，将化合物1-1(0.13g，0.56mmol)、(R)-3-苯基-1-(1-氧杂-6-氮杂-螺[2.5]辛-6-基)丁酮(合成方法参考文献WO2018073602) (0.15g，0.56mmol)溶于DMF(4mL)中，加入碳酸钾(0.16g，1.13mmol)，反应液升温至80℃反应8h。反应液降至室温，制备型高效液相色谱分离纯化(方法D)，冷冻干燥，得标题化合物，0.14g。 ESI-MS(m/z):490.1,492.1[M+H]+。
步骤二：(R)-3-((4-羟基-1-(3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)-7-(1H-吲唑-6-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物1)的合成
室温下，将化合物1-2(40mg，0.08mmol)、(1H-吲唑-6-基)硼酸(16 mg，0.10mmol)、碳酸钾(31mg，0.24mmol)依次加入反应瓶中，再加入1,4-二氧六环(2mL)和水(0.5mL)，最后加入四三苯基膦钯 (8.0mg，0.008mmol)，氮气置换三次。在氮气保护下加热至80℃搅拌反应4h。将反应液冷至室温，减压浓缩反应液，制备型高效液相色谱分离纯化(方法D)，冷冻干燥，得标题化合物，32mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.18(s,1H)，8.51(s,1H),8.45(s, 1H),8.12-8.04(m,2H),7.84(d,J＝8.0Hz,1H),7.69(d,J＝8.0Hz,1H), 7.29-7.10(m,5H),4.91(d,J＝4.0Hz,1H),4.09-3.85(m,3H),3.72-3.61 (m,1H),3.26-3.12(m,2H),2.94-2.81(m,1H),2.66-2.53(m,2H),1.59-1.27 (m,4H),1.24-1.16(m,3H).ESI-MS(m/z):528.3[M+H]+。
实施例二 (R)-3-((4-羟基-1-(3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)-7-(4-羟基苯 基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物2)的合成
Figure BDA0002361263240000381
室温下，将化合物1-2(30mg，0.06mmol)、4-羟基苯硼酸(20 mg，0.09mmol)、碳酸钾(25mg，0.18mmol)依次加入反应瓶中，再加入1,4-二氧六环(4mL)和水(0.8mL)。最后加入四三苯基膦钯 (7.1mg，0.006mmol)，氮气置换三次。在氮气保护下加热至80℃搅拌反应4h。将反应液冷至室温，减压浓缩反应液，制备型高效液相色谱分离纯化(方法D)，冷冻干燥，得标题化合物，20mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.74(s,1H),8.34(s,1H),7.97(d,J ＝10.4Hz,1H),7.91-7.83(m,2H),7.28-7.22(m,4H),7.20-7.09(m,1H), 6.91-6.82(m,2H),4.89(d,J＝4.8Hz,1H),4.10-3.99(m,1H),3.99-3.80 (m,2H),3.70-3.60(m,1H),3.28-3.09(m,2H),2.87-2.81(m,1H),2.71-2.52 (m,2H),1.57-1.29(m,3H),1.25-1.16(m,4H).ESI-MS(m/z):504.2[M+H]+。
实施例三 (R)-7-(4-(氨基甲基)苯基)-3-((4-羟基-1-(3-苯基丁酰基)哌啶-4- 基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物3)的合成
Figure BDA0002361263240000391
步骤一：(R)-4-(3-((4-羟基-1-(3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基-4-氧代 -3,4-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-7-基)苄基氨基甲酸叔丁酯(化合物3-1)的合成
根据实施例二中所述的操作，利用化合物1-2(20mg，0.04mmol) 和4-(N-叔丁氧羰基氨甲基)苯硼酸(15mg，0.06mmol)为反应原料分别代替化合物1-2(30mg，0.06mmol)和4-羟基苯硼酸进行反应，减压浓缩反应液，得标题化合物的粗品，21mg，直接用于下一步反应。ESI-MS(m/z):617.3[M+H]+。
步骤二：(R)-7-(4-(氨基甲基)苯基)-3-((4-羟基-1-(3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物3)的合成
在粗品化合物3-1(21mg，0.03mmol)中加入盐酸/1,4-二氧六环溶液(5mL，盐酸浓度为4mol/L)，室温反应1h。制备型高效液相色谱分离纯化(方法F)，制备液加入稀盐酸(0.5mL，1mol/L)，冷冻干燥，得标题化合物的盐酸盐，10mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(s,1H),8.37(s,3H),8.17-8.02 (m,3H),7.58(d,J＝8.4Hz,2H),7.29-7.25(m,4H),7.17-7.12(m,1H), 4.10-3.86(m,5H),3.71-3.62(m,2H),3.26-3.12(m,2H),2.91-2.84(m,1H), 2.69-2.54(m,2H),1.58-1.23(m,4H),1.20(d,J＝6.2Hz,3H).ESI-MS (m/z):517.3[M+H]+。
实施例四 7-(1-氨基-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((4-羟基-1-((R)-3-苯基丁酰 基)哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物4)的合成
Figure BDA0002361263240000401
步骤一：(5-(3-((4-羟基-1-((R)-3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)-4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4-1)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物1-2(40mg，0.11 mmol)和5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2,3-二氢-1H-茚-1- 基)氨基甲酸叔丁酯(46mg，0.09mmol)为反应原料分别代替化合物 1-2和(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，减压浓缩反应液，经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：二氯甲烷/甲醇＝15/1(v/v))，得标题化合物，45mg。ESI-MS(m/z):643.4[M+H]+。
步骤二：7-(1-氨基-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((4-羟基-1-((R)-3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物4)的合成
根据实施例三步骤二中所述的操作，利用化合物4-1(30mg，0.05 mmol)为反应原料代替化合物3-1进行反应，制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，制备液减压浓缩，冷冻干燥，得标题化合物的甲酸盐，20mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.47(s,1H),8.43(s,1H),8.02(d,J ＝12.0Hz,1H),7.97(s,1H),7.92(d,J＝8.0Hz,1H),7.58(d,J＝8.0Hz, 1H),7.30-7.21(m,4H),7.19-7.11(m,1H),4.59(t,J＝6.8Hz,1H),4.10- 3.98(m,1H),3.94(d,J＝8.0Hz,1H),3.88(d,J＝14.4Hz,1H),3.82(d,J ＝14.0Hz,1H),3.30-3.01(m,3H),2.98-2.78(m,2H),2.72-2.55(m,2H), 2.49-2.42(m,1H),2.00-1.85(m,1H),1.46-1.10(m,4H),1.21(dd,J＝6.8, 4.0Hz,3H).ESI-MS(m/z):543.3[M+H]+。
实施例五 3-((4-羟基-1-((R)-3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)-7-(1-(甲氨 基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物5)的合成
Figure BDA0002361263240000411
步骤一：N-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2,3-二氢-1H-茚-1-胺(化合物5-2)的合成
将化合物5-1(2.00g，6.59mmol)溶于甲醇(80mL)中，加入甲胺的乙醇溶液(7mL，33％wt)，室温反应12h，加入甲酸(0.80mL， 21.08mmol)调节pH≈5，再加入氰基硼氢化钠(1.24g，19.76mmol)，继续室温反应12h，减压浓缩反应液后，抽滤，减压浓缩滤液，得标题化合物的甲酸盐粗品，2.08g，直接用于下一步反应。ESI-MS (m/z):274.3[M+H]+。
步骤二：(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2,3-二氢-1H-茚-1- 基)氨基甲酸叔丁酯(化合物5-3)的合成
将化合物5-2的甲酸盐粗品(2.03g，6.36mmol)溶于四氢呋喃(40 mL)中，依次加入饱和碳酸氢钠水溶液(6.36mmol，40mL)、二碳酸二叔丁酯(1.67g，7.63mmol)，室温反应6h。反应液用乙酸乙酯 (3x 100mL)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，减压浓缩后，经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝9/1(v/v))，得标题化合物，0.87g。ESI-MS(m/z):318.2[M- 56+H]+。
步骤三：(5-(3-((4-羟基-1-((R)-3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)-4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物5-4)的合成
根据实施例二中所述的操作，利用化合物5-3(57mg，0.15mmol) 为反应原料代替4-羟基苯硼酸进行反应，反应液通过制备型高效液相色谱分离纯化(方法E)，冷冻干燥，得标题化合物，60mg。ESI-MS (m/z):657.4[M+H]+。
步骤四：3-((4-羟基-1-((R)-3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)-7-(1-(甲氨基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物5)的合成
根据实施例三步骤二中所述的操作，利用化合物5-4(45mg，0.07 mmol)为反应原料代替化合物3-1进行反应，制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，制备液加入稀盐酸(0.5mL，1mol/L)，冷冻干燥，得标题化合物的盐酸盐，40mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.45(br,1H),9.30(br,1H),8.52(s, 1H),8.09(d,J＝10.3Hz,1H),8.04(s,1H),7.98(d,J＝8.2Hz,1H),7.78 (d,J＝8.0Hz,1H),7.33-7.20(m,4H),7.20-7.09(m,1H),4.72(br,1H), 4.09-3.83(m,3H),3.72-3.59(m,1H),3.30-3.11(m,3H),3.02-2.83(m,2H), 2.68-2.53(m,5H),2.49-2.39(m,2H),2.26-2.16(m,1H),1.58-1.22(m,4H), 1.20(d,J＝5.9Hz,3H).ESI-MS(m/z):557.4[M+H]+。
实施例六 7-(2-氨基-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((4-羟基-1-((R)-3-苯基丁酰 基)哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物6)的合成
Figure BDA0002361263240000431
步骤一：(5-(3-((4-羟基-1-((R)-3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)-4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6-1)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用5-((4,4,5,5-四甲基-1,3,2- 二氧杂硼烷-2-基)-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸叔丁酯(33mg，0.09 mmol)为反应原料代替(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，减压浓缩反应液，得标题化合物的粗品，39mg，直接用于下一步反应。ESI-MS (m/z):643.3[M+H]+。
步骤二：7-(2-氨基-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((4-羟基-1-((R)-3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物6)的合成
根据实施例三步骤二中所述的操作，利用化合物6-1粗品(39mg， 0.06mmol)为反应原料代替化合物3-1进行反应，反应液通过制备液相分离纯化(方法F)，制备液加入稀盐酸(0.5mL，1mol/L)，冷冻干燥，得标题化合物的盐酸盐，21mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.46(s,1H),8.39(d,J＝5.6Hz, 3H),8.10(d,J＝10.4Hz,1H),7.95(s,1H),7.93-7.88(m,1H),7.38(d,J＝ 8.0Hz,1H),7.29-7.25(m,4H),7.20-7.11(m,1H),4.11-3.81(m,4H),3.73- 3.59(m,1H),3.33(td,J＝16.5,7.6Hz,2H),3.27-3.13(m,2H),3.06(td,J ＝16.3,5.3Hz,2H),2.91-2.84(m,1H),2.69-2.53(m,2H),1.58-1.22(m, 4H),1.20(d,J＝6.7Hz,3H).ESI-MS(m/z):543.3[M+H]+。
实施例七 3-((4-羟基-1-((R)-3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)-7-(2-(甲氨 基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物7)的合成
Figure BDA0002361263240000441
步骤一：5-溴-2,3-二氢-1H-茚-2-甲氨基甲酸叔丁酯(化合物7-2) 的合成
称取化合物7-1(700mg，2.24mmol)溶于DMF(14mL)中，降温至0℃，加入氢化钠(135mg，3.36mmol，60％purity)，保持在该温度下反应1h。再加入碘甲烷(382mg，2.69mmol)，缓慢升至室温反应16h。反应液经饱和氯化铵水溶液(100mL)淬灭，乙酸乙酯萃取(3x 50mL)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(3x 50mL)。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩滤液，得标题化合物，600mg，直接用于下一步反应。ESI-MS(m/z):270.0,272.0[M-56+H]+。
步骤二：(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2,3-二氢-1H-茚 -2-基)-甲氨基甲酸叔丁酯(化合物7-3)的合成
称取化合物7-2(200mg，0.61mmol)，联硼酸频哪醇酯(187mg， 0.74mmol)、乙酸钾(181mg，1.84mmol)加入1,4-二氧六环(5mL) 中，氮气置换3次，加入Pd(dppf)Cl2(22mg，0.03mmol)，氮气置换三次，在氮气氛围下升温至80℃反应16h。反应液冷至室温后，减压浓缩反应液，经硅胶柱层析分离纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1 (v/v))，得标题化合物，200mg。ESI-MS(m/z):318.2[M-56+H]+。
步骤三：(5-(3-((4-羟基-1-((R)-3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)-4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2,3-二氢-1H-茚-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物7-4)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物7-3(23mg，0.06 mmol)为反应原料代替(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，反应液经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝15/1(v/v))，得标题化合物，10mg。ESI-MS(m/z):657.3[M+H]+。
步骤四：3-((4-羟基-1-((R)-3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)-7-(2-(甲氨基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物7)的合成
根据实施例三步骤二中所述的操作，利用化合物7-4(10mg，0.02 mmol)为反应原料代替化合物3-1进行反应，反应液通过制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，制备液加入稀盐酸(0.5mL，1mol/L)，冷冻干燥，得标题化合物的盐酸盐，8mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.47-9.21(m,2H),8.46(s,1H),8.09 (d,J＝10.4Hz,1H),7.95(s,1H),7.90(dd,J＝7.9,1.7Hz,1H),7.39(t,J ＝8.2Hz,1H),7.32-7.21(m,4H),7.19-7.12(m,1H),4.12-3.79(m,4H), 3.66(t,J＝11.7Hz,1H),3.34(td,J＝16.1,7.8Hz,2H),3.28-3.07(m,4H), 2.86(t,J＝11.2Hz,1H),2.59(m,4H),2.48-2.52(m,1H),1.57-1.22(m, 4H),1.20(dd,J＝7.0,1.7Hz,3H).ESI-MS(m/z):557.3[M+H]+。
实施例八 7-(2-(二甲氨基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((4-羟基-1-((R)-3-苯 基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物8)的合成
Figure BDA0002361263240000451
步骤一：5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-茚-2(3H)-酮 (化合物8-2)的合成
根据实施例七步骤二中所述的操作，利用化合物8-1(1.00g，4.74 mmol)为反应原料代替化合物7-2进行反应，经硅胶柱层析分离纯化 (洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1(v/v))，得标题化合物，1.10g。ESI-MS(m/z):259.1[M+H]+。
步骤二：2-((二甲氨基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)硼酸(化合物8-3)的合成
向甲醇(5mL)中加入化合物8-2(100mg，0.39mmol)、二甲胺的甲醇溶液(5mL，2M)，室温反应20h后，加入硼氢化钠(43 mg，1.16mmol)，继续反应2h。反应液经制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，冷冻干燥，得标题化合物的甲酸盐，10mg。ESI-MS (m/z):206.2[M+H]+。
步骤三：7-(2-(二甲氨基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((4-羟基-1-((R)-3- 苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物8)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物8-3的甲酸盐(10 mg，0.05mmol)为反应原料代替(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，反应液经制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，冷冻干燥，得标题化合物的甲酸盐，11mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.43(s,1H),8.21(s,1H),8.01(d,J ＝10.3Hz,1H),7.87(s,1H),7.80(d,J＝7.8Hz,1H),7.31-7.21(m,5H), 7.17-7.12(m,1H),4.92(s,2H),4.08-4.01(m,1H),4.00-3.89(m,1H),3.88- 3.83(m,1H),3.69-3.63(m,1H),3.27-3.14(m,2H),3.10-3.00(m,2H), 2.90-2.76(m,3H),2.66-2.56(m,2H),2.22(s,6H),1.56-1.26(m,4H),1.20 (d,J＝6.8Hz,3H).ESI-MS(m/z):571.3[M+H]+。
实施例九 (R)-3-((4-羟基-1-(3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)-7-(异吲哚啉- 5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物9)的合成
Figure BDA0002361263240000461
步骤一：(R)-5-(3-((4-羟基-1-(3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)-4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-7-基)异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯(化合物9-1) 的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2- 二氧杂硼烷-2-基)异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯(32mg，0.09mmol)为反应原料代替(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，反应液经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1(v/v))，得标题化合物，16mg。 ESI-MS(m/z):629.3[M+H]+。
步骤二：(R)-3-((4-羟基-1-(3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)-7-(异吲哚啉-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物9)的合成
根据实施例七步骤二中所述的操作，利用化合物9-1(16mg，0.03 mmol)为反应原料代替化合物7-2进行反应，反应液经制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，制备液加入稀盐酸(0.5mL，1mol/L)，冷冻干燥，得标题化合物的盐酸盐，12mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.72(t,J＝5.8Hz,2H),8.52(s,1H), 8.11(s,1H),8.07(d,J＝8Hz,2H),7.51(d,J＝8.1Hz,1H),7.25(p,J＝ 3.1Hz,4H),7.15(dt,J＝5.4,2.6Hz,1H),4.93(s,1H),4.58(t,J＝5.6Hz, 2H),4.54(t,J＝5.6Hz,2H),4.03(t,J＝8.4Hz,1H),3.98-3.83(m,2H), 3.65(s,1H),3.28-3.13(m,2H),2.87(t,J＝11.4Hz,1H),2.68-2.53(m,2H), 1.58-1.24(m,4H),1.20(dd,J＝6.9,1.6Hz,3H).ESI-MS(m/z): 529.3[M+H]+。
实施例十 3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4- 基)甲基)-7-(1-(甲氨基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物 10)的合成
Figure BDA0002361263240000481
步骤一：4-((7-溴-4-氧代噻吩并[3,4-d]嘧啶-3(4H)-基)甲基)-4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物10-1)的合成
根据实施例一步骤一中所述的操作，利用1-氧杂-6-氮杂-螺[2.5]辛 -6-甲酸叔丁基酯(1.38g，6.49mmol)为反应原料代替化合物(R)-3-苯基-1-(1-氧杂-6-氮杂-螺[2.5]辛-6-基)丁酮进行反应，反应液倒入水(100 mL)中，析出固体，抽滤，滤饼用石油醚(3x10mL)洗涤，得标题化合物，1.45g。ESI-MS(m/z):388.0,390.0[M-56+H]+。
步骤二：7-溴-3-((4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)- 酮(化合物10-2)的合成
将化合物10-1(200mg，0.45mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，滴加盐酸/乙酸乙酯溶液(2mL，盐酸浓度为4mol/L)，室温反应2h。减压浓缩反应液后，得标题化合物的盐酸盐，150mg。不经纯化直接用于下一步反应。ESI-MS(m/z):344.0,346.0[M+H]+。
步骤三：7-溴-3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物10-3)的合成
在4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酸(102mg，0.49mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中，依次加入HATU(178mg，0.47mmol)、DIPEA (173mg，1.34mmol)，反应5分钟后，加入化合物10-2的盐酸盐 (0.17g，0.45mmol)，室温反应2h后，减压浓缩反应液，制备型高效液相色谱分离纯化(方法B)，冷冻干燥，得标题化合物，127mg。 ESI-MS(m/z):534.0,536.0[M+H]+。
步骤四：(5-(3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基-4-羟基哌啶-4-基)甲基)-4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2,3-二氢-1H-茚- 1-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物10-4)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物10-3(60mg，0.07 mmol)和化合物5-3(50mg，0.13mmol)为反应原料分别代替化合物 1-2和(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：二氯甲烷/甲醇＝19/1(v/v))，得标题化合物，80mg。ESI-MS(m/z): 701.2[M+H]+。
步骤五：3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶 -4-基)甲基)-7-(1-(甲氨基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶- 4(3H)-酮(化合物10)的合成
根据实施例十步骤二中所述的操作，利用化合物10-4(80mg，0.05 mmol)为反应原料代替化合物10-1进行反应，反应液经制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，制备液加入稀盐酸(0.5mL，1mol/L)，冷冻干燥，得标题化合物的盐酸盐，48mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.56(s,1H),9.41(s,1H),8.51(d,J ＝1.6Hz,1H),8.13(d,J＝3.9Hz,1H),8.04(d,J＝1.6Hz,1H),7.98(dd, J＝8.0,1.7Hz,1H),7.85-7.78(m,2H),6.26(td,JH-F＝55.2Hz,JH-H＝3.8 Hz,1H),6.05-5.95(m,1H),4.78-4.98(m,1H),4.08-3.88(m,3H),3.69(d, J＝13.6Hz,1H),3.35-3.15(m,3H),3.0-2.84(m,3H),2.57(t,J＝5.3Hz, 3H),2.50-2.42(m,2H),2.28-2.15(m,1H),1.65-1.30(m,4H).ESI-MS (m/z):601.2[M+H]+。
实施例十一 3-((1-(4,4-二氟-3-苯基丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)-7-(1- (甲氨基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物11)的合成
Figure BDA0002361263240000501
步骤一：4-羟基-4-((4-氧代-7-(1-氧代-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并 [3,4-d]嘧啶-3(4H)-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物11-1)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物10-1(378mg， 0.85mmol)和5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2,3-二氢-1H-茚 -1-酮(329mg，1.28mmol)为反应原料分别代替化合物1-2和(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：乙酸乙酯/甲醇＝25/1(v/v))，得标题化合物，420mg。ESI-MS(m/z):496.1[M+H]+。
步骤二：3-((4-羟基哌啶-4-基)甲基)-7-(1-氧代-2,3-二氢-1H-茚-5-基) 噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物11-2)的合成
根据实施例三步骤二中所述的操作，利用化合物11-1(420mg， 0.85mmol)为反应原料代替化合物3-1进行反应，反应液减压浓缩，加入乙酸乙酯，室温搅拌，抽滤，得标题化合物的盐酸盐，360mg。ESI- MS(m/z):396.1[M+H]+。
步骤三：3-((1-(4,4-二氟-3-苯基丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)-7- (1-氧代-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物11-3) 的合成
称取4,4-二氟-3-苯基丁酸(15mg，0.07mmol)溶于DMF(1mL) 中，依次加入HATU(28mg，0.07mmol)、化合物11-2盐酸盐(30 mg,0.07mmol)和DIPEA(27mg，0.21mmol)，室温反应1h。反应液经制备型高效液相色谱分离纯化(方法D)，冷冻干燥，得标题化合物，34mg。ESI-MS(m/z):578.2[M+H]+。
步骤四：3-((1-(4,4-二氟-3-苯基丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)-7- (1-(甲氨基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物 11)的合成
将化合物11-3(16mg，0.03mmol)分散于甲醇(5mL)和二氯甲烷(1mL)中,加入甲胺的乙醇溶液(26mg，0.83mmol)，室温反应16h。加入氰基硼氢化钠(5mg，0.08mmol)，滴加冰乙酸调节pH≈5，室温继续反应16h。反应液减压浓缩后，通过制备型高效液相色谱分离纯化(方法J)，冷冻干燥，得标题化合物的三氟乙酸盐，11mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.90-8.72(m,2H),8.56-8.49(m, 1H),8.11-7.96(m,3H),7.71-7.62(m,1H),7.35-7.25(m,5H),6.23(td,JH- F＝56.6Hz,JH-H＝3.9Hz,1H),4.92(s,1H),4.82-4.72(m,1H),4.06-3.92 (m,2H),3.87(s,1H),3.76-3.58(m,2H),3.25-3.08(m,2H),3.01-2.87(m, 3H),2.86-2.75(m,1H),2.69-2.62(m,3H),2.23-2.12(m,1H),1.61-1.14(m, 5H).ESI-MS(m/z):593.2[M+H]+。
实施例十二 (3-(1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4- 基)甲基)-7-(2-(甲氨基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物 12)的合成
Figure BDA0002361263240000511
步骤一：(5-(3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)-4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2,3-二氢-1H-茚- 2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物12-1)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物10-3(20mg，0.04 mmol)和化合物7-3(21mg，0.06mmol)为反应原料分别代替化合物 1-2和(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，反应液减压浓缩后，经制备薄层色谱分离纯化(洗脱液：二氯甲烷/甲醇＝20/1(v/v))，得标题化合物， 14mg。ESI-MS(m/z):701.3[M+H]+。
步骤二：(3-(1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶 -4-基)甲基)-7-(2-(甲氨基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶- 4(3H)-酮(化合物12)的合成
根据实施例十步骤二中所述的操作，利用化合物12-1(14mg，0.02 mmol)为反应原料代替化合物10-1进行反应，反应液减压浓缩后，通过制备型高效液相色谱分离纯化(方法A)，制备液加入稀盐酸(0.5 mL，1mol/L)，冷冻干燥，得标题化合物的盐酸盐，5mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.03(t,J＝7.0Hz,2H),8.46(d,J ＝1.5Hz,1H),8.05(d,J＝4.3Hz,1H),7.96(s,1H),7.91(dd,J＝7.8,1.7 Hz,1H),7.81(dt,J＝4.1,2.5Hz,1H),7.38(d,J＝8.0Hz,1H),6.26(td, JH-F＝56.0Hz,JH-H＝4.0H z,1H),5.98(dd,J＝5.9,2.5Hz,1H),5.09-4.86 (m,2H),4.01(p,J＝6.3Hz,2H),3.93(d,J＝10.1Hz,2H),3.69(d,J＝ 13.6Hz,1H),3.39-3.31(m,2H),3.31-3.20(m,2H),3.13(td,J＝17.3,6.1 Hz,2H),2.98-2.83(m,2H),2.62(t,J＝5.4Hz,3H),1.66-1.50(m,1H), 1.50-1.29(m,3H).ESI-MS(m/z)：601.2[M+H]+。
实施例十三 3-((4-羟基-1-(4,4,4-三氟-3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)-7- (2-(甲氨基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物13)的合成
Figure BDA0002361263240000531
步骤一：7-溴-3-((4-羟基-1-(4,4,4-三氟-3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物13-1)的合成
根据实施例十一步骤三中所述的操作，利用化合物10-2的盐酸盐 (200mg，0.53mmol)和4,4,4-三氟-3-苯基丁酸(138mg，0.63mmol) 为反应原料分别代替化合物11-2的盐酸盐和4,4-二氟-3-苯基丁酸进行反应，反应液倒入水中(20mL)，用乙酸乙酯萃取(3x15mL)，饱和氯化钠水溶液反洗，无水硫酸钠干燥，抽滤，减压浓缩滤液得到粗品，经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：二氯甲烷/乙酸乙酯＝1/1(v/v))，得标题化合物，250mg。ESI-MS(m/z):544.0,546.0[M+H]+。
步骤二：5-((3-((4-羟基-1-(4,4,4-三氟-3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)-4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲基甲酸叔丁酯(化合物13-2)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物13-1(30mg，0.06 mmol)和化合物7-3(31mg，0.08mmol)为反应原料分别代替化合物 1-2和(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，反应液减压浓缩后，经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：二氯甲烷/乙酸乙酯＝3/1(v/v))，得标题化合物，30mg。ESI-MS(m/z):711.3[M+H]+。
步骤三：3-((4-羟基-1-(4,4,4-三氟-3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)-7- (2-(甲氨基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物 13)的合成
根据实施例十步骤二中所述的操作，利用化合物13-2(30mg，0.04 mmol)为反应原料代替化合物10-1进行反应，反应液减压浓缩后，制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，制备液加入稀盐酸(0.5mL， 1mol/L)，冷冻干燥，得标题化合物的盐酸盐，21mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.22(s,2H),8.46(s,1H),8.06(d,J ＝8.8Hz,1H),7.96(s,1H),7.90(d,J＝8.0Hz,1H),7.43-7.26(m,6H), 4.95(s,1H),4.17-4.06(m,1H),4.02-3.92(m,3H),3.87(d,J＝9.0,2.1Hz, 1H),3.82-3.76(m,1H),3.40-3.29(m,2H),3.28-3.21(m,1H),3.21-3.09(m, 3H),3.01-2.79(m,2H),2.61(t,J＝5.4Hz,3H),1.66-1.14(m,4H).ESI- MS(m/z):611.3[M+H]+。
实施例十四 3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4- 基)甲基)-7-(4-氟苯基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物14)的合成
Figure BDA0002361263240000541
步骤一：4-((7-(4-氟苯)-4-氧代噻吩[3,4-d]嘧啶-3(4H)-基)甲基)-4- 羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物14-1)的合成
室温下，将4-氟苯硼酸(619mg，4.42mmol)和化合物10-1(1.31 g，2.95mmol)溶解于水(4mL)和1,4-二氧六环(20mL)中，依次加入碳酸钾(1.22g，8.84mmol)、四三苯基膦钯(341mg，0.30mmol)，氮气置换三次后，升温至80℃反应14h。反应液降至室温，减压浓缩得到粗品，经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：二氯甲烷/乙酸乙酯＝2/1 (v/v))，得标题化合物，1.30g。ESI-MS(m/z):460.2[M+H]+。
步骤二：7-(4-氟苯基)-3-((4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物14-2)的合成
室温下，将化合物14-1(1.30g，2.83mmol)溶解于盐酸/1,4-二氧六环溶液(20mL，4mol/L)中，室温反应1h。抽滤反应液，滤饼用乙酸乙酯(2x 30mL)冲洗，收集滤饼，干燥，得标题化合物的盐酸盐，1.10g。ESI-MS(m/z):360.1[M+H]+。
步骤三：3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶 -4-基)甲基)-7-(4-氟苯基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物14)的合成
室温下，称取化合物14-2的盐酸盐(20mg，0.05mmol)、4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酸(12mg，0.06mmol)和HATU(20mg， 0.05mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入DIPEA(20mg，0.15mmol)，室温反应4h。反应液减压浓缩后，经制备型高效液相色谱分离纯化(方法D)，制备液减压浓缩，冷冻干燥，得标题化合物，19mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(d,J＝1.4Hz,1H),8.19-8.06 (m,2H),8.04(d,J＝4.6Hz,1H),7.81(dd,J＝4.3,2.4Hz,1H),7.41-7.27 (m,2H),6.12-6.39(td,JH-F＝56.0Hz,JH-H＝3.6Hz,1H),5.98(ddd,J＝ 6.0,2.6,1.5Hz,1H),4.99(d,J＝12.7Hz,1H),4.95(d,J＝2.7Hz,1H), 4.09-3.89(m,3H),3.68(d,J＝13.6Hz,1H),3.31-3.19(m,2H),2.90(ddd, J＝19.1,16.7,4.2Hz,2H),1.64-1.50(m,1H),1.50-1.31(m,3H).ESI-MS (m/z):550.1[M+H]+。
实施例十五 (3-(1-(4,4’-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶- 4-基)甲基)-(4-氟苯基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮-A(化合物14-A)和-(3-(1-(4,4’- 二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)-(4-氟苯基)噻吩并[3,4- d]嘧啶-4(3H)-酮-B(化合物14-B)的合成
Figure BDA0002361263240000561
通过手性高效液相，对化合物14(300mg，0.55mmol)进行分离，得到化合物14-A(135mg)和化合物14-B(112mg)。化合物14-A 和化合物14--B的手性高效液相色谱条件如下：手性柱：CHIRALPAK AY-3(AY30CD-TJ004)(0.46cm I.D.×15cm L)；进样量：2μL；流动相：EtOH＝100％；流速：0.5mL/min；波长：UV 214nm；温度： 35℃；高效液相色谱设备：Shimadzu LC-20AD CP-HPLC-05；其中化合物14-A的保留时间为：5.383min，化合物14-B的保留时间为8.216 min。
其结构表征如下：
化合物14-A:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(d,J＝1.4Hz, 1H),8.15-8.07(m,2H),8.04(d,J＝4.4Hz,1H),7.81(dt,J＝4.8,2.8Hz, 1H),7.38-7.28(m,2H),6.25(td,JH-F＝54.8Hz,JH-H＝2.8Hz,1H),5.98 (dt,J＝6.0,2.0Hz,1H),5.01-4.95(m,2H),4.04-3.98(m,1H),3.95-3.90 (m,2H),3.68(d,J＝13.6Hz,1H),3.30-3.20(m,2H),2.98-2.84(m,2H),1.67-1.50(m,1H),1.49-1.32(m,3H).ESI-MS(m/z):550.0[M+H]+。
化合物14-B:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(d,J＝1.4Hz, 1H),8.16-8.07(m,2H),8.04(d,J＝4.4Hz,1H),7.81(dt,J＝4.8,2.8Hz, 1H),7.39-7.28(m,2H),6.26(td,JH-F＝54.8Hz,JH-H＝2.6Hz,1H),5.98 (dt,J＝6.0,2.0Hz,1H),5.03-4.95(m,2H),4.04-3.98(m,1H),3.95-3.90 (m,2H),3.68(d,J＝13.6Hz,1H),3.30-3.20(m,2H),2.96-2.85(m,2H),1.67-1.51(m,1H),1.48-1.32(m,3H).ESI-MS(m/z):550.0[M+H]+。
实施例十六 3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4- 基)甲基)-7-甲基噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物15)的合成
Figure BDA0002361263240000571
步骤一：4-羟基-4-((7-甲基-4-氧代噻吩并[3,4-d]嘧啶-3(4H)-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物15-1)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物10-1(100mg， 0.23mmol)和三甲基环三硼氧烷(113mg，0.90mmol)为反应原料分别代替化合物1-2和(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，反应液减压浓缩后，经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：二氯甲烷/甲醇＝13/1(v/v))，得标题化合物，72mg。ESI-MS(m/z):380.1[M+H]+。
步骤二：3-((4-羟基哌啶-4-基)甲基)-7-甲基噻吩并[3,4-d]嘧啶- 4(3H)-酮(化合物15-2)的合成
根据实施例十步骤二中所述的操作，利用化合物15-1(72mg，0.19 mmol)为反应原料代替化合物10-1进行反应，反应液减压浓缩后，得标题化合物的盐酸盐，60mg。不经纯化直接用于下一步反应。ESI-MS (m/z):280.1[M+H]+。
步骤三：3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶 -4-基)甲基)-7-甲基噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物15)的合成
根据实施例十一步骤三中所述的操作，利用化合物15-2的盐酸盐 (20mg，0.06mmol)和4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酸(15mg， 0.07mmol)为反应原料分别代替化合物11-2盐酸盐和4,4-二氟-3-苯基丁酸进行反应，反应液经制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，冷冻干燥，得标题化合物，10mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(d,J＝1.8Hz,1H),7.93(d,J ＝4.7Hz,1H),7.80(q,J＝2.8Hz,1H),6.40-6.10(m,1H),5.98(dd,J＝5.9,2.5Hz,1H),5.10-4.95(m,1H),4.05-3.95(m,1H),3.92-3.85(m,2H), 3.71-3.62(m,1H),3.33-3.17(m,2H),2.97-2.80(m,2H),2.60(s,3H),1.63- 1.28(m,4H).ESI-MS(m/z):470.1[M+H]+。
实施例十七 3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4- 基)甲基)-7-(2-甲基-2-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮 (化合物16)的合成
Figure BDA0002361263240000581
步骤一：(5-溴-2-甲基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物16-2)的合成
室温下，将化合物16-1(30mg，0.13mmol)悬浮于二氯甲烷(1.5 mL)中，加入DIPEA(34mg，0.27mmol，44uL)和二碳酸二叔丁酯(29mg，0.13mmol，30uL)，室温搅拌反应5h。减压浓缩，得标题化合物粗品，40mg。ESI-MS(m/z):270.2,272.2[M-56+H]+。
步骤二：(5-溴-2-甲基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯 (化合物16-3)的合成
根据实施例七步骤一中所述的操作，利用化合物16-2(40mg，0.12 mmol)为反应原料代替化合物7-1进行反应，经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：石油醚/乙酸乙酯＝5/1(v/v))，得标题化合物，29mg。 ESI-MS(m/z):240.0,242.0[M-100+H]+。
步骤三：甲基(2-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2,3- 二氢-1氢-茚-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(化合物16-4)的合成
根据实施例七步骤二中所述的操作，利用化合物16-3(34mg，0.10 mmol)为反应原料代替化合物7-2进行反应，经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1(v/v))，得标题化合物，18mg。 ESI-MS(m/z):288.2[M-100+H]+。
步骤四：(5-(3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)-4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2-甲基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物16-5)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用10-3(20mg，0.04mmol) 和化合物16-4(18mg，0.05mmol)和为反应原料分别代替化合物1-2 和(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1(v/v))，得标题化合物，26mg。ESI-MS(m/z): 715.3[M+H]+。
步骤五：3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶 -4-基)甲基)-7-(2-甲基-2-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩[3,4-d]嘧啶- 4(3H)-酮(化合物16的合成)
室温下，将化合物16-5(27mg，0.04mmol)溶于乙酸乙酯(2mL)，加入盐酸的乙酸乙酯溶液(2mL，4mol/L)，20℃搅拌反应3h。减压浓缩，加入乙酸乙酯，有固体析出，抽滤，滤饼经甲基叔丁基醚洗涤，干燥。溶于水后，冷冻干燥，得标题化合物的盐酸盐，23mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,D2O)δ8.14(d,J＝4.8Hz,1H),7.81(d,J＝18.8 Hz,1H),7.60-7.44(m,3H),7.28(d,J＝3.6Hz,1H),6.10(td,JH-F＝54.4 Hz,JH-H＝3.2Hz,1H),5.84(ddd,J＝44.4,5.6,2.8Hz,1H),5.00-4.80(m, 1H),4.11-3.65(m,4H),3.44-3.18(m,4H),3.17-3.06(m,2H),3.04-2.80(m, 2H),2.64(s,3H),1.73-1.54(m,1H),1.50(s,3H),1.48-1.18(m,3H).ESI- MS(m/z):615.2[M+H]+。
实施例十八 3-((1-(3-氯-1H-吡唑-1-基)-4,4-二氟丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基) 甲基)-7-(1-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮（化合物17） 的合成
Figure BDA0002361263240000601
步骤一：3-((1-(3-氯-1H-吡唑-1-基)-4,4-二氟丁酰基)-4-羟基哌啶-4- 基)甲基)-7-(1-氧代-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮（化合物17-1）的合成
根据实施例十一步骤三中所述的操作，利用3-(3-氯-1H-吡唑-1-基)- 4,4-二氟丁酸（30mg，0.69mmol）为反应原料代替4,4-二氟-3-苯基丁酸进行反应，反应液加入水（5mL），乙酸乙酯（3x5mL）萃取，有机相用饱和食盐水（5mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物的粗品，41mg。ESI-MS(m/z):601.7,603.7[M+H]+。
步骤二：3-((1-(3-氯-1H-吡唑-1-基)-4,4-二氟丁酰基)-4-羟基哌啶-4- 基)甲基)-7-(1-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)- 酮（化合物17）的合成
室温下，将化合物17-1的粗品（41mg）溶于甲醇（10mL），加入甲胺/乙醇溶液（4mL，33%wt），室温搅拌18h。反应液浓缩后，浓缩物溶于甲醇（10mL），加入氰基硼氢化钠（21mg，0.034mmol）和乙酸（20mg，0.034mmol），室温搅拌2h。反应液浓缩后经制备型高效液相色谱分离纯化（方法I），冷冻干燥，得标题化合物的甲酸盐， 10mg。
结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.45(d,J=2.4Hz,1H)，8.03(d, J=4.4Hz,1H),7.97-7.90(m,2H),7.82(d,J=8.0Hz,1H),7.46(d,J= 8.0Hz,1H),6.34(d,J=2.4Hz,1H),6.29(t,JH-F=56.0Hz,1H),5.10(br, 1H),4.96(br,1H),4.22(t,J=6.4Hz,1H),4.06-3.97(m,1H),3.96-3.89 (m,2H),3.72-3.65(m,1H),3.07-2.79(m,6H),2.43-2.33(m,4H),1.92- 1.82(m,1H),1.66-1.31(m,5H)；ESI-MS(m/z):616.7,618.7[M+H]+。
实施例十九 3-((1-(3-氯-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)-7- (1-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物18)的合成
Figure BDA0002361263240000611
步骤一：3-((1-(3-氯-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)- 7-(1-氧代-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物18- 1)的合成
根据实施例十一步骤三中所述的操作，利用3-(3-氯-1H-吡唑-1-基) 丁酸(30mg，0.69mmol)为反应原料代替4,4-二氟-3-苯基丁酸进行反应，反应液加入水(5mL)，乙酸乙酯(3x 5mL)萃取，有机相用饱和食盐水(5mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物的粗品， 39mg。ESI-MS(m/z):565.8,567.8[M+H]+。
步骤二：3-((1-(3-氯-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)- 7-(1-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物 18)的合成
根据实施例十八步骤二中所述的操作，利用化合物18-1的粗品(39 mg)为反应原料代替化合物化合物17-1的粗品进行反应，反应液经制备型高效液相色谱分离纯化(方法I)，制备液减压浓缩，冷冻干燥，得标题化合物的甲酸盐，14mg。
结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.45(d,J＝2.4Hz,1H),8.34(s,1 H),8.03(d,J＝5.2Hz,1H),7.92(s,1H),7.87(d,J＝8.0Hz,1H),7.80(dd, J＝3.6,2.4Hz,1H),7.46(d,J＝8.0Hz,1H),6.23(t,J＝2.0Hz,1H),4.95 (brs,1H),4.79-4.68(m,1H),4.21(t,J＝6.8Hz,1H),4.08-3.99(m,1H), 3.96-3.88(m,2H),3.67-3.61(m,1H),3.30-3.11(m,1H),3.03-2.91(m,2H), 2.90-2.78(m,2H),2.77-2.65(m,1H),3.39(s,3H),2.42-2.33(m,1H),1.93-1.82(m,1H),1.47-1.38(m,7H)；ESI-MS(m/z):580.8,582.8[M+H]+。
实施例二十 3-((1-(3-环丙基-3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)-7-(1- (甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物19)的合成
Figure BDA0002361263240000621
步骤一：7-溴-3-((1-(3-环丙基-3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基) 噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物19-1)的合成
根据实施例十步骤三中所述的操作，利用3-环丙基-3-苯丙酸(150 mg，0.79mmol)为反应原料代替化合物4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基) 丁酸进行反应，经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：乙酸乙酯＝100％)，得标题化合物，270mg。ESI-MS(m/z):516.0,518.0[M+H]+。
步骤二：5-((3-((1-(3-环丙基-3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)- 4-氧代-3,4-二氢噻吩[3,4-d]嘧啶-7-基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物19-2)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物19-1(30mg，0.06 mmol)和化合物5-3(26mg，0.07mmol)为反应原料分别代替化合物 1-2和(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，反应液减压浓缩后，制备薄层色谱分离纯化(展开剂：乙酸乙酯＝100％)，得标题化合物，35mg。ESI- MS(m/z):683.3[M+H]+。
步骤三：3-((1-(3-环丙基-3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)-7- (1-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物 19)的合成
室温下，称取化合物19-2(35mg，0.05mmol)于反应瓶中，加入盐酸乙酸乙酯溶液(2mL，4mol/L)，室温搅拌反应1h。减压浓缩除去溶剂，制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，制备液加稀盐酸(0.5 mL，1mol/L)，冷冻干燥，得标题化合物的盐酸盐，17mg。
结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)：δ8.81-8.17(m,2H),7.94-7.67(m, 3H),7.38-7.15(m,5H),4.99-4.93(m,1H),4.87-4.78(m,1H),4.27-3.84(m, 3H),3.74(t,J＝14.8Hz,1H),3.29-3.23(m,1H),3.20-2.91(m,3H),2.88- 2.71(m,4H),2.70-2.60(m,1H),2.37-2.22(m,2H),1.73-1.52(m,1H), 1.51-1.41(m,1H),1.40-1.31(m,1H),1.31-1.18(m,1H),1.18-0.70(m,1H), 0.69-0.56(m,1H),0.48-0.38(m,1H),0.37-0.26(m,1H),0.16-0.07(m,1H).ESI-MS(m/z):583.4[M+H]+。
实施例二十一 3-((1-(3-环丙基-3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)-7- (2-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物20)的合成
Figure BDA0002361263240000631
步骤一：5-(3-((1-(3-环丙基-3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)- 4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2,3-二氢-1H-茚-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物20-1)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物19-1(30mg，0.06 mmol)和化合物7-3(26mg，0.07mmol)为反应原料分别代替化合物 1-2和(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，反应液减压浓缩后，制备薄层色谱分离纯化(展开剂：乙酸乙酯＝100％)，得标题化合物，35mg。ESI- MS(m/z):683.3[M+H]+。
步骤二：3-((1-(3-环丙基-3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)-7- (2-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物 20)的合成
根据实施例二十步骤三中所述的操作，利用化合物20-1(35mg， 0.05mmol)为反应原料代替化合物19-2进行反应，反应液减压浓缩后，制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，制备液加稀盐酸(0.5mL， 1mol/L)冷冻干燥，得标题化合物的盐酸盐，21mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)：δ8.73-8.56(m,2H),7.73(s,1H), 7.63(d,J＝8.4Hz,1H),7.48(d,J＝7.8Hz,1H),7.41-7.13(m,5H),4.31- 4.02(m,3H),4.02-3.89(m,1H),3.75(t,J＝14.0Hz,1H),3.57-3.46(m, 2H),3.37-3.31(m,1H),3.28-3.18(m,2H),3.08-2.89(m,2H),2.88-2.69(m, 4H),2.33-2.23(m,1H),1.73-1.53(m,1H),1.50-1.41(m,1H),1.37-1.30(m, 1H),1.28-1.17(m,1H),1.16-0.70(m,1H),0.67-0.59(m,1H),0.47-0.38(m, 1H),0.36-0.27(m,1H),0.15-0.07(m,1H).ESI-MS(m/z):583.3[M+H]+。
实施例二十二 7-(4-氯-1-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二氟- 3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮 (化合物21)的合成
Figure BDA0002361263240000641
步骤一：7-(4-氯-1-氧代-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二氟-3-(3- 氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶- 4(3H)-酮(化合物21-1)的合成
室温下，将5-溴-4-氯-2,3-二氢-1H-茚-1-酮(60mg，0.24mmol)、联硼酸频那醇酯(68mg，0.27mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(18mg，0.02mmol)和乙酸钾(48mg，0.49mmol)于1,4-二氧六环(5mL)中，反应体系氮气置换三次，升温到80℃反应16h。反应液冷却到室温，加入化合物10-3(40mg，0.07mmol)、碳酸钾(31 mg，0.22mmol)、四(三苯基膦)钯(9mg，0.007mmol)和水(1mL)，氮气置换三次，升温到100℃反应4h。降至室温，减压浓缩后经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：乙酸乙酯＝100％)，得标题化合物，25mg。 ESI-MS(m/z):620.1,622.1[M+H]+。
步骤二：7-(4-氯-1-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二氟-3- (3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶- 4(3H)-酮(化合物21)的合成
室温下，称取化合物21-1(25mg，0.04mmol)于反应瓶中，加入甲胺/乙醇溶液(2mL，33％wt)，室温搅拌反应5h。减压浓缩除去溶剂，加甲醇(2mL)溶解，加硼氢化钠(3mg，0.08mmol)，室温搅拌2h。反应液经制备型高效液相色谱分离纯化(方法J)，冷冻干燥，得标题化合物的三氟乙酸盐，8mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)：δ8.54(d,J＝1.4Hz,1H),7.99 (d,J＝7.8Hz,1H),7.67-7.51(m,3H),6.12(td,JH-F＝55.4Hz,JH-H＝4.4 Hz,1H),5.91-5.84(m,1H),4.99-4.90(m,2H),4.19-4.09(m,1H),4.05(d, J＝3.4Hz,1H),4.00(d,J＝1.8Hz,1H),3.84-3.75(m,1H),3.49-3.36(m, 2H),3.29-3.22(m,1H),3.18-3.10(m,1H),3.10-3.00(m,1H),2.96-2.83(m, 1H),2.79(s,3H),2.73-2.64(m,1H),2.38-2.29(m,1H),1.77-1.46(m,4H). ESI-MS(m/z):635.2,637.2[M+H]+。
实施例二十三 3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶- 4-基)甲基)-7-(4-氟-1-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮 (化合物22)的合成
Figure BDA0002361263240000661
步骤一：3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶- 4-基)甲基)-7-(4-氟-1-氧代-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶- 4(3H)-酮(化合物22-1)的合成
根据实施例二十二步骤一中所述的操作，利用5-溴-4-氟-2,3-二氢- 1H-茚-1-酮(100mg，0.44mmol)为反应原料代替5-溴-4-氯-2,3-二氢 -1H-茚-1-酮进行反应，反应液减压浓缩后经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：乙酸乙酯＝100％)，得标题化合物，35mg。ESI-MS(m/z): 604.2[M+H]+。
步骤二：3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶 -4-基)甲基)-7-(4-氟-1-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶- 4(3H)-酮(化合物22)的合成
根据实施例二十二步骤二中所述的操作，利用化合物22-1(35mg， 0.06mmol)为反应原料代替化合物21-1进行反应，反应液经制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，冷冻干燥，得标题化合物的甲酸盐， 28mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)：δ8.54(s,1H),8.49(d,J＝1.6Hz, 1H),8.13(t,J＝7.2Hz,1H),8.03(d,J＝7.8Hz,1H),7.59(dt,J＝5.2,2.4 Hz,1H),7.43(d,J＝7.8Hz,1H),6.12(td,JH-F＝55.4Hz,JH-H＝4.4Hz, 1H),5.91-5.84(m,1H),5.01-4.93(m,1H),4.70(dd,J＝7.8,4.4Hz,1H), 4.19-4.09(m,1H),4.05(d,J＝3.6Hz,1H),4.00(s,1H),3.84-3.75(m,1H), 3.48-3.36(m,2H),3.26-3.17(m,1H),3.12-3.02(m,2H),2.96-2.83(m,1H), 2.69(s,3H),2.67-2.58(m,1H),2.30-2.21(m,1H),1.76-1.47(m,4H).ESI- MS(m/z):619.2[M+H]+。
实施例二十四 7-(4-氯-1-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(3-环丙基- 3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物23)的合成
Figure BDA0002361263240000671
步骤一：(5-溴-4-氯-2,3-二氢-1H-茚-1-基)(甲基)氨基甲酸叔丁基酯 (化合物23-2)的合成
室温下，将化合物23-1(100mg，0.41mmol)用甲醇(2mL)溶解，加入甲胺/乙醇溶液(2mL，33％wt)，室温反应16h，将反应液旋干，剩余物再用甲醇(2mL)溶解，加入硼氢化钠(30mg，0.81mmol)，室温反应1h后加入二碳酸二叔丁酯(444mg，2.04mmol)，继续在室温反应1h。减压抽干溶剂，经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝10/1(v/v))，得标题化合物，130mg。ESI-MS(m/z):304.3， 306.3[M-56+H]+。
步骤二：4-氯-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2,3-二氢- 1H-茚-1-基)(甲基)氨基甲酸叔丁基酯(化合物23-3)的合成
根据实施例七步骤二中所述的操作，利用化合物23-2(130mg， 0.36mmol)为反应原料代替化合物7-2进行反应，浓缩反应液经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：石油醚/乙酸乙酯＝15/1(v/v))，得标题化合物，100mg。ESI-MS(m/z):352.2,354.2[M-56+H]+。
步骤三：4-氯-5-(3-((1-(3-环丙基-3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基) 甲基)-4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)(甲基)氨基甲酸叔丁基酯(化合物23-4)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物19-1(20mg，0.04 mmol)和化合物23-4(17mg，0.04mmol)为反应原料分别代替化合物1-2和(1H-吲唑-6-基)硼酸，反应液减压浓缩后经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：乙酸乙酯/甲醇＝60/1(v/v))，得标题化合物，15mg。 ESI-MS(m/z):717.3,719.3[M+H]+。
步骤四：7-(4-氯-1-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(3-环丙基- 3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物23)的合成
根据实施例二十步骤三中所述的操作，利用化合物23-4(15mg， 0.02mmol)为反应原料代替化合物19-2进行反应，反应液减压浓缩后经制备型高效液相色谱分离纯化(方法K)，冷冻干燥，得标题化合物的甲酸盐，8mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.48(d,J＝7.0Hz,1H),7.92(s, 0.4H),7.86(s,0.6H),7.55-7.39(m,2H),7.32-7.08(m,5H),4.65-4.54(m, 1H),4.22-3.59(m,4H),3.30(s,1H),3.20-2.76(m,5H),2.65-2.51(m,1H), 2.58(s,3H),2.30-2.08(m,2H),1.64-1.04(m,5H),0.63-0.49(m,1H),0.43- 0.29(m,2H),0.31-0.19(m,1H),0.14-0.02(m,1H).ESI-MS(m/z):617.3, 619.3[M+H]+。
实施例二十五 7-(6-氯-1-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二氟- 3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮 (化合物24)的合成
Figure BDA0002361263240000681
步骤一：6-氯-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2,3-二氢- 1H-茚-1-酮(化合物24-2)的合成
室温下，将化合物24-1(100mg，0.41mmol)、联硼酸频那醇酯 (207mg，0.25mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(15mg， 0.02mmol)和乙酸钾(120mg，1.22mmol)用1,4-二氧六环(2mL) 溶解，氮气置换三次后，反应升温至80℃搅拌16h。反应液过滤后浓缩，得标题化合物的粗品，119mg。ESI-MS(m/z):293.1,295.1[M+H]+。
步骤二：7-(6-氯-1-氧代-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二氟-3-(3- 氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶- 4(3H)-酮(化合物24-3)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物10-3(35mg，0.07 mmol)和化合物24-2的粗品(23mg)为反应原料分别代替化合物1- 2和(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，反应液过滤后浓缩，得标题化合物的粗品，41mg。ESI-MS(m/z):620.0,622.0[M+H]+。
步骤三：7-(6-氯-1-氧代-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二氟-3-(3- 氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶- 4(3H)-酮(化合物24)的合成
根据实施例二十二步骤二中所述的操作，利用化合物24-3的粗品 (41mg)为反应原料代替化合物21-1进行反应，反应液经制备型高效液相色谱分离纯化(方法J)，冷冻干燥，得标题化合物的三氟乙酸盐， 4mg。
结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.54(s,1H),7.99(d,J＝8.0Hz, 1H),7.75(s,1H),7.62(s,1H),7.61-7.56(m,1H),6.11(td,JH-F＝55.2Hz, JH-H＝4.4Hz,1H),5.91-5.84(m,1H),5.00-4.90(m,1H),4.85-4.79(m,1H), 4.19-4.09(m,1H),4.07-3.98(m,2H),3.85-3.75(m,1H),3.45-3.35(m,2H), 3.23-3.15(m,1H),3.09-3.05(m,1H),2.96-2.84(m,1H),2.79(s,3H),2.71- 2.63(m,1H),2.34-2.26(m,1H),1.79-1.45(m,4H).ESI-MS(m/z):635.2, 637.2[M+H]+。
实施例二十六7-(6-氯-1-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(3-环丙基- 3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物25)的合成
Figure BDA0002361263240000691
步骤一：7-(6-氯-1-氧代-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(3-环丙基-3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物 25-1)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物19-1(30mg，0.06 mmol)和化合物24-2(13mg，0.06mmol)为反应原料分别代替化合物1-2和(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，反应液减压浓缩后经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：乙酸乙酯/甲醇＝30/1(v/v))，得标题化合物， 20mg。ESI-MS(m/z):602.2,604.2[M+H]+。
步骤二：7-(6-氯-1-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(3-环丙基- 3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物25)的合成
根据实施例二十二步骤二中所述的操作，利用化合物25-1(20mg， 0.03mmol)为反应原料代替化合物21-1进行反应，反应液经制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，冷冻干燥，得标题化合物，8mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)：δ8.50(d,J＝7.2Hz,1H),7.92 (d,J＝24.4Hz,1H),7.62(s,1H),7.48(s,1H),7.34-7.24(m,4H),7.22-7.15 (m,1H),4.38(t,J＝6.4Hz,1H),4.25-4.11(m,1H),4.00(q,J＝14.0Hz, 1H),3.92-3.76(m,1H),3.75-3.65(m,1H),3.29-3.14(m,1H),3.12-3.03(m, 1H),3.02-2.84(m,3H),2.83-2.64(m,1H),2.53(s,3H),2.52-2.41(m,1H), 2.32-2.23(m,1H),2.11-1.99(m,1H),1.63-1.26(m,4H),1.24-1.11(m,1H),0.66-0.55(m,1H),0.46-0.36(m,1H),0.35-0.25(m,1H),0.14-0.04(m,1H). ESI-MS(m/z):617.3,619.3[M+H]+。
实施例二十七 7-(7-氯-1-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二氟- 3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮 (化合物26)的合成
Figure BDA0002361263240000711
步骤一：7-氯-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2,3-二氢- 1H-茚-1-酮(化合物26-2)的合成
根据实施例二十五步骤一中所述的操作，利用化合物26-1(20mg，0.08mmol)为反应原料代替化合物24-1进行反应，反应液过滤后浓缩，得标题化合物的粗品，54mg。ESI-MS(m/z):293.1,295.1[M+H]+。
步骤二：7-(7-氯-1-氧代-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二氟-3-(3- 氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶- 4(3H)-酮(化合物26-3)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物10-3(44mg，0.08 mmol)和26-2的粗品(54mg)为反应原料分别代替化合物1-2和(1H- 吲唑-6-基)硼酸进行反应，反应液过滤后浓缩，得标题化合物的粗品， 51mg。ESI-MS(m/z):620.0,622.0[M+H]+。
步骤三：7-(7-氯-1-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二氟-3- (3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶- 4(3H)-酮(化合物26)的合成
根据实施例二十二步骤二中所述的操作，利用化合物24-3的粗品 (51mg)为反应原料代替化合物21-1进行反应，反应液经制备型高效液相色谱分离纯化(方法J)，冷冻干燥，得标题化合物的三氟乙酸盐， 6mg。
结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.44(d,J＝1.2Hz,1H),8.20(s, 1H),8.07(d,J＝8.0Hz,1H),7.96(s,1H),7.61-7.56(m,1H),6.11(td,JH-F＝55.6Hz,JH-H＝4.4Hz,1H),5.87(td,J＝6.0Hz,2.4Hz,1H),4.97- 4.93(m,2H),4.19-4.09(m,1H),4.05(s,1H),4.01(s,1H),3.85-3.75(m, 1H),3.45-3.35(m,2H),3.18-3.10(m,1H),3.09-3.02(m,1H),2.96-2.82 (m,1H),2.77(s,3H),2.64-2.56(m,1H),2.43-2.35(m,1H),1.79-1.44(m, 4H),1.40-1.34(m,1H)；ESI-MS(m/z):635.2,637.2[M+H]+。
实施例二十八 7-(7-氯-1-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(3-环丙基- 3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物27)的合成
Figure BDA0002361263240000721
步骤一：7-(7-氯-1-氧代-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(3-环丙基-3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物 27-1)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物19-1(40mg，0.08 mmol)和化合物26-2(18mg，0.09mmol)为反应原料分别代替化合物1-2和(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，反应液减压浓缩后经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：乙酸乙酯/甲醇＝30/1(v/v))，得标题化合物， 20mg。ESI-MS(m/z):602.2，604.2[M+H]+。
步骤二：7-(7-氯-1-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(3-环丙基-3- 苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物27)的合成
室温下，称取化合物27-1(20mg，0.03mmol)于甲醇(20mL) 和二氯甲烷(10mL)中，加入甲胺/乙醇溶液(2mL，33％wt)，室温搅拌反应20h。减压浓缩除去溶剂，再用甲醇(20mL)和二氯甲烷(10 mL)溶解，加入硼氢化钠(2mg，0.07mmol)，室温搅拌1h。反应液经制备型高效液相色谱分离纯化(方法J)，制备液加稀盐酸(0.5mL， 1mol/L)冷冻干燥，得标题化合物的盐酸盐，11mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)：δ8.53(d,J＝8.8Hz,1H),8.27(d, J＝17.6Hz,1H),8.09(s,1H),7.89(s,1H),7.41-7.10(m,5H),4.97(dd,J ＝7.6,1.8Hz,1H),4.26-4.13(m,1H),4.13-4.01(m,1H),3.97-3.82(m,1H), 3.79-3.69(m,1H),3.43-3.31(m,2H),3.20-3.11(m,1H),3.07-2.89(m,2H), 2.88-2.69(m,4H),2.67-2.56(m,1H),2.47-2.39(m,1H),2.32-2.23(m,1H), 1.69-1.30(m,4H),1.25-1.13(m,1H),0.66-0.56(m,1H),0.48-0.36(m,1H), 0.36-0.25(m,1H),0.16-0.05(m,1H).ESI-MS(m/z):617.2,619.2[M+H]+。
实施例二十九3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶- 4-基)甲基)-7-(3-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合 物28)的合成
Figure BDA0002361263240000731
步骤一：3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶- 4-基)甲基)-7-(3-氧代-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮 (化合物28-1)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物10-3(25mg，0.05 mmol)和(3-氧代-2,3-二氢-1H-茚-5-基)硼酸(14mg，0.06mmol)为反应原料分别代替化合物1-2和(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，浓缩反应液经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：乙酸乙酯＝100％)，得标题化合物，24mg。ESI-MS(m/z):586.2[M+H]+。
步骤二：3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶 -4-基)甲基)-7-(3-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)噻吩并[3,4-d]嘧啶- 4(3H)-酮(化合物28)的合成
根据实施例二十二步骤二中所述的操作，利用化合物28-1(24mg， 0.04mmol)为反应原料代替化合物21-1进行反应，反应液经制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，冷冻干燥，得标题化合物的甲酸盐， 13mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.44(d,J＝1.6Hz,1H),8.34(s, 1H),8.03(d,J＝4.8Hz,1H),8.00(s,1H),7.97(d,J＝7.6Hz,1H),7.81 (dt,J=4.8,2.8Hz,1H),7.35(d,J=7.8Hz,1H),6.32(dd,JH-F=54.8Hz, JH-H=3.6Hz,1H),6.01-5.95(m,1H),5.23-4.79(m,2H),4.26(t,J=6.6 Hz,1H),4.06-3.99(m,1H),3.97-3.89(m,2H),3.69(d,J=13.6Hz,1H),3.31-3.21(m,2H),3.02-2.96(m,1H),2.95-2.85(m,2H),2.85-2.75(m,1H), 2.41(s,3H),2.39-2.32(m,1H),1.93-1.82(m,1H),1.65-1.31(m,4H).ESI- MS(m/z):601.2[M+H]+。
实施例三十7-(7-氯-3-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二氟-3- (3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮（化 合物29）的合成
Figure BDA0002361263240000741
步骤一：7-(7-氯-3-氧代-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二氟-3-(3- 氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶- 4(3H)-酮（化合物29-1）的合成
根据实施例二十二步骤一中所述的操作，利用化合物6-溴-4-氯- 2,3-二氢-1H-茚-1-酮（50mg，0.20mmol）为反应原料代替5-溴-4-氯-2,3- 二氢-1H-茚-1-酮进行反应，反应液减压浓缩后经制备薄层色谱分离纯化（展开剂：乙酸乙酯=100%），得标题化合物，30mg。ESI-MS(m/z): 620.2,622.2[M+H]+。
步骤二：7-(7-氯-3-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二氟-3- (3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶- 4(3H)-酮（化合物29）的合成
根据实施例二十二步骤二中所述的操作，利用化合物29-1（30mg， 0.05mmol）为反应原料代替化合物21-1进行反应，反应液经制备型高效液相色谱分离纯化（方法C），冷冻干燥，得标题化合物的甲酸盐， 13mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.51(d,J＝1.6Hz,1H),8.29(s, 1H),8.17(d,J＝1.4Hz,1H),8.08(d,J＝4.8Hz,1H),7.87(s,1H),7.81 (q,J＝2.8Hz,1H),6.26(td,JH-F＝55.2Hz,JH-H＝4.4Hz,1H),5.98(dd, J＝6.0,2.4Hz,1H),5.15-4.86(m,2H),4.28(t,J＝6.8Hz,1H),4.04-3.98 (m,1H),3.96-3.89(m,2H),3.69(d,J＝13.6Hz,1H),3.31-3.21(m,2H), 3.03-2.87(m,3H),2.86-2.77(m,1H),2.61-2.52(m,1H),2.43-2.32(m,4H), 1.93-1.83(m,1H),1.60-1.30(m,4H).ESI-MS(m/z):635.2,637.2[M+H]+。
实施例三十一 7-(4-氯-3-(甲氨基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二氟- 3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮 (化合物30)的合成
Figure BDA0002361263240000751
步骤一：7-氯-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2,3-二氢- 1H-茚-1-酮(化合物30-2)的合成
根据实施例七步骤二中所述的操作，利用化合物30-1(450mg,1.83 mmol)为反应原料代替化合物7-2进行反应，反应液冷至室温，减压浓缩后，经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝6/1(v/v))，得标题化合物，130mg。ESI-MS(m/z):293.1,295.1[M+H]+。
步骤二：7-(4-氯-3-氧代-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二氟-3-(3- 氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)基)噻吩并[3,4-d]嘧啶- 4(3H)-酮(化合物30-3)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物10-3(50mg，0.09 mmol)和化合物30-2(41mg,0.14mmol)为反应原料分别代替化合物 1-2和(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，反应液冷至室温后，经硅藻土过滤，滤液减压浓缩后，经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1(v/v))，得标题化合物，25mg。ESI-MS(m/z):620.1,622.1[M+H]+。
步骤三：7-(4-氯-3-(甲氨基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二氟-3- (3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶- 4(3H)-酮(化合物30)的合成
将化合物30-3(25mg，0.04mmol)溶于甲胺/乙醇溶液(2mL， 33％wt)中，室温反应17h后，减压浓缩，再依次加入甲醇(2mL)、硼氢化钠(3mg，0.08mmol)，室温反应1h。反应液减压浓缩后，制备型高效液相色谱分离纯化(方法G)，冷冻干燥，得标题化合物的三氟乙酸盐，8mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.52(d,J＝1.2Hz,1H),7.97(d, J＝7.7Hz,1H),7.63(d,J＝7.8Hz,1H),7.60-7.53(m,1H),7.44(d,J＝ 7.8Hz,1H),6.09(td,JH-F＝55.4Hz,JH-H＝4.4Hz,1H),5.89-5.81(m,1H), 4.97(d,J＝6.7Hz,1H),4.94-4.88(m,1H),4.18-4.04(m,1H),4.00(d,J＝ 16.6Hz,2H),3.82-3.73(m,1H),3.48-3.28(m,4H),3.20-3.07(m,2H),3.09-2.98(m,1H),2.94-2.81(m,1H),2.77(s,3H),2.67-2.55(m,1H),2.42 (dd,J＝15.1,7.7Hz,1H),1.76-1.42(m,4H).ESI-MS(m/z):635.2, 637.2[M+H]+。
实施例三十二 7-(2-氯-4-氟苯基)-3-((1-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟 基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物32)的合成
Figure BDA0002361263240000761
氮气保护下，将化合物10-3(40mg，0.08mmol)溶于1,4-二氧六环(2mL)中，加入(2-氯-4-氟苯)硼酸(15mg，0.08mmol)和水(0.1 mL)，氮气保护后，依次加入四三苯基膦钯(9mg，0.007mmol))、碳酸氢钠(21mg，0.23mmol)后，氮气置换三次后，85℃反应5h，降至室温，减压浓缩后经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝15/1(v/v))，得标题化合物的粗品，制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，冷冻干燥，得标题化合物，20mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.52(t,J＝1.4Hz,1H),7.97(d, J＝7.2Hz,1H),7.63(dd,J＝8.8,6.0Hz,1H),7.59(dt,J＝6.4,2.4Hz, 1H),7.42(ddd,J＝8.8,2.8,1.2Hz,1H),7.26-7.19(m,1H),6.12(td,JH-F＝55.4Hz,JH-H＝4.4Hz,1H),5.87(ddd,J＝10.4,5.6,2.4Hz,1H),5.00- 4.90(m,1H),4.14(t,J＝12.8Hz,1H),4.07-3.97(m,2H),3.84-3.75(m,1H),3.48-3.35(m,2H),3.10-3.00(m,1H),2.98-2.82(m,1H),1.77-1.47(m, 4H).ESI-MS(m/z):584.1,586.1[M+H]+。
实施例三十三 7-(4-氯-1-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((4-羟基-1- ((R)-3-苯丁酰基)哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物33)的合成
Figure BDA0002361263240000771
步骤一：(4-氯-5-(3-((4-羟基-1-((R)-3-苯基丁酰基)哌啶-4-基)甲基)-4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)(甲基) 氨基甲酸叔丁酯(化合物33-1)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物23-3(30mg，0.07 mmol)为反应原料代替(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，反应液减压浓缩后，经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1(v/v))，得标题化合物，30mg。ESI-MS(m/z):691.3,693.3[M+H]+。
步骤二：7-(4-氯-1-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((4-羟基-1- ((R)-3-苯丁酰基)哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物 33)的合成
根据实施例十七步骤五中所述的操作，利用化合物33-1(30mg， 0.04mmol)为反应原料代替化合物16-5进行反应，减压浓缩得到反应液，反应液经制备型高效液相色谱分离纯化(方法L)，冷冻干燥，得标题化合物的甲酸盐，18mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.61(s,1H),7.94(d,J＝10.4Hz, 1H),7.48(d,J＝7.8Hz,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,1H),7.32-7.22(m,4H), 7.15(m,1H),4.89(brs,1H),4.24(t,J＝6.8Hz,1H),4.09-3.99(m,1H), 3.90(q,J＝14.0Hz,1H),3.88-3.78(m,1H),3.72-3.58(m,1H),3.27-3.10 (m,3H),3.07-2.98(m,1H),2.92-2.78(m,2H),2.69-2.53(m,2H),2.43-2.36 (m,1H),2.35(s,3H),1.95-1.87(m,1H),1.58-1.15(m,4H),1.20(dd,J＝ 7.2,2.0Hz,3H).ESI-MS(m/z):591.3,593.2[M+H]+。
实施例三十四 7-(4-氯-2-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二氟- 3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮 (化合物34)的合成
Figure BDA0002361263240000791
步骤一：5-溴-4-氯-1H-茚(化合物34-1)的合成
室温下，将化合物30-1(2.00g，8.15mmol)溶于甲醇(100mL) 中，分批加入硼氢化钠(0.60g，16.29mmol)，室温搅拌2h。减压抽干溶剂，加入稀盐酸(20mL，1mol/L)淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液经减压浓缩，浓缩物用甲苯(100mL)溶解，加入对甲苯磺酸(139mg，0.81mmol)，120℃反应3h。减压抽干溶剂，经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：石油醚＝100％)，得标题化合物，1.70g。其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.13(d,J＝ 8.0Hz,1H),6.96-6.89(m,1H),6.57(dt,J＝5.6,2.0Hz,1H),3.38-3.36(m, 2H).
步骤二：3-溴-2-氯-6,6a-二氢-1aH-茚并[1,2-b]环氧乙烷(化合物34- 2)的合成
室温下，将化合物34-1(1.50g，6.54mmol)溶于二氯甲烷(160 mL)中，加入间氯过氧苯甲酸(3.98g，19.61mmol)，室温反应18h。减压抽干溶剂，经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：石油醚/二氯甲烷＝1/1 (v/v))，得标题化合物，900mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.48(d,J＝8.0Hz,1H),6.98(d,J＝ 8.0Hz,1H),4.50-4.45(m,1H),4.12(s,1H),3.22(d,J＝18.4Hz,1H),6.98 (dd,J＝18.4,2.4Hz,1H).
步骤三：(5-溴-4-氯-2,3-二氢-1H-茚-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯 (化合物34-3)的合成
室温下，将化合物34-2(900mg，3.67mmol)溶于甲苯(50mL) 中，加入硅胶(2.70g)，120℃反应6h。过滤，减压抽干滤液，剩余物用甲醇(2.6mL)溶解，加入甲胺水溶液(1mL，40％wt)，搅拌10 min后加入硼氢化钠(94mg，2.54mmol)，室温反应1h后，加入二碳酸二叔丁酯(3.24g，14.83mmol)，继续在室温反应1h。减压抽干溶剂，经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝30/1(v/v))，得标题化合物，500mg。ESI-MS(m/z):304.3,306.3[M-56+H]+。
步骤四：(4-氯-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2,3-二氢- 1H-茚-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物34-4)的合成
根据实施例七步骤二中所述的操作，利用化合物34-3(200mg， 0.65mmol)为反应原料代替化合物7-2进行反应，浓缩后反应液经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：石油醚/乙酸乙酯＝60/1(v/v))，得标题化合物，80mg。ESI-MS(m/z):ESI-MS(m/z):352.3,354.3[M-56+H]+。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.52(d,J＝7.2Hz,1H),7.08(d,J＝7.2Hz,1H),5.08(brs,1H),3.30-3.15(m,2H),2.99(td,J＝15.2,6.0Hz, 2H),2.68(s,3H),1.46(s,9H),1.36(s,12H).ESI-MS(m/z):352.3, 354.3[M-56+H]+。
步骤五：(4-氯-5-(3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4- 羟基哌啶-4-基)甲基)-4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2,3-二氢- 1H-茚-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物34-5)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物10-3(15mg，0.03 mmol)和化合物34-4(12mg，0.03mmol)为反应原料分别代替化合物1-2和(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，减压浓缩后的反应液经制备薄层色谱分离纯化(洗脱液：乙酸乙酯/甲醇＝60/1(v/v))，得标题化合物，10mg。ESI-MS(m/z):735.3,737.3[M+H]+。
步骤六：7-(4-氯-2-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二氟-3- (3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶- 4(3H)-酮(化合物34)的合成
根据实施例十步骤二中所述的操作，利用化合物34-5(10mg，0.01 mmol)为反应原料代替化合物10-1进行反应，反应液减压浓缩后经制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，冷冻干燥，得标题化合物的甲酸盐，2mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.73-8.45(br,1H),8.49(d,J＝ 1.2Hz,1H),7.96(d,J＝7.6Hz,1H),7.59(dt,J＝6.0,2.8Hz,1H),7.43(d, J＝7.6Hz,1H),7.30(d,J＝7.6Hz,1H),6.11(td,JH-F＝55.2Hz,JH-H＝ 4.4Hz,1H),5.87(ddd,J＝9.6,6.0,2.8Hz,1H),5.02-4.93(m,1H),4.21- 4.08(m,1H),4.03(d,J＝4.0Hz,1H),3.99(s,1H),3.94-3.85(m,1H),3.84- 3.73(m,1H),3.54-3.34(m,4H),3.18-2.98(m,3H),2.88(ddd,J＝30.0, 16.4,4.0Hz,1H),2.63(s,3H),1.80-1.44(m,4H).ESI-MS(m/z):635.2, 637.2[M+H]+。
实施例三十五 7-(4-氯-2-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(3-环丙基- 3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物35)的合成
Figure BDA0002361263240000811
步骤一：(4-氯-5-(3-((1-(3-环丙基-3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基) 甲基)-4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2,3-二氢-1H-茚-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物35-1)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物19-1(20mg，0.04 mmol)和化合物34-5(16mg，0.04mmol)为反应原料分别代替化合物1-2和(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，减压浓缩后反应液经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：乙酸乙酯/甲醇＝60/1(v/v))，得标题化合物， 12mg。ESI-MS(m/z):717.3,719.3[M+H]+。
步骤二：7-(4-氯-2-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(3-环丙基- 3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物35)的合成
根据实施例十步骤二中所述的操作，利用化合物35-1(12mg，0.02 mmol)为反应原料代替化合物10-1进行反应，反应液经制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，冷冻干燥，得标题化合物的甲酸盐，8mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.65-8.53(brs,1H),8.50(d,J＝ 7.1Hz,1H),7.96(s,0.4H),7.90(s,0.6H),7.45(d,J＝7.7Hz,1H),7.38- 7.22(m,5H),7.22-7.14(m,1H),4.24-3.96(m,3H),3.93-3.69(m,2H),3.52 (dt,J＝15.5,7.5Hz,2H),3.22-3.10(m,2H),3.10-2.78(m,3H),2.71(s, 3H),2.33-2.24(m,1H),1.65-1.12(m,5H),0.66-0.56(m,1H),0.46-0.36(m, 1H),0.34-0.25(m,1H),0.13-0.04(m,1H).ESI-MS(m/z):617.3, 619.3[M+H]+。
实施例三十六 7-(7-氯-2-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二氟- 3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮 (化合物36)的合成
Figure BDA0002361263240000821
步骤一：5-溴-7-氯-1H-茚(化合物36-2)的合成
根据实施例三十四步骤一中所述的操作，利用化合物36-1(12mg， 0.02mmol)为反应原料代替化合物30-1进行反应，反应液减压浓缩除去溶剂，粗品用石油醚洗涤，过滤，收集滤液经减压浓缩，得标题化合物，560mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ7.44(d,J＝1.6Hz,1H),7.33(d,J＝ 1.5Hz,1H),6.82(dt,J＝5.5,1.9Hz,1H),6.65(dt,J＝5.5,2.0Hz,1H), 3.38(t,J＝1.9Hz,2H).
步骤二：3-溴-5-氯-6,6a-二氢-1aH-茚并[1,2-b]环氧乙烷(化合物36- 3)的合成
根据实施例三十四步骤二中所述的操作，利用化合物36-2(560mg， 2.44mmol)为反应原料代替化合物34-1进行反应，经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：石油醚/二氯甲烷＝2/1(v/v))，得标题化合物，400mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ7.53(d,J＝1.7Hz,1H),7.42(d,J＝1.7Hz,1H),4.26(dd,J＝2.7,1.4Hz,1H),4.15(t,J＝2.8Hz,1H),3.20 (dd,J＝18.6,1.6Hz,1H),2.89(dd,J＝18.6,3.0Hz,1H).
步骤三：(6-溴-4-氯-2,3-二氢-1H-茚-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物36-4)的合成
根据实施例三十四步骤三中所述的操作，利用化合物36-3(400mg， 1.63mmol)为反应原料代替化合物34-2进行反应，经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：石油醚/四氢呋喃＝30/1(v/v))，得标题化合物，310 mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ7.32(s,1H),7.24(s,1H),5.26-4.93 (m,1H),3.25-3.12(m,2H),3.05-2.87(m,2H),2.72(s,3H),1.46(s,9H).
步骤四：(4-氯-6-(3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4- 羟基哌啶-4-基)甲基)-4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2,3-二氢- 1H-茚-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物36-5)的合成
根据实施例二十二步骤一中所述的操作，利用化合物36-4(30mg， 0.08mmol)为反应原料代替5-溴-4-氯-2,3-二氢-1H-茚-1-酮进行反应，经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：乙酸乙酯/甲醇＝60/1(v/v))，得标题化合物，40mg。ESI-MS(m/z):735.2,737.2[M+H]+。
步骤五：7-(7-氯-2-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二氟-3- (3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶- 4(3H)-酮(化合物36)的合成
根据实施例十步骤二中所述的操作，利用化合物36-5(35mg，0.05 mmol)为反应原料代替化合物10-1进行反应，反应液经制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，制备液加稀盐酸(0.5mL，1mol/L)，冷冻干燥，得标题化合物的盐酸盐，20mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)：δ8.55(s,1H),8.45(d,J＝5.6Hz, 1H),7.87(s,1H),7.73(s,1H),7.63-7.56(m,1H),6.12(td,JH-F＝55.2Hz, JH-H＝4.4Hz,1H),5.92-5.84(m,1H),5.00-4.94(m,1H),4.22-4.04(m,4H), 3.85-3.75(m,1H),3.64-3.53(m,2H),3.48-3.36(m,2H),3.35-3.32(m,1H), 3.26-3.19(m,1H),3.11-3.02(m,1H),2.97-2.84(m,1H),2.80(s,3H),1.79- 1.46(m,4H).ESI-MS(m/z):635.3,637.3[M+H]+。
实施例三十七 7-(7-氯-2-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(3-环丙基- 3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物37)的合成
Figure BDA0002361263240000841
步骤一：(4-氯-6-(3-((1-(3-环丙基-3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基) 甲基)-4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2,3-二氢-1H-茚-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物37-1)的合成
根据实施例二十二步骤一中所述的操作，利用化合物化合物19-1 (38mg，0.07mmol)和化合物36-4(30mg，0.08mmol)为反应原料分别代替化合物10-3和5-溴-4-氯-2,3-二氢-1H-茚-1-酮进行反应，经制备薄层色谱(展开剂：乙酸乙酯/甲醇＝60/1(v/v))分离纯化，得标题化合物，50mg。ESI-MS(m/z):717.4,719.4[M+H]+。
步骤二：7-(7-氯-2-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(3-环丙基- 3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物37)的合成
根据实施例十步骤二中所述的操作，利用化合物37-1(50mg，0.07 mmol)为反应原料代替化合物10-1进行反应，反应液经制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，制备液加稀盐酸(0.5mL，1mol/L)，冷冻干燥，得标题化合物的盐酸盐，28mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)：δ8.57(d,J＝9.6Hz,1H),8.44 (d,J＝15.2Hz,1H),7.86(s,1H),7.72(s,1H),7.38-7.16(m,5H),4.33-4.12 (m,2H),4.13-4.04(m,1H),3.99-3.85(m,1H),3.81-3.69(m,1H),3.65-3.52 (m,2H),3.36-3.32(m,1H),3.30-3.16(m,2H),3.08-2.70(m,6H),2.34-2.23 (m,1H),1.71-1.27(m,3.5H),1.26-1.13(m,1H),0.82-0.73(m,0.5H),0.67- 0.58(m,1H),0.48-0.38(m,1H),0.36-0.26(m,1H),0.15-0.06(m,1H).ESI- MS(m/z):617.3,619.3[M+H]+。
实施例三十八 7-(6-氯-2-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二氟- 3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮 (化合物38)的合成
Figure BDA0002361263240000861
步骤一：5-溴-6-氯-2-(羟亚胺)-2,3-二氢-1H-茚-1-酮(化合物38-1) 的合成
室温下，将化合物24-1(200mg，0.81mmol)和三甲基氯硅烷(106 mg，0.98mmol)用甲基叔丁基醚(20mL)溶解，缓慢滴加亚硝酸异戊酯(115mg，0.98mmol)，反应室温搅拌2h。反应液过滤，滤饼用甲基叔丁基醚(2×10mL)洗涤，得标题化合物的粗品，165mg。ESI- MS(m/z):274.0,276.0[M+H]+。
步骤二：2-氨基-5-溴-6-氯-2,3-二氢-1H-茚-1-醇(化合物38-2)的合成
室温下，将化合物38-1(160mg，0.58mmol)溶于干燥的四氢呋喃(20mL)，加入硼氢化钠(86mg，2.33mmol)和三氟化硼乙醚络合物(331mg，2.33mmol)，反应升温至65℃搅拌5h。反应液冷却至室温后加入乙醇(20mL)淬灭，浓缩得到粗品经制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，冷冻干燥，得标题化合物的甲酸盐，80mg。 ESI-MS(m/z):262.3,264.3[M+H]+。
步骤三：5-溴-6-氯-2,3-二氢-1H-茚-2-胺(化合物38-3)的合成
室温下，将化合物38-2的甲酸盐(67mg，0.22mmol)溶于1,2-二氯乙烷(20ml)，加入三乙基硅烷(6mL)和三氟化硼乙醚络合物(6 mL)，反应升温至85℃搅拌18h。反应液浓缩，浓缩物经制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，冷冻干燥，得标题化合物的甲酸盐，43 mg。ESI-MS(m/z):246.3,248.3[M+H]+。
步骤四：(5-溴-6-氯-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物38-4)的合成
室温下，将化合物38-3的甲酸盐(43mg，0.15mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三乙胺(30mg，0.29mmol)和二碳酸二叔丁酯(218mg，0.29mmol)，室温搅拌4h。反应液浓缩，浓缩物经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：石油醚/乙酸乙酯＝8/1(v/v))，得标题化合物，40mg。ESI-MS(m/z):290.3,292.3[M-56+H]+。
步骤五：(5-溴-6-氯-2,3-二氢-1H-茚-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯 (38-5)的合成
根据实施例七步骤一中所述的操作，利用化合物38-4(40mg，0.12 mmol)为反应原料代替化合物7-1进行反应，反应液经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：石油醚/乙酸乙酯＝8/1(v/v))，得标题化合物， 39mg。ESI-MS(m/z):304.3,306.3[M-56+H]+。
步骤六：(5-氯-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2,3-二氢- 1H-茚-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物38-6)的合成
根据实施例七步骤二中所述的操作，利用化合物38-5(40mg，0.11 mmol)为反应原料代替化合物7-2进行反应，反应液过滤后浓缩，得标题化合物的粗品，45mg。ESI-MS(m/z):352.2,354.2[M-56+H]+。
步骤七：(5-氯-6-(3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4- 羟基哌啶-4-基)甲基)-4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2,3-二氢- 1H-茚-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物38-7)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物10-3(9mg，0.02 mmol)和化合物38-6的粗品(6mg)为反应原料分别代替化合物1-2 和(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，反应液过滤后浓缩，得标题化合物的粗品，9mg。ESI-MS(m/z):735.4,737.4[M+H]+。
步骤八：7-(6-氯-2-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二氟-3- (3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶- 4(3H)-酮(化合物38)的合成
根据实施例十步骤二中所述的操作，利用化合物38-7的粗品(9 mg)为反应原料代替化合物10-1进行反应，反应液经制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，制备液冷冻干燥，得标题化合物的甲酸盐， 2mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.53(s,1H),8.51(s,1H),7.98(d, J＝8.0Hz,1H),7.62-7.57(m,1H),7.50(d,J＝8.0Hz,2H),6.12(td,JH-F＝55.2Hz,JH-H＝4.4Hz,1H),5.91-5.83(m,1H),5.01-4.94(m,1H),4.17- 4.09(m,1H),4.07-3.96(m,3H),3.85-3.75(m,1H),3.50-3.35(m,4H), 3.17-3.03(m,3H),2.96-2.87(m,1H),2.72(s,3H),1.68-1.46(m,4H).ESI- MS(m/z):635.2,637.2[M+H]+。
实施例三十九 7-(2-氨基-6-氯-1-羟基-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二 氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)- 酮(化合物39)的合成
Figure BDA0002361263240000881
步骤一：(5-溴-1-((叔丁氧羰基)氧基)-6-氯-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物39-1)的合成
室温下，将化合物38-2(20mg，0.076mmol)溶于二氯甲烷(10 mL)中，加入三乙胺(16mg，0.23mmol)和二碳酸二叔丁酯(50mg， 0.23mmol)，室温反应4h。反应液浓缩，剩余物经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：石油醚/乙酸乙酯＝8/1(v/v))，得标题化合物，30mg。ESI-MS(m/z):461.1,463.1[M+H]+。
步骤二：(5-氯-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2,3-二氢- 1H-茚-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物39-2)的合成
根据实施例七步骤二中所述的操作，利用化合物39-1(30mg， 0.06mmol)为反应原料代替化合物7-2进行反应，反应液过滤后浓缩，得标题化合物的粗品，30mg。ESI-MS(m/z):509.5,511.5[M+H]+。
步骤三：(1-((叔丁氧羰基)氧基)-6-氯-5-(3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H- 吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)-4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,4-d] 嘧啶-7-基)-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物39-3)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物10-3(31mg，0.06 mmol)和化合物39-2的粗品(30mg，0.05mmol)为反应原料分别代替化合物1-2和(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，反应液过滤后浓缩，浓缩物经制备薄层色谱分离纯化(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1(v/v))，得标题化合物，15mg。ESI-MS(m/z):837.2,839.3[M+H]+。
步骤四：7-(2-氨基-6-氯-1-羟基-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d] 嘧啶-4(3H)-酮(化合物39)的合成
根据实施例十步骤二中所述的操作，利用化合物39-3(15mg，0.020 mmol)为反应原料代替化合物10-1进行反应，反应液经制备型高效液相色谱分离纯化(方法J)，制备液冷冻干燥，得标题化合物的三氟乙酸盐，6mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.53(d,J＝4.0Hz,1H),8.01- 7.96(m,1H),7.64-7.57(m,2H),7.54-7.50(m,1H),6.12(td,JH-F＝55.2 Hz,JH-H＝4.4Hz,1H),5.91-5.84(m,1H),5.31(d,J＝4.0Hz,0.3H),5.17 (d,J＝4.0Hz,0.7H),5.01-4.94(m,1H),4.19-4.05(m,4H),3.94(s,3H), 3.85-3.75(m,1H),3.59-3.36(m,4H),3.27-3.13(m,2H),3.10-3.01(s,1H), 2.97-2.84(m,1H),2.80(s,3H),1.77-1.47(m,4H).ESI-MS(m/z):637.3, 639.2[M+H]+。
实施例四十 7-(6-氯-2-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(3-环丙基-3- 苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物40)的合成
Figure BDA0002361263240000901
步骤一：(5-氯-6-(3-((1-(3-环丙基-3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基) 甲基)-4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2,3-二氢-1H-茚-2-基) (甲基)氨基甲酸叔丁基酯(化合物40-1)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物19-1(30mg，0.06 mmol)和化合物38-6(20mg，0.05mmol)为反应原料分别代替化合物1-2和(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，经制备型高效液相色谱分离纯化(方法M)，得标题化合物，20mg。ESI-MS(m/z):717.3,719.3[M+H]+。
步骤二：7-(6-氯-2-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(3-环丙基- 3-苯基丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物40)的合成
根据实施例十步骤二中所述的操作，利用化合物40-1(20mg，0.03 mmol)为反应原料代替化合物10-1进行反应，反应液减压浓缩，加入纯化水后冷冻干燥，得标题化合物的盐酸盐，14mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,Methanol-d4):δ8.56(d,J＝8.0Hz,1H),8.06(d, J＝20.0Hz,1H),7.54(s,1H),7.51(s,1H),7.35-7.14(m,5H),4.24-4.01 (m,3H),3.96-3.72(m,2H),3.55-3.43(m,2H),3.22-3.18(m,1H),3.17-3.11 (m,1H),2.98-2.82(m,2H),2.78(s,3H),2.72-2.64(m,1H),2.33-2.24(m, 1H),1.65-1.54(m,1H),1.50-1.41(m,1H),1.35-1.29(m,2H),1.23-1.15(m, 1H),0.82-0.72(m,1H),0.46-0.36(m,1H),0.35-0.26(m,1H),0.14-0.06(m,1H).ESI-MS(m/z):617.3,619.3[M+H]+。
实施例四十一 7-(4-氯-2-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(3-环丙基- 3-(4-氟苯基)丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物41) 的合成
Figure BDA0002361263240000911
步骤一：7-溴-3-((1-(3-环丙基-3-(4-氟苯基)丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基) 甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物41-2)的合成
根据实施例十步骤三中所述的操作，利用化合物41-1(127mg， 0.61mmol)为反应原料代替化合物4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酸进行反应，减压浓缩后反应液经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：二氯甲烷/甲醇＝19/1(v/v))，得标题化合物，285mg。ESI-MS(m/z):534.2, 536.2[M+H]+。
步骤二：(4-氯-5-(3-((1-(3-环丙基-3-(4-氟苯基)丙酰基)-4-羟基哌啶- 4-基)甲基)-4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2,3-二氢-1H-茚-2- 基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物41-3)的合成
根据实施例一步骤二中所述的操作，利用化合物41-2(26mg，0.05 mmol)和化合物34-4(20mg，0.05mmol)为反应原料分别代替化合物1-2和(1H-吲唑-6-基)硼酸进行反应，减压浓缩后反应液经制备薄层色谱分离纯化(洗脱液：乙酸乙酯/甲醇＝60/1(v/v))，得标题化合物， 15mg。ESI-MS(m/z):735.3,737.3[M+H]+。
步骤三：7-(4-氯-2-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(3-环丙基- 3-(4-氟苯基)丙酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4(3H)- 酮(化合物41)的合成
根据实施例十步骤二中所述的操作，利用化合物41-3(15mg，0.02 mmol)为反应原料代替化合物10-1进行反应，反应液经制备型高效液相色谱分离纯化(方法C)，冷冻干燥，得标题化合物的甲酸盐，9mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ8.55(brs,1H),8.49(d,J＝4.0Hz, 1H),7.94(d,J＝14.8Hz,1H),7.43(d,J＝7.6Hz,1H),7.38-7.18(m,3H), 7.06(t,J＝8.8Hz,1H),6.98(t,J＝8.4Hz,1H),4.24-4.10(m,1H),4.09- 3.82(m,3H),3.82-3.70(m,1H),3.58-3.40(m,2H),3.30-3.02(m,3H), 3.02-2.65(m,3H),2.65(s,3H),2.40-2.20(m,1H),1.70-1.35(m,3H),1.22- 0.95(m,2H),0.66-0.54(m,1H),0.47-0.35(m,1H),0.35-0.23(m,1H), 0.16-0.04(m,1H).ESI-MS(m/z):635.3,637.3[M+H]+。
实施例四十二 7-(6-氯-2-甲基-2-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4, 4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4-d]嘧啶-4 (3H)-酮(化合物42)的合成
Figure BDA0002361263240000921
步骤一：5-溴-6-氯-2-甲基-2,3-二氢-1H-茚-2-胺(化合物42-1)的合成
室温下，称取化合物16-1(125mg，0.46mmol)溶于盐酸(10mL， 6mol/L)，搅拌溶解后加入N-氯代丁二酰亚胺(64mg，0.48mmol)，升温至60℃搅拌反应8h。然后将反应液冷却至室温，饱和碳酸氢钠水溶液调pH值为9，乙酸乙酯(3×10mL)萃取，合并有机相，经无水硫酸钠干燥，减压浓缩。浓缩液经制备型高效液相色谱分离纯化(方法 N)，冷冻干燥，得标题化合物的三氟乙酸盐，66mg。ESI-MS(m/z): 260.0,262.0[M+H]+。
步骤二：叔丁基(5-溴-6-氯-2-甲基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)氨基甲酸酯 (化合物42-2)的合成
室温下，将化合物42-1的三氟乙酸盐(30mg，0.13mmol)悬浮于二氯甲烷(4mL)，加入N,N-二异丙基乙胺(70mg，0.54mmol) 和二碳酸二叔丁酯(68mg，0.18mmol)，室温反应5h。减压浓缩反应液，得标题化合物，65mg。ESI-MS(m/z):304.1,306.1[M-56+H]+。
步骤三：叔丁基(5-溴-6-氯-2-甲基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(化合物42-3)的合成
根据实施例七步骤一中所述的操作，利用化合物42-2(65mg，0.16 mmol)为反应原料代替化合物7-1进行反应，反应液经制备型高效液相色谱纯化(方法O)，冷冻干燥得标题化合物，48mg。ESI-MS(m/z): 274.0,276.0[M-100+H]+。
步骤四：叔丁基(5-氯-6-(3-((1-(4,4-二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)-4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2- 甲基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(化合物42-4)的合成
室温下，将化合物42-3(63mg，0.17mmol)和联硼酸频那醇酯 (64mg，0.25mmol)溶于1,4-二氧六环(4mL)，加入乙酸钾(50 mg，0.50mmol)，置换氮气后，加入Pd(dppf)Cl2(12mg，0.02mol)，再次置换氮气5次，在氮气保护下，80℃下反应12h。停止反应，待反应液冷却至室温。再依次加入化合物10-3(30mg，0.06mmol)、1,4- 二氧六环(0.5mL)、水(0.5mL)、碳酸钾(23mg，0.17mmol)，置换氮气后，加入Pd(PPh3)4(7mg，0.01mmol)。在氮气保护下，80℃下反应14h。停止反应，冷至室温，反应液经制备制备薄层色谱分离纯化(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1(v/v))，得标题化合物，21mg。 ESI-MS(m/z):749.3,751.3[M+H]+。
步骤五：7-(6-氯-2-甲基-2-(甲胺基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)-3-((1-(4,4- 二氟-3-(3-氟-1H-吡唑-1-基)丁酰基)-4-羟基哌啶-4-基)甲基)噻吩并[3,4- d]嘧啶-4(3H)-酮(化合物42)的合成
室温下，将化合物42-4(21mg，0.03mmol)溶于乙酸乙酯(1mL) 中，加入盐酸/乙酸乙酯溶液(2mL，4mol/L)。室温反应2h。反应液经制备型高效液相分离纯化(方法P),冷冻干燥，得标题化合物的甲酸盐，8mg。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.60(d,J＝1.2Hz,1H),7.95(d,J ＝4.8Hz,1H),7.84-7.78(m,1H),7.44(d,J＝2.4Hz,2H),6.26(td,JH-F＝ 55.2Hz,JH-H＝3.6Hz,1H),5.99(ddd,J＝6.0,2.8,1.2Hz,1H),5.07-4.86 (m,2H),4.06-3.98(m,1H),3.96-3.85(m,2H),3.72-3.65(m,1H),3.30-3.22 (m,2H),3.03(t,J＝16.8Hz,2H),2.97-2.76(m,4H),2.31(s,3H),1.64- 1.33(m,4H),1.26(s,3H).ESI-MS(m/z):649.3,651.3[M+H]+。
药理活性测试
试验例1：USP7(蛋白酶)体外酶学活性抑制试验
试验系统：
试剂盒USP7 Inhibitor Screening Assay Kit,(BPS Catalog:79256)，含有：
蛋白酶USP7 HisFLAGtags enzyme,(BPS Catalog:80395)，
底物Ub-AMC Substrate,(BPS Catalog:81150)，
缓冲液5×USP7 Assay Buffer,(BPS Catalog:79274)。
测试仪器：
BMG PHERAstar FS。
试验参数：
USP7浓度：3nM；Ub-AMC浓度：100nM；
缓冲液体系：1.25×USP7 Assay Buffer；0.06％BSA；1mM DTT； ddH2O；
化合物和酶孵育时间：20min；
酶动力学反应时间：20min；
荧光：激发波长350nm，发射波长460nm。
酶标仪参数：BMG PHERAstar FS Fluorescence，激发波长350nm，发射波长460nm。
试验方法：
按照试剂盒说明书进行试验，步骤如下，
测试组：将待测化合物和蛋白酶USP7的混合物在缓冲液体系下室温孵育20min，加入底物Ub-AMC启动反应，采用酶动力学方法，读取每个循环(1min)中各孔的荧光值，读取20个循环。
阴性组：用0.2％DMSO水溶液代替待测化合物，实验方法与测试组相同。
空白组：用0.2％DMSO水溶液代替待测化合物，并且不加蛋白酶 USP7，实验方法与测试组相同。
数据处理：
计算各浓度组的相对抑制活性，抑制率＝100％-(测试组的荧光值- 空白组的荧光值)/(阴性组的荧光值-空白组的荧光值)×100％。按照四参数模型拟合曲线，计算化合物的半数抑制浓度(IC50)。
试验结果：
按照上述方法测定本发明化合物对USP7活性的抑制，结果如表1 中所示。
表1.USP7酶活抑制试验结果
Figure BDA0002361263240000951
Figure BDA0002361263240000961
结论：
在USP7酶活抑制试验中，本发明的化合物表现出较强的抑制活性，尤其是实施例3、4、6、7、8、10、17、18、23、31、39、42的化合物对USP7具有极强的抑制活性。
试验例2：化合物对MM.1S细胞增殖活性抑制试验
试验系统：
细胞名称/制造商：MM.1S/南京科佰
试剂盒名称/制造商：
Figure BDA0002361263240000962
Luminescent Cell Viability Assay,Promega。
测试仪器：
BMG PHERAstar FS。
试验参数：
细胞数量：3000细胞/孔
铺板培养基：MM.1S:1640+10％FBS
加药培养基：MM.1S:1640+10％FBS
化合物孵育条件：37℃，5％CO2
孵育时间：5d
检测温度：RT
化学发光：Luminescent
试验方法：
将细胞培养在含有10％胎牛血清的培养基中，放置在37℃，5％ CO2培养条件下进行培养。向96孔板中铺入适量细胞，培养箱中过夜培养。次日，加入含有预先稀释化合物的完全培养基，37℃孵育5d。第五天向每孔中加入检测试剂CellTiter-GLo，化学发光检测各孔的相对发光单位(RLU)。
数据处理：
利用不含细胞的培养基的CellTiter-Glo获得背景值。细胞活率＝ (样品RLU-背景RLU)/(溶媒RLU-背景RLU)×100％，最大抑制率＝100％-细胞活率最大浓度，按照四参数模型拟合曲线，计算化合物的半数抑制浓度(IC50)。
试验结果：
采用上述方法测定化合物对MM.1S细胞增殖的抑制活性，结果如表2中所示。
表2.化合物对MM.1S细胞增殖活性抑制结果
Figure BDA0002361263240000971
Figure BDA0002361263240000981
结论：
在化合物对MM.1S细胞增殖活性抑制试验中，本发明的化合物表现出较强的细胞增殖抑制活性，尤其是实施例3、5、6、7、10、12、 21、实施例15中的14-B、36、38化合物对MM.1S细胞增殖具有极强的抑制活性。
试验例3：生化hERG抑制试验
试验系统：
试剂盒：PredictorTM hERG Fluorescence Polarization Assay, (ThermoFisherCatalog:PV5365)，含有：
阳性对照化合物E4031；
hERG细胞膜；
亲和性示踪剂Tracer；和
hERG缓冲液。
测试仪器：
BMG PHERAstar FS。
试验参数：
hERG浓度：1×
Tracer浓度：1nM
孵育时间：2h
荧光偏振：激发波长：540nm；发射波长：590nm
试验方法：
按照试剂盒说明书进行试验，步骤如下：
测试组：将不同浓度的待测化合物加入到含有hERG细胞膜的微孔板中，每孔中再加入具有高hERG亲和性示踪剂Tracer，将微孔板在室温孵育2小时后，使用多功能酶标仪检测荧光偏振(激发波长： 540nm；发射波长：590nm)值的变化。
阳性对照组：用30μM阳性对照化合物E4031代替待测化合物，实验方法与测试组相同。
空白对照组：用hERG缓冲液代替待测化合物，并且不加hERG 细胞膜，实验方法与测试组相同。
数据处理：
根据数据比值，计算本发明化合物在不同浓度下对hERG百分比抑制率(％)，判断化合物的半数抑制浓度(IC50)的范围。
百分比抑制率(％)＝(1-(待测化合物的荧光偏振值-阳性对照组的荧光偏振值)/(空白对照组的的荧光偏振值-阳性对照组的荧光偏振值))×100
试验结果：
采用上述方法测定化合物对hERG的抑制，结果如表3中所示。
表3.hERG抑制试验结果
实施例编号 IC<sub>50</sub>(μM)
10 ＞10
12 ＞10
34 ＞10
38 ＞10
39 ＞10
测试结果表明，本发明实施例10、12、34、38、39化合物与hERG 亲和性低，与亲和性示踪剂Tracer竞争的IC50均＞10μM。
试验例4：生化CYP酶(细胞色素P450)抑制试验
试验系统：
P450-GloTM CYP1A2 Screening System,(Promega Catalog:V9770)；
P450-GloTM CYP2D6 Screening System,(Promega Catalog:V9890)；
P450-GloTM CYP3A4 Screening System,(Promega Catalog:V9920)。
测试仪器：
BMG PHERAstar FS。
试验方法：
分别按照试剂盒说明书进行试验，步骤如下：
4.1对CYP1A2的抑制：
测试组：将不同浓度(10μM/1μM)的待测化合物加入到微孔板中，向每孔中加入Luciferin-ME(100μM)、KPO4(100mM)和CYP1A2 (0.01pmol/μL)，在室温下预孵育10min，随后加入NADPH再生系统在室温下反应30min，最后加入等体积的检测缓冲液在室温下孵育20min后进行化学发光检测。
阴性对照组：实验方法同测试组，只是不加待测化合物。
空白对照组：实验方法同测试组，只是不加待测化合物，并且用 CYP1A2Membrance(0.01pmol/μL)代替CYP1A2。
4.2对CYP2D6的抑制：
测试组：将不同浓度(10μM/1μM)的待测化合物加入到微孔板中，向每孔中加入Luciferin-ME EGE(30μM)、KPO4(100mM)和CYP2D6 (5nM)，在室温下预孵育10min，随后加入NADPH再生系统在37℃下反应30min，最后加入等体积的检测缓冲液在室温下孵育20min后进行化学发光检测。
阴性对照组：实验方法同测试组，只是不加待测化合物。
空白对照组：实验方法同测试组，只是不加待测化合物，并且用 CYP2D6Membrance(5nM)代替CYP2D6。
4.3对CYP3A4的抑制：
测试组：将不同浓度(10μM/1μM)的待测化合物加入到微孔板中，向每孔中加入Luciferin-IPA(3μM)、KPO4(100mM)和CYP3A4(2 nM)，在室温下预孵育10min，随后加入NADPH再生系统在室温下反应30min，最后加入等体积的检测缓冲液在室温下孵育20min后进行化学发光检测。
阴性对照组：实验方法同测试组，只是不加待测化合物。
空白对照组：实验方法同测试组，只是不加待测化合物，并且用 CYP3A4Membrance(2nM)代替CYP3A4。
数据处理：
百分比抑制率(％)＝(1-(待测化合物浓度组的化学发光值-空白对照组的化学发光值)/(阴性对照组的化学发光值-空白对照组的化学发光值))×100。
根据不同浓度下化合物对CYP酶的抑制率，估算化合物的半数抑制浓度(IC50)或范围。IC50＝X×(1-百分比抑制率(％))/百分比抑制率(％)，其中X为化合物测试浓度。
试验结果：
按照上述方法测定本发明化合物对三种CYPs的抑制，结果如表4 中所示。
表4.CYPs抑制试验结果
Figure BDA0002361263240001021
结论：
上述结果表明，本发明实施例12、17化合物对3种主要CYP亚型均无明显抑制作用，表明其潜在的药物相互作用可能性相对较低，具有较好的成药性质。
试验例5：大鼠药代动力学(PK)研究
分别通过静脉(IV)和灌胃(PO)给予雄性SD大鼠本申请的化合物，考察药代动力学特点。IV和PO的给药剂量分别是1mg/kg和 5mg/kg，IV的溶媒为10％DMSO:10％Solutol(聚乙二醇-15羟基硬脂酸酯):80％生理盐水，PO的溶媒为10％DMSO:10％Solutol (聚乙二醇-15羟基硬脂酸酯):80％生理盐水。IV和PO给药后在不同时间点收集血液(采集给药前0h，给药后0.083、0.25、0.5、1、2、 4、6、8和24h静脉血样；采集给药前0h，给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8和24h口服血样)。血液采用EDTA.K2抗凝，离心后得到血浆样品，保存于-80℃。血浆样品经沉淀蛋白处理后进行LC-MS/MS分析。应用WinNonlin 6.3软件，采用非房室模型计算药代动力学参数，结果见表5。
表5.通过IV和PO给药的化合物在大鼠体内血浆中的药代动力学参数
Figure BDA0002361263240001031
与静脉给药相比，大鼠口服(PO组)给予实施例15中的14-B的生物利用度为32.3％。表明本申请的实施例15中的14-B在溶媒10％ DMSO:10％Solutol(聚乙二醇-15羟基硬脂酸酯):80％生理盐水给药下吸收较好。
试验例6：小鼠药代动力学(PK)研究
分别通过静脉(IV)和灌胃(PO)给予雌性balb/c小鼠本申请的化合物，考察药代动力学特点。IV和PO的给药剂量分别是1mg/kg和 10mg/kg，IV的溶媒为5％DMSO:5％Solutol(聚乙二醇-15羟基硬脂酸酯):90％生理盐水，PO的溶媒为10％DMSO:10％Solutol (聚乙二醇-15羟基硬脂酸酯):80％生理盐水。采集给药前0h，给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8和24h静脉血样；采集给药前0h，给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8和24h口服血样，血液采用EDTA.K2抗凝，离心后得到血浆样品，保存于-80℃。血浆样品经沉淀蛋白处理后进行LC-MS/MS分析。应用WinNonlin 6.3软件，采用非房室模型计算药代动力学参数，结果见表6。
表6.通过IV和PO给药的化合物在小鼠体内血浆中的药代动力学参数
Figure BDA0002361263240001041
与静脉给药相比，小鼠口服(PO组)给予实施例15中的14-B的生物利用度为23.1％。表明本申请的实施例15中的14-B在溶媒10％ DMSO:10％Solutol(聚乙二醇-15羟基硬脂酸酯):80％生理盐水给药下吸收较好。
除本文中描述的那些实施方案外，根据前述描述，本发明的多种修改对本领域技术人员而言会是显而易见的。这样的修改也意图落入所附权利要求书的范围内。本申请中所引用的各参考文献(包括所有专利、专利申请、期刊文章、书籍及任何其它公开)均以其整体援引加入本文。
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Claims (12)

1.式I所示的化合物、其可药用盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物：
Figure FDA0002361263230000011
其中，
R1为氢、C1-6烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基、
Figure FDA0002361263230000012
卤素和氰基，其中，所述C1-6烷基、C6-10芳基和5-10元杂芳基各自独立地任选地被如下的一个或多个基团所取代：氢、卤素、氰基、-ORa、-NRbRc、-C1-6亚烷基-NRbRc、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、任选地被卤代的C1-6烷基、-C(O)R6、-COOR7、-C(O)NRbRc、-S(O)qR8、-S(O)qNRbRc、-O-C2-6亚烷基-NRbRc、-NRa-C2-6亚烷基-NRbRc；
R2选自氢、卤素、氰基、任选地被卤代的C1-6烷基、C3-8环烷基；
R3选自-C(O)R9、-COOR10、-C(O)NReRf、-S(O)qR11和-S(O)qNReRf；
A环和B环各自独立的选自C3-8环烷基、C3-8环烯基、3-8元杂环烷基、3-8元杂环烯基、C6-10芳基和5-10元杂芳基；
Figure FDA0002361263230000013
中，r个R基团为相同基团或不同基团，m个R4基团为相同基团或不同基团；
R选自氢、任选地被卤代的C1-6烷基、卤素和氰基；
R4选自氢、氧代基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基、-ORa、-NRbRc、卤素、氰基、-C(O)R6、-COOR7、-C(O)NRbRc、-O-C2-6亚烷基-NRbRc和-NRd-C2-6亚烷基-NRbRc，其中，所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、C6-10芳基和5-10元杂芳基各自独立地任选被如下的一个或多个基团所取代：氢、卤素、氰基、C1-6烷基、羟基、氨基、-N(C1-6烷基)2、-NH(C1-6烷基)；
Ra、Rb、Rc和Rd各自独立地选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基、-C(O)R6和-S(O)qR8，其中，所述C1-6烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、C6-10芳基和5-10元杂芳基各自独立地任选被如下的一个或多个基团所取代：氢、卤素、羟基、氨基、氰基、任选地被卤代的C1-6烷基、C3-8环烷基；或者，Rb、Rc与它们所连接的氮原子形成3-6元杂环基；
R6、R7和R8各自独立地选自氢、C1-6烷基和C3-8环烷基，其中，所述C1-6烷基和C3-8环烷基各自独立地任选被如下的一个或多个基团所取代：氢、卤素、氰基、氨基、羟基；
R9、R10、R11、Re和Rf各自独立地选自氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基，或者，Re、Rf与它们所连接的氮原子形成3-6元杂环基；其中，所述C1-6烷基、C2-6烯基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和3-6元杂环基各自独立地任选被如下的一个或多个取代基所取代：氢、氰基、卤素、-OH、C1-6烷氧基、-NRgRh、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基，并且，所述取代基中的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、C6-10芳基和5-10元杂芳基各自独立地任选被下述的一个或多个基团所取代：氢、卤素、氰基、任选地被卤代的C1-6烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基；
Rg、Rh各自独立地选自氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C3-8环烷基和3-8元杂环烷基；
m选自0、1、2、3、4、5、6、7和8；
q选自1和2；
r选自0、1、2和3。
2.根据权利要求1所述的化合物、其可药用盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物，其中，
R1选自C1-6烷基、C6-10芳基和
Figure FDA0002361263230000031
其中，所述C1-6烷基和C6-10芳基各自独立地任选被如下的一个或多个基团所取代：氢、卤素、-ORa、-C1-6亚烷基-NRbRc；
A环和B环各自独立地选自C6-10芳基、5-10元杂芳基、3-8元杂环烯基、3-8元杂环烷基、C3-8环烯基和C3-8环烷基；
R选自氢、任选地被卤代的C1-6烷基、卤素和氰基；
r选自0、1和2；
R4选自氢、-NRbRc、C1-6烷基和-ORa；
m选自0、1和2；
Ra、Rb和Rc各自独立地选自氢和C1-6烷基；
优选地，R选自氢和卤素。
3.根据权利要求1或2所述的化合物、其可药用盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物，其中，
R1选自C1-6烷基、C6-10芳基和
Figure FDA0002361263230000032
其中，所述C6-10芳基任选地被如下的一个或多个基团所取代：氢、羟基、NH2-C1-6亚烷基-、卤素；
A环和B环各自独立的选自C6-10芳基、5-10元杂芳基、3-8元杂环烯基、3-8元杂环烷基、C3-8环烯基和C3-8环烷基；
R4选自氢、氨基、C1-6烷基-NH-、(C1-6烷基)2N-、C1-6烷基和羟基；
优选地，R4选自氢、氨基、CH3-NH-、(CH3)2N-、甲基和羟基。
4.根据权利要求1-3任一项所述的化合物、其可药用盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物，其中，
R1选自C1-6烷基、C6-10芳基和
Figure FDA0002361263230000041
其中，所述C6-10芳基任选地被如下的一个或多个基团所取代：羟基、NH2-C1-6亚烷基-、卤素；
A环为C6-10芳基；
B环选自5-10元杂芳基、3-8元杂环烯基、3-8元杂环烷基、C3-8环烯基和C3-8环烷基。
5.根据权利要求1-4任一项所述的化合物、其可药用盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物，其中，
A环为苯基；
B环选自吡唑基、3-吡咯啉基、吡咯烷基、环戊烯基和环戊烷基。
6.根据权利要求1-5任一项所述的化合物、其可药用盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物，其中，
R1选自甲基、
Figure FDA0002361263230000042
Figure FDA0002361263230000043
Figure FDA0002361263230000051
优选地，R1选自甲基、
Figure FDA0002361263230000052
Figure FDA0002361263230000053
Figure FDA0002361263230000061
7.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物、其可药用盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物，其中，
R2选自氢、卤素、任选地被卤代的C1-6烷基和C3-8环烷基；
优选地，R2选自氢、氟、甲基和三氟甲基；
更优选地，R2为氢。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物、其可药用盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物，其中，
R3选自-C(O)R9和-C(O)NReRf；R9、Re、Rf各自独立地选自氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C3-8环烷基和3-8元杂环烷基，其中，所述C1-6烷基、C2-6烯基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基各自独立地任选被如下的一个或多个取代基所取代：卤素、任选地被卤代的C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基；并且，所述取代基中的C6-10芳基和5-10元杂芳基各自独立地任选被如下的一个或多个基团所取代：氢、卤素、任选地被卤代的C1-6烷基；
优选地，R3为-C(O)R9；其中，R9为被如下的一个或多个取代基任选取代的C1-6烷基：任选地被卤代的C1-6烷基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基，其中，所述C6-10芳基和5-10元杂芳基各自独立地任选被一个或多个卤素所取代；
更优选地，R3为-C(O)R9；其中R9为被如下的一个或多个取代基任选取代的C1-6烷基：甲基、二氟甲基、三氟甲基、环丙基、苯基、卤代苯基、卤代吡唑基；
进一步优选地，R3为-C(O)R9，其中，R9选自下列基团：
Figure FDA0002361263230000071
9.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物、其可药用盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物，其中，所述化合物选自：
Figure FDA0002361263230000072
Figure FDA0002361263230000081
Figure FDA0002361263230000091
10.一种药物组合物，其包含权利要求1至9中任一项所述的化合物、其可药用盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物，以及可选的药用辅料；
优选地，所述药物组合物还包含抑制去泛素化酶USP7活性的其它有效成分或者预防或治疗与去泛素化酶USP7调节相关疾病或病症的其它有效成分；
更优选地，所述与去泛素化酶USP7调节相关疾病或病症选自癌症、神经退行性疾病、糖尿病、骨和关节病、关节炎炎性病症、骨质疏松症、免疫病症、心血管疾病、局部缺血性疾病、病毒性感染性疾病及细菌性感染性疾病。
11.一种药品，包括权利要求1至9中任一项所述的化合物、其可药用盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物、或者权利要求10所述的药物组合物，以及可选的产品包装。
12.权利要求1至9中任一项所述的化合物、其可药用盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药、任意晶型、代谢物或它们的混合物或者权利要求10所述的药物组合物在制备去泛素化酶USP7抑制剂或者在制备预防或治疗与去泛素化酶USP7调节相关疾病或病症的药物中的用途；
优选地，所述与去泛素化酶USP7调节相关疾病或病症选自癌症、神经退行性疾病、糖尿病、骨和关节病、关节炎炎性病症、骨质疏松症、免疫病症、心血管疾病、局部缺血性疾病、病毒性感染性疾病及细菌性感染性疾病；
更优选地，所述癌症选自肝细胞癌、多发性骨髓瘤、结肠癌、肺癌、前列腺癌和膀胱癌中的至少一种。
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