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CN113018442A - 细胞因子il1f5在制备检测、预防和治疗肿瘤的产品中的应用 - Google Patents

细胞因子il1f5在制备检测、预防和治疗肿瘤的产品中的应用 Download PDF

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CN113018442A
CN113018442A CN202110305786.8A CN202110305786A CN113018442A CN 113018442 A CN113018442 A CN 113018442A CN 202110305786 A CN202110305786 A CN 202110305786A CN 113018442 A CN113018442 A CN 113018442A
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CN
China
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il1f5
cytokine
tumor
mice
preparation
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CN202110305786.8A
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钟波
杨薇
王鹏
董宏鹏
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Wuhan University WHU
Original Assignee
Wuhan University WHU
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Abstract

本发明提供了一种细胞因子IL1F5在制备检测、预防和/或治疗肿瘤产品中的应用，其对IL1F5对于肿瘤免疫的促进进而抑制肿瘤生长的深入研究，提示IL1F5可作为肿瘤抑制的一个新靶点，细胞因子IL1F5可以应用于制备抗肺癌、结直肠癌等的药物。

Description

细胞因子IL1F5在制备检测、预防和治疗肿瘤的产品中的应用
技术领域
本发明专利属于生物技术和医学领域，具体涉及细胞因子IL1F5在制备检测、预防和治疗肿瘤的产品中的应用。
背景技术
目前，癌症被称为人类面临的头号健康威胁，同时癌症也是导致人类死亡的主要原因。肺癌和结直肠癌是发病率和死亡率较高的癌症，并且发病率和死亡率呈现出增速加快的趋势，已成为对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤。吸烟、长期暴露于污染的空气中与所在工作场所暴露于致癌原是患肺癌的主要风险因子。饮食习惯、卫生习惯以及炎症性肠病是患结直肠癌的主要风险因子。基于肺癌的生物学特征、治疗和预后，世界卫生组织(WHO)将其分为两大类：非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)。其中，NSCLC占所有肺癌病例的85％以上，主要包括腺癌和鳞癌。根据结直肠癌的病理特征可将结直肠癌分为肿块型、溃疡型和浸润型。根据组织学分类则可以分为状腺癌、管状腺癌、粘液腺癌、未分化癌、腺鳞癌和小细胞癌。
细胞因子(Cytokine)是由多种细胞产生的低分子量可溶性蛋白质，具有调节固有免疫和适应性免疫、血细胞生成、细胞生长以及损伤组织修复等多种功能。细胞因子可被分为白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子超家族、集落刺激因子、趋化因子、生长因子等。众多细胞因子在体内通过旁分泌、自分泌或内分泌等方式发挥作用，具有多效性、重叠性、拮抗性、协同性等多种生理特性，形成了十分复杂的细胞因子调节网络，参与人体多种重要的生理功能。细胞因子通过与其特异性的受体结合，会引发靶细胞内的信号级联反应，例如调节细胞发育、参与细胞的命运决定、启动细胞的死亡程序、促进血管生成等。并且在肿瘤的发生、发展、复发和转移过程中，细胞因子也同样发挥着重要的作用，细胞因子可以通过与靶细胞上的特异性受体结合，改变肿瘤微环境中的细胞分布，激活或抑制某些免疫细胞的功能，也可以改变肿瘤微环境细胞的代谢组学、转录组学、表观组学特征，来发挥促进或者抑制肿瘤发生的功能。自1957 年Lssac发现干扰素以来，迄今已经发现了200多种细胞因子。根据其功能可将细胞因子分为白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子、造血因子、生长因子、趋化因子。IL1F5属于白细胞介素1家族成员，它可以与IL1RAcP(interleukin-1 Receptoraccessory protein)竞争性地结合IL36R 来阻碍IL36R-IL36R-IL1RAcP复合体的形成进而阻断IL1F9下游信号通路。
发明内容
因为细胞因子具有细胞类型特异性的表达模式，我们实验室前期进行了非小细胞肺癌小鼠模型肿瘤组织的单细胞测序研究。基于我们在小鼠肺癌模型中的研究，我们发现，Il1f5主要表达于嗜中性细胞(Neutrophils)，少量表达于树突状细胞(Dendritic cells)和表皮细胞(Epithelial cells)。Il36r主要表达于嗜中性细胞(Neutrophils)、表皮细胞(Epithelial cells)和内皮细胞 (Endothelial cells)。目前关于IL1F5的研究主要集中在银屑病、T细胞发育方面，主要功能为促进炎症反应和T细胞发育活化方面，目前关于IL1F5在肿瘤方面的研究较少，而且具体机制未知。
在研究肿瘤发生机制与肿瘤微环境方法中，常常使用动物模型来模拟肿瘤在机体内的生长状况。其中由带Cre重组酶的腺病毒(以下简称Ade-Cre)诱导的Krasfl/+Trp53fl/fl(以下简称KP)和Krasfl/+Lkb13fl/fl(以下简称KL)小鼠模型是研究非小细胞肺癌的主要经典模型之一。正常kras基因可以抑制肿瘤细胞生长，一旦发生突变，例如第十二位甘氨酸(G)突变为天冬氨酸(D)，会持续刺激细胞生长。Trp53是研究最为广泛的也是最重要的肿瘤抑制基因， p53缺失突变也会导致肿瘤的发生。Lkb1(又名STK11,serine/threoninekinase 11)，是一种丝氨酸/络氨酸激酶，其确实可以导致细胞内的氧化还原失衡和脂肪酸氧化的积累，进而导致肿瘤的发生。Kras、Trp53和LKB1突变常见于非小细胞肺癌中，在小鼠模型中，将Kras突变和 p53/LKB1缺失是理想的非小细胞肺腺癌的研究模型。但由于Kras与Trp53/LKB1在小鼠生长发育早期发挥重要作用，突变或者缺失都会致死，固需要使用借助Cre-Loxp系统的条件性敲除小鼠来实现在小鼠肺部原发癌的发生。
对于结直肠癌的研究我们同样使用小鼠模型来进行。在我们前期的研究中，主要利用DSS (Dextran Sulfate Sodium Salt，葡聚糖硫酸钠盐)来诱导溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)。利用AOM(azoxymethane,氧化偶氮甲烷)/DSS来诱导炎症引起的结直肠癌。利用AOM处理的
Figure RE-GDA0003068207190000021
小鼠来诱导原发性的结直肠癌。利用APCmin/+小鼠来诱导消化道自发的结直肠癌。
本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题之一，为此，在本发明的第一方面，本发明提供一种细胞因子IL1F5在制备检测、预防和/或治疗肿瘤产品中的应用。
本发明还提供一种细胞因子IL1F5在制备肿瘤的检测试剂中的应用。
根据本发明的技术方案，所述检测试剂以细胞因子IL1F5作为是否患肿瘤的标记物。
本发明还提供一种细胞因子IL1F5在制备检测肿瘤的芯片或试剂盒中的应用。
本发明还提供一种有促进细胞因子IL1F5表达或提高细胞因子IL1F5的活性的功能的物质在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明还提供一种细胞因子IL1F5、或编码所述IL1F5的核苷酸序列、或含有编码所述 IL1F5的核苷酸序列的载体、或含有编码所述IL1F5的核苷酸序列的载体导入或转染到宿主产生的重组蛋白、或过表达IL1F5的载体或病毒在制备抗肿瘤药物中的应用。
根据本发明的技术方案，编码所述IL1F5的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述载体为phage-puro-6tag或pET-30c，所述宿主为大肠杆菌。
根据本发明的技术方案，所述肿瘤包括但不限于：肝癌、肺癌、鳞癌、乳腺癌、子宫颈癌、结直肠癌、腺癌，优选地，所述肿瘤为肺癌或结直肠癌。根据现有技术报道及研究过程中发现，不同癌症在患病机理和治病机理上有很大差异，当一种药物治疗某一种癌症，并不能直接将其应用于其他癌症，发明人经过研究发现，本发明还提供一种细胞因子IL1F5、或编码所述IL1F5 的核苷酸序列、或含有编码所述IL1F5的核苷酸序列的载体、或含有编码所述IL1F5的核苷酸序列的载体导入或转染到宿主产生的重组蛋白、或过表达IL1F5的载体或病毒主要应用于在制备抗肺癌或结直肠癌药物中。
根据本发明的技术方案，所述IL1F5的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
在本发明的第二方面，本发明提供一种试剂盒，包括细胞因子IL1F5。
本发明的有益效果在于：
本发明提供一种细胞因子IL1F5在制备检测、预防和/或治疗肿瘤产品中的应用，其对 IL1F5对于肿瘤免疫的促进进而抑制肿瘤生长的深入研究，提示IL1F5可作为肿瘤抑制的一个新靶点，细胞因子IL1F5可以应用于制备抗肺癌、结直肠癌等的药物。
附图说明
图1为Il1f5在人肺癌组织中高表达的实验结果图，其中，图1A为Il1f5在新鲜肺癌样品肿瘤组织与正常组织中的mRNA水平对比结果图；图1B为Il1f5在新鲜肺癌样品肿瘤组织中与正常组织中蛋白水平对比结果图；
图2为证明Il1f5的缺失能够促进非小细胞肺癌小鼠模型肿瘤发生的实验结果图，其中，图2A为KL模型构建过程示意图；图2B为KL、KL5在小鼠诱导了肿瘤后的第6、8、10周，小鼠肺部肿瘤面积大小结果图；图2C为KL、KL5小鼠在0天、40天、80天、120天、160 天的生存比例结果图；图2D为KL、KL5小鼠肺部肿瘤面积与小鼠肺部面积的比例结果图；图2E为KP模型构建过程示意图；图2F为KP、KP5在小鼠诱导了肿瘤后的第6、8、10周，小鼠肺部肿瘤面积大小结果图；图2G为KP、KP5小鼠在0天、40天、80天、120天、160 天的生存比例结果图；图2H为KP、KP5小鼠肺部肿瘤面积与小鼠肺部面积的比例结果图；
图3为证明Il1f5蛋白能延缓非小细胞肺癌疾病发生的实验结果图，其中，图3A为证明 Il1f5蛋白能延缓非小细胞肺癌疾病发生的实验过程示意图；图3B为KL、KL5与其对照组小鼠肺部肿瘤面积大小对比结果图；图3C为KL5、KP5与其对照组小鼠的生存比例对比结果图；图3D为KL、KP与其对照组小鼠的生存比例对比结果图；图3E为KL、KL5与其对照组小鼠肺部肿瘤面积与小鼠肺部面积的比例对比结果图；
图4为证明Il1f5的缺失能够促进结肠炎/结直肠癌模型小鼠的疾病发生的实验结果图，其中，图4A为DSS诱导的溃疡性结肠炎的造模方式示意图；图4B为将小鼠结直肠，盲肠和一小部分小肠拍照的图片及Il1f5表达组(Il1f5+/+)与Il1f5缺失组(Il1f5-/-)结肠长度对比结果图；图4C为小鼠靠近肛门部分的结直肠通过苏木素-伊红染色(H&E)的实验结果图；图4D 为由AOM/DSS诱导的炎症引起的结肠癌的造模方式示意图及Il1f5表达组(Il1f5+/+)与Il1f5 缺失组(Il1f5-/-)体重变化结果对比结果图；图4E为Il1f5表达组(Il1f5+/+)与Il1f5缺失组(Il1f5-/-) 的结肠部位的肿瘤数目和肿瘤大小对比结果图；图4F为VP小鼠模型的造模方式示意图；图 4G为小鼠的结直肠的拍照图片及Il1f5缺失组和野生组的结肠部位的肿瘤数目和肿瘤大小对比结果图；图4H为Apc模型中，Il1f5缺失组(Il1f5-/-)与野生组(WT)小鼠的结直肠和小肠平行摆放的拍照图片；图4I为Il1f5缺失组(Il1f5-/-)与野生组(WT)的结肠部位的肿瘤数目和肿瘤大小对比结果图；图4J为Il1f5缺失组(Il1f5-/-)与野生组(WT)生存实验结果对比图；图4K为Il1f5缺失组(Il1f5-/-)与野生组(WT)小鼠小肠通过苏木素-伊红染色(H&E)结果对比图；图4M为Il1f5缺失组(Il1f5-/-)与野生组(WT)小鼠肿瘤发生率对比结果图；图4L 为Apc Min/+模型中Il1f5表达组(Il1f5+/+)与Il1f5缺失组(Il1f5-/-)的小肠部位的肿瘤数目对比结果图；
图5为证明IL1F5能延缓结肠炎/结直肠癌模型小鼠的疾病发生的实验结果图；其中，图 5A为IL1F5蛋白纯化方式过程示意图；图5B为给药方式及给药过程中实验组(IL-36Ra)与对照组(PBS)体重变化结果对比图；图5C为实验组(IL-36Ra)与对照组(PBS)小鼠结直肠，盲肠和一小部分小肠拍照图片及实验组(IL-36Ra)与对照组(PBS)结肠长度对比如所示；图5D为截取小鼠靠近肛门部分的结直肠通过苏木素-伊红染色(H&E)的实验结果图；图5E为对于AOM/DSS诱导的炎症引起的结肠癌的治疗方式示意图；图5F为实验组(IL-36Ra)与对照组(PBS)小鼠的结直肠拍照图片及实验组(IL-36RA)与对照组(PBS)的结肠部位的肿瘤数目和肿瘤大小对比结果图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。
实施例1：IL1F5在人肺癌组织中高表达
本实施例通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)实验检测在44位非小细胞肺癌患者的新鲜肺癌样品肿瘤组织和同一片肺的正常组织样品中趋化因子的mRNA水平，筛选到Il1f5在新鲜肺癌样品肿瘤组织组织中的mRNA水平明显高于正常组织，如图1A所示。另外，对病人的新鲜肺癌样品肿瘤组织和正常组织进行固定包埋，制成组织芯片，并通过免疫组织化学实验(IHC)检测发现Il1f5的蛋白水平在新鲜肺癌样品肿瘤组织中明显高于正常组织，部分结果如图1B所示。
实施例2：Il1f5的缺失能够促进KP和KL模型小鼠诱导的肺癌生长
本实施例通过构建KP/KL小鼠非小细胞肺癌模型来确定IL1F5对于肿瘤生长的影响。本实验先将Il1f5敲除小鼠与Krasfl/+Trp53fl/fl/Krasfl/+Lkb1fl/fl小鼠进行杂交，得到 Krasfl/+Trp53fl/flIl1f5-/-(图中KP5)和Krasfl/+Lkb1fl/flIl1f5-/-(图中KL5)小鼠，KL模型构建过程如图2A所示。KP模型构建过程如图2E所示。在小鼠生长至8周龄时，通过将小鼠麻醉滴鼻加入带Cre基因的腺病毒(每只小鼠2X 106pfu病毒溶于60ul PBS)，可以实现对小鼠肺部肿瘤诱导，然后观察小鼠的生存期，并在不同时间点(6周、8周、10周)对小鼠肺部进行固定、包埋、切片，通过苏木素-伊红染色(H&E)来检测该时间点小鼠肺部肿瘤生长大小。
KL、KL5(Il1f5缺失组)小鼠在0天、40天、80天、120天、160天的生存比例结果如图2C所示，KP、KP5(Il1f5缺失组)小鼠在0天、40天、80天、120天、160天的生存比例结果如图2G所示，由图可知，在诱导了肿瘤的小鼠中，Il1f5的缺失的小鼠对于肿瘤生长更加敏感，更容易死亡，说明的Il1f5的存在具有延长肺癌小鼠的生存期的作用。
KL、KL5在小鼠诱导了肿瘤后的第6、8、10周的时间点上取样，小鼠肺部肿瘤面积大小如图2B所示，KP、KP5在小鼠诱导了肿瘤后的第6、8、10周的时间点上取样，小鼠肺部肿瘤面积大小如图2F所示，KL、KL5小鼠肺部肿瘤面积与小鼠肺部面积的比例如图2D所示， KP、KP5小鼠肺部肿瘤面积与小鼠肺部面积的比例如图2H所示，由图中结果可以发现，Il1f5 缺失的小鼠肿瘤生长明显大于Il1f5野生型小鼠，说明了Il1f5能够在肿瘤发生和生长过程中起到抑制肿瘤的作用。
实施例3：Il1f5蛋白可以治疗肺癌小鼠
首先，将Il1f5片段连接到phage-puro-6tag载体上得到phage-puro-6tag-Il1f5，将 phage-puro-6tag-Il1f5质粒与包装质粒共转染到HEK293细胞中，36小时后收上清，上清经过慢病毒浓缩液处理后可以得到高效价的慢病毒Lenti-Illf5。如图3A，在KP肺癌模型诱导的第 6周，通过包装Il1f5过表达的慢病毒(Lenti-Illf5)与对照(Lenti-Ctrl)麻醉滴鼻感染KP和 KP5小鼠(每只小鼠2X 106pfu溶于60ul PBS)，观察小鼠生存期，并在慢病毒感染第五周后检测小鼠肺部肿瘤以及流式细胞术分析肺部免疫细胞数目和比例。(肿瘤诱导方式，与小鼠肿瘤检测方法与实施例2中相同)
KL、KL5与其对照组小鼠肺部肿瘤面积大小对比结果图如图3B所示，KL、KL5与其对照组小鼠肺部肿瘤面积与小鼠肺部面积的比例对比结果图如图3E所示，由图可知，在 KP,KP5,KL或者KL5的肺癌小鼠中，对比感染对照组，Il1f5的高表达可以明显抑制肿瘤的生长。
KL5、KP5与其对照组小鼠的生存比例对比结果图如图3C所示；KL、KP与其对照组小鼠的生存比例对比结果图如图3D所示，由图可知，在KP,KP5,KL或者KL5的肺癌小鼠中，对比感染对照组，Il1f5的高表达可以明显抑制肿瘤的生长。
综上所述，使Il1f5的高表达可使肺癌小鼠生存时间更长，说明Il1f5能延长肺癌小鼠的生存期。
实施例4：Il1f5的缺失能够促进结肠炎/结直肠癌模型小鼠的疾病发生
本实施例使用了DSS-induced UC、AOM/DSS、VP和Apcmin/+结直肠癌小鼠模型，在DSS-induced UC、AOM/DSS实验中使用的是Il1f5-/-和野生型小鼠，在VP和APCmin/+模型中，我们先将Il1f5-/-小鼠分别与VP和Apcmin/+小鼠进行杂交，得到VP-Il1f5-/-和Apcmin/+-Il1f5-/- 小鼠。
对于DSS诱导的溃疡性结肠炎，造模方式如图4A所示，此外，造模成功后，将小鼠结直肠，盲肠和一小部分小肠取出，Il1f5表达组(Il1f5+/+)与Il1f5缺失组(Il1f5-/-)体重变化结果对比结果如图4A所示，平行摆放在标尺旁测量长度并拍照，拍照图片及Il1f5表达组(Il1f5+/+) 与Il1f5缺失组(Il1f5-/-)结肠长度对比结果如图4B所示，由实验结果可知，Il1f5缺失后，小鼠体重减轻得更为加速，结肠长度更长。随后截取小鼠靠近肛门部分的结直肠用PBS冲洗干净后进行固定、包埋、切片，通过苏木素-伊红染色(H&E)，实验结果如图4C所示，由实验结果可知，结肠部位炎症更重，通过病理学评分也可以得出同样的结论。
对于AOM/DSS诱导的炎症引起的结肠癌，造模方式如图4D所示。造模成功后，将小鼠的结直肠取出并沿中线剪开，用PBS冲洗干净后平行摆放，Il1f5表达组(Il1f5+/+)与Il1f5缺失组(Il1f5-/-)体重变化结果对比结果如图4D所示，由实验结果可知，Il1f5缺失后，小鼠体重减少得更多，另外，Il1f5表达组(Il1f5+/+)与Il1f5缺失组(Il1f5-/-)的结肠部位的肿瘤数目和肿瘤大小对比结果图如图4E所示，由实验结果可知，Il1f5缺失后，结肠部位的肿瘤数目显著增多，肿瘤大小显著变大。
对于VP小鼠模型，造模方式如图4F所示。造模成功后，将小鼠的结直肠取出并沿中线剪开，用PBS冲洗干净后平行摆放，图片及Il1f5缺失组和野生组的结肠部位的肿瘤数目和肿瘤大小对比结果图如图4G所示，由实验结果可知，Il1f5缺失后，结肠部位肿瘤的发生率显著增多，肿瘤数量明显多于野生型组，肿瘤大小显著变大。
对于自发性消化道肿瘤的Apc小鼠模型。在小鼠第20周大时处死观察小肠和结肠，将小鼠的结直肠和小肠分别取出并沿中线剪开，结肠用PBS冲洗干净后平行摆放，我们发现如图 4H,I,K,L,M所示，由实验结果可知，Il1f5缺失后，直肠和小肠部位的肿瘤数量较野生型组显著增多，肿瘤体积普遍大于野生型组，小鼠小肠用PBS冲洗干净后进行“瑞士卷样”固定、包埋、切片，通过苏木素-伊红染色(H&E)结果表明，小肠的远-近-中段的肿瘤数量和严重程度较野生型组明显增多，肿瘤发生率明显高于野生型组，生存实验结果如图4J也表明，Il1f5 缺失可以显著减短小鼠的生存期。
综合以上实验结果，我们发现了Il1f5缺失后可以显著增加小鼠肠道的炎症和倡导肿瘤的发生，并为临床药物开发提供了潜在的药物靶点。
实施例5：Il1f5蛋白可以治疗结肠炎/结直肠癌模型小鼠的疾病发生
在DSS诱导的结肠炎模型中，用2.5％DSS的饮用水处理饲喂小鼠5天，并在第一天诱导的同时即对小鼠进行腹腔注射前期纯化的IL1F5蛋白，纯化方式为将Il1f5片段和TEV片段连接到pET-30c载体后在大肠杆菌中转化，低温诱导出蛋白表达后，收菌体进行超声破碎取上清后过Ni+柱，在得到的IL1F5-TEV-His中加入TEV酶进行切割后再次过Ni+柱，穿透液体便为实验所需的IL1F5蛋白，如图5A所示，并用PBS作为对照，小鼠每天进行腹腔注射给药，直至换水后第三天，每只小鼠每次注射50ng IL1F5或者PBS,体积均为200ul)，给药方式及给药过程中实验组(IL-36Ra)与对照组(PBS)体重变化结果对比如图5B所示。治疗结束后将小鼠结直肠，盲肠和一小部分小肠取出平行摆放在标尺旁测量长度并拍照，随后截取小鼠靠近肛门部分的结直肠用PBS冲洗干净后进行固定、包埋、切片，通过苏木素-伊红染色(H&E)(实验结果如图5D所示)和病理学评分对小鼠结肠炎症程度进行判断，发现结肠部位炎症更重，拍照图片及实验组(IL-36Ra)与对照组(PBS)结肠长度对比如图5C所示。实验结果表明，对 DSS诱导的小鼠结肠炎模型进行IL1F5蛋白治疗可以显著减少小鼠结肠部位的炎症，减缓小鼠的体重损失，提高小鼠结肠的完整性。对于AOM/DSS诱导的炎症引起的结肠癌，治疗方式如图5E所示。治疗结束后，将小鼠的结直肠取出并沿中线剪开，用PBS冲洗干净后平行摆放，拍照，图片如图5F所示，实验组(IL-36RA)与对照组(PBS)的结肠部位的肿瘤数目和肿瘤大小对比结果图如图5F所示，我们发现在IL1F5蛋白治疗后，结肠部位的肿瘤数目显著减少，肿瘤大小显著变小。说明可以设计靶向Il1f5的药物来达到治疗结肠炎和结直肠癌的目的。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
序列表
<110> 武汉大学
<120> 细胞因子IL1F5在制备检测、预防和治疗肿瘤的产品中的应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 471
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atgatggttc tgagtggggc actatgcttc cgaatgaagg attcagcctt gaaggtactg 60
tatctgcaca ataaccagct gctggctgga ggactgcacg cagagaaggt cattaaaggt 120
gaggagatca gtgttgtccc aaatcgggca ctggatgcca gtctgtcccc tgtcatcctg 180
ggcgttcaag gaggaagcca gtgcctatct tgtgggacag agaaagggcc aattctgaaa 240
cttgagccag tgaacatcat ggagctctac ctcggggcca aggaatcaaa gagcttcacc 300
ttctaccggc gggatatggg tcttacctcc agcttcgaat ccgctgccta cccaggctgg 360
ttcctctgca cctcaccgga agctgaccag cctgtcaggc tcactcagat ccctgaggac 420
cccgcctggg atgctcccat cacagacttc tactttcagc agtgtgacta g 471
<210> 2
<211> 156
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Met Met Val Leu Ser Gly Ala Leu Cys Phe Arg Met Lys Asp Ser Ala
1 5 10 15
Leu Lys Val Leu Tyr Leu His Asn Asn Gln Leu Leu Ala Gly Gly Leu
20 25 30
His Ala Glu Lys Val Ile Lys Gly Glu Glu Ile Ser Val Val Pro Asn
35 40 45
Arg Ala Leu Asp Ala Ser Leu Ser Pro Val Ile Leu Gly Val Gln Gly
50 55 60
Gly Ser Gln Cys Leu Ser Cys Gly Thr Glu Lys Gly Pro Ile Leu Lys
65 70 75 80
Leu Glu Pro Val Asn Ile Met Glu Leu Tyr Leu Gly Ala Lys Glu Ser
85 90 95
Lys Ser Phe Thr Phe Tyr Arg Arg Asp Met Gly Leu Thr Ser Ser Phe
100 105 110
Glu Ser Ala Ala Tyr Pro Gly Trp Phe Leu Cys Thr Ser Pro Glu Ala
115 120 125
Asp Gln Pro Val Arg Leu Thr Gln Ile Pro Glu Asp Pro Ala Trp Asp
130 135 140
Ala Pro Ile Thr Asp Phe Tyr Phe Gln Gln Cys Asp
145 150 155

Claims (10)

1.细胞因子IL1F5在制备检测、预防和/或治疗肿瘤产品中的应用。
2.细胞因子IL1F5在制备肿瘤的检测试剂中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，所述检测试剂以细胞因子IL1F5作为是否患肿瘤的标记物。
4.细胞因子IL1F5在制备检测肿瘤的芯片或试剂盒中的应用。
5.一种有促进细胞因子IL1F5表达或提高细胞因子IL1F5的活性的功能的物质在制备抗肿瘤药物中的应用。
6.一种细胞因子IL1F5、或编码所述IL1F5的核苷酸序列、或含有编码所述IL1F5的核苷酸序列的载体、或含有编码所述IL1F5的核苷酸序列的载体导入或转染到宿主产生的重组蛋白、或过表达IL1F5的载体或病毒在制备抗肿瘤药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，编码所述IL1F5的核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示，所述载体为phage puro 6tag和pet30c，所述宿主为大肠杆菌。
8.根据权利要求1～7任一项所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括但不限于：肝癌、肺癌、鳞癌、乳腺癌、子宫颈癌、结直肠癌、腺癌，优选地，所述肿瘤为肺癌或结直肠癌。
9.根据权利要求1～7任一项所述的应用，其特征在于，所述IL1F5的氨基酸序列如SEQID NO:2所示。
10.一种试剂盒，其特征在于，包括细胞因子IL1F5。
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