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CN113008646B - 一种消除柑橘固定样品组织切片中沉淀物质的方法 - Google Patents

一种消除柑橘固定样品组织切片中沉淀物质的方法 Download PDF

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CN113008646B CN202110148546.1A CN202110148546A CN113008646B CN 113008646 B CN113008646 B CN 113008646B CN 202110148546 A CN202110148546 A CN 202110148546A CN 113008646 B CN113008646 B CN 113008646B
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Abstract

本发明公开了一种消除柑橘固定样品组织切片中沉淀物质的方法，属于植物科学技术领域。所述消除柑橘固定样品组织中沉淀物质的方法，包括如下步骤：步骤1：固定液固定；步骤2：切片；步骤3：展片；步骤4：碱性溶液处理。本发明可以有效消除柑橘固定样品组织切片中的沉淀物质，在显微镜下各组织细胞清晰可见，提高了组织细胞显微观察的清晰度和完整度，有助于形态学分类、组织细胞抗逆反应及病虫害对柑橘组织细胞的侵害等试验研究的有效开展。

Description

一种消除柑橘固定样品组织切片中沉淀物质的方法
技术领域
本发明涉及一种消除柑橘固定样品组织切片中沉淀物质的方法，属于植物科学技术领域。
背景技术
植物组织结构与细胞形态学观察是植物系统分类、遗传演化和抗逆反应等的主要研究方法之一。植物材料用固定液固定后，进行切片观察是植物组织细胞显微观察的主要方法。固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液和苦味酸盐类固定液等。目前植物常用的是FAA或卡洛氏固定液(Carnoy's Fluid)。FAA固定液又称为酒精醋酸福尔马林混合固定液、AAF或者AAF固定液，主要由甲醛(F)、乙醇(A)和乙酸(A)组成。卡洛氏固定液适用于一般植物组织和细胞的固定，有极快的渗透力。
在实际工作中，柑橘的花、果、叶等组织经FAA或卡洛氏固定液固定后会产生沉淀物质，这些沉淀物质在幼嫩的花柱、子房、叶脉、茎等组织部位上较多，在成熟的叶脉、茎等组织上较少。切片后这些沉淀物质覆盖在组织细胞上，难以进行显微观察，影响柑橘形态学分类、组织细胞的抗逆反应及病虫害对柑橘组织细胞的侵害等试验研究的开展。
鉴于此，有必要研发一种消除柑橘固定样品组织切片中沉淀物质的方法，以解决现有技术的不足。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种消除柑橘固定样品组织切片中沉淀物质的方法。本发明可以有效消除柑橘固定样品组织切片中的沉淀物质，在显微镜下各组织细胞清晰可见，提高了组织细胞显微观察的清晰度和完整度，有助于柑橘形态学分类、组织细胞的抗逆反应及病虫害对柑橘组织细胞的侵害试验等研究的有效开展。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种消除柑橘固定样品组织中沉淀物质的方法，包括如下步骤：
步骤1：固定液固定
取新鲜的柑橘材料，用固定液固定；
步骤2：切片
将步骤1固定好的柑橘材料，进行切片；
步骤3：展片
将步骤2得到的切片进行展片后，晾干；
步骤4：碱性溶液处理
将步骤3得到的晾干的切片，用碱性溶液浸润后，进行显微观察。
本发明的原理是：
本发明的发明人经过研究发现，柑橘固定样品中的沉淀物质不能被酸性溶液溶解，但可以被碱性溶液溶解。因此，本发明采用碱性溶液浸润晾干后的切片，可以消除柑橘固定样品中的沉淀物质。
本发明的消除柑橘固定样品组织切片中沉淀物质的方法的有益效果是：
1、本发明可以有效消除柑橘固定样品组织切片中的沉淀物质，在显微镜下各组织细胞清晰可见，提高了组织细胞显微观察的清晰度和完整度，有助于柑橘形态学分类、组织细胞的抗逆反应及病虫害对柑橘组织细胞的侵害等试验研究的有效开展。
2、本发明的方法简单，操作容易，成本低廉，适合规模化推广应用。
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
进一步，步骤1中，所述柑橘材料为柑橘的花柱、子房和叶脉中的任意一种。
采用上述进一步的有益效果是：本发明的方法适用于上述柑橘部位。
进一步，步骤1中，所述固定液为FAA固定液或者卡洛氏固定液。
更进一步，所述FAA固定液为分析纯甲醛、70％体积浓度的乙醇和分析纯乙酸按体积比为5:90:5的混合液，或者为分析纯甲醛、50％体积浓度的乙醇和分析纯乙酸按体积比为5:90:5的混合液。
上述FAA固定液可以市售购买，如可以购自PHYGENE，货号为PH0974。
更进一步，所述卡洛氏固定液为100％体积浓度的乙醇和分析纯乙酸按体积比为3:1的混合液。
上述卡洛氏固定液可以市售购买，如可以购自PHYGENE，货号为PH0978-EO。
进一步，步骤2中，所述切片为冷冻切片或者石蜡切片。
采用上述进一步的有益效果是：冷冻切片或石蜡切片是植物组织细胞形态观察的常规方法，用这两种切片方法在显微镜下可以清楚的观测组织细胞形态。
进一步，步骤4中，所述碱性溶液为浓度为0.05mol/L-0.5mol/L氢氧化钠溶液、浓度为0.05mol/L-0.5mol/L氢氧化钾溶液和浓度为0.05mol/L-0.5mol/L磷酸钾溶液中的任意一种。
采用上述进一步的有益效果是：本发明经过试验发现，采用上述碱性溶液及其相应的浓度配比，消除柑橘固定样品组织切片中沉淀物质的效果更好。浓度<0.05mol/L时，不能有效的溶解沉淀物质；浓度>0.5mol/L时，溶质易结晶析出，影响显微观察。
进一步，步骤4中，所述浸润的时间为0.5min-2.0min。
采用上述进一步的有益效果是：采用上述参数的浸润时间，消除柑橘固定样品组织切片中沉淀物质的效果更好。
附图说明
图1为本发明的实施例1中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.05mol/L的氢氧化钠溶液浸润后，进行荧光显微观察图，比例尺为200μm。
图2为本发明的实施例1中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.05mol/L的氢氧化钠溶液浸润后，进行普通光学显微观察图，比例尺为200μm。
图3为本发明的实施例2中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液浸润后，进行荧光显微观察图，比例尺为200μm。
图4为本发明的实施例2中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液浸润后，进行普通光学显微观察图，比例尺为200μm。
图5为本发明的实施例3中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.5mol/L的氢氧化钠溶液浸润后，进行荧光显微观察图，比例尺为200μm。
图6为本发明的实施例3中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.5mol/L的氢氧化钠溶液浸润后，进行普通光学显微观察图，比例尺为200μm。
图7为本发明的实施例4中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.05mol/L的氢氧化钾溶液浸润后，进行荧光显微观察图，比例尺为200μm。
图8为本发明的实施例4中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.05mol/L的氢氧化钾溶液浸润后，进行普通光学显微观察图，比例尺为200μm。
图9为本发明的实施例5中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.1mol/L的氢氧化钾溶液浸润后，进行荧光显微观察图，比例尺为200μm。
图10为本发明的实施例5中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.1mol/L的氢氧化钾溶液浸润后，进行普通光学显微观察图，比例尺为200μm。
图11为本发明的实施例6中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.5mol/L的氢氧化钾溶液浸润后，进行荧光显微观察图，比例尺为200μm。
图12为本发明的实施例6中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.5mol/L的氢氧化钾溶液浸润后，进行普通光学显微观察图，比例尺为200μm。
图13为本发明的实施例7中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.05mol/L的磷酸钾溶液浸润后，进行荧光显微观察图，比例尺为200μm。
图14为本发明的实施例7中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.05mol/L的磷酸钾溶液浸润后，进行普通光学显微观察图，比例尺为200μm。
图15为本发明的实施例8中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.1mol/L的磷酸钾溶液浸润后，进行荧光显微观察图，比例尺为200μm。
图16为本发明的实施例8中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.1mol/L的磷酸钾溶液浸润后，进行普通光学显微观察图，比例尺为200μm。
图17为本发明的实施例9中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.5mol/L的磷酸钾溶液浸润后，进行荧光显微观察图，比例尺为200μm。
图18为本发明的实施例9中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.5mol/L的磷酸钾溶液浸润后，进行普通光学显微观察图，比例尺为200μm。
图19为本发明的实施例10中，晾干的柑橘子房切片用浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液浸润后，进行荧光显微观察图，比例尺为200μm。
图20为本发明的实施例10中，晾干的柑橘子房切片用浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液浸润后，进行普通光学显微观察图，比例尺为200μm。
图21为本发明的实施例11中，晾干的柑橘叶脉切片用浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液浸润后，进行荧光显微观察图，比例尺为100μm。
图22为本发明的实施例11中，晾干的柑橘叶脉切片用浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液浸润后，进行普通光学显微观察图，比例尺为100μm。
图23为本发明的实验例1中，柑橘花柱冷冻切片后，直接进行荧光显微观察图，比例尺为200μm。
图24为本发明的实验例1中，柑橘花柱冷冻切片后，直接进行普通光学显微观察图，比例尺为200μm。
图25为本发明的实验例2中，柑橘子房冷冻切片后，直接进行荧光显微观察图，比例尺为200μm。
图26为本发明的实验例2中，柑橘子房冷冻切片后，直接进行普通光学显微观察图，比例尺为200μm。
图27为本发明的实验例3中，柑橘叶脉冷冻切片后，直接进行荧光显微观察图，比例尺为100μm。
图28为本发明的实验例3中，柑橘叶脉冷冻切片后，直接进行普通光学显微观察图，比例尺为100μm。
图29为本发明的实验例4中，晾干的柑橘花柱切片用1mol/L硫酸溶液浸润后，进行荧光显微观察图，比例尺为200μm。
图30为本发明的实验例4中，晾干的柑橘花柱切片用1mol/L硫酸溶液浸润后，进行普通光学显微观察图，比例尺为200μm。
图31为本发明的实验例5中，晾干的柑橘花柱切片用1mol/L盐酸溶液浸润后，进行荧光显微观察图，比例尺为200μm。
图32为本发明的实验例5中，晾干的柑橘花柱切片用1mol/L盐酸溶液浸润后，进行普通光学显微观察图，比例尺为200μm。
图33为本发明的实验例6中，晾干的柑橘花柱切片用1mol/L磷酸二氢钾溶液浸润后，进行荧光显微观察图，比例尺为200μm。
图34为本发明的实验例6中，晾干的柑橘花柱切片用1mol/L磷酸二氢钾溶液浸润后，进行普通光学显微观察图，比例尺为200μm。
图35为本发明的实验例7中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.01mol/L的氢氧化钠溶液浸润后，进行荧光显微观察图，比例尺为200μm。
图36为本发明的实验例7中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.01mol/L的氢氧化钠溶液浸润后，进行普通光学显微观察图，比例尺为200μm。
图37为本发明的实验例8中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.01mol/L的氢氧化钾溶液浸润后，进行荧光显微观察图，比例尺为200μm。
图38为本发明的实验例8中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.01mol/L的氢氧化钾溶液浸润后，进行普通光学显微观察图，比例尺为200μm。
图39为本发明的实验例9中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.01mol/L的磷酸钾溶液浸润后，进行荧光显微观察图，比例尺为200μm。
图40为本发明的实验例9中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为0.01mol/L的磷酸钾溶液浸润后，进行普通光学显微观察图，比例尺为200μm。
图41为本发明的实验例10中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液浸润后，进行荧光显微观察图，比例尺为200μm。
图42为本发明的实验例10中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液浸润后，进行普通光学显微观察图，比例尺为200μm。
图43为本发明的实验例11中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为1mol/L的氢氧化钾溶液浸润后，进行荧光显微观察图，比例尺为200μm。
图44为本发明的实验例11中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为1mol/L的氢氧化钾溶液浸润后，进行普通光学显微观察图，比例尺为200μm。
图45为本发明的实验例12中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为1mol/L的磷酸钾溶液浸润后，进行荧光显微观察图，比例尺为200μm。
图46为本发明的实验例12中，晾干的柑橘花柱切片用浓度为1mol/L的磷酸钾溶液浸润后，进行普通光学显微观察图，比例尺为200μm。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1
本实施例的消除柑橘固定样品组织中沉淀物质的方法，包括如下步骤：
步骤1：固定液固定
取新鲜的柑橘花柱，用FAA固定液固定，所述FAA固定液为分析纯甲醛、70％体积浓度的乙醇和分析纯乙酸按体积比为5:90:5的混合液。
步骤2：切片
将步骤1固定好的柑橘材料，进行冷冻切片。
步骤3：展片
将步骤2得到的切片进行展片后，晾干。
步骤4：碱性溶液处理
将步骤3得到的晾干的切片，用浓度为0.05mol/L氢氧化钠溶液浸润2min后，分别进行荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图1和图2所示。
实施例2
本实施例跟实施例1不同的是，步骤1中，固定液为卡洛氏固定液；步骤2中，切片为石蜡切片；步骤4中，碱性溶液为浓度为0.1mol/L氢氧化钠溶液，浸润时间为1min。其余均相同。所述卡洛氏固定液为100％体积浓度的乙醇和分析纯乙酸按体积比为3:1的混合液。荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图3和图4所示。
实施例3
本实施例跟实施例1不同的是，步骤1中，固定液为FAA固定液；步骤4中，碱性溶液为浓度为0.5mol/L氢氧化钠溶液，浸润时间为0.5min。其余均相同。所述FAA固定液为分析纯甲醛、50％体积浓度的乙醇和分析纯乙酸按体积比为5:90:5的混合液。荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图5和图6所示。
实施例4
本实施例跟实施例1不同的是，步骤4中，碱性溶液为浓度为0.05mol/L氢氧化钾溶液。其余均相同。荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图7和图8所示。
实施例5
本实施例跟实施例1不同的是，步骤4中，碱性溶液为浓度为0.1mol/L氢氧化钾溶液。其余均相同。荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图9和图10所示。
实施例6
本实施例跟实施例1不同的是，步骤4中，碱性溶液为浓度为0.5mol/L氢氧化钾溶液。其余均相同。荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图11和图12所示。
实施例7
本实施例跟实施例1不同的是，步骤4中，碱性溶液为浓度为0.05mol/L磷酸钾溶液。其余均相同。荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图13和图14所示。
实施例8
本实施例跟实施例1不同的是，步骤4中，碱性溶液为浓度为0.1mol/L磷酸钾溶液。其余均相同。荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图15和图16所示。
实施例9
本实施例跟实施例1不同的是，步骤4中，碱性溶液为浓度为0.5mol/L磷酸钾溶液。其余均相同。荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图17和图18所示。
实施例10
本实施例跟实施例1不同的是，步骤1中，采用新鲜子房为材料。其余均相同。荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图19和图20所示。
实施例11
本实施例跟实施例1不同的是，步骤1中，采用新鲜叶脉为材料。其余均相同。荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图21和图22所示。
由实施例1-实施例11可知，经过碱性溶液浸润后，柑橘花柱、子房和叶脉上的沉淀物质均得到了有效溶解，在显微镜下各组织细胞清晰可见，提高了组织细胞显微观察的清晰度和完整度，有助于柑橘形态学分类、组织细胞的抗逆反应及病虫害对柑橘组织细胞的侵害等试验研究的有效开展。
实验例1
本实验例跟实施例1不同的是，步骤4中，晾干的切片不采用碱性溶液浸润，而是直接进行显微观察，其余均相同。荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图23和图24所示。
实验例2
本实验例跟实施例10不同的是，步骤4中，晾干的切片不采用碱性溶液浸润，而是直接进行显微观察，其余均相同。荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图25和图26所示。
实验例3
本实验例跟实施例11不同的是，步骤4中，晾干的切片不采用碱性溶液浸润，而是直接进行显微观察，其余均相同。荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图27和图28所示。
由实验例1-实验例3可知，采用现有技术的植物固定样品组织的方法，柑橘花柱、子房和叶脉等组织部位经固定液固定后均产生沉淀物质，难以进行显微观察，影响柑橘形态学分类、组织细胞的抗逆反应及病虫害对柑橘组织细胞的侵害等试验研究的开展。
实验例4
本实验例跟实施例1不同的是，步骤4中，采用浓度为1mol/L硫酸溶液替代浓度为0.05mol/L氢氧化钠溶液,其余均相同。荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图29和图30所示。
实验例5
本实验例跟实施例1不同的是，步骤4中，采用浓度为1mol/L盐酸溶液替代浓度为0.05mol/L氢氧化钠溶液,其余均相同。荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图31和图32所示。
实验例6
本实验例跟实施例1不同的是，步骤4中，采用浓度为1mol/L磷酸二氢钾溶液替代浓度为0.05mol/L氢氧化钠溶液,其余均相同。荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图33和图34所示。
由实验例4-实验例6可知，采用酸性溶液浸润晾干的切片，均不能溶解沉淀物质。
实验例7
本实验例跟实施例1不同的是，步骤4中，采用浓度为0.01mol/L氢氧化钠溶液替代浓度为0.05mol/L氢氧化钠溶液,其余均相同。荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图35和图36所示。
实验例8
本实验例跟实施例4不同的是，步骤4中，采用浓度为0.01mol/L氢氧化钾溶液替代浓度为0.05mol/L氢氧化钾溶液,其余均相同。荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图37和图38所示。
实验例9
本实验例跟实施例7不同的是，步骤4中，采用浓度为0.01mol/L磷酸钾溶液替代浓度为0.05mol/L磷酸钾溶液,其余均相同。荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图39和图40所示。
由实验例7-实验例9可知，当碱性溶液的浓度为0.01mol/L时，不能溶解沉淀物质。
实验例10
本实验例跟实施例1不同的是，步骤4中，采用浓度为1mol/L氢氧化钠溶液替代浓度为0.05mol/L氢氧化钠溶液,其余均相同。荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图41和图42所示。
实验例11
本实验例跟实施例4不同的是，步骤4中，采用浓度为1mol/L氢氧化钾溶液替代浓度为0.05mol/L氢氧化钾溶液,其余均相同。荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图43和图44所示。
实验例12
本实验例跟实施例7不同的是，步骤4中，采用浓度为1mol/L的磷酸钾溶液替代浓度为0.05mol/L的磷酸钾溶液,其余均相同。荧光显微观察图和普通光学显微观察图，分别如图45和图46所示。
由实验例10-实验例12可知，当碱性溶液的浓度为1mol/L时，切片干燥后碱性溶质结晶析出，覆盖在切片表面，影响显微观察。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种消除柑橘固定样品组织中沉淀物质的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：固定液固定
取新鲜的柑橘材料，用固定液固定；
步骤2：切片
将步骤1固定好的柑橘材料，进行切片；
步骤3：展片
将步骤2得到的切片进行展片后，晾干；
步骤4：碱性溶液处理
将步骤3得到的晾干的切片，用碱性溶液浸润后，进行显微观察；所述碱性溶液的作用是消除通过固定液固定后柑橘样品组织中产生的影响显微观察的沉淀物质；
步骤1中，所述柑橘材料为柑橘的花柱、子房和叶脉中的任意一种；所述固定液为FAA固定液或者卡洛氏固定液；
步骤2中，所述切片为冷冻切片或者石蜡切片；
步骤4中，所述碱性溶液为浓度为0.05mol/L-0.5mol/L氢氧化钠溶液、浓度为0.05mol/L-0.5mol/L氢氧化钾溶液和浓度为0.05mol/L-0.5mol/L磷酸钾溶液中的任意一种；
步骤4中，所述浸润的时间为0.5min-2.0min。
2.根据权利要求1所述的消除柑橘固定样品组织中沉淀物质的方法，其特征在于，所述FAA固定液为分析纯甲醛、70%体积浓度的乙醇和分析纯乙酸按体积比为5:90:5的混合液，或者为分析纯甲醛、50%体积浓度的乙醇和分析纯乙酸按体积比为5:90:5的混合液。
3.根据权利要求1所述的消除柑橘固定样品组织中沉淀物质的方法，其特征在于，所述卡洛氏固定液为100%体积浓度的乙醇和分析纯乙酸按体积比为3:1的混合液。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103323441A (zh) * 2013-06-14 2013-09-25 中南林业科技大学 一种快速、高效观察山茶属植物花粉管的荧光显微方法
CN104132940A (zh) * 2014-06-30 2014-11-05 上海市园林科学研究所 一种便捷观察兰科植物菌根显微结构的方法
CN104792806A (zh) * 2015-04-22 2015-07-22 山东省农业科学院作物研究所 一种植物花粉管细胞钙离子超微结构定位方法
CN106769298A (zh) * 2016-12-12 2017-05-31 中国科学院植物研究所 一种植物组织的显微观察方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103323441A (zh) * 2013-06-14 2013-09-25 中南林业科技大学 一种快速、高效观察山茶属植物花粉管的荧光显微方法
CN104132940A (zh) * 2014-06-30 2014-11-05 上海市园林科学研究所 一种便捷观察兰科植物菌根显微结构的方法
CN104792806A (zh) * 2015-04-22 2015-07-22 山东省农业科学院作物研究所 一种植物花粉管细胞钙离子超微结构定位方法
CN106769298A (zh) * 2016-12-12 2017-05-31 中国科学院植物研究所 一种植物组织的显微观察方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
周建理 等.芸香科Citrus属部分药用植物中果皮细胞的显微观察.《中国中药杂志》.2001,第26卷(第12期),第816-818页. *

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