CN112754717A - 一种乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法，该方法包括以下步骤：选用小鼠，并将其麻醉，剔除所述小鼠大腿外侧毛发，并将剔除区域消毒，沿股骨纵轴切开所述小鼠皮肤，钝性分离皮下筋膜，并暴露股骨远端，破坏所述小鼠股骨连续性，形成不完全骨折，将肿瘤细胞注射于所述小鼠骨折处，并迅速封闭肌间，冲洗所述小鼠皮肤操作区域，予以腹腔注射能量液，并将所述小鼠置于复苏箱中。本发明提供的乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法，通过予以不连续骨折环境，模拟溶骨状态的骨肿瘤侵袭，缩短成瘤时间，而且可以破坏骨髓免疫环境，从而使肿瘤细胞免疫逃脱，躲避免疫系统的攻击形成肿瘤，提高瘤体存活率，提升造模成功率。
Description
技术领域
本发明涉及鼠模型造模技术领域，尤其涉及一种乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法。
背景技术
乳腺癌几乎能扩散至身体的任何区域。最常见的位点是淋巴结、肺、骨和肝。目前，有关乳腺癌研究主要是以啮齿类动物建立的乳腺癌模型，在临床医学乳腺癌骨转移领域，常常使用实验动物制作乳腺癌骨转移模型，现有的疾病模型建造大致分为三种方式：第一种便是移位种植，即将肿瘤细胞种植在皮下或肌组织，这种方法因为缺乏与临床病灶相同的生理环境而缺乏一定的说服力；第二种是注射在实验动物乳腺区域，等待其自发的骨转移，如中国发明专利CN201910829779.0公开了一种乳腺癌骨转移小鼠模型造模方法，即采用乳腺注射的方法，但此种方法时间较长，且肺转移现象较骨转移明显；第三种是心脏注射，利用循环系统模拟癌细胞转移，此方法常常造成小鼠多处全身转移，造成肺部/脊柱/长骨多发转移，荷瘤负担较重，引起实验动物存活率较低。
目前广泛采用原位骨种植造模，即在长骨处种植，此方法也常常分为两类，一种是皮外穿刺，经膝关节向下刺入胫骨骨髓腔，注射癌细胞；另一种是麻醉后打开股骨外软组织，使用12G针头穿刺股骨近膝关节干骺端，后注入癌细胞。此两种方法常因小鼠自身免疫系统而出现造模成功率较低的现象，且操作难度较高。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的问题，而提出的一种乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法，包括以下步骤：
S1:选用小鼠，并将其麻醉；
S2:剔除所述小鼠大腿外侧毛发，并将剔除区域消毒；
S3:沿股骨纵轴切开所述小鼠皮肤，钝性分离皮下筋膜，并暴露股骨远端；
S4:破坏所述小鼠股骨连续性，形成不完全骨折；
S5:将肿瘤细胞注射于所述小鼠骨折处，并迅速封闭肌间隙；
S6:冲洗所述小鼠皮肤操作区域，予以腹腔注射能量液，并将所述小鼠置于复苏箱中。
优选的是，所述小鼠为20～25g雌性小鼠，且对其给予1％氯胺酮溶液腹腔注射麻醉，麻醉量为4ml/kg。
优选的是，所述剔除区域为矩形，且其长为1～1.5cm，宽为1～1.5cm，所述剔除区域与所述小鼠股骨重合。
优选的是，所述破坏股骨连续性的方法为：利用齿镊夹持股骨近端1/3至3/5范围内，眼科剪夹持股骨远端1/4至2/5处，并施力。
优选的是，所述破坏股骨连续性的方法为：利用齿镊夹持股骨近端1/3处，眼科剪夹持股骨远端1/4处，并施力。
优选的是，所述小鼠不完全骨折时，其对应股骨角位移为10°～15°。
优选的是，所述肿瘤细胞为0.1mlPBS悬浮的1～5*107肿瘤细胞培养液。
优选的是，所述能量液为0.5ml～0.8ml、37℃、5％的葡萄糖水溶液。
优选的是，沿股骨纵轴切开所述小鼠皮肤的长度为8～10mm。
本发明具有以下有益效果：
1、本发明通过予以不连续骨折环境，模拟溶骨状态的骨肿瘤侵袭，可以有效缩短成瘤时间；
2、本发明通过予以骨折不连续性环境，破坏骨髓免疫环境，从而使肿瘤细胞免疫逃脱，躲避免疫系统的攻击形成肿瘤，提高瘤体成活率，提升造模成功率。
附图说明
图1是本发明所述的乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法的步骤流程图。
图2是本发明所述的疾病模型建造方法与其他造模方法的造模时间对比图。
图3是本发明所述的疾病模型建造方法与其他造模方法的成瘤时间对比图。
图4是本发明所述的疾病模型建造方法与其他造模方法的术后三天瘤体存活率对比图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
本发明可以有许多不同的形式实施，而不应该理解为限于在此阐述的实施例，相反，提供这些实施例，使得本公开将是彻底和完整的。在附图中，为了清晰起见，会夸大结构和区域的尺寸和相对尺寸。
如图1-4所示，本发明提供一种乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法，包括以下步骤：
S1:选用小鼠，并将其麻醉；
S2:剔除所述小鼠大腿外侧毛发，并将剔除区域消毒；
S3:沿股骨纵轴切开所述小鼠皮肤，钝性分离皮下筋膜，并暴露股骨远端；
S4:破坏所述小鼠股骨连续性，形成不完全骨折；
S5:将肿瘤细胞注射于所述小鼠骨折处，并迅速封闭肌间隙；
S6:冲洗所述小鼠皮肤操作区域，予以腹腔注射能量液，并将所述小鼠置于复苏箱中。
下面将结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
本实施例中的乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法包括以下步骤：
S1:选用20g雌性小鼠，给予1％氯胺酮腹腔注射，麻醉量为4ml/kg；
S2:麻醉完善后移至无菌操作台，侧卧位固定，沿股骨纵轴方向在小鼠大腿外侧剔除1cm*1cm左右的毛发，剔除区域与股骨重合，使用1％活力碘消毒3遍，并用无菌纱布擦拭干净；
S3:沿股骨纵轴切开皮肤0.8cm，钝性分离皮下筋膜，在外侧股直肌与半腱肌之间的肌间隙用小止血钳钝性分离，暴露股骨远端(分离时注意保护位于股骨的内侧股动脉)；
S4:使用齿镊夹持股骨近端1/3处，眼科剪夹持在股骨远端1/4处并施力破坏骨折连续性，形成不完全骨折，并作成角位移约10°左右；
S5:将0.1mlPBS悬浮的1～5*107肿瘤细胞注射于骨折处，迅速封闭肌间隙；缝合筋膜及外层皮肤；
S6:用抗生素PBS溶液冲洗皮肤操作区域，予以腹腔注射0.5ml、37℃、5％葡萄糖水溶液，补充能量，并置于复苏箱中以提高存活率；
如图2-4，实验过程中将本方案中的乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法(以下称开放穿刺股骨造模方式)与常见的乳腺种植、血液循环、皮下穿刺胫骨和穿刺注射股骨等方式进行对比，比较五种不同造模方式的造模时间、成瘤时间以及瘤体术后三天存活率，将实验数据绘制成图2-4，可以看出，采用开放穿刺股骨造模方式，可以有效缩短造模时间和成瘤时间，提高瘤体成活率，从而进一步提高造模成功率。
实施例2
本实施例中的乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法包括以下步骤：
S1:选用20g雌性小鼠，给予1％氯胺酮腹腔注射，麻醉量为4ml/kg；
S2:麻醉完善后移至无菌操作台，侧卧位固定，沿股骨纵轴方向在小鼠大腿外侧剔除1cm*1cm左右的毛发，剔除区域与股骨重合，使用1％活力碘消毒3遍，并用无菌纱布擦拭干净；
S3:沿股骨纵轴切开皮肤0.8cm，钝性分离皮下筋膜，在外侧股直肌与半腱肌之间的肌间隙用小止血钳钝性分离，暴露股骨远端(分离时注意保护位于股骨的内侧股动脉)；
S4:使用齿镊夹持股骨近端1/3处，眼科剪夹持在股骨远端2/5处并施力破坏骨折连续性，形成不完全骨折，并作成角位移约10°左右；
S5:将0.1mlPBS悬浮的1～5*107肿瘤细胞注射于骨折处，迅速封闭肌间隙；缝合筋膜及外层皮肤；
S6:用抗生素PBS溶液冲洗皮肤操作区域，予以腹腔注射0.5ml、37℃、5％葡萄糖水溶液，补充能量，并置于复苏箱中以提高存活率。
实施例2
本实施例中的乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法包括以下步骤：
S1:选用25g雌性小鼠，给予1％氯胺酮腹腔注射，麻醉量为4ml/kg；
S2:麻醉完善后移至无菌操作台，侧卧位固定，沿股骨纵轴方向在小鼠大腿外侧剔除1cm*1cm左右的毛发，剔除区域与股骨重合，使用1％活力碘消毒3遍，并用无菌纱布擦拭干净；
S3:沿股骨纵轴切开皮肤0.8cm，钝性分离皮下筋膜，在外侧股直肌与半腱肌之间的肌间隙用小止血钳钝性分离，暴露股骨远端(分离时注意保护位于股骨的内侧股动脉)；
S4:使用齿镊夹持股骨近端1/3处，眼科剪夹持在股骨远端2/5处并施力破坏骨折连续性，形成不完全骨折，并作成角位移约12°左右；
S5:将0.1mlPBS悬浮的1～5*107肿瘤细胞注射于骨折处，迅速封闭肌间隙；缝合筋膜及外层皮肤；
S6:用抗生素PBS溶液冲洗皮肤操作区域，予以腹腔注射0.5ml、37℃、5％葡萄糖水溶液，补充能量，并置于复苏箱中以提高存活率。
实施例3
本实施例中的乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法包括以下步骤：
S1:选用25g雌性小鼠，给予1％氯胺酮腹腔注射，麻醉量为4ml/kg；
S2:麻醉完善后移至无菌操作台，侧卧位固定，沿股骨纵轴方向在小鼠大腿外侧剔除1.5cm*1.5cm左右的毛发，剔除区域与股骨重合，使用1％活力碘消毒3遍，并用无菌纱布擦拭干净；
S3:沿股骨纵轴切开皮肤0.8cm，钝性分离皮下筋膜，在外侧股直肌与半腱肌之间的肌间隙用小止血钳钝性分离，暴露股骨远端(分离时注意保护位于股骨的内侧股动脉)；
S4:使用齿镊夹持股骨近端1/3处，眼科剪夹持在股骨远端1/4处并施力破坏骨折连续性，形成不完全骨折，并作成角位移约15°左右；
S5:将0.1mlPBS悬浮的1～5*107肿瘤细胞注射于骨折处，迅速封闭肌间隙；缝合筋膜及外层皮肤；
S6:用抗生素PBS溶液冲洗皮肤操作区域，予以腹腔注射0.5ml、37℃、5％葡萄糖水溶液，补充能量，并置于复苏箱中以提高存活率。
实施例4
本实施例中的乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法包括以下步骤：
S1:选用25g雌性小鼠，给予1％氯胺酮腹腔注射，麻醉量为4ml/kg；
S2:麻醉完善后移至无菌操作台，侧卧位固定，沿股骨纵轴方向在小鼠大腿外侧剔除1.5cm*1.5cm左右的毛发，剔除区域与股骨重合，使用1％活力碘消毒3遍，并用无菌纱布擦拭干净；
S3:沿股骨纵轴切开皮肤1cm，钝性分离皮下筋膜，在外侧股直肌与半腱肌之间的肌间隙用小止血钳钝性分离，暴露股骨远端(分离时注意保护位于股骨的内侧股动脉)；
S4:使用齿镊夹持股骨近端1/3处，眼科剪夹持在股骨远端2/5处并施力破坏骨折连续性，形成不完全骨折，并作成角位移约15°左右；
S5:将0.1mlPBS悬浮的1～5*107肿瘤细胞注射于骨折处，迅速封闭肌间隙；缝合筋膜及外层皮肤；
S6:用抗生素PBS溶液冲洗皮肤操作区域，予以腹腔注射0.5ml、37℃、5％葡萄糖水溶液，补充能量，并置于复苏箱中以提高存活率。
实施例5
本实施例中的乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法包括以下步骤：
S1:选用25g雌性小鼠，给予1％氯胺酮腹腔注射，麻醉量为4ml/kg；
S2:麻醉完善后移至无菌操作台，侧卧位固定，沿股骨纵轴方向在小鼠大腿外侧剔除1.5cm*1.5cm左右的毛发，剔除区域与股骨重合，使用1％活力碘消毒3遍，并用无菌纱布擦拭干净；
S3:沿股骨纵轴切开皮肤1cm，钝性分离皮下筋膜，在外侧股直肌与半腱肌之间的肌间隙用小止血钳钝性分离，暴露股骨远端(分离时注意保护位于股骨的内侧股动脉)；
S4:使用齿镊夹持股骨近端1/3处，眼科剪夹持在股骨远端2/5处并施力破坏骨折连续性，形成不完全骨折，并作成角位移约10°左右；
S5:将0.1mlPBS悬浮的1～5*107肿瘤细胞注射于骨折处，迅速封闭肌间隙；缝合筋膜及外层皮肤；
S6:用抗生素PBS溶液冲洗皮肤操作区域，予以腹腔注射0.8ml、37℃、5％葡萄糖水溶液，补充能量，并置于复苏箱中以提高存活率。
实施例6
本实施例中的乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法包括以下步骤：
S1:选用20g雌性小鼠，给予1％氯胺酮腹腔注射，麻醉量为4ml/kg；
S2:麻醉完善后移至无菌操作台，侧卧位固定，沿股骨纵轴方向在小鼠大腿外侧剔除1.5cm*1.5cm左右的毛发，剔除区域与股骨重合，使用1％活力碘消毒3遍，并用无菌纱布擦拭干净；
S3:沿股骨纵轴切开皮肤1cm，钝性分离皮下筋膜，在外侧股直肌与半腱肌之间的肌间隙用小止血钳钝性分离，暴露股骨远端(分离时注意保护位于股骨的内侧股动脉)；
S4:使用齿镊夹持股骨近端1/3处，眼科剪夹持在股骨远端1/4处并施力破坏骨折连续性，形成不完全骨折，并作成角位移约10°左右；
S5:将0.1mlPBS悬浮的1～5*107肿瘤细胞注射于骨折处，迅速封闭肌间隙；缝合筋膜及外层皮肤；
S6:用抗生素PBS溶液冲洗皮肤操作区域，予以腹腔注射0.8ml、37℃、5％葡萄糖水溶液，补充能量，并置于复苏箱中以提高存活率。
实施例7
本实施例中的乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法包括以下步骤：
S1:选用20g雌性小鼠，给予1％氯胺酮腹腔注射，麻醉量为4ml/kg；
S2:麻醉完善后移至无菌操作台，侧卧位固定，沿股骨纵轴方向在小鼠大腿外侧剔除1.5cm*1.5cm左右的毛发，剔除区域与股骨重合，使用1％活力碘消毒3遍，并用无菌纱布擦拭干净；
S3:沿股骨纵轴切开皮肤1cm，钝性分离皮下筋膜，在外侧股直肌与半腱肌之间的肌间隙用小止血钳钝性分离，暴露股骨远端(分离时注意保护位于股骨的内侧股动脉)；
S4:使用齿镊夹持股骨近端1/3处，眼科剪夹持在股骨远端1/4处并施力破坏骨折连续性，形成不完全骨折，并作成角位移约10°左右；
S5:将0.1mlPBS悬浮的1～5*107肿瘤细胞注射于骨折处，迅速封闭肌间隙；缝合筋膜及外层皮肤；
S6:用抗生素PBS溶液冲洗皮肤操作区域，予以腹腔注射0.6ml、37℃、5％葡萄糖水溶液，补充能量，并置于复苏箱中以提高存活率。
实施例8
本实施例中的乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法包括以下步骤：
S1:选用20g雌性小鼠，给予1％氯胺酮腹腔注射，麻醉量为4ml/kg；
S2:麻醉完善后移至无菌操作台，侧卧位固定，沿股骨纵轴方向在小鼠大腿外侧剔除1.5cm*1.0cm左右的毛发，剔除区域与股骨重合，使用1％活力碘消毒3遍，并用无菌纱布擦拭干净；
S3:沿股骨纵轴切开皮肤1cm，钝性分离皮下筋膜，在外侧股直肌与半腱肌之间的肌间隙用小止血钳钝性分离，暴露股骨远端(分离时注意保护位于股骨的内侧股动脉)；
S4:使用齿镊夹持股骨近端1/3处，眼科剪夹持在股骨远端1/4处并施力破坏骨折连续性，形成不完全骨折，并作成角位移约10°左右；
S5:将0.1mlPBS悬浮的1～5*107肿瘤细胞注射于骨折处，迅速封闭肌间隙；缝合筋膜及外层皮肤；
S6:用抗生素PBS溶液冲洗皮肤操作区域，予以腹腔注射0.5ml、37℃、5％葡萄糖水溶液，补充能量，并置于复苏箱中以提高存活率。
实施例9
本实施例中的乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法包括以下步骤：
S1:选用20g雌性小鼠，给予1％氯胺酮腹腔注射，麻醉量为4ml/kg；
S2:麻醉完善后移至无菌操作台，侧卧位固定，沿股骨纵轴方向在小鼠大腿外侧剔除1.5cm*1.0cm左右的毛发，剔除区域与股骨重合，使用1％活力碘消毒3遍，并用无菌纱布擦拭干净；
S3:沿股骨纵轴切开皮肤1cm，钝性分离皮下筋膜，在外侧股直肌与半腱肌之间的肌间隙用小止血钳钝性分离，暴露股骨远端(分离时注意保护位于股骨的内侧股动脉)；
S4:使用齿镊夹持股骨近端1/3处，眼科剪夹持在股骨远端1/4处并施力破坏骨折连续性，形成不完全骨折，并作成角位移约10°左右；
S5:将0.1mlPBS悬浮的1～5*107肿瘤细胞注射于骨折处，迅速封闭肌间隙；缝合筋膜及外层皮肤；
S6:用抗生素PBS溶液冲洗皮肤操作区域，予以腹腔注射0.8ml、37℃、5％葡萄糖水溶液，补充能量，并置于复苏箱中以提高存活率。
最终摸到小鼠有乳腺癌肿瘤肿块且已经发现骨头上有肿瘤肿块，即得乳腺癌骨转移小鼠模型。
本发明通过原位种植的方式，较其他方法更符合生理病理环境，说服力较高；而且在直视下完成造模工作，操作便捷，可以有效提升造模成功率；通过予以不连续骨折环境，模拟溶骨状态的骨肿瘤侵袭，缩短成瘤时间和造模时间，提升造模成功率；通过骨折不连续性环境，破坏骨髓免疫环境，提高瘤体成活率。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。
Claims (9)
1.一种乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1:选用小鼠，并将其麻醉；
S2:剔除所述小鼠大腿外侧毛发，并将剔除区域消毒；
S3:沿股骨纵轴切开所述小鼠皮肤，钝性分离皮下筋膜，并暴露股骨远端；
S4:破坏所述小鼠股骨连续性，形成不完全骨折；
S5:将肿瘤细胞注射于所述小鼠骨折处，并迅速封闭肌间隙；
S6:冲洗所述小鼠皮肤操作区域，予以腹腔注射能量液，并将所述小鼠置于复苏箱中。
2.根据权利要求1所述的一种乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法，其特征在于，所述小鼠为20～25g雌性小鼠，且对其给予1％氯胺酮溶液腹腔注射麻醉，麻醉量为4ml/kg。
3.根据权利要求1或2所述的一种乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法，其特征在于，所述剔除区域为矩形，且其长为1～1.5cm，宽为1～1.5cm，所述剔除区域与所述小鼠股骨重合。
4.根据权利要求1所述的一种乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法，其特征在于，所述破坏股骨连续性的方法为：利用齿镊夹持股骨近端1/3至3/5范围内，眼科剪夹持股骨远端1/4至2/5处，并施力。
5.根据权利要求4所述的一种乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法，其特征在于，所述破坏股骨连续性的方法为：利用齿镊夹持股骨近端1/3处，眼科剪夹持股骨远端1/4处，并施力。
6.根据权利要求1所述的一种乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法，其特征在于，所述小鼠不完全骨折时，其对应股骨角位移为10°～15°。
7.根据权利要求1所述的一种乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法，其特征在于，所述肿瘤细胞为0.1mlPBS悬浮的1～5*107肿瘤细胞培养液。
8.根据权利要求1所述的一种乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法，其特征在于，所述能量液为0.5ml～0.8ml、37℃、5％的葡萄糖水溶液。
9.根据权利要求1所述的一种乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法，其特征在于，沿股骨纵轴切开所述小鼠皮肤的长度为8～10mm。
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| CN202110047286.9A CN112754717A (zh) | 2021-01-14 | 2021-01-14 | 一种乳腺癌骨转移实验鼠疾病模型建造方法 |
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| CN (1) | CN112754717A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113796349A (zh) * | 2021-08-06 | 2021-12-17 | 南通大学 | 一种乳腺癌侵袭神经及诱发疼痛的动物模型及其制备方法 |
-
2021
- 2021-01-14 CN CN202110047286.9A patent/CN112754717A/zh active Pending
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113796349A (zh) * | 2021-08-06 | 2021-12-17 | 南通大学 | 一种乳腺癌侵袭神经及诱发疼痛的动物模型及其制备方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210507 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |