CN112724192B - 一种采用娑罗子提取制备七叶皂苷钠的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种采用娑罗子提取制备七叶皂苷钠的方法。该制备方法包括：将娑罗子原料进行粉碎破壁；粉碎破壁后的娑罗子原料采用酸性乙醇水溶液浸提得到初提液；初提液浓缩后采用溶剂洗脱油脂得到水相溶液；水相溶液中加入高分子聚合物表面活性剂进行旋蒸得到七叶皂苷浓缩液；七叶皂苷浓缩液进行脱色处理；脱色处理后的七叶皂苷浓缩液进行钠型阳离子交换树脂层析，收集获得洗脱液；洗脱液经过过滤、结晶、重结晶后干燥得到七叶皂苷钠。本发明工艺条件较为简单、环境友好；其采用的高分子聚合物表面活性剂能够有效去除杂质，能够选择性地与β‑七叶皂苷形成胶束，制备获得的七叶皂苷钠的纯度大于95％，其中β‑七叶皂苷钠的质量含量高达70％以上。

Description

一种采用娑罗子提取制备七叶皂苷钠的方法

技术领域

本发明属于天然药物化学技术领域，涉及一种采用娑罗子提取制备七叶皂苷钠的方法。

背景技术

娑罗子(Aesculi，又名苏罗子、棱罗子)为七叶树科植物七叶树(Aesculuschinensis Bge)、欧洲七叶树(Aesculus hippocastanum)、天师栗(Aesculus wilsoniiRehd)或浙江七叶树(Aesculus chinensis Bge.var.chekiangensis Fang)的成熟种子。作为常用中药，娑罗子性味与甘、温，归肝、胃经，有理气宽中，和胃止痛之功效，多用于胸腹胀闷，胃脘疼痛。娑罗子主要含有脂肪油32％、淀粉36％、纤维15％等，其中脂肪油主要为油酸和硬脂酸的甘油酯。娑罗子在我国分布广泛，从中提取的七叶皂苷具有良好的疗效，应用前景很好，是目前所知为数不多的疗效稳定确切且副作用较少的纯天然植物药之一，其临床应用范围不断扩大，具有广阔的应用前景。

对七叶皂苷的功效研究发现，七叶皂苷具有消炎、抗渗出、恢复毛细血管通透性，提高静脉张力，改善血液循环，促进脑细胞恢复等作用，可减轻和消除水肿或血肿的形成，具有抗氧自由基而具有神经保护作用。广泛用于治疗流行性乙型脑炎、脑血管疾病、周围神经疾病、Hunt’s综合症、肿瘤、肛管水肿、面神经炎和肾病综合征Ⅰ型等多种疾病。一个显著优势在于其具有激素的抗炎及改善循环的功能，但无激素的副作用及禁忌症。国内外从事该药物生产与准备开发此药物的厂家日渐增多。

七叶树的成熟果实中含有30余种皂苷成分，对其有效成分的研究持续至今。上世纪50年代的研究发现七叶树果实可分别提取出两种结晶成分，其中溶血性的皂苷命名为七叶皂苷(aescin)，另一种不溶血的皂苷命名为次皂苷(prosapogenin)。其中，七叶皂苷是三萜皂苷的天然混合物，以ɑ-七叶皂苷和β-七叶皂苷两种形式存于植物中。上世纪60年代，Merkel等人证实具有抗水肿、抗渗出和血管保护作用的活性成分为β-七叶皂苷。目前临床上广泛应用的药物为β-七叶皂苷钠，为β-七叶皂苷的钠盐化合物。

我国国家标准按液相色谱出峰先后，依次将七叶皂苷主要的4种成分依次命名为七叶皂苷A、七叶皂苷B、七叶皂苷C和七叶皂苷D。七叶皂苷A和七叶皂苷B属于β-七叶皂苷，七叶皂苷C和七叶皂苷D属于ɑ-七叶皂苷。目前缺乏将七叶皂苷中不同有效成分分离的有效手段，临床应用以总七叶皂苷(Totalescin)钠为主。近期有研究认为，七叶皂苷的毒性反应主要由ɑ-七叶皂苷引起，降低提取物中ɑ-七叶皂苷含量可降低七叶皂苷提取物的毒副反应。

现有技术的七叶皂苷提取工艺，分为初提和纯化两个步骤。初提通常采用乙醇或甲醇回流法，其主要的问题在于七叶皂苷耐热性较差，超过60℃有可能导致糖苷键易断裂，因此提取温度不可过高，致使提取时间较长。亦有报道可采用微波或超声波辅助提取，但鉴于糖苷键易断裂的特性，微波辅助提取的实际效果难以验证。另有研究尝试采用超临界萃取的方法对七叶皂苷进行初提，但其工艺条件较为复杂，会导致生产成本显著提高，缺乏实际应用价值。还有尝试采用超高压提取法七叶皂苷进行初提，其优点在于七叶皂苷的总提取率较高，提取物中所含杂质较少，缺点在于采用高压反应容器增加了生产过程的安全隐患，且难以对ɑ-七叶皂苷和β-七叶皂苷进行选择性提取。

对初提液的纯化，现有技术多采用离子交换柱，也有采取超滤法或多次结晶法。

胶束(Micelle)指在水溶液中，表面活性剂浓度达到一定值后开始大量形成的分子有序聚集体。表面活性剂溶于水中，当其浓度较低时呈单分子分散或被吸附在溶液的表面上而降低表面张力。当表面活性剂的浓度增加至溶液表面已经饱和而不能再吸附时，表面活性剂的分子即开始转入溶液内部，由于表面活性剂分子的疏水部分与水的亲和力较小，而亲水部分之间的吸引力较大，当达到一定浓度时，多个表面活性剂分子的疏水部分便相互吸引，相互缔合形成缔合体，即为胶束。在胶束中，表面活性剂分子的疏水基聚集构成胶束内核，亲水的极性基团构成胶束外层。不容于水的物质分子可以被胶束的疏水基包裹于胶束内核形成水溶性胶束溶液。当胶束水溶液的表面活性剂浓度降低或者溶液的pH值改变或表面张力改变，胶束破裂，释放出内核中包裹的分子。近年的研究显示，表面活性剂的分子结构与被包裹的物质分子具有选择性。以植物提取的萜类化合物紫杉醇为例，只有mPEG-PLLA等少数表面活性剂才能有效包裹紫杉醇形成胶束，而同为萜类化合物的多西他赛却无法被mPEG-PLLA有效包裹形成胶束。

综上，由于七叶皂苷的原料中含有的成分非常复杂且不易分离，现有技术面临提取率和有效成分纯度的两难选择。若追求提取率，导致原料中的各种生物杂质混入初提产物，会增加提纯的工艺难度。为照顾纯化工艺的简单化，则初提阶段的提取率不能太高。目前未见在七叶皂苷的提纯工艺中采用胶束技术的报道。

发明内容

基于现有技术存在的问题，本发明的第一目的在于提供一种采用娑罗子提取制备七叶皂苷钠的方法；本发明的第二目的在于提供该方法获得的七叶皂苷钠。

为解决上述技术问题，一方面，本发明提供一种采用娑罗子提取制备七叶皂苷钠的方法，该制备方法包括如下步骤：

将娑罗子原料进行粉碎破壁；粉碎破壁后的娑罗子原料采用酸性乙醇水溶液浸提得到初提液；初提液浓缩后采用溶剂洗脱油脂得到水相溶液；水相溶液中加入高分子聚合物表面活性剂进行旋蒸得到七叶皂苷浓缩液；七叶皂苷浓缩液进行脱色处理；脱色处理后的七叶皂苷浓缩液进行钠型阳离子交换树脂层析，收集获得洗脱液；洗脱液经过过滤、结晶、重结晶后干燥得到七叶皂苷钠。

本发明采用的娑罗子原料选自七叶树、欧洲七叶树或天师栗，产地不限，采摘期为9～10月份。

上述的方法中，优选地，所述高分子聚合物表面活性剂为甲氧基聚乙二醇-聚己内酯嵌段共聚物(mPEG-PCL)，其分子量为6000～10000g/mol；其中，甲氧基聚乙二醇段分子量为2000g/mol，聚己内酯段分子量为4000～8000g/mol。上述的方法中，优选地，所述娑罗子原料粉碎的粒径为8～20目。

上述的方法中，优选地，破壁处理的方法包括：向粉碎后的娑罗子原料中加入酸性水分冰冻，冰冻后进行微波解冻实现破壁。

上述的方法中，优选地，酸性水分的pH值为5.5～6.9；粉碎后的娑罗子原料与酸性水分的重量比为1：(3～4)。所述酸性水分加入过多或过少均可能影响最终的产品收率。

上述的方法中，优选地，采用酸性乙醇水溶液浸提的方法包括：向破壁后的娑罗子原料中加入酸性乙醇水溶液，于40～45℃温度下浸提3～5小时，得到初提液。理论上而言，浸提的时间越长，产品得率越高。但破壁后的娑罗子原料浸提时间过长，会导致最终产品的纯度降低，因此浸提时间以控制在3～5小时为宜。

上述的方法中，优选地，所述酸性乙醇水溶液的pH值为5.0～6.9，乙醇的浓度为30％～50％。

上述的方法中，优选地，破壁后的娑罗子原料与酸性乙醇水溶液的重量比为1：(8～10)。

上述的方法中，优选地，初提液浓缩后采用溶剂洗脱油脂的方法包括：向初提液浓缩后的浓缩液中加入有机溶剂洗脱油脂，分离得到水相溶液和油相溶剂，其中，水相溶液进行后续旋蒸处理，油相溶剂回收提纯后再利用。脱脂环节选用不同有机溶剂以及有机溶剂用量和脱脂次数等工艺参数主要基于生产成本的考量，对本发明所提供的技术效果的影响并不显著。

上述的方法中，优选地，初提液浓缩后的浓缩液与有机溶剂的体积比为1:(0.2～1)；洗脱油脂的次数为1～3次。

上述的方法中，优选地，初提液浓缩至原体积的1/4以下得到浓缩液。

上述的方法中，优选地，所述有机溶剂包括二氯甲烷和/或三氯甲烷。

上述的方法中，优选地，水相溶液中加入高分子聚合物表面活性剂进行旋蒸的方法包括：

向水相溶液中加入高分子聚合物表面活性剂，于40～60℃温度下进行旋蒸，将反应体系浓缩至原体积的1/3～1/4，得到七叶皂苷浓缩液。

上述的方法中，优选地，水相溶液与高分子聚合物表面活性剂的重量比为100：(5～20)。

上述的方法中，优选地，七叶皂苷浓缩液进行脱色处理的方法包括：向七叶皂苷浓缩液中加入活性炭进行脱色处理，然后采用超滤膜过滤除杂得到脱色处理后的七叶皂苷浓缩液。

上述的方法中，优选地，七叶皂苷浓缩液与活性炭的重量比为1000：(1～5)。

上述的方法中，优选地，超滤膜的孔径为50nm(纳米)。

上述的方法中，优选地，脱色处理后的七叶皂苷浓缩液进行钠型阳离子交换树脂层析的方法包括：

向脱色处理后的七叶皂苷浓缩液中加入等体积的无水乙醇(含水量少于5％的乙醇)；然后上柱钠型阳离子交换树脂，交换成钠盐；然后先采用2倍体积的40％的乙醇溶液洗脱，清洗柱床中残留的高分子聚合物表面活性剂；再采用2倍柱体积的70％～90％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。

上述的方法中，所述钠型阳离子交换树脂由阳离子交换树脂经过酸、NaOH处理后得到。所述阳离子交换树脂包括强酸性树脂和弱酸性树脂，不同的树脂型号对于本发明的技术效果没有显著影响，本发明对此不加限定。

上述的方法中，优选地，洗脱液经过过滤、结晶、重结晶后干燥得到七叶皂苷钠的方法包括：将洗脱液采用滤膜过滤；过滤后将洗脱液浓缩至原体积的1/10～1/8，然后加入3～5倍体积的无水乙醇(含水量少于5％的乙醇)，溶解后置于-10℃至-20℃放置，待结晶后再次过滤，获得结晶物；重复上述结晶步骤2次获得重结晶；将重结晶真空干燥得到七叶皂苷钠。

上述的方法中，优选地，滤膜的孔径为0.22μm(微米)。

本发明工艺条件较为简单，避免大量采用交换树脂对环境的污染，所有溶剂均可回收利用，环境友好；采用冰冻和微波解冻的方法破壁效果好，提高了收率和减少溶剂的使用量；本发明选用的高分子聚合物表面活性剂mPEG-PCL，能够有效去除杂质，并能够选择性地与β-七叶皂苷形成胶束，提高产品中β-七叶皂苷所占比例；再经过简单提纯即可制备高纯度七叶皂苷钠(纯度大于95％)，其中β-七叶皂苷钠的质量含量高达70％以上。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的实施方式进行详细的阐述。然而，本领域的普通技术人员可以理解，在本发明各实施方式中，为了使读者更好地理解本发明而提出了许多技术细节。但是，即使没有这些技术细节和基于以下各实施方式的种种变化和修改，也可以实现本发明各权利要求所要求保护的技术方案。

实施例1。

本实施例提供一种采用娑罗子提取制备七叶皂苷钠的方法，该制备方法包括如下步骤：

(1)将100g娑罗子原料(产地湖北的七叶树种子)粉碎至粒径为8～20目。

(2)向粉碎后的娑罗子原料中加入300～400g的pH值为6.0～6.9的酸性水分，均匀混合后平铺于塑料托盘中送入冷柜，待结冰后使用微波进行解冻，解冻温度不高于40℃，实现破壁。

(3)向破壁后的娑罗子原料中加入800～1000g的酸性乙醇水溶液(乙醇浓度为30％～50％，pH值为5.0～6.9)，于40～45℃温度下浸提3小时以上，得到初提液。

(4)初提液浓缩至原体积的1/4以下后得到浓缩液，向浓缩液中加入等体积的二氯甲烷，充分搅拌以洗脱油脂，随后分离得到水相溶液和油相溶剂，油相溶剂回收提纯后再利用。

(5)向步骤(4)得到的水相溶液中加入高分子聚合物表面活性剂甲氧基聚乙二醇-聚己内酯嵌段共聚物(mPEG-PCL；其分子量为6000-10000g/mol，其中mPEG段分子量为2000g/mol，PCL段分子量为4000-8000g/mol，供应商为上海鑫珀生物技术有限公司)，每100重量份的水相溶液中加入5～20份mPEG-PCL，于40～60℃温度下进行旋蒸，将反应体系浓缩至原体积的1/3～1/4，得到七叶皂苷浓缩液。

(6)向七叶皂苷浓缩液中加入活性炭进行脱色处理，每1000份七叶皂苷浓缩液加入1～5份活性炭，然后采用50nm(纳米)的超滤膜过滤除杂得到脱色处理后的七叶皂苷浓缩液。

(7)向脱色处理后的七叶皂苷浓缩液中加入等体积的无水乙醇；然后上柱钠型阳离子交换树脂，交换成钠盐；然后先采用2倍体积的40％的乙醇溶液洗脱，清洗柱床中残留的mPEG-PCL；再采用2倍柱体积的70％～90％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。

(8)将洗脱液采用0.22μm(微米)的滤膜过滤；过滤后将洗脱液浓缩至原体积的1/10～1/8，然后加入3～5倍体积的无水乙醇，溶解后置于-10℃至-20℃放置，待结晶后再次过滤，获得结晶物；重复上述结晶步骤2次获得重结晶；将重结晶真空干燥得到七叶皂苷钠。

对比例1。

本对比例提供一种采用娑罗子提取制备七叶皂苷钠的方法，制备方法同实施例1，区别在于：

步骤(4)向浓缩液中加入0.2倍体积的三氯甲烷，充分搅拌后静置，去除油相三氯甲烷；再重复上述步骤2次，以洗脱油脂。

步骤(5)的旋蒸过程中，添加的表面活性剂为甲氧基聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物(mPEG-PLA；mPEG段分子量2000，PLA段分子量2000-4000g/mol，供应商为上海鑫珀生物技术有限公司)。

实验例1。

根据上海珈凯生物科技有限公司企业标准Q/C-H0026-4《七叶树提取物》所披露的检测方法，采用高效液相色谱法分析产品的纯度。将实施例1和对比例1制备的七叶皂苷钠进行色谱检测。

精密称取已标识七叶皂苷A含量的七叶皂苷对照试剂品5.0毫克，使用甲醇定容，制成七叶皂苷标准溶液。样品检测的色谱条件为：C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙腈：0.3％的磷酸水溶液(体积比33：67)；检测波长220nm(纳米)；柱温35℃；流速：l毫升/分钟。

取七叶皂苷标准溶液分别进样1μl(微升)、2μl、4μl、8μl、10μl进行色谱分析，以七叶各皂苷浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，分别绘制七叶皂苷A、七叶皂苷B组分的标准曲线。

将实施例1和对比例1制备的七叶皂苷钠进样10μl进行色谱分析，根据保留时间和紫外光谱图定性，测得峰面积，根据七叶皂苷A标准曲线得到待测溶液中七叶皂苷钠A、C的浓度，根据七叶皂苷B标准曲线得到待测溶液中七叶皂苷钠B、D的浓度；以七叶皂苷A、B、C、D峰面积的和为七叶皂苷响应值，用归一化法计算有关物质的量；以七叶皂苷A、B、C、D峰面积之和取对数，与浓度的对数进行回归，以标准曲线法计算七叶皂苷的总含量(A、B、C、D之和)；以七叶皂苷A、B峰面积之和计算β-七叶皂苷钠的含量比例。结果如下表1所示。

表1：

由表1实验数据对比可以看出，采用本发明实施例1娑罗子提取制备七叶皂苷钠的方法，其中的mPEG-PCL能够选择性地与β-七叶皂苷形成胶束，以提高产品中β-七叶皂苷所占比例，总皂苷钠中β-七叶皂苷钠重量比例高达71.35％，而对比例1采用的mPEG-PLA总皂苷钠中β-七叶皂苷钠重量比例仅为52.31％。

实验例2。

根据《中国药典》(2020版，一部，305页，娑罗子)所披露的检测方法，采用高效液相色谱法(通则0512)测定娑罗子原料中β-七叶皂苷含量。

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈：0.2％磷酸溶液(36:64)；检测波长为220nm(纳米)。取七叶皂苷钠对照品(已标示七叶皂苷A和七叶皂苷B含量)加甲醇制成对照品溶液。取实施例1所采用的娑罗子原料约1克，精密称定后置索氏提取器中，加乙醚，加热回流1小时，弃去乙醚液，药渣连同滤纸筒挥干溶剂后，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50毫升，称定重量，超声处理(功率250W，频率33kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25毫升，置蒸发皿中，于40℃水浴上浓缩至适量，转移至10毫升量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀滤过，取续滤液。

分别精密吸取对照品溶液与娑罗子溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，以对照品溶液中七叶皂苷A和七叶皂苷B位置相应峰的峰面积计算，即得到娑罗子药材中β-七叶皂苷含量。结果如下表2所示。

表2：

结合表1和表2实验数据可以看出：原料娑罗子中的总皂苷中β-七叶皂苷含量占比为45.48％，而经过本发明提取制备七叶皂苷钠的方法获得的总皂苷钠中β-七叶皂苷钠重量比例达到71.35％；由此可以看出，采用本发明的提取制备七叶皂苷钠的方法能够显著提高七叶皂苷钠中β-七叶皂苷钠的含量。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (11)

1.一种采用娑罗子提取制备七叶皂苷钠的方法，其特征在于，包括如下步骤：将娑罗子原料进行粉碎破壁；粉碎破壁后的娑罗子原料采用酸性乙醇水溶液浸提得到初提液；所述初提液浓缩后采用溶剂洗脱油脂得到水相溶液；所述水相溶液中加入高分子聚合物表面活性剂进行旋蒸得到七叶皂苷浓缩液；所述七叶皂苷浓缩液进行脱色处理；脱色处理后的七叶皂苷浓缩液进行钠型阳离子交换树脂层析，收集获得洗脱液；所述洗脱液经过过滤、结晶、重结晶后干燥得到七叶皂苷钠；所述高分子聚合物表面活性剂为甲氧基聚乙二醇-聚己内酯嵌段共聚物，其分子量为6000～10000g/mol；其中，甲氧基聚乙二醇段分子量为2000g/mol，聚己内酯段分子量为4000～8000g/mol。

2.根据权利要求1所述的一种采用娑罗子提取制备七叶皂苷钠的方法，其特征在于：所述娑罗子原料粉碎的粒径为8～20目；所述破壁处理的方法包括，向粉碎后的娑罗子原料中加入pH值为5.5～6.9的酸性水分冰冻，冰冻后进行微波解冻实现破壁。

3.根据权利要求1所述的一种采用娑罗子提取制备七叶皂苷钠的方法，其特征在于：采用酸性乙醇水溶液浸提的方法包括：向破壁后的娑罗子原料中加入酸性乙醇水溶液，于40～45℃温度下浸提3～5小时，得到初提液。

4.根据权利要求3所述的一种采用娑罗子提取制备七叶皂苷钠的方法，其特征在于：所述酸性乙醇水溶液的pH值为5.0～6.9，乙醇的浓度为30％～50％。

5.根据权利要求1所述的一种采用娑罗子提取制备七叶皂苷钠的方法，其特征在于，所述初提液浓缩后采用溶剂洗脱油脂的方法包括：向所述初提液浓缩后的浓缩液中加入有机溶剂洗脱油脂，分离得到水相溶液和油相溶剂，所述水相溶液进行后续旋蒸处理。

6.根据权利要求5所述的一种采用娑罗子提取制备七叶皂苷钠的方法，其特征在于：所述初提液浓缩后的所述浓缩液与有机溶剂的体积比为1:(0.2～1)；洗脱油脂的次数为1～3次；所述有机溶剂包括二氯甲烷和/或三氯甲烷。

7.根据权利要求1所述的一种采用娑罗子提取制备七叶皂苷钠的方法，其特征在于，所述水相溶液中加入高分子聚合物表面活性剂进行旋蒸的方法包括：向所述水相溶液中加入所述高分子聚合物表面活性剂，于40～60℃温度下进行旋蒸，将反应体系浓缩至原体积的1/3～1/4，得到七叶皂苷浓缩液；所述水相溶液与所述高分子聚合物表面活性剂的重量比为100：(5～20)。

8.根据权利要求1所述的一种采用娑罗子提取制备七叶皂苷钠的方法，其特征在于，所述七叶皂苷浓缩液进行脱色处理的方法包括：向所述七叶皂苷浓缩液中加入活性炭进行脱色处理，然后采用超滤膜过滤除杂得到脱色处理后的七叶皂苷浓缩液。

9.根据权利要求8所述的一种采用娑罗子提取制备七叶皂苷钠的方法，其特征在于：所述七叶皂苷浓缩液与活性炭的重量比为1000：(1～5)；超滤膜的孔径为50纳米。

10.根据权利要求1所述的一种采用娑罗子提取制备七叶皂苷钠的方法，其特征在于，所述脱色处理后的七叶皂苷浓缩液进行钠型阳离子交换树脂层析的方法包括：向脱色处理后的所述七叶皂苷浓缩液中加入等体积的无水乙醇；然后上柱钠型阳离子交换树脂，交换成钠盐；然后先采用2倍体积的40％的乙醇溶液洗脱，清洗柱床中残留的高分子聚合物表面活性剂；再采用2倍柱体积的70％～90％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。

11.根据权利要求1所述的一种采用娑罗子提取制备七叶皂苷钠的方法，其特征在于，所述得到七叶皂苷钠的方法包括：将洗脱液采用滤膜过滤；滤膜的孔径为0.22微米，过滤后将洗脱液浓缩至原体积的1/10～1/8，然后加入3～5倍体积的无水乙醇，溶解后置于-10℃至-20℃放置，待结晶后再次过滤，获得结晶物；重复上述结晶步骤2次获得重结晶；将重结晶真空干燥得到七叶皂苷钠。