CN112675173A

CN112675173A - FXIa抑制剂化合物或其盐的医药用途

Info

Publication number: CN112675173A
Application number: CN202011560903.7A
Authority: CN
Inventors: 肖瑛; 林章凛; 吴俊军; 王汝欢; 陆银锁
Original assignee: South China University of Technology SCUT; Shenzhen Salubris Pharmaceuticals Co Ltd
Current assignee: South China University of Technology SCUT; Shenzhen Salubris Pharmaceuticals Co Ltd
Priority date: 2020-12-25
Filing date: 2020-12-25
Publication date: 2021-04-20
Anticipated expiration: 2040-12-25
Also published as: CN112675173B

Abstract

本发明属于药物技术领域，提供了一种的FXIa抑制剂化合物或其盐的医药用途，具体涉及其在制备预防和/或治疗动脉和静脉血栓药物中的用途。

Description

FXIa抑制剂化合物或其盐的医药用途

技术领域

背景技术

全球每年脑血管、脑梗塞、心肌梗塞、冠心病、动脉硬化等心脑血管疾病夺走近1200万人的生命，接近世界总死亡人数的1/4，成为人类健康的头号大敌。中国每年死于心血管疾病的人数达到260万人以上，存活的患者75％致残，其中40％以上重残。由心脑血管疾病和糖尿病及其并发症引起的血栓问题，成为当今要解决的刻不容缓的问题。

人体血液凝固过程由内源性途径(intrinsic pathway)、外源性途径(extrinsicpathway)和共同通路组成(Annu.Rev.Med.2011.62:41–57)，是通过多种酶原被顺序激活而过程不断得到加强和放大的一种连锁反应。凝血级联反应由内源性途径(又称接触激活途径)及外源性途径(又称组织因子途径)启动生成FXa，再经共同途径生成凝血酶(FIIa)，最终形成纤维蛋白。

内源性途径是指由XII因子被激活形XIa-VIIIa-Ca²⁺-P L复合物、并激活X因子的过程,外源性凝血途径则是从组织因子(TF)释放到TF-VIIa-Ca²⁺复合物形成并激活因子Ⅹ的过程。共同通路是指因子Xa形成后,两条途径合二为一,激活凝血酶原并最终生成纤维蛋白的过程，其中FXI是维持内源性途径所必需的，而且在凝血级联反应放大过程中发挥关键作用。在凝血级联反应中，凝血酶可反馈激活FXI，活化的FXI(FXIa)又促使凝血酶的大量产生，从而使凝血级联反应放大。因此，FXI的拮抗剂被广泛开发，用于各种血栓的治疗。

传统的抗凝药物，如华法林、肝素、低分子量肝素(LMWH)，以及近年上市的新药，如FXa抑制剂(利伐沙班、阿哌沙班等)和凝血酶抑制剂(达比加群酯、水蛭素等)，对减少血栓形成均具有较好效果，以其显著有效性占据广大心脑血管市场，然而其副作用也越来越显著，其中“出血风险(bleeding risk)”是首当其冲最为严峻的问题之一(N Engl JMed1991；325:153-8、Blood.2003；101:4783-4788)。

研究发现，在血栓模型中，抑制FXIa因子可以有效抑制血栓的形成，但在更为严重的血栓情况下，FXIa的作用微乎其微(Blood.2010；116(19):3981-3989)。临床统计显示，提高FXIa的量会增加VTE的患病率(Blood 2009；114:2878-2883)，而FXIa严重不足者其患有DVT的风险性减少(Thromb Haemost 2011；105:269–273)。

FXIa作为目前抑制血栓的新兴靶点，公开具有FXIa抑制活性的化合物的专利申请有WO9630396、WO9941276、WO2013093484、WO2004002405、WO2013056060、WO2017005725、WO2017/023992、WO2018041122等。其中，目前仅拜耳公司的反义寡核苷酸BAY-2306001进入了临床二期研究。

发明内容

本发明提供了FXIa抑制剂化合物或其盐的医药用途，所述用途包括所述在FXIa抑制剂化合物或其盐制备预防和/或治疗动脉血栓、静脉血栓、动静脉旁路血栓药物中的用途药物中的用途，所述化合物结构式如下：

作为本发明的一种实施方案，所述化合物或其盐为晶型、或者无定型，或其混合物。

作为本发明的一种实施方案，所述化合物或其盐的一个以上的氢原子上被同位素氘取代。

作为本发明的一种实施方案，所述化合物或其盐，和一种以上药学上可接受的载体组成药物组合物。

作为本发明的一种实施方案，所述动脉血栓导致动脉栓塞性疾病，包括冠心病、心肌梗死、缺血性脑卒中、外周动脉疾病、房颤和心瓣膜病；所述静脉血栓导致静脉血栓栓塞性疾病，包括关节置换术后深静脉血栓，肺栓塞，深静脉血栓形成。

作为本发明的一种实施方案，关节置换术后深静脉血栓包括全膝关节置换术后静脉血栓。

本发明进一步提供了一种预防和/或治疗动脉、静脉血栓的药物组合物，含有下式化合物或其盐，和一种以上药学上可接受的载体，

本发明化合物或其盐、或含有所述化合物或其盐的药物组合物，对FXIa活性较好，对其他凝血酶选择性高；具有显著的延长APTT的效果，对人血浆的作用最强；对家兔静脉血栓模型可达到利伐沙班药效水平，且无出血风险。

除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。

本发明化合物的盐是指“药学上可接受的盐”，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与药学上可接受的酸或碱制备。

本发明的某些化合物的盐可以以非溶剂化形式或者溶剂化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶剂化形式与非溶剂化的形式相当，都包含在本发明的范围之内。

本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。

可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体，以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。

本发明化合物分子的原子是同位素，通过同位素衍生化通常可以延长半衰期、降低清除率、代谢稳定和提高体内活性等效果。并且，包括一个实施方案，其中至少一个原子被具有相同原子数(质子数)和不同质量数(质子和中子和)的原子取代。本发明化合物中包括的同位素的实例包括氢原子、碳原子、氮原子、氧原子、磷原子、硫原子、氟原子、氯原子，其分别包括²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁷O、¹⁸O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F、³⁶Cl。特别的是，随其衰退而发射辐射的放射性同位素例如³H或¹⁴C可用于药物制剂或者体内化合物的局部解剖学检验。稳定的同位素既不随其量衰减或变化，也不具有放射性，因此其可以安全使用。当构成本发明化合物分子的原子是同位素时，通过用包含相应同位素的试剂替代合成中所用的试剂，可以根据通用方法转化同位素。

本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氘(²H)，碘-125(¹²⁵I)或C-14(¹⁴C)。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。

进一步地，本发明的化合物一个或多个氢原子上被同位素氘(²H)取代，本发明化合物氘代后，具有延长半衰期、降低清除率、代谢稳定和提高体内活性等效果。

所述同位素衍生物的制备方法通常包括：相转移催化方法。例如，优选的氘化方法采用相转移催化剂(例如，四烷基铵盐，NBu₄HSO₄)。使用相转移催化剂交换二苯基甲烷化合物的亚甲基质子，导致比在酸(例如，甲磺酸)存在下用氘化硅烷(例如三乙基氘化甲硅烷)或用路易斯酸如三氯化铝采用氘化硼酸钠还原而引入较高的氘。

术语“药学上可接受的载体”是指能够递送本发明有效量活性物质、不干扰活性物质的生物活性并且对宿主或者患者无毒副作用的任何制剂载体或介质，代表性的载体包括水、油、蔬菜和矿物质、膏基、洗剂基质、软膏基质等。这些基质包括悬浮剂、增粘剂、透皮促进剂等。它们的制剂为化妆品领域或局部药物领域的技术人员所周知。关于载体的其他信息，可以参考Remington:The Science and Practice of Pharmacy,21st Ed.,Lippincott,Williams&Wilkins(2005)，该文献的内容通过引用的方式并入本文。

术语“赋形剂”通常是指配制有效的药物组合物所需要载体、稀释剂和/或介质。

针对药物或药理学活性剂而言，术语“有效量”或“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。对于本发明中的口服剂型，组合物中一种活性物质的“有效量”是指与该组合物中另一种活性物质联用时为了达到预期效果所需要的用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。

术语“治疗”是指一种化学实体，它可以有效地治疗目标紊乱、疾病或病症。

“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。

本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但发明的实施方式不限于此。

化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-III核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，内标为四甲基硅烷(TMS)。

MS的测定用ISQ EC质谱仪(生产商:Thermo,型号:ISQ EC)。

高效液相色谱法(HPLC)分析使用Thermo U3000 HPLC DAD高效液相色谱仪。

CombiFlash快速制备仪使用CombiFlash Rf+LUMEN(TELEDYNE ISCO)。

薄层层析硅胶板使用烟台银龙HSGF254或GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.17mm～0.23mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。

硅胶柱色谱法一般使用乳山上邦硅胶100～200目硅胶为载体。

实施例1化合物

具体合成路线如下：

步骤A：合成1-(2-溴-4-氯苯基)丙烷-1-酮

采用公知的方法(Angewandte Chemie,International Edition,2010,49(46),8729-8732)，将2-溴-4-氯-1-碘苯(2.00克，6.30毫摩尔)溶于2毫升四氢呋喃中，冷却至-20℃，滴加异丙基氯化镁的正己烷溶液(2M浓度)(4.1毫升，8.2毫摩尔)，在该温度下搅拌1小时。

将丙酰氯(716微升，8.20毫摩尔)、氯化锂(23毫克，378微摩尔)、氯化亚铜(19毫克，189微摩尔)和三氯化铝(25毫克，189微摩尔)加入2毫升四氢呋喃中，室温搅拌均匀，冰水浴冷却，将预先反应了一小时的上述反应液缓慢滴加到以上混合液中，加毕室温反应两小时。反应液中加入40毫升饱和氯化铵溶液淬灭，用二氯甲烷萃取(40毫升×3次)，合并有机相，有机相先用饱和食盐水(50毫升)洗，然后用无水硫酸钠干燥，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝20/1)。得到1.37克无色透明液体1-(2-溴-4-氯苯基)丙烷-1-酮(收率：87.8％)。LCMS:RT＝4.30min,不出分子离子峰。

步骤B：合成1-(4-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基)丙-1-酮

在氮气保护下，向1-(2-溴-4-氯苯基)丙烷-1-酮(1.37克，5.53毫摩尔)、双联频哪醇基二硼烷(2.83克，11.1毫摩尔)、乙酸钾(1.09克，11.1毫摩尔)的1，4-二氧六环(21毫升)溶液中加入Pd(dppf)₂Cl₂·2CH₂Cl₂(227毫克，0.28毫摩尔)，将该混合液在80℃下反应3小时。待反应液冷却至室温以后，用乙酸乙酯萃取(50毫升×2次)，合并有机相，依次用水(50毫升)、饱和食盐水(50毫升)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)。得到1.0克淡黄色固体1-(4-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基)丙-1-酮(收率：61.3％)。LCMS:RT＝4.46min,[M+H]⁺＝293.13。

步骤C：合成5-(5-氯-2-丙酰基苯基)-6-甲氧基-2-(4-甲氧基苄基)哒嗪-3(2H)-酮

在氮气保护下，向1-(4-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基)丙-1-酮(268毫克，0.91毫摩尔)、5-溴-6-甲氧基-2-(4-甲氧基苄基)哒嗪-3(2H)-酮(269毫克，0.83毫摩尔)、碳酸钠(176毫克，1.66毫摩尔)的乙二醇二甲醚(5.6毫升)溶液中加入乙醇(0.7毫升)、水(0.7毫升)和Pd(dppf)₂Cl₂(30毫克，0.040毫摩尔)，将该混合液在90℃下反应1小时。待反应液冷却至室温以后，用乙酸乙酯萃取(30毫升×2次)，合并有机相，依次用水(40毫升)、饱和食盐水(40毫升)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1–2/1)。得到321毫克淡黄色油状物5-(5-氯-2-丙酰基苯基)-6-甲氧基-2-(4-甲氧基苄基)哒嗪-3(2H)-酮(收率：94.0％)。LCMS:RT＝4.11min,[M+H]⁺＝413.11。

步骤D：合成5-(5-氯-2-丙酰基苯基)-6-甲氧基哒嗪-3(2H)-酮

在冰水浴下，向5-(5-氯-2-丙酰基苯基)-6-甲氧基-2-(4-甲氧基苄基)哒嗪-3(2H)-酮(290毫克，0.70毫摩尔)的乙腈/水(4.7毫升/1.6毫升)溶液中加入硝酸铈铵(3.09克，5.63毫摩尔)。加毕，移除冰水浴，室温反应0.5小时，反应液用乙酸乙酯萃取(50毫升×2次)，合并有机相，依次用水(50毫升×2次)、饱和食盐水(50毫升)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1.5/1–1/1.5)。得到65毫克白色固体5-(5-氯-2-丙酰基苯基)-6-甲氧基哒嗪-3(2H)-酮(收率：31.8％)。LCMS:RT＝3.42min,[M+H]⁺＝293.01。

步骤E：合成(S)-4-(2-(4-(5-氯-2-丙酰基苯基)-3-甲氧基-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯

室温下，向5-(5-氯-2-丙酰基苯基)-6-甲氧基哒嗪-3(2H)-酮(65毫克，0.22毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(2.2毫升)溶液中加入碳酸钾(61毫克，0.44毫摩尔)和(R)-4-(2-(((4-硝基苯基)磺酰基)氧基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯(128毫克，0.24毫摩尔)。加毕，加热至40℃反应过夜。

反应液用乙酸乙酯萃取(50毫升×2次)，合并有机相，依次用水(50毫升×2次)、饱和食盐水(50毫升)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝3/1)。得到127毫克无色油状物(S)-4-(2-(4-(5-氯-2-丙酰基苯基)-3-甲氧基-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯(收率：94.0％)。LCMS:RT＝4.68min,[M-H]^-＝614.14。

步骤F：合成(S)-4-(2-(4-(5-氯-2-丙酰基苯基)-3-甲氧基-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸

室温下，向(S)-4-(2-(4-(5-氯-2-丙酰基苯基)-3-甲氧基-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯(170毫克，0.28毫摩尔)的二氯甲烷(3.0毫升)溶液中加入三氟乙酸(0.5毫升)。加毕，室温反应0.5小时，减压蒸除溶剂。残余物用无水乙醇(2.0毫升)溶解，溶液缓缓滴入40毫升正己烷，析出大量固体。减压过滤，得到110毫克白色固体(S)-4-(2-(4-(5-氯-2-丙酰基苯基)-3-甲氧基-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸(收率：70.0％)。LCMS:RT＝4.09min,[M-H]^-＝559.15。¹H NMR(500MHz,DMSO)¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.75(br s,1H),10.53(s,1H),7.97(d,J＝8.4Hz,1H),7.91(d,J＝8.7Hz,2H),7.73(d,J＝8.7Hz,2H),7.67(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),7.51(d,J＝2.0Hz,1H),7.36–7.26(m,4H),7.21(t,J＝7.1Hz,1H),6.91(s,1H),5.72(dd,J＝10.3,4.8Hz,1H),3.64(s,3H),3.55(dd,J＝14.0,10.3Hz,1H),3.40(dd,J＝14.0,4.6Hz,1H),2.99(brs,2H),1.03(t,J＝7.1Hz,3H)。

对比实施例1：CN201680058331实施例143化合物-化合物A

参照CN201680058331实施例143的制备方法获得相应目标化合物。

对比实施例2：化合物B

合成(S)-4-(2-(4-(2-乙酰基-5-氯苯基)-5-甲氧基-2-氧吡啶鎓-1(2H)-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸

具体合成路线如下：

步骤A：合成(2,5-二甲氧基吡啶-4-基)硼酸

将2,5-二甲氧基吡啶(10.0克,71.9豪摩尔)溶于干燥四氢呋喃(40毫升)中,置于干燥三口烧瓶中,氮气保护后,于干冰/乙醇浴中搅拌15分钟后,将二异丙基氨基锂(20毫升,2.0M in THF)缓慢滴加到反应液中,30分钟后滴加完毕,干冰/乙醇浴中搅拌3h后,将硼酸三异丙酯(33.0毫升,143.8豪摩尔)加入混合液中,然后自然升温到室温并恒温搅拌18小时.LCMS监测,反应完全后,向反应液中加稀盐酸调节pH至3～4,搅拌15分钟后,旋蒸除去溶剂,残渣加乙腈打浆得到10.6克白色固体(2,5-二甲氧基吡啶-4-基)硼酸(收率：80％)。LCMS：RT＝1.73min,[M+H]⁺＝184.08。

步骤B：合成1-(4-氯-2-(2,5-二甲氧基吡啶-4-基)苯基)乙-1-酮

将2-溴-4-氯苯乙酮(14.8克,63.6豪摩尔)和(2,5-二甲氧基吡啶-4-基)硼酸(9.7克,53.0豪摩尔)溶于1,4-二氧六环(40毫升),碳酸钾(14.6克,106豪摩尔)溶于水(10毫升),置于干燥三口烧瓶中,氮气保护后,将[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(3.87克,5.3豪摩尔)加入反应液中,氮气保护后,升温到100℃并恒温搅拌18小时.LCMS监测,反应完全后,冷却至室温,垫硅藻土过滤,滤饼用EA(30毫升)洗涤3次,合并滤液及洗涤液,水洗一次,饱和氯化铵洗涤两次,有机相经无水硫酸钠干燥,过滤,旋干,残渣经硅胶柱层析纯化得到8.2克黄色固体1-(4-氯-2-(2,5-二甲氧基吡啶-4-基)苯基)乙-1-酮(收率：53％)。LCMS：RT＝4.03min,[M+H]⁺＝292.03。

步骤C：合成4-(2-乙酰基-5-氯苯基)-5-甲氧基吡啶-2(1H)-酮

将1-(4-氯-2-(2,5-二甲氧基吡啶-4-基)苯基)乙-1-酮(8.2克,28豪摩尔),吡啶氢溴酸盐(22g,140豪摩尔)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20毫升),置于干燥烧瓶中,氮气保护后,升温到110℃并恒温搅拌4h.LCMS监测,反应完全后,冷却至室温,将反应液滴加到100毫升水中,加5％碳酸钠调节pH至10～11,DCM(40毫升×4)萃取四次,合并有机相,有机相经无水硫酸钠干燥,过滤,旋干,残渣用DCM(10毫升)溶解,然后滴加到正己烷(120毫升)中,析出大量固体,过滤,收集滤饼,即产物粗品,经硅胶柱层析进一步纯化得到6.4g黄色固体4-(2-乙酰基-5-氯苯基)-5-甲氧基吡啶-2(1H)-酮(收率：82％)。LCMS：RT＝3.81min,[M-H]^-＝277.04。

步骤D：合成(S)-4-(2-(4-(2-乙酰基-5-氯苯基)-5-甲氧基-2-氧吡啶鎓-1(2H)-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯

室温下,将4-(2-乙酰基-5-氯苯基)-5-甲氧基吡啶-2(1H)-酮(1.5克,5.4毫摩尔)和(R)-4-(2-(((4-硝基苯基)磺酰基)氧基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯(4.0克,7.6毫摩尔)以及碳酸钾(1.5克,10.8毫摩尔)加入N,N-二甲基甲酰胺(20.0毫升)中,室温反应过夜。向反应液中加水淬灭,混合液用乙酸乙酯(40毫升×3次)萃取,合并有机相,有机相先用饱和食盐水(30毫升×2次),然后用无水硫酸钠干燥,最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/正己烷＝1/2)得到1.9克黄色固体(S)-4-(2-(4-(2-乙酰基-5-氯苯基)-5-甲氧基-2-氧吡啶鎓-1(2H)-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯(收率：59％)。LCMS：RT＝4.42min,[M+H]⁺＝601.18。

步骤E：合成(S)-4-(2-(4-(2-乙酰基-5-氯苯基)-5-甲氧基-2-氧吡啶鎓-1(2H)-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸

将(S)-4-(2-(4-(2-乙酰基-5-氯苯基)-3-乙氧基-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯(1.9克,3.2毫摩尔)溶于二氯甲烷(12.0毫升)中。随后,向上述溶液中加入三氟乙酸(3毫升),在室温下搅拌1小时。将反应液空气浴中减压浓缩。将所得残余物用甲醇打浆纯化,得到1.0克黄色固体(S)-4-(2-(4-(2-乙酰基-5-氯苯基)-5-甲氧基-2-氧吡啶鎓-1(2H)-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸(收率：59％)。LCMS：RT＝3.88min,[M-H]^-＝543.06。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.82(s,1H),7.92(d,J＝8.8Hz,2H),7.82(d,J＝8.3Hz,1H),7.76(d,J＝8.8Hz,2H),7.61(dd,J＝8.4,2.3Hz,2H),7.42(s,1H),7.38(s,1H)，7.33–7.23(m,4H),7.22–7.14(m,1H),6.30(s,1H),6.02(dd,J＝9.5,6.6Hz,1H),3.53(s,3H),3.49-3.44(m,2H),2.36(s,3H)。

实施例2

：吸收光法检测本发明化合物对人凝血因子XIa抑制的生物活性

1、实验材料

酶：Human Factor XIa(ENZYME RESEARCH，货号HFXIa 1111a)

底物：S-2366^TM：(CHROMOGENIX，货号82109039)

缓冲液：145mM NaCl，5mM KCl，1mg/mL PEG 8000,，30mM HEPES，pH7.4

2、实验步骤

将溶于100％DMSO的10mM受试化合物用100％DMSO稀释至1000、200、40、8、1.6、0.32、0.064、0.0128、0.00256、0.00128μM；在96孔板中每孔加入98μL(77.7ng/mL)的FXIa酶溶液，空白孔加入98μL缓冲液代替，再加入2μL不同浓度的化合物，空白和对照孔用DMSO代替，用振荡器混匀，37℃孵育20min。

最后每孔加入800μM的底物100μL，在405nm处测其吸光度。

3、数据处理

用GraphPad Prism软件进行曲线拟合，计算IC₅₀值，见表一。

表一.本发明化合物对人FXIa抑制的IC₅₀

实施例	hFXIa IC<sub>50</sub>(nM)
		1	1.65

结论：本发明化合物对人FXIa具有明显的抑制活性。

实施例3：本发明化合物对人血浆体外抗凝血作用的测定

1、实验材料

血浆：人血收集于含3.2％柠檬酸钠(体积比1:9)的真空采血管中，室温3000rpm离心10min，收集血浆，分装在EP管中，-80℃保存。

试剂：APTT测定试剂盒(活化部分凝血活酶时间检测定剂盒，mindray)、氯化钙溶液。

仪器：凝血仪(mindray，C2000-A)

2、实验方法

取分装的冻存人血浆室温融化后，混合均匀。将溶于100％DMSO的10mM受试化合物用100％DMSO稀释至1500、750、375、187.5、93.75、46.88、23.44、11.72μM；在1.5mL EP管中加入98μL人血浆，再加入2μL不同浓度的化合物，空白组加入2μL100％DMSO，37℃水浴孵育10min，将样品放入凝血仪中对应的位置，进行化合物的APTT测定。

3、数据处理

用GraphPad Prism软件进行曲线拟合，分别计算EC1.5×和EC2×值，即1.5倍和2倍空白对照组的APTT所对应的化合物的浓度，结果见表二。

表二.本发明化合物对人血浆体外抗凝血作用

结论：从表二中可以看出本发明化合物对人血浆具有明显的抗凝血作用。

实施例4:本发明化合物的药代动力学特征考察

1、实验材料

SD大鼠：雄性，180-250g，购于广东省医学实验动物中心、北京维通利华。食蟹猴：雄性，4-6kg，购于广州春盛生物研究院有限公司。比格犬：雄性，8-12kg，在康龙化成(宁波)新药技术股份有限公司开展。

试剂：DMSO(二甲亚砜)，PEG-400(聚乙二醇400)，生理盐水，肝素，乙腈，甲酸，普萘洛尔(内标)均为市售可得。

仪器：赛默飞LC-MS(U300 UPLC，TSQ QUANTUMN ULTRA三重四级杆质谱)。

2、实验方法

称取化合物溶于DMSO-PEG-400-生理盐水(5：60：35，v/v/v)体系中，大鼠/猴静脉或灌胃给药后，于5min(灌胃不采)、15min、30min、1h、2h、4h、6h、8h、24h采集静脉血200μL于肝素化EP管中，12000rpm离心2min，取血浆-80℃冻存待测。精密称取一定量供试品用DMSO溶解至1mg/mL，作为储备液。准确吸取适量的化合物储备液，加入乙腈稀释制成标准系列溶液。准确吸取上述标准系列溶液各20μL，加入空白血浆180μL，涡旋混匀，配制成相当于血浆浓度为1、3、10、30、100、300、1000、3000和5000ng/mL的血浆样品，每一浓度进行双样本分析，建立标准曲线。取20μL血浆，加入内标普萘洛尔(5ng/mL)的乙腈溶液200μL，涡旋混匀后4000rpm离心5min，取上清LC-MS分析。LC-MS检测条件如下：

色谱柱：赛默飞HYPERSIL GOLD C-18UPLC柱，100*2.1mm，1.9μm。

流动相：水(0.1％甲酸)-乙腈按下表进行梯度洗脱

时间(min)	水(含0.1％甲酸)	乙腈
			0	90％	10％
0.6	90％	10％
			1	10％	90％
2.6	10％	90％
			2.61	90％	10％
4	90％	10％

3、数据处理

LC-MS检测血药浓度后，采用WinNonlin 6.1软件，非房室模型法计算药动学参数。结果见表三、四、五。

表三.本发明化合物的大鼠药代动力学参数

表四.本发明化合物的食蟹猴药代动力学参数

表五.本发明化合物的比格犬药代动力学参数

结论：本发明化合物在大鼠和猴口服均有一定的吸收，犬口服吸收较好，体内清除速率中等偏慢，口服半衰期较长，具有良好的药代动力学特征。

实施例5：本发明化合物的体内药效学征考察

本实施例参考新药(西药)临床前研究指导原则汇编(药学药理学毒理学)要求进行以下试验：

5.1实施例1化合物对三氯化铁诱导的家兔下腔静脉血栓药效考察

试验方法：家兔禁食不禁水24h，按体重分为模型对照组、实施例1化合物15mg/kg/h(以游离酸计)剂量组、阳性药利伐沙班1.5mg/kg/h剂量组，均静脉输注给药一次，模型对照组给予等体积溶媒。

耳缘静脉40％乌拉坦1.5mL/kg麻醉，固定，手术分离下腔静脉，右股动、静脉。右股静脉插管静脉输注给药，静脉慢速输注1.4ml/kg/h(直至剪取血栓称重，对照组给予同等体积的溶剂，溶剂为N,N-dimethylacetamide/PPCES(10/90)(v/v)，给药60min后，15mm*20mm滤纸上加入40μl 15％FeCl₃溶液，敷在下腔静脉周围1min，去除滤纸片，静置60min后，剪下敷过滤纸的血管段，取出血栓称重。

兔子血栓实验结束后，剪开腹部皮肤、腹肌，然后剥离肾包膜，将肾放入37℃预热的生理盐水中，用一次性1ml注射器刺破肾组织，保证5mm的深度，引起肾出血，在生理盐水中观察肾出血时间。

试验结果：实施例1化合物和阳性对照药静脉滴注给药能显著降低家兔下腔静脉血栓重量，实施例1化合物15mg/kg/h血栓抑制率为67.0％；利伐沙班1.53mg/kg/h血栓抑制率为52.5％；试验结果见下表六。

表六.实施例4化合物家兔下腔静脉血栓药效结果

受试物	实施例1化合物	利伐沙班
			剂量(mg/kg/h)	15	1.5
血栓抑制率(％)	67.0***	52.5***
			肾出血时间增加倍数	1.1	3.1***

***P<0.001vs模型对照

试验结论：实施例1化合物达到和利伐沙班相当或更的药效水平时，出血风险明显降低。

5.2实施例1化合物对三氯化铁诱导的家兔颈动脉血栓药效考察

试验方法：家兔禁食不禁水24h，分为模型对照组、阳性药氯吡格雷3mg/kg/h和10mg/kg/h剂量组，实施例1化合物15mg/kg/h剂量组，每组3只家兔。

给药前先对家兔称重，耳缘静脉40％乌拉坦1.5mL/kg麻醉，固定，手术分离右股动、静脉和颈动脉，右股静脉给药，右股动脉采血，均静滴给药2h，滴注体积为1.4mL/kg/h，模型对照组给予等体积溶媒。静滴1h后开始造模：用10mm*10mm滤纸上加入20μL 50％FeCl3溶液，敷在颈动脉周围5min，去除滤纸片，静置55min，剪取颈动脉分离血栓称重。。

试验结果：氯吡格雷单药3mg/kg/h剂量组血栓抑制率约49.1％，肾出血时间无明显变化，10mg/kg/h剂量组血栓抑制率达到72.7％时，肾出血时间有明显延长。实施例1化合物15mg/kg/h剂量组血栓抑制率约43.5％，肾出血时间无明显变化。试验结果见表七。

表七.实施例1化合物家兔颈动脉血栓药效结果

**P<0.01,***P<0.001vs模型对照

试验结论：氯吡格雷对家兔颈动脉血栓有较好的效果，且有明显的量效关系，氯吡格雷随着给药剂量增加肾出血时间会明显变长。实施例1化合物15mg/kg/h给药时表现出一定的预防血栓形成效果，同时降低了出血风险。

5.3实施例1化合物对三氯化铁诱导的家兔动静脉旁路血栓药效考察

试验方法：家兔按体重分为模型对照组、实施例1化合物15mg/kg/h剂量组，手术分离右颈动脉和左颈静脉，右股动、静脉。右颈动脉和左颈静脉用于连接动静脉旁路装置用于动静脉血栓模型制作；右股静脉插管用于静脉输注给药。均采用静脉输注的方式给药，输注容积1.4ml/kg/h，模型对照组给予等体积溶媒。微量输液泵匀速输注60min后，接通动静脉旁路装置，装置内充满生理盐水，两端连接右颈动脉和左颈静脉，静置15min。

造模前，家兔40mg/kg戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉，仰卧固定，颈部备皮、消毒，用手术剪刀剪开颈部皮肤，分离右颈动脉和左颈静脉，首先结扎右颈动脉远心端，用血管夹夹闭近心端，靠近远心端结扎线内侧剪开血管，将充满生理盐水的动静脉旁路装置接入，用两道真丝非吸收缝线结扎固定，暂不打开血管夹；左颈静脉用同样的方法接入动静脉旁路装置，用两道真丝非吸收缝线结扎固定，暂不打开血管夹。输注时间结束后首先打开动静脉旁路装置静脉端血管夹，再打开动脉端血管夹，计时15min。取下动静脉旁路装置，利用减量法计算血栓重量。同时检测肾出血时间。使用1ml一次性注射器针头，在剥离肾包膜的肾脏表面，扎一深度3mm的针孔，测定出血时间。

试验结果：实施例1化合物给药剂量15mg/kg/h能明显减少家兔动静脉旁路血栓重量，血栓抑制率为39.5％，试验结果见表八。

表八.实施例1化合物家兔动静脉旁路血栓药效结果

*P<0.05vs模型对照

试验结论：实施例1化合物在家兔动静脉旁路血栓模型中均有较好的预防血栓形成效果，实施例1化合物肾出血时间仍无明显增加，表明实施例1化合物在达到较好药效水平时出血风险较小。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.FXIa抑制剂化合物或其盐的医药用途，其特征在于，所述用途包括所述在FXIa抑制剂化合物或其盐制备预防和/或治疗动脉血栓、静脉血栓、动静脉旁路血栓药物中的用途，所述化合物结构式如下：

2.根据权利要求1所述的医药用途，其特征在于，所述化合物或其盐为晶型、或者无定型，或其混合物。

3.根据权利要求1所述的医药用途，其特征在于：所述化合物或其盐的一个以上的氢原子上被同位素氘取代。

4.根据权利要求1所述的医药用途，其特征在于：所述化合物或其盐，和一种以上药学上可接受的载体组成药物组合物。

5.根据权利要求1-4任一项所述的医药用途，其特征在于：动脉血栓导致动脉栓塞性疾病，包括冠心病、心肌梗死、缺血性脑卒中、外周动脉疾病、房颤和心瓣膜病；所述静脉血栓导致静脉血栓栓塞性疾病，包括关节置换术后深静脉血栓，肺栓塞，深静脉血栓形成。

6.根据权利要求5所述医药用途，其特征在于：关节置换术后深静脉血栓包括全膝关节置换术后静脉血栓。

7.一种预防和/或治疗动脉、静脉血栓的药物组合物，其特征在于，含有下式化合物或其盐，和一种以上药学上可接受的载体，

8.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于：动脉血栓导致动脉栓塞性疾病，包括冠心病、心肌梗死、缺血性脑卒中、外周动脉疾病、房颤和心瓣膜病；所述静脉血栓导致静脉血栓栓塞性疾病，包括关节置换术后深静脉血栓，肺栓塞，深静脉血栓形成。

9.根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于：关节置换术后深静脉血栓包括全膝关节置换术后静脉血栓。