CN112516116A - 含有间苯二酚或苯乙基间苯二酚用于预防、治疗或改善由空气污染物诱发的皮肤病的组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及含有间苯二酚或苯乙基间苯二酚的用于预防、治疗或改善空气污染物诱发皮肤病的组合物。依据本发明的间苯二酚或苯乙基间苯二酚具有抑制苯并(a)芘及微细粉尘等空气污染物诱导的XRE表达、CYP1A1的蛋白质或mRNA表达、或AhR向核内的移动等效果，由此确认其可以抑制皮肤刺激。因此本发明的间苯二酚或苯乙基间苯二酚可以有效用于针对空气污染物诱发的各种皮肤疾病的治疗剂或改善剂的研发领域。

Description

含有间苯二酚或苯乙基间苯二酚用于预防、治疗或改善由空 气污染物诱发的皮肤病的组合物

关于政府权力的声明

由产业通商资源部和韩国产业技术试验院支援的尖端生物材料事业化支援计划(code#：B0080507000574)，即“源自天然物的生体合成功能性材料产品化及量产化支援”课题。

技术领域

本发明涉及一种含有间苯二酚或苯乙基间苯二酚的、用于预防、治疗或改善由空气污染物诱发的皮肤疾病的组合物。

背景技术

皮肤是由皮下组织、真皮、表皮等3个层构成的人体最大器官，其具有从物理、化学、生物学因素保护人体的作用。快速工业化、汽车尾气、从中国移动过来的气团导致的重金属粉末及微细粉尘等外部污染物会污染人的皮肤，被认为是皮肤老化及问题发生的主要原因。

皮肤中存在微细粉尘等外部生物性异物入侵时就对其进行防御的代谢机制，具体地，通过被称为“皮肤角质细胞的AHR(芳香烃受体；Aryl Hydr ocarbon Receptor)”的受体对被称为“XRE(异生物质反应元件；Xenobiot ic Response Element)”的生物性异物代谢因子进行激活，从而对用于从这种生物性异物防御皮肤的防御因子进行调节。但是，像现在这样大气污染水准严重的情况下，在抵抗大气污染物防御皮肤的过程中、XRE反而会被过度激活，由此就可能引发炎症反应、水分流失等皮肤病。

最近，因产业发展及生活模式的变化而引发的外因性皮肤疾病正在大幅增加。特别是，最近随着生活环境的变化，从汽车、工厂释放的煤烟越来越多。汽车尾气或香烟燃气等因不完全燃烧生成的苯并(a)芘(benzo(α)pyre ne,BaP)作为属于多环芳烃(PolycyclicAromatic Hydrocarbons,PAHs)的物质，其是一种具有代表性的环境压力诱因物质，通过转化为环氧化合物的代谢转换和与DNA的反应会引起细胞损伤，并诱发人体出现癌变。

煤烟不仅包含气体形态，而且还会以微细粉尘(PM10)、超微细粉尘(PM2.5)等粉尘形态存在于城市中。DPM(柴油微粒物质；Diesel Particulate Matter)不仅会影响呼吸器官，而且也会对皮肤产生不良影响。特别是，由于我国的位置因素，面临着从中国排放的大气污染物移动导致的黄沙和微细粉尘等的危害，其严重性也在不断提高。

微细粉尘(PM 10)作为飘浮在大气中直径在10μm以下的小的大气污染物，超微细粉尘(PM 2.5)的直径是2.5μm以下，其大小是微细粉尘的四分之一。微细粉尘的大小只有皮肤毛孔的约二十分之一，因此容易深入渗透皮肤，并且也很难清除。微细粉尘会对皮肤产生化学刺激和引发过敏反应，损伤皮肤角质层，从而对皮肤健康产生不良影响。同时，还会诱发痤疮、并加速皮肤干燥及色素沉着等的皮肤老化现象。

如上所述，在微细粉尘等外部刺激作用下，皮肤就会受到损伤。化妆品行业为了减少各种化学物质等对皮肤产生的刺激正在研发使用天然物质的多种产品。

但是，现在面临的情况是：能够有效缓解及阻断外部刺激导致的皮肤副作用的材料不足，因此迫切需要开发出具有高安全性和高性能的新型材料。

另外，间苯二酚(Resorcinol,m-dihydroxybenzene)是摩洛哥坚果(Ar gan)油的主要成分，具有抗癌、抗菌及美白等功效。同是，苯乙基间苯二酚(Phenylethylresorcinol,4-(1-phenylethyl)1,3-benzenediol)也具有美白功效。但是，对于由空气污染物诱发的皮肤刺激抑制效果，目前尚不清楚。

在先技术文献

专利文献

(专利文献1)韩国公开专利第10-2018-0081327号。

发明内容

所要解决的技术问题

本发明人为开发出一种不仅改善空气污染物诱发的皮肤损伤的效能优秀，而且稳定性高、对皮肤没有副作用的单一物质而付出努力，结果是，确认间苯二酚(Resorcinol,m-dihydroxybenzene)及苯乙基间苯二酚(Phenyl ethyl resorcinol,4-(1-phenylethyl)1,3-benzenediol)分别显示出抑制苯并(a)芘及微细粉尘导致皮肤刺激的效果。在此基础上，完成了本发明。

因此，本发明的一个目的在于，提供一种用于预防或治疗空气污染物诱发皮肤病的药学组合物，其以间苯二酚(Resorcinol)或苯乙基间苯二酚(Phenylethyl resorcinol)为有效成分包含。

本发明的另一个目的在于，提供一种用于预防或改善空气污染物诱发皮肤病的化妆料组合物，其以间苯二酚(Resorcinol)或苯乙基间苯二酚(Phenylethyl resorcinol)为有效成分包含。

但是，本发明所要解决的技术问题并非仅局限于上面提到的问题，对于没有提到的其它问题，具有本发明所属技术领域一般知识的技术人员通过以下记载就会有明确的了解。

解决技术问题的方法

为了实现上述目的，本发明提供一种用于预防或治疗空气污染物诱发皮肤病的药学组合物，其以下述化学式Ⅰ表示的间苯二酚(Resorcinol)或化学式Ⅱ表示的苯乙基间苯二酚(Phenylethyl resorcinol)为有效成分包含。

[化学式Ⅰ]

[化学式Ⅱ]

另外，本发明提供一种用于预防或改善空气污染物诱发皮肤病的化妆料组合物，其以上述化学式Ⅰ表示的间苯二酚(Resorcinol)或化学式Ⅱ表示的苯乙基间苯二酚(Phenylethyl resorcinol)为有效成分包含。

作为本发明的一个实施例，所述组合物能够抑制由空气污染物诱发的皮肤刺激相关基因或蛋白质的表达或活性。

作为本发明的另一实施例，所述组合物能够抑制由空气污染物诱导的XRE(异生物质反应元件；Xenobiotic Response Element)表达、CYP1A1(细胞色素P450，科1，亚科A，多肽1；Cytochrome P450,family 1,subfamily A,polypeptide 1)的蛋白质或mRNA表达、或AhR(芳香烃受体；Aryl hydrocarbon receptor)向核内移动的活性。

作为本发明的另一实施例，所述空气污染物为苯并(a)芘(Benzo(α)pyrene)或微细粉尘(城市微粒物质；Urban Particulate Matter,UPM)。

作为本发明的另一实施例，所述皮肤病可以是从由座疮、皮肤过敏、皮肤脓疮、疥肿、皮疹、牛皮癣、脂溢性皮炎、接触性皮炎、皮肤变色症、细菌性皮炎、真菌性皮炎、湿疹、浮肿、突发性发疹、毛囊炎、毛孔性角化症、瘊子、光线性角化症、粟粒疹、皮肤干燥症、汗腺炎、瘢痕瘤性疾病、过敏性皮炎、皮肤脓肿及神经性皮炎构成的组中选择的一种以上。

作为本发明的另一实施例，所述间苯二酚以0.5mM至3mM的浓度包含。

作为本发明的另一实施例，所述苯乙基间苯二酚以1uM至100uM的浓度包含。

作为本发明的另一实施例，所述间苯二酚或苯乙基间苯二酚相对整体组合物包含0.0001重量％至15重量％。

另外，本发明提供一种预防或治疗空气污染物诱发皮肤病的方法，其包括：将以间苯二酚(Resorcinol)或苯乙基间苯二酚(Phenylethyl resorcinol)为有效成分包含的药学组合物向个体施用的步骤。

另外，本发明提供一种药学组合物用于预防或治疗空气污染物诱发皮肤病的用途，所述药学组合物以间苯二酚(Resorcinol)或苯乙基间苯二酚(Phenylethylresorcinol)为有效成分包含。

另外，本发明提供一种间苯二酚(Resorcinol)或苯乙基间苯二酚(Phenylethylresorcinol)用于生产治疗皮肤病药剂的用途。

发明的效果

依据本发明的间苯二酚或苯乙基间苯二酚具有抑制苯并(a)芘及微细粉尘等空气污染物诱导的XRE(Xenobiotic Response Element)表达、CYP1A1(Cytochrome P450,family 1,subfamily A,polypeptide 1)的蛋白质或mRNA表达、或AhR(Aryl hydrocarbonreceptor)向核内的移动等效果，由此确认其可以抑制皮肤刺激，因此可以有效用于针对空气污染物诱发各种皮肤病的治疗剂或改善剂的研发领域。

附图说明

图1a是显示依据本发明一个实施例的间苯二酚对苯并(a)芘诱导的XRE萤光素酶报告基因(XRE luciferase reporter)活性抑制效果的示意图；

图1b是显示依据本发明一个实施例的间苯二酚对苯并(a)芘诱导的CYP1A1蛋白质表达抑制效果示意图；

图1c是显示依据本发明一个实施例的间苯二酚对苯并(a)芘诱导的CYP1A1 mRNA表达抑制效果示意图；

图1d是显示依据本发明一个实施例的间苯二酚对苯并(a)芘诱导的AhR蛋白质向核内移动抑制效果示意图；

图2a是显示依据本发明一个实施例的苯乙基间苯二酚对苯并(a)芘诱导的XRE萤光素酶报告基因(XRE luciferase reporter)活性抑制效果示意图；

图2b是显示依据本发明一个实施例的苯乙基间苯二酚对苯并(a)芘诱导的CYP1A1蛋白质表达抑制效果示意图；

图3是显示依据本发明一个实施例的间苯二酚及苯乙基间苯二酚分别对微细粉尘诱导的XRE萤光素酶报告基因(XRE luciferase reporter)活性抑制效果示意图。

具体实施方式

本发明提供一种用于预防或治疗空气污染物诱发皮肤病的药学组合物，该药学组合物以下述化学式Ⅰ表示的间苯二酚(Resorcinol)或化学式Ⅱ表示的苯乙基间苯二酚(Phenylethyl resorcinol)作为有效成分包含。

[化学式Ⅰ]

[化学式Ⅱ]

在本发明中，所述组合物可以抑制由空气污染物诱导的皮肤刺激相关基因或蛋白质的表达或活性。

具体地，所述组合物通过抑制空气污染物诱导的XRE(Xenobiotic Resp onseElement)表达、CYP1A1(Cytochrome P450,family 1,subfamily A,polypeptide 1)的蛋白质或mRNA表达、或AhR(Aryl hydrocarbon receptor)向核内移动的活性，从而可以抑制皮肤刺激。

在本发明中，“XRE(Xenobiotic Response Element)”是真核细胞中承担外因性环境污染物的信号传输的转录因子芳香烃受体(AhR)的诱导性目标基因上游的核心核苷酸序列。

在本发明中，“AhR(芳香烃受体；Aryl hydrocarbon receptor)”作为被苯并芘(benzoapyrene)及2,3,7,8-四氯二苯并二恶英(tetrachlordib enzodioxin)(TCDD)等生物性异物(xenobiotics)激活的、碱性螺旋-环-螺旋(basic helix-loop-helix)(bHLH)Per-Arnt-Sim(PAS)科(family)的转录因子，主要发挥所述生物性异物及对其进行代谢的细胞色素(cytochrome)P450等酶的调节剂作用。如果配体与2,3,7,8-四氯二苯并二恶英(tetrachlordibenzodioxin)(TCDD)等化学物质结合，分子伴侣(chaperone)就会解离，AhR向核移动，然后与ARNT(AhR核转移体)形成异二聚体(hete rodimer)，从而导致基因转录的变化。

在本发明中，“CYP1A1(Cytochrome P450,family 1,subfamily A,polypeptide1)”作为由人类CYP1A1基因编码的蛋白质，是细胞色素(cytochrome)P450超科(superfamily)酶之一。CYP1A1参与生物性异物(xenobiotics)及药物代谢，被氟喹诺酮类(fluoroquinolones)及大环内酯类(macrolides)抑制，由芳香烃诱导。

本发明中使用的术语“表达(expression)”是指多肽(polypeptide)从结构基因生产的过程。所述过程包括基因到mRNA的转录以及这种mRNA到多肽(可以是复数)的破译。

在本发明中，用于测定mRNA表达量的分析方法可以采用本行业公知的方法，例如：可以采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、竞争性逆转录聚合酶反应(Competitive RTPCR)、实时聚合酶链式反应(Real-time PCR,quantitative PCR)、实时逆转录聚合酶链式反应(quantitative reverse transcription-polymerase chainreaction,qRT-PCR)、RNase保护分析法(RPA；RNase protection assay)、RNA印迹法(Northern blotting)或DNA芯片等方法，依据本发明一个实施例，可以利用实时聚合酶链式反应(Real-time PCR,quantitative PCR)测定mRNA表达量，但是并非仅限定于此。

在本发明中，用于测定蛋白质表达量的分析方法可以采用本行业公知的方法，例如：包括蛋白质印迹法(Western blotting)、酶联免疫吸附测定法(enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA)、放射线免疫分析(RIA:Radioimmunoassay)、放射免疫扩散法(radioimmunodiffusion)、奥克特洛尼(Ouchterlony)免疫扩散法、火箭(rocket)免疫电泳法、组织免疫染色法、免疫沉淀分析法(Immunoprecipitation Assay)、补体固定分析法(Complement Fixation Assay)、流式细胞分析(Fluorescence Activated Cell Sorter,FACS)或蛋白质芯片(protein chip)等，依据本发明一个实施例，可以利用蛋白质印迹法(Western blotting)测定蛋白质表达量，但是并非仅限定于此。

本发明中使用的术语“空气污染”是指人类活动所产生的物质或者能量排放到大气中对人类健康、资源、生态系统和地球环境造成损害，“空气污染物”是指造成这种空气污染的原因的物质。

在本发明中，所述空气污染物可以是苯并(a)芘(Benzo(α)pyrene)或微细粉尘(城市微粒物质；Urban Particulate Matter,UPM)，但是并非仅限定于此。

所述“苯并(a)芘(Benzo(α)pyrene,C₂₀H₁₂)”作为5个苯环结合的芳香烃之一，是一种在300℃至600℃之间通过不完全燃烧生成的物质，一般都是从煤焦油工厂的物质燃烧后排出煤烟的烟囱、汽车尾气(特别是柴油发动机)、香烟燃气、一部分烧焦食品等中产生的物质。

所述“微细粉尘(Urban Particulate Matter,UPM)”是对粒子尺寸10μm以下粉尘的统称，简称为PM10(颗粒物10；Particulate Matter 10)，分为尺寸2.5μm以下的超微细粉尘即PM2.5(颗粒物2.5；Particulate Matter 2.5)。主要由化石燃料燃烧时产生，来自煤炭依赖度达到70％的中国的微细粉尘占了相当大的一部分。

在本发明中，所述皮肤病可以是由苯并(a)芘(Benzo(α)pyrene)或微细粉尘(Urban Particulate Matter,UPM)诱发的，可以是从由座疮、皮肤过敏、皮肤脓疮、疥肿、皮疹、牛皮癣、脂溢性皮炎、接触性皮炎、皮肤变色症、细菌性皮炎、真菌性皮炎、湿疹、浮肿、突发性发疹、毛囊炎、毛孔性角化症、瘊子、光线性角化症、粟粒疹、皮肤干燥症、汗腺炎、瘢痕瘤性疾病、过敏性皮炎、皮肤脓肿及神经性皮炎构成的组中选择的一种以上，但是并非仅限定于此。

本发明中使用的术语“预防”是指通过施用依据本发明的组合物抑制皮肤病或者延迟发病的所有行为。

本发明中使用的术语“治疗”是指通过施用依据本发明的组合物使皮肤病的症状好转或者朝有利的方向发展的所有行为。

在本发明中，“药学组合物”是指以预防或治疗空气污染物诱发的皮肤病为目的而制造的产品，可以分别按照常用的方法制成多种形态的剂型。例如：可以制成散剂、颗粒、片剂、胶囊、悬浮液、乳剂(emulsion)、糖浆等口服剂型，也可以制成霜剂、凝胶剂、贴片、喷雾剂、软膏剂、硬膏剂、乳液(lotion)、擦剂、糊剂或巴布剂等皮肤外用剂、栓剂及灭菌注射溶液形态使用。

依据本发明的药学组合物还包括：通常用于药学组合物制造的适当载体、赋形剂及稀释剂。在这种情况下，包含在组合物的载体、赋形剂及稀释剂可以为：乳糖、葡萄糖、蔗糖、低聚糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、刺槐胶、海藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟苯甲酯、羟苯丙酯、滑石、硬脂酸镁及矿物油。在制造制剂时，可以使用常用的填充剂、增量剂、结合剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂等稀释剂或赋形剂进行制造。用于口服的固形制剂包括片剂、丸剂、散剂、颗粒、胶囊等，这种固形制剂可以通过向所述间苯二酚或苯乙基间苯二酚中至少加入一种以上赋形剂(例如：淀粉、碳酸钙(calcium carbonate)、蔗糖(sucrose)或乳糖(lactose)、明胶等)进行混合调配。另外，除了单纯的赋形剂之外，还可以使用硬脂酸镁、滑石等润滑剂。用于口服的液状制剂可以为悬浮剂、内用液剂、乳剂、糖浆等，除了常用的单纯稀释剂即水、液体石蜡之外，还包括多种赋形剂，例如：湿润剂、甜味剂、芳香剂、防腐剂等。非口服的制剂包括：经过灭菌处理的水溶液、非水性溶剂、悬浮剂、乳剂、冷冻干燥制剂，栓剂。非水性溶剂、悬浮剂可以使用丙二醇(propylene glycol)、聚乙二醇、橄榄油等植物性油以及油酸乙酯等可以进行注射的酯类等。栓剂的基底可以使用合成脂肪酸酯(witepsol)、聚乙二醇、吐温(tween)61、可可脂、三月桂酸甘油酯、甘油明胶等。

本发明的药学组合物根据目的的方法可以采用经口施用或者非经口施用两种方式(例如：静脉内、皮下、腹腔内或局部使用)，施用量根据患者的状态及体重、疾病的程度、药物形态、施用途径及时间而不同，但是本领域的技术人员可以进行适当选择。

本发明的药学组合物按照药学上的有效的量进行施用。在本发明中，“药学上的有效的量”是指按照可用于医学治疗的合理获益/风险比足以治疗疾病的量，有效用量的标准由患者的疾病种类、严重程度、药物的活性、对药物的敏感度、施用时间、施用途径和包括排出比例、治疗期间、同时使用的药物的因素以及医学领域众所周知的因素决定。依据本发明的药学组合物既可以作为单独的治疗剂施用，也可以与其它治疗剂并用施用，其可以与现有治疗剂依次或同时施用。此外，其还可以单一或多重施用。将上述因素全部考虑在内，在不产生副作用的情况下，施用通过最小的量获得最大的效果的量是重要的，这一点本领域技术人员能够容易地确定。施用既可以一天施用1次，也可以分为几次进行施用。

对于依据本发明的药学组合物来说，在将效果及细胞毒性全都考虑在内的情况下，所述间苯二酚的浓度可以为0.5mM至3mM。优选地，可以为1mM至3mM。依据本发明一个实施例，当所述间苯二酚的浓度为3mM时，不会表现出细胞毒性的同时，空气污染物诱发的皮肤刺激抑制效果可以达到最高，但是所述浓度并没有特别限制。

对于依据本发明的药学组合物来说，在将效果及毒性全都考虑在内的情况下，所述苯乙基间苯二酚的浓度可以为1uM至100uM。优选地，可以为50uM至100uM。依据本发明一个实施例，当所述苯乙基间苯二酚的浓度为100uM时，不会表现出细胞毒性的同时，空气污染物诱发的皮肤刺激抑制效果可以达到最高，但是所述浓度并没有特别限制。

对于依据本发明的药学组合物来说，相对整体组合物，所述间苯二酚或苯乙基间苯二酚可以包含0.0001重量％至15重量％。优选地，可以包含0.001重量％至10重量％。当未满0.0001重量％时，空气污染物诱发的皮肤刺激抑制效果就非常微小。当超过15重量％时，随着含量增加而带来的效果增加并不明显，而且还不能够确保剂型的稳定性。

另外，本发明提供一种用于预防或改善由空气污染物诱发的皮肤病的化妆料组合物，该组合物以由所述化学式Ⅰ表示的间苯二酚(Resorcinol)或由化学式Ⅱ表示的苯乙基间苯二酚(Phenylethyl resorcinol)为有效成分包含。

在本发明中，为了改善由空气污染物诱发的皮肤病，“化妆料组合物”可以用作化妆品及洗面剂等多种形式。例如：可以添加本发明组合物的产品，包括：各种护肤霜(cream)、护肤液(lotion)、化妆水(skin)等化妆品类产品和卸妆水(cleansing)、洗面剂、肥皂、护发素(treatment)、美容液等。

本发明的化妆料包括：从由水溶性维生素、油溶性维生素、高分子肽、高分子多糖、鞘脂及海藻提取物构成的组中选择的组合物。

作为水溶性维生素，只要是能够与化妆品调配，任何一种都可以使用。但是，优选地，可以使用维生素B1、维生素B2、维生素B6、吡哆醇、盐酸吡哆醇、维生素B12、泛酸、烟酸、烟酰胺、叶酸、维生素C、维生素H等，其盐类物质(硫胺素盐酸盐、抗坏血酸钠盐等)或者衍生物(抗坏血酸-2-磷酸钠盐、抗坏血酸-2-磷酸镁盐等)也包含在可用于本发明的水溶性维生素内，水溶性维生素可以通过微生物转化法、从微生物的培养物中提炼的方法、酶处理法或化学合成法等常用的方法获取。

作为油溶性维生素，只要是能够与化妆品调配，任何一种都可以使用。但是，优选地，可以使用维生素A、胡萝卜素、维生素D2、维生素D3、维生素E(d1-α生育酚、d-α生育酚、d-α生育酚)等，其衍生物(抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯、抗坏血酸双棕榈酸酯、醋酸dl-α生育酚、烟酸dl-α生育酚维生素E、DL-泛醇(DL-Pantothenyl alcohol)、D-泛醇、泛酸醇乙基醚等)等也包含在可用于本发明的油溶性维生素内。油溶性维生素可以通过微生物转化法、从微生物的培养物中提炼的方法、酶或化学合成法等常用的方法获取。

作为高分子肽，只要是能够与化妆品调配，任何一种都可以使用。但是，优选地，可以使用胶原蛋白、水解胶原蛋白、明胶、弹性蛋白、水解弹性蛋白、角蛋白等。高分子肽可以通过从微生物的培养液的提炼法、酶法或化学合成法等常用的方法提炼获取。或者，通常还可以从猪或者牛等的真皮、蚕的丝纤维等天然物中提炼使用。

作为高分子多糖，只要是能够与化妆品调配，任何一种都可以使用。但是，优选地，可以使用羟乙基纤维素、黄原胶、透明质酸钠、硫酸软骨素或其盐类物质(钠盐等)。例如：硫酸软骨素或其盐类物质等通常可以从哺乳动物或者鱼类中提炼使用。

作为鞘脂，只要是能够与化妆品调配，任何一种都可以使用。但是，优选地，可以使用神经酰胺、植物鞘氨醇、神经鞘糖脂等。鞘脂通常可以从哺乳类、鱼类、贝类、酵母或植物等中通过常用的方法提炼或者通过化学合成法获取。

作为海藻提取物，只要是能够与化妆品配合，任何一种都可以使用。但是，优选地，可以使用褐藻提取物、红藻提取物、绿藻提取物等。此外，从这些海藻提取物中提炼的卡拉胶、海藻酸、海藻酸钠、海藻酸钾等也包含在可用于本发明的海藻提取物内。海藻提取物可以从海藻中通过常用的方法提炼获取。

本发明的化妆料中除了所述必需成分之外，也可以根据需要将通常与化妆料配合的其它成分与之一起配合使用。

除此之外，还可以添加的配合成分包括油脂成分、保湿剂、润肤剂、表面活性剂、有机及无机颜料、有机粉体、紫外线吸收剂、防腐剂、杀菌剂、抗氧化剂、植物提取物、pH调节剂、醇、色素、香料、血行促进剂、凉感剂、制汗剂、纯净水等。

油脂成分可以为酯类油脂、烃类油脂、硅类油脂、氟类油脂、动物油脂、植物油脂等。

酯类油脂包括三(2-乙基己酸)甘油酯、异辛酸鲸蜡酯、肉豆蔻酸异丙酯、肉豆蔻酸丁酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸乙酯、棕榈酸辛酯、异鲸蜡醇异硬脂酸酯、硬脂酸丁酯、亚油酸乙酯、亚油酸异丙酯、油酸乙酯、肉豆蔻酸异辛酯、肉豆蔻酸异硬脂酸酯、异硬脂醇棕榈酸酯、辛基十二醇肉豆蔻酸酯、异鲸蜡醇异硬脂酸酯、癸二酸二乙酯、二异丙基己二酸酯、新戊酸异癸酯、辛酸/癸酸甘油三酯、三羟甲基丙烷三(乙基己酸)酯、三羟甲基丙烷三异硬脂酸酯、季戊四醇四(2-乙基己酸)酯、辛酸十六烷基酯、月桂酸异癸酯、月桂酸己酯、肉豆蔻酸异癸酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯、鲸蜡醇肉豆蔻脑酸酯、硬脂醇硬脂酸酯、油酸癸酯、鲸蜡醇蓖麻油酸酯、异硬脂醇月桂酸酯、异十三醇肉豆蔻酸酯、异鲸蜡醇棕榈酸酯、硬脂酸辛酯、硬脂酸异辛酯、油酸异癸酯、辛基十二醇油酸酯、辛基十二醇油酸酯、异硬脂酸异丙酯、2-乙基己基硬脂酯、2-乙基己酸硬脂酯、异硬脂酸己酯、乙二醇二辛酸酯、乙二醇二油酸酯、丙二醇二辛酸酯、丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯、丙二醇二辛酸酯、新戊二醇二葵酸酯、新戊二醇二辛酸酯、三辛酸甘油酯、十一酸甘油三酯、三棕榈酸甘油酯、甘油三异硬脂酸酯、辛基十二醇新戊酸酯、季戊四醇异硬脂酸酯、壬酸二异辛酯、新癸酸己基癸基、二十烷酸十二烷基酯、异鲸蜡醇异硬脂酸酯、异硬脂醇异硬脂酸酯、异硬脂酸辛基癸酯、聚甘油单油酸酯、聚甘油异硬脂酸酯、三异鲸蜡醇柠檬酸酯、柠檬酸三异烷基酯、柠檬酸三异辛酯、月桂醇乳酸酯、肉豆蔻醇乳酸酯、十六烷基乳酸酯、辛基十二烷醇乳酸酯、柠檬酸三乙酯、乙酰柠檬酸三乙酯、乙酰柠檬酸三丁酯、柠檬酸三辛酯、二异硬脂醇苹果酸酯、羟基硬脂酸乙基己酯、琥珀酸二-2-乙基己酯、己二酸二异丁酯、癸二酸二异丙酯、二辛基癸二酸酯、硬脂酸胆固醇酯、异硬脂酸胆固醇酯、胆固醇羟基硬脂酸酯、胆固醇油酸酯、二氢胆固醇油酸酯、植物固醇异硬脂酸酯、植物固醇油酸酯、12-硬脂酰基羟基硬脂酸异鲸蜡酯、12-硬脂酰基羟基硬脂酸硬脂酯、12-硬脂酰基羟基硬脂酸异硬脂酯等酯类物质。

烃类油脂可以是角鲨烯、液体石蜡、α-烯烃低聚物、异链烷烃、纯地蜡、石蜡、液体异链烷烃、聚丁烯、微晶蜡、凡士林等烃类油脂。

硅类油脂可以是聚甲基硅酮、甲基苯基硅酮、环聚二甲基硅氧烷、八甲基聚硅氧烷、十甲基聚硅氧烷、十二甲基环硅氧烷、二甲基硅氧烷·甲基鲸蜡基氧基硅氧烷共聚物、二甲基硅氧烷·甲基环氧基硅氧烷共聚物、烷基改性硅油、氨基改性硅油等。

氟类油脂可以是全氟聚醚等。

动物或植物油脂可以是鳄梨油、扁桃油、橄榄油、芝麻油、米糠油、红花油、大豆油、玉米油、菜籽油,杏仁油、棕榈仁油、棕榈油、蓖麻油、葵花籽油、葡萄籽油、棉籽油、椰子油、夏威夷果油、小麦胚芽油、大米胚芽油、乳木果油、月见草油、澳洲坚果油、白芒花籽油、卵黄油、牛脂、马油、貂油、深海鱼油、荷荷巴油、小烛树蜡、巴西棕榈蜡、液体羊毛脂、氢化蓖麻籽油等动物或植物油脂。

保湿剂可以是水溶性低分子保湿剂、脂溶性低分子保湿剂、水溶性高分子、脂溶性高分子等。

水溶性低分子保湿剂可以是丝氨酸、谷氨酰胺、山梨糖醇、甘露醇、吡咯烷酮羧酸钠、甘油、丙二醇、1,3-丁二醇、乙二醇、聚乙二醇B(聚合度n＝2以上)、聚丙二醇(聚合度n＝2以上)、聚甘油B(聚合度n＝2以上)、乳酸、乳酸盐等。

脂溶性低分子保湿剂可以是胆固醇、胆固醇酯等。

水溶性高分子可以是羧乙烯基聚合物、聚天冬氨酸盐、黄蓍胶、黄原胶、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、水溶性甲壳素、壳聚糖、糊精等。

脂溶性高分子可以是聚乙烯吡咯烷酮·二十碳烯共聚物、聚乙烯吡咯烷酮·十六碳烯共聚物、硝酸纤维素、糊精脂肪酸酯、高分子硅等。

润肤剂可以是长链酰基谷氨酸胆固醇酯、胆固醇羟基硬脂酸酯、12-羟基硬脂酸、硬脂酸、松香酸、羊毛脂脂肪酸胆固醇酯等。

表面活性剂可以是非离子型表面活性剂、阴离子型表面活性剂、阳离子型表面活性剂、两性表面活性剂等。

非离子型表面活性剂可以是自乳化型单硬脂酸甘油酯、丙二醇脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、山梨糖醇脂肪酸酯、POE(聚氧乙烯)山梨糖醇脂肪酸酯、POE山梨糖脂肪酸酯、POE甘油脂肪酸酯、POE烷基醚、POE脂肪酸酯、POE氢化蓖麻籽油、POE蓖麻籽油、POE·POP(聚氧乙烯·聚氧丙烯)共聚物、POE·POP烷基醚、聚醚改性硅油、月桂酸链烷醇酰胺、烷基胺氧化物、氢化大豆磷脂等。

阴离子型表面活性剂可以是脂肪酸皂、α-酰基磺酸盐、烷基磺酸盐、烷基烯丙基磺酸盐、烷基萘磺酸盐、烷基硫酸盐、POE烷基醚硫酸盐、烷基酰胺硫酸盐、烷基磷酸盐、POE烷基磷酸盐、烷基酰胺磷酸盐、烷基烷基牛磺酸盐、N-酰基氨基酸盐、POE烷基醚羧酸盐、烷基磺基琥珀酸盐、烷基磺基乙酸钠、酰化水解胶原蛋白肽盐、全氟烷基磷酸酯等。

阳离子型表面活性剂可以是烷基三甲基氯化铵、硬脂基三甲基氯化铵、硬脂基三甲基溴化铵、鲸蜡硬脂基三甲基氯化铵、二硬脂基二甲基氯化铵、硬脂基二甲基苄基氯化铵、二十二烷基三甲基溴化铵、苯扎氯铵、硬脂酸二乙基氨基乙基酰胺、硬脂酸二甲氨基丙铵、羊毛脂衍生物第4级铵盐。

两性表面活性剂可以是羧基甜菜碱型、酰胺甜菜碱型、磺基甜菜碱型、羟磺基甜菜碱型、酰胺磺基甜菜碱型、磷酸酯甜菜碱型、氨基羧酸盐型、咪唑啉衍生物型、酰胺型等两性表面活性剂。

有机及无机颜料可以是：硅酸、无水硅酸、硅酸镁、滑石粉、绢云母、云母、高岭土、氧化铁、粘土、膨润土、钛膜云母、氯氧化铋、氧化锆、氧化镁、氧化锌、二氧化钛、氧化铝、硫酸钙、硫酸钡、硫酸镁、碳酸钙、碳酸镁、氧化铁、群青、氧化铬、氢氧化铬、炉甘石及其复合物等无机颜料；聚酰胺、聚酯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚氨酯、乙烯基树脂、尿素树脂、酚醛树脂、氟树脂、硅树脂、丙烯酸树脂、三聚氰胺树脂、环氧树脂、聚碳酸酯树脂、二乙烯基苯·苯乙烯共聚物、蚕丝粉、纤维素、CI颜料黄、CI颜料橙等有机颜料及其无机颜料与有机颜料的复合颜料等。

有机粉体可以是：硬脂酸钙等金属皂；十六烷基硫酸钠、月桂酸锌、月桂酸钙等烷基磷酸金属盐；N-月桂酰-Β-丙氨酸钙、N-月桂酰-Β-丙氨酸锌、N-月桂酰甘氨酸钙等酰基氨基酸多价金属盐；N-月桂酰牛磺酸钙、N-棕榈酰牛磺酸钙等酰胺磺酸多价金属盐；N-Ε-月桂酰-L-赖氨酸、N-Ε-棕榈酸酰肼、N-α-苯甲酰肉碱、N-α-月桂精氨酸、N-α-氢化脂肪酸酰基精氨酸等N-酰基碱性氨基酸；N-月桂酰甘氨酰甘氨酸等N-酰基多肽；α-氨基辛酸、α-氨基月桂酸等α-氨基脂肪酸；聚乙烯、聚丙烯、锦纶、聚甲基丙烯酸甲酯、聚苯乙烯、二乙烯基苯·苯乙烯共聚物、四氟化乙烯等。

紫外线吸收剂可以是对氨基苯甲酸、对氨基苯甲酸乙酯、对氨基苯甲酸戊酯、对氨基苯甲酸辛酯、水杨酸乙二醇酯、水杨酸苯酯、水杨酸辛酯、水杨酸苄酯、水杨酸丁苯酯、水杨酸薄荷酯、肉桂酸苄酯、对甲氧基肉桂酸-2-乙氧基乙酯、对甲氧基肉桂酸辛酯、二对甲氧基肉桂酸单-2-乙基己烷甘油酯、柠檬酸对甲氧基异丙酯、二异丙基·二异丙基肉桂酸酯混合物、尿刊酸、尿刊酸乙酯、羟基甲氧基二苯甲酮、羟基甲氧基二苯甲磺酸及其盐、二羟基甲氧基二苯甲酮、二羟基甲氧基二苯甲酮二磺酸钠、二羟基二苯甲酮、四羟基二苯甲酮、4-叔丁基-4’-甲氧基二苯甲酰甲烷、2,4,6-三苯甲基-对-(碳-2’-乙基己基-1’-氧基)-1,3,5-三嗪、2-(2-羟基-5-甲基苯基)苯并三唑等。

杀菌剂可以是桧木醇、三氯苯氧氯酚、三氯羟基二苯醚、洗必泰葡萄糖酸盐、苯氧乙醇、间苯二酚、异丙基甲基苯酚、甘菊蓝、水杨酸、吡啶硫酮锌、苯扎氯铵、感光素301号、1-硝基愈创木酚钠、十一碳烯酸等。

抗氧化剂可以是丁基羟基茴香醚、没食子酸丙酯、山梨酸等。

pH调节剂可以是柠檬酸、柠檬酸钠、苹果酸、苹果酸钠、富马酸、富马酸钠、琥珀酸、琥珀酸钠、氢氧化钠、磷酸一氢钠等。

醇可以是鲸蜡醇等的高级醇。

另外，可以添加的调配成分并非仅限定于此，在不损害本发明目的及效果的范围内，上述任何一种成分均可以进行调配。

本发明的化妆料组合物可以采用溶液、乳化物、粘性型混合物等形态。

本发明的化妆料组合物含有的有效成分除了所述间苯二酚或苯乙基间苯二酚之外，还包括通常用于化妆品组合物中的成分，例如：稳定剂、增溶剂、维生素、颜料及香料等常用的助剂及载体。

本发明的化妆料组合物可以制造成本行业通常制造的任何一种剂型，例如：乳液、乳膏(cream)、化妆水、面膜(pack)、粉底(foundation)、护肤液(lotion)、美溶液、毛发化妆料等。

具体地，本发明的化妆料组合物包括：润肤液、柔肤水、化妆水、爽肤水、护肤液、乳液、保湿乳液、营养乳液、按摩霜、营养霜、保湿霜、护手霜、粉底、精华液、营养精华露、面膜、肥皂、洗面奶、洁肤露、卸装膏、润肤露及沐浴露等剂型。

如果本发明的剂型为膏剂(paste)、霜剂(cream)或凝胶，则载体成分可以使用动物纤维、植物纤维、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、二氧化硅、滑石或氧化锌等。

如果本发明的剂型为粉剂或喷雾剂，则载体成分可以使用乳糖、滑石、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉末。特别是，当本发明的剂型为喷雾剂时，还可以进一步包含氯氟烃、丙烷/丁烷或二甲醚等推进体。

如果本发明的剂型为溶液或乳浊液，则载体成分可以使用溶剂、溶剂化剂或乳浊化剂，例如：可以使用水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇油、脂肪族甘油酯、聚乙二醇或山梨聚糖的脂肪酸酯。

如果本发明的剂型为悬浮液，则载体成分可以使用水、乙醇或丙二醇等液态稀释剂、乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇酯及聚氧乙烯山梨糖醇酐酯等悬浮剂、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂或黄蓍胶等。

如果本发明的剂型为含表面活性剂的洁面乳(cleansing)，则载体成分可以使用脂肪醇硫酸盐、脂肪醇醚硫酸盐、磺基琥珀酸单酯、乙硫磷、咪唑啉衍生物、牛磺酸甲酯、肌氨酸盐、脂肪酸酰胺醚硫酸盐、烷基酰胺甜菜碱、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物性油、羊毛脂衍生物或乙氧基化甘油脂肪酸酯等。

另外，本发明提供一种用于预防或治疗由空气污染物诱发的皮肤病的方法，该方法包括：将以间苯二酚(Resorcinol)或苯乙基间苯二酚(Phenylethyl resorcinol)为有效成分包含的药学组合物向个体施用的步骤。

本发明中使用的术语“施用”是指采用任意合适的方法将一定的本发明组合物提供给个体。

本发明中使用的术语“个体”是指需要进行疾病治疗的对象。更具体地，就是指人类或非人类的灵长类、大鼠(mouse)、狗、猫、马及牛等哺乳类。

另外，本发明提供一种药学组合物用于预防或治疗由空气污染物诱发的皮肤病的用途，其以间苯二酚(Resorcinol)或苯乙基间苯二酚(Phenylethyl resorcinol)为有效成分包含。

另外，本发明提供一种间苯二酚(Resorcinol)或苯乙基间苯二酚(Phen ylethylresorcinol)用于生产治疗皮肤病药剂的用途。

在本发明的一个实施例中，将HaCaT细胞用苯并(a)芘处理后，对用间苯二酚或苯乙基间苯二酚处理导致的细胞毒性进行了确认，结果表明，在间苯二酚约为0.5mM～3mM，苯乙基间苯二酚约为1uM～100uM处理浓度下，分别确认了没有细胞毒性(参照实施例1)。

在本发明的另一实施例中，对用间苯二酚处理导致的皮肤刺激相关因素活性及表达量进行了确认，结果表明，苯并(a)芘诱导的XRE(Xenobiotic Response Element)表达、CYP1A1(Cytochrome P450,family 1,subfamily A,polypeptide 1)的蛋白质及mRNA表达、以及AhR(Aryl hydrocarbon receptor)向核内的移动等均受到抑制(参照实施例2)。

在本发明的又一实施例中，对用苯乙基间苯二酚处理导致的皮肤刺激相关因子的表达量进行了确认，结果表明，苯并(a)芘诱导的XRE(Xenobiotic Response Element)表达及CYP1A1(Cytochrome P450,family 1,subfamily A,polypeptide 1)的蛋白质及mRNA表达均受到抑制(参照实施例3)。

在本发明的又一实施例中，针对使XRE报告基因质粒(XRE-reporter plasmid)转导时微细粉尘导致增加的XRE萤光素酶报告基因(Xenobiotics Response Element(XRE)-luciferase reporter)活性，对用间苯二酚及苯乙基间苯二酚处理产生的效果进行了确认，结果表明，随着分别用间苯二酚及苯乙基间苯二酚处理，XRE萤光素酶报告基因(XRE-luciferase repor ter)的活性受到抑制(参照实施例4)。

下面，为了有助于对本发明的理解而列举了优选的实施例。但是，列举下述实施例的目的仅为了更加容易对本发明进行理解，本发明的内容并非仅限定于下述实施例。

实施例1：确认间苯二酚(Resorcinol)或苯乙基间苯二酚(Phenylethyl resorcinol)的细胞毒性

将人永生化角化细胞(Human immortalized keratinocyte)(HaCaT)细胞按照每个孔(well)上1×10⁵个的标准接种到6孔板(6-well plate)(其使用含有10％的FBS(牛胎儿血清；fetal bovine serum)的DMEM培养基)上，然后在5％CO₂及37℃的条件下进行培养，直到细胞在孔板(well plate)底面附着达到约80％以上时为止。

经过培养之后，将HaCaT细胞用苯并(a)芘(Benzo(α)pyrene)[购买：Sigma-Aldrich,≥96％(HPLC)]按照15μM标准处理。1小时后，再用间苯二酚(Resorcinol)[购买：Sigma-Aldrich,ACS reagent]分别按不同浓度(0.5mM、1mM、3mM)进行后处理。然后，在5％CO₂,37℃条件下培养了约1天。接着，利用CCK-8(细胞计数试剂盒8；Cell Counting Kit-8)检定方法对细胞毒性进行了测定。同时，为了进行比较，还一并对未处理组(对照；control)的细胞存活率也进行了测定。

所述CCK-8是一种利用水溶性四唑盐即WST-8[2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二硫苯基)-2H-四唑]([2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium])的方法，无色的WST-8在细胞内被脱氢酶还原，生成甲臜(WST-8form azan)，显示出黄色。由于脱氢酶只能够在存活的细胞内生成，因此生成的甲臜水平与存活的细胞数量成比例。

CCK-8检定结果如下述表1所示，可以确认，在间苯二酚约为0.5mM～3mM处理浓度，苯乙基间苯二酚约为1uM～100uM处理浓度下，分别未显示出细胞毒性。

【表1】

实施例2：确认用间苯二酚处理导致的皮肤刺激相关基因表达量

2-1：确认Xenobiotics Response Element(XRE)-luciferase reporter活性抑制

将Human immortalized keratinocyte(HaCaT)细胞按照每个孔上1×10⁵个的标准接种到6孔板(其使用含有10％的FBS的DMEM培养基)上，然后在5％CO₂及37℃的条件下进行培养，直到细胞在孔板底部附着达到约50％时为止。

经过培养之后，将培养基清除20％，在HaCaT细胞用1μg的β-半乳糖苷酶载体(β-galactosidase vector)和XRE促进剂(XRE promoter)在荧光素酶载体(luciferasevector)上克隆而制作1μg的XRE报告基因质粒(XRE-reporter plasmid)，然后利用5μg PEI(聚乙烯亚胺；Polyethy lenimine)使1μg的XRE报告基因质粒转导，接着在5％CO₂及37℃条件下培养了4小时。然后，用新的培养基替换，接着在5％CO₂及37℃条件下进行隔夜(overnight)培养。经过培养之后，将HaCaT细胞用苯并(a)芘(Benzo(α)pyrene)[购买：Sigma-Aldrich,≥96％(HPLC)]按照15μM处理。1小时后，再用间苯二酚(Resorcinol)[购买：Sigma-Aldrich,ACS reagent]分别按不同浓度(0.5mM、1mM、3mM)进行后处理。然后，在5％CO₂及37℃条件下培养了约1天。

然后，将清除培养基的细胞用PBS(磷酸盐缓冲液；phosphated buffer saline)进行清洗，接着再用刮刀回收细胞。然后，将回收的细胞使用1X报告基因裂解缓冲液(Reporter lysis buffer)在-75℃条件下通过孵化约20分钟使其冻结。接着，待其溶解之后，在室温条件下进行溶化，然后获取上清液。接着，为了测定β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)活性，使上清液在37℃条件下与检测缓冲液(Assay buffer)反应约10分钟以上。利用1M的碳酸钠溶液使反应停止后，再利用酶标仪(microplate reader)测定了420nm的吸光度。然后，使上清液在96孔板上与荧光素酶检测底物(Luciferase assaysubstrate)及荧光素酶检测缓冲液(Luciferase assay buffer)在常温条件下发生反应。在发生反应时立即用酶标仪测定了发光情况。荧光素酶的活性用与β-半乳糖苷酶的比例表示。

其结果如图1a所示，确认了随着间苯二酚的处理浓度增加，苯并(a)芘导致的XRE报告基因(XRE reporter)活性受到抑制。其中，在间苯二酚为3mM浓度条件下的XRE报告基因活性抑制效果最为明显。

由此可知，间苯二酚对苯并(a)芘的效果进行了抑制。

2-2：确认CYP1A1的表达抑制

将人永生化角化(Human immortalized keratinocyte)(HaCaT)细胞按照与所述实施例2-1相同的条件接种到6孔板上并进行培养，直到细胞在孔板底部附着达到约80％时为止。经过培养之后，将HaCaT细胞用苯并(a)芘(Benzo(α)pyrene)[购买：Sigma-Aldrich,≥96％(HPLC)]按照15μM处理。1小时后，再用间苯二酚(Resorcinol)[购买：Sigma-Aldrich,ACS reagent]按照3mM进行后处理，接着在5％CO₂及37℃条件下培养了约1天。然后，将清除培养基的细胞利用PBS(phosphated buffer saline)进行清洗，接着再用刮刀对细胞进行了回收，并利用回收的细胞进行了蛋白质印迹(Western blot)分析和实时聚合酶链反应(real-time PCR)分析。

为了进行Western blot分析，通过利用RIPA(放射免疫沉淀测定；Radioimmunoprecipitation assay)裂解缓冲液(lysis buffer)使回收的细胞溶解，回收了蛋白质。然后将回收的蛋白质利用8％～10％十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法按照不同大小进行了分离，并移动到聚偏二氟乙烯膜上。然后，将所述膜利用5％脱脂乳封堵(blocking)1小时，接着将针对CYP1A1的1次抗体在4℃条件下进行隔夜孵化。然后利用含有吐温20(Tween20)的TBS(三缓冲盐水；tris-buffered saline)清洗所述膜，然后将2次抗体在室温条件下孵化了1小时，并将最终获取的膜的蛋白质利用ECL(增强化学发光法；Enchanced chemiluminescence)进行了检测。

另外，为了进行Real-time PCR分析，将总(total)RNA分离之后，通过合成cDNA进行了实时(real-time)分析。

具体地，为了进行总(Total)RNA分离，使用了TRIzol reagent(In vitrogenCarlsbad,CA,USA)。为了合成cDNA，使用了莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶和随机引物(Moloney murine leukemia virus reverse trans criptase and random primers)(Invitrogen Carlsbad,CA,USA)。为了进行Real-time PCR分析，使用了ABI7900HT Real-Time PCR Instrument(Applied Biosystems,Waltham,MA,USA)和事先制备的Taqman探针(probe)(Applied Biosystems)CYP1A1(ID:Hs01054796_g1)。PCR按照在50℃环境下2分钟、在60℃环境下30分钟、在95℃环境下5分钟的条件进行1循环(cycle)后，进行了45循环的(在94℃环境下20秒、在60℃环境下1分钟)处理。然后，使用ABI序列检测软件版本2.0(ABISequence Detector Software version 2.0)(Applied Biosystems)分析了mRNA的量。

其结果，如图1b及图1c所示，从图中可以看出，如果利用苯并(a)芘处理，干预皮肤刺激的CYP450(细胞色素P450；Cytochrome P450)蛋白质即CYP1A1(Cytochrome P450,family 1,subfamily A,polypeptide 1)蛋白质的表达与mRNA表达就增加，通过间苯二酚处理而分别增加的CYP1A1蛋白质(图1b)及基因(图1c)的表达均受到抑制。

依据上述结果，可以确认，间苯二酚抑制了与皮肤刺激相关的XRE启动子(XREpromoter)的活性，由此抑制了CYP1A1的表达，从而可以缓解由苯并(a)芘诱发的皮肤刺激。

2-3：确认芳香烃受体(AhR)蛋白质向核移动的抑制

按照与所述实施例2-2相同的方法对HaCaT细胞进行培养，然后再利用苯并(a)芘(Benzo(α)pyrene)及间苯二酚(Resorcinol)进行处理，接着利用回收的细胞对质蛋白(cytosolic fraction)与核蛋白(nuclear fraction)进行分离，然后再针对AhR实施了Western blot操作。

其结果如图1d所示，从图中可以看出，在苯并(a)芘影响下，AhR蛋白质向核移动，其效果因用间苯二酚处理而减小。

上述结果表明，间苯二酚阻断了AhR蛋白质向核内的移动，由此可以抑制皮肤刺激基因的表达。

实施例3：确认苯乙基间苯二酚处理导致的皮肤刺激相关基因表达量

3-1：确认Xenobiotics Response Element(XRE)-luciferase reporter活性抑制

按照与所述实施例2-1相同的实验方法，用苯乙基间苯二酚(Phenylethylresorcinol)[购买：Sigma-Aldrich,ACS reagent]代替间苯二酚分别按不同浓度(1uM、50uM、100uM)进行处理后，对XRE报告基因(XRE reporter)活性进行了测定。

其结果如图2a所示，从图中可以看出，随着苯乙基间苯二酚的处理浓度增加，苯并(a)芘导致的XRE reporter活性受到抑制。其中，在苯乙基间苯二酚为100uM浓度条件下的XRE reporter活性抑制效果最为明显。

由此可知，苯乙基间苯二酚对苯并(a)芘的效果进行了抑制。

3-2：确认CYP1A1的表达抑制

按照与所述实施例2-2相同的实验方法，用100uM的苯乙基间苯二酚(Phenylethylresorcinol)[购买：Sigma-Aldrich,ACS reagent]代替间苯二酚进行处理后，针对CYP1A1进行了Western blot分析。

其结果如图2b所示，从图中可以看出，如果用苯并(a)芘处理，干预皮肤刺激的CYP1A1蛋白质表达就会增加，通过苯乙基间苯二酚处理导致增加的CYP1A1蛋白质表达受到了抑制。

依据上述结果，可以确认，苯乙基间苯二酚抑制了与皮肤刺激相关的XRE启动子的活性，由此可以通过抑制CYP1A1的表达使苯并(a)芘诱发的皮肤刺激得到缓解。

实施例4：确认间苯二酚及苯乙基间苯二酚对由微细粉尘导致增加的Xenobiotics Response Element(XRE)-luciferase reporter活性抑制效果

按照与所述实施例2-1相同的实验方法，测定了XRE报告基因(XRE reporter)的活性。在这种情况下，用微细粉尘[城市微粒物质(UPM,the standard reference material,1648a),购买处：国家标准技术研究所(NIST)(Gaithersburg,MD,USA)]代替苯并(a)芘，按照50μg/ml标准进行处理，经过1小时后，分别用3mM的间苯二酚及100uM的苯乙基间苯二酚进行了后处理。

对XRE reporter的活性进行测定的结果如图3所示，从图中可以看出，微细粉尘(UPM)导致增加的XRE reporter活性，分别随着用间苯二酚及苯乙基间苯二酚处理而受到抑制。

由此可知，间苯二酚及苯乙基间苯二酚分别对微细粉尘的效果进行了抑制。

以上对本发明的说明是为了示例的，具有本发明所属技术领域一般知识的技术人员完全可以在不偏离本发明技术思想或者不改变必要特征的范围内轻松按照其它的具体形态实施变更。因此，以上列举的实施例在所有方面是示例性的，不能理解成是限制性的。

Claims (16)

1.一种用于预防或治疗空气污染物诱发皮肤病的药学组合物，其特征在于：

其以下述化学式Ⅰ表示的间苯二酚或化学式Ⅱ表示的苯乙基间苯二酚为有效成分包含，

[化学式Ⅰ]

[化学式Ⅱ]

2.根据权利要求1所述的药学组合物，其特征在于：

所述组合物抑制由空气污染物诱导的皮肤刺激相关基因或蛋白质表达或活性。

3.根据权利要求2所述的药学组合物，其特征在于：

所述组合物抑制由空气污染物诱导的XRE表达、CYP1A1的蛋白质或mRNA表达、或AhR向核内移动的活性。

4.根据权利要求1至权利要求3中任意一项所述的药学组合物，其特征在于：

所述空气污染物为苯并(a)芘或微细粉尘。

5.根据权利要求1所述的药学组合物，其特征在于：

所述皮肤病为从由座疮、皮肤过敏、皮肤脓疮、疥肿、皮疹、牛皮癣、脂溢性皮炎、接触性皮炎、皮肤变色症、细菌性皮炎、真菌性皮炎、湿疹、浮肿、突发性发疹、毛囊炎、毛孔性角化症、瘊子、光线性角化症、粟粒疹、皮肤干燥症、汗腺炎、瘢痕瘤性疾病、过敏性皮炎、皮肤脓肿及神经性皮炎构成的组中选择的一种以上的疾病。

6.根据权利要求1所述的药学组合物，其特征在于：

所述间苯二酚以0.5mM至3mM的浓度包含。

7.根据权利要求1所述的药学组合物，其特征在于：

所述苯乙基间苯二酚以1uM至100uM的浓度包含。

8.根据权利要求1所述的药学组合物，其特征在于：

所述间苯二酚或苯乙基间苯二酚相对整体组合物以0.0001重量％至15重量％包含。

9.一种用于预防或改善由空气污染物诱发的皮肤病的化妆料组合物，其特征在于：

其以下述化学式Ⅰ表示的间苯二酚或化学式Ⅱ表示的苯乙基间苯二酚为有效成分包含，

[化学式Ⅰ]

[化学式Ⅱ]

10.根据权利要求9所述的化妆料组合物，其特征在于：

所述组合物抑制由空气污染物诱导的皮肤刺激相关基因或蛋白质的表达或活性。

11.根据权利要求10所述的化妆料组合物，其特征在于：

所述组合物抑制由空气污染物诱导的XRE表达、CYP1A1的蛋白质或mRNA表达、或AhR向核内的移动。

12.根据权利要求9至权利要求11中的任意一项所述的化妆料组合物，其特征在于：

所述空气污染物为苯并(a)芘或微细粉尘。

13.根据权利要求9所述的化妆料组合物，其特征在于：

所述皮肤病为从由座疮、皮肤过敏、皮肤脓疮、疥肿、皮疹、牛皮癣、脂溢性皮炎、接触性皮炎、皮肤变色症、细菌性皮炎、真菌性皮炎、湿疹、浮肿、突发性发疹、毛囊炎、毛孔性角化症、瘊子、光线性角化症、粟粒疹、皮肤干燥症、汗腺炎、瘢痕瘤性疾病、过敏性皮炎、皮肤脓肿及神经性皮炎构成的组中选择的一种以上的疾病。

14.根据权利要求9所述的化妆料组合物，其特征在于：

所述间苯二酚以0.5mM至3mM的浓度包含。

15.根据权利要求9所述的化妆料组合物，其特征在于：

所述苯乙基间苯二酚以1uM至100uM的浓度包含。

16.根据权利要求9所述的化妆料组合物，其特征在于：

所述间苯二酚或苯乙基间苯二酚相对整体组合物以0.0001重量％至15重量％包含。

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