CN112430252B - 一种提高目标蛋白回收率的层析方法 - Google Patents
一种提高目标蛋白回收率的层析方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112430252B CN112430252B CN202011265249.7A CN202011265249A CN112430252B CN 112430252 B CN112430252 B CN 112430252B CN 202011265249 A CN202011265249 A CN 202011265249A CN 112430252 B CN112430252 B CN 112430252B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- chromatographic
- target protein
- chromatography
- solution
- sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 85
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 85
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 42
- 238000011084 recovery Methods 0.000 title claims abstract description 39
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims abstract description 47
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 claims abstract description 46
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 42
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims abstract description 40
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 31
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 22
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 21
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims description 20
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims description 20
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 19
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical group [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 18
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 16
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 claims description 13
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 13
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical group [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 claims description 12
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 9
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 9
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 6
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 4
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 3
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 claims description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical group [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 claims description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 claims description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 claims description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 claims description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 2
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 claims description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical group O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 16
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 9
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 9
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 108010057186 Insulin Glargine Proteins 0.000 description 5
- COCFEDIXXNGUNL-RFKWWTKHSA-N Insulin glargine Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(=O)NCC(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 COCFEDIXXNGUNL-RFKWWTKHSA-N 0.000 description 5
- 229960002869 insulin glargine Drugs 0.000 description 5
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000012487 rinsing solution Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 2
- 108010073961 Insulin Aspart Proteins 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 2
- 229960004717 insulin aspart Drugs 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- VOMXSOIBEJBQNF-UTTRGDHVSA-N novorapid Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1.C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 VOMXSOIBEJBQNF-UTTRGDHVSA-N 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229920000578 graft copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- -1 phosphate are added Chemical class 0.000 description 1
- 238000000164 protein isolation Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/18—Ion-exchange chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/20—Partition-, reverse-phase or hydrophobic interaction chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6427—Chymotrypsins (3.4.21.1; 3.4.21.2); Trypsin (3.4.21.4)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21004—Trypsin (3.4.21.4)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及一种提高目标蛋白回收率的层析方法，方法包括：以含有目标蛋白的溶液为原料，加入盐类，调节pH值，得到处理后的样品溶液，取层析介质装填层析柱，控制处理后的样品溶液上样温度，进行层析操作。本发明通过在样品中添加盐类，同时调节样品溶液的pH值与温度，改善了目标蛋白与层析介质的结合环境，提高了样品的捕获效率，回收率高达95%以上。
Description
技术领域
本发明属于生物制药技术领域，涉及一种提高目标蛋白回收率的层析方法。
背景技术
蛋白药物是生物制药领域的重要发展方向之一，研究或制备蛋白药物需要一种合适的蛋白分离纯化技术从含有目标蛋白的溶液中回收目标蛋白。蛋白分离纯化是利用不同蛋白间内在的相似性与差异性来除去蛋白和非蛋白物质杂质。基于吸附机理的层析技术是最常用的蛋白质分离纯化方法之一。
吸附层析是通过样品在固定相和流动相之间的吸附、脱附作用而实现分离的一种纯化技术。其吸附的作用力通常包括：被分离样品与层析介质之间相反电荷基团与基团之间的静电引力，氢键、偶极分子之间定向力及范德华力等。常见的层析介质有亲和填料、离子交换填料、吸附树脂填料等。层析介质(或层析填料)与蛋白之间的吸附性能决定了分离纯化的效果。吸附性能除了受样品与层析介质之间作用机理的影响，还受蛋白性质或状态以及溶液性质的影响。
目前对于蛋白分离纯化的研究主要包括两方面：一是层析介质的制备与改性研究：如CN101415692B、CN201310168576、CN101827648A制备了不同的蛋白质分离纯化层析介质；卢慧丽(层析介质孔径与配基密度对蛋白吸附性能影响及抗体分离[D]，浙江大学，2014年)、苑俊敏(三种基于接枝聚合物链的吸附分离材料的制备和应用[D]，西北大学，2012年)等研究了层析介质的改性等。这些方法需要开发专用的层析填料与相应的层析工艺，通用性差，且开发工艺复杂、耗时长，同时定制化的层析填料商业风险大。另一方面是对层析工艺过程的改进研究，主要是通过优化缓冲盐导电率或浓度或pH值或改进洗脱方式来分离纯化蛋白质：如CN1260249C及其各分案通过改变缓冲液的导电率和/或pH来分离多肽；CN106496302A通过使用不同pH和/或浓度的Tris缓冲液、采用多步洗脱的方式除去蛋白质中的不同杂质；CN102382168A在蛋白混合物与层析缓冲液中添加适量的蛋白结合金属离子(Fe3+、Ca2+)，以提高目标蛋白与杂蛋白在离子交换层析中的分辨率，该方法只能用于与金属离子具有结合作用的蛋白，其目的是保持目标蛋白的三级结构。上述方法主要目的是去除杂蛋白或提高分辨率，并没有针对目标蛋白的回收率进行优化，因此回收率较低。
发明内容
为解决上述技术问题，提供一种提高目标蛋白回收率的层析方法，通过改善样品环境以提高蛋白与层析介质之间的结合力，使与层析介质结合的氨基酸基团充分暴露出来，增加了蛋白与层析介质的有效接触部位，同时控制样品温度，以提高蛋白与层析介质之间的结合力，从而提高回收率。
本发明的技术方案是：
一种提高目标蛋白回收率的层析方法，所述方法包括以下步骤：
S1：样品溶液处理：以含有目标蛋白的溶液为原料，加入盐类，调节pH值，得到处理后的样品溶液；
S2：进行吸附层析：取层析介质装填层析柱；
S3：控制处理后的样品溶液上样温度，进行层析操作。
优选地，所述步骤S1中目标蛋白为胰岛素或胰岛素类似物或蛋白酶或多肽类。
优选地，所述步骤S2中层析介质为亲和层析填料或大孔吸附层析或离子交换层析填料或反相层析填料。
优选地，所述步骤S1中盐类为硫酸盐或柠檬酸盐或乙酸盐或其组合。
进一步优选地，所述硫酸盐为硫酸镁或硫酸钠或硫酸铵，柠檬酸盐为柠檬酸钠，乙酸盐为乙酸钠或乙酸铵。
进一步优选地，盐类加入量为0.05～0.5mol/L。
更优选地，盐类加入量为0.1～0.3mol/L。
优选地，所述步骤S1中调节pH值高于或低于目标蛋白等电点1个单位以上。
进一步优选地，所述调节pH值的酸性物质为磷酸或冰乙酸或柠檬酸或盐酸；调节pH值的碱性物质为氢氧化钠或氨水或氢氧化钾。
优选地，所述步骤S3中：样品溶液上样温度为25～30℃。
优选地，所述步骤S3中：层析过程如下：
①、平衡：使用平衡液冲洗层析柱；
②、上样：将处理后的样品上柱；
③、冲洗：使用平衡液或冲洗液冲洗；
④、洗脱：使用洗脱液洗脱，同时对主峰进行收集；
⑤、再生：使用再生液对填料进行再生处理。
其中，上样、冲洗与洗脱流速为60～210cm/h。
本发明有益效果：
(1)本发明通过在样品中添加盐类，调节样品溶液的pH值，使与层析介质结合的氨基酸基团充分暴露出来，增加了蛋白与层析介质的有效接触部位，同时控制样品温度，以提高蛋白与层析介质之间的结合力。通过上述调控，极大提高了样品的捕获效率，回收率高达95％以上。
(2)本发明改善了蛋白与层析介质之间的结合力，从而可使上样、洗脱等步骤的流速大幅度提高而不减低回收率。上样、冲洗与洗脱流速一般在135cm/h以下，添加盐类后可提高至150～210cm/h，从而缩短工时40％以上，大幅度提高了生产效率。
(3)本发明基于提高蛋白与层析介质之间的结合力，因此可应用于层析机理相同、性质类似的其它层析介质，适应性强。不需改变原有层析介质与层析工艺，仅做简单的样品处理即可提高回收率，操作简单，实施成本低，易于商业化与规模化应用。
附图说明
图1为是本发明的工艺流程示意图。
具体实施方式
本发明将通过以下实施例作进一步说明。实施例仅用于说明本发明而不限制本发明的范围。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记录内容相似或均等的方法及材料皆可用于本发明中，文中所述的较佳实施方法仅作示范之用。
本发明方法中，采用层析系统为美国通用电气公司的AKTAavant25系统，层析柱为XK16玻璃柱，检测器检测波长280nm；物料与试剂采用分析纯。样品采用Waterse2695高效液相色谱仪检测目标蛋白浓度。
回收率计算方法：
实施例1
一种提高目标蛋白回收率的层析方法，所述方法包括以下步骤：
S1：样品溶液处理：以含有目标蛋白的溶液为原料，加入盐类，调节pH值，得到处理后的样品溶液；
S2：进行吸附层析：取层析介质装填层析柱，装填高度28cm；
S3：控制处理后的样品溶液上样温度，进行层析操作。
所述步骤S1中目标蛋白为甘精胰岛素前体。
优选地，所述步骤S2中层析介质为亲和层析填料。
优选地，所述步骤S1中盐类为不同浓度的硫酸镁。
优选地，所述步骤S1中调节pH值为4.8，调节用碱为4mol/L的氢氧化钠溶液。
优选地，所述步骤S3中：样品溶液上样温度为27℃。
进一步优选地，所述步骤S3中：层析过程如下：
①、平衡：使用平衡液冲洗层析柱3CV(CV即柱体积，Columnvolume)；
②、上样：将处理后的样品上柱；
③、冲洗：使用冲洗液冲洗3.5CV；
④、洗脱：使用洗脱液洗脱，同时对主峰进行收集；
⑤、再生：使用再生液再生填料3CV；
上样、冲洗与洗脱流速为210cm/h。
本实施例结果见表1，通过在样品中加入不同浓度的硫酸镁，改善了蛋白与层析介质之间的结合，当硫酸镁用量在0.1～0.3mol/L时，目标蛋白回收率达到了95.0％以上，最高时达到了98.5％。但当硫酸镁浓度过高时会抑制蛋白在层析介质上的结合，导致回收率下降。
表1实施例1数据
实施例2
一种提高目标蛋白回收率的层析方法，所述方法包括以下步骤：
S1：样品溶液处理：以含有目标蛋白的溶液为原料，加入盐类，调节pH值，得到处理后的样品溶液；
S2：进行吸附层析：取层析介质装填层析柱，装填高度28cm；
S3：控制处理后的样品溶液上样温度，进行层析操作。
所述步骤S1中目标蛋白为甘精胰岛素前体。
优选地，所述步骤S2中层析介质为亲和层析填料。
优选地，所述步骤S1中盐类为硫酸镁，加入量为0.15mol/L。
优选地，所述步骤S1中调节pH值为4.8，调节用碱为4mol/L的氢氧化钠溶液。
优选地，所述步骤S3中：样品溶液控制不同的上样温度。
进一步优选地，所述步骤S3中：层析过程如下：
①、平衡：使用平衡液冲洗层析柱3CV；
②、上样：将处理后的样品上柱；
③、冲洗：使用冲洗液冲洗3.5CV；
④、洗脱：使用洗脱液洗脱，同时对主峰进行收集；
⑤、再生：使用再生液再生填料3CV；
上样、冲洗与洗脱流速为210cm/h。
本实施例结果见表2，不同的样品温度对蛋白与层析介质之间的结合力影响不同。随着样品温度的层高，结合力增强，目标蛋白回收率增加。当样品温度在27℃以上时，目标蛋白回收率高达98％以上。
表2实施例2数据
实施例3
一种提高目标蛋白回收率的层析方法，所述方法包括以下步骤：
S1：样品溶液处理：以含有目标蛋白的溶液为原料，加入盐类，调节pH值，得到处理后的样品溶液；
S2：进行吸附层析：取层析介质装填层析柱，装填高度28cm；
S3：控制处理后的样品溶液上样温度，进行层析操作。
所述步骤S1中目标蛋白为甘精胰岛素前体。
优选地，所述步骤S2中层析介质为亲和层析填料。
优选地，所述步骤S1中盐类为硫酸镁，加入量为0.15mol/L。
优选地，所述步骤S1中调节样品溶液不同的pH值。
优选地，所述步骤S3中：样品溶液上样温度为27℃。
进一步优选地，所述步骤S3中：层析过程如下：
①、平衡：使用平衡液冲洗层析柱3CV；
②、上样：将处理后的样品上柱；
③、冲洗：使用冲洗液冲洗3.5CV；
④、洗脱：使用洗脱液洗脱，同时对主峰进行收集；
⑤、再生：使用再生液再生填料3CV；
上样、冲洗与洗脱流速为210cm/h。
由于层析操作过程中需要保证样品能溶解于流动相，因此pH值需避开蛋白的等电点。本实施例针对甘精胰岛素前体(PI为6.9)考察了不同pH值对吸附特性的影响，由表3可知，pH值在4.5～5.0之间时层析过程回收率相差不大，均在95％以上。
表3实施例3数据
实施例4
一种提高目标蛋白回收率的层析方法，所述方法包括以下步骤：
S1：样品溶液处理：以含有目标蛋白的溶液为原料，加入盐类，调节pH值，得到处理后的样品溶液；
S2：进行吸附层析：取层析介质装填层析柱，装填高度28cm；
S3：控制处理后的样品溶液上样温度，进行层析操作。
所述步骤S1中目标蛋白为甘精胰岛素前体。
优选地，所述步骤S2中层析介质为亲和层析填料。
优选地，所述步骤S1中盐类为不同盐类。
优选地，所述步骤S1中调节pH值为4.8。
优选地，所述步骤S3中：样品溶液上样温度为27℃。
进一步优选地，所述步骤S3中：层析过程如下：
①、平衡：使用平衡液冲洗层析柱3CV；
②、上样：将处理后的样品上柱；
③、冲洗：使用冲洗液冲洗3.5CV；
④、洗脱：使用洗脱液洗脱，同时对主峰进行收集；
⑤、再生：使用再生液再生填料3CV；
上样、冲洗与洗脱流速为90～210cm/h。
本实施例结果见表4，当样品中添加硫酸盐或柠檬酸盐或乙酸盐等不同盐类或其复合物后，均有利于提高目标蛋白回收率，回收率在95％左右。主要是因为添加盐类后，使蛋白中与层析介质结合的氨基酸基团暴露出来，增加了蛋白与层析介质的有效接触部位，提高了蛋白与层析介质之间的结合能力，使得回收率提高。但当加入磷酸盐等盐类时，这些氨基酸基团被折叠到了内部，导致上样时蛋白不能有效结合到层析介质上，回收率大幅度下降。
而当不添加任何盐类时，目标蛋白与层析介质之间结合力也较弱，回收率较低，即使采取降低流速等措施，回收率提高也有限。
因此，样品中添加硫酸盐或柠檬酸盐或乙酸盐等可提高回收率，同时在保证回收率的情况下，可通过提高流速缩短工时，提高生产效率。
表4实施例4数据
实施例5
一种提高目标蛋白回收率的层析方法，所述方法包括以下步骤：
S1：样品溶液处理：以含有目标蛋白的溶液为原料，加入盐类，调节pH值，得到处理后的样品溶液；
S2：进行吸附层析：取层析介质装填层析柱，装填高度28cm；
S3：控制处理后的样品溶液上样温度，进行层析操作。
所述步骤S1中目标蛋白为门冬胰岛素前体。
优选地，所述步骤S2中层析介质为亲和层析填料。
优选地，所述步骤S1中加入不同的盐类，加入量为0.1～0.3mol/L。
优选地，所述步骤S1中调节pH值为5.5。
优选地，所述步骤S3中：样品溶液上样温度为25～30℃。
进一步优选地，所述步骤S3中：层析过程如下：
①、平衡：使用平衡液冲洗层析柱4CV；
②、上样：将处理后的样品上柱；
③、冲洗：使用平衡液冲洗5CV；
④、洗脱：使用洗脱液洗脱，同时对主峰进行收集；
⑤、再生：使用再生液再生填料3CV；
上样、冲洗与洗脱流速为210cm/h。
本实施例采用门冬胰岛素前体作为目标蛋白，亲和层析填料进行层析，实施例结果见表5。当样品中添加硫酸镁等盐类后回收率高达95％以上。
表5实施例5数据
实施例6
一种提高目标蛋白回收率的层析方法，所述方法包括以下步骤：
S1：样品溶液处理：以含有目标蛋白的溶液为原料，加入盐类，调节pH值，得到处理后的样品溶液；
S2：进行吸附层析：取层析介质装填层析柱，装填高度18cm；
S3：控制处理后的样品溶液上样温度，进行层析操作。
所述步骤S1中目标蛋白为重组胰蛋白酶。
优选地，所述步骤S2中层析介质为阳离子交换层析填料。
优选地，所述步骤S1中加入不同盐类，加入量为0.1～0.3mol/L。
优选地，所述步骤S1中调节pH值为5.3。
优选地，所述步骤S3中：样品溶液上样温度为25～30℃。
进一步优选地，所述步骤S3中：层析过程如下：
①、平衡：使用平衡液冲洗层析柱3CV；
②、上样：将处理后的样品上柱；
③、冲洗：使用平衡液冲洗2CV；
④、洗脱：使用洗脱液洗脱，同时对主峰进行收集；
⑤、再生：使用再生液再生填料3.5CV；
上样、冲洗与洗脱流速为210cm/h。
本实施例采用重组胰蛋白酶作为目标蛋白，以阳离子层析交换填料进行层析，实施例结果见表6。可以看出，目标蛋白回收率也高达95％。
表6实施例6数据
实施例7
一种提高目标蛋白回收率的层析方法，所述方法包括以下步骤：
S1：样品溶液处理：以含有目标蛋白的溶液为原料，加入盐类，调节pH值，得到处理后的样品溶液；
S2：进行吸附层析：取层析介质装填层析柱，装填高度100cm；
S3：控制处理后的样品溶液上样温度，进行层析操作。
所述步骤S1中目标蛋白为重组人胰岛素前体。
优选地，所述步骤S2中层析介质为大孔吸附树脂填料。
优选地，所述步骤S1中加入不同盐类，加入量为0.1～0.3mol/L。
优选地，所述步骤S1中调节pH值为4.5。
优选地，所述步骤S3中：样品溶液上样温度为25～30℃。
进一步优选地，所述步骤S3中：层析过程如下：
①、平衡：使用平衡液冲洗层析柱3CV；
②、上样：将处理后的样品上柱；
③、冲洗：使用平衡液冲洗3CV；
④、洗脱：使用洗脱液洗脱，同时对主峰进行收集；
⑤、再生：使用再生液再生填料3.5CV；
上样、冲洗与洗脱流速为210cm/h。
本实施例采用重组人胰岛素前体作为目标蛋白，以大孔吸附树脂填料进行层析，实施例结果见表7。可以看出，目标蛋白回收率也高达95％。
表7实施例7数据
上述的实施例仅为本发明的优选技术方案，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种提高目标蛋白回收率的层析方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
S1：样品溶液处理：以含有目标蛋白的溶液为原料，加入盐类，盐类为硫酸盐或柠檬酸盐或乙酸盐或其组合，调节pH值高于或低于目标蛋白等电点1个单位以上，得到处理后的样品溶液，硫酸盐为硫酸镁或硫酸钠或硫酸铵，柠檬酸盐为柠檬酸钠，乙酸盐为乙酸钠或乙酸铵,盐类加入量为0.05~0.5mol/L；
S2：进行吸附层析：取层析介质装填层析柱；
S3：控制处理后的样品溶液上样温度，样品溶液上样温度为25~30℃，进行层析操作,层析过程中上样、冲洗与洗脱流速为60~210cm/h；
步骤S1中目标蛋白为胰岛素或胰岛素类似物或蛋白酶。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S2中层析介质为亲和层析填料或大孔吸附层析填料或离子交换层析填料或反相层析填料。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述调节pH值的酸性物质为磷酸或冰乙酸或柠檬酸或盐酸；调节pH值的碱性物质为氢氧化钠或氨水或氢氧化钾。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S3中：
层析过程如下：
①、平衡：使用平衡液冲洗层析柱；
②、上样：将处理后的样品上柱；
③、冲洗：使用平衡液或冲洗液冲洗；
④、洗脱：使用洗脱液洗脱，同时对主峰进行收集；
⑤、再生：使用再生液对填料进行再生处理。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011265249.7A CN112430252B (zh) | 2020-11-13 | 2020-11-13 | 一种提高目标蛋白回收率的层析方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011265249.7A CN112430252B (zh) | 2020-11-13 | 2020-11-13 | 一种提高目标蛋白回收率的层析方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112430252A CN112430252A (zh) | 2021-03-02 |
| CN112430252B true CN112430252B (zh) | 2022-09-02 |
Family
ID=74699905
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011265249.7A Active CN112430252B (zh) | 2020-11-13 | 2020-11-13 | 一种提高目标蛋白回收率的层析方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112430252B (zh) |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100253916B1 (ko) * | 1997-12-29 | 2000-05-01 | 김충환 | 사람 인슐린 전구체의 제조방법 |
| CN1810292A (zh) * | 1998-05-06 | 2006-08-02 | 基因技术股份有限公司 | 用离子交换层析纯化蛋白质 |
| CN1919864A (zh) * | 2006-09-20 | 2007-02-28 | 宁波市三生药业有限公司 | 高纯度血促性素的生产方法 |
| CN102382168A (zh) * | 2010-09-03 | 2012-03-21 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种高效纯化金属离子结合蛋白的离子交换层析分离纯化方法 |
| US9067990B2 (en) * | 2013-03-14 | 2015-06-30 | Abbvie, Inc. | Protein purification using displacement chromatography |
| US20140154270A1 (en) * | 2012-05-21 | 2014-06-05 | Chen Wang | Purification of non-human antibodies using kosmotropic salt enhanced protein a affinity chromatography |
| WO2014099577A1 (en) * | 2012-12-17 | 2014-06-26 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Process for purifying insulin and analogues thereof |
| CN103130868B (zh) * | 2013-03-12 | 2014-09-17 | 合肥天麦生物科技发展有限公司 | 一种蛋白质或多肽的纯化方法 |
| EP3171888B1 (en) * | 2014-07-21 | 2022-12-28 | Merck Sharp & Dohme LLC | Chromatography process for purification of inlsulin and insulin analogs |
| CN105153294B (zh) * | 2015-08-31 | 2019-02-12 | 济南康和医药科技有限公司 | 一种重组胰岛素及胰岛素类似物前体纯化方法 |
-
2020
- 2020-11-13 CN CN202011265249.7A patent/CN112430252B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN112430252A (zh) | 2021-03-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hochuli | Large-scale chromatography of recombinant proteins | |
| JP3676817B2 (ja) | 新規因子ｉｘ精製法 | |
| Reif et al. | Immobilized metal affinity membrane adsorbers as stationary phases for metal interaction protein separation | |
| Champluvier et al. | Dye‐ligand membranes as selective adsorbents for rapid purification of enzymes: A case study | |
| JP2007532477A5 (zh) | ||
| EP1885488A1 (en) | Regeneration of a chromatography matrix | |
| SE526227C2 (sv) | Metod för rening av rekombinant humant serumalbumin | |
| EP3484599B1 (en) | Purification method and uses thereof | |
| Roy et al. | Current trends in affinity-based separations of proteins/enzymes | |
| CN103130868B (zh) | 一种蛋白质或多肽的纯化方法 | |
| CN112430252B (zh) | 一种提高目标蛋白回收率的层析方法 | |
| CN103505908B (zh) | 一种利用混合模式层析介质连续分离纯化抗体的方法 | |
| CN102898516A (zh) | 一种用扩张床吸附技术从乳清中提纯乳铁蛋白的方法 | |
| CN115651081A (zh) | 一种破伤风抗毒素的纯化方法、层析填料及破伤风抗毒素 | |
| CN116693659B (zh) | 一种分离重组人血白蛋白的两步混合模式层析方法 | |
| CN103694343B (zh) | 一种从尿液中制备人血白蛋白的方法 | |
| CN106496302B (zh) | 一种用离子交换层析纯化蛋白质的方法 | |
| CN111208242A (zh) | 利用高效液相色谱法检测glp-1或其类似物的方法 | |
| CN1197875C (zh) | 一种纯化血红蛋白的方法 | |
| Shepard et al. | Routine manufacture of recombinant proteins using expanded bed adsorption chromatography | |
| CN108479738B (zh) | 一种疏水层析介质、制备方法及其应用 | |
| CN115466323B (zh) | 一种分离分泌性白细胞蛋白酶抑制因子的方法 | |
| CN113045640B (zh) | 一种glp-1类似物的纯化方法 | |
| CN100343390C (zh) | 反义寡核苷酸的分离 | |
| CN106749623B (zh) | 一种基于混合模式的扩张床吸附分离人血白蛋白方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |