CN112410242A - 一株分离自直肠癌肿瘤组织的狄氏副拟杆菌株及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明一株分离自直肠癌肿瘤组织的狄氏副拟杆菌株及其应用，该狄氏副拟杆菌株命名为DXBHYZ1，分类命名为Parabacteroides distasonis，于2020年06月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO：M 2020223。目前已报道的用于研究的狄氏副拟杆菌菌株为在代谢综合征表型减轻的小鼠盲肠中分离出的CGMCC1.30169，而非从结直肠癌肿瘤组织中分离获得，其在抑制结直肠癌发生发展的相关研究中并不能充分代表肠道狄氏副拟杆菌的生物学特性。而本发明的狄氏副拟杆菌株DXBHYZ1直接来源于直肠癌肿瘤组织，在进行一系列肠癌相关的体内内外实验时更能反应真实性并更具代表性。
Description
技术领域
本发明涉及狄氏副拟杆菌领域，具体涉及一株分离自直肠癌肿瘤组织的狄氏副拟杆菌株及其应用。
背景技术
大肠癌(Colorectal Cancer，CRC)的发病率和死亡率居恶性肿瘤第三位，世界上每年有超过120万人被诊断为结肠癌，并且有超过60万病人死于结肠癌。在中国，CRC发生率正以每年4.7％的幅度增长，成为严重威胁人类生命的重要消化道肿瘤之一。研究发现肠道菌群失调与结直肠癌的发生发展密切相关。已有多种细菌被报道与CRC的进展呈现显著的相关性并作为临床上潜在的治疗靶点，如牛链球菌、脆弱拟杆菌、粪肠球菌、大肠杆菌、具核梭杆菌等。
狄氏副拟杆菌被认为是一种重要的“益生菌”，其不仅可以显著改善高脂饮食诱导的肥胖模型小鼠的肥胖、胰岛素抵抗、脂代谢紊乱及非酒精性脂肪肝等症状，还具有广泛的胆酸转化功能并能够水解多种结合型胆酸，同时还能抑制 TLR-4信号通路以及Akt信号通路的活化，从而缓解高脂饮食引起的肠道疾病的发生发展。由此可见，狄氏副拟杆菌是一种潜在的新型功能益生菌，但目前为止，尚未有关于其在抑制结直肠癌细胞系增殖中的应用。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的缺陷，提供了一株分离自直肠癌肿瘤组织的狄氏副拟杆菌株及其应用。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明的第一方面是提供一株分离自直肠癌肿瘤组织的狄氏副拟杆菌株，所述狄氏副拟杆菌株命名为DXBHYZ1，分类命名为狄氏副拟杆菌DXBHYZ1Parabacteroidesdistasonis DXBHYZ1，于2020年06月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏中心地址为中国.武汉.武汉大学，其保藏编号为CCTCC NO：M 2020223。
进一步地，所述狄氏副拟杆菌株的16SrRNA基因序列如SEQ ID NO:1所示。
进一步地，所述狄氏副拟杆菌株分离自新鲜的直肠癌肿瘤手术切除标本。
进一步地，所述狄氏副拟杆菌株在哥伦比亚血平板上培养7天，其菌落呈白色、圆形、边缘规则的相对较小菌落。
进一步地，所述狄氏副拟杆菌株经革兰染色后镜下呈红色、梭杆状，菌体间多呈链状排布。
本发明第二方面提供了所述狄氏副拟杆菌株在抑制结直肠癌细胞系增殖中的应用。
相对于现有技术，本发明的有益效果如下：
目前已报道的用于研究的狄氏副拟杆菌菌株为在代谢综合征表型减轻的小鼠盲肠中分离出的CGMCC1.30169，而非从结直肠癌肿瘤组织中分离获得，其在抑制结直肠癌发生发展的相关研究中并不能充分代表肠道狄氏副拟杆菌的生物学特性。而本发明的狄氏副拟杆菌株DXBHYZ1直接来源于直肠癌肿瘤组织，在进行一系列肠癌相关的体内内外实验时更能反应真实性并更具代表性。
附图说明
图1为本发明实施例2中SW620细胞经PBS和DXBHYZ1处理后的细胞周期图；
图2为本发明实施例2中细胞周期图在处理后的统计图(双尾t检验)，其数据以均值±标准差方式呈现；
图3为本发明实施例3中LoVo细胞经PBS和DXBHYZ1处理后的细胞周期图；
图4为本发明实施例3中细胞周期图在处理后的统计图(双尾t检验)，其数据以均值±标准差方式呈现；
具体实施方式
下面通过具体实施例和附图对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发明，但是下述实施例并不限制本发明范围。
实施例1
本实施例提供一株分离自直肠癌肿瘤组织的狄氏副拟杆菌株DXBHYZ1。
该菌株现已被保藏，分类命名为狄氏副拟杆菌Parabacteroides distasonis，于2020年06月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC M 2020223。
上述狄氏副拟杆菌株的获得方法为：从直肠癌手术切除标本上取1-2mm3肿瘤组织块，置于500μL含0.05％半胱氨酸的胰酶大豆肉汤培养基中机械打碎，稀释100-1000倍涂布于哥伦比亚血平板上，37℃厌氧培养48小时；从平板上挑取单菌落，纯化、鉴定菌种。
该菌株的16SrRNA基因序列具体如SEQ ID NO:1所示，与Parabacteroidesdistasonis菌株ATCC 8503的16S rRNA基因序列(NCBI登录号NR_074376.1) 有99.72％一致性。
该狄氏副拟杆菌株的形态特征观察结果为：
在哥伦比亚血平板上培养7天，其菌落呈白色、圆形、边缘规则的相对较小菌落；经革兰染色后镜下呈红色、梭杆状，菌体间多呈链状排布。
实施例2
本实施例提供了狄氏副拟杆菌株DXBHYZ1在抑制SW620细胞增殖中的作用。
将实施例1提供的狄氏副拟杆菌株DXBHYZ1与结直肠癌SW620细胞系共培养：
取已培养的SW620细胞，用胰酶消化并制备单细胞悬液，进行细胞计数接种至24孔板中(1×105个细胞/孔)，接种后培养12-24小时至细胞贴壁。贴壁后用PBS洗涤并更换无抗生素培养基。实验组加入新鲜制备的DXBHYZ1细菌悬浮液，1×108CFU/孔(使用PBS悬浮细菌)；对照组加入等体积PBS。每组分别做3个重复孔。放于正常条件下培养。培养24小时后，利用流式细胞术检测细胞周期。
结果如图1-2所示，DXBHYZ1可显著抑制SW620细胞增殖，在24小时的增殖期(s期)细胞数显著低于对照组(p<0.05)。
实施例3
本实施例提供了狄氏副拟杆菌株DXBHYZ1在抑制LoVo细胞增殖中的作用。
将实施例1提供的狄氏副拟杆菌株DXBHYZ1与结直肠癌LoVo细胞系共培养：
取已培养的LoVo细胞，用胰酶消化并制备单细胞悬液，进行细胞计数接种至24孔板中(1×105个细胞/孔)，接种后培养12-24小时至细胞贴壁。贴壁后用PBS洗涤并更换无抗生素培养基。实验组加入新鲜制备的DXBHYZ1细菌悬浮液，1×108CFU/孔(使用PBS悬浮细菌)；对照组加入等体积PBS。每组分别做3个重复孔。放于正常条件下培养。培养24小时后，利用流式细胞术检测细胞周期。
结果如图3-4所示，DXBHYZ1可显著抑制LoVo细胞增殖，在24小时的增殖期(s期)细胞数显著低于对照组(p<0.05)。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。
序列表
<110> 上海市第十人民医院
<120> 一株分离自直肠癌肿瘤组织的狄氏副拟杆菌株及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1450
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
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Claims (6)
1.一株分离自直肠癌肿瘤组织的狄氏副拟杆菌株，其特征在于，所述狄氏副拟杆菌株命名为DXBHYZ1，分类命名为Parabacteroides distasonis，于2020年06月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO： M 2020223。
2.根据权利要求1所述的狄氏副拟杆菌株，其特征在于，所述狄氏副拟杆菌株的16SrRNA基因序列如SEQ ID NO:1所示。
3.根据权利要求1所述的狄氏副拟杆菌株，其特征在于，所述狄氏副拟杆菌株分离自新鲜的直肠癌肿瘤手术切除标本。
4.根据权利要求1所述的狄氏副拟杆菌株，其特征在于，所述狄氏副拟杆菌株在哥伦比亚血平板上培养7天，其菌落呈白色、圆形、边缘规则的相对较小菌落。
5.根据权利要求1所述的狄氏副拟杆菌株，其特征在于，所述狄氏副拟杆菌株经革兰染色后镜下呈红色、梭杆状，菌体间多呈链状排布。
6.一种如权利要求1-5任一项所述的狄氏副拟杆菌株在抑制结直肠癌细胞系增殖中的应用。
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-
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Non-Patent Citations (1)
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