CN112385842A - 一种具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及保健品技术领域，具体涉及一种具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品及其制备方法。该产品由牦牛皮胶粉、党参粉、槐花粉、茜草提取物、紫珠草提取物、三七提取物及白芨提取物组成。本发明在以牦牛皮胶粉为主原料的基础上，加入复方药材，其中，牦牛皮胶特殊分子量范围具有明显的促凝作用；另外配伍复方药材后，明显改善血象红系参数及脾脏结构，达到了调节血小板，补气养血，供给身体营养的目的，可用于血小板数量低而引起凝血障碍病人的日常调理及术后调节凝血系统的辅助产品。制备方法操作流程简单。
Description
技术领域
本发明涉及保健品技术领域，具体涉及一种具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品及其制备方法。
背景技术
正常机体中存在着凝血系统和抗凝系统两个系统，它们时刻保持着动态平衡，保证血液循环正常。这两种系统之间平衡的破坏会导致出血或血栓形成。凝血系统是人体中的重要系统，如果体内凝血系统发生障碍难以启动，就会导致死亡。
血液的凝聚由一系列复杂的化学链反应组成，而血小板在这些链反应之中作用非常重要。血小板是骨髓中的巨核细胞衍生出的直径在1-3μm的无核细胞碎片，平均寿命在一个星期左右。血小板的结构复杂，通常是盘状的，且由复杂的质膜包围。血小板虽然是无核的，但是它具有许多的功能性细胞器及颗粒，这些细胞器和颗粒如线粒体和糖原颗粒可以进行活性代谢，血小板中也包含了RNA和蛋白质，它们可以将含有的RNA翻译成蛋白质然后用于细胞的使用和分泌。
血小板活化具有积极的生理作用，比如当外界因素造成血管壁破损，血小板能迅速活化，并与血液中细胞和血浆因子相互作用形成止血栓，封闭伤口实现止血，起到保护机体的作用。此外，对于术中出血，根据出血情况大小，除了给予输注红细胞和冰冻血浆外，还可以加输冰冻血小板，从而使术后凝血功能得以迅速恢复；还有创伤事故中关键的止血环节止血材料的应用等，都是积极促进血小板的活化。目的性激活血小板，保护机体防止出血的基础，是近年来生理学领域研究的重点。
申请人前期研究成果中，对牦牛皮胶的研究已有多项授权和受理发明专利。其中，牦牛皮胶的提取、分离已经获得授权发明专利。申请人继续在前期研究成果的基础上，为进一步扩大牦牛皮的适用范围，结合了复方药材，再次加强研究牦牛皮胶的凝血功效。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品及其制备方法。
本发明一种具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品的技术方案如下：
一种具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品，由下述重量份原料组成：牦牛皮胶粉1.5～6.0份、党参粉0.5～3.0份、槐花粉0.1～0.6份、茜草提取物0.1～0.8份、紫珠草提取物0.1～1.0份、三七提取物0.5～2.0份、白芨提取物0.5～1.5份。
上述一种具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品的制备方法，具体包括如下步骤：
步骤一，牦牛皮胶粉的制备：
S1：将脱毛脱脂后的牦牛皮清洗干净，切割成5cm×5cm的块，去除表皮，清洗干净；
S2：将上述经过预处理的牦牛皮和和蒸馏水，按照1:5～20(w/v)，在温度80～90℃条件下加热4～6h，过滤后未溶解牦牛皮再次加水加热提取，合并过滤液，得到明胶溶液；
S3：将上述明胶溶液在4℃，2500～5000r/min条件下离心5～15min；
S4：收集上清液，超滤膜分离特定分子量范围牦牛皮胶液，冷冻干燥后，备用；
步骤二，党参粉的制备：党参清洗干净，晾干后粉碎至20～200目；
步骤三，槐花粉的制备：槐花清洗干净，晾干后粉碎至20～200目；
步骤四，茜草提取物的制备：
S1：制备茜草浓缩液，茜草加2～4倍量的水，浸泡0.5～1.5h后，加热提取后过滤，滤渣再加入2～4倍量的水，加热提取后过滤；合并两次滤液；加热浓缩至0.8～1.5g生药/mL，4℃冷藏，备用；
S2：取茜草浓缩液适量，加入等量的去离子水，搅拌混匀后，静置，抽滤，抽滤液备用；
S3：取经预处理过的AB-8大孔树脂200～400mL装入内径30mm玻璃层析柱中；
S4：取S2中抽滤液80～140mL作为上样液，静置吸附后，用去离子水洗脱多糖，至Molish反应呈阴性，停止水洗脱；其中Molish反应为滴加α-萘酚+浓硫酸后，紫环消失；
S5：用95％乙醇洗脱，用量为1500～3000mL；将95％乙醇洗脱液合并，旋转蒸发，回收溶剂，减压干燥，得到茜草提取物；
步骤五，紫珠草、三七、白芨提取物的制备：将紫珠草、三七、白芨三味药加2～6倍量水浸泡0.5～3h后，再加入2～6倍量水，提取1～3次，每次0.5～2h，合并滤液，冷冻干燥，备用；
步骤六，混合分装：按配方称重牦牛皮胶粉，加入步骤二和步骤三制备的党参粉和槐花粉以及步骤四和步骤五制得的茜草提取物和紫珠草、三七、白芨提取物，充分混合均匀，分装即可得到具有促凝止血功效牦牛皮胶复方产品。
进一步的，所述牦牛皮胶粉制备步骤中所用的牦牛皮为新鲜的牦牛皮；
进一步的，所述牦牛皮胶粉制备S4步骤中，超滤膜分离的特定分子量范围牦牛皮胶液为0.22μm孔径滤膜以下的胶液。
进一步的，所述牦牛皮胶粉的制备S4步骤中超滤膜分离得到的特定分子量范围牦牛皮胶液中所述牦牛皮胶的分子量为15～45kDa。
优化的，所述牦牛皮胶粉的制备S4步骤中超滤膜分离得到的特定分子量范围牦牛皮胶液中所述牦牛皮胶的分子量为15～30kDa。
进一步的，茜草提取物的制备S4步骤中静置吸附的时间为20～50min。
本发明还保护上述方法制得的具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品的应用，可用于血小板数量低而引起凝血障碍病人的日常调理及术后调节凝血系统的辅助产品。
相比于现有的技术，本发明具有如下有益效果：
本发明在以牦牛皮胶粉为主原料的基础上，加入复方药材，其中，牦牛皮胶特殊分子量范围具有明显的促凝作用；另外配伍复方药材后，明显改善血象红系参数及脾脏结构，达到了调节血小板，补气养血，供给身体营养的目的，可用于血小板数量低而引起凝血障碍病人的日常调理及术后调节凝血系统的辅助产品。制备方法操作流程简单。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品，由下述重量份原料组成：牦牛皮胶粉3.5份、党参粉0.5份、槐花粉0.1份、茜草提取物0.4份、紫珠草提取物0.1份、三七提取物0.5份、白芨提取物0.5份。
上述一种具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品的制备方法，具体包括如下步骤：
步骤一，牦牛皮胶粉的制备：
S1：将新鲜的牦牛皮，脱毛脱脂后清洗干净，切割成5cm×5cm的块，去除表皮，清洗干净；
S2：将上述经过预处理的牦牛皮和和蒸馏水，按照1:15(w/v)，在温度85℃条件下加热5h，过滤后未溶解牦牛皮再次加水加热提取，合并过滤液，得到明胶溶液；
S3：将上述明胶溶液在4℃，3000r/min条件下离心10min；
S4：收集上清液，超滤膜分离特定分子量范围牦牛皮胶液，冷冻干燥后，备用，其中，超滤膜分离的特定分子量范围牦牛皮胶液为0.22μm孔径滤膜以下的胶液，所述牦牛皮胶的分子量为15～45kDa；
步骤二，党参粉的制备：党参清洗干净，晾干后粉碎至20目；
步骤三，槐花粉的制备：槐花清洗干净，晾干后粉碎至20目；
步骤四，茜草提取物的制备：
S1：制备茜草浓缩液，茜草加2倍量的水，浸泡0.5h后，加热提取后过滤，滤渣再加入2倍量的水，加热提取后过滤；合并两次滤液；加热浓缩至1.5g生药/mL，4℃冷藏，备用；
S2：取茜草浓缩液适量，加入等量的去离子水，搅拌混匀后，静置，抽滤，抽滤液备用；
S3：取经预处理过的AB-8大孔树脂200mL装入内径30mm玻璃层析柱中；
S4：取S2中抽滤液80mL作为上样液，静置吸附35min后，用去离子水洗脱多糖，至Molish反应呈阴性，停止水洗脱；其中，Molish反应为滴加α-萘酚+浓硫酸后，紫环消失；
S5：用95％乙醇洗脱，用量为1500mL；将95％乙醇洗脱液合并，旋转蒸发，回收溶剂，减压干燥，得到茜草提取物；
步骤五，紫珠草、三七、白芨提取物的制备：将紫珠草、三七、白芨三味药加4倍量水浸泡0.5h后，再加入2倍量水，提取3次，每次0.5h，合并滤液，冷冻干燥，备用；
步骤六，混合分装：按配方称重牦牛皮胶粉，加入步骤二和步骤三制备的党参粉和槐花粉以及步骤四和步骤五制得的茜草提取物和紫珠草、三七、白芨提取物，充分混合均匀，分装即可得到具有促凝止血功效牦牛皮胶复方产品。
上述方法制得的具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品的应用，可用于血小板数量低而引起凝血障碍病人的日常调理及术后调节凝血系统的辅助产品。
上述实施例制得的具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品的功效实验：
SPF级KM小鼠，体质量18～22g，雌雄各半。所有动物饲养于于恒温环境(25±2℃)下，相对湿度55±5％，昼夜正常循环，饮食自由，实验前至少适应环境1周；实验前，所有动物禁食12h。
将KM小鼠随机分为4组，即为空白对照组，牦牛皮胶复方产品给药组(高、中、低三组)，连续灌胃给药7d，于末次给药30min后，进行出血时间以及小鼠血清中P-选择素的测定(详见表1和表2)。
表1 不同剂量牦牛皮胶复方产品对小鼠出血时间的影响(n＝10,
)
注：与空白组相比*P<0.05，**P<0.01。
表2 不同剂量牦牛皮胶复方产品对小鼠血清中P-选择素含量的影响(n＝10,
)
注：与空白组相比*P<0.05，**P<0.01。
实施例2
一种具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品，由下述重量份原料组成：牦牛皮胶粉6.0份、党参粉2.0份、槐花粉0.6份、茜草提取物0.1份、紫珠草提取物0.5份、三七提取物0.8份、白芨提取物1.0份。
上述一种具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品的制备方法，具体包括如下步骤：
步骤一，牦牛皮胶粉的制备：
S1：将新鲜的牦牛皮，脱毛脱脂后清洗干净，切割成5cm×5cm的块，去除表皮，清洗干净；
S2：将上述经过预处理的牦牛皮和和蒸馏水，按照1:5(w/v)，在温度80℃条件下加热4h，过滤后未溶解牦牛皮再次加水加热提取，合并过滤液，得到明胶溶液；
S3：将上述明胶溶液在4℃，2500r/min条件下离心15min；
S4：收集上清液，超滤膜分离特定分子量范围牦牛皮胶液，冷冻干燥后，备用，其中，超滤膜分离的特定分子量范围牦牛皮胶液为0.22μm孔径滤膜以下的胶液，所述牦牛皮胶的分子量为15～45kDa；
步骤二，党参粉的制备：党参清洗干净，晾干后粉碎至100目；
步骤三，槐花粉的制备：槐花清洗干净，晾干后粉碎至90目；
步骤四，茜草提取物的制备：
S1：制备茜草浓缩液，茜草加3倍量的水，浸泡1.0h后，加热提取后过滤，滤渣再加入3倍量的水，加热提取后过滤；合并两次滤液；加热浓缩至1.2g生药/mL，4℃冷藏，备用；
S2：取茜草浓缩液适量，加入等量的去离子水，搅拌混匀后，静置，抽滤，抽滤液备用；
S3：取经预处理过的AB-8大孔树脂300mL装入内径30mm玻璃层析柱中；
S4：取S2中抽滤液100mL作为上样液，静置吸附20min后，用去离子水洗脱多糖，至Molish反应呈阴性，停止水洗脱；其中，Molish反应为滴加α-萘酚+浓硫酸后，紫环消失；
S5：用95％乙醇洗脱，用量为2000mL；将95％乙醇洗脱液合并，旋转蒸发，回收溶剂，减压干燥，得到茜草提取物；
步骤五，紫珠草、三七、白芨提取物的制备：将紫珠草、三七、白芨三味药加2倍量水浸泡2h后，再加入4倍量水，提取2次，每次1h，合并滤液，冷冻干燥，备用；
步骤六，混合分装：按配方称重牦牛皮胶粉，加入步骤二和步骤三制备的党参粉和槐花粉以及步骤四和步骤五制得的茜草提取物和紫珠草、三七、白芨提取物，充分混合均匀，分装即可得到具有促凝止血功效牦牛皮胶复方产品。
上述方法制得的具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品的应用，可用于血小板数量低而引起凝血障碍病人的日常调理及术后调节凝血系统的辅助产品。
上述实施例制得的具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品的功效实验：
SD大鼠体质量180～220g，雌雄各半。所有动物饲养于于恒温环境(25±2℃)下，相对湿度55±5％，昼夜正常循环，饮食自由，实验前至少适应环境1周；实验前，所有动物禁食12h。
将SD大鼠随机分为4组，即为空白对照组，牦牛皮胶复方产品给药组(高、中、低三组)，连续灌胃给药7d，于末次给药30min后，采用10％水合氯醛麻醉大鼠，心脏取血，前2mL采用3.8％柠檬酸钠抗凝，1000r/min离心10min制备富含血小板血浆(PRP)，后1mL加入含有3.8％柠檬酸钠(1:9，v/v)的试管中，于2h内完成收集及Gp Ia/Ⅱa、GpⅡb/Ⅲa的分析测定(详见表3)。
表3 不同剂量牦牛皮胶复方产品对大鼠血小板活化作用的影响(n＝8,
)
注：与空白组相比*P<0.05，**P<0.01。
实施例3
一种具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品，由下述重量份原料组成：牦牛皮胶粉1.5份、党参粉3.0份、槐花粉0.4份、茜草提取物0.8份、紫珠草提取物1.0份、三七提取物2.0份、白芨提取物1.5份。
上述一种具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品的制备方法，具体包括如下步骤：
步骤一，牦牛皮胶粉的制备：
S1：将新鲜的牦牛皮，脱毛脱脂后清洗干净，切割成5cm×5cm的块，去除表皮，清洗干净；
S2：将上述经过预处理的牦牛皮和和蒸馏水，按照1:20(w/v)，在温度90℃条件下加热6h，过滤后未溶解牦牛皮再次加水加热提取，合并过滤液，得到明胶溶液；
S3：将上述明胶溶液在4℃，5000r/min条件下离心5min；
S4：收集上清液，超滤膜分离特定分子量范围牦牛皮胶液，冷冻干燥后，备用，其中，超滤膜分离的特定分子量范围牦牛皮胶液为0.22μm孔径滤膜以下的胶液，所述牦牛皮胶的分子量为15～45kDa；
步骤二，党参粉的制备：党参清洗干净，晾干后粉碎至200目；
步骤三，槐花粉的制备：槐花清洗干净，晾干后粉碎至200目；
步骤四，茜草提取物的制备：
S1：制备茜草浓缩液，茜草加4倍量的水，浸泡1.5h后，加热提取后过滤，滤渣再加入4倍量的水，加热提取后过滤；合并两次滤液；加热浓缩至0.8g生药/mL，4℃冷藏，备用；
S2：取茜草浓缩液适量，加入等量的去离子水，搅拌混匀后，静置，抽滤，抽滤液备用；
S3：取经预处理过的AB-8大孔树脂400mL装入内径30mm玻璃层析柱中；
S4：取S2中抽滤液140mL作为上样液，静置吸附50min后，用去离子水洗脱多糖，至Molish反应呈阴性，停止水洗脱；其中，Molish反应为滴加α-萘酚+浓硫酸后，紫环消失；
S5：用95％乙醇洗脱，用量为3000mL；将95％乙醇洗脱液合并，旋转蒸发，回收溶剂，减压干燥，得到茜草提取物；
步骤五，紫珠草、三七、白芨提取物的制备：将紫珠草、三七、白芨三味药加6倍量水浸泡3h后，再加入6倍量水，提取1次，每次2h，合并滤液，冷冻干燥，备用；
步骤六，混合分装：按配方称重牦牛皮胶粉，加入步骤二和步骤三制备的党参粉和槐花粉以及步骤四和步骤五制得的茜草提取物和紫珠草、三七、白芨提取物，充分混合均匀，分装即可得到具有促凝止血功效牦牛皮胶复方产品。
上述方法制得的具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品的应用，可用于血小板数量低而引起凝血障碍病人的日常调理及术后调节凝血系统的辅助产品。
上述实施例制得的具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品的功效实验：
SD大鼠体质量180～220g，雌雄各半。所有动物饲养于于恒温环境(25±2℃)下，相对湿度55±5％，昼夜正常循环，饮食自由，实验前至少适应环境1周；实验前，所有动物禁食12h。
将SD大鼠随机分为4组，即为空白对照组，牦牛皮胶复方产品给药组(高、中、低三组)，连续灌胃给药7d，于末次给药30min后，采用10％水合氯醛麻醉大鼠，心脏取血，前2mL采用3.8％柠檬酸钠抗凝，1000r/min离心10min制备富含血小板血浆(PRP)，后1mL加入含有3.8％柠檬酸钠(1:9，v/v)的试管中，于2h内完成收集及大鼠血小板膜蛋白CD62P活化的分析测定(详见表4)。
表4 不同剂量牦牛皮胶复方产品对大鼠血小板CD62P的影响(n＝8,
)
注：与空白组相比*P<0.05，**P<0.01。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (8)
1.一种具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品，其特征在于，由下述重量份原料组成：牦牛皮胶粉1.5～6.0份、党参粉0.5～3.0份、槐花粉0.1～0.6份、茜草提取物0.1～0.8份、紫珠草提取物0.1～1.0份、三七提取物0.5～2.0份、白芨提取物0.5～1.5份。
2.根据权利要求1所述的一种具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品，其特征在于，具体包括如下步骤：
步骤一，牦牛皮胶粉的制备：
S1：将脱毛脱脂后的牦牛皮清洗干净，切割成5cm×5cm的块，去除表皮，清洗干净；
S2：将上述经过预处理的牦牛皮和和蒸馏水，按照1:5～20(w/v)，在温度80～90℃条件下加热4～6h，过滤后未溶解牦牛皮再次加水加热提取，合并过滤液，得到明胶溶液；
S3：将上述明胶溶液在4℃，2500～5000r/min条件下离心5～15min；
S4：收集上清液，超滤膜分离特定分子量范围牦牛皮胶液，冷冻干燥后，备用；
步骤二，党参粉的制备：党参清洗干净，晾干后粉碎至20～200目；
步骤三，槐花粉的制备：槐花清洗干净，晾干后粉碎至20～200目；
步骤四，茜草提取物的制备：
S1：制备茜草浓缩液，茜草加2～4倍量的水，浸泡0.5～1.5h后，加热提取后过滤，滤渣再加入2～4倍量的水，加热提取后过滤；合并两次滤液；加热浓缩至0.8～1.5g生药/mL，4℃冷藏，备用；
S2：取茜草浓缩液适量，加入等量的去离子水，搅拌混匀后，静置，抽滤，抽滤液备用；
S3：取经预处理过的AB-8大孔树脂200～400mL装入内径30mm玻璃层析柱中；
S4：取S2中抽滤液80～140mL作为上样液，静置吸附后，用去离子水洗脱多糖，至Molish反应呈阴性，停止水洗脱；
S5：用95％乙醇洗脱，用量为1500～3000mL；将95％乙醇洗脱液合并，旋转蒸发，回收溶剂，减压干燥，得到茜草提取物；
步骤五，紫珠草、三七、白芨提取物的制备：将紫珠草、三七、白芨三味药加2～6倍量水浸泡0.5～3h后，再加入2～6倍量水，提取1～3次，每次0.5～2h，合并滤液，冷冻干燥，备用；
步骤六，混合分装：按配方称重牦牛皮胶粉，加入步骤二和步骤三制备的党参粉和槐花粉以及步骤四和步骤五制得的茜草提取物和紫珠草、三七、白芨提取物，充分混合均匀，分装即可得到具有促凝止血功效牦牛皮胶复方产品。
3.根据权利要求2所述的一种具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品，其特征在于，所述牦牛皮胶粉制备步骤中所用的牦牛皮为新鲜的牦牛皮。
4.根据权利要求2所述的一种具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品，其特征在于，所述牦牛皮胶粉制备S4步骤中，超滤膜分离的特定分子量范围牦牛皮胶液为0.22μm孔径滤膜以下的胶液。
5.根据权利要求1所述的一种具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品，其特征在于，所述牦牛皮胶粉的制备S4步骤中超滤膜分离得到的特定分子量范围牦牛皮胶液中所述牦牛皮胶的分子量为15～45kDa。
6.根据权利要求5所述的一种具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品，其特征在于，所述牦牛皮胶粉的制备S4步骤中超滤膜分离得到的特定分子量范围牦牛皮胶液中所述牦牛皮胶的分子量为15～30kDa。
7.根据权利要求1所述的一种具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品，其特征在于，所述茜草提取物的制备S4步骤中静置吸附的时间为20～50min。
8.权利要求2-7任意一项所述制备方法制得的具有促凝止血功效的牦牛皮胶复方产品的应用，可用于血小板数量低而引起凝血障碍病人的日常调理及术后调节凝血系统的辅助产品。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20210223 |