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CN112384227A - 含有不可消化寡糖的发酵配方物 - Google Patents

含有不可消化寡糖的发酵配方物 Download PDF

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CN112384227A
CN112384227A CN201980012669.3A CN201980012669A CN112384227A CN 112384227 A CN112384227 A CN 112384227A CN 201980012669 A CN201980012669 A CN 201980012669A CN 112384227 A CN112384227 A CN 112384227A
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CN
China
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oligosaccharides
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lactic acid
flora
fermented
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CN201980012669.3A
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S·蒂姆森
A·R·奥泽尔
J·科诺尔
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Nutricia NV
Original Assignee
Nutricia NV
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Abstract

给予包含不可消化寡糖的部分发酵的婴儿配方物使得肠道菌群组成与母乳喂养婴儿的肠道菌群组成更相似。

Description

含有不可消化寡糖的发酵配方物
技术领域
本发明涉及用于改善肠道菌群的婴幼儿营养领域。
背景技术
人们普遍认为新生婴儿的最佳营养是人乳。当母亲无法母乳喂养其婴儿或选择不进行母乳喂养时，基于成熟人乳组成形成的婴儿配方物(IF)被认为是最佳的替代物。提高婴儿配方物的质量的研究不一定是为了模拟人乳的精确组成，而是为了实现超出在母乳喂养婴儿中仅观察到营养方面的功能效果。
人体肠道拥有一个复杂的微生物生态系统，肠道菌群已被认为是我们人类生理学必不可少的部分。在成年人中，肠道菌群被认为是一个稳定的生态系统，因此，在幼年时，微生物定植过程(与胃肠道本身的成熟密切相关)可以认为是健康发展的基本步骤。可能在幼年出现的几种环境因素已显示对肠道菌群及其活动具有长期影响，从而增加了晚年中患病的风险。幼年的营养是影响肠道菌群发育的主要因素。双歧杆菌菌种(Bifidobacteriumspecies)通常在母乳喂养婴儿的肠道菌群中占主导地位，而在常规配方物喂养的婴儿中通常观察到富含厚壁菌门成分(Firmicutes members)的肠道菌群。
补充有益生元scGOS/lcFOS混合物的配方物已被证明可调节肠道菌群组成使其富含双歧杆菌的群落(Knol等人，2005，JPGN 40：36-42)。当将这种scGOS/lcFOS混合物加入使用短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)和嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)部分发酵的婴儿配方乳中时，已被证明其对肠道菌群的影响保持不变(Huet，F.等人，2016，JPGN 63：e43-53)。
WO 2009/151330公开了喂养通过剖腹产分娩的婴儿的方法，以及给予通过剖腹产分娩的婴儿的组合物，特别是由产乳酸细菌发酵乳、乳清、乳清蛋白、乳清蛋白水解物、酪蛋白、酪蛋白水解产物和/或乳糖获得的产品的用途。因此可刺激所述婴儿的肠道菌群的快速定植。
上述现有技术文献公开了调节特定菌群分类单元的干预措施，对其进行了针对性的分析。例如，使得双歧杆菌增多或梭状芽胞杆菌减少，但并未关注整个菌群。
WO 2015/033304公开了在健康成年人中给予益生菌副干酪乳杆菌DG降低了菌群中布劳特氏菌属(Blautia)的数量。
WO 2017/021476涉及一种包含岩藻糖基化的和N-乙酰化的寡糖的营养组合物，与用常规营养组合物喂养的婴儿相比，该营养组合物促进或诱导整体肠道菌群，使其更接近仅用人母乳喂养婴儿的整体肠道菌群。
然而，需要营养组合物用于进一步改善婴幼儿的整个肠道菌群，甚至与母乳喂养婴儿的肠道菌群更相似。
发明内容
发明人采用了数项独立的临床试验，通过分子技术(包括非靶向16S rRNA基因扩增子测序)对多种测试和对照配方物喂养的婴儿的菌群进行了分析。该技术检验了对整个微生物群的影响。发现试验配方物(即，部分发酵且包含不可消化寡糖)喂养的婴儿的肠道菌群与母乳喂养的参照婴儿组的菌群更为相似。与包含不可消化寡糖但未发酵的对照配方物喂养的婴儿的菌群相比、与部分发酵但不含不可消化寡糖的对照配方物喂养的婴儿的菌群相比，肠道菌群与母乳喂养婴儿的菌群更为相似，且与不含不可消化寡糖的常规非发酵配方物喂养的婴儿的菌群相比，观察到的差异最大。这表明发酵配方物和不可消化寡糖的组合对婴幼儿肠道菌群的作用进一步改善。更具体而言，发现部分发酵且包含不可消化寡糖的配方物喂养的婴儿的菌群与母乳喂养婴儿的菌群更相似，特别是发现α-多样性较低，具有较低丰度的布劳特氏菌属和/或丹毒丝菌目(Erysipelotrichales)和/或具有增加丰度的乳酸菌。
具体实施方式
因此，本发明涉及一种用于促进年龄在36个月以下的人类受试者的肠道菌群发育的方法，该肠道菌群与未由产乳酸细菌至少部分发酵且不包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐和/或不包含不可消化寡糖的营养组合物喂养的同龄人类受试者的肠道菌群相比，其组成更接近于人乳喂养的同龄人类受试者的肠道菌群，所述方法包括给予由产乳酸细菌至少部分发酵的营养组合物，其中所述营养组合物包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐，且其中所述营养组合物包含基于干重计2.5至15重量％的不可消化寡糖。
在一个实施方案中，本发明的方法可视为用于促进肠道菌群发育的非医疗方法。
本发明也可描述为发酵组合物和不可消化寡糖用于制备由产乳酸细菌至少部分发酵的营养组合物的用途，其中所述营养组合物包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐，且其中所述营养组合物包含基于干重计2.5至15重量％的不可消化寡糖，用于促进年龄在36个月以下的人类受试者的肠道菌群的发育，该肠道菌群与未由产乳酸细菌至少部分发酵且不包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐和/或不包含不可消化寡糖的营养组合物喂养的同龄人类受试者的肠道菌群相比，其组成更接近于人乳喂养的同龄人类受试者的肠道菌群。
本发明也可描述为由产乳酸细菌至少部分发酵的营养组合物，其中所述营养组合物包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐，且其中所述营养组合物包含基于干重计2.5至15重量％的不可消化寡糖，用于促进年龄在36个月以下的人类受试者的肠道菌群的发育，所述肠道菌群与未由产乳酸细菌至少部分发酵且不包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐和/或不包含不可消化寡糖的营养组合物喂养的同龄人类受试者的肠道菌群相比，其组成更接近于人乳喂养的同龄人类受试者的肠道菌群。
本发明还涉及一种用于预防和/或治疗年龄在36个月以下的人类受试者的肠道菌群失调的方法，所述方法包括给予由产乳酸细菌至少部分发酵的营养组合物，其中所述营养组合物包含基于干重计总共0.02至1.5重量的乳酸和乳酸盐且其中所述营养组合物包含基于干重计2.5至15重量％的不可消化寡糖。
本发明还可描述为发酵组合物和不可消化寡糖用于制备由产乳酸细菌至少部分发酵的营养组合物的用途，其中所述营养组合物包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐，且其中所述营养组合物包含基于干重计2.5至15重量％的不可消化寡糖，用于预防和/或治疗年龄在36个月以下的人类受试者的肠道菌群失调。
本发明还可描述为由产乳酸细菌至少部分发酵的营养组合物，其用于预防和/或治疗年龄在36个月以下的人类受试者的肠道菌群失调，其中所述营养组合物包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐，且其中所述营养组合物包含基于干重计2.5至15重量％的不可消化寡糖。
发酵组合物
本发明的方法或用途中的营养组合物(下文也称为本发明的营养组合物，或本发明的营养组合物或最终营养组合物)是至少部分发酵的。部分发酵的营养组合物至少部分地包含由产乳酸细菌发酵的组合物。结果表明，最终营养组合物中存在发酵组合物，经给予时使得肠道菌群与母乳喂养婴儿的菌群更为相似。
优选在营养组合物的制备过程中进行发酵。优选地，由于发酵后的热灭活或通过其他方式灭活，营养组合物在最终产品中不含大量的活细菌。优选地，发酵组合物是乳衍生产品，其为由产乳酸细菌发酵的乳底物，其中乳底物包括至少一种选自以下的乳底物：乳、乳清、乳清蛋白、乳清蛋白水解物、酪蛋白、酪蛋白水解物或其混合物。合适地，包含发酵组合物和不可消化寡糖的营养组合物及其制备方法记载于WO 2009/151330、WO 2009/151331和WO 2013/187764中。
发酵组合物优选包含细菌细胞碎片，如糖蛋白、糖脂、肽聚糖、脂磷壁酸(LTA)、脂蛋白、核苷酸和/或英膜多糖。有利的是将包含灭活细菌和/或细胞碎片的发酵组合物直接用作最终营养产品的一部分，因为这将导致更高浓度的细菌细胞碎片。当使用产乳酸细菌的商业制剂时，通常洗涤这些制剂，并将材料与包含细菌细胞碎片的含水生长培养基分离，从而减少或消除细菌细胞碎片的存在。此外，在产乳酸细菌与乳底物的发酵和/或其他相互作用时，可形成另外的生物活性化合物，例如短链脂肪酸、生物活性肽和/或寡糖，和其他代谢物，其也使得肠道菌群与母乳喂养婴儿的菌群更为相似。在发酵过程中由产乳酸细菌或其他食品级细菌产生的这种生物活性化合物也可称为益生素(post-biotics)。认为包含此类益生素的组合物有利地更接近母乳，因为母乳不是完全合成的配方物，而是包含代谢物、细菌细胞、细胞碎片等。因此，与在肠道菌群上不具有或仅具有产乳酸细菌的非发酵乳衍生产品相比，该发酵组合物，特别是发酵乳衍生产品被认为具有改善的效果。
优选地，最终营养组合物包含基于干重计5至97.5重量％、更优选10至90重量％、更优选20至80重量％、甚至更优选25至60重量％的发酵组合物。作为表示最终营养组合物至少部分地包含发酵组合物的方式以及表示发酵程度的方式，可以采用最终营养组合物中乳酸和乳酸盐的总水平，因为这是产乳酸细菌在发酵时产生的代谢终产物。本发明的最终营养组合物包含基于组合物的干重计总共0.02至1.5重量％、更优选0.05至1.0重量％、甚至更优选0.1至0.5重量％的乳酸和乳酸盐。优选地，总共至少50重量％、甚至更优选至少90重量％的乳酸和乳酸盐呈L(+)-异构体的形式。因此，在一个实施方案中，L(+)-乳酸和L(+)-乳酸盐的总和大于50重量％、更优选大于90重量％，基于乳酸和乳酸盐的总和计。在本文中，L(+)-乳酸盐和L(+)-乳酸也称为L-乳酸盐和L-乳酸。
在基于组学的技术时代，越来越多的复杂工具可用于研究不同分子水平的肠道菌群。在过去的十年中，研究肠道菌群最广泛使用的工具是基于细菌16S rRNA基因序列的(部分)测序和确定存在哪些细菌谱系。但是，通过基于DNA的方法进行肠道菌群分析并不能直接了解肠道生态系统的功能水平。
用于产生发酵成分的产乳酸细菌
据猜测要获得发酵组合物的有益效果，不取决于用于发酵的产乳酸细菌的确切菌种。用于制备发酵成分、特别是用于发酵乳底物的产乳酸细菌优选以单一培养物或混合培养物的形式提供。产乳酸细菌由以下属组成：双歧杆菌属(Bifidobacterium)、乳杆菌属(Lactobacillus)、肉杆菌属(Carnobacterium)、肠球菌属(Enterococcus)、乳球菌属(Lactococcus)、明串珠菌属(Leuconostoc)、酒球菌属(Oenococcus)、片球菌属(Pediococcus)、链球菌属(Streptococcus)、四联球菌属(Tetragenococcus)、漫游球菌属(Vagococcus)和魏斯氏菌属(Weissella)。优选地，用于发酵的产乳酸细菌包括双歧杆菌属和/或链球菌属的细菌。
优选地，链球菌是嗜热链球菌(S.thermophilus)菌株。合适的嗜热链球菌菌株的选择记载于EP 778885的实施例2和FR 2723960的实施例1中。在本发明的另一个优选的实施方案中，营养组合物包含102-105cfu嗜热链球菌活细菌/g最终营养组合物的干重，优选最终营养组合物包含103-104嗜热链球菌活细菌/g干重。
就本发明的目的而言，用于制备发酵成分的优选的嗜热链球菌菌株已被Compagnie Gervais Danone保藏在由Institut Pasteur，25 rue du Docteur Roux，Paris，France运营的Collection Nationale de Cultures de Microorganismes(CNCM)处，于1995年8月23日保藏的登记号为I-1620且于1994年8月25日保藏的登记号为I-1470。其他嗜热链球菌菌株可商购获得。
由于嗜热链球菌不能在胃中存活，因此不被视为益生菌。
双歧杆菌为革兰氏阳性厌氧杆状细菌。就本发明的目的而言，当与相应的双歧杆菌菌种的模式菌株相比时，用于制备发酵成分的优选双歧杆菌菌种优选地具有至少95％的16S rRNA序列的同一性，更优选至少97％的同一性，如在关于该主题的手册例如Sambrook，J.，Fritsch，E.F.，和Maniatis，T.(1989)，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbor(N.Y.)Laboratory Press中所定义。优选使用的双歧杆菌还由Scardovi，V.记载于Genus Bifidobacterium，第1418-1434页，记载于Bergey’s manual ofsystematic Bacteriology.第2卷.Sneath，P.H.A.，N.S.Mair，M.E.Sharpe和J.G.Holt(编辑).Baltimore：Williams&Wilkins，1986.第635页中。优选地，用于发酵的产乳酸细菌包括或者为至少一种选自以下的双歧杆菌：短双歧杆菌(B.breve)、婴儿双歧杆菌(B.infantis)、两歧双歧杆菌(B.bifidum)、链状双歧杆菌(B.catenulatum)、青春双歧杆菌(B.adolescentis)、嗜热双歧杆菌(B.thermophilum)、没食子双歧杆菌(B.gallicum)、动物双歧杆菌(B.animalis)或乳双歧杆菌(B.lactis)、角双歧杆菌(B.angulatum)、假小链双歧杆菌(B.pseudocatenulatum)、嗜酸嗜热双歧杆菌(B.thermacidophilum)和长双歧杆菌(B.longum)，更优选短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、两歧双歧杆菌、链状双歧杆菌、长双歧杆菌，更优选长双歧杆菌和短双歧杆菌，甚至更优选短双歧杆菌，更优选选自以下的短双歧杆菌：短双歧杆菌Bb-03(Rhodia/Danisco)、短双歧杆菌M-16V(Morinaga)、短双歧杆菌R0070(Institute Rosell，Lallemand)、短双歧杆菌BR03(Probiotical)、短双歧杆菌BR92(CellBiotech)DSM 20091、LMG 11613和保藏在法国巴黎CNCM的短双歧杆菌I-2219。最优选地，短双歧杆菌为短双歧杆菌M-16V(Morinaga)或短双歧杆菌I-2219，甚至更优选短双歧杆菌I-2219。
最优选地，本发明的营养组合物包含由产乳酸细菌发酵的发酵组合物，所述产乳酸细菌包括短双歧杆菌和嗜热链球菌(S.thermophilus)两者。在一个实施方案中，产乳酸细菌发酵是通过嗜热链球菌和短双歧杆菌的发酵。在一个实施方案中，最终营养组合物包含发酵组合物，其中产乳酸细菌在发酵后被灭活。
优选地，发酵组合物不通过保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)发酵。保加利亚乳杆菌发酵的产品被认为不适合婴儿，因为在幼小婴儿中，将D-乳酸盐转化为丙酮酸盐的特异性脱氢酶的活性远低于转化L-乳酸盐的脱氢酶。
优选地，本发明的营养组合物包含灭活的产乳酸细菌和/或源自产乳酸细菌的细菌碎片，其获自基于每g最终组合物的干重计大于1×104cfu，更优选1×105cfu，甚至更优选1×106cfu的产乳酸细菌。优选地，灭活细菌或细菌碎片获自基于每g最终组合物的干重计小于1×1012cfu，更优选1×1010cfu，甚至更优选1×109cfu的产乳酸细菌。灭活的乳酸菌和cfu的相关性可以通过本领域已知的分子技术或通过检查生产过程来确定。
发酵过程
优选地，发酵组合物是乳衍生产品，其为由产乳酸细菌发酵的乳底物，所述乳底物包含至少一种选自以下的乳底物：乳、乳清、乳清蛋白、乳清蛋白水解物、酪蛋白、酪蛋白水解物或其混合物。待发酵的乳衍生产品或乳底物适合存在于含水介质中。待发酵的乳底物包含至少一种选自以下的乳底物：乳、乳清、乳清蛋白、乳清蛋白水解物、酪蛋白、酪蛋白水解物或其混合物。乳可为全脂乳、半脱脂乳和/或脱脂乳。优选地，待发酵的乳底物包括脱脂乳。乳清可为甜乳清和/或酸乳清。优选地，乳清以3至80g干重/L含有乳底物的含水培养基的浓度存在，更优选40至60g/L。优选地，乳清蛋白水解物以2至80g干重/L含有乳底物的含水培养基存在，更优选5至15g/L。优选地，乳糖以5至50g干重/L含水底物存在，更优选1至30g/L。优选地，含有乳底物的含水培养基包含缓冲盐，以将pH保持在所需范围内。优选使用磷酸二氢钠或磷酸二氢钾作为缓冲盐，优选以0.5至5g/L、更优选1.5至3g/L使用。优选地，含有乳底物的含水培养基包含半胱氨酸，其量为0.1至0.5g/L含水底物，更优选0.2至0.4g/L。半胱氨酸的存在导致底物具有低的氧化还原电位，这有利于产乳酸细菌、特别是双歧杆菌的活性。优选地，含有乳底物的含水培养基包含酵母提取物，其量为0.5至5g/L含有乳底物的含水培养基，更优选1.5至3g/L。酵母提取物是产乳酸细菌的酶辅因子和生长因子的丰富来源。酵母提取物的存在将增强产乳酸细菌的发酵。
合适地，在发酵步骤之前对乳底物、特别是含有乳底物的含水培养基进行巴氏灭菌，以消除不需要的活细菌的存在。合适地，在发酵后对产物进行巴氏灭菌，以使酶失活。合适地，酶失活在75℃下进行3分钟。合适地，含有乳底物的含水培养基在发酵前均质化和/或乳衍生产品在发酵后均质化。均质化导致更稳定的底物和/或发酵产物，尤其是在脂肪的存在下。
接种密度优选为1×102至5×1010、优选1×104至5×109cfu产乳酸细菌/ml含有乳底物的含水培养基，更优选为1×107至1×109cfu产乳酸细菌/ml含有乳底物的含水培养基。发酵后的最终细菌密度优选为1×103至1×1010、更优选1×104至1×109cfu/ml含有乳底物的含水培养基。
发酵优选在约20℃至50℃、更优选30℃至45℃、甚至更优选约37℃至42℃的温度下进行。产乳酸细菌、更特别是乳酸菌和/或双歧杆菌的生长和/或活性的最佳温度为37℃至42℃。
温育优选在4至8、更优选6至7.5的pH下进行。所述pH不会引起蛋白质沉淀和/或不好的味道，同时产乳酸细菌如乳酸菌和/或双歧杆菌能够使乳底物发酵。
温育时间优选为10分钟至48小时，优选2小时至24小时，更优选4小时至12小时。足够长的时间使得能够在充分或较大程度上进行发酵并同时产生免疫原性细胞碎片如糖蛋白、糖脂、肽聚糖、脂磷壁酸(LTA)、鞭毛、脂蛋白、DNA和/或英膜多糖和代谢物(益生素)，然而出于经济原因，温育时间不需要太长。
优选地，将乳衍生产品或乳底物、优选脱脂乳进行巴氏灭菌，冷却，并利用一种或多种产乳酸细菌株、优选嗜热链球菌菌株发酵至一定程度的酸度，在所述酸度下冷却发酵产物并储存。优选地，以类似方式使用一种或多种用于发酵的双歧杆菌菌种制备第二乳衍生产品。随后，优选将两种发酵产物混合在一起并与构成婴儿配方物的除脂肪组分之外的其他组分混合。优选地，将混合物预热，然后在生产线上(in-line)加入脂肪，均质化，巴氏灭菌并干燥。或者，在同时具有双歧杆菌(优选短双歧杆菌)和嗜热链球菌的发酵罐中进行发酵。
制备适用于本发明目的的发酵组合物的方法本身是已知的。EP 778885——通过引用的方式纳入本文——在实施例7中具体公开了一种制备发酵成分的合适方法。FR2723960——通过引用的方式纳入本文——在实施例6中具体公开了一种制备发酵成分的合适方法。简而言之，将包含乳糖和任选地其他常量营养素(如脂肪(优选植物脂肪)、酪蛋白、乳清蛋白、维生素和/或矿物质等)的乳底物、优选巴氏灭菌的乳底物浓缩至例如15至50％的干物质，然后用嗜热链球菌(S.thermophilus)接种，例如用含有106至1010个细菌/ml的5％培养物接种。优选地，所述乳底物包含乳蛋白肽。发酵的温度和持续时间如上所述。合适地，在发酵之后，可对发酵成分进行巴氏灭菌或杀菌，并且例如进行喷雾干燥或冻干，以提供一种适于在最终产品中进行配制的形式。
制备待用于本发明的营养组合物中的发酵组合物的优选方法公开于WO 01/01785中，更具体地公开于实施例1和2中。制备待用于本发明的营养组合物中的发酵组合物的优选方法记载于WO 2004/093899中，更具体地记载于实施例1中。
在发酵组合物中产乳酸细菌的活细胞在发酵后优选通过例如灭活和/或物理去除被除去。优选使细胞灭活。优选地，在乳底物发酵之后将产乳酸细菌热灭活。优选的热灭活方法是(闪蒸)巴氏灭菌、杀菌、超高温处理、高温/短时热处理和/或在细菌不能存活的温度下喷雾干燥。细胞碎片优选通过热处理获得。通过所述热处理使得优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少99％的活的微生物灭活。优选地，发酵的营养组合物包含小于1×105菌落形成单位(cfu)的活产乳酸细菌/g干重。热处理优选在70至180℃、优选80至150℃的温度下进行优选约3分钟至2小时，优选在80至140℃的温度下进行5分钟至40分钟。产乳酸细菌的灭活有利地导致较少的后酸化和更安全的产品。当将营养组合物给予婴儿或幼儿时，这是特别有利的。合适地，在发酵之后，可对发酵成分进行巴氏灭菌或杀菌，并且例如进行喷雾干燥或冻干，以提供一种适于在最终产品中进行配制的形式。
不可消化寡糖
本发明的营养组合物包含不可消化寡糖且优选包含至少两种不同的不可消化寡糖，特别是两种不同来源的不可消化寡糖。不可消化寡糖的存在已被证明改善了菌群，使其与母乳喂养婴儿的菌群更加相似。因此，不可消化寡糖和发酵组合物二者的存在，特别是通过与产乳酸细菌发酵获得的乳衍生产品的协同作用，有利地使得总体菌群与主要或完全由母乳喂养的婴儿的菌群更加类似。
本文所用的术语“寡糖”是指聚合度(DP)为2至250、优选DP为2至100、更优选2至60、甚至更优选2至10的糖类。如果本发明的营养组合物包含DP为2至100的寡糖，则这导致可含有DP为2至5、DP为50至70和DP为7至60的寡糖的组合物。本发明中使用的术语“不可消化寡糖”是指不通过存在于人上消化道(如小肠和胃)中的酸或消化酶的作用而在肠道中被消化，但优选通过人肠道菌群发酵的寡糖。例如，蔗糖、乳糖、麦芽糖和麦芽糖糊精被认为是可消化的。
优选地，本发明的不可消化寡糖是可溶的。当提及多糖、纤维或寡糖时，本文所用的术语“可溶的”意指根据L.Prosky等人，J.Assoc.Off.Anal.Chem.71，1017-1023(1988)记载的方法，所述物质至少是可溶的。
在本发明的方法或用途中，本发明的营养组合物中包含的不可消化寡糖优选包括不可消化寡糖的混合物。不可消化寡糖优选选自低聚果糖，例如菊粉；不可消化糊精；低聚半乳糖，例如反式低聚半乳糖；低聚木糖、阿拉伯寡糖(arabino-oligosaccharide)、阿拉伯低聚半乳糖(arabinogalacto-oligosaccharide)、低聚葡萄糖(gluco-oligosaccharide)、低聚龙胆糖(gentio-oligosaccharide)、葡甘露寡糖(glucomanno-oligosaccharide)、半乳甘露寡糖(galactomannooligosaccharide)、甘露寡糖、低聚异麦芽糖、黑曲霉寡糖(nigero-oligosaccharide)、葡甘露寡糖(glucomanno-oligosaccharide)、壳寡糖(chito-oligosaccharide)、大豆低聚糖(soy oligosaccharide)、糖醛酸寡糖(uronic acidoligosaccharide)及其混合物。此类寡糖具有许多生化特性，并且具有类似的功能优势，包括改善菌群。还应理解的是，一些不可消化的寡糖以及优选地某些混合物具有甚至进一步改善的效果。因此，更优选地，不可消化寡糖选自低聚果糖，如菊粉；低聚半乳糖，如β-低聚半乳糖；及其混合物，甚至更优选β-低聚半乳糖和/或菊粉，最优选β-低聚半乳糖。在本发明的营养组合物的一个实施方案中，不可消化寡糖选自低聚半乳糖、低聚果糖及其混合物，更优选β-低聚半乳糖、低聚果糖及其混合物。
不可消化寡糖优选选自β-低聚半乳糖、α-低聚半乳糖和半乳聚糖(galactan)。根据更优选的实施方案，不可消化寡糖为β-低聚半乳糖。优选地，不可消化寡糖包括具有β(1，4)、β(1，3)和/或β(1，6)糖苷键和末端葡萄糖的低聚半乳糖。反式低聚半乳糖例如可以商品名
Figure BDA0002625836310000121
GOS(Domo FrieslandCampina Ingredients)、Bi2muno(Clasado)、Cup-oligo(Nissin Sugar)和Oligomate55(Yakult)获得。这些寡糖在更大程度上改善了菌群。
不可消化寡糖优选包括低聚果糖。在其他情况下，低聚果糖可以具有例如果聚糖(fructopolysaccharide)、低聚果糖(oligofructose)、多聚果糖(polyfructose)、聚果聚糖(polyfructan)、菊粉、果聚糖(levan)和果聚糖(fructan)的名称，并且可指包含β-连接的果糖单元的寡糖，其优选通过β(2，1)和/或β(2，6)糖苷键连接且优选的DP为2至200。优选地，低聚果糖含有末端β(2，1)糖苷键连接的葡萄糖。优选地，低聚果糖含有至少7个β-连接的果糖单元。在另一个优选的实施方案中，使用菊粉。菊粉是一种低聚果糖，其中至少75％的糖苷键为β(2，1)键。通常，菊粉的平均链长为8至60个单糖单元。适用于本发明的组合物的低聚果糖可以商品名
Figure BDA0002625836310000122
HP(Orafti)商购获得。其他合适的来源为Raftilose(Orafti)、Fibrulose和Fibruline(Cosucra)以及Frutafit和Frutalose(Sensus)。
优选地，本发明的营养组合物包含低聚半乳糖和低聚果糖的混合物。优选地，低聚半乳糖和低聚果糖的混合物以1/99至99/1、更优选1/19至19/1、更优选1/1至19/1、更优选2/1至15/1、更优选为5/1至12/1、甚至更优选8/1至10/1、甚至更优选约9/1的重量比存在。当低聚半乳糖具有低的平均DP并且低聚果糖具有相对高的DP时，该重量比是特别有利的。最优选的是平均DP低于10、优选低于6的低聚半乳糖和平均DP高于7、优选高于11、甚至更优选高于20的低聚果糖的混合物。这种混合物协同地改善婴儿的肠道菌群，使其与母乳喂养婴儿的菌群更相似。
优选地，本发明的营养组合物包含短链低聚果糖和长链低聚果糖的混合物。优选地，短链低聚果糖和长链低聚果糖的混合物以1/99至99/1、更优选1/19至19/1、甚至更优选1/10至19/1、更优选1/5至15/1、更优选1/1至10/1的重量比存在。优选的是平均DP低于10、优选低于6的短链低聚果糖和平均DP高于7、优选高于11、甚至更优选高于20的低聚果糖的混合物。
优选地，本发明的营养组合物包含短链低聚果糖和短链低聚半乳糖的混合物。优选地，短链低聚果糖和短链低聚半乳糖的混合物以1/99至99/1、更优选1/19至19/1、甚至更优选1/10至19/1、更优选1/5至15/1、更优选1/1至10/1的重量比存在。优选的是平均DP低于10、优选低于6的短链低聚果糖和低聚半乳糖的混合物。
本发明的营养组合物包含总共2.5至20重量％、更优选2.5至15重量％、甚至更优选3.0至10重量％、最优选5.0至7.5重量％的不可消化寡糖，基于营养组合物的干重计。基于100ml计，本发明的营养组合物优选包含总共0.35至2.5重量％、更优选0.35至2.0重量％、甚至更优选0.4至1.5重量％的不可消化寡糖，基于100ml营养组合物计。较低量的不可消化寡糖改善菌群的效果较差，而过高的量则会导致腹胀和腹部不适的副作用。
营养组合物
根据本发明使用的营养组合物还可被认为是药物组合物且优选适合于向婴儿给药。本发明的营养组合物优选肠内给药，更优选口服给药。
优选地，根据本发明使用的营养组合物不是益生菌组合物或包含益生菌的组合物。优选在生产过程中使产乳酸细菌不复制或使其失活和/或在人上消化道中存在的条件下不存活。
本发明的营养组合物优选为婴儿配方物、第二阶段配方物(follow on formula)、幼儿乳(toddler milk)或幼儿配方物或用于少年儿童的成长乳(growing up milk)。本发明的营养组合物可有利地用作婴儿的完全营养物。优选地，本发明的营养组合物为婴儿配方物。婴儿配方物定义为用于婴儿的配方物，并且例如可为用于0至6或0至4月龄婴儿的起始配方物。第二阶段配方物用于4或6月龄至12月龄的婴儿。在这个年龄段，婴儿开始断奶，吃其他食物。幼儿乳或成长乳或配方物用于12至36月龄的儿童。本发明的组合物优选包含脂质组分、蛋白质组分和碳水化合物组分，并且优选以液体形式给予。本发明的营养组合物还可为干食品的形式，优选为粉末形式，其附有将所述干食品(优选粉末)与合适的液体(优选水)进行混合的说明。根据本发明使用的营养组合物优选包含其他成分，例如维生素、矿物质、微量元素和其他微量营养素，以使其成为完全营养组合物。根据国际指令，优选婴儿配方物包含维生素、矿物质、微量元素和其他微量营养素。
本发明的营养组合物优选包含脂质、蛋白质和可消化碳水化合物，其中脂质提供总卡路里的5至50％，蛋白质提供总卡路里的5至50％，并且可消化碳水化合物提供总卡路里的15至90％。优选地，在本发明的营养组合物中，脂质提供总卡路里的35至50％，蛋白质提供总卡路里的7.0至12.5％，并且可消化碳水化合物提供总卡路里的40至55％。为了计算蛋白质占总卡路里的百分比，需要考虑由蛋白质、肽和氨基酸提供的总能量。优选地，脂质提供3至7g/100kcal营养组合物，优选4至6g/100kcal营养组合物；蛋白质提供1.6至4g/100kcal营养组合物，优选1.7至2.5g/100kcal营养组合物，并且可消化碳水化合物提供5至20g/100kcal营养组合物，优选8至15g/100kcal营养组合物。优选地，本发明的营养组合物包含脂质提供4至6g/100kcal营养组合物，蛋白质提供1.6至2.0g/100kcal营养组合物、更优选1.7至1.9g/100kcal营养组合物，和可消化碳水化合物提供8至15g/100kcal营养组合物。在一个实施方案中，脂质提供3至7g脂质/100kcal营养组合物，优选4至6g/100kcal营养组合物；蛋白质提供1.6至2.1g/100kcal营养组合物，优选1.6至2.0g/100kcal营养组合物；并且可消化碳水化合物提供5至20g/100kcal营养组合物，优选8至15g/100kcal营养组合物，并且其中优选地可消化碳水化合物组分包含至少60重量％的乳糖，基于总的可消化碳水化合物计，更优选至少75重量％、甚至更优选至少90重量％的乳糖，基于总的可消化碳水化合物计。卡路里的总量由来自蛋白质、脂质、可消化碳水化合物和不可消化寡糖的卡路里的总和确定。
本发明的营养组合物优选包含可消化碳水化合物组分。优选的可消化碳水化合物组分为乳糖、葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、麦芽糖、淀粉和麦芽糖糊精。乳糖是人乳中存在的主要的可消化碳水化合物。本发明的营养组合物优选包含乳糖。由于本发明的营养组合物包含由产乳酸细菌发酵获得的发酵组合物，因此乳糖的量相对于其来源由于发酵而减少，通过发酵乳糖转化为乳酸盐和/或乳酸。因此，在本发明的营养组合物的制备中，优选加入乳糖。优选地，本发明的营养组合物不包含除乳糖之外的高含量的碳水化合物。与可消化碳水化合物如麦芽糖糊精、蔗糖、葡萄糖、麦芽糖和具有高血糖指数的其他可消化碳水化合物相比，乳糖具有较低的血糖指数，因此是优选的。本发明的营养组合物优选包含可消化碳水化合物，其中至少35重量％、更优选至少50重量％、更优选至少60重量％、更优选至少75重量％、甚至更优选至少90重量％、最优选至少95重量％的可消化碳水化合物为乳糖。基于干重计，本发明的营养组合物优选包含至少25重量％的乳糖，优选至少40重量％、更优选至少50重量％的乳糖。
本发明的营养组合物优选包含至少一种选自动物脂质(不包括人脂质)和植物脂质的脂质。优选地，本发明的组合物包含植物脂质和至少一种选自鱼油、动物油、藻油、真菌油(fungal oil)和细菌油(bacterial oil)的油的组合。本发明的营养组合物的脂质优选提供3至7g/100kcal营养组合物，优选脂质提供4至6g/100kcal营养组合物。当呈液体形式例如作为即食液体时，营养组合物优选包含2.1至6.5g脂质/100ml，更优选3.0至4.0g/100ml。基于干重计，本发明的营养组合物优选包含12.5至40重量％的脂质、更优选19至30重量％。优选地，脂质包含必需脂肪酸α-亚麻酸(ALA)、亚油酸(LA)和/或长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)。LC-PUFA、LA和/或ALA可作为游离脂肪酸，以甘油三酯形式、甘油二酯形式、单甘油酯形式、磷脂形式或作为上述的一种或多种的混合物提供。优选地，本发明的营养组合物包含至少一种、优选至少两种选自以下的脂质来源：菜籽油(例如菜油(colza oil)、低芥酸菜籽油和芥花油)、高油酸葵花籽油、高油酸红花油、橄榄油、海产油(marine oil)、微生物油、椰子油、棕榈仁油。本发明的营养组合物不是人乳。
本发明的营养组合物优选包含蛋白质。营养组合物中使用的蛋白质优选选自非人动物蛋白质，优选乳蛋白；植物蛋白，例如优选大豆蛋白和/或大米蛋白；及其混合物。本发明的营养组合物优选含有酪蛋白和/或乳清蛋白，更优选牛乳清蛋白和/或牛酪蛋白。因此，在一个实施方案中，本发明的营养组合物中的蛋白质包含选自乳清蛋白和酪蛋白的蛋白质，优选乳清蛋白和酪蛋白，优选地乳清蛋白和/或酪蛋白来自牛乳。优选地，蛋白质包含小于5重量％的游离氨基酸、二肽、三肽或水解蛋白质，基于总蛋白质计。本发明的营养组合物优选包含酪蛋白和乳清蛋白，酪蛋白∶乳清蛋白的重量比为10∶90至90∶10，更优选20∶80至80∶20，甚至更优选35∶65至55∶45。
基于本发明的营养组合物的干重计的重量％蛋白质根据凯氏定氮法，通过测量总氮并在酪蛋白的情况下使用6.38的转换因子或者对于除酪蛋白之外的其他蛋白质使用6.25的转换因子进行计算。本发明中使用的术语“蛋白质”或“蛋白质组分”是指蛋白质、肽和游离氨基酸的总和。
本发明的营养组合物优选包含蛋白质提供1.6至4.0g/100kcal营养组合物、优选提供1.6至3.5g、甚至更优选1.75至2.5g/100kcal营养组合物。在一个实施方案中，本发明的营养组合物包含蛋白质提供1.6至2.1g/100kcal营养组合物、优选提供1.6至2.0g、更优选1.75至2.1g、甚至更优选1.75至2.0g/100kcal营养组合物。在一个实施方案中，本发明的营养组合物包含的蛋白质的量小于2.0g/100kcal，优选1.6至1.9g，甚至更优选1.75至1.85g/100kcal营养组合物。基于总卡路里计太低的蛋白质含量将导致婴幼儿的生长和发育不充分。含量过高会在如婴幼儿的肾脏上造成新陈代谢压力(bude)。当呈液体形式例如作为即食液体时，营养组合物优选包含0.5至6.0g蛋白质/100ml、更优选1.0至3.0g蛋白质/100ml、甚至更优选1.0至1.5g蛋白质/100ml，最优选1.0至1.3g蛋白质/100ml。基于干重计，本发明的营养组合物优选包含5至20重量％的蛋白质，优选至少8重量％的蛋白质，基于全部营养组合物的干重计，更优选8至14重量％的蛋白质，甚至更优选8至9.5重量％的蛋白质，基于全部营养组合物的干重计。
为了满足婴儿或幼儿的热量需求，营养组合物优选包含45至200kcal/100ml液体。对于婴儿，营养组合物更优选具有60至90kcal/100ml液体，甚至更优选65至75kcal/100ml液体。这种热量密度确保水和热量消耗之间的最佳比例。对于幼儿——12至36月龄的人类受试者，营养组合物更优选具有45至65kcal/100ml的热量密度，甚至更优选50至60kcal/100ml。本发明的组合物的摩尔渗透压浓度优选为150至420mOsmol/L，更优选260至320mOsmol/L。低的摩尔渗透压浓度旨在进一步降低胃肠道压力。
当营养组合物为即食液体形式时，每日给予的优选体积为每日约80至2500ml，更优选约200至1200ml。优选地，每日的喂食次数为1至10，优选3至8。在一个实施方案中，每日以液体形式给予营养组合物，持续至少2天，优选至少4周，优选至少8周，更优选至少12周，其中每日给予的总体积为200ml至1200ml，并且其中每日的喂食次数为1至10。
当呈液体形式时，本发明的营养组合物优选具有1至60mPa.s、优选1至20mPa.s、更优选1至10mPa.s、最优选1至6mPa.s的粘度。低粘度确保适当的液体给予，例如，适合通过整个奶嘴。所述粘度还非常类似于人乳的粘度。此外，低粘度导致正常的胃排空和更好的能量摄入，这对需要能量用于最佳生长和发育的婴儿是必需的。或者，本发明的营养组合物为粉末形式，适于用水重构为即饮液体。本发明的组合物优选通过将粉末状组合物与水混合来制备。通常，婴儿配方物以这种方式制备。因此，本发明还涉及一种包装的粉末组合物，其中所述包装提供有将粉末与适量液体混合从而得到粘度为1至60mPa.s的液体组合物的说明。使用Physica Rheometer MCR 300(Physica Messtechnik GmbH，Ostfilden，Germany)在20℃下以95s-1的剪切速率测定液体的粘度。
应用
在本发明的上下文中，疾病或某种病症的“预防”还意指患疾病或某种病症的“风险降低”，并且还意指处于患所述疾病或所述某种病症的“风险的人的治疗”。
包含给予本发明营养组合物的本发明方法也是指向需要这种治疗的个体给予有效量的营养组合物。
发明人发现，使用非靶向16S rRA基因扩增子测序，在消耗本发明的营养组合物时，婴儿的肠道菌群与母乳喂养婴儿的肠道菌群更加相似。该技术检查了对整个肠道微生物群的影响，不仅仅获得了已知的靶向细菌的结果。已知通过这种技术，粪便样品中获得的结果对于肠道，特别是大肠中的菌群具有代表性。当提到肠道菌群时，优选地是指大肠中的菌群。与包含不可消化寡糖但未发酵的配方物喂养的婴儿的肠道菌群相比，以及当与部分发酵但不含不可消化寡糖的配方物喂养的婴儿的肠道菌群相比，肠道菌群与母乳喂养婴儿的肠道菌群更为相似。当与不含不可消化寡糖的常规非发酵配方物喂养的婴儿的肠道菌群相比，观察到的差异最大。这表明发酵配方物和不可消化寡糖具有协同作用。与仅或甚至主要喂养非本发明的营养组合物，特别是未由产乳酸细菌至少部分发酵和/或不包含不可消化寡糖的营养组合物相比，发现部分发酵且包含不可消化寡糖的配方物喂养的婴儿的菌群与母乳喂养婴儿的肠道菌群在以下方面更相似：具有低的α-多样性(使用Chao-1指数测定)、具有较低丰度的布劳特氏菌属和/或丹毒丝菌目和/或具有增加丰度的乳酸菌。
因此，在本发明方法或用途的一个优选实施方案中，促进肠道菌群的发育是指，该肠道菌群与未由产乳酸细菌至少部分发酵且不包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐和/或不包含不可消化寡糖的营养组合物喂养的人类受试者的肠道菌群相比，其具有较低的α-多样性，优选通过Chao-1指数测定。
一方面，本发明涉及一种用于降低年龄在36个月以下的人类受试者的肠道菌群的α-多样性的方法，其包括给予由产乳酸细菌至少部分发酵的营养组合物，其中所述营养组合物包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐，且其中所述营养组合物包含基于干重计2.5至15重量％的不可消化寡糖，与未由产乳酸细菌至少部分发酵且不包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐和/或不包含不可消化寡糖的营养组合物喂养的同龄人类受试者的肠道菌群的α-多样性相比，优选降低肠道菌群的α-多样性。
本发明用于降低肠道菌群的α-多样性的方法也可视为用于降低肠道菌群的α-多样性的非医疗方法。
本发明的方法也可表述为发酵组合物和不可消化寡糖用于制备由产乳酸细菌至少部分发酵的营养组合物的用途，其中所述营养组合物包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐，且其中所述营养组合物包含基于干重计2.5至15重量％的不可消化寡糖，与未由产乳酸细菌至少部分发酵且不包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐和/或不包含不可消化寡糖的营养组合物喂养的同龄人类受试者的肠道菌群的α-多样性相比，用于降低年龄在36个月以下的人类受试者的肠道菌群的α-多样性，优选用于降低肠道菌群的α-多样性。
本发明也可表述为由产乳酸细菌至少部分发酵的营养组合物，其中所述营养组合物包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐，且其中所述营养组合物包含基于干重计2.5至15重量％的不可消化寡糖，与未由产乳酸细菌至少部分发酵且不包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐和/或不包含不可消化寡糖的营养组合物喂养的同龄人类受试者的肠道菌群的α-多样性相比，其用于降低年龄在36个月以下的人类受试者的肠道菌群的α-多样性，优选用于降低肠道菌群的α-多样性。
丹毒丝菌目是一种属于丹毒丝菌纲和厚壁菌门的目。在食用高脂饮食的成年人中，这种群体更为丰富，而在母乳喂养婴儿中，这种群体通常较低。
布劳特氏菌属(最近被重新分类为瘤胃球菌属的一部分(主要与Ruminococcusobeum有关))存在于成年肠道菌群中并且是正常胃肠道菌群的主要成员之一。据报道丰度在2.5％-16％之间。IBS患者与布劳特氏菌属增加有关。布劳特氏菌属菌种的共同特征是利用氢和二氧化碳形成乙酸盐。布劳特氏菌属的菌种为产氢生物体，其已被证明参与消化植物纤维。球形布劳特氏菌(Blautia coccoides)可被认为是成年型共生细菌，因为它们在幼年的菌群发育期间几乎不存在。健康婴儿的肠道菌群形成的气体很少，因此认为，对于婴儿的微生物菌群而言，布劳特氏菌属的存在表明肠道气体的形成量增加，因此，与母乳喂养的婴儿相比，这反映出微生物发酵特性受到干扰或至少有所不同。
乳酸杆菌属于产乳酸细菌，发现其在母乳喂养婴儿的肠道菌群中的含量高于常规配方物喂养婴儿的菌群中的含量。
一方面，本发明涉及一种降低年龄在36个月以下的人类受试者的肠道菌群中的布劳特氏菌属和/或丹毒丝菌目的丰度和/或增加乳酸菌的丰度，优选用于降低布劳特氏菌属和/或丹毒丝菌目的丰度，更优选用于降低布劳特氏菌属的丰度的方法，所述方法包括施用由产乳酸细菌至少部分发酵的营养组合物，其中所述营养组合物包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐，且其中所述营养组合物包含基于干重计2.5至15重量％的不可消化寡糖，与未由产乳酸细菌至少部分发酵且不包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐和/或不包含不可消化寡糖的营养组合物喂养的同龄人类受试者的肠道菌群中布劳特氏菌属和/或丹毒丝菌目和/或乳酸菌的丰度相比，优选用于降低肠道菌群中的布劳特氏菌属和/或丹毒丝菌目的丰度和/或增加乳酸菌的丰度，优选用于降低布劳特氏菌属和/或丹毒丝菌目的丰度，更优选用于降低劳特氏菌属的丰度。
本发明用于降低肠道菌群中的布劳特氏菌属和/或丹毒丝菌目的丰度和/或增加乳酸菌的丰度的方法也可视为用于降低肠道菌群中的布劳特氏菌属和/或丹毒丝菌目的丰度和/或增加乳酸菌的丰度的非医疗方法。
本发明的方法也可表述为发酵组合物和不可消化寡糖用于制备由产乳酸细菌至少部分发酵的营养组合物的用途，其中所述营养组合物包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐，且其中所述营养组合物包含基于干重计2.5至15重量％的不可消化寡糖，与未由产乳酸细菌至少部分发酵且不包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐和/或不包含不可消化寡糖的营养组合物喂养的同龄人类受试者的肠道菌群中布劳特氏菌属和/或丹毒丝菌目和/或乳酸菌的丰度相比，用于降低年龄在36个月以下的人类受试者的肠道菌群中的布劳特氏菌属和/或丹毒丝菌目的丰度和/或增加乳酸菌的丰度，优选用于降低肠道菌群中的布劳特氏菌属和/或丹毒丝菌目的丰度和/或增加乳酸菌的丰度，优选用于降低布劳特氏菌属和/或丹毒丝菌目的丰度，更优选用于降低布劳特氏菌属的丰度。
本发明也可表述为由产乳酸细菌至少部分发酵的营养组合物，其中所述营养组合物包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐，且其中所述营养组合物包含基于干重计2.5至15重量％的不可消化寡糖，与未由产乳酸细菌至少部分发酵且不包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐和/或不包含不可消化寡糖的营养组合物喂养的同龄人类受试者的肠道菌群中的布劳特氏菌属和/或丹毒丝菌目和/或乳酸菌的丰度相比，所述营养组合物用于降低年龄在36个月以下的人类受试者的肠道菌群中布劳特氏菌属和/或丹毒丝菌目的丰度和/或增加乳酸菌的丰度，优选用于降低布劳特氏菌属和/或丹毒丝菌目的丰度，更优选用于降低布劳特氏菌属的丰度，优选用于降低肠道菌群中的布劳特氏菌属和/或丹毒丝菌目的丰度和/或增加乳酸菌的丰度，优选用于降低布劳特氏菌属和/或丹毒丝菌目的丰度，更优选用于降低布劳特氏菌属的丰度。
Chao 1分数表明肠道菌群丰富度。它估算了样品中存在的不同菌种的数量。对于成年人而言，期望其肠道菌群的丰富度增加或高度丰富，而婴儿则不是这种情况。Azad等人，2013，CMAJ，185(5)385-394观察到，与母乳喂养婴儿的菌群相比，非母乳喂养但配方物喂养的健康婴儿在4个月大时，其Chao 1指数增加。与不含发酵组合物和/或不可消化寡糖的常规配方物喂养的婴儿的肠道菌群相比，优选本发明营养组合物喂养的婴儿的肠道菌群的α-多样性，优选Chao-1指数至少低5％，更优选至少10％。与不含发酵组合物和不可消化寡糖的常规配方物喂养的婴儿的肠道菌群相比，优选本发明营养组合物喂养的婴儿的肠道菌群的α-多样性，优选Chao-1指数低至少5％，更优选至少10％。优选肠道菌群的α-多样性，优选Chao-1指数不低于人乳喂养婴儿的肠道菌群。
在本发明的上下文中，用于促进肠道菌群发育的同义词为发展、改善、诱导、维持、支持或驱动肠道菌群。
与给予不包含发酵组合物和/或不可消化寡糖，优选不包含发酵组合物和不可消化寡糖组合的营养组合物的婴儿的肠道菌群相比，观察到本文所述的效果，即促进、发展、改善、诱导、维持或驱动肠道菌群使其与母乳喂养婴儿中发现的肠道菌群更相似。
在一个实施方案中，本发明的营养组合物被用于改善0至36月龄的人类受试者的肠道菌群。在一个实施方案中，本发明的营养组合物被用于改善0至18月龄的人类受试者的肠道菌群，甚至更优选是年龄在12个月以下的婴儿，甚至更优选是0至6月龄的婴儿，最优选0至4月龄的婴儿。在一个实施方案中，本发明的营养组合物被用于改善12至36月龄的幼儿，最优选18至30月龄或24月龄的幼儿的肠道菌群。优选地，本发明的营养组合物还用于向所述人类受试者提供营养。优选给予营养组合物至少1周，更优选至少4周，更优选至少8周，甚至更优选至少4个月。
在一个优选的实施方案中，本发明的方法或用途是用于经产道分娩的婴儿。在一个优选的实施方案中，本发明的方法或用途是用于足月儿，优选用于健康足月儿。在一个优选的实施方案中，本发明的方法或用途是用于经产道分娩的健康婴儿。在一个优选的实施方案中，本发明的方法或用途是用于通过剖腹产出生的健康婴儿。
在一个实施方案中，本发明的方法或用途是用于具有脆弱的或不平衡的肠道菌群或肠道菌群失调的年龄在36个月以下的人类受试者，或处于具有脆弱的或不平衡的肠道菌群或肠道菌群失调的风险的年龄在36个月以下的人类受试者，优选年龄在36个月以下的人类受试者选自早产儿、胎龄小的婴儿、低出生体重的婴儿、接受过或正在接受抗生素治疗的婴儿或幼儿、剖腹产婴儿、或者患有或遭受肠道炎症或肠道感染的婴儿或幼儿或者母亲进行了围产期抗生素治疗的婴儿。微生物失调包括且优选为菌群失调。优选地，微生物失调或菌群失调是结肠中的失调。
在一个实施方案中，本发明的营养组合物用于提供健康的肠道功能和/或用于预防和/或治疗年龄在36个月以下的人类受试者的肠道菌群失调。
在本文及其权利要求书中，动词“包含”及其变形以其非限制性含义使用，意指包括该词后面的项目，但不排除未具体提及的项目。另外，由不定冠词“一”或“一个”引出的元素不排除存在多于一个元素的可能性，除非上下文明确要求存在一个且仅一个元素。因此，不定冠词“一”或“一个”通常意指“至少一个”。重量％意指重量百分比。
实施例
实施例1：与母乳喂养的参照组相比，具有不可消化寡糖的部分发酵的婴儿配方物或对照配方物对肠道菌群组成的影响
在一项探索性临床研究中，对足月健康婴儿进行了3-4个月的干预，研究实验配方物(配方物1)与对照配方物(配方物2)的生长和安全性。在随机的、对照的、多中心的、双盲的、前瞻性临床试验中，婴儿在28日龄之前入组，并被指定接受两种配方之一，直到17周龄。
实验婴儿配方物1是这样一种婴儿配方物，其包含0.8g/100ml的重量比为9∶1的scGOS(来源
Figure BDA0002625836310000241
GOS)和lcFOS(来源
Figure BDA0002625836310000242
)的不可消化寡糖。在该婴儿配方物中，基于干重计的30％来自LactofidusTM，其是以商品名Gallia市售的可商购婴儿配方物。LactofidusTM是发酵乳衍生的组合物，其通过用嗜热链球菌发酵产生，并且包含短双歧杆菌。采用温和的热处理。婴儿配方物1包含基于干重计约0.33重量％的(乳酸+乳酸盐)，其中至少95％为L-乳酸+L-乳酸盐。在婴儿配方物1中，产乳酸细菌(嗜热链球菌)的菌落形成单位的水平为约2x104cfu/g干重，并且衍生自发酵组合物LactofidusTM。
对照婴儿配方物2是不含scGOS/lcFOS的可商购非发酵婴儿配方物。这两个配方物的组分在能量和常量营养素组成上相似(每100ml∶66kcal，1.2g蛋白质(重量比为1/1的牛乳清蛋白/酪蛋白)，7.7g可消化的碳水化合物(其中7.6g乳糖)，3.4克脂肪(主要是植物脂肪)。根据用于婴儿配方物的国际指令2006/141/EC，两种婴儿配方物还包含维生素、矿物质、微量元素和其他微量营养素。
作为参照，包括一组仅母乳喂养至17周龄的婴儿。意向治疗(ITT)人群由随机分配婴儿配方物的所有受试者组成(n＝199)，另外100名受试者被纳入母乳喂养参照组。ITT人群由实验组的94名受试者、对照组的105名受试者组成。
在不晚于最后摄入研究产品的一天后，随机或随后(基准)一天收集8周龄和16-17周龄的粪便样品。分析一个婴儿亚组中的粪便参数，这些婴儿的选择如下：自然分娩(产道分娩)，不使用益生菌、增稠剂、抗生素或其他可能影响从出生到研究结束的菌群的药物，粪便采样前三天或更短的时间不使用轻泻剂。该亚组由三个研究小组中的每个小组的30位受试者组成——总共90位受试者，总共产生270个粪便样本。
由于受试者潜在地可能已经食用了一天的各研究产品，或者——甚至更相关——可能已经食用了其他含有发酵配方物，或益生元或益生菌的市售婴儿配方物，因此与母乳喂养参照组相比可能已经产生影响。
根据制造商的方案，除了加入两次打浆(bcad-beating)步骤，使用QIAmp DNAStool Mini试剂盒(Qiagen)对粪便样品进行DNA提取。向0.2-0.3g的粪便样品中加入300mg的0.1mm玻璃珠和1.4mL的ASL(溶菌)缓冲液，并在该悬浮液上进行3x 30秒的第一次打浆步骤(FastPrep-24仪器程序5.5)。加入InhibitEx片剂后，将第二次打浆步骤进行3x 30秒(FastPrep-24仪器程序5.5)以均化样品。在各打浆步骤后，将样品在冰上冷却5分钟。使用NanoDropTM分光光度计(Thermo Fisher Scientific Inc.)检查提取的DNA纯度，而使用Quant-iTTM 193 dsDNA BR Assay试剂盒(InvitrogenTM)测定DNA的质量和浓度。将DNA等分试样在-80℃下储存待用。
使用引物357F和926Rb从纯化的粪便DNA提取物中扩增出细菌16S rRNA基因的V3-V5区域。如前所述，使用454FLX测序仪(454 Life Sciences，Branford，CT，USA)对获得的16S rRNA基因扩增子进行焦磷酸测序。
使用1.8.0版《微生物生态定量洞察学》(Quantitative Insights IntoMicrobial Ecology)(QIIME)pipeline分析序列数据。设置质量控制过滤器(Qualitycontrol filter)以丢弃长度小于200个碱基、长度大于1000个碱基、平均序列质量得分小于25、带有任何模糊碱基的序列或者包含的大于6个碱基的均聚物延伸链(homopolymerstretches)。嵌合序列用QIIME自己的ChimeraSlayer过滤。在过滤后的序列上，使用USEARCH算法从头开始进行操作分类单位(OTU)筛选，该算法将具有97％以上同一性的序列分组。通过QIIME对OTU进行了稀释，以确保每个样本的读取次数相同，以便使用以下度量标准执行α多样性计算：Chao1和观测到的菌种。随后，通过与SILVA核糖体RNA数据库(发行版本1.0.8)比对，应用核糖体数据库项目分类器(Ribosomal Database ProjectClassifier)(RDP)将分类标准分配给每个OTU的代表性序列(即最丰富的序列)。
统计：对于生理和微生物目标参数，将Wilcoxon Rank Sum检验用于计算每个时间点的实验与对照之差的p值。如果在70％或更多的样品中检测到给定参数值的百分比，则将低于定量限的值替换为(检测限+定量限)/2，而将低于检测限的值替换为检测限/(2的平方根)。在任一组中的测量百分比均低于定量限的情况下，则将参数转换为二进制(1表示存在，0表示不存在或低于检测限)。对于所有二进制参数，使用卡方检验(如果预期细胞计数＜5，则使用fisher精确检验)进行推理。
对于16S rRNA基因扩增子测序结果，每个分类单元的相对丰度主要经过两部分统计检验(Wagner等人，2011)。在该测试中，首先比较两组中零的比例，然后比较两组中非零数据的中位数。将这两个部分合并，每个分类单元在每次就诊时获得一个p值。当最小的组中至少有10个观测值(即非零值)时，两部分统计检验是不可靠的(Wagner等人，2011)，因此，数据按以下步骤进行分析：如果两个组都有＞＝10个非零值，则进行两部分统计；如果任一组具有＜10个非零值，则将数据按二进制数据处理，并进行卡方检验，除非50％的单元格的期望频数＜5，在这种情况下，将执行Barnard检验。对于所得p值，通过评估阳性假发现率(pFDR)进行多次检验的校正(Benjamini&Hochberg，1995)。由Storey，Taylor，&Siegmund(2004)描述的自举法用于估计π0，随后计算q值，其为各特征的显著性的量度。当p值＜0.05和q值＜0.05时，测序结果被认为具有统计学显著性。
结果：
通过qPCR进行的目标菌群定量分析显示，与对照组相比，来自8和17周龄时的实验组的样品显示出统计学显著增加量的双歧杆菌，和较低量的艰难梭菌(Clostridium)和产气英膜梭状芽孢杆菌群(Clostridium perfringens groups)，而在基线时，这些测量在治疗组之间没有显著差异。没有观察到对细菌总量的显著影响。
非靶向16S rRNA基因扩增子测序表明，在经过4个月的干预后，将实验配方物与对照配方物进行比较，使用实验配方物时，各种细菌分类单位(4-11个属，取决于时间点)确实发生了一致的变化。在干预2个月时，已观察到中介效应。干预结束时，实验组中这些差异细菌群的水平似乎与母乳喂养参照组中检测到的水平更加一致。参见表1。
特别是在第17周，实验组中梭状芽胞杆菌、布劳特氏菌属和丹毒丝菌目成员的相对丰度显著降低，与母乳喂养的参照组相当。双歧杆菌增加。还发现了对乳酸菌的影响(对照组降低)，在第8周观察到统计学差异。还发现对照组中梭菌、布劳特氏菌属和丹毒丝菌目的含量较高，而双歧杆菌的含量较低，这与实验组和母乳喂养参照组的差异更大。
总体菌群分布多样性可以概括为每个样品一个多样性指数。可以以多种方式来计算这种多样性指数，更被广泛地称为α-多样性。母乳喂养参照组的Chao-1指数(基于丰度数据对菌种丰富度的估算)一直且保持较低水平(4个月时Chao 1指数的中位数为91.37，Q1-Q3为66.71-119.2；平均值为90.17，95％置信区间(CI)范围为79.48-100.9)，而对照组适时地则有所增加(4个月时的中位数为117.9，Q1-Q3为96.46-128.1；平均值为114.3，95％CI范围为104.7-124)。对于实验组，Chao-1指数保持较低水平，与母乳喂养的对照组更为相似(4个月时的中位数为96.5，Q1-Q3为86.17-114.3；平均值为105.2，95％CI范围为93.78-116.6)。与该观察结果一致，在4个月时，在实验组中所观察到的菌种(以OTU(操作分类单位)表示)的中位数较低，与母乳喂养的对照组更相似，而对照组中的中位数则更高。
这些结果表明，与对照组相比，食用含有不可消化寡糖的部分发酵的配方物的婴儿的肠道菌群具有更像母乳喂养婴儿的肠道中的菌群组成。
Figure BDA0002625836310000281
Figure BDA0002625836310000291
实施例2：食用含有不可消化寡糖的部分发酵的配方物改善了肠道菌群组成
在另一随机的、多中心的、双盲的、前瞻性临床试验中，婴儿在28日龄之前入组，并被指定接受三种配方物中的一种直至17周龄：
测试组1：婴儿配方物1包含每100ml 66kcal、1.35g蛋白质(牛乳清蛋白/酪蛋白，重量比为1/1)、8.2g可消化碳水化合物(其中5.6g乳糖和2.1g麦芽糖糊精)、3.0g脂肪(主要是植物脂肪)、0.8g包含重量比为9∶1的scGOS(来源
Figure BDA0002625836310000301
GOS)和lcFOS(来源
Figure BDA0002625836310000302
)的不可消化寡糖。基于干重计，在该婴儿配方物中约50％源自LactofidusTM。婴儿配方物包含基于干重计约0.55重量％的乳酸+乳酸盐，其中至少95％为L(+)-乳酸/乳酸盐。根据婴儿配方物的国际指令2006/141/EC，组合物还包含维生素、矿物质、微量元素和其他微量营养素。
测试组2：婴儿配方物2，类似于婴儿配方物1，其中基于干重计约15％来源于LactofidusTM。该婴儿配方物包含基于干重计约0.17重量％的乳酸+乳酸盐，其中至少95％为L(+)-乳酸/乳酸盐。
测试组3：婴儿配方物3，类似于婴儿配方物1，但不含不可消化寡糖scGOS和lcFOS。
测试组4：婴儿配方物4，具有0.8g包含重量比为9∶1的scGOS(来源
Figure BDA0002625836310000303
GOS)和lcFOS(来源
Figure BDA0002625836310000304
)的不可消化寡糖，但不包含LactofidusTM且余量与婴儿配方物1的组分类似。
以与实施例1中所述类似的方式，除了QIIME版本(1.6.0)，在基线和干预17周后收集粪便样品用于微生物分析，并对16S rRNA基因扩增子测序结果的统计分析进行WilcoxonRank Sum检验以计算每个时间点各组之间的差异的p值，并结合pFDR估算(q值计算)，以控制由于多次测试而导致的错误发现。仅分析产道生产受试者的亚组的样品(各组30个受试者，共240个粪便样品)，这些样品具有一套完整的粪便样品(两次就诊)，且粪便量足以进行所有分析。此外，排除了在出生后任何时间使用任何系统性抗生素或在研究期间使用添加到配方物中的增稠剂的婴儿的样品。
在所选的一套粪便样本中，评估了所用婴儿配方物对菌群的影响。在干预后(第17周)，由第3组婴儿测定的粪便微生物参数(无发酵成分，但含有GOS/FOS)显示双歧杆菌数量增加，病原菌发生率低，通过艰难梭菌水平测定。在至少5个分类单元中观察到差异，涉及到乳酸菌、布劳特氏菌属、梭菌目、消化链球菌科和丹毒丝菌目，结果列于表2。
表2：显著性q值＜＝0.1的分类单元的丰度——17周
Figure BDA0002625836310000311
与组3和组4相比，发现组1的乳酸菌数量增加。与组3和组4相比，发现组1和组2组的布劳特氏菌属和丹毒丝菌目数量减少。在所有情况下，组1和组3之间的差异具有统计显著性，p＜0.05。
总体菌群分布多样性可以概括为每个样品一个多样性指数。对于每个样品，在每个样品1496个序列的深度处计算Chao-1指数(可能进行的最深测量，没有缺失值)。在第4个月时，第1组的Chao-1估计值较低，因此表明多样性(中位数70.68，Q1-Q3为52.5-145.9；平均值73.11，95％CI区间为60.34-85.89)低于不含不可消化寡糖的组3(中位数为104.2，Q1-Q3为77.69-139.8；平均值为104.8，95％Cl区间为88.97-120.7)且也低于不含发酵组合物的组4(中位数为97.32，Q1-Q3为68.99-120.5；平均值为96.04，95％Cl为82.71-109.4)。第1组和第3组之间的差异具有统计学显著性(p＝0.005)。
当结合临床试验实施例1和2的结果时，存在所有的对照组和母乳喂养参照组。因此可以推论，与不含发酵组合物和/或不含不可消化寡糖的配方物相比，在部分发酵的配方物和不可消化寡糖结合的配方物喂养的婴儿中观察到对肠道菌群的改善效果，这与母乳喂养的对照组更相似。对于多样性(较低)、布劳特氏菌属(较低)、丹毒丝菌目(较低)、乳酸菌(较高)、双歧杆菌(较高)观察到了这些效果。在中间时间点已经观察到效果。对于具有15重量％的发酵组合物的产品，已经观察到效果，但是对于具有30或50重量％的发酵组合物的组合物观察到了更高的效果。
实施例3：发酵的婴儿配方物和不可消化寡糖对婴儿的菌群组成的影响
在另一随机的、双盲的、对照的、平行组、前瞻性、多中心的、多国的、干预研究中，将受试者平等地随机分成四个治疗组。此外，将自出生以来纯母乳喂养(从未接受任何婴儿配方物)且其母亲有意向继续纯母乳喂养直到婴儿至少4月龄的婴儿列入母乳喂养参照组。总共350名受试者入组，其中280名受试者被随机给予四种测试产品中的任一种，并且70名受试者被列入母乳喂养参照组。
测试组1：婴儿配方物1为实验测试配方物：用于奶瓶喂养的0-6月龄婴儿的基于牛乳的改良婴儿配方物。配方物含有约0.9g/100ml的不可消化寡糖(平均聚合度低于6的低聚半乳糖和平均聚合度大于20的低聚果糖(来自Orafti的RaftilinHP)的混合物)且包含发酵的婴儿配方物
Figure BDA0002625836310000321
(由法国的Gallia销售)，其包含短双岐杆菌和嗜热链球菌(发酵过程后被热灭活)、细菌发酵代谢物(如L-(+)乳酸盐)。L-乳酸盐的量基于组合物的干重计大于0.05重量％。不存在添加的不可消化寡糖。
测试组2：婴儿配方物2为用于奶瓶喂养的0-6月龄婴儿的基于牛乳的改良婴儿配方物(Nutrilon 1，由荷兰Nutricia销售)。配方物含有不可消化寡糖(NDO)——低聚半乳糖(购自FrieslandCampina Domo的
Figure BDA0002625836310000331
GOS，平均聚合度低于6)和低聚果糖(购自Orafti的RaftilinHP，平均聚合度高于20)以约9∶1的w/w比的混合物，其量为约0.8g/100ml。配方物不含发酵组合物。
测试组3：婴儿配方物2为用于奶瓶喂养的0-6月龄婴儿的基于牛乳的改良婴儿配方物，并且为包含短双歧杆菌和嗜热链球菌(在发酵过程后被热灭活)、细菌发酵代谢物(如L-(+)乳酸)的发酵婴儿配方物
Figure BDA0002625836310000332
(由法国的Gallia销售)。L-乳酸盐的量高于0.05重量％，基于组合物的干重计。不存在添加的不可消化寡糖。
对照组：婴儿配方物4为对照配方物：用于奶瓶喂养的0-6月龄婴儿的基于牛乳的改良婴儿配方物，不含不可消化寡糖且不含发酵的组分。
所有四种测试配方物都包含核苷酸和含有长链脂肪酸的脂肪混合物。配方物在卡路里含量、蛋白质含量、脂肪混合物方面相似，并且具有相似量的可消化碳水化合物。测试产品2和3中的活细菌数低于103cfu/g。根据用于婴儿配方物的国际指令2006/141/EC，配方物还包含维生素、矿物质、微量元素和其他微量营养素。
在研究结束时，198名随机受试者完成了研究，而82名随机受试者过早地退出研究。将有效的测试产品组和对照组相比，提早退出者的数量和性质没有统计学上的显著性差异。就人口统计学和基线特征而言，受试者在研究组中很好地均衡。
每次就诊时，父母将粪便样本收集到粪便容器中。在父母收集后将样品在-20℃下直接冷冻并保持在该温度下直至将样品交给研究人员。在现场，将样品储存在-80℃下用于后续分析。在每次收集时，2个管必须填充一半。通过荧光原位杂交(FISH)分析样品，其用于细菌鉴定和通过荧光细菌特异性DNA探针计数的细胞遗传学技术。以本领域已知的方式使用FISH探针。更具体而言，对于球形布劳特氏菌组，使用探针Erec48(Franks，1998，AEM 64：3336-45)。
结果：
在第4个月，实验组1中双歧杆菌增加，而几种梭菌菌种减少(数据未示出)。对于球形布劳特氏菌，在实验配方物中观察到了改善的效果。在基线时，任何配方物中球形布劳特氏菌的百分比均无差异(p值＞0.05；Kruskal-Wallis)。但是，在第4个月，检测到配方物之间的统计学显著性差异(p值＜0.001；Kruskal-Wallis检验)。第4个月的总体差异主要受Calismax(相对于对照：p值＝＜0.001；相对于Calisma：p值＝＜0.001；Wilcoxon Sum Rank检验)和Nutrilon(相对于对照：p-值＝＜0.001；相对于Calisma：p值＝0.015；WilcoxonSum Rank检验)配方物影响，参见表3。
表3：球形布劳特氏菌百分比，通过FISH测定。
Figure BDA0002625836310000351
a：p＜0.05组1相对于组2，b：p＜0.05组1相对于组3，c：p＜0.05组1相对于组4，d：p＜0.05组2相对于组3，e：p＜0.05组2相对于组4，f：p＜0.05组3相对于组4。使用WilcoxonSum Rank检验通过成对比较来确定。
观察到的结果再次表明，与不含发酵组合物和/或不含不可消化寡糖的配方物相比，在具有部分发酵配方物和不可消化寡糖的组合的配方物喂养的婴儿中观察到了对肠道菌群的改善效果。这些效果是针对α多样性(较低)和布劳特氏菌属(较低)观察的。

Claims (15)

1.由产乳酸细菌至少部分发酵的营养组合物，其中所述营养组合物包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐，且其中所述营养组合物包含基于干重计2.5至15重量％的不可消化寡糖，所述不可消化寡糖选自低聚果糖、不可消化糊精、低聚半乳糖、低聚木糖、阿拉伯寡糖、阿拉伯低聚半乳糖、低聚葡萄糖、低聚龙胆糖、葡甘露寡糖、半乳甘露寡糖、甘露寡糖、低聚异麦芽糖、黑曲霉寡糖、葡甘露寡糖、壳寡糖、大豆低聚糖、糖醛酸寡糖、唾液酸寡糖和岩藻寡糖及其混合物，所述营养组合物用于促进年龄在36个月以下的人类受试者的肠道菌群发育，所述肠道菌群与未由产乳酸细菌至少部分发酵且不包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐和/或不包含不可消化寡糖的营养组合物喂养的同龄人类受试者的肠道菌群相比，其组成更接近于人乳喂养的同龄人类受试者的肠道菌群。
2.根据权利要求1的具有所述用途的营养组合物，其中促进肠道菌群的发育是指，所述肠道菌群与未由产乳酸细菌至少部分发酵且不包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐和/或不包含不可消化寡糖的营养组合物喂养的人类受试者的肠道菌群相比，其具有较低的α-多样性，优选通过Chao-1指数测定。
3.根据权利要求1的具有所述用途的营养组合物，其中促进肠道菌群发育是指，所述肠道菌群与未由产乳酸细菌至少部分发酵且不包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐和/或不包含不可消化寡糖的营养组合物喂养的人类受试者的肠道菌群相比，其具有较低丰度的布劳特氏菌属和/或丹毒丝菌目和/或具有增加丰度的乳酸菌，优选是指肠道菌群具有较低丰度的布劳特氏菌属。
4.由产乳酸细菌至少部分发酵的营养组合物，其中所述营养组合物包含基于干重计总共0.02至1.5重量％的乳酸和乳酸盐，且其中所述营养组合物包含基于干重计2.5至15重量％的不可消化寡糖，所述不可消化寡糖选自低聚果糖、不可消化糊精、低聚半乳糖、低聚木糖、阿拉伯寡糖、阿拉伯低聚半乳糖、低聚葡萄糖、低聚龙胆糖、葡甘露寡糖、半乳甘露寡糖、甘露寡糖、低聚异麦芽糖、黑曲霉寡糖、葡甘露寡糖、壳寡糖、大豆低聚糖、糖醛酸寡糖、唾液酸寡糖和岩藻寡糖及其混合物，所述营养组合物用于预防和/或治疗年龄在36个月以下的人类受试者的肠道菌群失调。
5.根据前述权利要求中任一项用途的营养组合物，其中所述人类受试者为小于12个月，更优选小于6个月的婴儿。
6.根据前述权利要求中任一项用途的营养组合物，其中所述人类受试者具有脆弱的或不平衡的肠道菌群或肠道菌群失调，或处于具有脆弱的或不平衡的肠道菌群或肠道菌群失调的风险。
7.根据前述权利要求中任一项用途的营养组合物，其中所述营养组合物包含基于营养组合物的干重计总共0.1至1.5重量％的乳酸和乳酸盐。
8.根据前述权利要求中任一项用途的营养组合物，其中总共至少90重量％的乳酸和乳酸盐为L(+)-乳酸和/或L(+)-乳酸盐。
9.根据前述权利要求中任一项用途的营养组合物，其中发酵组合物通过双歧杆菌属和/或链球菌属发酵。
10.根据前述权利要求中任一项用途的营养组合物，其中所述营养组合物包含短双岐杆菌和/或嗜热链球菌。
11.根据前述权利要求中任一项用途的营养组合物，其中产乳酸细菌被灭活至低于106cfu/g营养组合物的干重的水平。
12.根据前述权利要求中任一项用途的营养组合物，其中发酵组合物的量为10至90重量％，基于全部营养组合物计。
13.根据前述权利要求中任一项用途的营养组合物，其中所述不可消化寡糖包含低聚半乳糖和/或低聚果糖。
14.根据前述权利要求中任一项用途的营养组合物，其中所述营养组合物包含蛋白质、可消化碳水化合物和脂质且其中蛋白质提供1.6至2.5g/100kcal营养组合物，可消化碳水化合物提供5至20g/100kcal营养组合物，并且脂质提供3至7g/100kcal营养组合物。
15.根据前述权利要求中任一项用途的营养组合物，其为婴儿配方物、第二阶段配方物、幼儿乳或幼儿配方物或用于少年儿童的成长乳，优选婴儿配方物。
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