CN112218894A

CN112218894A - 抗趋化因子样受体1抗体及其治疗应用

Info

Publication number: CN112218894A
Application number: CN201980037001.4A
Authority: CN
Inventors: N·波里尔; C·马里; B·瓦努夫; V·高铁尔; C·特里洛; M·杜布尔多
Original assignee: OSE Immunotherapeutics SA
Current assignee: OSE Immunotherapeutics SA
Priority date: 2018-04-03
Filing date: 2019-04-03
Publication date: 2021-01-12
Also published as: IL321209A; KR102802041B1; EP3774899A1; AU2019247068A1; JP2024105648A; BR112020020118A2; JP2021520210A; CA3102607A1; US20210147558A1; KR20250065423A; KR20210006359A; MA52174A; WO2019193029A1; IL277701A; US20240400698A1

Abstract

本发明提供了对消退素E1和CMKLR1之间的相互作用具有激动剂能力的抗CMKLR1化合物，及其在治疗或预防疾病(特别是炎症消退被延迟或破坏的疾病)中的用途。

Description

抗趋化因子样受体1抗体及其治疗应用

技术领域

本发明涉及免疫治疗领域。本发明提供了对趋化因子样受体-1(CMKLR1，chemokine like receptor)具有激动剂活性的新型抗趋化因子受体抗体。本发明还提供了此种抗体在治疗中的用途，特别是用于治疗自身免疫性疾病和慢性炎性疾病、感染性疾病、癌症以及炎症的消退(resolution)阶段被破坏或延迟的任何病症。

背景技术

炎症过程在健康和疾病中的关键作用早已为人所知。调节炎症的进展和消退的详细分子机制和生物学事件仍至关重要。最近的研究提供了有力证据表明炎症的消退并非是如先前所认为的被动过程。相反，炎症的消退是一种生物合成上的主动过程，受生化介质和受体信号传导通路的调节。因此，消退由特异性的促消退介质来驱动。炎症是在感染、受伤或外伤期间发生的自发机制。炎症是不可避免且通常是有益的，炎症反应通过正反馈回路和负反馈回路之间的微妙平衡来协调。炎症通常分为三个步骤：引发、放大和消退。

引发步骤的特征在于血管的扩张。常驻型细胞(resident cell)(树突状细胞(DC)和巨噬细胞)识别感染人体的病原体或危险信号。此步骤诱导细胞因子、趋化因子的分泌以及称为前列腺素(PG)的促炎性脂质介质和白细胞三烯(leukotriene)的产生。趋化因子返回血液循环并诱导先天免疫细胞作用子(actor)的募集(recruitment)。放大步骤开始于免疫系统的炎症细胞的募集。最先募集到感染部位的作用子是多形核粒细胞(PMN)。在细胞阶段，PMN识别病原体并负责清除病原体。其他细胞到达发炎部位(例如DC和促炎性巨噬细胞M1)以帮助PMN。DC进入血液循环并到达淋巴结以激活适应性免疫。T淋巴细胞和B淋巴细胞到达炎症部位并铲除被感染的细胞。当病原体被完全消除后，停止炎症以防止可能引起机体致病的慢性炎症就变得尤为重要。为此，发生一种名为“消退”的主动机制。因此，消退被描述为炎症的最后一步。

使炎性反应终止的消退过程是一个复杂的过程，涉及细胞(例如粒细胞或巨噬细胞)和化学(例如细胞因子或特异性的促溶解介质或因子)效应子的依顺序和依时间的参与。

消退缺陷可能导致粒细胞在炎性部位的渗透增加(例如通过组织学、细胞计数或间接生化技术进行测量，例如通过酶联免疫测定对粒细胞受体1进行弹性蛋白酶定量或通过PCR对粒细胞受体1进行分子定量)，延迟此类细胞的凋亡(例如使用针对膜联蛋白5的特异性抗体通过细胞学方法进行测量)。炎症消退缺陷也可能导致促炎性细胞因子(例如TNF-α、IL8或IL-12)被持续或增加地合成，以及抗炎性细胞因子(例如IL-10)减少(通过酶联免疫测定或PCR进行测量)，参与炎性细胞因子合成的转录因子(例如NF-κB)被持续或增加地激活(例如通过核易位或Western Blot进行测量和对IκB降解水平进行定量)。也可通过质谱或酶联免疫测定对特异性的促消退介质(例如脂氧素、消退素(resolvin)、保护素(protectin)或Maresin)或它们的前体(例如17-HDOHE或14-HDOHE)进行定量来测量。消退缺陷进而导致一种以上这些介质的合成缺陷。消退缺陷也可能由于消退分子(ALX/CMK1R1、GPR32、GPR18)的受体表达降低或这些受体内吞(internalization)进入细胞质和加工或某些炎性细胞因子或脂质的受体的过度表达所致。这些情况可通过组织学、细胞学或PCR来测量。消退缺陷还可能导致M1巨噬细胞向M2巨噬细胞转换的减少或抑制、相同细胞的吞噬作用或胞葬作用(efferocytosis)受损。

现在清楚的是，除此种机制涉及的检查点活化剂和/或抑制剂以外，一种化学物质家族也主动促进炎症的消退和组织修复，而不会损害宿主防御能力。急性炎症发作时的事件为一系列化学介质建立了生物合成途径，这些介质可充当拮抗剂和激动剂，这意味着它们不仅抑制炎症通路，还打击(strike)炎症，从而恢复组织稳态和功能。因此，抗炎因子不等同于促消退因子(Buckley等，2014；Serhan，2014a)。急性炎症的消退失败与慢性炎症发展有关。因此，抗炎性化合物指炎症消退的抑制剂或阻断剂(blocker)，其分子可阻止免疫外渗物(extravasation)；而促消退因子可刺激和/或激活引发或增强炎症消退的特定过程(例如凋亡或胞葬作用)。

在PMN引起的炎症反应开始后不久就开始消退，它清除病原体，并同时开始合成特异性促炎症消退介质(SPM，pro-resolving mediator)。这些SPM是消退阶段的主要作用子。中性粒细胞通过使促消退回路激活来确保炎症反应安全结束，从而控制炎症消退阶段的开始。在消退的早期阶段，中性粒细胞经历表型转换，从而根据当前环境中存在的细胞和底物产生不同类型的脂质介质。PMN-LT在脂氧素和消退素的作用下转换为PMN-LO(脂氧化酶)通路。它们暴露于启动表型变化的自体有效物质(autacoid)梯度。脂氧素通过细胞-细胞相互作用(PMN-5-LO/组织常驻型细胞–5-LO)期间参与的生物合成途径产生。已观察到在中性粒细胞缺失模型中伤口愈合被延迟，中性粒细胞释放使炎性细胞因子失活的蛋白酶。

各种分子参与炎症消退的引发或抑制。以下分子是此类活性分子的示例。COX-2(环氧合酶2)，一种前列腺素-内过氧化物合酶(PTGS)，是负责形成前列腺素类(包括血栓烷和前列腺素，例如前列腺环素)的酶，具有引起炎症发作的双重作用，并且之后作为消退过程的帮手。COX-2抑制剂可能在炎症的早期发挥有益作用。COX-2抑制剂还具有有害后果，例如减少早期PMN转运、破坏LXA的产生、减少巨噬细胞的吞噬作用以及减少PGE2和LXA。在炎症消退过程中，负反馈也涉及称为PGD2/15dPGJ的抗炎性前列腺素，但其他前列腺素(例如PGE2)也参与了正反馈。

G蛋白偶联受体(GPCR)构成了一个庞大的蛋白家族，其涵盖了广泛的功能，包括各种自分泌、旁分泌和内分泌过程。它们在序列水平显示出相当大的多样性，因此可将它们分为不同的组。通常，GPCR的激活会参与由G蛋白或B抑制蛋白(B-arrestin)或两者介导的信号传导通路的广泛网络。

趋化因子样受体1(CMKLR1)(也称为ChemR23)和趋化因子样受体2(CCRL2)是7跨膜受体，它们被与其同源的已知G蛋白偶联受体识别(AJ Kennedy和AP Davenport，2018)。趋化因子样受体1(CMKLR1；在鼠类动物中也称为Dez)是与GPR-1(38％的总体氨基酸同一性)、C3a受体(38％)、C5a过敏毒素受体(36％)和甲酰Met-Leu-Phe受体(35％)相关的孤儿(orphan)G蛋白偶联受体。ChemR23与趋化因子受体亚家族关系更远(Samson等，1998)。CMKLR1在单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞和NK细胞以及脂肪细胞和内皮细胞上表达。CMKLR1的表达在白细胞以外的许多细胞群中也有描述，包括前脂肪细胞和脂肪细胞(Goralski等，2007；Roh等，2007)、骨骼肌细胞(Sell等，2009)和内皮细胞(Kaur等，2010)，并提出了趋化素(chemerin)/CMKLR1系统在控制脂质和葡萄糖代谢(Bozaoglu等，2007；Ernst和Sinal，2010)、血压(Watts等，2013)和血管生成(Kaur等，2010)方面的其他作用。

鉴定这些受体的配体及其功能的最近研究已开始公开。因此，血浆蛋白衍生的化学引诱物(chemoattractant)趋化素是CMKLR1的配体，用趋化素活化CMKLR1已显示出在体外诱导巨噬细胞和树突状细胞(DC)迁移，这表明趋化素具有促炎性作用。相反，使用CMKLR缺陷型小鼠的体内研究表明，这些受体可能具有抗炎性作用，这可能是由于浆细胞样DC的募集。趋化素/CMKLR1相互作用也促进脂肪生成和血管生成。

趋化素在炎症过程中充当趋化因子，在感染部位募集细胞。该配体通过增强PMN凋亡和M2依赖性胞葬作用(非炎性吞噬作用；不释放促炎性介质)以及通过减少DC的迁移和IL-12(促炎性细胞因子)的分泌来促进急性炎症动物模型中炎症的消退(Serhan，2014b)。

趋化素大量存在于炎症液体中，具有抗菌活性，被证明可以吸引表达CMKLR1的白细胞，并促进巨噬细胞与细胞外基质蛋白的粘附(Wittamer等，2003)。此外，最近发现趋化素是一种脂肪因子。趋化素由成熟的脂肪细胞分泌，刺激前脂肪细胞分化。趋化素的血清水平升高与慢性炎性疾病、冠状动脉疾病、代谢综合征和肥胖症有关。有迹象表明，肥胖脂肪组织中趋化素大量产生可能会导致肥胖脂肪组织中巨噬细胞浸润的增加，从而导致炎症水平降低。当趋化素结合CMKLR1时，两种信号传导通路被活化：G蛋白信号传导通路和β-抑制蛋白信号传导通路。

CMKLR1的第二种配体是脂质介质消退素E1(RvE1)，属于消退素家族。抗炎性脂质介质消退素E1抑制白细胞浸润和促炎性基因表达。这些不同的结果表明，CMKLR1是一种多功能受体。它参与增加PMN凋亡和M2胞葬作用，并减少DC迁移和促炎性细胞因子(例如IL-12)的分泌。RvE1由嗜中性粒细胞和内皮细胞产生。由于阿司匹林激活负责产生RvE1的COX-2通路，因此，在体外用阿司匹林治疗诱导RvE1。此外，嗜中性粒细胞能够将18R-HEPE转化为RvE1。在局部侵袭性牙周炎(LAP)患者中，已观察到巨噬细胞能减少吞噬作用。RvE1挽救了LAP巨噬细胞受损的吞噬活性。RvE1还通过减少小鼠过敏性气道中的IL-23和IL-6以及增加IFN-γ来提高消退。RvE1调节自然杀伤(NK)细胞迁移和细胞毒性。当RvE1结合CMKLR1时，仅G蛋白信号传导通路被活化，而B-抑制蛋白通路被抑制。在特定条件下，B-阻滞(B-arresting)通路被抑制。

最初，对趋化素系统的关注集中于其在牛皮癣疾病中发现后在免疫细胞的炎症和趋化中的作用。最近，鉴于趋化素系统在炎症、肥胖症、代谢综合征中的作用，已研究其在与心血管功能相关的潜在作用以及在生殖生物学中的作用。因此，趋化素系统因其在炎症过程中的作用(特别是其在炎症消退中的作用)而广受关注。许多疾病与消退过程的延迟或中断有关。目前已知的大多数特异性促消退因子介质都来自多不饱和脂肪酸(包括脂氧素)，消退家族包括E系列消退素和D系列消退素、保护素和Maresin。但是，促消退分子由于其脂质性质而难以合成。例如，难以生产例如对临床试验而言足够量的促消退分子，并且很少能有效生产SPM。此外，难以产生特异性靶向G蛋白偶联受体的抗体。因此，需要具有引发或增强炎症反应的消退阶段的能力的分子(例如促消退因子)。

发明内容

在第一方面，本发明涉及抗CMKLR1抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体。在以下公开中，抗CMKLR1化合物被认为是抗CMKLR1抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体。在本发明的一个具体实施方式中，所述化合物由其CDR的序列定义。在本发明的一个更具体实施方式中，抗CMKLR1化合物是由其CDR和框架区(FR)的序列定义的抗体。抗CMKLR1化合物是与趋化因子样受体1(CMKLR1)特异性结合的化合物。在以下公开中，术语“趋化因子样受体1”、“CMKLR1”和“ChemR23”可互换使用，均指由人类中基因CMKLR1或非人动物中基因cmklr1编码的受体。在本发明的一个具体实施方式中，抗CMKLR1化合物与人CMKLR1特异性结合，或者换言之，本发明涉及抗人CMKLR1化合物。如本文所用，术语“CMKLR1”指趋化因子样受体1蛋白(也称为chemR23)，其为来自哺乳动物物种的G蛋白偶联受体家族的成员，优选为人CMKLR1。在本申请实施例中使用的人CMKLR1蛋白的参考序列对应于与Uniprot登录号Q99788(SEQ ID NO：1)相关的序列。

在第二方面，本发明涉及由至少一种功能特征定义的抗CMKLR1抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体。在一个优选实施方式中，所述抗CMKLR1化合物由其抑制促炎性细胞因子(特别是IL-12)的分泌的能力和/或增强抗炎性细胞因子(特别是IL-10和/或CCL17)的分泌的能力来定义。在一个更具体实施方式中，抗CMKLR1化合物抑制或增强巨噬细胞(特别是M1巨噬细胞和/或M2巨噬细胞)的细胞因子分泌。在一个具体实施方式中，本发明的抗CMKLR1化合物增强巨噬细胞向抗炎性巨噬细胞(特别是M2巨噬细胞)的极化。

在第三方面，本发明涉及抗CMKLR1抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物，其具有针对消退素E1(RvE1)的激动剂性质，从而模拟RvE1与CMKLR1阳性细胞上的CMKLR1的结合。“针对RvE1-CMKLR1相互作用的激动剂特性”指靶向CMKLR1的本发明的抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体具有模拟RvE1与(特别是树突状细胞、单核细胞和巨噬细胞上的)CMKLR1的结合(特别是人RvE1与人CMKLR1的结合)的作用，从而活化通常由RvE1活化的受体信号传导通路。由于受体的结合和活化会产生生物学应答，本发明的化合物可以导致G蛋白信号传导通路(特别是Gα_i和/或Gα_o信号传导通路)的活化，而不活化β-抑制蛋白通路；特别是本发明的化合物可以导致β-抑制蛋白通路的抑制。特别地，本发明化合物的结合在体外和/或体内诱导Akt和/或Erk蛋白的活化。换言之，与对照抗体相比，可将消退素E1样激动剂抗体定义为能够结合CMKLR1从而能诱导Akt和/或Erk蛋白磷酸化的抗体。对照抗体可为不特异性结合CMKLR1的抗体。蛋白质的磷酸化可根据技术人员公知的方法(例如本说明书的实施例中公开的方法)来确定。

在一个具体实施方式中，本发明的化合物是RvE1样激动剂，即本发明的化合物是RvE1诱导的CMKLR1信号传导通路的激动剂。换言之，本发明的抗CMKLR1化合物是RvE1和CMKLR1(特别是人RvE1和人CMKLR1)之间相互作用的激动剂。在一个具体实施方式中，本发明的化合物增强了由CMKLR1诱导的G蛋白通路的活化。在另一个实施方式中，本发明的化合物不诱导由CMKLR1诱导的β-抑制蛋白通路的活化。在另一个实施方式中，本发明的化合物抑制由CMKLR1诱导的β-抑制蛋白通路。在另一个实施方式中，由于本发明的化合物诱导RvE1与CMKLR1结合的至少一种激动剂作用且RvE1是促消退因子或促消退介质，因此，本发明化合物是促消退因子或促消退介质。

在一个具体实施方式中，本发明的化合物不干扰趋化素与CMKLR1的结合。趋化素是CMKLR1的天然配体之一。换言之，本发明的化合物不是趋化素和CMKLR1之间相互作用的激动剂。可根据本发明的实施例评估此种激动剂能力的不存在，其中，公开了竞争测定(competition assay)，该竞争测定在本发明抗CMKLR1抗体存在的情况下测量通过CMKLR1受体的趋化素依赖性B-抑制蛋白募集。在一个优选实施方式中，本发明的抗CMKLR1化合物不与趋化素竞争与CMKLR1的结合。在本发明CMKLR1化合物存在的情况下趋化素与CMKLR1的结合为在相同实验条件、但不存在本发明抗CMKLR1的情况下趋化素与CMKLR1结合的至少50％，优选至少80％，更优选至少90％，最优选类似于趋化素与CMKLR1的结合，可以确定本发明的抗CMKLR1化合物与趋化素之间不存在竞争。或者，可根据实施例11所示的方法确定本发明的抗CMKLR1化合物与趋化素之间不存在竞争。

在一个具体实施方式中，抗CMKLR1化合物具有在体外和/或体内活化至少一种Akt信号传导通路蛋白(也称为PI3K-Akt通路)和/或Erk信号传导通路蛋白(优选Akt蛋白和/或Erk蛋白，优选Akt和Erk蛋白两者)的能力。可根据本领域已知的方法(特别是利用本发明实施例中公开的方法)来评估通路的活化。

在一个具体实施方式中，本发明的抗体、其抗原结合片段、抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体在体外和/或体内增强RvE1诱导的IL-10细胞因子的分泌(特别是巨噬细胞的IL-10细胞因子的分泌)。在一个具体实施方式中，本发明的抗体、其抗原结合片段、抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体在体外和/或体内增强RvE1诱导的IL-10和CCL17细胞因子的分泌(特别是巨噬细胞的IL-10和CCL17的分泌)。在一个具体实施方式中，本发明的抗体、其抗原结合片段、抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体在体外和/或体内抑制IL-12细胞因子的分泌(特别是巨噬细胞的IL-12分泌)。抑制作用可能是部分抑制，即，在存在抗CMKLR1化合物的情况下，IL-12的分泌水平降低至低于基线水平(即没有RvE1或抗CMKLR1化合物时的水平)，或者抑制作用可能是完全抑制(无IL-12分泌)。

附图说明

图1：抗CMKLR1变体1G1、2G1、3G1和4G1嵌合抗体对DC成熟和分化的影响。在成熟阶段孵育小鼠树突状细胞(24小时或48小时)，然后使用赋形剂或RvE1或抗CMKLR1抗体变体(在SEQ ID NO.8的第1位和第2位的突变，对应于VH-CDR3：1G1(LL)、2G1(LI)、3G1(IL)或4G1(II))或同种型(isotype)对照(hIgG1或mlgG)进行分化阶段。然后用细胞标志物(marker)抗体对细胞染色以进行FACS分析：A.CD80-PE；B.CD86-FITC；C.CD103-PerCPCy5.5；D.1/Ab-APC。测定每种条件下的荧光平均值。E和F分别表示在成熟24小时或48小时后在每种条件下使用Life Technologies的

试剂盒通过FACS测量的细胞活力。

图2：抗CMKLR1抗体对DSS诱导的小鼠急性炎性结肠炎模型的影响。在DSS诱导6天后，小鼠每天用同种型对照hIgG1(10μg/小鼠)(x)、RvE1(10μg/小鼠)(●)或2G1抗体(10μg/小鼠)注射3次(□)，共5天。未治疗的野生型小鼠以▼表示。A.动物体重减轻。B.动物粪便评分。C.结肠长度。D.消退指数。

图3：抗CMKLR1抗体对TNBS诱导的小鼠急性炎性结肠炎模型的影响。小鼠在第0天接受200μL的5％半抗原化试剂(haptenating agent)TNBS(在50％乙醇中)，然后每天注射同种型对照hIgG1(10μg/小鼠)(x)、RvE1(1μg/小鼠)(●)或2G1抗体(10μg/小鼠)3次(□)，共5天，或未经治疗(野生型动物)(▲)。处死小鼠，测量每种条件下的结肠长度。

图4：抗CMKLR1抗体对IL-10KO小鼠慢性炎性结肠炎模型的影响。IL-10KO小鼠发展为自发性炎性结肠炎。这些小鼠用抗CMKLR1抗体(2G1)(□)或同种型对照(hIgG1)(x)(25μg/注射剂，每周3次)进行腹腔内治疗。A.治疗期间和之后的动物体重减轻。B.动物粪便评分。

图5：抗CMKLR1抗体对小鼠I型非肥胖糖尿病模型的影响。小鼠发展为自发性糖尿病。当血糖为180mg/dL至234mg/dL时，以20μg/注射剂的量腹腔内施用抗CMKLR1抗体(A和B中为□，C中为■)或同种型对照抗体(A和B中为x；C中为□)每周3次，共2周。A.存活百分比，B.单独表示的血糖浓度(mg/dL)。C.汇总表示的血糖浓度(mg/dL)。

图6：消退素E1对自身免疫性疾病(例如小鼠牛皮癣模型)的影响。Aldara处理的小鼠连续6天每天腹腔内注射：RvE1(1μg)(●)和PBS，在第0、2和4天注射同种型对照抗体(10μg)(x)。每天测量A.耳朵厚度和B.皮肤厚度，直至恢复。

图7：抗CMKLR1抗体对小鼠腹膜炎模型的影响。在酵母多糖A(Zymosan A)注射之前进行预防性注射抗CMKLR1(1mg(1mL)/小鼠)：RvE1(1μg/小鼠)(●)、2G1抗体(10μg/小鼠)(□)或同种型对照抗体(x)。A.在注射酵母多糖A后的最初50个小时内计数PMN。B.在注射酵母多糖A后的最初50小时内计数巨噬细胞。C.消退指数。

图8：抗CMKLR1抗体对4T1乳腺肿瘤模型的影响。小鼠在乳腺中接种了4T1细胞(25万)。然后，在第4天和第7天注射(10μg/注射剂)两次抗CMKLR1抗体(2G1)(A.

，B.●)或抗41BB抗体(3H3)(●)或这两种抗体(▲)，或注射对照抗体(IgG1同种型抗体克隆3G8)(x A.和B.)每周3次，共3周。A.肿瘤注射8天后测量肿瘤面积，然后每2天测量一次。B.通过生物发光成像(BLI)测量用同种型对照和抗CMKLR1抗体治疗的动物(n＝4)的肿瘤肺转移。

图9：抗CMKLR1抗体对2种不同的结肠上皮癌小鼠模型的影响。研究了两种小鼠模型，动物以20μg/注射剂腹腔内注射同种型对照抗体(3G8)(x)或抗CMKLR1(2G1)(□)3周。A.-C.CT26结肠上皮癌模型中的结果比较了用p84(A)和2G1(B)进行单次治疗与用这两种抗体进行组合治疗(C)。D.MC38结肠上皮癌模型的结果。

图10：CMKLR1在抗TNFa治疗之前和之后在溃疡性结肠炎(UC)或克罗恩病(Crohn'sDisease)患者活检中的表达。x表示对照；

表示在英夫利昔单抗(Infliximab)治疗前对皮质类固醇治疗和/或免疫抑制治疗有反应的患者中CMKLR1的表达；■表示在英夫利昔单抗治疗前对皮质类固醇治疗和/或免疫抑制治疗无反应的患者中CMKLR1的表达；Δ表示在英夫利昔单抗治疗后对皮质类固醇治疗和/或免疫抑制治疗有反应的患者中CMKLR1的表达；▲表示在英夫利昔单抗治疗后对皮质类固醇治疗和/或免疫抑制治疗无反应的患者中CMKLR1的表达。A.英夫利昔单抗治疗之前和之后溃疡性结肠炎患者的CMKLR1转录表达。B.英夫利昔单抗治疗之前和之后克罗恩病患者的炎症结肠活检中CMKLR1转录表达。

图11：CMKLR1在抗α4β7(VDZ)治疗之前和之后在UC患者活检中的表达。A.表示在维多利珠单抗(Vedolizumab)治疗之前和之后溃疡性结肠炎患者的炎症结肠活检中CMKLR1(CMKLR1)转录表达。R对应于对VDZ治疗有反应的患者，NR对应于对VDZ治疗无反应的患者。

图12：通过ELISA测定抗CMKLR1抗体对CMKLR1肽的结合。通过ELISA测量在450nm处的OD，将CMKLR1 EL3环(SEQ ID NO：18)上2G1抗体(□)的结合与同种型对照抗体(3G8)(x)进行比较。

图13：通过FACS和Western blot研究CMKLR1在不同细胞系中的表达。A.用两种不同人T细胞系Thp1和U937，使用2G1抗体以不同浓度(ng/ml)测定CMKLR1在细胞表面的蛋白表达。B.通过Western Blot测定T细胞系(Thp1和U937)、成纤维细胞系MRC5、NK细胞系NKL以及阴性和转导CHO细胞的CMKLR1的CMKLR1蛋白表达。

图14：通过FACS测定小鼠骨髓样细胞(myeloid cell)的CMKLR1表达。分化后，分析小鼠髓样谱系细胞在细胞表面的CMKLR1表达。A.巨噬细胞单核细胞(MO)的表达。B.和C.巨噬细胞(mM1和mM2)的表达。D.和E.树突状细胞(mDC和iDC)的表达。

图15：人巨噬细胞在CMKLR1活化期间的炎性细胞因子分泌的研究。在人巨噬细胞M1或M2分化后，在培养基、同种型对照、抗CMKLR1抗体(H6和BZ194)、C15肽、2G1抗CMKLR1抗体或RvE1的存在下孵育细胞。通过ELISA评估IL-10、CCL17和IL-12p40的分泌。使用BD公司的ELISA试剂盒测量上清液中细胞因子的分泌。以1/10稀释上清液用于检测IL-10细胞因子，以1/50稀释上清液用于检测CCL17细胞因子，以1/100稀释上清液用于检测IL-12p40细胞因子。A.M2细胞分泌的IL-10细胞因子。B.M2细胞分泌的CCL17细胞因子。C.表示M1细胞分泌的IL-12细胞因子。

图16：人巨噬细胞在CMKLR1活化期间的炎性细胞因子分泌的研究。在人单核细胞分化后，在不同同种型对照(mlgG4；hIgG4或hIgG1，2μg/ml)、C7市售抗CMKLR1抗体(2μg/ml)、2G4或2G1抗体(2μg/ml)或其他市售抗CMKLR1抗体(H6(2μg/ml)、BZ332(2μg/ml)或84939(2μg/ml)、C15肽(10nM)或RvE1(10ng/ml)的存在下孵育细胞。A.通过FACS测量CD200R标志物的表达。B.M2细胞分泌的IL-10细胞因子。C.M2细胞分泌的CCL17细胞因子。D.表示M1细胞分泌的IL-12细胞因子。通过ELISA评估IL-10、CCL17和IL-12p40的分泌。

图17：CMKLR1通路活化后髓样细胞活化标志物的研究。用赋形剂、RvE1、2G1或同种型对照(hIgG1)孵育树突状细胞，然后进行染色，以用标志物抗体进行FACS分析：A.CD80-PE；B.CD86-FITC；C.CD103-PerCPCy5.5；D.CD40-PeCy 7；E.1/Ab-APC。测定每种条件下的荧光平均值。

图18：CMKLR1通路活化的研究：Akt和Erk磷酸化。用2G1或RvE1孵育小鼠M1细胞5分钟、10分钟和30分钟后，对ERK和AKT活化通路进行Western Blot分析。使用P-Akt抗体或P-Erk抗体(p44/42)评估磷酸化的蛋白Akt或Erk。A.用RvE1活化Erk和Akt。B.用2G1活化Erk和Akt。

图19：用促炎性刺激剂刺激的人单核细胞和小鼠骨髓细胞的CMKLR1表达。用LPS、TNFα或IL6刺激细胞16小时或48小时后，通过FACS测量CMKLR1(ChemR23)的表达。A.人血液单核细胞的结果；B.和C.来自小鼠骨髓的髓样细胞和中性粒细胞的结果。

图20：趋化素-CMLKRI与抗CMKLR1抗体相互作用的竞争研究。

A.检测了来自两个不同供应商DiscoverX(·)或R&D System(▲)的趋化素或单独与抗CMKLR1抗体(2G1)组合(◇)或与DiscoverX的趋化素组合(□)对cAMP的抑制作用。

B.在1μM至1nM的不同浓度的抗CMKLR1抗体以及2nM(◇)或6nM(·)的趋化素的存在下，β抑制蛋白(beta Arrestin)的活化。

图21：抗CMKLR1抗体在CD45Rb^高T细胞转移慢性结肠炎小鼠模型中的作用。

跟踪受治疗动物的体重变化高达60天。用同种型对照hIgG1(x)或抗CMKLR1抗体(■)治疗动物。

图22：抗CMKLR1抗体对肝癌(Hepatocarcinoma)小鼠模型(HCC模型)的影响。每周腹腔(i.p.)注射抗CMKLR1抗体(2G1，0.8mg/kg)3次(共2周)，组合(▲)或不组合(·)在第4天和第8天注射两次抗PD1 mAb(RMP1-14克隆，8mg/kg)或单独注射(每周两次)抗PD-1抗体(Δ)的抗肿瘤作用。在小鼠肝癌的正交模型(在第0天，通过门静脉注射2.5×10⁶Hepa 1.6细胞)中治疗小鼠2周。同种型对照抗体以0.8mg/kg的剂量每周使用3次，共2周。在停止治疗后，当小鼠存活数天至1个月时，则认为小鼠被部分缓解(PR，partial response)；当小鼠存活超过1个月时，则认为小鼠被完全缓解(CR，complete response)；当小鼠存活时间比所有对照小鼠染色所需时间长三倍时，则认为小鼠被治愈。

具体实施方式

如本文所用，术语“抗体”包括多克隆抗体、单克隆抗体或重组抗体。如本文所用，与包含具有不同氨基酸序列的抗体混合物的“多克隆”抗体制剂相比，“单克隆抗体”意指获得具有共同重链和共同轻链氨基酸序列的抗体的抗体分子制剂。单克隆抗体可通过几种已知技术产生，例如噬菌体、细菌、酵母或核糖体展示，以及以杂交瘤衍生抗体为例的经典方法。也可使用公开的氨基酸序列作为参考来合成抗体。因此，术语“单克隆”用于指衍生自一种核酸克隆的所有抗体。

本发明的抗体包括重组抗体。如本文所用，术语“重组抗体”指通过重组方式生成、表达、产生或分离的抗体，例如，使用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体；从重组组合抗体文库中分离的抗体；从转基因有人免疫球蛋白基因的动物(例如小鼠)分离的抗体；或以特定免疫球蛋白基因序列(例如人免疫球蛋白基因序列)与其他DNA序列组装在一起的任何其他方式生成、表达、产生或分离的抗体。例如，重组抗体包括嵌合抗体和人源化抗体。

如本文所用，“嵌合抗体”指源自哺乳动物物种(例如小鼠)种系的可变结构域序列被拼接到源自另一哺乳动物物种(例如人)种系的恒定结构域序列上的此种抗体。

如本文所用，在第一实施方式中，人源化抗体”指源自另一哺乳动物物种(例如小鼠)种系的CDR序列被拼接到人或人源化框架序列上的此种抗体。在另一个实施方式中，“人源化抗体”指其中至少一个CDR和全部或部分框架序列被人源化的抗体。

如本文所用，“抗体的抗原结合片段”指表现出对CMKLR1的抗原结合能力的抗体的一部分(即与本发明抗体的结构的一部分相对应的分子)，其可能为天然形式；与相应的4链抗体的抗原结合特异性相比，此种片段特别是对所述抗原表现出相同或基本相同的抗原结合特异性。有利地，抗原结合片段具有与相应的4链抗体相似的结合亲和力。然而，与相应的4链抗体相比，抗原结合亲和力降低的抗原结合片段也涵盖在本发明内。抗原结合能力可通过测量抗体和靶片段之间的亲和力来确定。这些抗原结合片段也可以称为抗体的“功能片段”。

抗体的抗原结合片段是这样的片段：其包含称为CDR(互补决定区)的其高变结构域或包含抗原识别位点的其部分(即CMKLR1的胞外结构域，特别是CMKLR1的胞外结构域的第三环(称为EL3))，从而限定抗原识别的特异性。EL3位于SEQ ID NO：1的氨基酸残基283和氨基酸残基300之间。EL3对应于SEQ ID NO：2的氨基酸残基。EL3也包含在SEQ ID NO：18的多肽内。

四链免疫球蛋白的每个轻链链可变结构域和重链可变结构域(分别为VL和VH)均具有三个CDR，轻链可变结构域的三个CDR称为VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3，重链可变结构域的三个CDR称为VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3。四链免疫球蛋白的每个轻链可变结构域和重链可变结构域均具有四个框架区(FR)，轻链可变结构域的四个FR称为LFR1、LFR2、LFR3和LFR4，重链可变结构域的四个FR称为HFR1、HFR2、HFR3和HFR4。

通过参考在此方面阐述的标准定义(包括参考编号系统)、参考KABAT编号系统或通过应用IMGT的“Collier de Perle”算法，本领域技术人员能够确定抗体的各个区/结构域的位置。在此方面，为了定义本发明的序列，应注意，不同参考系统之间的区/结构域的界定可能不同。因此，本发明中定义的区/结构域包括在抗体的可变结构域的全长序列内长度或位置变化约+/-10％的相关序列。

因此，基于四链免疫球蛋白的结构，可通过与可用数据库和现有技术中的抗体序列进行比较(尤其通过比较这些序列中功能结构域的位置)来定义抗原结合片段，注意，各种类型的抗体(特别是IgG，特别是哺乳动物IgG)的框架和恒定结构域的位置是明确定义的。此种比较还涉及与抗体的三维结构有关的数据。

出于说明本发明的具体实施方式的目的，包含可变结构域(其包含抗体的CDR)的所述抗体的抗原结合片段涵盖Fv、dsFv、scFv、Fab、Fab'、F(ab')2。Fv片段由通过疏水相互作用结合在一起的抗体的VL和VH结构域组成；在dsFv片段中，VH：VL异二聚体通过二硫键稳定；在scFv片段中，VL和VH结构域通过柔性肽接头彼此连接，从而形成单链蛋白。Fab片段是可通过木瓜蛋白酶消化抗体得到的单体片段；Fab片段包含通过二硫键结合在一起的整个L链和H链的VH-CH1片段。F(ab')2片段可通过胃蛋白酶消化铰链二硫键下的抗体产生；F(ab')2片段包含两个Fab'片段，以及免疫球蛋白分子铰链区的一部分。Fab'片段可通过在铰链区切割二硫键而由F(ab')2片段获得。F(ab')2片段是二价的，即F(ab')2片段像天然免疫球蛋白分子一样包含两个抗原结合位点；另一方面，Fv(构成Fab的可变部分的VHVL二聚体)、dsFv、scFv、Fab和Fab'片段是单价的，即它们包含单个抗原结合位点。可将本发明的这些基本的抗原结合片段组合在一起以获得多价抗原结合片段，例如双价抗体(diabody)、三价抗体(tribody)或四价抗体(tetrabody)。这些多价抗原结合片段也是本发明的一部分。

如本文所用，术语“修饰的抗体”包括“双特异性”抗体，并且指凭借对第一抗原具有特异性的至少一个区域(例如源自第一抗体的可变区)以及对第二抗原具有特异性的至少一个第二区域(例如源生自第二抗体的可变区)来识别两种不同抗原的抗体。双特异性抗体特异性结合两个靶抗原，因此是一种多特异性抗体。识别两种以上不同抗原的多特异性抗体可通过重组DNA方法产生，或者包括但不限于通过任何方便方法在化学上产生的抗体。双特异性抗体包括能够识别两种不同抗原的所有抗体或抗体的缀合物或抗体的聚合物形式。双特异性抗体包括经还原和重组以保留其二价特征的抗体以及经化学偶联的抗体，使得它们能对每种抗原具有多个抗原识别位点，例如BiME(双特异性巨噬细胞增强抗体)、BiTE(双特异性T细胞衔接子(engager))、DART(双重亲和力重定位)、DNL(对接-锁定结构，dock-and-lock)、DVD-Ig(双可变结构域免疫球蛋白)、HAS(人血清白蛋白)、KiH(杵臼结构，knob into hole)。

抗原结合抗体模拟物是特异性结合抗原但与抗体在结构上不相关的有机化合物。抗体模拟物通常是摩尔质量为约3至20kDa的人工肽或小蛋白质。核酸和小分子有时也被视为抗体模拟物，但不包括人工抗体、抗体片段和由它们组成的融合蛋白。与抗体相比，抗体模拟物的共同优势是溶解度、组织渗透性、对热和酶的稳定性更好以及生产成本相对较低。抗体模拟物被开发为治疗剂和诊断剂。抗原结合抗体模拟物也可选自：亲和体(affibody)、Affilin、亲和性多聚体(affimer)、Affitin、DARPin和单克隆抗体。

更优选地，抗原结合抗体模拟物选自Affitin和Anticalin。Affitin是具有选择性结合抗原能力的人工蛋白质。Affitin在结构上源自在嗜酸热硫化叶菌Sulfolobusacidocaldarius(属于古细菌属结构域的微生物)中发现的DNA结合蛋白Sac7d。通过随机化Sac7d结合表面上的氨基酸，例如通过生成对应于Sac7d结合界面的11个残基的随机取代的变体，可以生成Affitin文库并使所得蛋白质文库经历多轮核糖体展示，亲和力可以针对各种靶标(例如肽、蛋白质、病毒和细菌)。Affitin是抗体模拟物，正在被开发作为生物技术中的工具。Affitin还被用作各种酶的特异性抑制剂(Krehenbrink等，J.mol.Biol.,383:5,2008)。技术人员可以使用本领域已知的方法(特别是如专利申请WO2008068637和以上引用出版物中所公开的方法)容易地开发出具有所需结合特性的Affitin，特别是使用本文所公开抗原产生和筛选噬菌体展示文库和/或核糖体展示文库。Anticalin是能够结合抗原(蛋白质或小分子)的人工蛋白质。Anticalin是源自天然结合蛋白家族的人脂质运载蛋白(lipocalin)的抗体模拟物。Anticalinn小约八倍，大小为约180个氨基酸，质量为约20kDa(Skerra,Febs J.,275:11,2008)。已经产生了Anticalin噬菌体展示文库，该Anticalin噬菌体展示文库可用于筛选和选择特别是具有特定结合特性的Anticalin。技术人员可使用本领域已知的方法(特别是如EP专利EP1270725B1、US专利US8536307B2、Schlehuber和Skerra，Biophys Biophys.Chem.,96:2-3,2002以及以上引用出版物中所公开的方法)容易地开发具有所需结合特性的Anticalin，特别是使用本文所公开抗原产生和筛选噬菌体展示文库和/或核糖体展示文库。Anticalin和Affitin均可在许多表达系统(包括细菌表达系统)中产生。因此，本发明包括具有本文所述抗体的特性的Affitin、Anticalin和其他类似抗体模拟物的用途，特别是关于它们结合CMKLR1的能力、它们对RvE1和CMKLR1之间结合的激动剂能力、它们诱导或抑制如本文所述的特定细胞因子分泌的能力、它们在治疗或预防本文所述疾病中的用途，所有这些均被认为是本发明的模拟物。

如本文所用，“修饰的抗体”指其氨基酸序列已通过至少一种氨基酸残基突变而改变的抗体。因此，“修饰的抗体”涵盖本文所述的嵌合抗体或人源化抗体，“修饰的抗体”还可对应于包含抗体或其抗原结合片段的分子，其中，所述单克隆抗体或其功能片段与功能不同的分子相关。本发明的修饰的抗体可以为由任何合适的结合形式产生的融合嵌合蛋白或缀合物，所述结合形式包括共价结合、接枝、与化学基团或生物基团或与分子(例如PEG聚合物或适合在体内抵抗蛋白酶切割的另一种保护性基团或分子)化学键合，用于改善抗体或功能片段的稳定性和/或半衰期。用类似的技术(特别是通过化学偶联或接枝)，修饰的抗体可用生物活性分子来制备，例如，所述活性分子选自：毒素(特别是假单胞菌外毒素A、植物毒素蓖麻毒素A链或皂草素毒素，特别是治疗活性成分)、适用于将抗体或功能片段靶向人体特定细胞或组织的载体(特别是蛋白质载体)，或者(特别是当使用抗体片段时)所述修饰的抗体可与标记物或接头缔结。将抗体或其功能片段PEG化(PEGylation)是特别有用的实施方式，因为特别是对于治疗应用而言，PEG化改善了向宿主递送活性物质的条件。PEG化可以为位点特异性的，以防止干扰抗体或功能片段的识别位点，PEG化可以用高分子量PEG进行。可通过存在于抗体或功能片段的序列中的游离半胱氨酸残基或通过在抗体或功能片段的氨基序列中添加的游离半胱氨酸残基来实现PEG化。根据本发明，当使用术语“抗体”时，它指抗体、其抗原结合片段、抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体。

非人(例如鼠)抗体的“人源化”形式是嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(例如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或抗体的其他靶结合子序列)，其包含源自非人免疫球蛋白的最小序列。通常，人源化抗体将基本上包含所有至少一种、通常是两种可变结构域，其中，所有CDR区对应于非人免疫球蛋白的CDR区和/或CDR区的人源化形式；所有或基本上所有的FR区都是人免疫球蛋白模板序列的FR区。人源化抗体还可包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常是所选择的人免疫球蛋白模板的恒定区。在一个具体实施方式中，本发明涉及包含本文所公开的重链可变区和本文所公开的轻链可变区的抗体，所述重链可变区和/或轻链可变区还包含恒定区(特别是Fc区)。

术语“特异性结合”和“与…特异性结合”指本发明的抗体、其抗原结合片段、抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体以至少1×10^-6M、1×10^-7M、1×10^-8M、1×10^-9M、1×10^-10M、1×10^-11M、1×10^-12M以上的亲和力与CMKLR1结合的能力，和/或以比其对非特异性靶标(例如，除CMKLR1以外的另一种蛋白质)的亲和力高至少两倍的亲和力与CMKLR1结合的能力。可根据本领域技术人员公知的各种方法来评估亲和力。这些方法包括但不限于生物传感器，例如Biacore分析、Blitz分析和Scatchard图。

术语“治疗有效量”用于指足以至少改善所治疗患者的临床或生理状况的本文所述的任何给定化合物的量。要施用的本发明的抗体、其抗原结合片段、抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体的治疗有效量取决于诸如所治疗的疾病、所治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床症状、疾病的原因、药剂的递送部位、施用方法、施用时间表以及医师已知的其他因素等考虑因素。

对本文公开的关于抗体或其抗原结合片段的所有实施方式在细节上作必要变通后，均转化为本发明的大分子(特别是抗原结合抗体模拟物和修饰的抗体)。

在第一方面，本发明涉及抗体、其抗原结合片段、抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体，其中，所述抗体、其抗原结合片段、抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体特异性结合CMKLR1(特别是CMKLR1的EL3环)，特别是特异性结合包含SEQ ID NO：2的氨基酸残基的多肽，更特别是特异性结合位于SEQ ID NO：2或CMKLR1的EL3环内的表位，所述表位由氨基酸残基“AMPGS”(SEQ ID NO：152)的序列组成，所述抗体、其抗原结合片段、抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体包含：

-包含HCDR1、HCDR2和HCDR3的重链可变结构域；

-包括LCDR1、LCDR2和LCDR3的轻链可变结构域。

另一方面，本发明涉及抗CMKLR1化合物，其中，所述抗CMKLR1化合物选自特异性结合CMKLR1的抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或嵌合抗体或人源化抗体，所述化合物包含：

-包含三个CDR(VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3)的抗体重链可变结构域，其中：

·VHCDR1包含或由SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列或其突变序列(其中氨基酸残基被取代)组成；以及

·VHCDR2包含或由SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列或其突变序列(其中氨基酸残基被取代)组成；以及

·VHCDR3包含或由SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列或其突变序列(其中氨基酸残基被取代以使SEQ ID NO：8的第1位和第2位的氨基酸残基分别是L和I或L)组成；以及

-包含三个CDR(VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3)的抗体轻链可变结构域，其中：

·VLCDR1包含或由SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列或其突变序列(其中氨基酸残基被取代)组成；以及

·VLCDR2包含或由SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列或其突变序列(其中氨基酸残基被取代)组成；以及

·VLCDR3包含或由SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列或其突变序列(其中氨基酸残基被取代)组成；

其中，所述抗CMKLR1化合物是CMKLR1的RvE1样激动剂，特别地，所述抗CMKLR1化合物是促消退因子，特别是针对髓样细胞谱系；

特别地，抗CMKLR1化合物是抗人CMKLR1化合物。

在另一方面，本发明涉及抗CMKLR1化合物，其中，所述抗CMKLR1化合物选自特异性结合CMKLR1的抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或嵌合抗体或人源化抗体，所述抗CMKLR1化合物包含抗体重链可变结构域，所述抗体重链可变结构域包含VHCDR3，所述VHCDR3包含或由SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列或其突变序列组成，所述突变序列中的氨基酸残基被取代以使SEQ ID NO：8的第1位和第2位的氨基酸残基分别是L和I或L；以及

其中，抗CMKLR1化合物特异性结合位于CMKLR1的第三胞外环(EL3，extra-cellular loop)内的表位，特别地，所述化合物特异性结合多肽，所述多肽包含或由序列SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：152的氨基酸残基组成；以及

其中，抗CMKLR1化合物是CMKLR1的消退素E1样激动剂，特别地，抗CMKLR1化合物是促消退因子，特别是针对髓样细胞谱系；以及

其中，所述化合物与包含对应于SEQ ID NO：9的重链可变结构域和对应于SEQ IDNO：16的轻链可变结构域的抗体竞争结合多肽；更特别地，所述化合物与抗体2G1竞争结合多肽，所述多肽包含或由序列SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：152的氨基酸残基组成，或者所述多肽包含或由CMKLR1的胞外域的第三环(EL3)组成。

另一方面，本发明涉及抗CMKLR1化合物，所述抗CMKLR1化合物选自特异性结合CMKLR1的抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或嵌合抗体或人源化抗体，所述化合物包含：

-包含三个CDR(即VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3)的抗体重链可变结构域，其中：

-包含三个CDR(即VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3)的抗体轻链可变结构域，其中：

所述化合物与包含对应于SEQ ID NO：9的重链可变结构域和对应于SEQ ID NO：16的轻链可变结构域的抗体竞争结合多肽(或抗原)和/或竞争结合CMKLR1的第三胞外环；更特别地，所述化合物与抗体2G1竞争结合多肽(或抗原)和/或竞争结合CMKLR1的第三胞外环，所述多肽(或抗原)包含或由序列SEQ ID NO：2和/或SEQ ID NO：152的氨基酸残基组成(即，交叉竞争结合SEQ ID NO：2和/或SEQ ID NO：152的氨基酸残基或CMKLR1的第三胞外环)。可通过本文所公开的实施例(特别是实施例9中通过ELISA测定来分析结合亲和力)评估与多肽的结合和/或与CMKLR1的第三胞外环的结合，所述多肽包含或由序列SEQ ID NO：2和/或SEQ ID NO：152的氨基酸残基组成。为了确定测试抗体是否可以在表位被2G1抗体(或包含对应于SEQ ID NO：9的重链可变结构域和对应于SEQ ID NO：16对应的轻链结构域的抗原结合片段)结合时竞争结合相同抗原或第三环，可以进行交叉阻断测定(例如竞争ELISA测定)。在一个示例性竞争ELISA测定中，可将包含或由表位或第三环组成的多肽包被在微量滴定板的孔上，与或不与候选竞争抗体一起预孵育，然后添加本发明的生物素标记的2G1抗体。使用亲和素-过氧化物酶缀合物和合适的底物，测量孔中与多肽(其包含或由SEQ IDNO：2或SEQ ID NO：152的多肽组成)或CMKLR1的第三环结合的标记的抗2G1抗体的量。抗体可用放射性或荧光标记或一些其他可检测和可测量的标记来进行标记。与SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：152的多肽或第三环结合的标记的抗2G1抗体的量与候选竞争抗体(测试抗体)竞争结合相同表位或相同环的能力间接相关，即，测试抗体对相同表位的亲和力越大，标记的2G1抗体与抗原包被的孔的结合就越少。与在不存在候选竞争抗体(但可存在已知的非竞争抗体)的情况下平行进行的对照相比，如果候选竞争抗体可将2G1抗体的结合阻断至少20％(优选至少20％至50％、更优选至少50％)，则该候选竞争抗体被视为与本发明2G1抗体竞争结合相同多肽或第三环的抗体。应理解，可对该测定进行变化以获得相同的定量值。

在另一方面，本发明涉及特异性结合CMKLR1(特别是人CMKLR1)的抗体、其抗原结合片段、抗原结合抗体模拟物或嵌合抗体或人源化抗体，其包含：

·HCDR1包含或由SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：63、SEQID NO：64或SEQ ID NO：65所示的氨基酸序列组成；以及

·VHCDR2包含或由SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQID NO：68、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：71或SEQ ID NO：72所示的氨基酸序列组成；以及

·VHCDR3包含或由SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：74，SEQID NO：75、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：145，SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：148、SEQ ID NO：149、SEQ ID NO：150或SEQ ID NO：151所示的氨基酸序列组成；和/或

·VLCDR1包含或由SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：79或SEQ ID NO：80所示的氨基酸序列组成；以及

·VLCDR2包含或由SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：87或SEQ ID NO：88所示的氨基酸序列组成；以及

·VLCDR3包含或由SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：89所示的氨基酸序列组成。

在一个具体实施方式中，本发明涉及特异性结合CMKLR1(特别是人CMKLR1)的抗体、其抗原结合片段、抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体，其包含：

·VHCDR1包含或由SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：62或SEQ ID NO：63所示的氨基酸序列组成；以及

·VHCDR2包含或由SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：70或SEQ ID NO：72所示的氨基酸序列组成；以及

·VHCDR3包含或由SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：144或SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列组成；和/或

·VLCDR1包含或由SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列组成；以及

·VLCDR2包含或由SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：81或SEQ ID NO：84所示的氨基酸序列组成；以及

在本发明的一个具体实施方式中，抗体重链可变结构域包含：SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的VHCDR1、SEQ ID NO：67所示的氨基酸序列的VHCDR2；以及SEQ ID NO：144或SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列(更特别是SEQ ID NO：144所示的氨基酸序列)的VHCDR3。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体重链可变结构域包含：SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的VHCDR1、SEQ ID NO：70所示的氨基酸序列的VHCDR2以及SEQ ID NO：144或SEQID NO：148所示的氨基酸序列(更特别是SEQ ID NO：144所示的氨基酸序列)的VHCDR3。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体重链可变结构域包含：SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的VHCDR1、SEQ ID NO：72所示的氨基酸序列的VHCDR2以及SEQ ID NO：144或SEQID NO：148所示的氨基酸序列(更特别是SEQ ID NO：144所示的氨基酸序列)的VHCDR3。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体重链可变结构域包含：SEQ ID NO：62所示的氨基酸序列的VHCDR1、SEQ ID NO：67所示的氨基酸序列的VHCDR2以及SEQ ID NO：144或SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列的VHCDR3(更特别是SEQ ID NO：144所示的氨基酸序列)的VHCDR3。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体重链可变结构域包含：SEQ ID NO：62所示的氨基酸序列的VHCDR1、SEQ ID NO：70所示的氨基酸序列的VHCDR2以及SEQ ID NO：144或SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列的VHCDR3(更特别是SEQ ID NO：144所示的氨基酸序列)的VHCDR3。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体重链可变结构域包含：SEQ ID NO：62所示的氨基酸序列的VHCDR1、SEQ ID NO：72所示的氨基酸序列的VHCDR2以及SEQ ID NO：144或SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列的VHCDR3(更特别是SEQ ID NO：144所示的氨基酸序列)的VHCDR3。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体重链可变结构域包含：SEQ ID NO：63所示的氨基酸序列的VHCDR1、SEQ ID NO：67所示的氨基酸序列的VHCDR2以及SEQ ID NO：144或SEQ ID NO：148所示的氨基酸的VHCDR3(更特别是SEQ ID NO：144所示的氨基酸序列)的VHCDR3。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体重链可变结构域包含：SEQ ID NO：63所示的氨基酸序列的VHCDR1、SEQ ID NO：70所示的氨基酸序列的VHCDR2以及SEQ ID NO：144或SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列的VHCDR3(更特别是SEQ ID NO：144所示的氨基酸序列)的VHCDR3。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体重链可变结构域包含：SEQ ID NO：63所示的氨基酸序列的VHCDR1、SEQ ID NO：72所示的氨基酸序列的VHCDR2以及SEQ ID NO：144或SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列的VHCDR3(更特别是SEQ ID NO：144所示的氨基酸序列)的VHCDR3。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列的VLCDR1、SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列的VLCDR2以及SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列的VLCDR3。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列的VLCDR1、SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列的VLCDR2以及SEQ ID NO：89所示的氨基酸序列的VLCDR3。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的VLCDR1：77、SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列的VLCDR2以及SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列的VLCDR3。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列的VLCDR1、SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列的VLCDR2以及SEQ ID NO：89所示的氨基酸序列的VLCDR3。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列的VLCDR1、SEQ ID NO：84所示的氨基酸序列的VLCDR2以及SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列的VLCDR3。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体轻链可变结构域包含：SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列的VLCDR1、SEQ ID NO：84所示的氨基酸序列的VLCDR2以及SEQ ID NO：89所示的氨基酸序列的VLCDR3。

在本发明的一个具体实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体是鼠抗体的人源化抗体，特别地，抗体轻链可变结构域和/或抗体重链可变结构域的至少一个框架区(FR1和/或FR2和/或FR3和/或FR4)源自人链框架区，所述轻链和/或重链还包含本文所述的CDR或野生型CDR的任何组合。

从重链第三CDR的氨基酸序列的多种选择开始，已定义并合成了野生型抗体，本公开称为2G1和2G4(具有相同的可变区但具有不同的重链恒定区)。因此，已产生、合成了几种推定的抗体序列并检测了它们的结合和生物学特性。在多种新合成的抗体中，已确定了重链可变结构域的第三CDR(根据IMGT)中氨基酸残基“5'RLIY 3'”或“5'RLLY 3'”序列的存在与抗体对RvE1-CMKLR1相互作用的激动剂特性高度相关。具有不同氨基酸残基序列(例如“5'RIIY 3'”；“5'RILY 3'”)的抗体对RvE1与CMKLR1结合的激动剂能力相对较差。

因此，合成的野生型抗CMKLR1抗体(本公开称为2G1和4G1)是具有鼠可变区和人恒定区(2G1为人IgG1或2G4为人IgG4)的嵌合抗体。2G1在其可变序列中具有以下氨基酸序列：

重链：

其中，信号肽用小写字母表示，CDR以粗体显示(根据Kabat)或加下划线(根据IMGT)。重链的全序列对应于具有信号肽的SEQ ID NO：10，而SEQ ID NO：9对应于无信号肽的重链。根据Kabat的CDR1、CDR2和CDR3分别对应于SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6和SEQ IDNO：144。根据IMGT的CDR1、CDR2和CDR3分别对应于SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：7。

可以通过用氨基酸残基LEU取代第二位(根据Kabat编号的第二位)的氨基酸残基ILE来修饰CDR3，从而产生序列的重链：

轻链：

其中，信号肽以小写形式表示，CDR以粗体(根据Kabat)或加下划线(根据IMGT)。轻链的全序列对应于具有信号肽的SEQ ID NO：17，而SEQ ID NO：16对应于无信号肽的重链。根据Kabat的CDR1、CDR2和CDR3分别对应于SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：15；根据IMGT的CDR1、CDR2和CDR3分别对应于SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：15。

如本领域已知，以本发明的嵌合抗体为例，重链可变结构域和轻链可变结构域均包含3个CDR(从5'端至3'端分别为CDR1、CDR2和CDR3)和4个框架区(从5'端至3'端分别为FR1、FR2、FR3和FR4)。鼠抗体的人源化可包括使轻链可变区或重链可变区或两者内的至少一个框架区人源化。在一个具体实施方式中，几个框架区可以是人源化的，特别是在重链可变区之内和在轻链可变区之内。野生型CDR可以是保守的，但CDR也可以被本文已描述的CDR替代。因此，当框架区被人源化时，根据本发明的抗CKLMR1化合物可包含至少1个或至少2个或至少3个或至少4个或至少5个或6个野生型CDR。换言之，抗CMKLR1化合物是亲本嵌合抗体2G1的人源化形式，其中，至少1个框架区是人源化的，特别地，至少1个框架区和至少1个CDR是人源化的。在本发明的一个具体实施方式中，抗体的可变区可与抗体恒定区相关，例如SEQ ID NO：134(由SEQ ID NO：133的核苷酸序列编码)、SEQ ID NO：136(由SEQ ID NO：135的核苷酸序列编码)、SEQ ID NO：138(由SEQ ID NO：137的核苷酸序列编码)、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：140和SEQ ID NO：141所示的恒定区。此种组合以SEQ ID NO：142的轻链和SEQ ID NO：143的重链为示例。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体在其抗体重链可变结构域内包含至少一个人源化框架区，其中：

-抗体重链可变结构域包含四个框架区：HFR1、HFR2、HFR3和HFR4，其中：

·HFR1包含或由SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：92或SEQ ID NO：93所示的氨基酸序列组成；和/或

·HFR2包含或由SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：97、SEQID NO：98、SEQ ID NO：99或SEQ ID NO：100所示的氨基酸序列组成；和/或

·HFR3包含或由SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105或SEQ ID NO：106所示的氨基酸序列组成；和/或

·HFR4包含或由SEQ ID NO：107或SEQ ID NO：108所示的氨基酸序列组成。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体在其抗体轻链可变结构域内包含至少一个人源化框架区，其中：

-抗体轻链可变结构域包括四个框架区：LFR1、LFR2、LFR3和LFR4，其中：

·LFR1包含或由SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：111或SEQ ID NO：112所示的氨基酸序列组成；和/或

·LFR2包含或由SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：116或SEQ ID NO：117所示的氨基酸序列组成；和/或

·LFR3包含或由SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：122或SEQ ID NO：132所示的氨基酸序列组成；和/或

·LFR4包含或由SEQ ID NO：123或SEQ ID NO：124所示的氨基酸序列组成。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体在其抗体轻链可变区和其抗体重链可变区内包含至少一个人源化框架区，其中：

·HFR4包含或由SEQ ID NO：107或SEQ ID NO：108所示的氨基酸序列组成；以及

-抗体轻链可变结构域包含四个框架区：LFR1、LFR2、LFR3和LFR4，其中：

在本发明的一个具体实施方式中，抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体包含：

-重链可变区，其包含SEQ ID NO：91的HFR1、SEQ ID NO：95的HFR2、SEQ ID NO：102的HFR3和SEQ ID NO：108的HFR4。

此种抗体可包含亲本嵌合抗体的CDR(即，SEQ ID NO：4的HCDR1；SEQ ID NO：6的HCDR2；SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：144或SEQ ID NO：148的HCDR3；SEQ ID NO：12的LCDR1；SEQ ID NO：14的LCDR2；以及SEQ ID NO：15的LCDR3)。

-重链可变区，其包含SEQ ID NO：92的HFR1、SEQ ID NO：96的HFR2、SEQ ID NO：103的HFR3和SEQ ID NO：108的HFR4。

-重链可变区，其包含SEQ ID NO：92的HFR1、SEQ ID NO：98的HFR2、SEQ ID NO：106的HFR3和SEQ ID NO：108的HFR4。

-重链可变区，其包含SEQ ID NO：93的HFR1、SEQ ID NO：96的HFR2、SEQ ID NO：104的HFR3和SEQ ID NO：108的HFR4。

-轻链可变区，其包含SEQ ID NO：111的LFR1、SEQ ID NO：115的LFR2、SEQ ID NO：120的LFR3和SEQ ID NO：124的LFR4。

-轻链可变区，其包含SEQ ID NO：110的LFR1、SEQ ID NO：114的LFR2、SEQ ID NO：119的LFR3和SEQ ID NO：124的LFR4。

-轻链可变区，其包含SEQ ID NO：110的LFR1、SEQ ID NO：114的LFR2、SEQ ID NO：122的LFR3和SEQ ID NO：124的LFR4。

-轻链可变区，其包含SEQ ID NO：112的LFR1、SEQ ID NO：116的LFR2、SEQ ID NO：121的LFR3和SEQ ID NO：124的LFR4。

在一个具体实施方式中，抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体包含人源化抗体轻链可变结构域和人源化抗体重链可变结构域，其中：

-抗体重链可变结构域包含：

·SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的VFICDR1；SEQ ID NO：67所示的氨基酸序列的VFICDR2；以及SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：144或SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列的VFICDR3；或

·SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的VFICDR1；SEQ ID NO：70所示的氨基酸序列的VFICDR2；以及SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：144或SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列的VFICDR3；或

·SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的VFICDR1；SEQ ID NO：72所示的氨基酸序列的VFICDR2；以及SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：144或SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列的VFICDR3；或

·SEQ ID NO：62所示的氨基酸序列的VFICDR1；SEQ ID NO：67所示的氨基酸序列的VFICDR2；以及SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：144或SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列的VFICDR3；或

·SEQ ID NO：62所示的氨基酸序列的VHCDR1；SEQ ID NO：70所示的氨基酸序列的VHCDR2；以及SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：144或SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列的VHCDR3；或

·SEQ ID NO：62所示的氨基酸序列的VHCDR1；SEQ ID NO：72所示的氨基酸序列的VHCDR2；以及SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：144或SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列的VHCDR3；或

·SEQ ID NO：63所示的氨基酸序列的VHCDR1；SEQ ID NO：67所示的氨基酸序列的VHCDR2；以及SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：144或SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列的VHCDR3；或

·SEQ ID NO：63所示的氨基酸序列的VHCDR1；SEQ ID NO：70所示的氨基酸序列的VHCDR2；以及SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：144或SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列的VHCDR3；或

·SEQ ID NO：63所示的氨基酸序列的VHCDR1；SEQ ID NO：72所示的氨基酸序列的VHCDR2；以及SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：144或SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列的VHCDR3；以及

-抗体轻链可变结构域包含：

·SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列的VLCDR1；SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列的VLCDR2；以及SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列的VLCDR3；或

·SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列的VLCDR1；SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列的VLCDR2；以及SEQ ID NO：89所示的氨基酸序列的VLCDR3；或

·SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列的VLCDR1；SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列的VLCDR2；以及SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列的VLCDR3；或

·SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列的VLCDR1；SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列的VLCDR2；以及SEQ ID NO：89所示的氨基酸序列的VLCDR3；

·SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列的VLCDR1；SEQ ID NO：84所示的氨基酸序列的VLCDR2；以及SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列的VLCDR3；或

·SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列的VLCDR1；SEQ ID NO：84所示的氨基酸序列的VLCDR2；以及SEQ ID NO：89所示的氨基酸序列的VLCDR3。

应注意，这些CDR(VHCDR和VLCDR)的组合可与本文所述的人源化框架区(特别是与以下框架区)结合：

-SEQ ID NO：91的HFR1、SEQ ID NO：95的HFR2、SEQ ID NO：102的HFR3和SEQ IDNO：108的HFR4；或

-SEQ ID NO：92的HFR1、SEQ ID NO：96的HFR2、SEQ ID NO：103的HFR3和SEQ IDNO：108的HFR4；或

-SEQ ID NO：92的HFR1、SEQ ID NO：98的HFR2、SEQ ID NO：106的HFR3和SEQ IDNO：108的HFR4；或

-SEQ ID NO：93的HFR1、SEQ ID NO：96的HFR2、SEQ ID NO：104的HFR3和SEQ IDNO：108的HFR4；以及

-轻链可变区，其包含SEQ ID NO：111的LFR1、SEQ ID NO：115的LFR2、SEQ ID NO：120的LFR3和SEQ ID NO：124的LFR4；或

-轻链可变区，其包含SEQ ID NO：110的LFR1、SEQ ID NO：114的LFR2、SEQ ID NO：119的LFR3和SEQ ID NO：124的LFR4；或

-轻链可变区，其包含SEQ ID NO：110的LFR1；SEQ ID NO：114的LFR2、SEQ ID NO：122的LFR3和SEQ ID NO：124的LFR4；或

在本发明的一个具体实施方式中，抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ IDNO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ IDNO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41或SEQ ID NO：42；特别地，所述重链可变结构域包含或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：28：SEQ ID NO、29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：36、SEQID NO：37、SEQ ID NO：38或SEQ ID NO：39。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ IDNO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：59、SEQ IDNO：60或SEQ ID NO：61；特别地，重链可变结构域包含或由以下氨基酸序列组成：SEQ IDNO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：48、SEQ IDNO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：56、SEQ IDNO：57、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：59或SEQ ID NO：60。

-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：4的HCDR1、SEQ ID NO：6的HCDR2、SEQ IDNO：8或SEQ ID NO：144或SEQ ID NO：148的HCDR3、SEQ ID NO：90的HFR1、SEQ ID NO：94的HFR2、SEQ ID NO：101的HFR3和SEQ ID NO：107的HFR4；以及

-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：12的LCDR1、SEQ ID NO：14的LCDR2、SEQ IDNO：15的LCDR3、SEQ ID NO：109的LFR1、SEQ ID NO：113的LFR2、SEQ ID NO：118的LFR3和SEQID NO：123的LFR4。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体包含SEQ ID NO：10的重链可变结构域和SEQ ID NO：17的轻链可变结构域。

-重链可变结构域，其包含或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ IDNO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ IDNO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ IDNO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41或SEQ ID NO：42；特别地，重链可变结构域包含或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ IDNO：28：SEQ ID NO、29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38或SEQID NO：39；

-轻链可变结构域，其包含或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ IDNO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ IDNO：56、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：60或SEQ ID NO：61；特别地，重链可变结构域包含或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ IDNO：45、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ IDNO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：58、SEQ IDNO：59或SEQ ID NO：60。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体包含重链可变结构域，其中，HFR1包含或由SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列(E/Q VQLV A/E/Q SG G/A/S G L/E V/L Q/K P/K PG G/A S L/V K/R/V L/V SC A/K AS)组成。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体包含重链可变结构域，其中，HFR2包含或由SEQ ID NO：125所示的氨基酸序列(WVR Q/A TP D/G R/K R/G/Q LELVA)组成。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体包含重链可变结构域，其中，HFR3包含或由SEQ ID NO：126所示的氨基酸序列(R F/V T/V I S/T RDN A/S K/T/V N/S TLY L/M Q/E M/L/I SSL K/R S/A EDTA M/VYYCPR)组成。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体包含重链可变结构域，其中，HFR4包含或由SEQ ID NO：127所示的氨基酸序列(WGQGT T/L L/V TVSS)组成。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体包含重链可变结构域，其中，LFR1包含或由SEQ ID NO：128所示的氨基酸序列(Q/A/E I V/Q LTQSP A/S/D I/S/F/T M/L/Q S A/S/L S/V P/V/T G/P E/D/K K/R V/A TM/I/L TC)组成。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体包含重链可变结构域，其中，LFR2包含或由SEQ ID NO：129所示的氨基酸序列(WYQQK S/P G/D T/K S/A P K/R RWIY)组成。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体包含重链可变结构域，其中，LFR3包含或由SEQ ID NO：130所示的氨基酸序列(G V/I P A/S RFSGSGSGT F/D Y S/T LTI S/N S M/L E/Q A/P ED A/F A T/V YYC)组成。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体包含重链可变结构域，其中，LFR4包含或由SEQ ID NO：131所示的氨基酸序列(FG P/G GTK L/V E L/I KR)组成。

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列组成；以及

-轻链可变结构域，其包含或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ IDNO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ IDNO：56、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：60或SEQ ID NO：61。

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：21所示的氨基酸序列组成；以及

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：22所示的氨基酸序列组成；以及

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：23所示的氨基酸序列组成；以及

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：24所示的氨基酸序列组成；以及

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：25所示的氨基酸序列组成；以及

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列组成；以及

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：27所示的氨基酸序列组成；以及

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列组成；以及

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列组成；以及

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列组成；以及

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列组成；以及

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列组成；以及

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列组成；以及

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：34所示的氨基酸序列组成；以及

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：35所示的氨基酸序列组成；以及

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：36所示的氨基酸序列组成；以及

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：37所示的氨基酸序列组成；以及

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列组成；以及

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：39所示的氨基酸序列组成；以及

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：40所示的氨基酸序列组成；以及

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：41所示的氨基酸序列组成；以及

-重链可变结构域，其包含或由SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列组成；以及

本发明涉及本发明的任一上述化合物，用于预防和/或治疗其中炎症消退被延迟或破坏的疾病和/或选自下组的疾病：炎性疾病，特别是急性炎性疾病、慢性炎性疾病，例如哮喘、角膜结膜炎、牙周病、湿疹、炎性肠病，特别是克罗恩病(Crohn's disease)或结肠炎(特别是溃疡性结肠炎或自发性结肠炎)；自身免疫性疾病，例如糖尿病(特别是I型糖尿病)、牛皮癣、狼疮、类风湿性关节炎、多发性硬化症、干燥综合征(

syndrome)、脂泻病(celiac disease)、血管炎、重症肌无力；感染性疾病，例如败血症、腹膜炎；退行性疾病；伤口愈合障碍、干眼综合征；癌症疾病，特别是实体癌症和液体癌症、转移性癌症，特别是上皮癌(carcinoma)，特别是乳腺上皮癌(mammary carcinoma)或结肠上皮癌(coloncarcinoma)，或肺癌或髓样癌，特别是白血病，特别是癌细胞表达CMKLR1或肿瘤微环境被表达或过度表达CMKLR1的细胞侵袭的癌症。在一个具体实施方式中，本发明涉及本发明的任一上述化合物，用于预防和/或治疗其中炎症消退被延迟或破坏的疾病和/或选自下组的疾病：炎性疾病，特别是急性炎性疾病、慢性炎性疾病，例如哮喘、角膜结膜炎、牙周病、湿疹、炎性肠病，特别是克罗恩病或结肠炎(特别是溃疡性结肠炎或自发性结肠炎)；自身免疫性疾病，例如糖尿病(特别是I型糖尿病)、牛皮癣、狼疮、类风湿性关节炎、多发性硬化症、干燥综合征、脂泻病、血管炎、重症肌无力；感染性疾病，例如败血症、腹膜炎；退行性疾病；伤口愈合障碍和干眼综合征。在本发明的另一个具体实施方式中，本发明涉及本发明的任一上述化合物，用于预防和/或治疗癌症，特别是实体癌症和液体癌症、转移性癌症，特别是上皮癌，特别是乳腺上皮癌或结肠上皮癌，或肺癌或髓样癌，特别是白血病，特别是癌细胞表达CMKLR1或肿瘤微环境被表达或过度表达CMKLR1的细胞侵袭的癌症。

在一个具体实施方式中，本发明涉及抗CMKLR1化合物，其选自特异性结合CMKLR1的抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟或修饰的抗体，所述化合物包含：

所述抗CMKLR1化合物用于预防和/或治疗其中炎症消退被延迟或破坏的疾病和/或选自下组的疾病：炎性疾病，特别是急性炎性疾病、慢性炎性疾病，例如哮喘、角膜结膜炎、牙周病、湿疹、炎性肠病，特别是克罗恩病或结肠炎(特别是溃疡性结肠炎或自发性结肠炎)；自身免疫性疾病，例如糖尿病(特别是I型糖尿病)、牛皮癣、狼疮、类风湿性关节炎、多发性硬化症、干燥综合征、脂泻病、血管炎、重症肌无力；感染性疾病，例如败血症、腹膜炎；退行性疾病；伤口愈合障碍、干眼综合征；癌症疾病，特别是实体癌症和液体癌症、转移性癌症，特别是上皮癌，特别是乳腺上皮癌或结肠上皮癌，或肺癌或髓样癌，特别是白血病，特别是癌细胞表达CMKLR1或肿瘤微环境被表达或过度表达CMKLR1的细胞侵袭的癌症。在一个具体实施方式中，本发明涉及本发明的任一上述化合物，用于预防和/或治疗其中炎症消退被延迟或破坏的疾病和/或选自下组的疾病：炎性疾病，特别是急性炎性疾病、慢性炎性疾病，例如哮喘、角膜结膜炎、牙周病、湿疹、炎性肠病，特别是克罗恩病或结肠炎(特别是溃疡性结肠炎或自发性结肠炎)；自身免疫性疾病，例如糖尿病(特别是I型糖尿病)、牛皮癣、狼疮、类风湿性关节炎、多发性硬化症、干燥综合征、脂泻病、血管炎、重症肌无力；感染性疾病，例如败血症、腹膜炎；退行性疾病；伤口愈合障碍和干眼综合征。在本发明的另一个具体实施方式中，本发明涉及本发明的任一上述化合物，用于预防和/或治疗癌症，特别是实体癌症和液体癌症，特别是上皮癌，特别是乳腺上皮癌或结肠上皮癌或髓样癌，特别是白血病，特别是癌细胞表达CMKLR1或肿瘤微环境被表达或过度表达CMKLR1的细胞侵袭的癌症。

-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：12的LCDR1、SEQ ID NO：14的LCDR2、SEQ IDNO：15的LCDR3、SEQ ID NO：109的LFR1、SEQ ID NO：113的LFR2、SEQ ID NO：118的LFR3和SEQID NO：123的LFR4；

所述抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体用于治疗和/或预防其中炎症消退被延迟或破坏的疾病和/或选自下组的疾病：炎性疾病，特别是急性炎性疾病、慢性炎性疾病，例如哮喘、角膜结膜炎、牙周病、湿疹、炎性肠病，特别是克罗恩病或结肠炎(特别是溃疡性结肠炎或自发性结肠炎)；自身免疫性疾病，例如糖尿病(特别是I型糖尿病)、牛皮癣、狼疮、类风湿性关节炎、多发性硬化症、干燥综合征、脂泻病、血管炎、重症肌无力；感染性疾病，例如败血症、腹膜炎；退行性疾病；伤口愈合障碍、干眼综合征；癌症疾病，特别是实体癌症和液体癌症、转移性癌症，特别是上皮癌，特别是乳腺上皮癌或结肠上皮癌，或肺癌或髓样癌，特别是白血病，特别是癌细胞表达CMKLR1或肿瘤微环境被表达或过度表达CMKLR1的细胞侵袭的癌症。在一个具体实施方式中，本发明涉及本发明的任一上述化合物，用于预防和/或治疗其中炎症消退被延迟或破坏的疾病和/或选自下组的疾病：炎性疾病，特别是急性炎性疾病、慢性炎性疾病，例如哮喘、角膜结膜炎、牙周病、湿疹、炎性肠病，特别是克罗恩病或结肠炎(特别是溃疡性结肠炎或自发性结肠炎)；自身免疫性疾病，例如糖尿病(特别是I型糖尿病)、牛皮癣、狼疮、类风湿性关节炎、多发性硬化症、干燥综合征、脂泻病、血管炎、重症肌无力；感染性疾病，例如败血症、腹膜炎；退行性疾病；伤口愈合障碍和干眼综合征。在本发明的另一个具体实施方式中，本发明涉及本发明的任一上述化合物，用于预防和/或治疗癌症，特别是实体癌症和液体癌症，特别是上皮癌，特别是乳腺上皮癌或结肠上皮癌或髓样癌，特别是白血病，特别是癌细胞表达CMKLR1或肿瘤微环境被表达或过度表达CMKLR1的细胞侵袭的癌症。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体包含SEQ ID NO：10的重链可变结构域和SEQ ID NO：17的轻链可变结构域；

所述抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体用于预防和/或治疗其中炎症消退被延迟或破坏的疾病和/或选自下组的疾病：炎性疾病，特别是急性炎性疾病、慢性炎性疾病，例如哮喘、角膜结膜炎、牙周病、湿疹、炎性肠病，特别是克罗恩病或结肠炎(特别是溃疡性结肠炎或自发性结肠炎)；自身免疫性疾病，例如糖尿病(特别是I型糖尿病)、牛皮癣、狼疮、类风湿性关节炎、多发性硬化症、干燥综合征、脂泻病、血管炎、重症肌无力；感染性疾病，例如败血症、腹膜炎；退行性疾病；伤口愈合障碍、干眼综合征；癌症疾病，特别是实体癌症和液体癌症、转移性癌症，特别是上皮癌，特别是乳腺上皮癌或结肠上皮癌，或肺癌或髓样癌，特别是白血病，特别是癌细胞表达CMKLR1或肿瘤微环境被表达或过度表达CMKLR1的细胞侵袭的癌症。在一个具体实施方式中，本发明涉及本发明的任一上述化合物，用于预防和/或治疗其中炎症消退被延迟或破坏的疾病和/或选自下组的疾病：炎性疾病，特别是急性炎性疾病、慢性炎性疾病，例如哮喘、角膜结膜炎、牙周病、湿疹、炎性肠病，特别是克罗恩病或结肠炎(特别是溃疡性结肠炎或自发性结肠炎)；自身免疫性疾病，例如糖尿病(特别是I型糖尿病)、牛皮癣、狼疮、类风湿性关节炎、多发性硬化症、干燥综合征、脂泻病、血管炎、重症肌无力；感染性疾病，例如败血症、腹膜炎；退行性疾病；伤口愈合障碍和干眼综合征。在本发明的另一个具体实施方式中，本发明涉及本发明的任一上述化合物，用于预防和/或治疗癌症，特别是实体癌症和液体癌症，特别是上皮癌，特别是乳腺上皮癌或结肠上皮癌或髓样癌，特别是白血病，特别是癌细胞表达CMKLR1或肿瘤微环境被表达或过度表达CMKLR1的细胞侵袭的癌症。

-重链可变结构域，其包含SEQ ID NO：4的HCDR1、SEQ ID NO：6的HCDR2、SEQ IDNO：8或SEQ ID NO：144或SEQ ID NO：148的HCDR3，以及：

·HFR1，其包含或由SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：92或SEQ ID NO：93所示的氨基酸序列组成；以及

·HFR2，其包含或由SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99或SEQ ID NO：100所示的氨基酸序列组成；以及

·HFR3，其包含或由SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105或SEQ ID NO：106所示的氨基酸序列组成；以及

·HFR4，其包含或由SEQ ID NO：108所示的氨基酸序列组成；以及

-轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO：12的LCDR1、SEQ ID NO：14的LCDR2、SEQ IDNO：15的LCDR3，以及：

·LFR1，其包含或由SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：111或SEQ ID NO：112所示的氨基酸序列组成；以及

·LFR2，其包含或由SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：116或SEQ IDNO：117所示的氨基酸序列组成；以及

·LFR3，其包含或由SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：122或SEQ ID NO：132所示的氨基酸序列组成；以及

·LFR4，其包含或由SEQ ID NO：124所示的氨基酸序列组成。

-重链可变结构域，其包含或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ IDNO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ IDNO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ IDNO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41或SEQ ID NO：42；特别地，重链可变结构域包含或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID No：20、SEQ ID No：21、SEQ ID No：22、SEQ ID No：23、SEQ IDNo：28、SEQ ID No、29、SEQ ID No：30、SEQ ID No：36、SEQ ID No：37、SEQ ID No：38或SEQID No：39；

-轻链可变结构域，其包含或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ IDNO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ IDNO：56、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：60或SEQ ID NO：61；特别地，重链可变结构域包含或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ IDNO：45、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ IDNO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：58、SEQ IDNO：59或SEQ ID NO：60；

所述抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体用于预防和/或治疗其中炎症消退被延迟或破坏的疾病和/或选自下组的疾病：炎性疾病，特别是急性炎性疾病、慢性炎性疾病，例如哮喘、角膜结膜炎、牙周病、湿疹、炎性肠病，特别是克罗恩病或结肠炎(特别是溃疡性结肠炎或自发性结肠炎)；自身免疫性疾病，例如糖尿病(特别是I型糖尿病)、牛皮癣、狼疮、类风湿性关节炎、多发性硬化症、干燥综合征、脂泻病、血管炎、重症肌无力；感染性疾病，例如败血症、腹膜炎；退行性疾病；伤口愈合障碍、干眼综合征；癌症疾病，特别是实体癌症和液体癌症、转移性癌症，特别是上皮癌，特别是乳腺上皮癌、肺癌或结肠上皮癌或髓样癌，特别是白血病，特别是癌细胞表达CMKLR1或肿瘤微环境被表达或过度表达CMKLR1的细胞侵袭的癌症。在一个具体实施方式中，本发明涉及本发明的任一上述化合物，用于预防和/或治疗其中炎症消退被延迟或破坏的疾病和/或选自下组的疾病：炎性疾病，特别是急性炎性疾病、慢性炎性疾病，例如哮喘、角膜结膜炎、牙周病、湿疹、炎性肠病，特别是克罗恩病或结肠炎(特别是溃疡性结肠炎或自发性结肠炎)；自身免疫性疾病，例如糖尿病(特别是I型糖尿病)、牛皮癣、狼疮、类风湿性关节炎、多发性硬化症、干燥综合征、脂泻病、血管炎、重症肌无力；感染性疾病，例如败血症、腹膜炎；退行性疾病；伤口愈合障碍和干眼综合征。在本发明的另一个具体实施方式中，本发明涉及本发明的任一上述化合物，用于预防和/或治疗癌症，特别是实体癌症和液体癌症，特别是上皮癌，特别是乳腺上皮癌或结肠上皮癌或髓样癌，特别是白血病，特别是癌细胞表达CMKLR1或肿瘤微环境被表达或过度表达CMKLR1的细胞侵袭的癌症。

在本发明的一个具体实施方式中，抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体具有：

-重链可变结构域，其包含或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ IDNO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ IDNO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ IDNO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41或SEQ ID NO：42；特别地，重链可变结构域包含或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID No：20、SEQ ID No：21、SEQ ID No：22、SEQ ID No：23、SEQ IDNo：28、SEQ ID No、29、SEQ ID No：30、SEQ ID No：36、SEQ ID No：37、SEQ ID No：38或SEQID No：39；以及

-轻链可变结构域，其包含或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ IDNO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ IDNO：56、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：60或SEQ ID NO：61；特别地，重链可变结构域包含或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ IDNO：45、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ IDNO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：58、SEQ IDNO：59或SEQ ID NO：60；所述抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体用于治疗皮质类固醇和/或免疫抑制治疗难以治疗的受试者的结肠炎或克罗恩病。

在另一方面，本发明涉及本文所述的抗CMKLR1化合物，其增强特别是巨噬细胞分泌的抗炎性细胞因子(特别是I10)。在另一方面，本发明涉及本文所述的抗CMKLR1化合物，其增强特别是巨噬细胞分泌的抗炎性细胞因子(特别是CCL17)。在另一方面，本发明涉及本文所述的抗CMKLR1化合物，其增强特别是巨噬细胞分泌的抗炎性细胞因子(特别是I10和/或CCL17)。本发明还涉及本文所述的抗CMKLR1化合物，其抑制特别是巨噬细胞分泌的促炎性细胞因子(特别是IL-12)。细胞因子的分泌可通过本领域已知的方法或通过本发明实施例中公开的方法来评估。

在另一方面，本发明涉及本文所述的抗CMKLR1化合物，其抑制树突状细胞(特别是人树突状细胞)的增殖和/或活化。树突状细胞的增殖和/或活化可通过本发明的实施例中公开的方法进行评估。

在另一方面，本发明涉及包含本文所述的抗CMKLR1化合物的组合物，特别是包含本发明的抗CMKLR1化合物和另外的治疗剂或药学上可接受的载体的药物组合物。在一个具体实施方式中，本发明涉及组合物，该组合物包含本发明的抗CMKLR1化合物和治疗剂，该治疗剂选自免疫调节剂、免疫检查点阻断剂、免疫检查点活化剂、抗体(特别是抗CD137抗体(其靶向也称为CD137的TNF受体超家族成员4-1BB))或抗SIRPa抗体(P84-Merck Millipore的抗小鼠SIRPa)。

在另一个方面，本发明涉及包含本文所述的抗CMKLR1化合物的化合物组合，特别是包含本发明的抗CMKLR1化合物和抗PD1或抗PDL1化合物(特别是抗PD1化合物)的药物组合物；特别地，此种化合物选自可以结合PD1或PDL1的抗体、抗原结合抗体片段、抗原结合抗体模拟物、小分子(例如适配体(aptamer)或肽)、修饰的抗体，例如但不限于人源化抗体或嵌合抗体。

在另一方面，本发明涉及包含本文所述的抗CMKLR1化合物的化合物组合，特别是包含本发明的抗CMKLR1化合物和抗SIRPa化合物的药物组合物；特别地，此种化合物选自可以结合SIRPa(特别是人SIRPa)的抗体、抗原结合抗体片段、抗原结合抗体模拟物、小分子(例如适配体或肽)、修饰的抗体，例如但不限于人源化抗体或嵌合抗体。

在另一方面，考虑到其中炎症的延长是病理性的或炎症消退的持续时间是病理性的疾病治疗，本发明涉及本发明的抗CMKLR1化合物的治疗用途，特别是用于诱导和/或增强炎症的消退，特别是当所述消退被延迟或破坏时，用于诱导和/或增强炎症的消退。

在本发明的一个具体实施方式中，抗CKLMR1化合物以至少10E-8M(更优选至少10E-9M)的亲和力(KD值)结合CMKLR1。本发明的抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体与CMKLR1(或CMKLR1中包含第三胞外环的区域，包括SEQ ID NO：2和18所示的氨基酸序列)的特异性结合表明，该抗体对CMKLR1表现出明显的亲和力。“明显的亲和力”包括以约10^-8M(KD)以上的亲和力结合。优选地，当结合亲和力为10^-8M至10^-12M(可选地为10^-9M至10^-10M、特别是至少10^-9M)时，则认为结合是特异性的。结合结构域是否特异性地与靶标反应或结合尤其可容易地通过以下方式来检测：将所述结合结构域与靶蛋白或抗原的反应和所述结合结构域与除靶蛋白以外的蛋白或抗原的反应相比较。本发明的此种抗体特异性结合CMKLR1，并对RvE1和CMKLR1之间的相互作用具有激动剂作用。通过竞争性抑制来确定抗体特异性和亲和力的方法是本领域已知的(参见，例如，Harlow等，Antibodies:ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY(1998)；Colligan等，Current Protocols in Immunology,Green Publishing Assoc.,NY(1992；1993)；Meth Muller，Enzym.,92:589-601(1983))。这些方法包括但不限于Biacore分析、Blitz分析、流式细胞术和ELISA测定。

在本发明的一个具体实施方式中，抗CMKLR1化合物特异性结合位于CMKLR1的第三胞外环内的表位，特别是结合SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：18(特别是SEQ ID NO：2)所示的氨基酸残基序列内的表位。结合至CMKLR1的该特定区域的抗CMKLR1化合物可能对CMKLR1具有激动剂特性，从而模拟RvE1与CMKLR1的结合。

在另一方面，本发明涉及如上所述的抗CMKLR1抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体，其对RvE1和CMKLR1之间的相互作用具有激动剂能力，用作药物。

在另一方面，本发明涉及如上所述的抗CMKLR1抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体，其具有在体外和/或体内诱导Akt和/或Erk蛋白活化的能力。这些蛋白质的活化可通过本发明实施例中描述的方法进行评估。特别地，抗CMKLR1抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体具有活化巨噬细胞(特别是人巨噬细胞)中的Akt和/或Erk蛋白或两者的能力。

本发明还涉及治疗有需要的受试者的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的如上所述的抗CMKLR1抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物，所述抗CMKLR1抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物对RvE1和CMKLR1之间相互作用的具有激动剂能力，或者换言之，所述抗CMKLR1抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物为RvE1激动剂样因子或调节剂。

改变巨噬细胞的极化使其偏向于抗炎性细胞在许多病理学或情况中可能是有用的。如上所述，此种改变对选自下组的疾病特别有用：炎性疾病，包括但不限于急性炎性疾病和慢性炎性疾病、炎性肠病、克罗恩病、哮喘、角膜结膜炎、牙周病、湿疹、结肠炎、尤其是溃疡性结肠炎或自发性结肠炎、糖尿病(特别是I型糖尿病)、腹膜炎、牛皮癣、上皮癌(特别是乳腺上皮癌或结肠上皮癌)、癌症、转移性癌症、肺癌、退行性疾病、感染性疾病(特别是败血症)、自身免疫性疾病。

本发明还涉及如上所述的抗CMKLR1抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物在制备药物中的用途，所述抗CMKLR1抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物对RvE1和CMKLR1之间的相互作用具有激动剂能力。

在另一方面，本发明涉及抗CMKLR1抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体，例如但不限于如上所述的人源化或嵌合抗体，用于治疗慢性炎性疾病，特别是治疗慢性结肠炎。

在另一方面，本发明涉及如上所述的抗CMKLR1抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物，其对RvE1和CMKLR1之间的相互作用具有激动剂活性，用于治疗炎性病症消退的延迟或破坏(特别是消退被延迟或破坏的炎性疾病)和/或治疗或预防选自下组的疾病：炎性疾病，包括但不限于急性炎性疾病和慢性炎性疾病、炎性肠病、克罗恩病、哮喘、角膜结膜炎、牙周病、湿疹、结肠炎、尤其是溃疡性结肠炎或自发性结肠炎、糖尿病(特别是I型糖尿病)、腹膜炎、牛皮癣、上皮癌(特别是乳腺上皮癌或结肠上皮癌)、癌症、退行性疾病、感染性疾病(特别是败血症)、自身免疫性疾病。

如本文所述，当与正常消退(即在炎症事件后经历正常消退的患者中发生的消退)相比，炎症的消退被延迟或破坏时，发生“炎性病症消退的延迟或破坏”。消退延迟或缺陷可能导致粒细胞在炎性部位渗透增加。因此，可通过量化炎症部位的粒细胞来评估消退延迟或缺陷。可通过例如组织学、细胞计数或间接生化技术来测量粒细胞的数量，例如通过酶联免疫测定对弹性蛋白酶进行定量或通过PCR对粒细胞受体1进行分子定量。消退延迟或缺陷也可通过测定粒细胞凋亡的延迟来评估，例如通过细胞学方法使用针对膜联蛋白5的特异性抗体进行测量。还可通过定量评估促炎性细胞因子(例如TNF-α、IL-8或IL-12)和抗炎性细胞因子(例如IL-10)的合成来确定炎症消退的缺陷或延迟。细胞因子的分泌可通过酶联免疫测定或PCR来评估。还可通过评估参与炎性细胞因子合成的转录因子(例如NF-κB)的活化来确定炎症消退的缺陷或延迟，可通过例如核易位或Western blot和/或量化IκB的降解水平。炎症消退的缺陷或延迟还可通过质谱法或定量特异性酶联免疫测定的促消退介质(例如脂氧素、消退素、保护素或Maresin)或它们的前体(例如17-HDOHE或14-HDOHE)来确定。消退的缺陷或延迟导致这些介质中一种以上的合成缺陷。当消退分子的受体的表达降低时，也可以确定消退缺陷或延迟。这些受体可以选自ALX、CMK1R1、GPR32或GPR18。替代地或补充地，也可评估内吞到细胞质中加工的那些受体。替代地或补充地，也可评估炎性细胞因子或脂质的一些受体的表达，与正常情况相比的过表达意味着具有炎症消退的延迟或缺陷。这些条件可通过组织学、细胞学或PCR来测量。消退缺陷还可能导致M1巨噬细胞向M2巨噬细胞转换被减少或抑制，同一细胞的吞噬作用或胞葬作用受损。因此，如本发明实施例中所示例的，可通过分析与正常情况相比在特定情况下M1向M2巨噬细胞的转换来评估消退的延迟或缺陷。

根据一个具体实施方式，抗CMKLR1化合物可用于治疗个体，该个体患有选自下组的癌症：乳腺癌(特别是乳腺上皮癌)、黑色素瘤、结肠癌(特别是结肠上皮癌)、白血病(特别是急性髓样白血病)，特别是当癌细胞过表达CMKLR1时。

在一个实施方式中，本发明涉及如上所述的抗人CMKLR1抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体，用于如上所述的用途；其中，向表现出CMKLR1阳性的肿瘤患者施用本发明的所述抗人CMKLR1抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物或修饰的抗体。

本发明的抗体或其抗原结合片段可以以各种合适的途径施用给受试者，例如静脉内(IV)、皮下(SC)或肌内(IM)。抗CMKLR1化合物可单独施用或与另一种治疗剂(例如第二人单克隆抗体或其抗原结合片段)组合施用。在另一个示例中，将抗体与另一种试剂(例如免疫抑制剂、促红细胞生成剂(ESA))与治疗性细胞组合物等一起施用。在一个实施方式中，本发明涉及如上所述的抗CMKLR1化合物或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物，其中，该抗CMKLR1抗体或抗原结合片段与第二治疗剂组合。

第二治疗剂可与抗CMKLR1化合物同时或不同时施用。取决于第二治疗剂的性质，共同施用可以制备组合药物(产品)的形式，也称为“联合体(combo)”。联合体是固定剂量的组合，其包含在单一剂型中组合的两种以上活性药物成分，其以固定剂量制造和分发。但是剂量方案和/或施用途径也可以不同。

在一个优选实施方式中，该第二治疗剂选自：化学治疗剂、放射治疗剂、免疫治疗剂、细胞治疗剂(例如CAR-T细胞)、抗生素和益生菌。

特别地，可用于本发明的免疫治疗剂选自：治疗性疫苗(DNA疫苗、RNA疫苗或肽疫苗)、免疫检查点阻断剂或活化剂，特别是适应性免疫细胞(T淋巴细胞或B淋巴细胞)的免疫检查点阻断剂或活化剂，或免疫缀合物(例如抗体-药物缀合物)。

如本文所用，术语“免疫治疗剂”特别是指可将癌症疫苗从目标生物学现象转移到有效治疗剂的试剂，包括：增加幼稚(naive)T细胞的数量和谱系(repertoire)的T细胞生长因子、增加树突状细胞(DC)数量的生长因子、活化DC和其他抗原呈递细胞(APC)的激动剂、允许和增强癌症疫苗的佐剂、活化和刺激T细胞的激动剂、T细胞检查点阻断的抑制剂、增加免疫T细胞的生长和存活率的T细胞生长因子，以及抑制、阻断或中和癌细胞和免疫细胞来源的免疫抑制细胞因子的试剂。

许多免疫检查点阻断剂或活化剂是本领域已知的。在本发明中，可能有用的适应性免疫细胞(B或T淋巴细胞)的免疫检查点阻断剂或活化剂的实例是：抗PDL1、抗PD1、抗CTLA4、抗SIRPa、抗CD137、抗CD2、抗CD28、抗CD40、抗HVEM、抗BTLA、抗CD160、抗TIGIT、抗TIM-1/3、抗LAG-3、抗2B4、抗OX40、抗CD40激动剂、CD40-L、TLR激动剂、抗ICOS、ICOS-L和B细胞受体激动剂，特别是抗CD137和抗SIRPa。在本发明的一个具体实施方式中，第二治疗剂是抗PDL1或抗PD1化合物，特别是抗PD1化合物，更特别是抗PD1抗体。在本发明的一个具体实施方式中，第二治疗剂是抗SIRPa化合物，特别是抗SIRPa抗体。

所述免疫治疗剂也可以是靶向肿瘤抗原的抗体，特别是选自抗Her2、抗EGFR、抗CD20、抗CD19、抗CD52。

可以以约1ng/kg体重至约30mg/kg体重或更高的有效剂量提供抗体。在具体实施方式中，剂量可以为1μg/kg至约20mg/kg，可选地为10μg/kg至10mg/kg，或100μg/kg至5mg/kg。

术语“有效剂量”或“有效用量”或“有效量”被定义为足以达到或至少部分达到所需效果的量。术语“有效剂量”意在包括足以治愈或至少部分阻止疾病及其并发症或减轻已患有该疾病的患者的疾病症状的量。对于此种用途有效的量或剂量将取决于要治疗的病症、所递送的抗体构建体、治疗情况和目标、疾病的严重程度、既往治疗、患者的临床病史和对治疗剂的反应、施用途径、患者大小(体重、体表或器官大小)和/或病情(年龄和总体健康状况)以及患者自身免疫系统的一般状态。可对适当剂量进行调节，使得可以一次或多次施用于患者，以获得最佳治疗效果。

可视需要重复用于此类目的的剂量，例如复发期间的每天、每半周、每周、每半月、每月或视需要。

在另一方面，本发明涉及药物组合物，其包含如上所述的抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载体。

如本文所用，“药物组合物”意在包括适用于施用给受试者或患者(例如哺乳动物，特别是人)的组合物。通常，“药物组合物”是无菌的，并且通常不含可以在受试者中引起不良反应的污染物(例如，药物组合物中的化合物为药物级)。可设计药物组合物以通过许多不同的施用途径(包括口服、口腔含化、直肠施用、肠胃外施用、腹腔施用、皮内施用、支气管内施用等方式)向有需要的受试者或患者施用。

如本文所用，“药学上可接受的载体”意在包括可用于制备药物组合物的赋形剂、稀释剂、载体和佐剂，其通常是安全、无毒的且在生物学上或其他方面均不是不期望的，并且包括兽用药品和人用药品均可接受的赋形剂、稀释剂、载体和佐剂。本文所用的“药学上可接受的载体”包括一种以上此种赋形剂、稀释剂、载体和佐剂。

特别地，本发明涉及药物组合物，其包含如上所述的抗体或其抗原结合片段作为活性成分和药学上可接受的载体。

在另一方面，本发明涉及治疗手段(特别是组合产品手段)，其包含以下组分作为活性成分：如上所述的抗SIRPa抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物和第二治疗剂；其中，将所述活性成分配制成用于分别、依次或组合的治疗，特别是用于组合或依次的用途。

特别地，本发明涉及包含以上所述的抗CMKLR1化合物和第二治疗剂的组合产品，用于同时、分别或依次用作药物。

在一个实施方式中，本发明涉及如上所述的组合产品，其中，第二治疗剂选自：化学治疗剂、放射治疗剂、细胞治疗剂、免疫治疗剂、抗生素和益生菌。

在一个实施方式中，本发明涉及如上所述的组合产品，其中，所述免疫治疗剂选自：治疗性疫苗、免疫检查点阻断剂或活化剂，特别是适应性免疫细胞(T淋巴细胞和B淋巴细胞)的免疫检查点阻断剂或活化剂，以及抗体-药物缀合物。

在一个实施方式中，本发明涉及如上所述的组合产品，其中，所述适应性免疫细胞(T淋巴细胞和B淋巴细胞)的免疫检查点阻断剂或活化剂选自：抗PDL1、抗PD1、抗SIRPA、抗CTLA4、抗CD137、抗CD2、抗CD28、抗CD40、抗HVEM、抗BTLA、抗CD160、抗TIGIT、抗TIM-1/3、抗LAG-3、抗2B4和抗OX40、抗CD40激动剂、CD40-L、TLR激动剂、抗ICOS、ICOS-L和B细胞受体激动剂，特别选自：抗PDL1、抗PD1和抗CD137。在本发明的一个具体实施方式中，第二治疗剂是抗PDL1或抗PD1化合物，特别是抗PD1化合物，更特别是抗PD1抗体。在本发明的一个具体实施方式中，第二治疗剂是抗SIRPa化合物，特别是抗SIRPa抗体。

在一个实施方式中，所述免疫治疗剂是靶向肿瘤抗原的抗体，特别选自下组：抗Her2、抗Her2、EGFR、抗CD20、抗CD19、抗CD52。

一方面，本发明涉及如上所述的组合产品，其同时、分别或依次地用于治疗易于通过巨噬细胞极化改变为抗炎性巨噬细胞而被改善或预防的任何病症。

在一个实施方式中，本发明涉及在有需要的受试者中治疗易于通过巨噬细胞极化改变为抗炎性巨噬细胞而被改善或预防的任何病症的方法，该方法包括向所述受试者同时、分别或依次施用有效量的如上所述的组合产品。

在一个实施方式中，本发明涉及如上所述的组合产品在制备药物中的用途，所述药物用于治疗易于通过巨噬细胞极化改变为抗炎性巨噬细胞而被改善或预防的任何病症。

一方面，本发明涉及如上所述的组合产品，其同时、分别或依次地用于治疗病理学类型或用于疫苗接种，所述病理学类型选自：炎性疾病，包括但不限于急性炎性疾病和慢性炎性疾病、炎性肠病、克罗恩病、哮喘、角膜结膜炎、牙周病、湿疹、结肠炎、尤其是溃疡性结肠炎或自发性结肠炎、糖尿病(特别是I型糖尿病)、腹膜炎、牛皮癣、上皮癌(特别是乳腺上皮癌或结肠上皮癌)、癌症、转移性癌症、肺癌、退行性疾病、感染性疾病(特别是败血症)、自身免疫性疾病。

在一个实施方式中，本发明涉及治疗有需要的受试者的病理学类型的方法，所述病理学类型选自：炎性疾病，包括但不限于急性炎性疾病和慢性炎性疾病、炎性肠病、克罗恩病、哮喘、角膜结膜炎、牙周病、湿疹、结肠炎、尤其是溃疡性结肠炎或自发性结肠炎、糖尿病(特别是I型糖尿病)、腹膜炎、牛皮癣、上皮癌(特别是乳腺上皮癌或结肠上皮癌)、癌症、转移性癌症、肺癌、退行性疾病、感染性疾病(特别是败血症)、自身免疫性疾病，所述方法包括向所述受试者同时、分别或依次施用有效量的如上所述的组合产品。

在一个实施方式中，本发明涉及如上所述的组合产品在制备治疗病理学类型的药物中的用途，所述病理学类型选自：炎性疾病，包括但不限于急性炎性疾病和慢性炎性疾病、炎性肠病、克罗恩病、哮喘、角膜结膜炎、牙周病、湿疹、结肠炎、尤其是溃疡性结肠炎或自发性结肠炎、糖尿病(特别是I型糖尿病)、腹膜炎、牛皮癣、上皮癌(特别是乳腺上皮癌或结肠上皮癌)、癌症、转移性癌症、肺癌、退行性疾病、感染性疾病(特别是败血症)、自身免疫性疾病。

本发明还涉及筛选抗CMKLR1化合物的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供选自抗体或其抗原结合片段或嵌合抗体或人源化抗体的化合物，所述化合物包含：

·VHCDR3包含或由SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：144或SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列或其突变序列(其中氨基酸残基被取代以使SEQ ID NO：8的第1位和第2位的氨基酸残基分别是L和I)组成；以及

b)检测化合物作为CMKLR1的RvE1样激动剂的能力，特别是检测所述化合物促进炎症消退的能力，特别是针对髓样细胞；可选地，

c)通过BLITZ分析或生物传感器检测化合物与位于CMKLR1的第三环E3内的表位的结合能力，特别是化合物与包含SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：152的氨基酸残基的多肽的结合能力；可选地，

d)检测所述化合物不竞争趋化素与CMKLR1结合的能力；

e)当步骤c)测得的化合物的结合能力为至少10E-8KD时：

i)在化合物与CMKLR1结合后，检测化合物诱导Akt磷酸化和/或Erk磷酸化的能力，特别是诱导Akt磷酸化和Erk磷酸化的能力；

ii)检测化合物增强抗炎性细胞因子(特别是IL-10，更特别是IL-10和CCL17)分泌的能力，和/或化合物抑制或减少促炎性细胞因子(特别是IL-12)分泌的能力，特别是针对表达CMKLR1的髓样细胞；和/或

iii)检测化合物促进巨噬细胞极化偏向抗炎性M2型巨噬细胞的能力，特别是化合物增强表型标志物CD200R分泌的能力；和/或

iv)检测化合物抑制树突状细胞活化和/或增殖的能力。

可根据本公开实施例中公开的示例来检测化合物的能力。

本发明还涉及编码如本文所述抗CMKLR1化合物的多核苷酸。为此，本发明还涉及核酸分子或核酸分子组，更特别地，分离的核酸分子和/或重组核酸分子，其编码本公开的任何抗CMKLR1化合物，更特别地，其编码重链可变结构域和轻链可变结构域：

所述重链可变结构域包含或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ IDNO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ IDNO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ IDNO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41或SEQ ID NO：42；和/或

所述轻链可变结构域包含或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ IDNO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ IDNO：56、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：60或SEQ ID NO：61。

核酸分子还可包含用于转录和表达所编码的重链可变结构域和/或轻链可变结构域的调控序列，例如但不限于增强子、沉默子、启动子，特别是表达启动子、信号肽。

本发明还涉及包含本文所公开多核苷酸或包含本文所公开核酸分子的载体。如本文所用，载体是核酸分子，其用作将遗传物质转移至细胞中的运载工具，在一个优选实施方式中，载体使得可以表达插入载体内的多核苷酸。术语“载体”包括质粒、病毒、粘粒和人工染色体。通常，载体包含复制起点、多克隆位点和筛选标记。通常，载体本身是核苷酸序列(通常是DNA序列)，其包含插入物(转基因)和用作载体“骨架”的较大序列。除转基因插入物和骨架以外，现代载体可能还包含其他特征：启动子、基因标记、抗生素抗性、报道基因、靶向序列、蛋白质纯化标签。称为表达载体的载体(表达构建体)特别用于转基因在靶细胞中的表达，并且通常具有控制序列。

另一方面，本发明涉及包含如上所述载体的细胞、分离的细胞、宿主细胞、分离的宿主细胞或细胞系。如本文所用，与细胞有关的这些术语旨在包括任何单个细胞或细胞培养物，所述细胞或细胞培养物可以是或已经是编码本发明抗体构建体的载体、外源核酸分子和多核苷酸的接受体(recipient)；和/或抗体构建体本身的接受体。可通过转化、转染等方式将各个材料引入细胞。这些术语还旨在包括单个细胞的后代或潜在后代。合适的宿主细胞包括原核细胞或真核细胞，还包括但不限于细菌、酵母细胞、真菌细胞、植物细胞和动物细胞，例如昆虫细胞和哺乳动物细胞，例如小鼠细胞、大鼠细胞、兔细胞、猕猴细胞或人细胞。

提出以上附图和实施例是为了向本领域普通技术人员提供有关如何制造和使用本发明的完整公开和说明，而无意限制本发明人认为的发明的范围，也不意在表示以下实验是全部或唯一进行的实验。尽管已参照本发明的具体实施方式描述了本发明，但本领域技术人员应理解，在不脱离本发明的真实精神和范围的情况下，可做出各种改变且可用等同物代替。此外，可做出许多修改以使特定情况、材料、物质组成、过程、工艺步骤或步骤适应本发明的目的、精神和范围。所有这些修改旨在落入所附权利要求的范围内。

实施例

抗CMKLR1抗体的生产和筛选

已合成了重链和轻链可变结构域内具有不同CDR序列的几种抗体。检测了不同的抗体诱导树突状细胞成熟和向促炎性通路或抗炎性通路分化的能力。鉴于不同结果，发明人比较了所得重链和轻链可变结构域的氨基酸序列，并确定HCDR3中的氨基酸差异可能对所述实验结果很重要。他们选择了抗体2G1(SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：17)来评估其在消退炎症状态方面的特性，至少在消退阶段会影响所述状态。

如图1所示，与针对促炎性通路的其他合成抗体(3G1和4G1)细胞相比，2G1和1G1抗体(另一种合成抗体)细胞能以更强的方式抑制DC的活化和/或成熟，因为2G1处理的表达CD103和IAb的DC的检测水平低于C7抗体处理的DC细胞(本测定法中使用的方法描述于实施例的10.2)。如图1E和1F所示，与用其他抗体(包括C7或消退素E1)处理的细胞相比，在用1G1或2G1抗体处理后，细胞的活力得到增强。

使用计算机上的CDR拼接方法将2G1人源化，这是本领域公知的人源化方法。下表描述了获得的CDR和FR区以及可变重链和可变轻链的人源化序列。

表1：抗CMKLR1化合物的重链可变结构域的野生型序列(SEQ ID NO：4、SEQ ID NO： 6和SEQ ID NO：144)和人源化CDR(其他SEQ ID)。

<u>SEQ ID NO</u>		<u>序列</u>
			4	VHCDR1 WT	GFTFSSYGMS
6	VHCDR2 WT	TINRYGGSTYYPDSVKG
			144	VHCDR3 WT	LIYYGNEGDS
62	VHCDR1	GFTFSSYAMS
			63	VHCDR1	GYTFTSYGMS
64	VHCDR1	GYTFTSYAMS
			65	VHCDR1	GYTFTSYAMN
66	VHCDR2	TINRYGGSTYYAASVKG
			67	VHCDR2	TISRSGGSTYYAASVKG
68	VHCDR2	TINRYGGSTYYPDSFKG
			69	VHCDR2	TINRYGGSTYYAQKFQG
70	VHCDR2	IINRNGGSTYYAQKFQG
			71	VHCDR2	TINRYGGSPYYAQGFTG
72	VHCDR2	TINRYGGNPYYAQGFTG
			145	VHCDR3	LIYYGNEGES
146	VHCDR3	LIYYGNEGDT
			147	VHCDR3	LIYYGNEGET

表2：抗CMKLR1化合物的轻链可变结构域的野生型序列(SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：15)和人源化CDR(SEQ ID NO：76至SEQ ID NO：89)

SEQ ID No		序列
			12	VLCDR1WT	SASSSVSFMH
14	VLCDR2WT	DTTKLTS
			1S	VLCDR3WT	QQWNSKPPLT
76	VLCDR1	RASQSVSFMH
			77	VLCDR1	RASQSVSFLH
78	VLCDR1	RASQGISFLA
			79	VLCDR1	RASQSVSFLA
80	VLCDR1	RASQSISFLH
			81	VLCDR2	DATKLTS
82	VLCDR2	DASKLTS
			83	VLCDR2	DASKLES
84	VLCDR2	DATKSTS
			85	VLCDR2	DASKSFS
86	VLCDR2	DATKRTT
			87	VLCDR2	DASKSTS
88	VLCDR2	DASKRTT
			89	VLCDR3	QQWQSKPPLT

表3：抗CMKLR1化合物的重链可变结构域的野生型序列、人源化序列和共有FR序列

SEQ ID No		序列
			90	HFR1 WT	EVQLVASGGGLVQPGGSLKLSCAAS
91	HFR1/1	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS
			92	HFR1/2	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS
93	HFR1/3	QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKAS
			94	HFR2 WT	WVRQTPDRRLELVA
95	HFR2/1	WVRQAPGKGLELVA
			96	HFR2/2	WVRQAPGQGLELVA
97	HFR2/3	WVRQAPGQGLELVA
			98	HFR2/4	WVRQAPGKGLELVS
99	HFR2/5	WVRQAPGQGLELVG
			100	HFR2/6	WVRQAPGQGLELMG
101	HFR3 WT	RFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYYCPR
			102	HFR3/1	RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCPK
103	HFR3/2	RVTITRDNSTSTLYMELSSLRSEDTAVYYCPR
			104	HFR3/3	RFVISRDNSVSTLYLQISSLKAEDTAVYYCPR
105	HFR3/4	RVTITRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCPR
			106	HFR3/5	RFVISRDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCPR
107	HFR4 WT	WGQGTTLTVSS
			108	HFR4	WGQGTLVTVSS
19	HFR1	XVQLVXSGXGXXXXPGXSXXXSCXAS
			125	HFR2共有	WVRXTPXXXLELVA
126	HFR3共有	RXXIXRDNXXXTLYXXXSSLXXEDTAXYYCPR
			127	HFR4共有	WGQGTXXTVSS

表4：抗CMKLR1化合物的轻链可变结构域的野生型序列、人源化序列和共有FR序列

SEQ ID No		序列
			109	LFR1 WT/1	QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTC
110	LFR1/1	AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC
			111	LFR1/2	E1VLTQSPDFQSVTPKEKVTITC
112	LFR1/3	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC
			113	LFR2 WT/1	WYQQKSGTSPKRWIY
114	LFR2/1	WYQQKPGKAPKRWIY
			115	LFR2/2	WYQQKPDQSPKRWIY
116	LFR2/3	WYQQKPGQAPRRWIY
			117	LFR2/4	WYQQKPGKAPKRLIY
118	LFR3 WT/1	GVPARFSGSGSGTFYSLTISSMEAEDAATYYC
			119	LFR3/1	GVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYC
120	LFR3/2	GVPSRFSGSGSGTDYTLTINSLEAEDAATYYC
			121	LFR3/3	GIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYC
122	LFR3/4	GVPSRFSGSGSGTDFTLTTSSLQPEDFATYYC
			132	LFR3/5	GVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYC
123	LFR4 WT/1	FGPGTKLELK
			124	LFR4/1	FGGGTKVEIK
128	LFR1共有/1	XIXLTQSPXXXSXCXCXXXTXTC
			129	LFR2共有/1	WYQQKXXXXPXRWIY
130	LFR3共有/1	GXPXRFSGSGSGTXYXLTTXSXXXEDXAXYYC
			131	LFR4共有/1	FGXGTKXEXKR

表5：抗CMKLR1化合物的重链序列

表6：抗CMKLR1化合物的轻链序列

抗CMKLR1抗体治疗对自身免疫疾病和炎性疾病的临床前模型的治疗功效的实施例

实施例1：DSS诱发结肠炎

通过将2％(w/v)DSS添加到随意饮用无菌水中，在8至10周龄的C57BI/6雄性小鼠中诱发结肠炎6天。腹腔内注射治疗：同种型对照hIgG1(10μg/小鼠)、RvE1(1μg/小鼠)每天或2G1抗体(10μg/小鼠)三次，共5天。每天进行由体重和粪便评分(0：粪便正常；4：粪便带血)组成的结肠炎随访参数。安乐死小鼠时，测量表示病理严重性的结肠长度。如Bannenberg等(2005)所述，确定不同条件下的消退指数。

结果：图2所示的DSS动物模型是急性炎症模型。图1显示，用抗CMKLR1抗体治疗的动物的总体状态比接受对照抗体或消退素RvE1的动物的状态更好。经抗CMKLR1治疗的小鼠的体重损失(图2A)显著减轻并且粪便评分(图2B)显著更好。关于结肠长度和消退指数(图2C和2D)，接受抗CMKLR1或RvE1的动物表现出相似的结果。

实施例2：TNBS诱发结肠炎

在第0天，通过直肠内注射200μL 5％半抗原化试剂TNBS(在50％乙醇中)，在8至10周龄的C57BI/6雄性小鼠中诱发结肠炎。腹腔内注射治疗：RvE1(1μg/小鼠)每天一次或2G1抗体(10μg/小鼠)每天两次，共3天。每天进行由体重和粪便评分(0：粪便正常；4：粪便带血)组成的结肠炎随访参数(数据未显示)。对小鼠实施安乐死后，测量表示病理严重程度的结肠长度。

结果：TNBS诱发的结肠炎是另一种急性炎症模型。图3显示，用抗CMKLR1或RvE1治疗的动物的结肠长度与正常动物(wt)相同。但是，用同种型对照治疗的动物的结肠长度缩短。这些结果证实，抗CMKLR1抗体像RvE1一样在急性炎症小鼠模型中具有治疗潜力。

实施例3：IL-10KO模型——自发性结肠炎模型

主要由于缺乏调节性T细胞功能(通过肠道中分泌IL-10)，IL-10KO小鼠从20周龄开始发展为自发性结肠炎。IL-10KO小鼠从18周龄开始每周进行3次随访，以保持体重减轻和粪便的一致性，这是此种病理学的临床特征。当体重减轻超过5％并且粪便评分高于或等于1时，腹腔内注射抗CMKLR1抗体(2G1)或同种型对照(hIgG1)，持续2周(25μg/注射剂，每周3次)。

结果：慢性炎症模型用于研究抗CMKLR1抗体治疗的疗效。图4显示了当用同种型对照或抗CMKLR1抗体治疗动物时的体重减轻百分比的分析(图4A)和粪便评分(图4B)。结果显示，与接受同种型对照的动物相比，接受抗CMKLR1抗体治疗的动物体重减轻的更少并且粪便评分更优。因此，抗CMKLR1抗体看起来具有治疗慢性炎性疾病的潜力。

实施例4：I型糖尿病的临床前模型：小鼠NOD模型

从查尔斯河实验室(Charles River Laboratory)获得8周龄的NOD雌性小鼠。这些小鼠在12至20周之间发展为自发性I型糖尿病。糖尿病引发可通过高血糖来衡量。当血糖为180mg/dL至234mg/dL时，每周3次以20μg/注射剂的量腹腔内施用抗CMKLR1和同种型对照，共2周。当血糖高于600mg/dL(对应于不可逆的糖尿病)时，对小鼠实施安乐死。

结果：该I型糖尿病模型也被认为是小鼠自身免疫性疾病模型。结果如图5A-C所示，用抗CMKLR1抗体治疗的动物表现出更好的存活率，通过测量血糖浓度显示出几乎正常的血糖。随着时间变化，此种恢复似乎是稳定的，表明以前患病的动物可能会完全恢复。抗CMKLR1抗体恢复了对葡萄糖的耐受状态。

实施例5：咪喹莫特(imiquimod)诱发的牛皮癣样皮肤炎症

对C57BI/6雄性小鼠(8至10周龄)使用

乳膏(已知会在小鼠中诱发牛皮癣)。小鼠连续6天每天在剃光的背部和左耳上接受局部剂量的Aldara。腹腔内注射治疗：每天RvE1(1μg/小鼠)和PBS。每天测量耳朵(图6A)和背部(图6B)厚度，直至恢复。

结果：用消退素RvE1治疗的动物的耳朵和皮肤厚度比用对照组分子治疗的动物低。这些结果表明，激动剂抗CMKLR1抗体治疗对牛皮癣(代表了自身免疫性疾病)小鼠模型具有潜在应用。

实施例6：抗CMKLR1抗体对败血症临床前模型(小鼠腹膜炎模型)的治疗功效

腹腔内注射

可诱发普通腹膜炎(1mg(1mL)/小鼠)。在注射酵母多糖A前5分钟进行抗CMKLR1的预防性注射：RvE1(1μg/小鼠)、2G1抗体(10μg/小鼠)。在酵母多糖A注射后2、4、8、16、24和48小时收集小鼠腹膜多形核中性粒细胞(PMN)和巨噬细胞，通过流式细胞术分析计数，确定消退指数(Bannenberg等，2005)。

结果：图7所示的PMN(7A)和巨噬细胞(7B)数量以及消退指数(7C)结果表明，与同种型对照相比，用RvE1或抗CMKLR1抗体治疗的动物表现出相同结果、PMN和巨噬细胞的数量略少、消退指数更高。在败血症中，即使轻微差异也可能对治疗很重要。因此，这些结果对于抗CMKLR1抗体在败血症中的潜在应用是非常正面的支持。

实施例7：抗CMKLR1抗体治疗对癌症的临床前模型的治疗功效

实施例7.1：在原位乳腺上皮癌模型中，抗CMKLR1抗体对原发性肿瘤生长及其肺转移发展的影响。

用3％的异氟烷麻醉小鼠。将小鼠腹部剃光，用胰岛素注射器(30G)给乳腺注射在50mL PBS中的4T1细胞(25万)。在第4天和第7天，注射两次抗CMKLR1抗体(2G1)或抗41BB抗体(3H3)或这两种抗体(10μg/注射剂)；每周三次(共三周)腹腔内注射在PBS中的对照抗体(100μg/注射剂)。在测量乳腺上皮癌发展后的肺转移的第二项研究中，每周三次用0.8mg/kg抗CMKLR1抗体或对照抗体(100μg/注射剂)对动物进行治疗，持续三周。

结果：如图8A所示，与接受同种型对照抗体的动物相比，用单一化合物(2G1或3H3)治疗的动物的肿瘤生长没有任何改善。但是，用抗CMKLR1抗体和抗41BB抗体组合治疗的动物在乳腺上皮癌模型中显示出肿瘤生长的显著减少(p<0.01)。由于此种乳腺上皮癌模型是严重侵袭性模型，因此结果被认为是正面的。如图8B所示，通过生物发光成像显示了抗CMKLR1化合物对肺转移的作用，可以看出，与用对照抗体治疗的动物相比，抗CMKLR1治疗减少了肺转移。淋巴结转移的分析表明，用抗CMKLR1化合物治疗的动物没有转移，而对照组的两只动物有转移(数据未显示)。这些结果表明，具有模拟RvE1的激动剂活性的抗CMLKR1抗体具有抗转移作用。在该模型中，本发明的抗体对原发性肿瘤的发展没有表现出任何显著的功效。但是，结果显示，用抗CMKLR1和抗41BB抗体组合治疗动物时得到了改善的结果。

实施例7.2：对结肠上皮癌模型中肿瘤生长的治疗效果

用3％异氟烷麻醉8周龄的C57bl/6J雄性。将小鼠腹部剃光，用胰岛素注射器(30G)皮下注射在50mL PBS中的MC38细胞(0.5×10⁶细胞/小鼠)细胞系。使用另一种模型，其中，用3％的异氟烷麻醉8周龄的Balb/c雄性小鼠。将小鼠腹部剃光，用胰岛素注射器(30G)皮下注射在50mL PBS中的CT26细胞(1×10⁶细胞/小鼠)。

从第4天开始肿瘤接种后，每周一次(20μg/注射剂)单独或组合腹腔内注射激动性抗CMKLR1抗体(2G1)或抗SIRPa抗体(来自Merck Millipore的p84-抗小鼠SIRPa)(SIRPa是一种新型检查点抑制剂)，共3周。

结果：如图9A-C所示，在CT26癌模型中，与对照组相比，单独使用抗CMKLR1抗体没有显示出对肿瘤发展的临床效果(图9B)，单独使用抗SIRPa也没有显示出对肿瘤发展的临床效果(图9A)。然而，令人惊讶的是，这两种化合物的组合能够及时抑制肿瘤的生长(图9C)。在图9D所示的另一个小鼠结肠上皮癌模型中，与同种型对照相比，抗CMKLR1确实显示出抑制肿瘤生长的功效。总之，对于两种不同的结肠上皮癌模型，这些结果表明，激动性抗CMKLR1抗体可以单独或与其他治疗剂组合使用来预防肿瘤的发展。

实施例8：对使用抗TNFα或抗α4β7抗体治疗的UC或CD人类患者活检组织进行CMKLR1表达的荟萃分析(Meta-analysis)

在人类中，慢性克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)(炎性肠病(IBD)的两种主要形式)中长期存在的慢性胃肠道炎症的信号传导网络尚不清楚。根据对近500名IBD患者和100名对照患者的分析，此处发明人报告，CMKLR1转录物积聚在严重IBD患者的炎性结肠组织，该IBD患者对免疫抑制/皮质类固醇和免疫治疗(例如抗TNFα(英夫利昔单抗)或抗α4β7种整联蛋白(维多利珠单抗))无反应。

通过对三个队列的UC患者(GSE16879(Arijs等，2009a)和GSE12251(Arijs等，2009b)以及GSE73661)进行公开可获得的转录数据集的荟萃分析，发明人首先分析了粘膜CMKLR1转录物表达；在抗TNF治疗之前(一周内)对皮质类固醇和/或免疫抑制难以治疗的患者进行结肠粘膜活检。在这三个队列中，将抗TNF反应定义为抗TNF首次输注4周至6周后的组织学愈合情况(共：非IBD对照n＝18、UC无反应者n＝41和UC反应者n＝28)。

结果：分析表明，与非IBD对照或抗TNF治疗前的UC患者(其会响应于抗TNF治疗)相比，抗TNF治疗之前和之后的原发UC无反应患者结肠活检中的CMKLR1转录表达显著增加(图10A)。在克罗恩病患者的结肠或回肠活检中，与非IBD对照或未来反应者相比，对抗TNF无反应的患者接受抗TNF治疗之前和之后粘膜CMKLR1表达也显著增加(非IBD对照n＝24、CD无反应者n＝17和CD反应者n＝20；GSE16879(Arijs等，2009a))(图10B)。最后，接受抗α4β7(维多利珠单抗)治疗的UC病人队列(GSE7366146)的结肠粘膜基因表达分析也证实，无反应者在进行维多利珠单抗治疗之前和之后，CMKLR1的表达也显著增加(图11)。

总之，荟萃分析显示，CMKLR1在IBD患者的炎性组织中过度表达，特别是在对当前免疫抑制或免疫治疗无反应的患者(甚至在开始治疗之前)中过度表达。我们的荟萃分析提供了证据证明，难治性UC或CD患者的结肠(对于CD患者是回肠)中CMKLR1的表达反而可以使这些患者对激动性抗CMKLR1抗体治疗(例如本发明的抗体)有反应。

实施例9：CMKLR1表达以及抗体结合研究

ELISA结合CMKLR1(图12)

将CMKLR1肽(273NH2-PYHTLNLLELHHTAMPGSVFSLGLPLATALAIA-COOFI305)(SEQ IDNO：18)(5μg/ml)在硼酸盐缓冲液中包被过夜。用PBS-吐温0.1％-明胶0.25％在37℃下饱和2小时。然后，在37℃下以不同浓度添加2G1或hIgG1抗体2小时。然后在37℃下加入过氧化物酶缀合的二抗(0.8μg/ml)1小时，通过TMB底物显色。用TECAN读取比色反应。

FACS测定CMKLR1表达(图13A)

将细胞重悬于PBS-FBS-EDTA中，在冰上与Fc阻断剂(1/50)一起孵育30分钟。用A488标记的2G1(5μg)或A488标记的hIgG1(5μg)对单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞进行染色。

Western Blot分析CMKLR1(图13B)

在如前所述的蛋白质迁移和转移之后，将2G1抗体(10μg/膜)在4℃下孵育过夜，用过氧化物酶缀合的二抗(1：2000)显色。然后使用化学发光和图像读取器检测CMKLR1表达。通过Multi Gauge软件量化Western Blot图像。

结果：图12所示的结果证实，抗CMKLR1抗体克隆2G1能结合形成CMKLR1的环EL3的多肽。通过FACS和Western Blot使用2G1抗体评估不同细胞系中CMKLR1表达，结果表明，人肿瘤T细胞系Trp1和U937以及转导的CMKLR1 CHO细胞、人肺成纤维细胞系MRC5和人NK细胞系NKL表达CMKLR1(图13)。

实施例10：髓样谱系中CMKLR1表达的研究

实施例10.1：人单核细胞的分化和极化

从健康志愿者的血沉棕黄层(buffy coat)的PBMC中收集单核细胞，通过磁分离或淘析进行分离。然后，用不同的细胞因子混合物培养单核细胞，产生分化的非极化巨噬细胞或极化的巨噬细胞。该方案使得可以产生极化的分化巨噬细胞，以在不同的孔中具有促炎性巨噬细胞(M1)或抗炎性巨噬细胞(M2)。将单核细胞以0.5×10⁶细胞/mL的浓度接种在完全RPMI(含10％FBS、1％谷氨酰胺、1％抗生素的RPMI)中，将500pL细胞悬液接种于24孔板的每个孔中。加入在培养基中的100ng/mL M-CSF，用于分化细胞。将细胞孵育5天，在第3天用补充有100ng/mL M-CSF的新鲜培养基更换培养基。对于极化阶段，在3天时间内添加补充有同种型对照(rnlgd或hIgG4)(2μg/ml)或抗CMKLR1抗体(2μg/ml)(2G1或2G4、H6、BZ332或84939)或补充有C15肽(10nM)或RvE1(10ng/ml)的LPS-IFNg溶液(100ng/mL LPS和20ng/mLIFNg)以产生M1巨噬细胞。也可通过在培养基中仅添加IFNg(20ng/mL)来产生M1-IFNg巨噬细胞。对于M2极化，用20ng/mL IL-4孵育细胞。在分化和/或极化后，通过FACS分析、ELISA和Western Blot研究表型和功能性细胞因子/趋化因子的释放。

实施例10.2：小鼠巨噬细胞和DC细胞的分离和分化

-分离小鼠骨髓来源的巨噬细胞

收获骨髓细胞，在补充有10％FBS、谷氨酰胺和抗生素并含有100ng/mL巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的RPMI培养基中培养5天，诱导巨噬细胞分化。收获巨噬细胞，用诱导M1极化的IFNg(20ng/ml)和LPS(100ng/ml)或诱导M2极化的IL-4(20ng/ml)培养2天。在巨噬细胞极化期间，以2μg/ml添加治疗剂。

-产生骨髓来源的树突状细胞

收集骨髓细胞，在补充有10％FBS、谷氨酰胺和抗生素的RPMI培养基中培养，用20ng/ml GM-CSF诱导树突状细胞分化7天。然后，收集未成熟的树突状细胞(iDC)，用LPS(100ng/ml)培养24小时，诱导从iDC向mDC的成熟。在分化和成熟期间，以2μg/ml加入治疗剂。

在如上所述的小鼠M1或M2分化后，将细胞在培养基、同种型对照、抗CMKLR1抗体的存在下孵育：使用克隆H6和BZ194、C15肽、2G1(目标抗CMKLR1抗体)或RvE1。然后，通过ELISA评估IL-10、CCL17和IL-12p40的分泌。使用购自BD的ELISA试剂盒测量上清液中的细胞因子分泌。以1/10稀释上清液用于IL-10细胞因子，以1/50稀释上清液用于CCL17细胞因子，以1/100稀释上清液用于IL-12p40细胞因子。

-ELISA细胞因子分泌研究

根据BD制造商的说明，通过ELISA检测细胞因子的分泌。简言之，用适当缓冲液稀释上清液，包被过夜后，用捕获抗体孵育2小时并饱和。然后，用检测生物素偶联的抗体使细胞因子显色，用生物素-链霉亲和素偶联的过氧化物酶系统放大信号。将BD Bioscience提供的TMB用作底物，用TECAN读取比色反应。

-通过FACS分析活化细胞标志物

将树突状细胞重悬于PBS-FBS-EDTA中，在冰上用活细胞染料和死细胞染料(

Fixable Dead Cell Stains Yellow-Life Technologies)孵育30分钟。进行CD11c-BV711、CD11b-APCCy7、1/Ab-APC、CD103-PerCPCy5.5、CCR7-V450、CD40-PeCy7、CD80-PE、CD86-FITC(均由BD Pharmingen提供)染色。

-Western Blot分析ERK/Akt

用M-CSF由骨髓产生小鼠促炎性巨噬细胞(M1)，用IFN-γ(IFNg)和LPS进行极化。简言之，通过冲洗股骨收集骨髓细胞，用100ng/mL mM-CSF培养5天，然后用20ng/mL IFNg和100ng/mL LPS极化24小时。然后，用RPMI FBS 2％培养基除去FBS 24小时。最后，用2μg/mL的2G1抗体处理小鼠M1不同时间(5分钟、10分钟和30分钟)。将细胞收集在RIPA缓冲液中。通过BCA蛋白质试剂盒测定法测量蛋白质浓度。通过在95℃加热5分钟使蛋白质变性，用DTT和Laemmli溶液稀释。迁移和转移后，用在TBS-T中的5％BSA封闭硝酸纤维素膜2小时。将抗磷酸-ERK抗体和抗磷酸-Akt抗体(1：1000)在4℃下与膜孵育过夜，用过氧化物酶缀合的二抗(1：2000)显色。通过Multi Gauge软件对Western Blot图像进行定量。

实施例10.3：在炎性刺激后人血单核细胞以及小鼠骨髓髓样细胞和嗜中性白细胞的CMLKR1表达

从健康志愿者的血沉棕黄层的PBMC中收集人单核细胞，通过磁分离或淘析进行分离。然后，在培养基中培养单核细胞(CD14阳性细胞)，用不同的促炎性刺激剂处理16小时或48小时：LPS(100ng/ml)或TNFa(10.000U/ml)或IL6(20ng/ml)。

从骨髓细胞中收获小鼠单核细胞(CD11b+Ly6G-SSClow)和嗜中性白细胞(CD11b+Ly6G-SSClow)，在补充有10％FBS、谷氨酰胺和抗生素的RPMI培养基中培养。然后，用培养基培养细胞，用不同的促炎性刺激剂处理16小时或48小时：LPS(100ng/ml)或TNFa(10.000U/ml)或IL6(20ng/ml)。

使用市售抗CMKLR1抗体(人抗ChemR23：克隆84939和小鼠抗ChemR23：克隆477806)通过FACS测量CMLKR1的表达。

结果：对图14所示的小鼠髓样谱系的CMKLR1表达的分析表明，单核细胞和1型和2型巨噬细胞以及树突状细胞均良好表达该蛋白。图19显示了人单核细胞以及小鼠骨髓髓样细胞和中性粒细胞的CMKLR1表达。炎性刺激剂(例如LPS、TNFa或IL6)使表达明显增加(48小时后，相比于对照至少两倍)，证实了髓样细胞谱系的CMKLR1表达和炎症期间的过表达可能代表了下调和/或诱导炎症消退的治疗方法。对图15所示的小鼠M1或M2巨噬细胞分泌的炎性细胞因子的研究表明，仅2G1克隆(抗CMKLR1抗体)诱导了M2型巨噬细胞的抗炎性细胞因子IL-10和CCL17(图15A和15B)，并减少了M1型巨噬细胞的促炎性细胞因子(图15C)。对于用RvE1或趋化素C末端的C15肽(Cash等，2008)或甚至用其他市售抗CMKLR1抗体处理的细胞，结果是不同的，表明2G1抗体作为抗炎化合物一个非常有趣的特征。然后，发明人研究了从捐献者获得并与不同化合物一起孵育的人髓样细胞的细胞因子表达。图16所示的结果表明，与对照组和市售CMKLR1抗体C7相比，2G4诱导细胞的M2极化，这证实了在小鼠细胞中获得的结果。仅2G1抗体能诱导M2型巨噬细胞的抗炎性细胞因子IL-10和CCL17(图16A和16B)，并能减少M1型巨噬细胞的IL-12p40细胞因子的分泌(图16C)。最后，通过FACS分析了DC活化标志物，图17所示的结果显示，与赋形剂或同种型相比，用RvE1脂质或2G1抗体处理细胞时，CD80、CD86、CD103、CD40和IAb的表达明显降低。这些结果表明，如RVE1一样，2G1抗体可以活化DC的CMKLR1通路。然后，发明人通过Western Blot分析了小鼠巨噬细胞的CMKLR1活化通路。图18显示，在孵育10至30分钟后，抗CMKLR1抗体2G1能诱导Akt和Erk蛋白的活化。这些结果表明，如RvE1一样，2G1抗体能对CMKLR1受体表现出激动剂特性。

实施例11：用抗CMKLR1抗体进行趋化素诱导的CMKLR1活化的竞争研究

方法

在抗CMKLR1抗体存在下，通过竞争测定测量通过CMKLR1受体的趋化素依赖性B-抑制蛋白募集：

测定前一天，将CHO-K1 CMKLR1细胞(Discover’X参考号93-0313E2)加到预热的细胞试剂中，然后以100μl/孔将细胞(Discover’X参考号15-103)铺在96孔板中，在37℃、5％CO₂加湿培养箱中孵育48小时。稀释抗CMLKR1抗体(22X，1μM至1nM，3倍稀释的7个点系列)，在37℃用抗体孵育细胞30分钟。然后，根据供应商的操作规程(Discover’X参考号92-1036)在37℃用趋化素(2nM或6nM)刺激细胞90分钟。在将工作检测溶液添加到细胞中后，用酶标仪以0.5s为间隔来测量发光。

通过CMKLR1受体测量抗CMKLR1抗体与趋化素在AMPc生产中的竞争：

在实验的前一天，将CHO-K1 CMKLR1 Gi细胞(Discover’X参考号95-0080C2)加到预热的细胞试剂中，然后以100μl/孔将细胞(Discover’X参考号15-103)铺在96孔板中，在37℃、5％CO₂加湿培养箱中孵育24小时。

在37℃下，在30分钟内将趋化素激动剂(6X，10^-7μM至10^-10M，3倍稀释的7个点系列)(购自R&D Systems的Discover’X参考号92-1036或2324-CM-025)和毛喉素(forskolin)(40μM)(cAMP活化剂)(Discover’X参考号92-0005)的混合物加入细胞中；或者，将细胞与抗CMKLR1抗体在37℃下预孵育30分钟(系列稀释：6X，1μM至1nM，3倍稀释的7个点系列)。然后，在37℃下，在30分钟内将趋化素(2nM)+毛喉素(60nM)的混合物加到细胞中。为了检测cAMP，在室温下，将抗体试剂和cAMP工作检测溶液加到平板中1小时，然后添加cAMP溶液A，将细胞在室温下在黑暗中孵育3小时。用酶标仪以0.5s为间隔来测量发光。

结果：为了检测本发明的抗体是否是趋化素诱导的CMKLR1活化的拮抗剂，进行了两次测定，结果显示在图20中。毛喉素依赖性cAMP产生的趋化素诱导的抑制作用如图20A所示(黑色圆圈或白色方形)；与对照(灰色菱形)相比，本发明的抗CMLKR1抗体不能恢复对产生的此种抑制(黑色圆圈或白色方形)。如图20B所示的趋化素诱导的β-抑制蛋白活化表明，本发明的抗CMKLR1抗体不会显著改变趋化素依赖的β-抑制蛋白活化(白色圆圈，与黑色菱形相比)。本发明的抗体不具有CMLKR1-趋化素相互作用的拮抗剂活性。此外，本发明的抗体不能诱导趋化素诱导的CMKLR1信号传导通路，证实了这些抗体不是CMLKR1通路的趋化素的激动剂。

实施例12：CD45Rb^高T细胞转移慢性结肠炎小鼠模型

方法：从幼稚小鼠的脾脏中分离出CD45Rb^高CD4 T细胞，通过磁分选对CD4 T细胞进行负向选择，然后用ARIA FACS进行分选，然后将0.5×10⁶细胞(在100μL PBS中)腹腔内注射到6周龄的Rag1基因敲除的雌性小鼠中。从CD45Rb^高CD4 T细胞转移后第32天开始，每周3次(共3周)以1mg/kg施用抗CMKLR1抗体(2G1)或同种型对照。每周三次评估体重随访，确定相对于初始体重的体重变化。*p<0.05，*p<0.01。

结果：图21显示了用抗CMLKR1抗体或同种型对照治疗的动物在施用抗体后随时间变化的重量变化百分比。在治疗后的最初30天内，两组表现出相同的初始体重变化，在第35天开始不同。用抗CMKLR1处理的小鼠继续增重，与此相反，对照小鼠开始减重(这表明，对照组如预测地发展了慢性结肠炎)。发明人用结肠炎的第三种模型(此处为慢性炎症模型)证实，本发明的抗CMKLR1抗体对于治疗慢性炎性和自身免疫性疾病(例如结肠炎)可能有用。

实施例13：抗肿瘤作用对小鼠肝癌肿瘤模型的整体生存率的影响

方法：用甲苯噻嗪/氯胺酮混合物麻醉小鼠。剖腹手术后，通过门静脉注入在PBS中的肿瘤Hepa 1.6细胞(2.5×10⁶细胞/100μL)。注射肿瘤4天后，开始治疗。在2周内，每周三次以0.8mg/kg注射抗CMKLR1抗体(2G1克隆)和hIgG1同种型对照。在2周内，每周两次腹腔内注射在PBS中的抗PD1单克隆抗体(8mg/kg)。还检测了抗CMKLR1和抗PD1抗体(分别为0.8mg/kg和8mg/kg)的组合。在60天内跟踪总生存期，报告每种情况下的生存率(图22)。

结果：如图22所示，用抗CMKLR1或抗PD1抗体治疗的动物的7个治疗动物中仅1个动物(15％的治疗动物)的存活率延长，表明部分缓解(PR)。但是，用抗PD1和抗CMKLR1抗体组合治疗的动物可使存活率(在治疗后动物存活60天)显著提高(从15％增至45％)，表明完全缓解(CR)。该结果表明，治疗组合(抗PD1/抗CMKLR1抗体)对HCC肿瘤模型具有出乎意料的功效。

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序列表

<110> OSE免疫疗法(OSE IMMUNOTHERAPEUTICS)

<120> 抗趋化因子样受体1抗体及其治疗应用

<130> B13110A/AD/HLQ

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<160> 152

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 373

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 1

Met Arg Met Glu Asp Glu Asp Tyr Asn Thr Ser Ile Ser Tyr Gly Asp

1 5 10 15

Glu Tyr Pro Asp Tyr Leu Asp Ser Ile Val Val Leu Glu Asp Leu Ser

20 25 30

Pro Leu Glu Ala Arg Val Thr Arg Ile Phe Leu Val Val Val Tyr Ser

35 40 45

Ile Val Cys Phe Leu Gly Ile Leu Gly Asn Gly Leu Val Ile Ile Ile

50 55 60

Ala Thr Phe Lys Met Lys Lys Thr Val Asn Met Val Trp Phe Leu Asn

65 70 75 80

Leu Ala Val Ala Asp Phe Leu Phe Asn Val Phe Leu Pro Ile His Ile

85 90 95

Thr Tyr Ala Ala Met Asp Tyr His Trp Val Phe Gly Thr Ala Met Cys

100 105 110

Lys Ile Ser Asn Phe Leu Leu Ile His Asn Met Phe Thr Ser Val Phe

115 120 125

Leu Leu Thr Ile Ile Ser Ser Asp Arg Cys Ile Ser Val Leu Leu Pro

130 135 140

Val Trp Ser Gln Asn His Arg Ser Val Arg Leu Ala Tyr Met Ala Cys

145 150 155 160

Met Val Ile Trp Val Leu Ala Phe Phe Leu Ser Ser Pro Ser Leu Val

165 170 175

Phe Arg Asp Thr Ala Asn Leu His Gly Lys Ile Ser Cys Phe Asn Asn

180 185 190

Phe Ser Leu Ser Thr Pro Gly Ser Ser Ser Trp Pro Thr His Ser Gln

195 200 205

Met Asp Pro Val Gly Tyr Ser Arg His Met Val Val Thr Val Thr Arg

210 215 220

Phe Leu Cys Gly Phe Leu Val Pro Val Leu Ile Ile Thr Ala Cys Tyr

225 230 235 240

Leu Thr Ile Val Cys Lys Leu Gln Arg Asn Arg Leu Ala Lys Thr Lys

245 250 255

Lys Pro Phe Lys Ile Ile Val Thr Ile Ile Ile Thr Phe Phe Leu Cys

260 265 270

Trp Cys Pro Tyr His Thr Leu Asn Leu Leu Glu Leu His His Thr Ala

275 280 285

Met Pro Gly Ser Val Phe Ser Leu Gly Leu Pro Leu Ala Thr Ala Leu

290 295 300

Ala Ile Ala Asn Ser Cys Met Asn Pro Ile Leu Tyr Val Phe Met Gly

305 310 315 320

Gln Asp Phe Lys Lys Phe Lys Val Ala Leu Phe Ser Arg Leu Val Asn

325 330 335

Ala Leu Ser Glu Asp Thr Gly His Ser Ser Tyr Pro Ser His Arg Ser

340 345 350

Phe Thr Lys Met Ser Ser Met Asn Glu Arg Thr Ser Met Asn Glu Arg

355 360 365

Glu Thr Gly Met Leu

370

<210> 2

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 2

Glu Leu His His Thr Ala Met Pro Gly Ser Val Phe Ser Leu Gly Leu

1 5 10 15

Pro Leu

<210> 3

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 3

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly

1 5

<210> 4

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 4

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met Ser

1 5 10

<210> 5

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 5

Ile Asn Arg Tyr Gly Gly Ser Thr

1 5

<210> 6

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 6

Thr Ile Asn Arg Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 7

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 7

Pro Arg Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp Ser

1 5 10

<210> 8

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> S选自L或I

<400> 8

Leu Xaa Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp Ser

1 5 10

<210> 9

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 9

Glu Val Gln Leu Val Ala Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Arg Arg Leu Glu Leu Val

35 40 45

Ala Thr Ile Asn Arg Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Pro Arg Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp Ser Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

115

<210> 10

<211> 140

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 10

Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro

1 5 10 15

Gly Ser Thr Gly Asp Glu Val Gln Leu Val Ala Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Arg

50 55 60

Arg Leu Glu Leu Val Ala Thr Ile Asn Arg Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala

85 90 95

Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Met Tyr Tyr Cys Pro Arg Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp

115 120 125

Ser Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

130 135 140

<210> 11

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 11

Ser Ser Val Ser Phe

1 5

<210> 12

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 12

Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Phe Met His

1 5 10

<210> 13

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 13

Asp Thr Thr

1

<210> 14

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 14

Asp Thr Thr Lys Leu Thr Ser

1 5

<210> 15

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 15

Gln Gln Trp Asn Ser Lys Pro Pro Leu Thr

1 5 10

<210> 16

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 16

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Phe Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Thr Lys Leu Thr Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn Ser Lys Pro Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg

100 105

<210> 17

<211> 129

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 17

Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro

1 5 10 15

Gly Ser Thr Gly Asp Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met

20 25 30

Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser

35 40 45

Ser Val Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro

50 55 60

Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Thr Lys Leu Thr Ser Gly Val Pro Ala

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr Ile Ser

85 90 95

Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn

100 105 110

Ser Lys Pro Pro Leu Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

115 120 125

Arg

<210> 18

<211> 33

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 18

Pro Tyr His Thr Leu Asn Leu Leu Glu Leu His His Thr Ala Met Pro

1 5 10 15

Gly Ser Val Phe Ser Leu Gly Leu Pro Leu Ala Thr Ala Leu Ala Ile

20 25 30

Ala

<210> 19

<211> 26

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> Xaa选自E或Q

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> Xaa选自A, E或Q

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> Xaa选自G, A或S

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(11)

<223> Xaa选自L或E

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(12)

<223> Xaa选自V或L

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(13)

<223> Xaa选自Q或K

<220>

<221> misc_feature

<222> (14)..(14)

<223> Xaa选自P或K

<220>

<221> misc_feature

<222> (17)..(17)

<223> Xaa选自G或A

<220>

<221> misc_feature

<222> (19)..(19)

<223> Xaa选自L或V

<220>

<221> misc_feature

<222> (20)..(20)

<223> Xaa选自K, R或V

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> Xaa选自L或V

<220>

<221> misc_feature

<222> (24)..(24)

<223> Xaa选自A或K

<400> 19

Xaa Val Gln Leu Val Xaa Ser Gly Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Gly

1 5 10 15

Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser Cys Xaa Ala Ser

20 25

<210> 20

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 20

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

35 40 45

Ala Thr Ile Asn Arg Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Pro Arg Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp Ser Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 21

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 21

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

35 40 45

Ala Thr Ile Asn Arg Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Pro Lys Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp Ser Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 22

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 22

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

35 40 45

Ala Thr Ile Asn Arg Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Pro Lys Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp Ser Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 23

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 23

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

35 40 45

Ser Thr Ile Ser Arg Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Pro Lys Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp Ser Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 24

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 24

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

35 40 45

Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp Ser Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 25

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 25

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp Ser Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 26

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 26

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Glu Ser Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 27

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 27

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp Thr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 28

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 28

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Leu Val

35 40 45

Ala Thr Ile Asn Arg Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Asn Ser Thr Ser Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Pro Arg Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp Ser Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 29

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 29

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Leu Val

35 40 45

Gly Thr Ile Asn Arg Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Asn Ser Thr Ser Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Pro Arg Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp Ser Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 30

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 30

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Leu Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Arg Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Pro Arg Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp Ser Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 31

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 31

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Leu Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp Ser Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 32

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 32

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp Ser Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 33

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 33

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Asn Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp Ser Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 34

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 34

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Asn Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Glu Ser Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 35

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 35

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

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Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Leu Val

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65 70 75 80

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<220>

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Gly

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<220>

<223> 合成序列

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Gly

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<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 70

Ile Ile Asn Arg Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 71

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 71

Thr Ile Asn Arg Tyr Gly Gly Ser Pro Tyr Tyr Ala Gln Gly Phe Thr

1 5 10 15

Gly

<210> 72

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 72

Thr Ile Asn Arg Tyr Gly Gly Asn Pro Tyr Tyr Ala Gln Gly Phe Thr

1 5 10 15

Gly

<210> 73

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> Xaa选自I或L

<400> 73

Leu Xaa Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Glu Ser

1 5 10

<210> 74

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> Xaa选自I或L

<400> 74

Leu Xaa Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp Thr

1 5 10

<210> 75

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> Xaa选自I或L

<400> 75

Leu Xaa Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Glu Thr

1 5 10

<210> 76

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 76

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Phe Met His

1 5 10

<210> 77

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 77

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Phe Leu His

1 5 10

<210> 78

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 78

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Phe Leu Ala

1 5 10

<210> 79

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 79

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Phe Leu Ala

1 5 10

<210> 80

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 80

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Phe Leu His

1 5 10

<210> 81

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 81

Asp Ala Thr Lys Leu Thr Ser

1 5

<210> 82

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 82

Asp Ala Ser Lys Leu Thr Ser

1 5

<210> 83

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 83

Asp Ala Ser Lys Leu Glu Ser

1 5

<210> 84

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 84

Asp Ala Thr Lys Ser Thr Ser

1 5

<210> 85

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 85

Asp Ala Ser Lys Ser Phe Ser

1 5

<210> 86

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 86

Asp Ala Thr Lys Arg Thr Thr

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<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 87

Asp Ala Ser Lys Ser Thr Ser

1 5

<210> 88

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 88

Asp Ala Ser Lys Arg Thr Thr

1 5

<210> 89

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 89

Gln Gln Trp Gln Ser Lys Pro Pro Leu Thr

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<210> 90

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 90

Glu Val Gln Leu Val Ala Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser

20 25

<210> 91

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 91

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser

20 25

<210> 92

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 92

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser

20 25

<210> 93

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 93

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser

20 25

<210> 94

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

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1 5 10

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<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 95

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val Ala

1 5 10

<210> 96

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 96

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Leu Val Ala

1 5 10

<210> 97

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 97

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Leu Val Ala

1 5 10

<210> 98

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 98

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val Ser

1 5 10

<210> 99

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 99

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Leu Val Gly

1 5 10

<210> 100

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 100

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Leu Met Gly

1 5 10

<210> 101

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 101

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Pro Arg

20 25 30

<210> 102

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 102

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Pro Lys

20 25 30

<210> 103

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 103

Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Asn Ser Thr Ser Thr Leu Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Pro Arg

20 25 30

<210> 104

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 104

Arg Phe Val Ile Ser Arg Asp Asn Ser Val Ser Thr Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Pro Arg

20 25 30

<210> 105

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 105

Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Pro Arg

20 25 30

<210> 106

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 106

Arg Phe Val Ile Ser Arg Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Pro Arg

20 25 30

<210> 107

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 107

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 108

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 108

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 109

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 109

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys

20

<210> 110

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 110

Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

20

<210> 111

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 111

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys

20

<210> 112

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 112

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

20

<210> 113

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 113

Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 114

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 114

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 115

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 115

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 116

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 116

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Arg Trp Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 117

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 117

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 118

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 118

Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 119

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 119

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 120

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 120

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 121

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 121

Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 122

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 122

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 123

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 123

Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

1 5 10

<210> 124

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 124

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 125

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> Xaa选自Q或A

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> Xaa选自D或G

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> Xaa选自R或K

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> Xaa选自R, G或Q

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Trp Val Arg Xaa Thr Pro Xaa Xaa Xaa Leu Glu Leu Val Ala

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<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> Xaa选自F或V

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> Xaa选自T或V

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(5)

<223> Xaa选自S或T

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

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<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> Xaa选自K, T或V

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(11)

<223> Xaa选自N或S

<220>

<221> misc_feature

<222> (15)..(15)

<223> Xaa选自L或M

<220>

<221> misc_feature

<222> (16)..(16)

<223> Xaa选自Q或E

<220>

<221> misc_feature

<222> (17)..(17)

<223> Xaa选自M, L或I

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> Xaa选自K或R

<220>

<221> misc_feature

<222> (22)..(22)

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<220>

<221> misc_feature

<222> (27)..(27)

<223> Xaa选自M或V

<400> 126

Arg Xaa Xaa Ile Xaa Arg Asp Asn Xaa Xaa Xaa Thr Leu Tyr Xaa Xaa

1 5 10 15

Xaa Ser Ser Leu Xaa Xaa Glu Asp Thr Ala Xaa Tyr Tyr Cys Pro Arg

20 25 30

<210> 127

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> Xaa选自T或L

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> Xaa选自L或V

<400> 127

Trp Gly Gln Gly Thr Xaa Xaa Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 128

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> Xaa选自Q, A或E

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> Xaa选自V或Q

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> Xaa选自A, S或D

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> Xaa选自I, S, F或T

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(11)

<223> Xaa选自M, L或Q

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(13)

<223> Xaa选自A, S或L

<220>

<221> misc_feature

<222> (14)..(14)

<223> Xaa选自S或V

<220>

<221> misc_feature

<222> (15)..(15)

<223> Xaa选自P, V或T

<220>

<221> misc_feature

<222> (16)..(16)

<223> Xaa选自G或P

<220>

<221> misc_feature

<222> (17)..(17)

<223> Xaa选自E, D或K

<220>

<221> misc_feature

<222> (18)..(18)

<223> Xaa选自K或R

<220>

<221> misc_feature

<222> (19)..(19)

<223> Xaa选自V或A

<220>

<221> misc_feature

<222> (21)..(21)

<223> Xaa选自M, I或L

<400> 128

Xaa Ile Xaa Leu Thr Gln Ser Pro Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa

1 5 10 15

Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Thr Cys

20

<210> 129

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> Xaa选自S或P

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> Xaa选自G或D

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> Xaa选自T或K

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> Xaa选自S或A

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(11)

<223> Xaa选自K或R

<400> 129

Trp Tyr Gln Gln Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Arg Trp Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 130

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> Xaa选自V或I

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> Xaa选自A或S

<220>

<221> misc_feature

<222> (14)..(14)

<223> Xaa选自F或D

<220>

<221> misc_feature

<222> (16)..(16)

<223> Xaa选自S或T

<220>

<221> misc_feature

<222> (20)..(20)

<223> Xaa选自S或N

<220>

<221> misc_feature

<222> (22)..(22)

<223> Xaa选自M或L

<220>

<221> misc_feature

<222> (23)..(23)

<223> Xaa选自E或Q

<220>

<221> misc_feature

<222> (24)..(24)

<223> Xaa选自A或P

<220>

<221> misc_feature

<222> (27)..(27)

<223> Xaa选自A或F

<220>

<221> misc_feature

<222> (29)..(29)

<223> Xaa选自T或V

<400> 130

Gly Xaa Pro Xaa Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Xaa Tyr Xaa

1 5 10 15

Leu Thr Ile Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Glu Asp Xaa Ala Xaa Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 131

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> Xaa选自P或G

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> Xaa选自L或V

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> Xaa选自L或I

<400> 131

Phe Gly Xaa Gly Thr Lys Xaa Glu Xaa Lys Arg

1 5 10

<210> 132

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 132

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 133

<211> 993

<212> DNA

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 133

gctagcacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60

ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120

tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180

ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240

tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 300

aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360

ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420

gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480

tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540

agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600

gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgcgaa aaccatctcc 660

aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720

atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780

gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840

ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900

cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960

cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa tga 993

<210> 134

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 134

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Ala Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 135

<211> 984

<212> DNA

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 135

gctagcacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 60

agcacagccg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120

tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180

ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacgaagacc 240

tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagtcc 300

aaatatggtc ccccatgccc accatgccca gcacctgagt tcctgggggg accatcagtc 360

ttcctgttcc ccccaaaacc caaggacact ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 420

tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggat 480

ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagttcaa cagcacgtac 540

cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 600

tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccgtcc tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 660

gggcagcccc gagagccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccaggagga gatgaccaag 720

aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 780

tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 840

gacggctcct tcttcctcta cagcaggcta accgtggaca agagcaggtg gcaggagggg 900

aatgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac acagaagagc 960

ctctccctgt ctccgggtaa atga 984

<210> 136

<211> 327

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 136

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325

<210> 137

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 137

acggtggctg caccatctgt cttcatcttc ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga 60

actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg 120

aaggtggata acgccctcca atcgggtaac tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc 180

aaggacagca cctacagcct cagcagcacc ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa 240

cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc 300

ttcaacaggg gagagtgtta g 321

<210> 138

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 138

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

1 5 10 15

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

20 25 30

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

35 40 45

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

50 55 60

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

65 70 75 80

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

85 90 95

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 139

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 139

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

225 230 235 240

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 140

<211> 326

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 140

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

115 120 125

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

130 135 140

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

145 150 155 160

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn

165 170 175

Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp

180 185 190

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro

195 200 205

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu

210 215 220

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

225 230 235 240

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

245 250 255

Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

260 265 270

Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

275 280 285

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

290 295 300

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

305 310 315 320

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325

<210> 141

<211> 327

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 141

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

325

<210> 142

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 142

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Phe Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Thr Lys Leu Thr Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn Ser Lys Pro Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 143

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 143

Glu Val Gln Leu Val Ala Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Arg Arg Leu Glu Leu Val

35 40 45

Ala Thr Ile Asn Arg Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Pro Arg Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp Ser Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

Lys

<210> 144

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 144

Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp Ser

1 5 10

<210> 145

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 145

Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Glu Ser

1 5 10

<210> 146

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 146

Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp Thr

1 5 10

<210> 147

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 147

Leu Ile Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Glu Thr

1 5 10

<210> 148

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 148

Leu Leu Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp Ser

1 5 10

<210> 149

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 149

Leu Leu Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Glu Ser

1 5 10

<210> 150

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 150

Leu Leu Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Asp Thr

1 5 10

<210> 151

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 151

Leu Leu Tyr Tyr Gly Asn Glu Gly Glu Thr

1 5 10

<210> 152

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（artificial sequence）

<220>

<223> 合成序列

<400> 152

Ala Met Pro Gly Ser

1 5

Claims

1.抗CMKLR1化合物，所述抗CMKLR1化合物选自特异性结合CMKLR1的抗体或其抗原结合片段或嵌合抗体、人源化抗体或修饰的抗体，其中，所述抗CMKLR1化合物包含：

-包含三个CDR即VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3的抗体重链可变结构域，其中：

·VHCDR1包含或由SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：64或SEQID NO：65所示的氨基酸序列组成；以及

·VHCDR2包含或由SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68、SEQ IDNO：69、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：71或SEQ ID NO：72所示的氨基酸序列组成；以及

·VHCDR3包含或由SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：74或SEQ ID NO：75所示的氨基酸序列组成；以及

-包含三个CDR即VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3的抗体轻链可变结构域，其中：

·VLCDR1包含或由SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：78、SEQID NO：79或SEQ ID NO：80所示的氨基酸序列组成；以及

·VLCDR2包含或由SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：87或SEQ ID NO：88所示的氨基酸序列组成；以及

2.根据权利要求1所述的抗CMKLR1化合物，其中，所述抗CMKLR1化合物是CMKLR1的消退素E1样激动剂；特别地，所述抗CMKLR1化合物是促消退因子，特别是针对髓样细胞谱系；特别地，所述抗CMKLR1化合物是抗人CMKLR1化合物。

3.根据权利要求1或2所述的抗CMKLR1化合物，其中，所述抗CMKLR1化合物特异性结合位于CMKLR1的第三胞外环(EL3)内的表位；特别地，所述抗CMKLR1化合物特异性结合包含序列SEQ ID NO：2的氨基酸残基的多肽。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗CMKLR1化合物，其中，所述VHCDR3包含或由SEQID NO：144或SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列组成。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗CMKLR1化合物，其中：

·VHCDR3包含或由SEQ ID NO：144或SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列组成。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗CMKLR1化合物，其中：

·VLCDR1包含或由SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列组成；以及

7.根据权利要求1至6中任一项所述的抗CMKLR1化合物，其中：

所述重链可变结构域包含或由SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ IDNO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ IDNO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ IDNO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ IDNO：41或SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列组成；

所述轻链可变结构域包含或由SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：45、SEQ IDNO：46、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ IDNO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：57、SEQ IDNO：58、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：60或SEQ ID NO：61所示的氨基酸序列组成。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗CMKLR1化合物，其中，所述抗CMKLR1化合物在体外和/或体内增强抗炎性细胞因子的分泌，特别是IL-10和/或CCL17、更特别是IL-10的分泌，和/或所述抗CMKLR1化合物在体外和/或体内抑制或减少促炎性细胞因子的分泌，特别是IL-12的分泌，特别针对表达CMKLR1的髓样细胞。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的抗CMKLR1化合物，其中，所述抗CMKLR1化合物促进巨噬细胞极化偏向抗炎性M2型巨噬细胞。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的抗CMKLR1化合物，其中，所述抗CMKLR1化合物抑制树突状细胞的活化和/或增殖。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的抗CMKLR1化合物，其中，所述抗CMKLR1化合物具有在CMKLR1活化后在体外和/或体内诱导Akt和/或Erk磷酸化的能力，特别是在CMKLR1活化后诱导Akt和Erk磷酸化的能力。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的抗CMKLR1化合物，其中，所述抗CMKLR1化合物不与趋化素竞争结合CMKLR1，或者所述抗CMKLR1化合物不干扰趋化素与CMKLR1的结合。

13.抗CMKLR1化合物，所述抗CMKLR1化合物选自特异性结合CMKLR1的抗体、其抗原结合片段或嵌合抗体、修饰的抗体或人源化抗体，其中：

所述抗CMKLR1化合物包含抗体重链可变结构域，所述抗体重链可变结构域包含VHCDR3，所述VHCDR3包含或由SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列或其突变序列组成，所述突变序列中的氨基酸残基被取代以使SEQ ID NO：8的第1位和第2位的氨基酸残基分别是L和I或L；以及

所述抗CMKLR1化合物特异性结合位于CMKLR1的第三胞外环(EL3)内的表位；特别地，所述抗CMKLR1化合物特异性结合多肽，所述多肽包含或由序列SEQ ID NO：2的氨基酸残基组成；以及

所述抗CMKLR1化合物是CMKLR1的消退素E1样激动剂，特别地，抗CMKLR1化合物是促消退因子，特别是针对髓样细胞谱系；以及

所述抗CMKLR1化合物与包含对应于SEQ ID NO：9的重链可变结构域和对应于SEQ IDNO：16的轻链可变结构域的抗体竞争结合多肽；更特别地，所述抗CMKLR1化合物与抗体2G1竞争结合多肽，所述多肽包含或由序列SEQ ID NO：2的氨基酸残基组成，或者所述多肽包含或由CMKLR1的胞外域的第三环(EL3)组成。

14.根据权利要求13所述的抗CMKLR1化合物，其中：

-抗体重链可变结构域包含三个CDR即VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，其中：

所述抗CMKLR1化合物还包含：

15.核酸分子或核酸分子组，更特别是分离的核酸分子和/或重组的核酸分子，其编码权利要求1至14中任一项所述的抗CMKLR1化合物，更特别地，核酸分子或核酸分子组编码重链可变结构域和/或轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含或由SEQ ID NO：20、SEQ IDNO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ IDNO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ IDNO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ IDNO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41或SEQ ID NO：42所示序列的氨基酸残基组成，所述轻链可变结构域包含或由SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：46、SEQID NO：47、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52、SEQID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：58、SEQID NO：59、SEQ ID NO：60或SEQ ID NO：61所示序列的氨基酸残基组成。

16.根据权利要求15所述的核酸分子或核酸分子组，其中，所述核酸分子还包含用于转录和表达所编码的重链可变结构域和/或轻链可变结构域的调控序列。

17.载体，其中，所述载体包含或由可操作地连接的权利要求15或16所述的核酸分子或核酸分子组组成，所述载体特别是重组载体和/或分离的载体。

18.根据权利要求17所述的载体，其中，所述载体是质粒、人工染色体、粘粒或病毒载体。

19.宿主细胞，其中，所述宿主细胞包含权利要求15或16所述的核酸分子或权利要求17或18所述的载体。

20.根据权利要求19所述的宿主细胞，其中，所述宿主细胞是哺乳动物细胞，特别是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。

21.抗CMKLR1化合物，其中，所述抗CMKLR1化合物选自：权利要求1至14中任一项所述的抗CMKLR1、权利要求15或16所述的核酸分子或核酸分子组、权利要求17或18所述的载体和/或权利要求19或20所述的宿主细胞；

所述抗CMKLR1化合物用于预防和/或治疗炎性疾病，特别是急性炎性疾病、慢性炎性疾病，例如哮喘、角膜结膜炎、牙周病、湿疹、炎性肠病，特别是克罗恩病或结肠炎，特别是溃疡性结肠炎或自发性结肠炎，特别是炎症消退被延迟或破坏的疾病。

22.根据权利要求21所述的抗CMKLR1化合物，其中，所述抗CMKLR1化合物用于治疗受试者的炎性肠病、特别是结肠炎或克罗恩病，所述受试者的髓样细胞过表达CMKLR1，特别地，所述受试者对皮质类固醇和/或免疫抑制治疗无反应。

23.根据权利要求21或22所述的抗CMKLR1化合物，其中，所述抗CMKLR1化合物用于结肠炎的延长治疗和/或晚期结肠炎的治疗。

24.抗CMKLR1化合物，其中，所述抗CMKLR1化合物选自：权利要求1至14中任一项所述的抗CMKLR1、权利要求15或16所述的核酸分子或核酸分子组、权利要求17或18所述的载体和/或权利要求19或20所述的宿主细胞；

所述抗CMKLR1化合物用于预防和/或治疗自身免疫性疾病，例如糖尿病，特别是I型糖尿病、牛皮癣、狼疮、类风湿性关节炎、多发性硬化症、干燥综合征、脂泻病、血管炎、重症肌无力，或感染性疾病，例如败血症、腹膜炎，退行性疾病、伤口愈合障碍或干眼综合征，特别是炎症消退被延迟或破坏的疾病。

25.抗CMKLR1化合物，其中，所述抗CMKLR1化合物选自权利要求1至14中任一项所述的抗CMKLR1、权利要求15或16所述的核酸分子或核酸分子组、权利要求17或18所述的载体和/或权利要求19或20所述的宿主细胞；

所述抗CMKLR1化合物用于预防和/或治疗癌症、转移性癌症，特别是实体癌症和液体癌症，例如上皮癌，更特别是肝癌，特别是乳腺上皮癌或结肠上皮癌或肺癌或髓样癌，例如白血病，特别是癌细胞表达CMKLR1或肿瘤微环境被表达或过度表达CMKLR1的细胞侵袭的癌症，特别是炎症消退被延迟或破坏的癌症。

26.抗CMKLR1化合物，其中，所述抗CMKLR1化合物选自：权利要求1至14中任一项所述的抗CMKLR1、权利要求15或16所述的核酸分子或核酸分子组、权利要求17或18所述的载体和/或权利要求19或20所述的宿主细胞；

所述抗CMKLR1化合物用于预防和/或治疗癌症、转移性癌症，特别是实体癌症和液体癌症，例如上皮癌，更特别是肝癌，特别是乳腺上皮癌或结肠上皮癌或肺癌或髓样癌，例如白血病，特别是癌细胞表达CMKLR1或肿瘤微环境被表达或过度表达CMKLR1的细胞侵袭的癌症。

27.组合产品，其中，所述组合产品包含：

-权利要求1至14中任一项所述的抗人CMKLR1化合物、权利要求15或16所述的核酸分子或核酸分子组、权利要求17或18所述的载体和/或权利要求19或20所述的宿主细胞中的至少一种；以及

-至少一种第二治疗剂，所述第二治疗剂选自化学治疗剂、放射治疗剂、免疫治疗剂、细胞治疗剂、抗生素和益生菌；特别地，免疫治疗剂选自适应性免疫细胞的检查点阻断剂或活化剂，特别选自：抗PDL1、抗PD1、抗CTLA4、抗SIRPa、抗CD137、抗CD2、抗CD28、抗CD40、抗HVEM、抗BTLA、抗CD160、抗TIGIT、抗TIM-1/3、抗LAG-3、抗2B4和抗OX40、抗CD40激动剂、CD40-L、TLR激动剂、抗ICOS、ICOS-L和B细胞受体激动剂，特别是抗PD1、抗PDL1、抗SIRPa和/或抗CD137；用于同时、分别或依次用作药物。

28.化合物组合，其中，所述化合物组合包含：

权利要求1至14中任一项所述的抗CMKLR1化合物、权利要求15或16所述的核酸分子或核酸分子组、权利要求17或18所述的载体和/或权利要求19或20所述的宿主细胞；

以及选自抗体、其抗原结合片段、人源化抗体、嵌合抗体、修饰的抗体或抗原结合抗体模拟物的抗PD1或抗PDL1化合物。

29.根据权利要求28所述的化合物组合，其中，所述化合物组合包含权利要求1至11中任一项所述的抗CMKLR1化合物和抗PD1抗体，更特别地，所述抗PD1化合物是单克隆抗PD1抗体。

30.化合物组合，其中，所述化合物组合包含：

以及选自抗体、其抗原结合片段、人源化抗体、嵌合抗体、修饰的抗体或抗原结合抗体模拟物的抗SIRPa化合物，更特别地，抗SIRPa抗体或其抗原结合片段。

31.筛选抗CMKLR1化合物的方法，其中，所述方法包括以下步骤：

·VHCDR1包含或由SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列或其突变序列组成，所述突变序列中的氨基酸残基被取代；以及

·VHCDR2包含或由SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列或其突变序列组成，所述突变序列中的氨基酸残基被取代；以及

·VHCDR3包含或由SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列或其突变序列组成，所述突变序列中的氨基酸残基被取代以使SEQ ID NO：8的第1位和第2位的氨基酸残基分别是L和I或L；以及

·VLCDR1包含或由SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列或其突变序列组成，所述突变序列中的氨基酸残基被取代；以及

·VLCDR2包含或由SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列或其突变序列组成，所述突变序列中的氨基酸残基被取代；以及

·VLCDR3包含或由SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列或其突变序列组成，所述突变序列中的氨基酸残基被取代；

b)检测所述化合物作为CMKLR1的RvE1样激动剂的能力，特别是检测所述化合物促进炎症消退的能力，特别是针对髓样细胞；以及可选地，

c)通过生物传感器检测所述化合物与位于CMKLR1的第三环E3内的表位的结合能力，特别是所述化合物与包含SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：152的氨基酸残基的多肽的结合能力；以及可选地，

d)检测所述化合物不竞争趋化素与CMKLR1结合的能力；

e)当步骤c)测得的所述化合物的结合能力为至少10E-8KD时：

i)在所述化合物与CMKLR1结合后，检测所述化合物诱导Akt磷酸化和/或Erk磷酸化的能力，特别是诱导Akt磷酸化和Erk磷酸化的能力；

ii)检测所述化合物增强抗炎性细胞因子分泌的能力，特别是IL-10和/或CCL17分泌的能力，和/或所述化合物抑制或减少促炎性细胞因子分泌的能力，特别是IL-12分泌的能力，特别是针对表达CMKLR1的髓样细胞；和/或

iii)检测所述化合物促进巨噬细胞极化偏向抗炎性M2型巨噬细胞的能力，特别是所述化合物增强表型标志物CD200R分泌的能力；和/或

iv)检测所述化合物抑制树突状细胞活化和/或增殖的能力。

32.CMKLR1的激动剂化合物，其中，所述激动剂化合物具有RvE1样激动剂能力，在所述激动剂化合物结合CMKLR1后，所述激动剂化合物诱导Akt的磷酸化和/或Erk的磷酸化，特别是针对髓样细胞；所述激动剂化合物特异性结合CMKLR1的第三环E3，特别是结合位于第三环E3内且包含在序列SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：152的氨基酸残基内的表位；

所述激动剂化合物是抗体、抗原结合抗体、抗原结合抗体模拟物、修饰的抗体、细胞外配体、肽或多肽。

33.根据权利要求32所述的激动剂化合物，其中，所述激动剂化合物促进巨噬细胞极化偏向抗炎性M2型巨噬细胞，和/或所述激动剂化合物抑制树突状细胞的增殖和活化，所述激动剂化合物在体外和/或体内增强抗炎性细胞因子的分泌，特别是IL-10和/或CCL17的分泌，和/或所述激动剂化合物在体外和/或体内抑制或减少促炎性细胞因子的分泌，特别是IL-12的分泌，特别是针对表达CMKLR1的髓样细胞。