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CN112162098A - 一组血清差异蛋白在制备用于检测人ⅱ型血小板减少症试剂中的应用 - Google Patents

一组血清差异蛋白在制备用于检测人ⅱ型血小板减少症试剂中的应用 Download PDF

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CN112162098A CN202010826863.XA CN202010826863A CN112162098A CN 112162098 A CN112162098 A CN 112162098A CN 202010826863 A CN202010826863 A CN 202010826863A CN 112162098 A CN112162098 A CN 112162098A
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Abstract

本发明涉及疾病检测技术领域，公开一组血清差异蛋白在制备用于检测人Ⅱ型血小板减少症试剂中的应用，所述血清差异蛋白为A0A024R1G8蛋白、A0A075B6I0蛋白、A0A0C4DGZ8蛋白、A0A0F7T8B3蛋白、A0A0R7FJH5蛋白、A0A0X9V9C4蛋白、A0A161I202蛋白、A0A1L2BU39蛋白、A0A1S5UZ24蛋白、A0A2U8J8J8蛋白、A0A2U8J9B8蛋白、A0A384NPR0蛋白、A2N0T6蛋白、A2N0U0蛋白、A2N0U4蛋白、A2NYV1蛋白、B2ZDQ1蛋白、B4DKJ0蛋白、B7Z2B4蛋白、D3JV41蛋白、K7EPN4蛋白、O75460蛋白、P00738蛋白、P00739蛋白、P04259蛋白、P35527蛋白、Q86YZ3蛋白与Q9HCC1蛋白中任意数量差异蛋白的组合。本发明主要目的是解决目前技术中基因检测速度慢，价格昂贵，以及基层医院由于硬件条件的限制，不能很好的对人Ⅱ型血小板减少症进行快速检测的问题。

Description

一组血清差异蛋白在制备用于检测人Ⅱ型血小板减少症试剂 中的应用
技术领域
本发明涉及疾病应用检测技术领域，尤其涉及一组血清差异蛋白在制备用于检测人Ⅱ型血小板减少症试剂中的应用。
背景技术
人Ⅱ型血小板减少症是因ANKRD26基因5'-UTR区的突变导致的一种遗传性血小板减少症。人Ⅱ型血小板减少症患者表现为中等程度血小板减少，血小板大小与功能正常，不伴发白内障、肾病、耳聋、发育迟缓、贫血等其他类型遗传性血小板减少症常见的伴发疾病。因缺乏特异性表型，常被误诊为免疫性血小板减少症而接受错误甚至有害的免疫抑制/切脾治疗。
一般情况下，人Ⅱ型血小板减少症患者凝血功能只受到轻微影响，无需输注血小板来维持日常血小板的消耗，但在外伤、剖腹产等失血量较大的情况下，其凝血障碍较为严重，易导致生命危险。目前常用的人Ⅱ型血小板减少症诊断金标准为基因诊断，但是基因诊断速度慢，价格昂贵，并且部分基层医院也缺乏相应检测条件，不能很好的对人Ⅱ型血小板减少症进行确诊。
因此，现有的人Ⅱ型血小板减少症检测技术有待进一步改进与发展。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的是提供一组血清差异蛋白在制备用于检测人Ⅱ型血小板减少症试剂中的应用，解决目前技术中基因检测速度慢，价格昂贵，以及基层医院由于硬件条件的限制，不能很好的对人Ⅱ型血小板减少症进行快速检测的问题。
本发明通过以下技术手段解决上述技术问题：
一组血清差异蛋白在制备用于检测人Ⅱ型血小板减少症试剂中的应用，所述血清差异蛋白为A0A024R1G8蛋白、A0A075B6I0蛋白、A0A0C4DGZ8蛋白、A0A0F7T8B3蛋白、A0A0R7FJH5蛋白、A0A0X9V9C4蛋白、A0A161I202蛋白、A0A1L2BU39蛋白、A0A1S5UZ24蛋白、A0A2U8J8J8蛋白、A0A2U8J9B8蛋白、A0A384NPR0蛋白、A2N0T6蛋白、A2N0U0蛋白、A2N0U4蛋白、A2NYV1蛋白、B2ZDQ1蛋白、B4DKJ0蛋白、B7Z2B4蛋白、D3JV41蛋白、K7EPN4蛋白、O75460蛋白、P00738蛋白、P00739蛋白、P04259蛋白、P35527蛋白、Q86YZ3蛋白与Q9HCC1蛋白中任意数量差异蛋白的组合。
人Ⅱ型血小板减少症诊断必须建立在血小板计数的基础上，因此，必须采集抗凝血液进行血常规检测，利用同一抗凝血标本进行血浆标志物检测，可避免采集更多患者血液。但上述的差异蛋白作为标志物同样可以从血清标本中检出，同样适用于利用血清标本对人Ⅱ型血小板减少症进行检测。
由于单一血浆标志物对人Ⅱ型血小板减少症进行诊断具有的特异性与准确性欠佳，而通过多个血浆标志物进行组合，可显著提高检测的准确性与特异性。基于本发明提供的28个血浆蛋白标志物，进行任意数量的组合，均可显著改善检测的准确性与特异性。
进一步，所述血清差异蛋白为B7Z2B4蛋白、O75460蛋白与P00738蛋白中任意数量差异蛋白的组合。该组合蛋白用作人Ⅱ型血小板减少症检测标志物时，具有更好的特异性与准确性。
进一步，通过采集血浆，利用数据非依赖性扫描模式蛋白组学方法确定血浆中是否存在血清差异蛋白组合。
进一步，确定血清中存在血清差异蛋白后还包括：采用酶联免疫技术对血清差异蛋白进行逐个检测，确定检测到的血清差异蛋白的浓度变化。与现有的人Ⅱ型血小板减少症检测方法相比，本发明根据检测到的血清差异蛋白的浓度变化，可进一步提高检测的特异性、灵敏度和准确性。
进一步，确定血清中存在血清差异蛋白后还包括：采用化学发光技术对血清差异蛋白进行逐个检测，确定检测到的血清差异蛋白的浓度变化。与现有的人Ⅱ型血小板减少症检测方法相比，本发明根据检测到的血清差异蛋白的浓度变化，可进一步提高检测的特异性、灵敏度和准确性。
进一步，确定血清中存在血清差异蛋白后还包括：采用蛋白芯片技术对血清差异蛋白进行逐个检测，确定检测到的血清差异蛋白的浓度变化。与现有的人Ⅱ型血小板减少症检测方法相比，本发明根据检测到的血清差异蛋白的浓度变化，可进一步提高检测的特异性、灵敏度和准确性。
本发明的有益效果：
1、本发明确定了28个可用于检测人Ⅱ型血小板减少症的血清差异蛋白，将这28个血清差异蛋白任意组合，用于制备检测人Ⅱ型血小板减少症的试剂，可以提高检测的客观性、特异性和准确性。
2、因为通过试剂检测，检测速度快，检测成本较基因检测更低，可以普及使用，能更快、更好的协助医务人员对人Ⅱ型血小板减少症进行确诊。
附图说明
图1是健康对照组和疾病组中A0A024R1G8蛋白实验结果对比图；
图2是健康对照组和疾病组中A0A075B6I0蛋白实验结果对比图；
图3是健康对照组和疾病组中A0A0C4DGZ8蛋白实验结果对比图；
图4是健康对照组和疾病组中A0A0F7T8B3蛋白实验结果对比图；
图5是健康对照组和疾病组中A0A0R7FJH5蛋白实验结果对比图；
图6是健康对照组和疾病组中A0A0X9V9C4蛋白实验结果对比图；
图7是健康对照组和疾病组中A0A161I202蛋白实验结果对比图；
图8是健康对照组和疾病组中A0A1L2BU39蛋白实验结果对比图；
图9是健康对照组和疾病组中A0A1S5UZ24蛋白实验结果对比图；
图10是健康对照组和疾病组中A0A2U8J8J8蛋白实验结果对比图；
图11是健康对照组和疾病组中A0A2U8J9B8蛋白实验结果对比图；
图12是健康对照组和疾病组中A0A384NPR0蛋白实验结果对比图；
图13是健康对照组和疾病组中A2N0T6蛋白实验结果对比图；
图14是健康对照组和疾病组中A2N0U0蛋白实验结果对比图；
图15是健康对照组和疾病组中A2N0U4蛋白实验结果对比图；
图16是健康对照组和疾病组中A2NYV1蛋白实验结果对比图；
图17是健康对照组和疾病组中B2ZDQ1蛋白实验结果对比图；
图18是健康对照组和疾病组中B4DKJ0蛋白实验结果对比图；
图19是健康对照组和疾病组中B7Z2B4蛋白实验结果对比图；
图20是健康对照组和疾病组中D3JV41蛋白实验结果对比图；
图21是健康对照组和疾病组中K7EPN4蛋白实验结果对比图；
图22是健康对照组和疾病组中O75460蛋白实验结果对比图；
图23是健康对照组和疾病组中00738蛋白实验结果对比图；
图24是健康对照组和疾病组中P00739蛋白实验结果对比图；
图25是健康对照组和疾病组中P04259蛋白实验结果对比图；
图26是健康对照组和疾病组中P35527蛋白实验结果对比图；
图27是健康对照组和疾病组中Q86YZ3蛋白实验结果对比图；
图28是健康对照组和疾病组中Q9HCC1蛋白实验结果对比图；
图29是B7Z2B4蛋白、O75460蛋白与P00738蛋白组合一起后的受试者工作特征曲线。
具体实施方式
以下将结合具体实施例及说明书附图对本发明进行详细说明：
如图1-图29所示：
本实施例分别采集人Ⅱ型血小板减少症患者血清和健康对照血清，然后通过数据非依赖性扫描模式蛋白组学方法对人Ⅱ型血小板减少症患者血清和健康对照血清进行比较分析。
本实施例对28个血清差异蛋白均进行了检测，具体的，检测的血清差异蛋白为A0A024R1G8蛋白、A0A075B6I0蛋白、A0A0C4DGZ8蛋白、A0A0F7T8B3蛋白、A0A0R7FJH5蛋白、A0A0X9V9C4蛋白、A0A161I202蛋白、A0A1L2BU39蛋白、A0A1S5UZ24蛋白、A0A2U8J8J8蛋白、A0A2U8J9B8蛋白、A0A384NPR0蛋白、A2N0T6蛋白、A2N0U0蛋白、A2N0U4蛋白、A2NYV1蛋白、B2ZDQ1蛋白、B4DKJ0蛋白、B7Z2B4蛋白、D3JV41蛋白、K7EPN4蛋白、O75460蛋白、P00738蛋白、P00739蛋白、P04259蛋白、P35527蛋白、Q86YZ3蛋白与Q9HCC1蛋白。
检测人Ⅱ型血小板减少症患者与健康对照的血清差异蛋白结果，如下表所示：
表1、人Ⅱ型血小板减少症患者与健康对照的血清差异蛋白
Figure BDA0002636525270000051
人Ⅱ型血小板减少症诊断必须建立在血小板计数的基础上，因此，必须采集抗凝血液进行血常规检测，利用同一抗凝血标本进行血浆标志物检测，可避免采集更多患者血液。但上述的差异蛋白作为标志物同样可以从血清标本中检出，同样适用于利用血清标本对人Ⅱ型血小板减少症进行检测。
由于单一血浆标志物对人Ⅱ型血小板减少症进行诊断具有的特异性与准确性欠佳，而通过多个血浆标志物进行组合，可显著提高检测的准确性与特异性。基于本发明提供的28个血浆蛋白标志物，均可显著改善检测的准确性与特异性。
通过上述的检测结果得到：与对照健康血清相比，在人Ⅱ型血小板减少症患者血清中获得了血清差异蛋白28个，其中14个表达蛋白上调，14个表达蛋白下调。
然后采用酶联免疫技术、化学发光技术、蛋白芯片技术对28个血清差异蛋白同时进行逐个检测，确定检测到的血清差异蛋白的浓度变化。本发明通过数据非依赖性扫描模式蛋白组学方法，对人Ⅱ型血小板减少症患者血清与健康对照血清进行比较分析，与对照相比，获得了血清差异蛋白28个，表达上调蛋白14个，表达下调蛋白14个，并通过酶联免疫技术、化学发光技术、蛋白芯片技术对这些蛋白进行逐个检测，确定检测到的血清差异蛋白的浓度变化。
本发明确定的28个可用于检测人Ⅱ型血小板减少症的血清差异蛋白，用于制备检测人Ⅱ型血小板减少症的试剂，可以提高检测的客观性、特异性和准确性。并且通过试剂检测，检测速度快，检测成本较基因检测更低，可以普及使用，能更快、更好的协助医务人员对人Ⅱ型血小板减少症进行确诊。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。本发明未详细描述的技术、形状、构造部分均为公知技术。

Claims (6)

1.一组血清差异蛋白在制备用于检测人Ⅱ型血小板减少症试剂中的应用，其特征在于：所述血清差异蛋白为A0A024R1G8蛋白、A0A075B6I0蛋白、A0A0C4DGZ8蛋白、A0A0F7T8B3蛋白、A0A0R7FJH5蛋白、A0A0X9V9C4蛋白、A0A161I202蛋白、A0A1L2BU39蛋白、A0A1S5UZ24蛋白、A0A2U8J8J8蛋白、A0A2U8J9B8蛋白、A0A384NPR0蛋白、A2N0T6蛋白、A2N0U0蛋白、A2N0U4蛋白、A2NYV1蛋白、B2ZDQ1蛋白、B4DKJ0蛋白、B7Z2B4蛋白、D3JV41蛋白、K7EPN4蛋白、O75460蛋白、P00738蛋白、P00739蛋白、P04259蛋白、P35527蛋白、Q86YZ3蛋白与Q9HCC1蛋白中任意数量差异蛋白的组合。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述血清差异蛋白为B7Z2B4蛋白、O75460蛋白与P00738蛋白中任意数量差异蛋白的组合。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：通过采集血浆，利用数据非依赖性扫描模式蛋白组学方法确定血浆中是否存在血清差异蛋白组合。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：确定血清中存在血清差异蛋白后还包括：采用酶联免疫技术对血清差异蛋白进行逐个检测，确定检测到的血清差异蛋白的浓度变化。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：确定血清中存在血清差异蛋白后还包括：采用化学发光技术对血清差异蛋白进行逐个检测，确定检测到的血清差异蛋白的浓度变化。
6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：确定血清中存在血清差异蛋白后还包括：采用蛋白芯片技术对血清差异蛋白进行逐个检测，确定检测到的血清差异蛋白的浓度变化。
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师晓东;师丽晓;: "加强对血小板减少症的遗传学诊断", 中国医刊, no. 04, pages 9 - 12 *
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