CN112125969A

CN112125969A - 生物因子rimbp2在维持内耳毛细胞特性上的应用

Info

Publication number: CN112125969A
Application number: CN202011073720.2A
Authority: CN
Inventors: 柴人杰; 廖梦晖; 高下; 唐明亮; 付小龙
Original assignee: Southeast University
Current assignee: Southeast University
Priority date: 2020-09-30
Filing date: 2020-09-30
Publication date: 2020-12-25

Abstract

本发明属于生物学内耳研究领域，具体公开了生物因子RIMBP2在维持内耳毛细胞特性上的应用。所述生物因子为突触活性域蛋白结合蛋白RIMBP2，所述生物因子具有维持内耳毛细胞活性的作用，氨基酸序列如SEQ NO.1所示。本发明首次在内耳中发现Rimbp2在小鼠内耳中的时空表达模式；以及该基因在小鼠毛细胞中敲除之后会导致毛细胞凋亡进而影响正常的听觉功能。本发明所述Rimbp2为后续小鼠毛细胞功能的研究中奠定了重要基础。

Description

生物因子RIMBP2在维持内耳毛细胞特性上的应用

技术领域

本发明涉及内耳细胞保护技术领域，具体涉及生物因子RIMBP2在维持内耳毛细胞特性上的应用。

背景技术

耳聋是世界上发生率最高的感官缺陷性疾病。然而，因为耳聋的不致死性，社会上对耳聋治疗的发展关注不够，关于治疗耳聋的研发的投入一直以来相对不足。目前，对耳聋的治疗方法主要以器械辅助为主，无法达到正常人水平，并且对螺旋神经元也有一定损伤。对耳聋治疗缺乏多种有效的干预策略。除了环境造成的耳聋以外，现在的研究认为50％以上的感音神经性耳聋是由遗传因素引起的。

造成感音神经性聋的主要原因是：内耳毛细胞被损伤及死亡和毛细胞损伤或死亡之后的螺旋神经元神经突的退化以及死亡。耳蜗毛细胞作为感觉细胞，其主要功能是将声音的机械震动信号转化为生物电信号。内耳毛细胞的存活、纤毛运动、突触可塑性在声音信号传递和放大过程发挥了重要作用，这些细胞结构须有细胞骨架组成蛋白作为结构基础，同时受到其调节蛋白的调控。

RIMBP2属于突触活性域蛋白结合蛋白家族，是一种大型的多域蛋白质，构成一类新型的蛋白质。RIMBP家族有三个非常保守的结构域，分别是一个N末端和两个C末端SH3结构域，以及2个或3个FN3结构域。研究表明其SH3结构域可以与富含脯氨酸序列的Ca²⁺通道以及Rab3-Interacting Molecule(RIMs)相互作用，对高保真耦合的动作电位诱导的Ca²⁺流入，从而对诱导突触囊泡的胞外分泌很重要。目前国内外关于Rimbp2在小鼠内耳中的作用的研究很少。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种生物因子RIMBP2在维持内耳毛细胞特性上的应用，该生物因子为突触活性域蛋白结合蛋白2(RIMBP2)，对维持听力起重要作用，为人类因遗传导致的感音神经性耳聋恢复做出贡献。

生物因子RIMBP2，所述生物因子RIMBP2为突触活性域蛋白结合蛋白2，氨基酸序列如SEQ NO.1所示，所述生物因子具有维持内耳毛细胞的特性的作用。

SEQ NO.1：

一种核酸分子，编码上述突触活性域蛋白结合蛋白2(RIMBP2)的核苷酸序列如SEQNO.2所示。

SEQ NO.2：

一种重组质粒，所述重组质粒整合了上述编码突触活性域蛋白结合蛋白2(RIMBP2)的核苷酸序列。

一种重组载体，转化上述重组质粒。

上述生物因子RIMBP2在制备治疗RIMBP2缺陷产品上的应用。

一种基因靶向药物，活性成分包括所述编码突触活性域蛋白结合蛋白2(RIMBP2)的核苷酸序列、重组质粒，或重组载体中任一种。

有益效果：

与现有技术相比，本发明生物因子RIMBP2在维持内耳毛细胞特性上的应用，具有如下优势：

1、本发明通过将转基因小鼠特异性地敲除Rimbp2基因，在敲除后的小鼠模型中研究内耳毛细胞及其调控机制，这是常规的药物调控所做不到的，且调控效果良好，指向性非常明确；

2、在现有研究基础上进一步深入探索Rimbp2对内耳毛细胞的调控机制，既有学术理论上的创新和深度，也为进一步治疗遗传性感音神经性耳聋提供科学理论依据，通过基因靶向治疗，替代人工耳蜗，保护毛细胞损伤，治疗遗传性感音神经性耳聋，便具有有力的证据；

3、本发明通过机制研究，再借助活体动物实验，所得结果具有良好的临床应用价值，将为在临床治疗上遗传性感音神经性耳聋从而恢复听觉功能奠定实验基础。

附图说明

图1为Rimbp2敲除小鼠的构建的PB元件示意图；

图2为Rimbp2在P0(小鼠出生当天)小鼠内耳中的表达图，其中(A)为内耳毛细胞核层和支持细胞层的Rimbp2免疫荧光定位图，用MYOSIN7A标记毛细胞，用RIMBP2标记目的蛋白，用SOX2标记支持细胞；(B)为冰冻切片免疫组化结果，用MYOSIN7A标记毛细胞，用RIMBP2标记目的蛋白，用DAPI标记细胞核；scale bar＝10μm；(C)为蛋白表达水平，图中GAPDH为蛋白内参，大小为36kDa，RIMBP2为目的蛋白，大小为116kDa；(D)为RIMBP2在小鼠E16、P3、P14、P30这4个时间点的mRNA表达水平；

图3为P14、P21和P30三个时期小鼠内耳毛细胞细胞胞质层RIMBP2的免疫荧光定位图，用MYOSIN7A标记毛细胞，用RIMBP2标记目的蛋白，用DAPI标记细胞核，scale bar＝10μm；

图4为Rimbp2敲除小鼠的听觉脑干反应图，(A)为P21时期检测Rimbp2敲除小鼠的听力变化，频率选4KHz,8KHz,12KHz,16KHz,24KHz,32KHz，(B)为P30时期检测Rimbp2敲除小鼠的听力变化，频率选4KHz,8KHz,12KHz,16KHz,24KHz,32KHz，(C)为P60时期检测Rimbp2敲除小鼠的听力变化，频率选4KHz,8KHz,12KHz,16KHz,24KHz,32KHz；(D)为P21天小鼠的听觉脑干反应波形图；

图5为Rimbp2敲除小鼠内耳毛细胞的形态和数量变化图，(A)为P21时期的小鼠内耳毛细胞免疫荧光染色图，用MYOSIN7A标记毛细胞，用DAPI标记细胞核；scale bar＝10μm，(B)为P30时期的小鼠内耳毛细胞免疫荧光染色图，用MYOSIN7A标记毛细胞，用DAPI标记细胞核；scale bar＝10μm，(C)为P60时期的小鼠内耳毛细胞免疫荧光染色图，用MYOSIN7A标记毛细胞，用DAPI标记细胞核；scale bar＝10μm；(D)为P21时期的小鼠内耳外毛细胞数量统计，(F)为P30时期的小鼠内耳外毛细胞数量统计，(H)为P60时期的小鼠内耳外毛细胞数量统计；(E)为P21、时期的小鼠内耳内毛细胞数量统计图，(G)为P30时期的小鼠内耳内毛细胞数量统计，(I)为P60时期的小鼠内耳内毛细胞数量统计；

图6为Rimbp2敲除小鼠内耳毛细胞的纤毛形态和极性变化图，(A)为P21时期的小鼠内耳毛细胞纤毛免疫荧光染色图，scale bar＝10μm，(B为P30时期的小鼠内耳毛细胞纤毛免疫荧光染色图，scale bar＝10μm),(C)为P60时期的小鼠内耳毛细胞纤毛免疫荧光染色图，scale bar＝10μm；

图7为Rimbp2敲除小鼠内耳毛细胞发生凋亡，(A)为Tunel染色结果，用MYOSIN7A标记毛细胞，用DAPI标记细胞核，用Tunel标记正在凋亡的细胞；(B)为Tunel和MYOSIN7A双阳性细胞的统计结果；(C)为在WT小鼠和Rimbp2敲除小鼠中Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平，图中GAPDH为蛋白内参，大小为36kDa，Cleaved Caspase-3为目的蛋白，大小为19kDa；(D)为Cleaved Caspase-3蛋白表达的灰度统计结果；(E)为凋亡相关因子的mRNA表达水平结果。

图8为Rimbp2敲除小鼠的突触变化图，(A)为Rimbp2敲除小鼠和WT小鼠的突触免疫荧光染色图，用CTBP2标记robbon,用GluR2标记AMPA receptor，(B)为Ctbp2⁺的puncta的统计结果，(C)为GluR2⁺的puncta的统计结果，(D)为Ctbp2⁺/GluR2⁺的puncta的统计结果。

具体实施方式

为了更好的研究Rimbp2的作用机制，本发明采用以下步骤进行验证。

实施例1 RIMBP2蛋白在野生型小鼠耳蜗中的时空表达

1.1取P0，P14，P21，P30等不同年龄段的FVB品系的野生型的小鼠颞骨，对小鼠基底膜做精细解剖，通过免疫荧光的方法，使用毛细胞标记物MYOSIN7A(DSHB)、支持细胞标记物SOX2(santa,sc-17320)与RIMBP2抗体(Proteintech，15716–1-AP)进行免疫荧光染色，研究Rimbp2在P0，P14，P21，P30等不同年龄段的小鼠内耳中的时空表达。

免疫荧光染色：分别在预冷的HBSS(GIBCO)中解剖出P0，P14，P21，P30等时间点野生型小鼠基底膜；用cell tak(CORNING)在10mm的盖玻片上涂成直径5mm的圆，晾干(现涂)；将涂好的盖玻片放入有耳蜗的培养皿中，再将耳蜗正面朝上地粘附在玻片上；将粘附好的耳蜗放入装有PBS(GIBCO)的4孔培养皿中，待所有的耳蜗都粘附好后，将PBS换成4％的PFA，室温固定1h；用0.1％的PBST漂洗3次,每次5min；用Blocking medium室温封闭1h后，用PBT-1按1：400稀释毛细胞标记物myosin7a、支持细胞标记物sox2和Rimbp2抗体，加入在四孔皿里的耳蜗中进行共染色，置于4℃条件下孵育过夜；用0.1％的PBST漂洗3次,每次5min；然后将对应的二抗用PBT-2按1：400稀释(另外DAPI按1：1000稀释)，室温孵育1h；用0.1％的PBST漂洗3次,每次5min；在每个玻片上加6μL DAKO(DAKO，S3023)(成年鼠耳蜗加8μL)，盖上盖玻片，用指甲油封片；用共聚焦显微镜进行图片的采集；

1.2提取P0，P14，P21，P30等不同年龄段的FVB品系的野生型小鼠的耳蜗基底膜组织的蛋白和RNA，分别用免疫印迹(Western Blot)和qPCR的实验证明Rimbp2在正常小鼠的耳蜗中的表达。

1.2.1 Western Blot实验：

a)蛋白提取：取10只P0野生型小鼠的颞骨，在预冷的HBSS中解剖组织取基底膜，放入装有PBS的1.5mL离心管中。瞬离后弃PSB，加入150μL RIPA裂解液(弗德生物，FD008)(含蛋白酶抑制剂Cocktail)，然后研磨直至匀浆状态(每研磨30S暂停20S-30S)，在冰上放置10min后进行4℃离心(12000g，10min)；取上清(约100μL)至新的1.5mL离心管中，加入25μL5×loading buffer(索莱宝,P0015L)；沸水浴15min后用于Western Blot或-20℃冻存。

b)Western Blot:i)根据蛋白质的大小配制相应浓度的PAGE胶，先将下层的分离胶加入玻璃板中，用异丙醇压胶，室温约20min凝固后，去异丙醇，配制上层的浓缩胶，插入1.5mm的10孔梳子，室温放置15min凝固；ii)用夹板将玻璃板夹好，放入电泳槽内，倒入1×Running Buffer至指示位置，拔掉梳子，将充分变性的蛋白质样品和蛋白ladder(thermos,26616)加入到孔槽中，先用80V恒压电泳约30min，直至样品完全进入下层胶内，再换成120V恒压电泳，根据待测蛋白的大小观察蛋白ladder来确定何时结束SDS-PAGE；iii)剪取合适大小的PVDF膜，在甲醇中激活1-5min；洗净玻璃皿，倒入适量冰冷的1×Transfer Buffer，取出分离好的PAGE胶，去除多余部位，摆好转印夹，使其黑色一面(负极)在底部，依次放上海绵、三层滤纸、PAGE胶、PVDF膜、三层滤纸、海绵，最后将白色一面(正极)合上扣紧，放到在冰中的装有预冷的1×Transfer Buffer的转印槽内转印(300mA恒流转印2hr)；iiii)用TBST配制5％的脱脂奶粉(伊利)封闭液，将转印结束的PVDF膜正面朝上置于封闭液中室温封闭1hr；去封闭液，再加入用TBST按比例稀释的一抗，4℃摇床孵育过夜；次日用TBST清洗膜上残留的一抗4次，每次10-15min；再用TBST按1:4000的比例稀释二抗，室温摇床孵育1hr；用TBST清洗膜上残留的二抗4次，每次10-15min。V)将适量化学发光液加至PVDF膜上，在凝胶成像系统中观察结果并拍照记录。

1.2.2 qPCR实验：

a)RNA提取：选取FVB品系的野生型小鼠，在HBSS中解剖取耳蜗基底膜组织,用PBS清洗后加入1ml Trizol(life，15596-018)进行充分研磨，冰上放置10min后4℃条件下12000rpm离心15min，得到的上清中加入0.2ml的氯仿，震荡混匀后室温放置5min，再次在4℃条件下12000rpm离心15min。离心后溶液均匀分层，再仔细取含有RNA的上层水相，加入异丙醇充分混匀后冰上静置10min，再在4℃条件12000rpm离心5min，弃上清，加入1ml 75％的乙醇(用DEPC水配置)进行洗涤，4℃条件7500rpm离心10min，弃上清后加入50μl的DEPC(生工，B501005)水进行溶解。

b)qPCR：将提取的总RNA样品和无RNA酶的灭菌水加入反转录引物mix(OligoldT)18)(thermo，K1622)构建混合体系，混匀后放置于70℃条件下5min进行RNA变性处理，反应完毕后立刻放在冰上10min终止反应。向反应混合液中再次加入6μl反转录缓冲液(thermo，K1622)和2μl的反转录酶(thermo，K1622)构建反转录体系，充分混匀后先进行42℃、1hr的逆转录反应，然后在95℃进行5min的反转录酶变性反应。使用逆转录PCR酶(thermo，K1622)混合试剂进行逆转录PCR反应(Reverse Transcription PCR,RT-PCR)，得到cDNA，测定cDNA的浓度。使用实时定量PCR缓冲试剂SYBR Green(ROCHE，17747200)进行实时定量PCR反应(RT-PCR)，将反转录得到的cDNA根据测定的浓度进行稀释，使各个组之间的浓度一样，构建反应体系:加入2μl稀释后的cDNA，10μl的SYBR，PCR上下游引物各0.6μl和6.8μl的灭菌水，充分混匀后使用Bio-Rad IQ5Real-Time PCR仪进行反应并得到相应的Ct值数据。

1.3取P0，P7，P14，P21，P30等不同年龄段的FVB品系的野生型小鼠颞骨，通过冰冻切片的方法进一步研究Rimbp2在P0，P7，P14，P21，P30等不同年龄段的小鼠内耳中的时空表达。

冰冻切片：取P0，P7，P14，P21，P30等不同年龄段的FVB品系的野生型小鼠颞骨依次放入15％、20％、30％浓度的蔗糖溶液中进行真空脱水处理，然后置于4℃冰箱过夜；次日再放入30％的蔗糖溶液和O.C.T(樱花)混合液(含三个梯度，分别是50:50、30:70、15:85)中进行真空脱水处理，再用100％的O.C.T进行包埋，摆正位置后抽真空，将其中的气泡去除，置于4℃冰箱过夜；次日再次摆正位置后抽真空，然后放入-20℃的冰箱，冻起来后放到超低温冰箱冷冻。将包埋好的组织制成10μm的切片，然后进行免疫荧光染色，再用激光共聚焦显微镜进行观察。

结果表明：Rimbp2在内耳毛细胞胞质中表达，说明Rimbp2在内耳毛细胞中起重要作用。

1.4细胞凋亡相关因子的表达变化

分别提取P0，P7，P14，P21，P30等不同年龄段的Rimbp2敲除小鼠和FVB品系的野生型小鼠的耳蜗蛋白和RNA,通过Western Blot(参照1.2.1)和q-PCR(参照1.2.2)技术检测在Rimbp2敲除小鼠的耳蜗中，细胞凋亡信号通路中的主要信号分子如Caspase、Bcl2、Bak、Bax等的表达变化情况。

Tunel染色：分别在预冷的HBSS中解剖出P18的野生型小鼠和Rimbp2敲除小鼠基底膜；用cell tak在10mm的盖玻片上涂成直径5mm的圆，晾干(现涂)；将涂好的盖玻片放入有耳蜗的培养皿中，再将耳蜗正面朝上地粘附在玻片上；将粘附好的耳蜗放入装有PBS的4孔培养皿中，待所有的耳蜗都粘附好后，将PBS换成4％的PFA，室温固定1h；用0.1％的PBST漂洗3次,每次5min；配制体系：34μlddH₂O、5μl FITC mix、10μl 5x Equilibation buffer、1μl TdT Enzyme(诺唯赞，A111-03)，每个孔加80-100μl混合体系，置于37度孵育1小时；用PBS洗2次，每次5分钟。用Blocking medium室温封闭1h后，用PBT-1按1：400稀释毛细胞标记物myosin7a，加入在四孔皿里的耳蜗中进行共染色，置于4℃条件下孵育过夜；用0.1％的PBST漂洗3次,每次5min；然后将对应的二抗用PBT-2按1：400稀释(另外DAPI按1：1000稀释)，室温孵育1h；用0.1％的PBST漂洗3次,每次5min；在每个玻片上加8μL DAKO(DAKO，S3023)，盖上盖玻片，用指甲油封片；用共聚焦显微镜进行图片的采集；

所用引物序列见下表：

GAPDH Forward sequence	GCAAGAGAGAGGCCCTCAG
		GAPDH Reverse sequence	TGTGAGGGAGATGCTCAGTG
Bcl-2 Forward sequence	GGTGAACTGGGGGAGGATTG
		Bcl-2 Reverse sequence	AGAGCGATGTTGTCCACCAG
Caspase-8 Forward sequence	AGCCTATGCCACCTAGTGAT
		Caspase-8 Reverse sequence	GGAGAGCTGTAACCTGTCGC
Fadd Forward sequence	ACAATGTGGGGAGAGACTGG
		Fadd Reverse sequence	CCCTTACCCGATCACTCAGG
Apaf1 Forward sequence	AGGGTGTGAGAGGAGTGTGT
		Apaf1 Reverse sequence	ATCACCTCGATGGACTTGCC
Caspase-2 Forward sequence	CTGACAGGAGGAGCAGGATTTT
		Caspase-2 Reverse sequence	CACCGAGAAGGGGAGACTTG
Caspase-3 Forward sequence	AATCATGCCATTTGCCCAGC
		Caspase-3 Reverse sequence	CTCAAGTGTGTAGGGGGAGG
Rimbp2 Forward sequence	TGAGCAGTTTAACTTGTTGTCCC
		Rimbp2 Reverse sequence	GGAGGTGGCTAGTCCATTCAT

结果表明：Rimbp2敲除后小鼠毛细胞发生了凋亡。

1.5突触传递过程中相关分子的变化

分别提取P0，P7，P14，P21，P30等不同年龄段的Rimbp2敲除小鼠和FVB品系的野生型小鼠的耳蜗蛋白和RNA,通过Western Blot和q-PCR技术检测在Rimbp2敲除小鼠的耳蜗中，突触传递中主要信号分子如RIM、Rab3、Munc13、Bassoon等的表达变化情况。

1.6在内耳中探究已报道的与RIMBP2相互作用的蛋白

分别提取P0，P7，P14，P21，P30等不同年龄段的Rimbp2敲除小鼠和FVB品系的野生型小鼠的耳蜗蛋白和RNA,通过Western Blot、q-PCR和Co-IP等技术检测在Rimbp2敲除小鼠的耳蜗中，与RIMBP2相互作用的蛋白(如MYOSIN7A、BASSOON、Ca²⁺通道等)的变化。

实施例2.Rimbp2敲除小鼠耳蜗的形态学分析

2.1取P21，P30,P60等不同年龄段的Rimbp2敲除小鼠和FVB品系的野生型的小鼠颞骨，对小鼠基底膜做精细解剖，通过用毛细胞标记物MYOSIN7A、phalloidine和支持细胞标记物SOX2进行免疫荧光染色(具体操作可参照实施例1中的1.1中的方法)，检测在这些不同年龄段的Rimbp2敲除小鼠内耳中毛细胞、支持细胞的数量改变以及纤毛形态和极性变化；

结果表明：Rimbp2敲除后毛细胞有部分缺失，纤毛形态和极性没有变化。

2.2取P14，P21，P30等不同年龄段的Rimbp2敲除小鼠和FVB品系的野生型的小鼠颞骨，通过用突触前标记物CTBP2和突触后标记物GluR2进行免疫荧光染色(具体操作可参照实施例1中的1.1中的方法)，检测这些不同年龄段的Rimbp2敲除小鼠内耳毛细胞突触数目的变化。

结果表明：Rimbp2敲除后CTBP2和GluR2数目没有变化。

实施例3.Rimbp2敲除小鼠耳蜗功能的分析

用同窝的野生型小鼠作对照，分析小鼠Auditory Brainstem Response(ABR)、Distortion Product Otoacoustic Emissions(DPOAE)的变化，以此来尽可能全面地评估Rimbp2敲除小鼠的整体的听力状况及耳蜗毛细胞功能。

3.1听性脑干反应(Auditory Brainstem Response,ABR)阈值分析

通过ABR检测听觉反应阈值、潜伏期和波间期等参数，分别用短声(Click)，尤其是不同音频的短音(4KHz、8KHz、12KHz、16KHz、24KHz、32KHz)作为刺激声，检测Rimbp2基因缺陷小鼠对不同音频的听力阈值，分析小鼠的听力敏感性，从而从整体上判断Rimbp2基因缺陷小鼠从毛细胞到大脑皮层有无正常的听觉功能。

将小鼠使用浓度为10mg/ml的戊巴比妥钠(bioshapr)按小鼠体重比(1mg/g)腹腔注射进行麻醉处理，然后使用Smart EP诱发电位系统对放置在双壁声室系统中的已麻醉的小鼠进行相应的测试与记录。实验中所使用的电极为皮下针，将使用的检测电极植入小鼠脑部顶端位置，参比电极和接地电极分别植入左耳外侧和右耳外侧。实验过程中实验动物的体温需要保持恒定。使用带通滤波处理的100Hz以下和3000Hz以上的信号作为生物信号，并将信号放大200000倍。数据采集时将抗干扰水平设置为31.00μV，采集的结果由计算机进行平均化处理后直接显示。计算机的运算时间基本稳定在10ms左右。通过每次5dB增量增加声压级(SPL)来进行阈值的确定。检测听觉反应阈值、潜伏期和波间期等参数，分析小鼠的听觉敏感性。

结果表明：在各个频率下Rimbp2敲除后ABR阈值都明显升高，表明Rimbp2基因缺陷小鼠的听觉功能损失严重。

3.2外毛细胞功能分析(Distortion Product Otoacoustic Emissions,DPOAE)

通过畸变产物耳声发射测定小鼠DPOAEs的幅度及阈值，利用两个不同频率且相互间具有一定频比关系的长时程纯音(2f1-f2)进行诱发，进一步分析Rimbp2基因缺陷小鼠耳蜗外毛细胞有无正常的功能。将小鼠使用浓度为10mg/ml的戊巴比妥钠进行麻醉处理，然后使用IL092耳声发射仪对放置在双壁声室系统中的已麻醉的小鼠进行测试与记录。实验过程中实验动物的体温需要保持恒定。实验过程中需要保证小鼠外耳道与探头(仪器配备)的密闭性良好。探头经导线链接接入IL092，相关参数设置为f2/f1＝1.207，L1＝L2，将阈值设置为以DPOAE强度刚刚大于本地噪声3dB。在检测DPOAE输入曲线和输出曲线时，需要将原始音强度从80dB SPL以每次1.5dB衰减至阈值以下。将f2记录为5、6、7和8kHz的DPOAE阈值；将L1＝L2记录为70dB SPL和60dB SPL时所引出的2f1-f2DPOAE的强度。分析DPOAE潜伏期时，原始音L1＝L2为70dB，将f2记录为5、6和7kHz的DPOAE潜伏期。同时将所得的数据使用相应的软件直接进行处理,初步分析小鼠耳蜗外毛细胞的功能。

通过上述研究表明，生物因子Rimbp2具有良好的维持内耳毛细胞特性上的应用，通过基因靶向治疗，替代人工耳蜗，保护毛细胞损伤，治疗遗传性感音神经性耳聋。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。

序列表

<110> 东南大学

<120> 生物因子RIMBP2在维持内耳毛细胞特性上的应用

<160> 18

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1069

<212> PRT

<213> 氨基酸(Abies alba)

<400> 1

Met Arg Glu Ala Ala Glu Arg Arg Gln Gln Leu Glu Leu Glu His Glu

1 5 10 15

Gln Ala Leu Ala Phe Leu Asn Ala Lys Gln Gln Glu Ile Gln Leu Leu

20 25 30

Gln Gln Ala Gln Val Glu Ala Lys Lys Glu His Glu Gly Ala Val Gln

35 40 45

Leu Leu Glu Ser Lys Val Arg Glu Leu Glu Glu Lys Cys Arg Val Gln

50 55 60

Ser Glu Gln Phe Asn Leu Leu Ser Arg Asp Leu Glu Lys Phe Arg Gln

65 70 75 80

His Thr Gly Ser Ile Asp Leu Leu Gly Ser Ser Ser Val Ala Leu Leu

85 90 95

Asp Val Pro Leu Ala Pro Gly Lys Pro Phe Pro Gln Tyr Met Asn Gly

100 105 110

Leu Ala Thr Ser Ile His Lys Gly His Glu Gly Pro Thr Gly His Tyr

115 120 125

Ser Val Ile Gly Asp Tyr Ile Pro Leu Ser Gly Asp Lys Leu Glu Ser

130 135 140

Pro Cys Val Lys Pro Ser Phe Leu Leu Arg Ser Ser Ser Pro Arg Cys

145 150 155 160

Arg Phe Glu Ser Glu Met Asp Asn Asp Arg Asn Ser Asn Asn Ser Lys

165 170 175

Gln Ser Ser Ser Gly Lys Val His Leu Cys Val Ala Arg Tyr Ser Tyr

180 185 190

Asn Pro Phe Asp Gly Pro Asn Glu Asn Pro Glu Ala Glu Leu Pro Leu

195 200 205

Thr Ala Gly Lys Tyr Leu Tyr Val Tyr Gly Asp Met Asp Glu Asp Gly

210 215 220

Phe Tyr Glu Gly Glu Leu Leu Asp Gly Gln Arg Gly Leu Val Pro Ser

225 230 235 240

Asn Phe Val Asp Phe Ile Gln Asp Asn Glu Ser Arg Leu Ala Gly Thr

245 250 255

Leu Gly Ser Glu Gln Asp Gln Asn Phe Leu Asn His Ser Gly Ile Ser

260 265 270

Leu Glu Arg Asp Ser Ile Leu His Leu His Ser Pro Thr Gln Val Asp

275 280 285

Ser Gly Ile Thr Asp Asn Gly Gly Gly Thr Leu Asp Val Asn Ile Asp

290 295 300

Asp Ile Gly Glu Asp Thr Val Pro Tyr Pro Arg Lys Ile Thr Leu Ile

305 310 315 320

Lys Gln Leu Ala Lys Ser Val Ile Val Gly Trp Glu Pro Pro Ala Val

325 330 335

Pro Pro Gly Trp Gly Thr Val Ser Ser Tyr Asn Val Leu Val Asp Lys

340 345 350

Glu Thr Arg Met Ser Leu Ala Leu Gly Arg Arg Thr Lys Ala Leu Ile

355 360 365

Glu Lys Leu Asn Thr Ala Ala Cys Thr Tyr Arg Ile Ser Val Gln Cys

370 375 380

Val Thr Ser Arg Gly Asn Ser Asp Glu Leu Gln Cys Thr Leu Leu Val

385 390 395 400

Gly Lys Asp Val Val Val Ala Pro Ser Gln Leu Arg Val Asp Asn Ile

405 410 415

Thr Gln Ile Ser Ala Gln Leu Ser Trp Leu Pro Thr Asn Ser Asn Tyr

420 425 430

Ser His Ile Ile Phe Leu Asn Glu Glu Glu Leu Asp Ile Val Lys Ala

435 440 445

Ala Arg Tyr Lys Tyr Gln Phe Phe Asn Leu Arg Pro Asn Met Ala Tyr

450 455 460

Lys Val Lys Val Leu Ala Gln Pro His Gln Met Pro Trp Gln Leu Pro

465 470 475 480

Leu Glu Gln Arg Glu Lys Lys Glu Ala Cys Val Glu Phe Ser Thr Leu

485 490 495

Pro Ala Gly Pro Pro Ala Pro Pro Gln Asp Val Thr Val His Ala Gly

500 505 510

Ala Thr Ala Ala Ser Val Gln Val Ser Trp Lys Pro Pro Ala Leu Thr

515 520 525

Pro Thr Gly Leu Ser Asn Gly Ala Asn Val Thr Gly Tyr Gly Val Tyr

530 535 540

Ala Lys Gly Gln Arg Val Ala Glu Val Ile Ala Pro Thr Ala Asp Gly

545 550 555 560

Thr Ala Val Glu Leu Ile Arg Leu Arg Ser Leu Glu Ala Lys Ala Val

565 570 575

Ser Val Arg Thr Leu Ser Val Gln Gly Glu Ser Met Asp Ser Ala Leu

580 585 590

Ala Ala Ile Pro Pro Asp Leu Leu Val Pro Pro Ala Pro His Pro Arg

595 600 605

Thr Ala Pro Pro Pro Lys Pro Leu Ala Ser Asp Met Asp Thr Lys Asp

610 615 620

Gln His Leu Gly Pro His Val Lys Val Asp Glu Ser Trp Glu Gln Ser

625 630 635 640

Arg Ser Pro Gly Pro Ala His Gly His Met Leu Glu Pro Pro Asp Met

645 650 655

His Ser Ala Gly Pro Gly Arg Arg Ser Pro Ser Pro Ser Arg Ile Leu

660 665 670

Pro Gln Pro Gln Gly Ala Pro Val Ser Thr Thr Val Ala Lys Ala Met

675 680 685

Ala Arg Glu Ala Ala Gln Arg Val Ala Glu Ser Asn Arg Leu Glu Lys

690 695 700

Arg Ser Leu Phe Leu Glu Gln Ser Ser Ala Gly Gln Tyr Thr Asn Ser

705 710 715 720

Asp Glu Glu Asp Gly Tyr Ala Ser Pro Glu Val Lys Arg Arg Gly Thr

725 730 735

Ser Val Asp Asp Phe Leu Lys Gly Ser Glu Leu Gly Lys Gln Pro His

740 745 750

Cys Cys His Gly Asp Glu Tyr His Thr Glu Ser Ser Arg Gly Ser Asp

755 760 765

Leu Ser Asp Ile Met Glu Glu Asp Glu Glu Glu Leu Tyr Ser Glu Met

770 775 780

Gln Leu Glu Asp Gly Gly Arg Arg Arg Pro Ser Gly Thr Ser His Asn

785 790 795 800

Ala Leu Lys Ile Leu Gly Asn Ser Thr Leu Met Gly Arg Ala Asp Arg

805 810 815

Met Glu His Val Ser Arg Arg Tyr Ser His Ser Gly Gly Gly Ser His

820 825 830

Arg His Arg Pro Ala Met Ala Pro Ser Ile Asp Glu Tyr Thr Gly Arg

835 840 845

Asp His Leu Ser Pro Asp Phe Tyr Asp Glu Ser Glu Thr Asp Pro Gly

850 855 860

Ala Glu Glu Leu Pro Ala Arg Ile Phe Val Ala Leu Phe Asp Tyr Asp

865 870 875 880

Pro Leu Thr Met Ser Pro Asn Pro Asp Ala Ala Glu Glu Glu Leu Pro

885 890 895

Phe Lys Glu Gly Gln Ile Ile Lys Val Tyr Gly Asp Lys Asp Ala Asp

900 905 910

Gly Phe Tyr Arg Gly Glu Thr Cys Ala Arg Leu Gly Leu Ile Pro Cys

915 920 925

Asn Met Val Ser Glu Ile His Ala Asp Asp Glu Glu Met Met Asp Gln

930 935 940

Leu Leu Arg Gln Gly Phe Leu Pro Leu Asn Thr Pro Val Glu Lys Ile

945 950 955 960

Glu Arg Ser Arg Arg Ser Gly Arg Gly His Ser Val Pro Thr Arg Arg

965 970 975

Met Val Ala Leu Tyr Asp Tyr Asp Pro Arg Glu Ser Ser Pro Asn Val

980 985 990

Asp Val Glu Ala Glu Leu Pro Phe Cys Thr Gly Asp Ile Ile Thr Val

995 1000 1005

Phe Gly Glu Ile Asp Glu Asp Gly Phe Tyr Tyr Gly Glu Leu Asn Gly

1010 1015 1020

Gln Lys Gly Leu Val Pro Ser Asn Phe Leu Glu Glu Val Pro Asp Asp

1025 1030 1035 1040

Val Glu Val His Leu Ser Asp Ala Pro Pro His Tyr Ser His Asp Pro

1045 1050 1055

Pro Met Arg Ser Lys Ala Lys Arg Val Ser Gln Pro Pro

1060 1065

<210> 2

<211> 7020

<212> DNA

<213> 基因序列(Gene Sequence)

<400> 2

attcctgccc tgcttttgac caccgcttcg tgagagacac cggcagggaa gggacagagc 60

catcttggga tgcgtgtgtg catgcgcgtt tgtgtgcgca cgtgtgtgtg tgtgtgtgtg 120

tgtgggtgtg tgtgtgtgtg tgtgttaaaa cactgccgtt tccaagcttt ggctactgct 180

ctctggctgg tgactcttgc tcatgcctct ctctctctct ctctctctct ctctctctct 240

ctctctctct ctctttctct ccctccctgc aaaaattaaa tggataattt ctagctgata 300

ccaagcggtg cccacacacc cgtgtccttc agtgttgatt ggatctctct ctctctctct 360

ctctctctct ctctctctct ctctctctct ctctcctctc cactctcctc ccctccctct 420

ggccccagtt tgtaatctga cacagtgcac tgcagtggct gtctctgtct ctctcttgga 480

gccttggagc ccgggaggct gggcaccgag aacatccaag gatgatgaac taaaggccgc 540

tgtgcagaga gagcatcacc tgaagcccct ggaaaggcct tcccttgagg gcccggcagc 600

atgaccaggt gaaggctgaa catgcctggc tctccgtggt gacctgagag gagagttcga 660

ttcactgtgc gggagaaacg ccagctccaa gccaaactgg agaacttgga acaggtcctg 720

aagcatatgc gagaggctgc tgagcggcgg caacagctgg agttggagca tgagcaagcc 780

ctggccttcc tcaatgccaa gcagcaggag atccagctac tgcagcaggc tcaggttgaa 840

gctaagaaag agcatgaagg tgctgtgcag ctgttagaga acaccctgga ctgcatgcag 900

tccaaggtcc gagagctgga agagaaatgc cgtgtgcaga gtgagcagtt taacttgttg 960

tcccgggacc tggaaaagtt ccggcaacac actgggagta ttgacctgct gggcagcagc 1020

tcagtggccc tgctggatgt tcccttggcc cctggcaagc ctttccctca gtacatgaat 1080

ggactagcca cctccatcca caaaggtcac gagggcccca ctggacacta ctctgtgatt 1140

ggtgactata ttccgctgtc tggggacaag ctggagtctc cgtgtgtgaa gccctccttc 1200

ctcttgcgat ccagcagccc aagatgcaga tttgagtccg agatggacaa tgaccggaac 1260

tctaacaact ccaagcaaag cagctcgggg aaggtgcacc tgtgtgtggc ccgctacagt 1320

tacaacccct tcgatgggcc caatgagaac ccagaagctg agctgcctct cacggcggga 1380

aagtacctct atgtctatgg ggacatggat gaagatgggt tctatgaagg agagcttctg 1440

gatgggcaaa ggggcttggt gccctccaac tttgtggatt ttatccagga caatgagtcg 1500

cggctggctg gtactctggg gagtgagcag gaccagaact ttctcaacca ctctggcatc 1560

agtctggagc gcgacagcat ccttcacctt cactccccaa ctcaagtgga ctcggggatc 1620

accgacaatg gtggggggac cctggacgtg aacatcgacg acatcggaga agacaccgtg 1680

ccttacccta ggaaaatcac ccttatcaaa cagcttgcca aaagtgtcat cgtgggctgg 1740

gagccccctg ctgtgcctcc cggctggggc accgtgagca gttataatgt gctggtggac 1800

aaagagacac gcatgagcct tgccctgggt aggagaacta aggcgctgat cgagaaactt 1860

aacacagctg cctgcaccta ccgcatctcc gtgcagtgcg tcacgagccg gggaaactca 1920

gacgagctgc agtgcactct gctggtgggc aaggatgtgg tggtggcacc gtcccagctg 1980

cgtgtggaca acatcacaca gatctctgcc cagctctcgt ggctgccgac caacagtaac 2040

tacagccata tcatcttcct caacgaagaa gaactggaca tcgtgaaggc agccaggtac 2100

aagtaccaat tcttcaacct caggcctaat atggcctaca aggtgaaggt cttggcccag 2160

ccacaccaga tgccctggca gctgccgctg gagcagagag aaaagaagga ggcctgtgtg 2220

gagttctcca cgctgcctgc aggacctcca gccccaccac aagatgtcac tgtccacgct 2280

ggggccacag ccgcctctgt tcaggtctcc tggaagcccc ctgcactgac tcccactggg 2340

ttgtccaatg gagcaaatgt cacaggatac ggcgtgtacg ccaaagggca gagggtggct 2400

gaggtcatcg cccccacggc agatggcacg gcagtggagc tgatccggct gcgaagccta 2460

gaggccaagg ccgtgagtgt gcgtaccctg tctgtacagg gagagtccat ggattctgcc 2520

ctcgctgcca tcccccctga cctcctggtg cctccagccc cccacccgag gactgctccc 2580

ccaccaaagc cattagcaag tgacatggat accaaagacc aacacctggg gccccacgtc 2640

aaagtggatg agtcctggga gcagagccgg tcaccgggcc ctgcacatgg ccacatgttg 2700

gaaccacctg acatgcacag cgctggccca ggcagaaggt caccctcgcc cagccggatc 2760

cttcctcagc cacaaggagc ccccgtgtct accactgtcg ccaaggccat ggcccgtgaa 2820

gctgcacaga gggtggctga gagcaacagg ttagagaaaa ggagcctctt tctagagcaa 2880

agcagtgcgg ggcaatatac caactcggac gaggaggacg gctacgcctc ccccgaggtc 2940

aagaggagag gcacctcagt ggatgacttc ctcaaagggt cagagctggg caagcagccc 3000

cactgttgcc atggagatga gtaccacaca gagagcagcc gggggtcaga cctgtcggac 3060

atcatggagg aggatgagga ggagctatac tcagagatgc agctggagga tgggggccgc 3120

cgtcggccca gcggtacctc tcacaacgcc ctcaagattt taggaaactc cacgttgatg 3180

ggacgagcag accggatgga acacgtgagc cgaaggtatt cacacagtgg cggagggtct 3240

cataggcacc gcccagcgat ggctccatcc attgatgaat acaccgggcg agaccatctt 3300

tctccagact tctatgatga gtccgaaact gaccctggtg ctgaggagct cccagcccgt 3360

atctttgtgg ctctgtttga ctatgaccca ctgaccatgt ccccaaaccc agacgctgct 3420

gaagaggagc ttcccttcaa agaaggacag atcatcaagg tatatggaga caaagacgca 3480

gatggcttct accgtgggga gacctgtgcc aggctcggcc tcattccctg taacatggtc 3540

tctgagatcc atgcggatga tgaggagatg atggatcagc tgctgaggca aggcttcctc 3600

cctctgaaca cgcctgtgga gaaaatagag agaagtagaa gaagcggccg gggtcactct 3660

gtacccacac gaagaatggt ggctctctac gactatgatc ctagggaaag ctctcctaac 3720

gtggatgttg aggctgaact tccattttgc acaggagaca ttattactgt ttttggtgaa 3780

atcgatgaag atggatttta ttatggagag ctgaatgggc aaaaaggcct cgtgccttcc 3840

aatttcctgg aagaagtgcc tgatgatgtg gaggtccacc tttctgatgc tccgccccac 3900

tactcccacg acccgcccat gcgctccaag gccaaaagga agaagagtgt tcatttcaca 3960

ccctaatcag gcatgtagcc gtcacgtaag tgagcaaccg aagacacctt agagagatac 4020

cgacttaagc taccctaagc ggacagcacg gtagtcttaa gacgtcaatg tgggcttaaa 4080

gaaagagaga gaaaagaaat atgtctcaaa acaaacaaac aaaaaaatca ttggacctaa 4140

agtattaggc tatctcacct ggtttcagtt gcctggcaac tagattcata gtgaaatgaa 4200

tcgtctcgaa caattttttt tttaaatgtg tccgttgaga atacgggaaa ggccaacctt 4260

gggaacatat ttcttaaagc tgtttgttta cacaagagtg cgccagcgtg tactcacaag 4320

gagagttgcc tattgcattg ttagctaccc tcagtcaaaa agcacaaccg gatccatgtg 4380

tttaccgtag cagggttgac tcatggtgag agccaagaca aaactttaat cccagatcaa 4440

gccccaaggg gtggccttgg ctctgggcat gccaaagctg gtggaatacc cagctgcagc 4500

cccttggcct taggagcagg tgttccctct cctcaaagca caattgtccc gagctcatgg 4560

aggtacgcat gtacctacga ggtgctggca tactaatgca atagtatctc cggatgcggc 4620

agctcccatg actgcgctag ctggccccat ggtatcttca ggtgtgcttt gggtgcgccc 4680

taggtgttct ccattagagt tagaccttga ttttcaatcc aagcaagctt gggggcccct 4740

tgccttgtat tgtgtgcccg ctgagtgccc tggtctcact cgccaagttt tgctctgggg 4800

agattactga accagaagcc tggcgatccc tggccacgcc caggcgtgtg cctagctgca 4860

gaatgaagtg aaattggcac acagtgttcc tgaatcaaat tccaccccct tggaagcacc 4920

gttggtcggc cacctaaagt ctctcaaagc ccaccgtctc tctgtgctgg ggaaagtgca 4980

cactcctcca ttgggaaatg gtgagagtct tcaagaaggg cctttgagct tccttagatt 5040

acaattaagg ttcatttccg tttttttttc tttcaaacag tgtgccatcc ccaaagtttc 5100

tgtaggactc taactgaccc aagggcttac tccaccatgg cagggcctta tcgaccccac 5160

ctagttcatg atccatccaa attcccactg agagcttttt tgatttacaa tgattgatgg 5220

gtatctcggc caccttgcct atccatctga ttgacaataa cccctcccct gcttttagtc 5280

tgaatttcca gagtaaatta tgacctggct ttctttgcca aagcgatggc caccccgtct 5340

cccaagacaa agacggcgaa agcccatgga gggccagccc ctctctctca gaggggcctt 5400

gggagagggt gtgtgcttct catggcatac tttaaaaatt gaaagaagaa acgaaccacc 5460

acccaaccta ccctttcccc tggctggcgg gagtccgggg cagtgttacc cagtgaattg 5520

ttgttggcgc tgacgcactc aataaaactg tcgcaatgta cctactaggt tcctcccgag 5580

ggttcaggga cagcaaggag agctccatcc cccacagccc atctccattc ggggtcacct 5640

acgtcatcta tgggttctgg tagtcctggg agaggcaggg aaatgtcctc gaaaaagaaa 5700

aaagggctgc tctccagagg caagaaattg ctgcaaaggc tggccgcagt gaagtgaccc 5760

ctgagcctcc ggacacttcc aaatccatgt cactggcttt aattccaaac gaggactccc 5820

aaaacccaac cttgaccccc accccccacc ccagcagtag agagctacac tcttacacta 5880

ccattcacat gataccactg gagagatcag ggaaggggct gcaccgtggt cccctccccc 5940

tccgctccca aggttctgtc caaggtctgg ggtggggagg tgggtggggg gcagctggct 6000

gagcagcaga aggggcaggg ggagggctct ctgcagccac ctcccctcca cctgcagttc 6060

cagcctgcac gcattagagt gtagccctga caggctttct gacctctccc cctctccccc 6120

cccccccacc tctcaagacg tttgcctcat tacacattat tgtcattttc acgcggctct 6180

tgagattcct agtttaactc gccttgatgt tctggcctta taactgcaca gtggtttgta 6240

ctgtcgaata aaaaacaccg tgtatacttc gcatgtgttg tgcattcctg gtcttcatcc 6300

tcacttgaca cagtggcttc acctcacagt ggcccaggcc ctacactttc agatgcctgt 6360

cttgggtctt tcaacgcaag ccagcaacac acaggacatg tttacttagc ccaccacacg 6420

agagacaggg gaaaggagcg ggagcaactg ggcagcatgc atgtcctcta gccagccagg 6480

gagctgacca atctttgcct ttagtgtcct atcctgtggc ttttagcttt ctgttccttt 6540

cattatttgt tgaaatgcct tgccccgaga caccatccac agcacacata gcaaagccac 6600

cacacgcttc attagccaga ccagaaggag cctaaattga aatctctcag acaccccaca 6660

cccatcttta tcattagcct cgaacagcaa acctccccag acgctggctg atgggatggc 6720

cacaactttg taattcctgt ccactgtaaa ctgtttttac ttctttatac atacttttca 6780

gactgccttt cttttgtaat ttctggaagg tttgtaaatg aatggcaaag ctttccctgt 6840

gcgtcttcag aaactatatt gtacattgta atataattgt atgtggtaga ttgattaaaa 6900

ggtcgttcct cggtgtgtga agtactgtgc gggtgtgtgc atgtgtacag ctagggtgac 6960

atattttcta gaaataaact ttgttatttt gtacaacatt aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 7020

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gcaagagaga ggccctcag 19

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

tgtgagggag atgctcagtg 20

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

ggtgaactgg gggaggattg 20

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

agagcgatgt tgtccaccag 20

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

agcctatgcc acctagtgat 20

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

ggagagctgt aacctgtcgc 20

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

acaatgtggg gagagactgg 20

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

cccttacccg atcactcagg 20

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

agggtgtgag aggagtgtgt 20

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

atcacctcga tggacttgcc 20

<210> 13

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

ctgacaggag gagcaggatt tt 22

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 14

caccgagaag gggagacttg 20

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 15

aatcatgcca tttgcccagc 20

<210> 16

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 16

ctcaagtgtg tagggggagg 20

<210> 17

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 17

tgagcagttt aacttgttgt ccc 23

<210> 18

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 18

ggaggtggct agtccattca t 21

Claims

1.生物因子RIMBP2，其特征在于，所述生物因子RIMBP2为突触活性域蛋白结合蛋白2，氨基酸序列如SEQ NO.1所示，所述生物因子具有维持内耳毛细胞的特性的作用。

2.一种核酸分子，其特征在于，编码权利要求1所述突触活性域蛋白结合蛋白2的核苷酸序列如SEQ NO.2所示。

3.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒整合了权利要求2所述的编码突触活性域蛋白结合蛋白2的核苷酸序列。

4.一种重组载体，其特征在于，转化权利要求3所述的重组质粒。

5.基于权利要求1所述的生物因子RIMBP2在制备治疗RIMBP2基因缺陷疾病的相关产品上的应用。

6.一种基因靶向药物，其特征在于，所述基因靶向药物的活性成分包括权利要求2所述的核酸分子、权利要求3所述的重组质粒，或权利要求4中所述重组载体中任一种。