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CN112118868B - 预防和治疗髓样来源的抑制细胞相关疾病的用途 - Google Patents

预防和治疗髓样来源的抑制细胞相关疾病的用途 Download PDF

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CN112118868B CN201980031966.2A CN201980031966A CN112118868B CN 112118868 B CN112118868 B CN 112118868B CN 201980031966 A CN201980031966 A CN 201980031966A CN 112118868 B CN112118868 B CN 112118868B
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Abstract

本发明涉及与在MDSC上表达的CD66c结合的抗CD66c抗体及其用途，并且涉及与MDSC结合的抗CD66c抗体，以及包含其的药物组合物和诊断组合物。本发明的抗CD66c抗体靶向诱导免疫抑制的MDSC，因此可用于治疗由其引起的多种疾病。

Description

预防和治疗髓样来源的抑制细胞相关疾病的用途
技术领域
本发明涉及免疫增强剂以及使用所述免疫增强剂预防、改善或治疗MDSC相关疾病的用途，所述免疫增强剂包含与髓样来源的抑制细胞(MDSC)中表达的CD66c特异性结合的抗体或其抗原结合片段。具体地，本发明提供了通过用单克隆抗体调节产生、死亡或活性来降低MDSC的免疫抑制活性，从而用于MDSC相关疾病的预防、改善或治疗的用途或诊断的用途。
背景技术
最近，在癌症治疗中已经对使用抗体或免疫细胞疫苗的免疫疗法积极地进行了研究。然而，癌细胞的免疫逃逸和抑制作用抑制了治疗效果。出于防止对癌细胞自身的免疫应答的目的，癌细胞降低了各种免疫细胞的活性，并且诱导具有免疫抑制功能的细胞，例如失活的树突细胞、调节性T细胞(Treg)和肿瘤相关巨噬细胞(TAM)。最近，作为免疫抑制细胞中的一种，髓样来源的抑制细胞的作用受到了广泛的关注。
MDSC被定义为具有免疫抑制功能的骨髓来源的未成熟骨髓细胞的集合。据报道，虽然在健康个体中MDSC的数量是有限的，但是它们在病理条件如慢性/急性感染和癌症下在外周血、淋巴器官、脾脏和癌组织中积累。
MDSC还可以通过抑制T细胞和NK细胞的免疫应答并诱导作为免疫抑制细胞的Treg细胞的产生来促进癌细胞的生长以及诱导癌细胞的远处转移。
迄今为止已知的MDSC的免疫抑制机制可以分为四种主要类型。第一种是缺乏淋巴细胞所需的营养。第二种是产生氧化应激，这种氧化应激通过制造活性氧或活性氮来抑制例如T细胞的增殖到功能的多个步骤。第三种是影响淋巴细胞的贩运和存活。具体地，诸如抑制T细胞向淋巴结的再循环过程、防止T细胞向肿瘤中心移动以及诱导T细胞死亡的机制是已知的。第四是，已知增殖抗原特异性自然Treg细胞以及促进幼稚CD4+T细胞转化为Treg的过程。
MDSC的最大特点之一是其形式、表型和功能的多样性。作为MDSC的标志物，谱系(Lineage)(-)、HLA-DR低/(-)、CD11b(+)和CD33(+)是已知的。由于这些标志物通常在几种不同类型的髓样细胞，例如树突细胞、巨噬细胞和粒状白细胞的前体细胞中表达，因此MDSC被定义为一群具有免疫抑制功能的髓样来源细胞。MDSC的这种多样性导致在研究MDSC的起源和特征方面进行了不同的分析，从而引起了对研究的很大的困惑。因此，已经进行了研究以阐明MDSC的亚群，目前发现MDSC由80％的粒细胞MDSC和20％的单核细胞MDSC组成。这两种细胞类型不仅在形状和表型上不同，而且在抑制免疫的机制上也不同。粒细胞MDSC通过在T细胞之间经活性氧接触来诱导抗原特异性免疫抑制。单核细胞MDSC主要通过使用精氨酸酶的高表达和各种免疫抑制细胞因子来表现出免疫抑制功能。
最近的研究报道了MDSC的积累与癌症患者中发生的免疫抑制环境有关，这在几乎所有癌症类型中都是常见的。许多研究表明，随着癌症阶段的发展，MDSC增加的程度越来越高。因此，使用MDSC的增加程度作为癌症患者的低存活率和治疗响应率的预后标志物的研究正在积极进行。显然，MDSC在癌症的病理生理中起着重要作用。
发明内容
技术问题
本发明的实施方式是包含与在髓样来源的抑制细胞(MDSC)中表达的CD66c特异性结合的抗体或其抗原结合片段、用于降低或消除MDSC的免疫抑制活性的免疫增强剂、免疫活化剂或组合物。
本发明的实施方式是包含与在MDSC中表达的CD66c特异性结合的抗体或其抗原结合片段的用于预防、改善或治疗MDSC相关疾病的药物组合物或用途。
本发明的实施方式是增强或活化受试者的免疫应答的方法，所述方法包括将与在MDSC中表达的CD66c特异性结合的抗体或其抗原结合片段施用至有需要的受试者。
本发明的另外的实施方式是抑制MDSC的活性的方法，所述方法包括使MDSC与特异性结合在MDSC中表达的CD66c的抗体或其抗原结合片段接触。
另外，本发明的实施方式是预防、改善或治疗MDSC相关疾病的方法，其包括将免疫增强剂或免疫活化剂施用至患有MDSC相关疾病的受试者中。
另外，本发明的实施方式是预防、改善或治疗MDSC相关疾病的方法，其包括将包含与在髓样来源的抑制细胞中表达的CD66c特异性结合的抗体或其抗原结合片段的免疫增强剂或免疫活化剂施用至患有MDSC相关疾病的受试者中。
根据本发明的与在髓样来源的抑制细胞中表达的CD66c特异性结合的抗体或其抗原结合片段消除或降低MDSC的免疫抑制活性，减少MDSC的数量，调节MDSC的活性、产生或细胞死亡，或者诱导细胞死亡。
技术方案
本发明涉及与在髓样来源的抑制细胞(MDSC)中表达的CD66c特异性结合的抗体或其抗原结合片段的免疫增强、免疫活化、或降低或消除MDSC的免疫抑制活性的用途。
本发明的进一步的实施方式涉及与在MDSC中表达的CD66c特异性结合的抗体或其抗原结合片段的预防、改善或治疗MDSC相关疾病(例如癌症、传染性疾病等)的用途。
具体地，本发明涉及通过诱导MDSC的免疫抑制活性的降低来预防、治疗或诊断MDSC相关疾病的用途。
该抗体可以是多克隆抗体或单克隆抗体，并且可以是小鼠抗体、嵌合抗体或人源化抗体。
另一种实施方式提供了编码抗CD66c抗体或其抗原结合片段的核酸分子。
另一种实施方式提供了包含该核酸分子的重组载体。该重组载体可以用作在宿主细胞中表达核酸分子的表达载体。
进一步的实施方式提供了包含核酸分子或重组载体的重组细胞。该重组细胞可以通过将该核酸分子或重组载体转化到宿主细胞中来获得。
另一种实施方式提供了制备抗CD66c抗体或其抗原结合片段的方法。该制备方法可以包括在宿主细胞中表达核酸分子的步骤。该表达步骤可以包括培养重组细胞，并且任选地，还可以包括从获得的细胞培养物中分离和/或纯化抗体。该方法可以包括以下步骤：
(a)制备用核酸分子或重组载体转化的重组细胞；
(b)在足以表达核酸分子的条件和/或时间下培养重组细胞；和
(c)从步骤(c)中获得的培养物中分离和/或纯化抗CD66c抗体或其抗原结合片段。
在下文中，将更详细地描述本发明。
在一种实施方式中，该制备方法涉及用于降低或消除MDSC的免疫抑制能力的组合物、免疫增强剂或免疫活化剂，其包含与在MDSC中表达的CD66c结合的抗体或其抗原结合片段。
MDSC被定义为具有免疫抑制功能的骨髓来源的未成熟骨髓细胞的集合，并且据报道，其在病理条件如慢性/急性感染和癌症下在外周血、淋巴器官、脾脏、癌组织等中积累。
MDSC通过抑制T细胞和NK细胞的免疫应答并诱导作为免疫抑制细胞的Treg细胞的产生来促进癌细胞的生长以及还可以诱导癌细胞的远处转移。迄今为止已知的MDSC的免疫抑制机制是淋巴细胞所需的营养耗尽，影响淋巴细胞的贩运和存活，产生通过制造活性氧或活性氮来抑制例如T细胞的增殖到功能的多个步骤的氧化应激，或阻断T细胞到癌组织中心的运动，以及诱导T细胞的细胞死亡。另外，已知MDSC增殖抗原特异性自然Treg细胞以及促进将幼稚CD4+T细胞转化为Treg的过程。
MDSC被定义为具有免疫抑制功能的骨髓来源的未成熟骨髓细胞的集合。虽然在健康个体中数量是有限的，但是它在病理条件如慢性/急性感染和癌症下在外周血、淋巴器官、脾脏和癌组织中积累。已经报道了在结肠癌、纤维肉瘤、胸腺瘤、肺癌、间皮瘤、淋巴瘤、前列腺癌、头颈癌、黑素瘤等中MDSC在癌中的积累和免疫抑制功能(Gabrilovich DI等人,肿瘤对髓样细胞的协调调节(Coordinated regulation of myeloid cells by tumors),Nat Rev Immunol.12(4):253-68)。除癌症外，已知MDSC在诸如克氏锥虫(Trypanosomacruzi)、单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)、硕大利什曼原虫(Leishmaniamajor)、蠕虫(helminth)、白色念珠菌(Candida albicans)、牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)的感染，或弓形体病(toxoplasmosis)和多种微生物败血症的疾病中诱导免疫抑制作用(Garbrilovich DI等人,髓样来源的抑制细胞作为免疫系统的调节剂(Myeloid-derived suppressor cells as regulators of the immune systems).Nat Rev Immunol.9(3):162-74(2009))。
在本公开中，表型为非淋巴HLA-DR低/(-)、CD11b+和CD33+并表达CD66c的MDSC可以是根据本发明的抗CD66c抗体或其抗原结合片段的靶标。特别地，本发明可以以表型为非淋巴性HLA-DR低/(-)、CD11b+和CD33+的MDSC中的CD66c阳性MDSC的积累为靶标，从而提出改善或治疗由MDSC引起的免疫缺陷、免疫力下降、免疫损害的计划。例如，通过在点阵图中根据细胞大小指定除了淋巴细胞以外的单核细胞区域和粒细胞区域，选择HLA-DR不表达或表达水平低的组以及选择CD11b和CD33阳性的组，可以指定MDSC。
本发明的实施方式可以提供通过使用根据本发明的与MDSC中表达的CD66c特异性结合的抗体或其抗原结合片段来预防、改善或治疗MDSC相关疾病的药物组合物或用途。
根据本发明的抗CD66c抗体对MDSC的裂解效果可以在全血和PMBC中诱导MDSC细胞数量的减少或CEACAM6阳性细胞的凋亡。优选地，抗CD66c抗体可以以ADCC方式诱导数量减少或细胞死亡。在全血中，对CEACAM6靶抗原呈阳性的嗜中性粒细胞与MDSC混合在一起，因此很难说只选择性地裂解MDSC。然而，在去除嗜中性粒细胞后获得的外周血单核细胞(PBMC)中，可以通过使用抗CD66c抗体进行MDSC的选择性裂解。
MDSC相关疾病是表现出通过MDSC进行的免疫抑制活性的疾病，并且是与正常细胞相比CD66c阳性MDSC水平升高的疾病，这是用于确定该疾病的标准。例如，基于每单位体积的相应正常受试者样品中CD66c阳性MDSC的数量或活性为100％，患有特定疾病的受试者中CD66c阳性MDSC的数量或活性为约200％或更多，约300％或更多，约500％或更多，约700％或更多，约1,000％或更多，或约1,500％或更多，例如约200％至5,000％，或200％至3,000％，200至1,500％等。例如，通过从怀疑患有MDSC相关疾病的受试者和正常受试者中取样品如血液，用流式细胞仪分析样品中MSDC的数量，然后比较怀疑患有MDSC相关疾病的受试者的MDSC数量与正常受试者的MDSC数量，可以确定MDSC数量的增加。具体地，基于每单位体积相应正常受试者的样品中MDSC的数量或活性为100％，在患有MDSC相关疾病的受试者中，每单位体积样品(例如血液)中MDSC的数量为约200％或更多，约300％或更多，约500％或更多，约700％或更多，约1,000％或更多，或约1,500％或更多，例如约200％至5,000％，或200％至3,000％，200至1,500％等。
具体地，MDSC相关疾病是例如，显示出表型为非淋巴HLA-DR低/(-)、CD11b+和CD33+的MDSC中的表达CD66c的MDSC增加或积累的疾病，或MDSC数量与正常细胞数量相比增加的疾病。MDSC相关疾病的实例包括慢性/急性感染、癌症等，具体地是显示出MDSC的免疫抑制活性的慢性/急性感染、癌症等。例如，该疾病可以是显示表型为非淋巴HLA-DR低/(-)、CD11b+和CD33+的MDSC中CD66c阳性MDSC积累的慢性/急性感染、癌症等。
MDSC相关传染性疾病可能是诸如克氏锥虫，单核细胞增生李斯特菌、硕大利什曼原虫、蠕虫、白色念珠菌、牙龈卟啉单胞菌的感染或弓形体病或多种微生物败血症。
例如，MDSC相关癌症可以是CD66c阳性MDSC增加的癌症，包括实体癌和血液癌。实体癌的实例包括结肠癌、纤维肉瘤、胸腺瘤、肺癌、间皮瘤、淋巴瘤、前列腺癌、头颈癌、黑素瘤、胃癌、肝癌或乳腺癌，或优选结肠癌、胃癌或肝癌。预防、抑制或治疗癌症和癌症转移的用途可以例如抑制癌细胞的生长。造血系统恶性肿瘤的实例包括急性髓细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性单核细胞性白血病、霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤。
本发明涉及与在MDSC中表达的CD66c结合的抗体或其抗原结合片段。CD66c(分化簇66c)也称为CEACAM6(癌胚抗原相关细胞粘附分子6)或NCA(非特异性交叉反应糖蛋白抗原)-90，已知是与细胞粘附有关的重要蛋白质。CD66c可以优选地由SEQ ID NO：1的氨基酸序列(基因库蛋白编号(Genbank Protein No.)AAH05008)表示，但不限于此。
如本文所用，术语“抗体”意指通过在免疫系统中抗原的刺激而产生的物质，并且其种类没有特别限制。抗体可以以非天然方式产生，例如重组或合成地产生。该抗体可以是动物抗体(例如小鼠抗体等)、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体。
抗CD66c抗体或其抗原结合片段与如上所述的CD66c的特定表位特异性结合，并且可以选自由动物抗体(例如小鼠抗体)、嵌合抗体、人源化抗体和其抗原结合片段组成的组。动物抗体可以来源于人以外的动物物种，例如大鼠、小鼠、山羊、豚鼠、驴、兔、马、美洲驼、骆驼、鸟类(例如鸡、鸭等)，但不限于此。由这样的动物抗体产生嵌合抗体和/或人源化抗体的技术是本领域熟知的。人源化抗体可以是任何合适的同种型，例如IgG(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgM、IgA、IgD、IgE或任何亚类，优选IgG1或IgG2同种型，或更优选去岩藻糖基化的IgG1或IgG2同种型。
另外，除非另有说明，否则本文中的抗体可以理解为包括抗体的具有抗原结合能力的抗原结合片段。在本说明书中，术语“互补决定区(CDR)”是指在抗体的可变区中赋予抗体对抗原的结合特异性的抗体区域。如上所述的抗体的抗原结合片段可以是包含至少一个互补决定区的抗体片段。术语“CDR(互补决定区)”是指免疫球蛋白的重链和轻链的高变区的氨基酸序列。重链和轻链中的每一个可以包含三个CDR(CDRH1、CDRH2、CDRH3和CDRL1、CDRL2、CDRL3)。CDR可以为抗体提供关键的接触残基以结合抗原或表位。另一方面，在本公开中，术语“特异性结合”或“特异性识别”的意思与本领域技术人员通常已知的相同。
术语“抗原结合片段”是指针对免疫球蛋白的整个结构的其片段，并且是指包括抗原可以结合的部分的多肽部分。例如，片段可以是scFv、(scFv)2、scFv-Fc、Fab、Fab'或F(ab')2，但不限于此。
根据本发明的抗CD66c抗体特异性识别和/或结合CD66c，并且该抗体包括小鼠抗体、嵌合抗体或人源化抗体。本发明中的嵌合抗体是这样的抗体，其中可变区的序列来源于一个物种，而恒定区的序列来源于其它物种，例如，可变区来源于小鼠，而恒定区来源于人。本发明中的人源化抗体是具有对人的低免疫原性并且具有非人抗体活性的抗体。例如，它可以通过保留非人CDR区并用人对应物替代该区域的其余部分来制备。例如，参考文献：Morrison等人,Proc.Natl.Acad.ScL USA,81:6851-6855(1984)；Morrison和Oi,Adv.Immunol.,44:65-92(1988)；Verhoeyen等人,科学(Science),239:1534-1536(1988)；Padlan,Molec.Immun.,28:489-498(1991)；Padlan,Molec.Immun.,31(3):169-217(1994)。
对本发明中的抗体片段没有限制，只要该抗体片段特异性识别CD66c表位并且包括轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)即可。该抗体片段可以选自由Fab、Fab'、F(ab')2、scFv、dsFv和CDR组成的组。特别地，scFv是通过将重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)与接头多肽连接而制备为单链的抗体片段。
术语“铰链区”是包含在抗体的重链中的区域，存在于CH1和CH2区域之间，并且是指提供抗体中抗原结合位点的柔性的区域。例如，铰链可以来源于人抗体，并且具体地，可以来源于IgA、IgE或IgG，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
抗CD66c抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体，例如单克隆抗体。可以根据本领域熟知的方法来制备单克隆抗体。例如，它可以使用噬菌体展示技术来制造。
与小鼠抗体或嵌合抗体不同，人源化抗体在稳定性方面显示出为嵌合8F5抗体的10倍的更高的稳定性，此外还具有显著减少施用至人时的免疫原性的原因的不同特征。具体地，在高温(例如62℃)下，由于针对ANS试剂的荧光变异性小于200％，因此抗体具有高稳定性。
在特别严苛的条件下，由于抗体特性的变化，嵌合8F5抗体显示1,406％的ANS反应性改变，而人源化抗体显示约114％和133％的相对不显著的改变，表明它们是显著稳定的蛋白。
嵌合8F5和人源化抗体增强T细胞的活化，这也在由T细胞活化剂引起的T细胞活性增加以及由于不同人的同种异体树突细胞和T细胞混合而导致的T细胞活性条件中显示。这种T细胞活化的诱导诱导了当与癌细胞处于共培养条件时的癌细胞死亡，以及在与各种癌细胞共培养的条件下的T细胞活化。
根据本发明的抗体或其片段具有肿瘤消退活性和对肿瘤细胞系的直接抑制效果。在本公开中，肿瘤消退包括诱导或促进肿瘤大小的减小，和/或抑制、停止或减少肿瘤细胞的生长。例如，肿瘤大小的减小意指，基于处理包含本发明的抗体或其片段的组合物之前肿瘤大小为100％，通过施用包含抗体或其片段的组合物而获得的肿瘤大小为97％或更少、95％或更少、90％或更少、85％或更少、80％或更少和75％或更少。
根据本发明的抗体具有抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)，并且优选具有ADCC特征。
根据本发明的抗体或抗原结合片段可以通过使用自然杀伤细胞或NK细胞来源的细胞疗法的联合来改善或治疗MDSC相关疾病。
具体地，根据本发明的抗CD66c抗体通过与自然杀伤细胞联合而增加了癌细胞杀伤能力，并且因此对于不仅有效去除CEACAM6阳性癌细胞而且还有CEACAM6阳性MDSC，与NK细胞或NK细胞治疗剂联合处理的效果是优异的。
在特定的实验中，作为使用EZ-cytox增强型细胞活力试剂盒(Daeil Lab)测量细胞活力的结果，确认了与单一处理的情况相比，在两种类型的癌细胞系中联合自然杀伤细胞的凋亡效果更高(图12a和12b)。根据由本发明的抗CD66c抗体，以及抗CD66c抗体与NK细胞或NK细胞治疗剂的联合效果引起的MDSC的选择性裂解，抗体可以去除包括CEACAM6阳性癌细胞和CEACAM6阳性MDSC的靶标。根据本发明的抗CD66c抗体显示出分别针对不同靶细胞(例如MDSC和癌细胞)的ADCC。在两种类型的细胞实际上一起增加的癌症患者的情况下，本发明的抗CD66c抗体可以一起去除两种类型的靶标，并且与NK细胞治疗剂联合而显示出同时去除癌细胞和MDSC靶标的增强的功效。
根据本发明的抗体可以部分或全部地去除作为与抗体结合的糖残基的岩藻糖。本发明的去除岩藻糖的抗体具有MDSC的凋亡活性，并且在一种实施方式中，与岩藻糖形式的抗体相比，本发明的抗体中的低岩藻糖形式或去岩藻糖形式的抗体具有MDSC的凋亡活性，因此具有高免疫增强。如本文所用，“正常岩藻糖”或“正常岩藻糖含量”是指具有通常至少90％的岩藻糖含量的抗体。根据本发明的低岩藻糖形式或去岩藻糖形式的抗体可以是岩藻糖含量为约10％或更低、约7％或更低或约5％或更低，例如0至约10％、0至约7％或0至约5％的抗体。
具体地，本发明的抗体可包含以下互补决定区(CDR)：
CDR-H1，其包含SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：9的氨基酸序列，
CDR-H2，其包含SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：10的氨基酸序列，
CDR-H3，其包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列，
CDR-L1，其包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12的氨基酸序列，
CDR-L2，其包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列，和
CDR-L3，其包含SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：13的氨基酸序列。
该抗体的重链可变区包含选自由以下组成的组中的至少一种：包含SEQ ID NO：22、23、24、25、26或27的氨基酸序列的框架序列(V-FR1)，包含SEQ ID NO：32、33、34、35、36或37的氨基酸序列的框架序列(V-FR2)，包含SEQ ID NO：42、43、44、45、46或47的氨基酸序列的框架序列(V-FR3)，和包含SEQ ID NO：52、53、54、55、56或57的氨基酸序列的框架序列(V-FR4)。
该抗体的轻链可变区包含选自由以下组成的组中的至少一种：包含SEQ ID NO：28、29、30或31的氨基酸序列的框架序列(L-FR1)，包含SEQ ID NO：38、39、40或41的氨基酸序列的框架序列(L-FR2)，包含SEQ ID NO：48、49、50或51的氨基酸序列的框架序列(L-FR3)，和包含SEQ ID NO：58、59、60或61的氨基酸序列的框架序列(L-FR4)。
该抗体包括含有SEQ ID NO：7、14、15、16、17或18的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO：8、19、20或21的氨基酸序列的轻链可变区。
根据本发明的小鼠抗体或嵌合抗体的实例可以是抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含选自由以下组成的组中的至少一种：包含SEQ ID NO：1至3的氨基酸序列的VH CDR的氨基酸序列和包含SEQ ID NO：4至6的氨基酸序列的VL CDR的氨基酸序列。在下表1中总结了小鼠抗体或嵌合抗体的实例的CDR和可变区。
具体地，本发明的抗体的实例可以包括作为VH CDR的SEQ ID NO：1(CDR1)、SEQ IDNO：2(CDR2)和SEQ ID NO：3(CDR3)和/或作为VL CDR的SEQ ID NO：4(CDR1)、SEQ ID NO：5(CDR2)和SEQ ID NO：6(CDR3)。
小鼠抗体或嵌合抗体可以包括含有SEQ ID NO：7的氨基酸序列的VH区和含有SEQID NO：8的氨基酸序列的VL区。
本发明涉及包含小鼠抗体或嵌合抗体作为活性成分的用于预防或治疗MDSC相关疾病及其症状的药物组合物、试剂盒或方法。
本发明还涉及包含小鼠抗体或嵌合抗体作为活性成分的用于预防或治疗MDSC相关疾病及其症状的药物组合物，所述小鼠抗体或嵌合抗体例如包含由杂交瘤细胞产生的抗体的CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的抗CD66c抗体或其抗原结合片段，所述杂交瘤细胞以保藏号KCLRF-BP-00230保藏。该杂交瘤细胞于2010年2月22日以“8F5”保藏于韩国细胞系研究基金会(KCLRF)中，并且保藏号为KCLRF-BP-00230，其已在KR 10-1214177中进行了详细描述。
本发明可以通过使用小鼠抗体或嵌合抗体中的抗CD66c抗体8F5的氨基酸序列和人类框架序列来制备人源化抗体。基于表达程度、聚集和细胞结合程度，正常表达的人源化抗体由于蛋白质本身的不稳定性而非常少聚集，并且具有与嵌合抗体类似的结合靶抗原阳性细胞的能力。具体地，该细胞结合谱与嵌合抗体的细胞结合谱相似，并且通过将抗体阳性的阳性率(门控％)乘以平均荧光(平均值)而获得，然后将该细胞结合谱与嵌合抗体进行比较，以在±20％的范围内选择候选抗体(实施例2)。因此，当在制备人源化抗体时将小鼠抗体的CDR区序列插入人抗体的框架区中时，由于原始蛋白质结构的改变，导致所制备的抗体的结合能力迅速降低。考虑到所制备的抗体的结合能力降低，所选择的本发明的人源化抗体是非常优异的抗体。
优选地，选择与嵌合抗体相比基于细胞结合能力而表现出高结合亲和力的五种类型的重组人源化抗体，并通过ELISA对所述五种类型的重组人源化抗体进行针对CD66c抗原和与CD66抗原相似的抗原的结合测定。
另外，与嵌合抗体相比，根据本发明的人源化抗体表现出优异的稳定性，例如具有反映为ANS反应性变化小于200％的稳定性的抗体。小于200％的ANS反应性变化被认为是非常小的变化，而高于200％的变化值可以解释为观察到由于蛋白质的显著结构变化而导致的ANS反应性。因此，根据本发明的人源化抗体具有与嵌合抗体相似的抗原结合活性和细胞结合能力，并且抗体蛋白本身的物理稳定性增加，这在治疗性抗体的可药用性方面可以是非常优异的。
通过将在低温条件(例如4℃)下测得的荧光值与在高温条件(例如62℃)下测得的荧光值之差除以在低温条件下测得的荧光值，可以测量针对ANS试剂的抗体的荧光变化。
[数学方程式]
荧光变化＝(在高温条件下测得的荧光值-在低温条件下测得的荧光值)/(在低温条件下测得的荧光值)
作为用于获得抗体的特定荧光变化的方法，在冷藏条件(4℃)和62℃的温度下放置4小时后，通过荧光读取器测量ANS试剂的反应性，并表示为荧光值，可以利用该方程式获得荧光变化。
根据本发明的人源化抗体的实例可以包括选自由以下组成的组中的一个或多个氨基酸序列：确定包含SEQ ID NO：9至13的氨基酸序列的重链可变区或轻链可变区的CDR的氨基酸序列。小鼠抗体和嵌合抗体的实例可以包括选自由以下组成的组中的一个或多个氨基酸序列：确定包含SEQ ID NO：1至3的氨基酸序列的重链可变区或包含SEQ ID NO：4至6的氨基酸序列的轻链可变区的CDR的氨基酸序列。
具体地，人源化抗体的实例包括确定包含SEQ ID NO：1或9的氨基酸序列的VH区的CDR1的氨基酸序列、确定包含SEQ ID NO：2或10的氨基酸序列的VH区的CDR2的氨基酸序列、和确定包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列的VH区的CDR3的氨基酸序列。
人源化抗体的实例包括确定包含SEQ ID NO：4、11或12的氨基酸序列的VL区的CDR1的氨基酸序列、确定包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列的VL区的CDR2的氨基酸序列、和确定包含SEQ ID NO：6或13的氨基酸序列的VL区的CDR3的氨基酸序列。
人源化抗体的实例包括选自由SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：14至18的氨基酸序列组成的组中的重链可变区和选自由SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：19至21的氨基酸序列组成的组中的轻链可变区，但不包括含有SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8的抗体。
在下表1中总结了根据人源化抗体的实例的CDR序列和可变区序列。
[表1]
下表2和3中显示了根据本发明的人源化抗体的一个实例的框架序列，其中所述抗体可以包含选自由重链可变区的框架1至4和轻链可变区的框架1至4组成的组中的至少一种，并且可以是包含一个或多个框架的抗体。
具体地，在重链可变区中，框架1的氨基酸序列可以包含SEQ ID NO：23至27，框架2的氨基酸序列可以包含SEQ ID NO：32至37，框架3的氨基酸序列可以包含SEQ ID NO：43至47，框架4的氨基酸序列可以包含SEQ ID NO：53至57。
在轻链可变区中，框架1的氨基酸序列可以包含SEQ ID NO：29至31，框架2的氨基酸序列可以包含SEQ ID NO：39至41，框架3的氨基酸序列可以包含SEQ ID NO：49至51，框架4的氨基酸序列可以包含SEQ ID NO：59至61。下表显示了根据人源化抗体的实例的框架序列。
[表2]
[表3]
人源化抗体可包含选自由SEQ ID NO：14至18的氨基酸序列组成的组中的VH区和选自由SEQ ID NO：19至21的氨基酸序列组成的组中的VL区。具体地，人源化抗体的实例包括：抗体(Vk8+VH6)，其包括含有SEQ ID NO：15的氨基酸序列的VH区和含有SEQ ID NO：21的氨基酸序列的VL区；抗体(Vk8+VH11)，其包括含有SEQ ID NO：18的氨基酸序列的VH区和含有SEQ ID NO：21的氨基酸序列的VL区；抗体(Vk5+VH7)，其包括含有SEQ ID NO：16的氨基酸序列的VH区和含有SEQ ID NO：19的氨基酸序列的VL区；抗体(Vk7+VH6)，其包括含有SEQ IDNO：17的氨基酸序列的VH区和含有SEQ ID NO：20的氨基酸序列的VL区；抗体(Vk7+VH10)，其包括含有SEQ ID NO：15的氨基酸序列的VH区和包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的VL区；抗体(Vk7+VH7)，其包括含有SEQ ID NO：16的氨基酸序列的VH区和含有SEQ ID NO：20的氨基酸序列的VL区；抗体(Vk7+VH5)，其包括含有SEQ ID NO：14的氨基酸序列的VH区和含有SEQID NO：20的氨基酸序列的VL区；和抗体(Vk8+VH7)，其包括含有SEQ ID NO：16的氨基酸序列的VH区和含有SEQ ID NO：21的氨基酸序列的VL区。下表6中显示了抗体的特定组合和氨基酸序列。抗体的优选实例包括：抗体(Vk8+VH6)，其包括含有SEQ ID NO：15的氨基酸序列的VH区和含有SEQ ID NO：21的氨基酸序列的VL区；抗体(Vk8+VH11)，其包括含有SEQ ID NO：18的氨基酸序列的VH区和含有SEQ ID NO：21的氨基酸序列的VL区；抗体(Vk5+VH7)，其包括含有SEQ ID NO：16的氨基酸序列的VH区和含有SEQ ID NO：19的氨基酸序列的VL区；抗体(Vk7+VH6)，其包括含有SEQ ID NO：17的氨基酸序列的VH区和含有SEQ ID NO：20的氨基酸序列的VL区；和抗体(Vk7+VH10)，其包括含有SEQ ID NO：15的氨基酸序列的VH区和含有SEQID NO：20的氨基酸序列的VL区。
抗CD66c抗体或其片段可以与各种标记试剂、毒素或抗肿瘤药物偶联。对于本领域技术人员而言显而易见的是，可以通过本领域熟知的方法将本发明的抗体与标记试剂、毒素或抗肿瘤药物偶联。这样的偶联可以在抗体或抗原表达后在附接位点上以化学方式进行。可替代地，可以在DNA水平上将偶联产物工程化到本发明的抗体或抗原中。随后，可以如下文所述在合适的宿主系统中表达产物，并且收集表达的蛋白质，并且如果需要，使所述蛋白质复性。偶联可以通过本领域已知的接头进行。特别是，在酸性或还原性条件下或暴露于特定蛋白酶后释放毒素或抗肿瘤药物的各种接头可以用于该技术。在一些实施方式中，接头通过各种长度的间隔区臂附接至标记试剂、毒素或抗肿瘤药物以减少潜在的空间位阻可能是期望的。
用CD66c蛋白、CD66c抗原决定区、CD66c的含有CD66c抗原决定区的CD66c部分或表达CD66c抗原决定区的细胞作为抗原，使用通常的方法，可以产生针对CD66c的抗原决定区的抗体或其片段。例如，产生抗CD66c抗体的方法可以通过制备产生抗CD66c抗体的细胞系的方法来实现，所述方法包括：(a)用CD66c蛋白、CD66c的抗原决定区、CD66c的含有CD66c抗原决定区的部分或表达CD66c抗原决定区的细胞注射并免疫动物，(b)获得产生针对CD66c具有特异性的抗体的脾细胞，以及(c)将脾细胞与骨髓瘤细胞融合以得到杂交瘤细胞，并选择产生针对CD66c的抗体的杂交瘤细胞。可以通过体外培养细胞系或体内引入细胞系来分离抗体。例如，可以将细胞系腹膜内注射到小鼠中，然后从腹水中分离并纯化抗体。单克隆抗体的分离和纯化可以通过使用抗免疫球蛋白柱或蛋白A柱对培养上清液和腹水进行离子交换色谱(DEAE或DE52)或亲和色谱来实现。
本发明的抗体所结合的抗原决定区表现出MDSC特异性表达。因此，抗CD66c抗体不仅可以有效地用于检测MDSC，而且当该抗体携带毒性物质时也可以仅对肿瘤细胞发挥细胞毒性。
另一种实施方式提供了根据本发明的抗CD66c抗体作为用于检测MDSC的标志物的用途，或者具体地，使用抗CD66c的抗体或其抗原结合片段检测MDSC、诊断MDSC相关疾病或提供关于诊断MDSC相关疾病的信息的用途。
例如，它提供了通过使用抗CD66c的抗体或其抗原结合片段来检测MDSC的组合物，该组合物包含与抗体的抗原决定区相互作用的物质。相互作用的物质包括能够与抗原决定区CD66c相互作用的所有物质，并且可以是选自小分子化学品、抗体、抗体的抗原结合片段、适体等中的至少一种。
通过使样品与本发明的抗体接触以及确定样品中CD66c的存在，本发明的诊断组合物用于检测各种细胞、组织或另一种合适的样品中CD66c不期望的表达或过表达。因此，本发明的诊断组合物可用于评估疾病的发作或状态，如下文所定义。特别地，可以用本发明的抗体或其片段或衍生物靶向能够表达CD66c的MDSC。结合了本发明的抗体的细胞可能会被免疫系统功能(例如补体系统)或细胞介导的细胞毒性攻击，从而减少显示出CD66c的不期望的表达或过表达的细胞数量或完全根除所述细胞。
作为具体实例，提供了使用根据本发明的针对CD66c的抗体或抗原结合片段来诊断MDSC相关疾病的方法或组合物。
在诊断MDSC相关疾病(例如癌症)的情况下，根据本发明的抗CD66c的抗体或其抗原结合片段可以通过靶向浸润在癌组织周围的MDSC(无论CEACAM6抗原在癌组织或癌细胞中的表达)来用于诊断和治疗。根据本发明的抗CD66c的抗体不仅与实体癌细胞中表达的CD66c结合，而且与MDSC中表达的CD66c结合，因此，即使在实体癌细胞中不表达CD66c的癌症中，所述抗体也可以通过靶向由癌症引起的MDSC的增加状态来检测癌症。具体地，在癌细胞中CEACAM6阳性的肺腺癌的癌组织以及在癌细胞中CEACAM6阴性的肺鳞状细胞癌、尿膀胱癌和恶性黑素瘤中，对癌组织染色的结果确认了，CEACAM6阳性的MDSC在癌组织的非肿瘤部位中(图13)。
因此，癌症患者显示出，无论癌细胞表面中的CEACAM6阳性与否，MDSC水平都升高，因此，如实施例8的结果所示，可以检测并确认浸润到癌症微环境中的MDSC。当与实施例5.2显示的可以选择性地溶解MDSC的结果一起考虑时，这表明无论癌细胞上CEACAM6阳性与否，MDSC都可以用作诊断和治疗目的的靶标。虽然癌细胞表面上存在或不存在CEACAM6表达可以根据癌症类型而变化，但是无论CEACAM6表达与否，大多数癌症类型中MDSC都增加。因此，根据本发明的抗CD66c抗体可以靶向MDSC，并且可以在各种应用中用于诊断和治疗目的。
在另一种实施方式中，本发明的抗体或其片段或衍生物与标记试剂偶联。这样的抗体特别适合于诊断应用。
可以将本发明的组合物作为活性剂单独地或与其他药剂联合施用。
本发明的又进一步的实施方式涉及检测MDSC的方法，该方法包括(a)使抗CD66c抗体与包含MDSC的样品反应，以及(b)如果样品对抗体呈阳性，则确定该样品为MDSC。样品可以包括但不限于淋巴液、骨髓、血液和血细胞。当用于筛选MDSC时，抗CD66c抗体可以与能够指示抗原-抗体反应性的标记缀合。用于该目的的标记可以包括放射性同位素、荧光物质、发光物质、色原和染料。
同样，可以提供本发明的抗CD66c抗体以用于诊断MDSC相关疾病的试剂盒。除了抗CD66c抗体外，诊断试剂盒还可包括用于检测抗原-抗体反应的手段。检测手段可以是用于进行选自由以下组成的组中的技术的药剂：流式细胞术、免疫组织化学染色、酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)、酶免疫测定(EIA)、荧光免疫测定(FIA)和发光免疫测定(LIA)。
实体癌的治疗效果是抑制癌症恶化的效果，不仅包括癌细胞(特别是癌症干细胞)或包括癌细胞在内的癌组织的生长抑制(量的减少)和凋亡效果，还包括对迁移、侵袭、转移等的抑制。为了使根据本发明的抗体的效果最大化，抗体可以与STING激动剂或5-Fu联合处理，可以预期在联合处理中获得更高的效果。
如本文所用，术语“受试者”或“患者”是指患有MDSC相关疾病或症状或具有患MDSC相关疾病或症状的可能性并因此需要缓解、预防和/或治疗MDSC的哺乳动物，包括灵长类动物(例如人、猴子等)以及啮齿类动物(例如小鼠、大鼠等)。
根据本发明的抗体或其片段的施用可以以任何可接受的方式进行。例如，包含将抗CD66c抗体作为活性成分的治疗剂经口服或胃肠外，优选经胃肠外施用至患有MDSC相关疾病的受试者，例如人或动物。治疗剂可以包括药学上可接受的赋形剂，并且治疗剂的剂量可以取决于患者的状况而变化，并且可以在例如每天3mg至6,000mg的范围内。治疗剂可以采取诸如液体、粉末、乳剂、悬液或注射剂的形式，但不限于此。
进一步地，本发明提供了使用选自针对CD66c的抗原决定区的抗体、该抗体的片段(F(ab')2、Fab、Fv等)和针对CD66c的抗原决定区的配体中的至少一种来治疗MDSC相关疾病的方法。抗体或其片段可以是单克隆或多克隆的，并且可以来源于人或动物。抗CD66c抗体或其片段可以进一步包含上述毒素。可以使用熟知的技术将毒素与抗体融合、偶联、缀合或连接。
本发明的药物组合物可以作为单一活性剂或与优选用于治疗目的疾病的任何其他药剂联合施用。另外，本发明的抗体可以与其他抗癌疗法(例如化学疗法、放射疗法、细胞疗法等)联合使用。熟知的各种抗癌剂可以用于化学疗法或细胞疗法中。
技术效果
本发明提供了免疫增强剂和所述免疫增强剂用于预防、改善或治疗MDSC相关疾病的用途，所述免疫增强剂包含与在髓样来源的抑制细胞(MDSC)中表达的CD66c特异性结合的抗体或其抗原结合片段。
附图说明
图1显示了从小鼠8F5抗体克隆抗体基因并将该基因表达为嵌合重组抗体并与CD66c抗原阳性的A549细胞表面结合的结果。
图2a至2c显示了在96种重组人源化抗体中首先选择的8种重组人源化抗体的HPLC分析的结果。对于每种抗体，左侧显示的结果为在OD 220nm处测量，右侧显示的结果在OD280nm处测量。结果表示抗体和来源于抗体的杂质(例如片段)是否聚集。
图3a至3e显示了与嵌合抗体相比相似的重组人源化抗体的细胞表面结合程度，因此确认了首先选自96种重组人源化抗体中的8种重组人源化抗体的CD66c抗原阳性细胞的表面结合。
图4a和4b显示了针对选自96种重组人源化抗体中的5种重组人源化抗体与CD66c抗原的结合能力的ELISA分析结果。图4a显示了CECACAM6(CD66c)作为抗原的结果，图4b显示了CEACAM1(CD66a)抗原的结果。
图5a和5b显示了评估选自96种重组人源化抗体中的5种重组人源化抗体在严苛温度条件下的抗体稳定性的结果。
图6a至6d显示在CHO细胞中表达的重组人源化抗体的CD66c抗原阳性细胞A549的细胞表面结合。
图7是用于帮助理解MDSC分析方法的示意图，具体地，上图是通过在点阵图中根据细胞大小指出除了淋巴细胞以外的单核细胞区域和粒细胞区域，选择HLA-DR不表达或低表达的组以及确定所述组中的CD11b和CD33阳性的组作为MDSC而获得的特定的点阵图的示意图，下图是确定的MDSC组中DNP002的阳性率的结果。
图8是分析用DNP002处理后的MDSC杀伤效果的代表性结果，显示通过去岩藻糖基化的DNP002显著降低了MDSC。CD66b在粒细胞MDSC中表达，但不在单核细胞MDSC中表达，并用于MDSC亚型分类。图8中指出的大多数MDSC是CD66b阳性的，可以被分类为粒细胞MDSC。因此，通过用DNP002处理，粒细胞MDSC明显减少。
图9是分析用DNP002处理后MDSC杀伤效果的结果，显示在5名患者中由于DNP002处理而减少的MDSC数量的百分比与对照组相比的比较结果，其中图中的横轴上的P#1表示患者的全血#1，纵轴表示相对MDSC活力％变化的变化。
图10显示了分析用DNP002抗体处理从胃癌患者血液中分离的PBMC后，使用流式细胞仪分析MDSC杀伤效果的结果。
图11a是比较根据DNP002同种型的MDSC杀伤效果的结果，确认了去岩藻糖基化的IgG1类型中的DNP002最有效地诱导血液中的MDSC杀伤。
图11b是在5名胃癌患者中比较根据DNP002的同种型的MDSC杀伤效果的结果，显示由比较MDSC杀伤效果的百分比的结果而得到的去岩藻糖基化的IgG1类型的DNP002在5名胃癌患者的血液中提供最高的MDSC杀伤效果，其中图中的横轴上的P#1表示患者的全血#1，纵轴表示相对MDSC活力％变化的变化。
图12a和图12b是在单独的DNP002抗体、单独的NK细胞以及DNP002抗体和NK细胞联合的条件下，对作为靶抗原的对CEACAM6呈阳性的胃癌细胞系A549和胰腺癌细胞系AsPC-1进行凋亡效果分析的结果。
图13是通过对癌细胞中CEACAM6为阳性的肺腺癌以及癌细胞自身中CEACAM6为阴性的肺鳞状细胞癌、尿膀胱癌和皮肤癌(恶性黑素瘤)的癌组织进行CEACAM免疫染色来显示在癌组织的非肿瘤部位CEACAM6阳性MDSC的存在的图。
具体实施方式
通过以下实施例可以更好地理解本发明，所述实施例是为说明而进行阐述的，但不应被解释为限制本发明。
实施例1：抗CD66c嵌合抗体的制备
1.1.抗CD66c抗体的基因序列克隆
使用小鼠Ig引物集(Millipore公司，目录号：69831)克隆8F5抗体基因。使用小鼠Ig引物集对从8F5杂交瘤中分离的RNA进行PCR，将其插入pGem-T载体(Promega公司，目录号：A3600)，测序以确认DNA序列，并通过IMGT站点(www.imgt.org)鉴定了小鼠抗体基因。所分析的8F5抗体的重链可变区序列和轻链可变区序列如下。
[表4]
1-2.嵌合抗体的产生
基于所构建的抗CD66c小鼠抗体8F5的氨基酸序列，制备抗CD66c嵌合抗体。
1-2-1.质粒产生
对于表达抗CD66c嵌合抗体，分别制备了重链表达质粒和轻链表达质粒。使用POptiVEC(Invitrogen公司)载体作为轻链表达质粒，并使用pcDNA3.3(Invitrogen公司)载体作为重链表达质粒。
为了将每种抗体的可变区编码cDNA和恒定区编码cDNA表达为连续氨基酸序列而不插入另外的氨基酸，合成了克隆的可变区的编码序列以及已知的人IgG1恒定区(重链)和κ恒定区(轻链)的编码序列(Bioneer公司)。用限制酶Xho I和Sal I切割合成的重链基因和轻链基因，分别将轻链基因片段连接到pOptiVec载体上并将重链基因片段连接到pcDNA3.3载体上以构建完整的抗体表达质粒(pcDNA3.3-抗CD66c重链表达质粒和pOptiVEC-抗CD66c轻链表达质粒)。
1-2-2.转染
将制备的pcDNA3.3-抗CD66c重链表达质粒和pOptiVEC-抗CD66c轻链表达质粒转染到CHO细胞衍生的DG44细胞(Invitrogen公司)中。
转染前三天，将悬浮液中的DG44细胞在含有5％FBS的MEMS培养基中适应以将所述细胞转化为贴壁细胞并改善转染效率。使用ViaFect转染试剂(Promega公司，目录号：E4981)在6孔板上进行转染。在转染前一天，通过以1×105个细胞/孔的浓度传代来制备适应于贴壁状态的DG44细胞。用于转染的DNA的量为通过pcDNA3.3-抗CD66c重链表达质粒和pOptiVEC-抗CD66c轻链表达质粒各2ug和1.5ug，以1.5:1的比率组合使用来确定。转染进行48小时。使用流式细胞术分析转染的细胞群。如图1所示，通过A549非小细胞肺癌细胞系确认了嵌合抗体的表达。图1显示了从小鼠8F5抗体克隆抗体基因并将该基因表达为重组嵌合抗体并与CD66c抗原阳性的A549细胞表面结合的结果。
实施例2：人源化抗CD66c单克隆抗体的制备
2.1通过计算机模拟人源化选择重组抗体序列
通过尽可能维持小鼠抗CD66c抗体、8F5(重链氨基酸序列：SEQ ID NO：7，重链编码DNA：SEQ ID NO：62；轻链氨基酸序列：SEQ ID NO：8，重链编码DNA：SEQ ID NO：63)的重链和轻链各自的CDR(CDRH1：ASGYSFTDYTMN)SEQ ID NO：1，CDRH2：SEQ ID NO：2(LINPFHGGTVSNQRFKV)；CDRH3：SEQ ID NO：3(VRGDPVRHYYALAY)；CDRL1：SEQ ID NO：4(GASENVYGTL)；CDRL2：SEQ ID NO：5(GATNLAD)；CDRL3：SEQ ID NO：6(VATYYCQNVLSAPYT)CDR尽可能相似，如果抗原结合能力相等或更高，则基于编码人抗体基因的种系序列，通过计算机模拟的方法选择通过将框架区的位点序列重组而获得的人源化抗体序列。如表5所示，用作重组人源化抗体序列骨架的人抗体种系基因分别与小鼠CD66c抗体8F5的重链和轻链最相似。表6中显示了小鼠CD66c抗体的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列和核酸序列以及重链可变区和轻链可变区的CDR序列。
[表5]
使用人抗体种系基因序列，选择了12种重链可变区和8种轻链可变区作为所选择的人源化8F5抗体序列，如表3所示。表6至表8显示了所选择的人源化抗体的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列、CDR序列和框架序列。表1中显示了嵌合抗体和人源化抗体的重链可变区和轻链可变区。优选的是，小鼠抗体和人源化抗体具有相同的重链CDR3和轻链CDR2的氨基酸序列。表6中粗体和带下划线的部分为抗体的CDR序列。表7中粗体和带下划线的部分指示修饰的氨基酸。
[表6]
[表7]
[表8]
2.2重组人源化抗体的表达和分析
选择的抗体序列通过分别连接人IgG1重链恒定区和κ轻链恒定区，在293细胞中以人IgG1的形式表达。转染7天后，使用KanCap A树脂(Kaneca公司)纯化重组人源化抗体。
通过在OD 280nm处测量来定量纯化的抗体，并进行SDS-PAGE。通过使用SepaxZenix-C SEC-300尺寸排阻色谱柱(Sepax Technologies公司)的HPLC并通过在280nm和220nm处进行分析，分析抗体的纯度和聚集(图2a至2c)。
2.3重组人源化抗体的细胞结合和抗原结合分析
2-3-1细胞结合测定
将表达的96种重组人源化抗体各自倒入含有等量(1ug)CD66c阳性A549非小细胞肺癌细胞系的试管中，并在4℃下反应30分钟，用PBS洗涤，添加FITC缀合的山羊抗人IgG(DiNona公司，韩国)，并在4℃下温育15分钟进行处理。用PBS洗涤后，用流式细胞仪(Stratedigm公司，S1000EXi)分析细胞，结果如下所示。
在96种重组人源化抗体候选物中，首先基于表达程度、聚集的存在和细胞结合程度选择了8种(表9和表10，图3a至3e)。表9和10是初次选择的抗CD66c人源化抗体和嵌合8F5的分析结果，表10显示了流式细胞仪分析的结果。
[表9]
[表10]
表9显示了8种选择的抗体的表达程度、是否存在聚集以及细胞结合的程度。具体地，总结了8种选择的抗体的表达水平和分子量。另外，根据表10中的流式细胞术的结果，确认了8种重组人源化抗体表现出±20％的细胞结合强度，这显示出与嵌合抗体非常相似的细胞结合强度。结果，从96种人源化候选抗体中首先选择了8种抗体，所述8种抗体正常表达，由于蛋白质本身的不稳定性而形成的聚集少，并且对靶抗原阳性细胞的结合亲和力与嵌合抗体相似。
特别地，细胞系的结合能力在数值上不同。然而，如图3所示，实际的细胞结合谱与嵌合抗体的相似，通过将抗体阳性率(门控％)乘以平均荧光(平均值)以及与嵌合抗体相比获得数值，从而选择±20％以内的人源化抗体，可以确定8种人源化抗体。一般地，在产生人源化抗体时，当将小鼠抗体CDR区序列插入人源化抗体的框架区中时，由于原始蛋白质结构的改变，抗体结合亲和力急剧降低。考虑到人源化抗体的一般性质，本发明中选择了非常好的人源化抗体。
2-3-2抗原结合测定
在所选择的8种重组人源化抗体中，选择了与嵌合抗体相比表现出高结合亲和力的5种重组人源化抗体，并通过ELISA分别分析所述5种重组人源化抗体与CD66c抗原和相似CD66抗原的结合亲和力。
[表11]
蛋白质ID HC&LC组合
3043 Vk8+VH6
3058 Vk8+VH11
2938 Vk5+VH7
3007 Vk7+VH6
3019 Vk7+VH10
将抗原CD66c(CEACAM6；Sino Biological公司)和CEACAM1抗原(Sino Biological公司)以每孔100ng的比例在96孔板上包被，然后封闭。将一抗从10ug/ml稀释3倍，并在37℃下结合1小时。将一抗从初始浓度10ug/ml稀释3倍，并在37℃下结合1小时，将作为二抗的山羊抗人Ig-HRP缀合物(Jackson ImmunoResearch公司)以1:10,000稀释，并在37℃下温育30分钟。在每个步骤之间进行三次洗涤，然后进行TMB反应，用与TMB溶液等量的1N H2SO4溶液(100ul)终止，然后在450nm处测量OD值。
作为实验结果，图4a、表12、图4b和表13中显示了从96种重组人源化抗体中选择的5种重组人源化抗体与CD66c抗原的结合亲和力。图4a和表12显示了抗体与CECACAM6(CD66c)抗原的结合能力，图4b和表13是CEACAM1(CD66a)抗原的结果。
从图4a、表12、图4b和表13中抗体与抗原的结合亲和力来看，所有抗CECACAM6的抗体均显示出与抗CEACAM6的嵌合抗体相似的结合谱并且被分为不结合CEACAM1或弱结合CEACAM1的组。
[表12]
[表13]
2.4重组人源化抗体的稳定性分析
通过将通过与抗原和细胞的结合谱选择的实施例3.3中的5种重组人源化抗体放置在在高温条件下进行实验以确定抗体的稳定性。
通过使用8-苯胺基-1-萘磺酸(ANS，Sigma公司)进行结合实验来确定稳定性。ANS是可以通过测量当蛋白质变性时与所暴露的疏水位点结合和不结合之间的荧光波长变化来检测蛋白质的变性的化合物。
使用PBS(磷酸盐缓冲盐水)将重组人源化抗体的浓度调节至0.2mg/ml，并在严苛条件下在50℃下放置4小时。将每500μl的待分析抗体的稀释溶液与20μl的0.2μg/ml的ANS溶液混合，并在5分钟后用荧光读板器在360nm激发和460nm发射的条件下进行分析。此外，还在70℃的温度下再测量ANS试剂反应30分钟。
图5a和5b显示了确认表11中所示的5种重组人源化抗体在严苛温度条件下的抗体稳定性的结果。也就是说，将抗体在严苛条件下在50℃下放置4小时后，再在70℃下放置30分钟后，通过荧光来测量ANS试剂的反应性。如图5a的实验结果所示，当将抗体在50℃的温度下放置4小时时，5种抗体中的大多数显示出很少的ANS响应，但是当将抗体在70℃下再放置30分钟后，荧光值会大大提高。其中，蛋白质ID：3058的重组抗体显示出最小的荧光值增加，因此在5种重组人源化抗体中表现出在温度变化最稳定的性质。
为了测量ANS试剂反应性的变化，将抗体在冷藏条件(4±2℃)和62℃下各放置4小时后，以与上述相同的方式用荧光读板器分析ANS试剂的反应性。通过获得在低温条件(例如4℃)下测得的荧光值与在高温条件(例如62℃)下测得的荧光值之差并除以在低温条件下测得的荧光值，可以确定针对ANS试剂的抗体的荧光值变化。
[数学方程式]
荧光值变化＝(在高温条件下测得的荧光值-在低温条件下测得的荧光值)/(在低温条件下测得的荧光值)
如图5b所示，使反应在相对于温度(50℃)有所升高的62℃的温度下进行4小时，然后确认了ANS试剂的反应性。5种重组人源化抗体和嵌合抗体在冷藏条件下几乎没有ANS反应，但随着温度的升高而增加。然而，嵌合8F5抗体显示，通过保持在62℃的温度条件下，ANS试剂的反应性增加至1,406％，而且产生沉淀物，显示出不稳定的结果。然而，5种人源化抗体显示出显著低于嵌合抗体的ANS试剂反应性的变化，并且未产生沉淀物。特别地，人源化抗体蛋白质ID 3019和蛋白质ID 3058的ANS试剂反应性的变化分别为114％和133％，因此被认为是最稳定的抗体。ANS试剂反应性的增加的含义是指置于蛋白质结构内部的疏水性氨基酸的暴露增加，这造成蛋白质结构的变性并导致蛋白质聚集体(即沉淀物)的形成。根据本发明的人源化抗体被认为是ANS反应性变化小于200％的稳定抗体。小于200％的ANS反应性变化被认为是非常低的，超过该值则被认为蛋白质结构具有更显著的变化并观察到ANS反应性。因此，根据本发明的人源化抗体具有与嵌合抗体相似的抗原结合能力和细胞结合能力以及抗体蛋白本身的增加的物理稳定性，这样的事实在治疗性抗体的可药用性方面是非常优异的特征。
2.5重组人源化抗体的CHO细胞表达和分析
在用于表达大多数治疗性抗体的CHO细胞中表达实施例2.3中选择的5种重组人源化抗体并对所述抗体进行分析。将构建选择的5种重组人源化抗体的轻链可变区DNA序列和重链可变区DNA序列进行密码子优化，合成，并通过重叠PCR方法与人IgG1恒定区基因连接。用XhoI和EcoRI切割产物，并连接到pcDNA3.4载体(Life Technology公司)中。表11显示了选择用于CHO细胞表达的人源化抗体的轻链和重链组合。
下表14中显示了用于在可变区和恒定区基因上PCR的DNA引物序列。
[表14]
使用ExpiCHO(商标)表达系统试剂(ThermoFisher公司，目录号：A29133)瞬时转染5种重组人源化抗体，将表达的抗体转染到CD66c阳性的A549非小肺癌细胞系中并通过流式细胞仪进行分析，如图6a至图6c所示。所有5种重组人源化抗体均显示出与嵌合抗体相似的结合亲和力。将流式细胞仪的测量的荧光值除以CHO培养基的抗体表达量，获得相对于抗体表达量的抗体结合亲和力，如图6d所示。因此，确认了重组人源化抗体在CHO细胞中适当地表达。抗体与细胞表面的结合亲和力被确定为100％，图6d中显示了相对变化。
<实施例3>CHO细胞表达和DNP002的分析
在用于表达大多数治疗性抗体的CHO细胞中表达并分析了抗CD66c的人源化抗体DNP002。为了测试根据DNP002抗体亚型的功能差异，制备了IgG1型和IgG2型抗体。
在对用于构建人源化重组抗体的轻链可变区和重链可变区的DNA序列进行密码子优化后，将它们合成并通过重叠PCR方法与人IgG1或IgG2的恒定区连接，并将XhoI和EcoRI基因片段克隆到pcDNA3.4载体(Life Technology公司)中。
[表15]
为了制备去岩藻糖基化的DNP002人源化抗体，当表达DNP002 IgG1型抗体时，将2F-PF(2F-全乙酰基-岩藻糖；Merck公司，目录号：344827)以50uM添加到培养基中并进行培养，然后使用Mabselect sure蛋白A柱(GE Healthcare Lifescience公司，目录号：11003494)进行纯化。将纯化的抗体用磷酸盐缓冲液透析，将280nm处的吸光度除以1.4的吸光度系数并转换为“mg/mL”的浓度单位，然后用于随后的实验。
通过相对地比较与岩藻糖具有结合性质的生物素化小扁豆凝集素(Vectorlaboratories公司，目录号：B-1045)的反应性来评价去岩藻糖基化。岩藻糖缀合的IgG1 DNP002与生物素化小扁豆凝集素反应，并通过SA-HRP(Jackson immunoresearch公司，目录号：016-030-084)用于TMB显色。然而，去岩藻糖基化的DNP002的显色相对较少。
[表16]
<实施例4>DNP002抗体与MDSC的反应性的研究
通过流式细胞术分析评价DNP002抗体针对MDSC的反应性。
具体地，在从胃癌患者中制备血液后，将与APC结合的DNP002和针对具有不同荧光的MDSC标记抗原的抗体(抗HLA-DR-FITC、CD11b-PE、CD33-PE抗体)一起添加到100uL全血中，在4℃下反应20分钟。向产物中添加了5ml 1X RBC裂解缓冲液(ThermoFisher公司，目录号：00-4333-57)的红细胞(RBC)裂解缓冲液，在室温下反应30分钟，离心去除分解的RBC，再次用PBS洗涤，并通过流式细胞术进行。染色强度作为荧光强度的对数而被测量，并以数十为单位表示。
在结果分析中，在点阵图中根据细胞大小指定除了淋巴细胞以外的单核细胞区域和粒细胞区域后，选择了HLA-DR不表达或表达低的组，从这些组中选择CD11b和CD33呈阳性的组并指定为MDSC。确认了指定为MDSC组中DNP002的阳性率(图7)。
具体地，在图7的上图中从左到右方向，1)仅对FSC和SSC点阵图中除了淋巴细胞以外的单核细胞和粒细胞进行门控。(FSC：前向散射，指示待分析细胞大小的变量，SSC：侧向散射，指示待分析细胞的粒度和细胞中存在颗粒的程度的变量)，2)对HLA-DR低或(-)组进行门控，和3)在第一组和第二组中CD11b和CD33呈阳性的MDSC。DNP002阳性MDSC为90.9％(图7右点阵图中的右上方)，DNP002阴性MDSC为4.4％(图7右点阵图中的左上方)。MDSC分为单核细胞MDSC和粒细胞MDSC的亚型。粒细胞MDSC表达CD66b，但是单核细胞MDSC不表达CD66b，因此是否表达CD66b可用于区分MDSC亚型。
图7是对定义MDSC(淋巴细胞除外的HLA-DR低/(-)，CD11b+，CD33+)的方法以及对MDSC特异性的DNP002(抗CD66c)的反应性进行证明的结果。因为DNP002与MDSC结合，所以DNP002可以用作指定MDSC的方法(图7)，并且DNP002可以引起ADCC效应以去除MDSC(图8)。在以下测试结果中，与DNP002结合的MDSC为90.9％。
图8显示了通过DNP002处理杀伤CD66b阳性粒细胞MDSC并且其比率减少的现象。在图8中，点阵图上图(对照组)代表用DNP002处理之前的样品，而点阵图下图(DNP002)是用DNP002处理后的MDSC降低的结果。CD66b是可以区分单核细胞MDSC和粒细胞MDSC的标志物。在以下测试结果中，MDSC中的大多数是CD66b阳性的粒细胞MDSC，并且DNP002有效杀伤了粒细胞MDSC。
作为分析19名胃癌患者的血液的结果，所有PBMC中的MDSC上的DNP002的阳性率为34.3～76.7％，平均阳性率为55.1％。下表17是用19名胃癌患者的样品分析DNP002抗体与MDSC的反应性的结果。
[表17]
<实施例5>DNP002对MDSC的裂解效果
5.1.DNP002对全血MDSC的裂解效果
为了检查DNP002对MDSC的杀伤效果，向5名胃癌患者的血液中添加1XRBC裂解缓冲液(ThermoFisher公司，目录号：00-4333-57)的红细胞裂解缓冲液以溶解红细胞，然后在12孔板的每孔中倒入产物1×105个。将DNP002抗体以10ug/mL的浓度添加至每个孔，并在37℃的培养箱中温育一天。温育后，将细胞用PBS洗涤，并在4℃下与具有不同荧光的抗MDSC标记的抗原的抗体(抗HLA-DR，CD11b，CD33抗体)反应20分钟。用PBS洗涤后，进行流式细胞术。染色强度作为荧光强度的对数而被测量，并以数十为单位表示。
作为以上实验的结果，图8显示了代表性的结果，其中DNP002抗体有效诱导血液中MDSC的凋亡，并且与用DNP002抗体进行预处理相比，MDSC的比率显著降低。图9是示出针对5名胃癌患者的血液样品进行与图8相同的测试的图。空心柱表示在DNP002处理之前的MDSC的比率，而实心柱表示在DNP002处理之后的MDSC的相对比率。DNP002处理后，可以看出所有5名患者样品的MDSC比率均已显著降低。
5.2 DNP002对PBMC中的MDSC的裂解效果
为了更清楚地阐明DNP002抗体的MDSC靶向杀伤能力，在排除成熟嗜中性粒细胞的情况下仅获得MDSC，并且在没有嗜中性粒细胞的效果的情况下测试DNP002抗体的MDSC杀伤效果。
具体地，使用Ficoll-Paque PLUS(Ge Healthcare公司，目录号：17-1440-02)溶液从两名胃癌患者的血液中仅分离出含有MDSC的PBMC层。通过Ficoll溶液进行的血细胞密度梯度分离有效地排除了成熟的嗜中性粒细胞，所以可以更准确地分析MDSC的杀伤效果。将制备的PBMC以1×105个/孔分配到12孔板中，并将DNP002抗体以10μg/mL的浓度添加到每个孔中，然后在37℃下温育48小时。此时，使用针对PD-1的抗体纳武单抗(Bristol-MyersSquibb公司)比较MDSC的杀伤能力。培养后，用PBS洗涤细胞，并通过流式细胞术分析MDSC组的增加或减少(图10)。
作为流式细胞术的结果，与未进行DNP002处理的组相比，DNP002处理的组显示出平均约49％的凋亡。另一方面，用作对照的纳武单抗仅显示约24％的MDSC杀伤效果。在从两名患者中分离出的种MDSC中，MDSC的杀伤效果均相同。因此，该实验确认了DNP002抗体杀伤MDSC的效果是显著的。
分别针对全血(实施例5.1)和PBMC(外周血单核细胞；实施例5.2)确认DNP002对MDSC的裂解效果。在全血和PBMC中，包括可以诱导ADCC的患者的NK细胞，可以通过DNP002以ADCC裂解CEACAM6阳性细胞。然而，在全血中，对CEACAM6靶抗原呈阳性的嗜中性粒细胞与MDSC混合在一起，很难说只选择性地裂解MDSC。为了阐明DNP002对MDSC的选择性裂解，在通过离心进行层分离而去除嗜中性粒细胞的PBMC上进行另外的实验(实施例5.2)。因此，确认了DNP002对MDSC的裂解是明显的。
<实施例6>不同抗体同种型对MDSC的裂解效果
为了测试DNP002抗体杀伤MDSC靶标的能力，制备了三种类型的DNP002抗体。抗体取决于抗体的同种型而对NK细胞上表达的FcrRIII(CD16)的亲和力不同，并且抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)与亲和力成正比。IgG2同种型对FcrRIII的亲和力非常低并且不具有ADCC功效，而IgG1同种型对FcrRIII的亲和力高并且具有优异的ADCC功效。已经报道了，抗体的ADCC功效不仅取决于同种型，还取决于与抗体的第297位天冬酰胺连接的糖链结构。特别地，当糖链中没有岩藻糖时，ADCC功效会提高(Shitara K.等人,J ImmunolMethods.2005Nov 30；306(1-2)通过从Asn297连接的寡糖中去除岩藻糖来进行IgG亚类依赖性的抗体依赖性细胞毒性的改善(IgG subclass-independent improvement ofantibody-dependent cellular cytotoxicity by fucose removal from Asn297-linkedoligosaccharides))。
进行了体外测试，以测试取决于DNP002抗体的同种型和去岩藻糖基化的杀伤MDSC靶标的能力。向5名胃癌患者的血液中添加1XRBC裂解缓冲液(ThermoFisher公司，目录号：00-4333-57)的RBC裂解缓冲液，然后在12孔板的每孔中倒入产物1×105个。将诸如DNP002IgG1型、DNP002 IgG2型和去岩藻糖基化的IgG1型三种抗体以10ug/mL的浓度添加至每个孔，并在37℃的培养箱中温育一天。温育后，将细胞用PBS洗涤，并在4℃下与具有不同荧光的抗MDSC标记的抗原的抗体(抗HLA-DR，CD11b，CD33抗体)反应20分钟。用PBS洗涤后，进行流式细胞术。染色强度作为荧光强度的对数而被测量，并以数十为单位表示。
观察到，在作为测试受试者的所有五位胃癌患者中，MDSC杀伤效果按IgG2、IgG1和去岩藻糖基化的IgG1类型的顺序增加(图11a和11b)。根据同种型和去岩藻糖基化程度(岩藻糖含量小于10％)的MDSC杀伤效果的差异可以通过抗体对FcrRIII的亲和力差异来考虑，MDSC杀伤效果可以理解为NK细胞导致的ADCC效果。
如图11a所示，这是证实了能够有效去除MDSC的DNP002制剂类型的代表性结果。与上图(对照)相比，DNP002 IgG2中保留了MDSC中的大部分，但DNP002 IgG1中的MDSC比例却显著降低。该测试确认了，DNP002 IgG1对MDSC的杀伤效果显著高，而DNP002 IgG2对MDSC的杀伤效果不显著。由于与IgG1同种型相比，IgG2同种型的ADCC效应不存在或非常低，因此通过ADCC推断出DNP002 IgG1对MDSC的杀伤效果。
如图11b所示，在5名胃癌患者的血液样品中进行了与图9相同的测试并绘图，并且图中的水平轴代表5名胃癌患者中的每一名(P#1、P#2、P#3、P#4、P#5)。以对照、IgG2、IgG1和去岩藻糖基化的IgG1的顺序观察到MDSC的杀伤作用。IgG2同种型由于不具有ADCC功能而没有MDSC杀伤效果或MDSC杀伤效果不显著，但是在具有ADCC功能的IgG1以及ADCC功能通过去岩藻糖基化作用而增强的IgG1-去岩藻糖基化中，MDSC杀伤效果优异。
<实施例7>DNP002与自然杀伤细胞联合使用的癌症细胞杀伤效果
进行了体外测试，以测试DNP002抗体和自然杀伤(NK)细胞的联合作用。使用Ficoll-Paque PLUS(Ge Healthcare公司，目录号：17-1440-02)溶液从三名的正常血液中分离PBMC后，使用CD56微珠(Miltenyi Biotec公司，目录号：130-050-401)仅分离出CD56阳性的自然杀伤细胞。在图12a和12b中，水平轴分别代表是自然杀伤细胞的来源的三名献血者。
将对DNP002的靶抗原CEACAM6呈阳性的胃癌细胞系A549和胰腺癌细胞系AsPC-1以每孔1×104个分配到96孔板中，并以每孔2×105个分配先前分离的自然杀伤细胞，用10μg/mL的DNP002抗体处理，然后在37℃下温育6小时。
作为使用EZ-cytox增强型细胞活力试剂盒(Daeil Lab公司)测量细胞活力的结果，确认了与单一处理相比，DNP002抗体和自然杀伤细胞联合在两种癌细胞系中的凋亡效应均有增强(图12a和图12b)。
这表明通过与自然杀伤细胞的联合，DNP002的癌细胞杀伤能力显著增强。由此表明，对于有效去除CEACAM6阳性MDSC以及CEACAM6阳性癌细胞，与NK细胞或NK细胞治疗剂的联合治疗可以是优异的。
实施例5.2中通过DNP002对MDSC的选择性裂解以及实施例7中与NK细胞或NK细胞治疗剂的联合效果证实，可以消除作为靶标的CEACAM6阳性癌细胞和CEACAM6阳性MDSC。尽管实施例5.2和实施例7分别显示了针对不同靶细胞(如MDSC和癌细胞)的ADCC，但是在癌症患者中两种类型的细胞实际上同时增加的情况下，DNP002可以同时去除两种类型的靶标，并且可以与NK细胞治疗剂联合使用，以使同时去除癌细胞和MDSC靶标的功效加倍。
<实施例8>CEACAM6阴性患者的癌症微环境中MDSC的检测
由于CEACAM6抗原不仅在癌细胞中表达，而且也在MDSC中表达，因此使用DNP002抗体不仅可以检测癌细胞，而且可以检测MDSC。为了测试这一点，通过免疫组织化学(Immunohistochemistry)，在具有阳性或阴性CEACAM6抗原的癌症患者组织中检测了MDSC而非癌细胞。
免疫组织化学染色以如下方式进行。将组织在二甲苯中脱蜡10分钟，进行3次，在100％酒精中10分钟，进行2次，在80％酒精中5分钟，在70％酒精中3分钟，然后用三蒸水洗涤。然后，通过在室温下在0.03％的H2O2中浸渍10分钟来进行过氧化物酶封闭，并用三蒸水洗涤。立即将载玻片放入1X柠檬酸盐缓冲液(柠檬酸盐缓冲液，pH 6.0)中，在沸腾的自来水中加热20分钟，缓慢冷却，用三蒸水洗涤，再用1X PBS洗涤。将作为DNP002的单克隆抗体的8F5抗体在室温下在组织区域上以每载玻片150ul(10ug/ml)反应90±5分钟。反应后，将载玻片用1X PBS洗涤4次，每次5分钟。使二抗以每片载玻片100ul在室温下反应20分钟，反应后，用1X PBST洗涤4次，每次5分钟。以每片载玻片100ul使DAB色原在室温下显影3分钟，并用自来水洗涤载玻片10分钟。在室温下将梅氏苏木精(Mayer's Hematoxylin)以每片载玻片100ul复染3分钟，然后在流动的自来水下洗涤10分钟。脱水后，放置载玻片。
作为对癌细胞中CEACAM6阳性的肺腺癌以及对癌细胞自身中CEACAM6阴性的肺鳞状细胞癌、尿膀胱癌和恶性黑素瘤进行CEACAM6免疫染色的结果，确认了在癌组织的非肿瘤部位中存在CEACAM6阳性的MDSC(图13)。这表明，无论CEACAM6抗原在癌组织中或癌细胞自身中的表达如何，浸润在癌组织周围的MDSC都可以作为诊断和治疗的靶标使用。
无论CEACAM6在癌细胞的细胞表面上的程度如何，MDSC倾向于在癌症患者中增加，这可以检测并确认渗透到肿瘤微环境中的MDSC，如实施例8所示。当与显示选择性裂解MDSC的实施例5.2的结果一起考虑时，这表明，无论CEACAM6在癌细胞上是否为阳性，MDSC都可以用作诊断和治疗目的的靶标。癌细胞的细胞表面上存在或不存在CEACAM6的表达可以根据癌症类型而不同，但是无论怎样，在大多数癌症类型中MDSC都会增加。因此，这表明DNP002可通过靶向MDSC而在大多数癌症中用于诊断和治疗目的。
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<223> 小鼠或嵌合抗CD66c抗体的CDR-H2
<400> 2
Leu Ile Asn Pro Phe His Gly Gly Thr Val Ser Asn Gln Arg Phe Lys
1 5 10 15
Val
<210> 3
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 小鼠或嵌合抗CD66c抗体的CDR-H3
<400> 3
Val Arg Gly Asp Pro Val Arg His Tyr Tyr Ala Leu Ala Tyr
1 5 10
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 小鼠或嵌合抗CD66c抗体的CDR-L1
<400> 4
Gly Ala Ser Glu Asn Val Tyr Gly Thr Leu Asn
1 5 10
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 小鼠或嵌合抗CD66c抗体的CDR-L2
<400> 5
Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp
1 5
<210> 6
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 小鼠或嵌合抗CD66c抗体的CDR-L3
<400> 6
Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Ser Ala Pro Tyr Thr
1 5 10 15
<210> 7
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 小鼠或嵌合抗CD66c抗体的重链可变区
<400> 7
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Phe His Gly Gly Thr Val Ser Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Val Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Val Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Asp Pro Val Arg His Tyr Tyr Ala Leu Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 8
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 小鼠或嵌合抗CD66c抗体的轻链可变区
<400> 8
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Gly Ala Ser Glu Asn Val Tyr Gly Thr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Arg Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Met Ser Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Arg Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Ser Ser Leu His Pro
65 70 75 80
Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Ser Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Ile
100 105
<210> 9
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的CDR-H1
<400> 9
Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Thr Met His
1 5 10
<210> 10
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的CDR-H2
<400> 10
Leu Ile Asn Pro Phe Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 11
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的CDR-L1
<400> 11
Gly Ala Ser Glu Asn Val Tyr Gly Thr Leu Ala
1 5 10
<210> 12
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的CDR-L1
<400> 12
Arg Ala Ser Glu Asn Val Tyr Gly Thr Leu Asn
1 5 10
<210> 13
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的CDR-L3
<400> 13
Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Ser Ala Pro Tyr Thr
1 5 10 15
<210> 14
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区 (8F5-人-VH5)
<400> 14
Phe His Met Ala Asn Val His Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala
1 5 10 15
Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala His
35 40 45
Gly Gln Asn Leu Glu Trp Ile Gly Leu Ile Asn Pro Phe His Gly Gly
50 55 60
Thr Val Ser Asn Gln Arg Phe Lys Val Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp
65 70 75 80
Val Ser Thr Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp
85 90 95
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Gly Asp Pro Val Arg His Tyr
100 105 110
Tyr Ala Leu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 15
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区(8F5-人-VH6)
<400> 15
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Asn Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Phe His Gly Gly Thr Val Ser Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Val Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Val Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Asp Pro Val Arg His Tyr Tyr Ala Leu Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 16
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区(8F5-人-VH7)
<400> 16
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Phe His Gly Gly Thr Val Ser Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Val Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Val Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Asp Pro Val Arg His Tyr Tyr Ala Leu Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 17
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区(8F5-人-VH10)
<400> 17
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Asn Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Phe His Gly Gly Thr Val Ser Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Val Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Val Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Asp Pro Val Arg His Tyr Tyr Ala Leu Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 18
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区(8F5-人-VH11)
<400> 18
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Asn Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Phe Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Asp Pro Val Arg His Tyr Tyr Ala Leu Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 19
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的轻链可变区(8F5-人-VK5)
<400> 19
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gly Ala Ser Glu Asn Val Tyr Gly Thr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Arg Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Ser Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 20
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的轻链可变区(8F5-人-VK7)
<400> 20
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gly Ala Ser Glu Asn Val Tyr Gly Thr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Ser Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 21
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的轻链可变区(8F5-人-VK8)
<400> 21
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Val Tyr Gly Thr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Met Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Ser Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 22
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 嵌合抗CD66c抗体的重链可变区中的框架1
<400> 22
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys
20
<210> 23
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区中的框架1 (8F5-人-VH5)
<400> 23
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys
20
<210> 24
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区中的框架1 (8F5-人-VH6)
<400> 24
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys
20
<210> 25
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区中的框架1(8F5-人-VH7)
<400> 25
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys
20
<210> 26
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区中的框架1(8F5-人-VH10)
<400> 26
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys
20
<210> 27
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区中的框架1(8F5-人-VH11)
<400> 27
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys
20
<210> 28
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 嵌合抗CD66c抗体的轻链可变区中的框架1
<400> 28
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 29
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的轻链可变区中的框架1 (8F5-人-VK5)
<400> 29
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 30
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的轻链可变区中的框架1(8F5-人-VK7)
<400> 30
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 31
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的轻链可变区中的框架1(8F5-人-VK8)
<400> 31
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 32
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 嵌合抗CD66c抗体的重链可变区中的框架2
<400> 32
Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 33
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区中的框架2 (8F5-人-VH5)
<400> 33
Trp Val Arg Gln Ala His Gly Gln Asn Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 34
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区中的框架2 (8F5-人-VH6)
<400> 34
Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Asn Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 35
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区中的框架2(8F5-人-VH7)
<400> 35
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 36
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区中的框架2(8F5-人-VH10)
<400> 36
Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Asn Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 37
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区中的框架2(8F5-人-VH11)
<400> 37
Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Asn Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 38
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 嵌合抗CD66c抗体的轻链可变区中的框架2
<400> 38
Trp Tyr Gln Arg Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 39
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的轻链可变区中的框架2(8F5-人-VK5)
<400> 39
Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 40
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的轻链可变区中的框架2(8F5-人-VK6)
<400> 40
Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 41
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的轻链可变区中的框架2(8F5-人-VK8)
<400> 41
Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 42
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 嵌合抗CD66c抗体的重链可变区中的框架3
<400> 42
Asn Gln Arg Phe Lys Val Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Val Ser Ser
1 5 10 15
Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala
20 25 30
Val Tyr Tyr Cys Val Arg
35
<210> 43
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区中的框架3(8F5-人-VH5)
<400> 43
Asn Gln Arg Phe Lys Val Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Val Ser Thr
1 5 10 15
Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala
20 25 30
Val Tyr Tyr Cys Val Arg
35
<210> 44
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区中的框架3(8F5-人-VH6)
<400> 44
Asn Gln Arg Phe Lys Val Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Val Ser Thr
1 5 10 15
Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala
20 25 30
Val Tyr Tyr Cys Val Arg
35
<210> 45
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区中的框架3 (8F5-人-VH7)
<400> 45
Asn Gln Arg Phe Lys Val Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Val Ser Thr
1 5 10 15
Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala
20 25 30
Val Tyr Tyr Cys Val Arg
35
<210> 46
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区中的框架3(8F5-人-VH10)
<400> 46
Asn Gln Arg Phe Lys Val Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Val Ser Thr
1 5 10 15
Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala
20 25 30
Val Tyr Tyr Cys Val Arg
35
<210> 47
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区中的框架3(8F5-人-VH11)
<400> 47
Ala Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr
1 5 10 15
Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala
20 25 30
Val Tyr Tyr Cys Val Arg
35
<210> 48
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 嵌合抗CD66c抗体的轻链可变区中的框架3
<400> 48
Gly Met Ser Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Gln Tyr Ser
1 5 10 15
Leu Lys Ile Ser Ser Leu His Pro Asp Asp
20 25
<210> 49
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的轻链可变区中的框架3(8F5-人-VK5)
<400> 49
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Gln Tyr Ser
1 5 10 15
Leu Lys Ile Ser Ser Leu His Pro Asp Asp
20 25
<210> 50
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的轻链可变区中的框架3(8F5-人-VK7)
<400> 50
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp
20 25
<210> 51
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的轻链可变区中的框架3(8F5-人-VK8)
<400> 51
Gly Met Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp
20 25
<210> 52
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 嵌合抗CD66c抗体的轻链可变区中的框架4
<400> 52
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 53
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区中的框架4(8F5-人-VH5)
<400> 53
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 54
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区中的框架4(8F5-人-VH6)
<400> 54
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 55
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区中的框架4(8F5-人-VH7)
<400> 55
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 56
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区中的框架4(8F5-人-VH10)
<400> 56
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 57
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的重链可变区中的框架4(8F5-人-VH11)
<400> 57
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 58
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 嵌合抗CD66c抗体的轻链可变区中的框架4
<400> 58
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Ile
1 5 10
<210> 59
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的轻链可变区中的框架4(8F5-人-VK5)
<400> 59
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 60
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的轻链可变区中的框架4(8F5-人-VK7)
<400> 60
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 61
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗CD66c抗体的轻链可变区中的框架4(8F5-人-VK8)
<400> 61
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 62
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码嵌合抗CD66c抗体的重链可变区的多核苷酸
<400> 62
gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgaa ctggtgaagc ctggagcttc aatgaagata 60
tcctgcaagg cttctggtta ctcattcact gactacacca tgaactgggt gaagcagagc 120
catggaaaga accttgagtg gattggactt attaatcctt tccatggtgg tactgtctcc 180
aaccagaggt tcaaggtcaa ggccacatta actgtagaca agtcatccaa cacagcctac 240
atggagctcc tcagtctgac atctgacgac tctgcggtct attactgtgt aagaggtgac 300
ccggtccgcc attactatgc tttggcctac tggggtcagg gaacctcagt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 63
<211> 217
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码嵌合抗CD66c抗体的轻链可变区的多核苷酸
<400> 63
gacatccaga tgactcagtc tccagcttca ctgtctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 60
atcacatgtg gagcaagtga gaatgtttac ggtactttaa attggtatca gcggaaacag 120
ggaaaatctc ctcagctcct gatctatggt gcaaccaact tggcagatgg catgtcatcg 180
aggttcagtg gcagtggttc tggtagacag tattctc 217
<210> 64
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 第一片段正向的8F01引物
<400> 64
attactcgag gccaccatga a 21
<210> 65
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 第一片段反向的8F02引物
<400> 65
agttgaagcg ctgctcacag tca 23
<210> 66
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 第二片段正向的8F03引物
<400> 66
gtgagcagcg cttcaactaa ggg 23
<210> 67
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 第一片段反向的3E04引物
<400> 67
agtcgaattc tcatttccca ggagag 26
<210> 68
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 第一片段反向的8F04引物
<400> 68
agttgaagca gaagacactg tca 23
<210> 69
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 第一片段正向的8F05引物
<400> 69
gtgtcttctg cttcaactaa ggg 23
<210> 70
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 第一片段正向的3E01引物
<400> 70
attactcgag gccaccatga agtggg 26
<210> 71
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 第一片段反向的8F06引物
<400> 71
aacagtccgc ttgatctcca gct 23
<210> 72
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 第二片段正向的3EL02(2)引物
<400> 72
gagatcaagc ggactgttgc tgc 23
<210> 73
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 第二片段反向的3E08引物
<400> 73
attagaattc tcagcactcg ccgcgg 26
<210> 74
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IgG1的重链恒定区
<400> 74
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 75
<211> 993
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IgG1的重链恒定区的DNA序列
<400> 75
gcttcaacta agggaccaag cgtattccca cttgctccat ctagcaagag cactagcgga 60
ggaacagctg ctttggggtg tttggtaaag gattactttc ccgaacctgt taccgtgagc 120
tggaacagcg gggctttgac aagtggcgtt catacatttc ctgccgtttt gcaaagcagc 180
ggcttgtata gcttgagctc tgttgttacc gttccaagct catctctggg cacacaaaca 240
tacatctgca acgtgaacca caagccctca aacaccaagg tggacaagaa ggtggagcca 300
aagtcttgcg acaagaccca cacctgtcca ccttgtccag cccctgaact cctggggggc 360
ccttcagttt ttctctttcc tcctaaacct aaagatacac tcatgatcag tcggacccct 420
gaagttacct gtgtggtggt cgatgtgtct catgaagatc ctgaagtcaa gtttaactgg 480
tatgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagaccaagc ctcgggagga gcaatataat 540
tctacctatc gcgtcgtctc tgtcctcacc gtcctgcatc aggactggct gaatggcaaa 600
gagtataagt gcaaagtcag taacaaagcc ctccccgccc ccatagagaa aaccattagt 660
aaagccaaag ggcagccccg cgagccccag gtctatacac tgccccccag tagagacgag 720
ctgacaaaga atcaggtgtc tctgacatgc ctggtgaaag gcttttatcc ctctgacatt 780
gccgtcgagt gggagtctaa tgggcagccc gagaataatt ataagacaac accccccgtg 840
ctggacagtg acggctcatt tttcctgtat tcaaaactga cagtggacaa aagtcggtgg 900
cagcagggga atgtgttttc atgcagtgtc atgcacgagg ccctccacaa tcactatacc 960
cagaaatctc tgagtctctc tcctgggaaa tga 993
<210> 76
<211> 326
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IgG2的重链恒定区
<400> 76
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 77
<211> 981
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IgG2的重链恒定区的DNA序列
<400> 77
gcttccacca agggcccatc cgtgttccct ctggccccat gttctaggtc tacatctgag 60
agcaccgccg ccctcggctg tctggtgaag gattatttcc ccgagcccgt gaccgtgtct 120
tggaacagcg gagccctgac tagcggagtg cacaccttcc cagctgtgct gcagagctcc 180
ggcctgtaca gcctctcttc tgtggtgacc gtgccctcta gcaacttcgg aacacagacc 240
tacacatgta acgtggatca caagccttcc aacaccaagg tggataagac cgtggagaga 300
aagtgctgtg tggagtgccc tccatgtcct gccccacctg tggctggacc ttctgtgttt 360
ctgttccctc caaagccaaa ggataccctg atgatcagca gaactcctga ggtgacctgt 420
gtggtggtgg acgtgagcca cgaggatcct gaggtgcagt ttaactggta cgtggatggc 480
gtggaggtgc ataacgctaa gacaaagcct agggaggagc agtttaacag caccttcaga 540
gtggtgagcg tgctgaccgt ggtgcaccag gattggctga acggcaagga gtataagtgt 600
aaggtgtcta acaagggcct gccagcccct attgagaaga ccatcagtaa gaccaaggga 660
cagcctaggg agcctcaggt gtacaccctg cctccttcca gagaggagat gacaaagaac 720
caggtgagcc tgacctgtct ggtgaagggc ttctacccta gcgatatcgc cgtggagtgg 780
gagagcaacg gccagcctga gaacaactac aagaccaccc cacctatgct ggacagcgat 840
ggctctttct tcctgtactc taagctgacc gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac 900
gtgttttctt gttctgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaagtctctg 960
tctctgtctc caggcaagtg a 981
<210> 78
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 轻链恒定区
<400> 78
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 79
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 轻链恒定区的DNA序列
<400> 79
cggactgttg ctgctccatc tgtttttata tttcctccca gcgacgagca gctgaaaagc 60
ggcactgcct ctgtggtgtg tctgctgaat aatttttacc cccgggaagc caaagtccag 120
tggaaggtgg ataatgccct ccagtctggg aacagtcagg aaagtgtgac agaacaggat 180
agtaaggact ctacttatag cctctcttct acactgactc tgtcaaaggc cgactatgag 240
aagcataaag tgtatgcctg cgaggtgaca catcagggcc tgagttcacc cgtgacaaaa 300
tcttttaacc gcggcgagtg ctga 324

Claims (5)

1.一种免疫增强剂，包含与CD66c(分化簇66c)特异性结合的抗体，所述CD66c在髓样来源的抑制细胞(MDSC)中表达，
其中，所述抗体是去岩藻糖基化IgG1型抗体并且是人源化的，并且
所述抗体包括以下互补决定区(CDR)：
(1)CDR-H1，其由SEQ ID NO：1的氨基酸序列组成，
CDR-H2，其由SEQ ID NO：2的氨基酸序列组成，
CDR-H3，其由SEQ ID NO：3的氨基酸序列组成，
CDR-L1，其由SEQ ID NO：4的氨基酸序列组成，
CDR-L2，其由SEQ ID NO：5的氨基酸序列组成，和
CDR-L3，其由SEQ ID NO：13的氨基酸序列组成；
(2)CDR-H1，其由SEQ ID NO：1的氨基酸序列组成，
CDR-H2，其由SEQ ID NO：2的氨基酸序列组成，
CDR-H3，其由SEQ ID NO：3的氨基酸序列组成，
CDR-L1，其由SEQ ID NO：12的氨基酸序列组成，
CDR-L2，其由SEQ ID NO：5的氨基酸序列组成，和
CDR-L3，其由SEQ ID NO：13的氨基酸序列组成；
(3)CDR-H1，其由SEQ ID NO：9的氨基酸序列组成，
CDR-H2，其由SEQ ID NO：10的氨基酸序列组成，
CDR-H3，其由SEQ ID NO：3的氨基酸序列组成，
CDR-L1，其由SEQ ID NO：12的氨基酸序列组成，
CDR-L2，其由SEQ ID NO：5的氨基酸序列组成，和
CDR-L3，其由SEQ ID NO：13的氨基酸序列组成；或
(4)CDR-H1，其由SEQ ID NO：1的氨基酸序列组成，
CDR-H2，其由SEQ ID NO：2的氨基酸序列组成，
CDR-H3，其由SEQ ID NO：3的氨基酸序列组成，
CDR-L1，其由SEQ ID NO：11的氨基酸序列组成，
CDR-L2，其由SEQ ID NO：5的氨基酸序列组成，和
CDR-L3，其由SEQ ID NO：13的氨基酸序列组成。
2.权利要求1所述的免疫增强剂，其中，所述抗体的重链可变区包含以下框架序列：
(1)V-FR1，其由SEQ ID NO：24的氨基酸序列组成；
V-FR2，其由SEQ ID NO：34的氨基酸序列组成；
V-FR3，其由SEQ ID NO：44的氨基酸序列组成；和
V-FR4，其由SEQ ID NO：54的氨基酸序列组成；
(2)V-FR1，其由SEQ ID NO：25的氨基酸序列组成；
V-FR2，其由SEQ ID NO：35的氨基酸序列组成；
V-FR3，其由SEQ ID NO：45的氨基酸序列组成；和
V-FR4，其由SEQ ID NO：55的氨基酸序列组成；
(3)V-FR1，其由SEQ ID NO：26的氨基酸序列组成；
V-FR2，其由SEQ ID NO：36的氨基酸序列组成；
V-FR3，其由SEQ ID NO：46的氨基酸序列组成；和
V-FR4，其由SEQ ID NO：56的氨基酸序列组成；或
(4)V-FR1，其由SEQ ID NO：27的氨基酸序列组成；
V-FR2，其由SEQ ID NO：37的氨基酸序列组成；
V-FR3，其由SEQ ID NO：47的氨基酸序列组成；和
V-FR4，其由SEQ ID NO：57的氨基酸序列组成。
3.权利要求1所述的免疫增强剂，其中，所述抗体的轻链可变区包含以下框架序列：
(1)L-FR1，其由SEQ ID NO：29的氨基酸序列组成；
L-FR2，其由SEQ ID NO：39的氨基酸序列组成；
L-FR3，其由SEQ ID NO：49的氨基酸序列组成；和
L-FR4，其由SEQ ID NO：59的氨基酸序列组成；
(2)L-FR1，其由SEQ ID NO：30的氨基酸序列组成；
L-FR2，其由SEQ ID NO：40的氨基酸序列组成；
L-FR3，其由SEQ ID NO：50的氨基酸序列组成；和
L-FR4，其由SEQ ID NO：60的氨基酸序列组成；或
(3)L-FR1，其由SEQ ID NO：31的氨基酸序列组成；
L-FR2，其由SEQ ID NO：41的氨基酸序列组成；
L-FR3，其由SEQ ID NO：51的氨基酸序列组成；和
L-FR4，其由SEQ ID NO：61的氨基酸序列组成。
4.权利要求1所述的免疫增强剂，其中，所述抗体包括以下可变区：
(1)重链可变区，其由SEQ ID NO：15的氨基酸序列组成；和
轻链可变区，其由SEQ ID NO：21的氨基酸序列组成；
(2)重链可变区，其由SEQ ID NO：18的氨基酸序列组成；和
轻链可变区，其由SEQ ID NO：21的氨基酸序列组成；
(3)重链可变区，其由SEQ ID NO：16的氨基酸序列组成；和
轻链可变区，其由SEQ ID NO：19的氨基酸序列组成；
(4)重链可变区，其由SEQ ID NO：15的氨基酸序列组成；和
轻链可变区，其由SEQ ID NO：20的氨基酸序列组成；或
(5)重链可变区，其由SEQ ID NO：17的氨基酸序列组成；和
轻链可变区，其由SEQ ID NO：20的氨基酸序列组成。
5.一种用于治疗MDSC相关疾病的药物组合物，包含根据权利要求1至4中任一项所述的免疫增强剂，其中，所述MDSC相关疾病为胃癌或胰腺癌。
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