CN112105380A - 网蛋白-1结合抗体和其用途 - Google Patents
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Abstract
本公开的方面提供了用于治疗以网蛋白‑1的表面表达为特征的癌症的组合物和方法。本公开部分地涉及共同(例如,协同地)起作用以抑制癌细胞生长的治疗剂的组合(例如,抗网蛋白‑1抗体和某些小分子)。在一些实施例中,本公开涉及抗网蛋白‑1抗体‑药物缀合物(ADC)。
Description
相关申请的交叉引用
本申请根据35U.S.C.119(e)要求于2017年10月11日提交的题为“网蛋白-1结合抗体和其用途(PLECTIN-1BINDING ANTIBODIES AND USES THEREOF)”的美国临时申请序列号62/571,246的提交日期的权益,所述美国临时申请的全部内容通过引用并入本文中。
背景技术
胰腺导管腺癌(PDAC)是美国癌症死亡的第4大原因,显示出导致死亡的快速临床病程。一旦确诊,PDAC的中位生存期为6个月,5年生存率仅为3%(Li等人,《柳叶刀(Lancet)》,363:1049-1057(2004))。
由于化疗和放疗的益处不大,并且只有20%的患者可以进行手术,因此允许手术切除的早期检测为更长的生存期提供了最好的希望(Yeo等人,《外科学年鉴(Ann Surg)》,222:580-588(1995);讨论588-592)。事实上,在高风险患者群体(例如,遗传性癌症综合征、慢性胰腺炎和新发糖尿病)中检测和治疗PDAC病或高级前驱体代表了癌症诊断组合中一个关键的未满足需求(Brentnall等人,《内科学年鉴(Ann.Intern.Med.)》,131:247-255(1999);Canto等人,《临床胃肠病学和肝脏病学(Clin.Gastroenterol.Hepatol)》),2:606-621(2004)。
发明内容
在一些方面,本公开涉及用于治疗某些癌症(例如,胰腺癌、卵巢癌等)的组合物和方法。本公开部分地基于一起(例如,协同地)起作用以抑制癌细胞生长的作为单一组合施用或单独施用的抗网蛋白-1抗体和抗癌剂(例如,小分子,如吉西他滨、吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)等)的组合。在一些实施例中,所述组合被配制成产生抗体-药物-缀合物(ADC)。
本公开的方面基于与暴露于细胞(例如癌细胞)表面上的网蛋白-1特异性结合的网蛋白-1抗体。因此,在一些方面,本公开提供了一种组合物,其包括:抗体,所述抗体与暴露于癌细胞表面上的网蛋白-1特异性结合;和一种或多种抗癌剂,其中所述抗体与所述抗癌剂不相连。
在一些方面,本公开提供了一种组合物,其包括抗体或抗原结合片段,所述抗体或抗原结合片段与和SEQ ID NO:2具有至少85%同一性的氨基酸序列(例如,和SEQ ID NO:2具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%同一性的氨基酸序列)特异性结合;以及抗癌剂,其中所述抗体与所述抗癌剂不相连。在一些实施例中,抗网蛋白-1抗体和抗癌剂协同作用(例如,通过Chou-Talalay方法测量)。
在一些实施例中,抗体或抗原结合片段包括具有如SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:67所示的序列的重链可变区。在一些实施例中,抗体或抗原结合片段包括具有如SEQ ID NO:45或SEQ ID NO:89所示的序列的轻链可变区。
在一些实施例中,抗体包括具有如SEQ ID NO:23所示的序列的重链可变区和具有如SEQ ID NO:45所示的序列的轻链可变区。
在一些实施例中,抗体包括具有如SEQ ID NO:67所示的序列的重链可变区和具有如SEQ ID NO:89所示的序列的轻链可变区。
在一些实施例中,抗体或抗原结合片段与细胞表面暴露的网蛋白-1(例如,在细胞(例如癌细胞)表面表达的网蛋白-1)结合。
在一些实施例中,抗癌剂选自由以下组成的组:凯素(Abraxane)(白蛋白稳定化紫杉醇纳米颗粒调配物)、Adrucil(氟尿嘧啶)、飞尼妥(Afinitor)(依维莫司)、Efudex(氟尿嘧啶)、埃罗替尼盐酸盐、依维莫司、Fluoroplex(氟尿嘧啶)、氟尿嘧啶、盐酸吉西他滨、健择(Gemzar)(盐酸吉西他滨)、丝裂霉素C、Mitozytrex(丝裂霉素C)、密吐霉素(丝裂霉素C)、白蛋白稳定化紫杉醇纳米颗粒调配物、苹果酸舒尼替尼、索坦(Sutent)(苹果酸舒尼替尼)、和特罗凯(Tarceva)(埃罗替尼盐酸盐)、六甲蜜胺、爱克兰(Alkeran)(马法兰)、阿瓦斯汀(Avastin)(贝伐单抗(Bevacizumab))、贝伐单抗、卡铂、Clade(环磷酰胺)、顺铂、环磷酰胺、癌得星(Cytoxan)(环磷酰胺)、盐酸多柔比星、Dox-SL(盐酸多柔比星脂质体)、DOXIL(盐酸多柔比星脂质体)、盐酸多柔比星脂质体、Evacet(盐酸多柔比星脂质体)、盐酸吉西他滨、健择(盐酸吉西他滨)、和美新(Hycamtin)(盐酸拓扑替康)、LipoDox(盐酸多柔比星脂质体)、利普卓(Lynparza)(奥拉帕尼)、马法兰、Neosar(环磷酰胺)、尼拉帕尼甲苯磺酸一水合物、奥拉帕尼、紫杉醇、Paraplat(卡铂)、铂尔定(Paraplatin)(卡铂)、Platinol(顺铂)、Platinol-AQ(顺铂)、Rubraca(瑞卡帕布樟脑磺酸盐(Rucaparib Camsylate))、瑞卡帕布樟脑磺酸盐、泰素(Taxol)(紫杉醇)、噻替派、盐酸拓扑替康、以及则乐(Zejula)(尼拉帕尼甲苯磺酸一水合物)。在一些实施例中,所述抗癌剂是吉西他滨(gem)或顺铂。
在一些方面,本公开提供了一种抗体-药物-缀合物(ADC),所述ADC包括与一个或多个抗癌剂分子(例如2至100个抗癌剂分子)连接抗体或抗原结合片段,所述抗体或抗原结合片段与暴露于的细胞(例如癌细胞)的表面上的网蛋白-1特异性结合。
在一些方面,本公开提供了抗体-药物-缀合物(ADC),所述ADC包括与一个或多个抗癌剂分子(例如,介于2到100个抗癌剂分子之间)连接的抗体或抗原结合片段,所述抗体或抗原结合片段与和SEQ ID NO:2具有至少85%同一性的氨基酸序列(例如,和SEQ ID NO:2具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%同一性的氨基酸序列)特异性结合。
在一些实施例中,一个或多个抗癌剂分子与抗体或抗原结合片段直接连接。
在一些实施例中,一个或多个抗癌剂分子通过接头(例如光连接剂或柔性氨基酸序列接头)与所述抗体或抗原结合片段间接连接。
在一些实施例中,2个、3个、4个或5个抗癌剂分子与抗体或抗原结合片段连接。
在一些实施例中,抗癌剂分子是奥瑞他汀(auristatin)或吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)。在一些实施例中,PBD分子是PBD二聚体。
在一些方面,本公开提供了一种用于治疗癌症的方法,所述方法包括向患有癌症的受试者施用有效量的抗体或抗原结合片段和抗癌剂,所述抗体或抗原结合片段与和SEQID NO:2具有至少85%同一性的氨基酸序列特异性结合。在一些实施例中,受试者是哺乳动物,例如人。
在本公开内容描述的方法的一些实施例中,抗体或抗原结合片段和抗癌剂一起施用(例如,作为本文所述的组合物或ADC)。在一些实施例中,将抗体或抗原结合片段和抗癌剂分别施用于受试者。
在一些实施例中,癌症的特征在于在癌细胞表面表达网蛋白-1。在一些实施例中,癌症是卵巢癌、食道癌、头颈鳞状细胞癌或胰腺癌。在一些实施例中,所述胰腺癌是胰腺导管腺癌(PDAC)。
在本公开所述方法的一些实施例中,抗体、抗癌剂、ADC或组合物以1ng/kg至100mg/kg范围内的剂量施用。
附图说明
图1A-1B示出了抗plec1抗体对人重组蛋白(图1A)和人(YapC和L3.6pl)以及小鼠(Han14.3)胰腺细胞系(图1B)的亲和力和特异性的代表性数据。
图2A-2C示出了用抗plec1抗体处理YapC细胞。图2A示出了用抗plec1处理细胞导致G0和G2生长停滞。图2B示出了YapC细胞的抗plec1的EC50的代表性数据。图2C示出了抗plec1处理对YapC微管(顶部,从左到右)和肌动蛋白微丝(底部,从左到右)的表型效应。
图3示出了抗plec1与吉西他滨(gem)的组合对癌细胞具有协同作用。将等摩尔浓度的抗plec1和gem与细胞一起孵育72小时。孵育后,对细胞进行了处理。组合疗法使得IC50下降20倍。
具体实施方式
在一些方面,本公开涉及用于治疗某些癌症(例如,以网蛋白-1的表面表达为特征的癌症)的组合物和方法。网蛋白-1是多种癌症的有用生物标志物,包含卵巢癌、食道癌、头颈鳞状细胞癌以及胰腺导管腺癌。与抗体靶相比,例如由本妥昔单抗(Brentuximabvedotin)靶向的CD30和由曲妥珠单抗(Ado-trastuzumab Emtansine)靶向的Her2,网蛋白-1是特别有用的靶,因为其仅存在于某些癌细胞(例如,胰腺导管腺癌细胞、卵巢癌细胞等)的细胞表面,因此提供了极好的特异性和选择性。因此,在一些实施例中,本公开涉及与癌细胞表面网蛋白-1特异性结合的抗体和抗原结合片段及其使用方法。在一些实施例中,如本公开所述的抗网蛋白-1抗体与表达网蛋白-1的细胞的结合诱导细胞死亡(例如,触发细胞凋亡)。
本公开部分地基于以下认识,即当作为单独的组合物或作为单一的组合物(例如,如本文所述的包含抗网蛋白-1抗体和抗癌剂或ADC的组合物)一起递送时,抗网蛋白-1抗体和抗癌剂的某些组合能够介导增强的癌细胞生长抑制。
与网蛋白-1结合的抗体
本公开提供了包括与癌细胞表面上的网蛋白-1结合的抗体和抗原结合片段的组合物(例如,ADC)。本公开的单克隆抗体可以是鼠的、人源化的或嵌合的或其它形式的。本文提供了本公开抗体的详细描述。
网蛋白-1是一种高分子量蛋白质(500kDa),除了将细胞骨架锚定在血浆和核膜上之外,其还将中间丝连接到微管和微丝上(在Sonnenberg等人,《实验细胞研究(Ex CellRes)》,313:2189-2203(2007)中进行了综述)。
一般来说,网蛋白-1在正常胰腺导管细胞中的水平较低,但在患有某些癌症的细胞(例如,前体胰腺上皮内瘤(PanIN)、胰腺导管腺癌细胞(PDAC)、卵巢癌细胞等)中的表达上调。网蛋白-1在正常成纤维细胞中表现出独特的细胞质和细胞核定位,而在具有某些癌症的细胞(例如,PDAC)中观察到细胞膜上的异常表达。在自身免疫性病状、副肿瘤性天疱疮以及相关的淋巴增生性肿瘤、Castleman病中也观察到了网蛋白-1亚细胞定位的改变(Aho等人,《皮肤病学研究杂志(J Invest Piral)》,113:422-423(1999))。网蛋白-1在信号转导中也有重要作用。因此,具有某些癌症的细胞(例如,前体胰腺上皮内瘤形成(PanIN)、胰腺导管腺癌细胞(PDAC)、卵巢癌细胞等)中的网蛋白-1可能对调节细胞迁移、极性和与癌症发生相关的能量代谢的信号通路有影响。因此,在一些实施例中,本公开提供了与癌细胞表面的网蛋白-1结合的抗体和抗原结合片段。
在一些实施例中,抗体(也称为免疫球蛋白)是由两条轻(L)链和两条重(H)链组成的四聚糖基化蛋白质,每条轻(L)链约25kDa,每条重(H)链约50kDa。两种轻链(称为λ和κ)可以存在于抗体中。根据重链恒定区的氨基酸序列,免疫球蛋白可分为五大类:A、D、E、G和M,其中几类可进一步分为亚类(同种型),例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。每个轻链通常包含N端可变(V)结构域(VL)和恒定(C)结构域(CL)。每个重链通常包含N端V结构域(VH)、三个或四个C结构域(CH1-3)和铰链区。最接近VH的CH结构域被称为CH1。VH和VL结构域由称为框架区(FR1、FR2、FR3和FR4)的相对保守序列的四个区域组成,所述框架区形成高变序列的三个区域(互补决定区,CDR)的支架。CDR包含大多数负责抗体与抗原特异性相互作用的残基。CDR被称为CDR1、CDR2和CDR3。因此,重链上的CDR成分被称为CDRH1、CDRH2和CDRH3,而轻链上的CDR成分被称为CDRL1、CDRL2和CDRL3。CDR通常指Kabat CDR,如“具有免疫学重要性的蛋白序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)”(美国卫生与公共服务部(US Department of Health and Human Services)(1991),Kabat等人编辑)中所述。表征抗原结合位点的另一个标准是指Chothia描述的高变环。参见例如Chothia,D.等人,《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》(1992),227:799-817;和Tomlinson等人,《欧洲分子生物学学会杂志(EMBO J.)》(1995),14:4628-4638。还有一个标准是牛津分子AbM抗体建模软件使用的AbM定义。参见例如“抗体可变结构域的蛋白质序列和结构分析(Protein Sequenceand Structure Analysis of Antibody Variable Domains)”的综述。该文献载于:《抗体工程实验室手册(Antibody Engineering Lab Manual)》(Duebel,S、Kontermann,R.、Springer-Verlag、Heidelberg编辑)。关于Kabat CDR描述的实施例可以替代性地使用关于Chothia高变环或AbM定义的环或这些方法的任意组合的类似描述的关系来实现。
在一些实施例中,本公开的抗网蛋白-1抗体和对所述抗体进行编码的本公开的核酸分子包含下表1所示的CDR氨基酸和核酸序列。
表1
在一些实施例中,本公开的抗网蛋白-1结合剂(例如,抗网蛋白-1抗体)包含任何抗体或抗原结合片段,其包含CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2或CDRL3或其组合,如表1所示的任何一种抗体所提供的。在一些实施例中,抗网蛋白-1结合剂包含表1中所示的任何一种抗体的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3。本公开还包含为表1所示的任何一种抗体提供的对CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2或CDRL3进行编码的任何核酸序列。抗体重链和轻链CDR3结构域在抗体对抗原的结合特异性/亲和力中可能发挥特别重要的作用。因此,本公开的抗网蛋白-1抗体或其核酸分子可至少包含,如表1所示或如SEQ ID NO:14、21、23、36、43、45、58、65、67、80、87或89所示的抗体的重链和/或轻链CDR3。
表2列出了抗体重链可变区和轻链可变区的完整氨基酸和核酸序列。
表2
在一些实施例中,本公开的抗网蛋白抗体包含任何抗体,其包含如表1所示或如本公开的序列表中所述(例如,SEQ ID NO:14、23、36、45、58、67、80或89)的重链可变结构域或轻链可变结构域或两者。本公开还包含对抗体进行编码的任何核酸分子,所述抗体包含如表1所示或如本公开的序列表中所述(例如,SEQ ID NO:3、12、25、34、47、56、69或78)的重链可变结构域或轻链可变结构域核酸序列或两者。
本公开的抗网蛋白-1抗体可以任选地包括抗体恒定区或其部分。例如,VL结构域可以在其C端末端附接到轻链恒定结构域,如Cκ或Cλ。类似地,VH结构域或其部分可以附接到重链(如IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)的全部或部分以及任何同种型亚类。抗体可以包含合适的恒定区(参见例如Kabat等人,“具有免疫学重要性的蛋白序列列”,第91-3242号,《国立卫生研究院出版物(National Institutes of Health Publications,Bethesda)》(医学博士Bethesda)(1991))。因此,本公开范围内的抗体可包含与本领域已知的恒定区结合的VH和VL结构域或其抗原结合部分。在一些实施例中,本公开的抗网蛋白-1抗体包括重链恒定区,其包括由SEQ ID NO:3、13、25、35、47、57、69或79表示的序列。
在某些实施例中,可以将VH和/或VL结构域还原为种系序列,例如,使用常规分子生物学技术使这些结构域的FR突变以匹配由种系细胞产生的FR。在其它实施例中,FR序列保持与共有种系序列不同。
在一些实施例中,抗网蛋白-1抗体或抗原结合片段可以包含或不包含例如在SEQID NO:5、7、9、11、16、18、20、22、27、29、31、33、38、40、42、44、49、51、53、55、60、62、64、66、71、73、75、77、82或84中所示的抗体的框架区。在一些实施例中,抗网蛋白-1抗体是鼠抗体。在一些实施例中,抗网蛋白-1抗体是嵌合或人源化抗体。
应当理解,在一些实施例中,本公开考虑了抗体的重链可变区和轻链可变区的氨基酸和核酸序列的变体(例如,同源物)。“同源性”是指两个多核苷酸或两个多肽部分之间的同一性百分比。当提及核酸或其片段时,术语“基本同源性”表示当与另一个核酸(或其互补链)的适当核苷酸插入或缺失进行最佳比对时,约90-100%的比对序列具有核苷酸序列同一性。例如,在一些实施例中,具有基本同源性的核酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%和至少99%的序列同一性。当提及多肽或其片段时,术语“基本同源性”表示当与另一种多肽的适当间隙、插入或缺失进行最佳比对时,约90-100%的比对序列具有核苷酸序列同一性。术语“高度保守的”是指至少80%的同一性、优选地至少90%的同一性、更优选超过97%的同一性。例如,在一些实施例中,高度保守的蛋白质具有至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%和至少99%的同一性。在某些情况下,高度保守可能指100%同一性。例如通过使用本领域技术人员已知的算法和计算机程序,本领域技术人员可以容易地确定同一性。
在一些实施例中,本公开的抗网蛋白-1抗体可以高亲和力与网蛋白-1结合,例如,Kd小于10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M或更低。例如,抗网蛋白-1抗体或其抗原结合片段可以以介于5pM与500nM之间(例如介于50pM与100nM之间,例如介于500pM与50nM之间)的亲和力与网蛋白-1结合。本公开还包含抗体或抗原结合片段,其与本文所述的任何抗体竞争与网蛋白-1结合,并且具有50nM或更低的亲和力(例如,20nM或更低、10nM或更低、500pM或更低、50pM或更低、或5pM或更低)。抗网蛋白-1抗体的亲和力和结合动力学可以使用本领域已知的任何方法进行测试,包含但不限于生物传感器技术(例如,OCTET或BIACORE)。
如本文所用,术语“抗体”通常指免疫球蛋白。本文还提供了抗体保持或具有特异性结合能力的所有衍生物。抗体制剂可以是单克隆的或多克隆的。
如本文所用,术语“抗体片段”或“抗原结合片段”是指长度小于全长的抗体的任何衍生物。通常,抗原结合片段至少保留全长抗体特异性结合能力的重要部分。抗原结合片段的实例包含但不限于Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、scFv片段、Fv片段、dsFv双价抗体片段、亲合体片段和Fd片段。抗原结合片段可以通过任何合适的方法产生。例如,抗原结合片段可以通过完整抗体的片段化以酶促方式或以化学方式产生,或者其可以由对部分抗体序列进行编码的基因重组产生。或者,抗原结合片段可以全部或部分以合成方式产生。抗原结合片段可以任选地是单链抗体片段。或者,片段可以包括通过例如二硫键连接在一起的多条链。抗原结合片段也可以任选地是多分子复合物。功能性抗原结合片段通常包括至少约50个氨基酸,更通常包括至少约200个氨基酸。
单链Fv(scFv)是仅由可变轻链(VL)和可变重链(VH)组成的重组抗原结合片段,其通过多肽接头彼此共价连接。VL或VH都可能是NH2端结构域。多肽接头可以是长度可变的和组成的,只要两个可变结构域被桥接而没有严重的空间干扰。典型地,接头主要由甘氨酸和丝氨酸残基的延伸组成,一些谷氨酸或赖氨酸残基散布在其中以增加溶解性。
双价抗体是二聚体scFv。双价抗体的组分通常比大多数scFv具有更短的肽接头,并且其显示出作为二聚体结合的偏好。
Fv片段是一种抗原结合片段,由一个VH和一个VL结构域通过非共价相互作用结合而成。术语dsFv在本文中用于指具有经工程化分子间二硫键以稳定VH-VL对的Fv。
AF(ab')2片段是一种抗原结合片段,基本上等同于通过用胃蛋白酶在pH 4.0-4.5下消化而从免疫球蛋白(通常为IgG)获得的抗原结合片段。所述片段可以通过重组方式产生。
Fab片段是一种抗原结合片段,基本上等同于通过减少连接F(ab')2片段中两个重链段的一个或多个二硫键而获得的抗原结合片段。Fab'片段可以通过重组方式产生。
Fab片段是一种抗原结合片段,基本上等同于通过木瓜蛋白酶消化免疫球蛋白(通常为IgG)获得的抗原结合片段。Fab片段可以通过重组方式产生。Fab片段的重链片段是Fd段。
亲合体是一种包括三螺旋束的小蛋白质,起抗原结合分子(如抗体模拟物)作用。一般来说,亲合体长度约为58个氨基酸,摩尔质量约为6kDa。具有独特结合特性的亲合体分子是通过随机化位于亲本蛋白结构域结合活性所涉及的两个α-螺旋中的13个氨基酸获得的。利用噬菌体展示等方法,可以从含有数十亿种不同变体的池(库)中分离结合所需靶蛋白的特异性结合体分子。
抗体-药物缀合物(ADC)
本公开的一些方面涉及靶向网蛋白-1的抗体-药物缀合物。如本文所用,“抗体药物缀合物”或“ADC”是指包括与一种或多种靶向分子(例如,生物活性分子,如治疗分子,和/或可检测标记)相连的抗体或其抗原结合片段的分子。因此,在一些实施例中,本公开的抗体或抗原结合片段可以用治疗剂修饰。如本文所用,术语“治疗剂”是指能够抑制细胞功能、抑制细胞复制或杀死哺乳动物细胞(优选为人细胞,更优选为人癌细胞)的化学品或药物或蛋白质。治疗剂的实例包含但不限于细胞毒性部分;放射性同位素;植物,真菌或细菌来源的分子(例如,植物毒素(例如,次级代谢产物));糖苷;抗微生物化合物(例如,链霉素、青霉素等));生物蛋白(例如蛋白毒素)、颗粒(例如重组病毒颗粒,例如通过病毒外壳蛋白)或其混合物。治疗剂可以是细胞内活性药物或其它药剂,例如短程辐射发射器,包含例如短程高能α发射器(例如,131I)。
在一些实施例中,治疗剂是抗癌剂。术语“抗癌剂”是指能够抑制癌细胞功能、抑制癌细胞生长或复制或杀死癌细胞的化学品或药物或蛋白质。在一些实施例中,抗癌剂是经美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于治疗癌症的化学品或药物或蛋白质。抗癌剂的实例包含但不限于:凯素(Abraxane)(白蛋白稳定化紫杉醇纳米颗粒调配物)、Adrucil(氟尿嘧啶)、飞尼妥(Afinitor)(依维莫司)、Efudex(氟尿嘧啶)、埃罗替尼盐酸盐、依维莫司、Fluoroplex(氟尿嘧啶)、氟尿嘧啶、盐酸吉西他滨、健择(Gemzar)(盐酸吉西他滨)、丝裂霉素C、Mitozytrex(丝裂霉素C)、密吐霉素(丝裂霉素C)、白蛋白稳定化紫杉醇纳米颗粒调配物、苹果酸舒尼替尼、索坦(Sutent)(苹果酸舒尼替尼)、和特罗凯(Tarceva)(埃罗替尼盐酸盐)、六甲蜜胺、爱克兰(Alkeran)(马法兰)、阿瓦斯汀(Avastin)(贝伐单抗(Bevacizumab))、贝伐单抗、卡铂、Clade(环磷酰胺)、顺铂、环磷酰胺、癌得星(Cytoxan)(环磷酰胺)、盐酸多柔比星、Dox-SL(盐酸多柔比星脂质体)、DOXIL(盐酸多柔比星脂质体)、盐酸多柔比星脂质体、Evacet(盐酸多柔比星脂质体)、盐酸吉西他滨、健择(盐酸吉西他滨)、和美新(Hycamtin)(盐酸拓扑替康)、LipoDox(盐酸多柔比星脂质体)、利普卓(Lynparza)(奥拉帕尼)、马法兰、Neosar(环磷酰胺)、尼拉帕尼甲苯磺酸一水合物、奥拉帕尼、紫杉醇、Paraplat(卡铂)、铂尔定(Paraplatin)(卡铂)、Platinol(顺铂)、Platinol-AQ(顺铂)、Rubraca(瑞卡帕布樟脑磺酸盐(Rucaparib Camsylate))、瑞卡帕布樟脑磺酸盐、泰素(Taxol)(紫杉醇)、噻替派、盐酸拓扑替康、以及则乐(Zejula)(尼拉帕尼甲苯磺酸一水合物)。在一些实施例中,所述抗癌剂是吉西他滨(gem)或顺铂。
在一些实施例中,抗癌剂是吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)。一般来说,PDB是以序列特异性的方式与DNA小凹槽结合的一类二聚交联剂,例如如Antonow D等人(2011),《化学评论(Chem Rev)》,111:2815-2864;Cipolla等人,《医药化学之抗癌药剂(Anticancer AgentsMed Chem)》(2009),9:1-31;以及Gerratana,《医学研究评论(Med Res Rev)》(2012),32:254-293所述。
在一些实施例中,治疗剂(例如,抗癌剂)是免疫调节部分(例如,免疫调节剂)。如本文所用,“免疫调节剂”是指增加或减少受试者对药剂的免疫应答的化合物或分子。例如,免疫调节剂可增强受试者对肿瘤的免疫应答,例如,增加炎性细胞因子如白细胞介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。增强受试者免疫应答的免疫调节剂的实例包含粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、干扰素、咪喹莫特、来自细菌的细胞膜组分、某些白细胞介素和细胞因子(例如,IL-1β、IL-6和TNF-α)和免疫检查点抑制剂(例如,PD-1抑制剂、PD1-L抑制剂等)。在一些实施例中,免疫调节剂可降低受试者的免疫应答(例如,介导或实现免疫抑制)。免疫抑制性免疫调节剂的实例包含但不限于免疫抑制药物(例如,糖皮质激素、细胞抑制剂、抗炎性单克隆抗体(例如,抗IL-2受体抗体))和靶向免疫亲和素的药物(例如,环孢素、西罗莫司等)。
使用本领域已知的技术,可以将一种或多种治疗剂(例如,抗癌剂)直接偶联或缀合到本公开的抗网蛋白-1抗体上,或者通过中间体(例如,本领域已知的接头)间接偶联或缀合。在一些实施例中,将多种(例如,2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多)治疗剂(例如,抗癌剂分子)偶联或缀合到抗网蛋白-1抗体上。例如,在一些实施例中,ADC包括缀合到抗网蛋白-1抗体的1、2、3、4或5个PDB分子(例如,PDB二聚体、三聚体等)。
在一些实施例中,抗体通过接头与靶向药剂偶联。如本文所用,术语“接头”指以桥的形式将一个分子或序列附接到另一个分子或序列的分子或序列(如氨基酸序列)。“连接的”、“缀合的”或“偶联的”是指通过共价键、非共价键或其它键(如范德华力)附接或结合。本公开描述的抗体可以直接连接到靶向药剂(例如,治疗部分或可检测部分),例如,作为具有可检测蛋白质或可检测肽部分的融合蛋白(具有或不具有任选的连接序列,例如,柔性连接序列),或者通过化学偶联部分。许多这样的偶联部分在本领域中是已知的(例如肽接头或化学接头),如国际专利申请公开第WO 2009/036092号中所述。在一些实施例中,接头是柔性氨基酸序列。柔性氨基酸序列的实例包含富含甘氨酸和丝氨酸的接头,其包括两个或多个甘氨酸残基的延伸(例如,GGGS;SEQ ID NO:91)。在一些实施例中,所述接头是光连接剂。光连接剂的实例包含与酮基反应的二苯甲酮(BP)、蒽醌(AQ)、与硝烯反应的硝基苯叠氮化物(NPA)和与卡宾反应的苯基-(三氟甲基)二氮杂环戊烯(PTD)。
药物组合物
在一些方面,本公开涉及包括抗网蛋白-1抗体的药物组合物(例如,包括抗网蛋白-1抗体的ADC)。在一些实施例中,所述组合物包括抗网蛋白-1抗体、抗癌剂和药学上可接受的载体。在本公开的组合物中,抗网蛋白-1抗体与抗癌剂的比率(例如,浓度比)可以变化。在一些实施例中,抗网蛋白-1抗体与抗癌剂的比率在约1:100至约100:1的范围内,例如其之间的任何比率。在一些实施例中,抗网蛋白-1抗体与抗癌剂的比率(例如,浓度比)约为1:1。
如在此使用的,术语“药学上可接受的载体”旨在包括与药物给予相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂以及吸收延迟剂等。这些介质和药剂用于药物活性物质的用途在本领域中是熟知的。除非任何常规介质或药剂与活性化合物不相容,否则考虑在组合物中使用它们。补充的活性化合物也可以并入这些组合物中。药物组合物可以如下所述制备。活性成分可以与任何常规的药学上可接受的载体或赋形剂混合或复合。组合物可以是无菌的。
通常,药物组合物被配制用于递送有效量的药剂(例如,包括抗网蛋白-1抗体的组合物,或包括抗网蛋白-1抗体和抗癌剂的抗体药物缀合物)。通常,活性药剂的“有效量”是指足以引发所需生物反应(例如杀死癌细胞或抑制肿瘤生长)的量。药剂的有效量可以根据如所需的生物终点、化合物的药代动力学、正在治疗的疾病(例如,某些以网蛋白-1的表面表达为特征的癌症)、施用方式和患者等因素而变化。
如果接受治疗的患者能够耐受组合物的施用,则所述组合物被称为“药学上可接受的载体”。无菌磷酸盐缓冲盐水是药学上可接受的载体的一个实例。其它合适的载体在本领域中是众所周知的。参见例如REMINGTON的《制药科学(PHARMACEUTICAL SCIENCES)》第18版(1990)。
本领域技术人员将理解,任何施用方式、常规使用的媒剂或载体以及对活性剂呈惰性的方式都可以用于制备和施用本公开的药物组合物。举例来说,这些方法、媒剂和载体是在Remington的《药物科学(Pharmaceutical Sciences)》,第4版(1970)中描述的那些,其公开内容通过引用并入本文。已经接触了本公开的原理的本领域技术人员在确定合适和合适的媒剂、赋形剂和载体或者在将活性成分与其复合以形成本公开的药物组合物方面不会有困难。
化合物(例如,抗网蛋白-1抗体或包括抗网蛋白-1抗体和靶向剂的抗体药物缀合物)的有效量(也称为治疗有效量)是足以改善至少一种与癌症相关的副作用(例如,肿瘤生长、转移)的量。在每种情况下,包含在药物组合物中的治疗有效量取决于几个因素,例如,待治疗患者的类型、大小和状况、预期的施用模式、患者掺入预期剂型的能力等。通常,每种剂型中包含一定量的活性剂,以提供约0.1至约250mg/kg,优选约0.1至约100mg/kg。本领域普通技术人员能够凭经验确定合适的治疗有效量。
结合本文提供的教导,通过在各种活性化合物中进行选择并权衡效力、相对生物利用度、患者体重、不良副作用的严重程度和所选择的施用模式等因素,可以计划一种有效的预防或治疗方案,所述方案不会引起显著的毒性,但对治疗特定受试者完全有效。任何特定应用的有效量可以根据如所治疗的疾病或病状、所施用的特定治疗剂、受试者的大小或疾病或病状的严重程度等的因素而变化。本领域普通技术人员可以凭经验确定特定核酸和/或其它治疗剂的有效量,而无需进行不必要的实验。
在一些情况下,本公开的化合物在胶体分散体系中制备。胶体分散系统包含基于脂质的系统,包含水包油乳液、胶束、混合胶束和脂质体。在一些实施例中,本公开的胶体系统是脂质体。脂质体是人工膜血管,可用作体内或体外的递送载体。已经表明,大小在0.2-4.0μm范围内的大单层囊泡(LUV)可以包裹大的大分子。
通过将脂质体与特定的配体(如单克隆抗体、糖、糖脂或蛋白质)偶联,可以将脂质体靶向特定的组织。可用于将脂质体靶向到例如平滑肌细胞的配体包含但不限于:与平滑肌细胞特异性受体和分子相互作用的完整分子或分子片段,例如与癌细胞的细胞表面标记相互作用的抗体。这种配体可以通过本领域技术人员熟知的结合测定容易地识别。在另外的实施例中,可以通过将脂质体与本领域已知的抗体偶联而将脂质体靶向组织。
本公开描述的化合物可以单独施用(例如,在盐水或缓冲液中)或使用本领域已知的任何递送媒剂施用。例如,已经对以下递送媒剂进行了描述:螺旋体;乳脂体;ISCOM;脂质体;活细菌载体(例如沙门氏菌(Salmonella)、大肠杆菌(Escherichia coli)、卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin)、志贺氏菌(Shigella)、乳酸杆菌(Lactobacillus));活病毒载体(例如痘苗病毒、腺病毒、单纯疱疹);微球;核酸疫苗;聚合物(例如羧甲基纤维素、壳聚糖);聚合物环;蛋白体;氟化钠;转基因植物;病毒体;和病毒样颗粒。
本公开的调配物在药学上可接受的溶液中施用,所述溶液通常可包含药学上可接受浓度的盐、缓冲剂、防腐剂、相容的载体、佐剂和任选的其它治疗成分。
术语“药学上可接受的载体”是指一种或多种适用于向人或其它脊椎动物施用的相容的的固体或液体填充剂、稀释剂或包封物质。术语“载体”表示天然或合成的有机或无机成分,活性成分与其结合以促进应用。所述药物组合物的组分还能够与本公开的化合物混合,并以不存在会显著损害所需药物效率的相互作用的方式彼此混合。
为糖衣丸芯提供了合适的涂层。出于此目的,可以使用浓缩的糖溶液,其可以任选地含有阿拉伯树胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶(carbopol gel)、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液以及适当的有机溶剂或溶剂混合物。可以将染料或颜料添加到片剂或糖衣丸包衣中以便于识别或表征活性化合物剂的不同组合。
除了本文所述的调配物之外,所述化合物也可以配制成贮库制剂。这种长效调配物可以用合适的聚合物或疏水材料(例如在可接受的油中的乳液)或离子交换树脂配制,或者配制为微溶衍生物(例如微溶盐)。
药物组合物还可以包括合适的固体或凝胶相载体或赋形剂。这种载体或赋形剂的实例包含但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物(如聚乙二醇)。
合适的液体或固体药物制剂形式是,例如,用于吸入的水溶液或盐溶液;微囊化的、包埋的、涂覆在显微金颗粒上的、包含在脂质体中的、雾化的、气溶胶的、用于植入皮肤中的颗粒或者干燥在尖锐的物体上以刮入皮肤中的颗粒。药物组合物还包含颗粒、粉末、片剂、包衣片剂、(微)胶囊、栓剂、糖浆剂、乳剂、悬浮液、霜剂、滴剂或活性化合物缓释制剂,在这些制剂中通常如上所述使用赋形剂和添加剂和/或助剂(例如崩解剂、粘合剂、包衣剂、溶胀剂、润滑剂、调味剂、甜味剂或增溶剂)。所述药物组合物适用于多种药物递送系统。对于药物递送方法的简要综述,参见Langer(1990),《科学(Science)》,249:1527-1533,该文献其通过引用并入本文。
这些化合物可以以本身(纯的)或药学上可接受的盐的形式施用。当用于药物时,盐应该是药学上可接受的,但是非药学上可接受的盐可以方便地用于制备其药学上可接受的盐。此类盐包括但不限于从以下酸制得的盐:盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、乙酸、水杨酸、对甲苯磺酸、酒石酸、柠檬酸、甲烷磺酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸、萘-2-磺酸和萘磺酸。此外,这种盐可以制备成碱金属盐或碱土金属盐,如羧酸基团的钠盐、钾盐或钙盐。
合适的缓冲剂包含:乙酸和盐(1-2%w/v);柠檬酸和盐(1-3%w/v);硼酸和盐(0.5-2.5%w/v);以及磷酸以及盐(0.8-2%w/v)。合适的防腐剂包含苯扎氯铵(0.003-0.03%w/v);氯丁醇(0.3-0.9%w/v);对羟基苯甲酸酯(0.01-0.25%w/v)和硫柳汞(0.004-0.02%w/v)。
这种组合物可以方便地以单位剂型呈现,并且可以通过药学领域熟知的任何方法制备。所有方法包含将化合物与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。通常,通过均匀和紧密地制备组合物:将化合物与液体载体、细碎的固体载体或两者结合,然后根据需要成型产品。液体剂量单位是小瓶或安瓿。固体剂量单位是片剂、胶囊和栓剂。
治疗方法
本公开的方面涉及一起(例如,协同地)起作用以抑制某些癌细胞的生长的作为单一组合物施用或单独施用的抗网蛋白-1抗体和抗癌剂的组合。测量协同作用的方法是已知的并且例如Chou,《Cancer Res.(癌症研究)》(2010),70(2):440-6已经对其进行了描述。在一些实施例中,抗网蛋白-1抗体和一种或多种抗癌剂的组合抑制细胞(例如癌细胞)生长2倍至100倍(例如2倍、4倍、5倍、10倍、20倍、25倍、50倍、75倍等)超过单独的抗体或抗癌剂。在一些实施例中,抗网蛋白-1抗体和一种或多种抗癌剂的组合相对于单独的抗体或抗癌剂抑制细胞(例如癌细胞)生长超过100倍。
不希望受任何特定理论的约束,在一些实施例中,本公开描述的组合物和ADC可用于治疗以网蛋白-1的表面表达为特征的癌症。如本文所用,“治疗癌症”是指减少患者体内癌细胞的数量、减缓患者体内癌细胞的生长、减少患者体内癌细胞的转移,并且包括缓解癌症症状或延长患者寿命的任何类型的反应。
以网蛋白-1的表面表达为特征的癌症的实例包含但不限于卵巢癌细胞、食道癌细胞、头颈鳞状细胞癌细胞或胰腺癌细胞(例如,胰腺导管腺癌(PDAC))。然而,应当理解,其它癌症(例如肺癌、膀胱癌、乳腺癌、食道癌、口腔癌、舌癌、牙龈癌、皮肤癌(例如黑色素瘤、基底细胞癌、卡波西肉瘤等)、肌癌、贲门癌、肝癌、支气管癌、软骨癌、骨癌、胃癌、前列腺癌、睾丸癌、宫颈癌、子宫内膜癌、子宫癌、结肠癌、结肠直肠癌、胃癌、肾癌、膀胱癌、淋巴瘤、脾癌、胸腺癌、甲状腺癌、脑癌、神经元癌、间皮瘤、胆囊癌、眼癌(例如,角膜癌、葡萄膜癌、脉络膜癌、黄斑癌、玻璃体液癌等)、关节癌(例如滑膜癌)、成胶质细胞瘤、白细胞癌(例如,淋巴瘤、白血病等)、遗传性非息肉病性癌(HNPC)、结肠炎相关癌等)可以通过网蛋白-1的表面表达来表征和/或使用本公开所述的组合物和ADC来治疗。在一些实施例中,可以使用本公开描述的组合物和ADC来治疗进一步以肉瘤为例的癌症(例如骨肉瘤和卡波西肉瘤)。
在一些方面,本公开提供了一种用于治疗癌症的方法,所述方法包括向患有癌症的受试者施用有效量的如本公开所述的组合物或ADC(例如,包括抗网蛋白-1抗体和抗癌剂的组合物或ADC)。在一些实施例中,所述受试者是哺乳动物。在一些实施例中,所述受试者是人。
通常,本公开的抗体和药物组合物优选包含药学上可接受的载体或赋形剂,其适于使化合物或混合物以片剂、胶囊或丸剂的形式口服施用,或胃肠外、静脉内、皮内、肌内或皮下或透皮施用。
药物组合物和/或ADC可以通过任何合适的施用途径施用。可以使用多种施用途径。所选择的特定模式当然将取决于所选择的特定药剂、所治疗的特定病状以及治疗功效所需的剂量。一般来说,本公开的方法可以使用医学上可接受的任何施用模式来实践,这意味着使用产生治疗效果而不引起临床上不可接受的副作用的任何模式。本文讨论了各种施用模式。为了在治疗中使用,可以通过将抗网蛋白-1抗体和/或其它治疗剂递送至所需表面(例如粘膜、全身)的任何方式向受试者施用有效量的抗网蛋白-1抗体和/或其它治疗剂。
本公开的药物组合物的施用可以通过本领域技术人员已知的任何方式来完成。施用途径包含但不限于口服、胃肠外、静脉内、肌肉内、腹膜内、鼻内、舌下、气管内、吸入、皮下、眼内、阴道和直肠。全身途径包含口服和肠胃外。几种类型的装置通常用于吸入施用。这些类型的装置包含计量吸入器(MDI)、呼吸驱动式MDI、干粉吸入器(DPI)、与MDI组合的隔离/保持室以及喷雾器。
对于口服施用,所述化合物可以通过将一种或多种活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的载体组合容易地配制。此类载体使得本公开的化合物能够被配制成片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液、悬浮液等,用于待治疗的受试者的口服摄入。口服药物制剂可以作为固体赋形剂获得,在加入合适的助剂后(如果需要)任选地研磨所得混合物,并加工颗粒混合物,从而获得片剂或糖衣丸芯。适当的赋形剂具体地是如糖等填充剂,包含乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇;纤维素制剂,如例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基-纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。根据需要,可以加入崩解剂,如交-联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或藻酸或其盐(如海藻酸钠)。任选地,口服调配物也可以配制在盐水或缓冲液中,用于中和内部酸性条件,或者可以在没有任何载体的情况下施用。
可口服使用的药物制剂包含由明胶制成的-压配合胶囊,以及由明胶和增塑剂如甘油或山梨醇制成的软的密封胶囊。这种-推合式胶囊可以含有活性成分,这些活性成分与如乳糖等填充剂、如淀粉等粘合剂和/或如滑石或硬脂酸镁等润滑剂以及任选地稳定剂混合。在软胶囊中,活性化合物可以溶解或悬浮于适当的液体中,如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇。此外,还可以添加稳定剂。也可以使用配制用于口服的微球。此类微球已经在本领域中进行了详细的定义。所有口服施用的调配物都应该是适合此类施用的剂量。
对于经颊施用,组合物可以采用以常规方式配制的片剂或锭剂的形式。
对于吸入施用,根据本公开使用的化合物可以通过使用合适的推进剂(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体)以气溶胶喷雾形式从加压包装或喷雾器中方便地递送。在加压气雾剂的情况下,剂量单位可以通过提供阀门来递送计量的量来确定。可将用于吸入器或吹入器的胶囊和药筒(例如明胶)配制成包含化合物和合适的粉末基质(如乳糖或淀粉)的粉末混合物。
当需要全身递送时,可以将化合物配制成注射施用的非肠道施用形式(例如通过快速注射或连续输注)。注射用调配物可以以单位剂型存在,例如在安瓿或在多剂量容器中,并添加有防腐剂。这些组合物可以采用以下形式:在油性或水性媒剂中的混悬剂、溶液剂、或乳剂,并且可以含有配制剂,如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。
肠胃外施用的药物调配物包含水溶性形式的活性化合物-的水溶液。此外,活性化合物的悬浮液可以制备成合适的油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或媒剂包含脂肪油(如芝麻油)或合成脂肪酸酯(如油酸乙酯或甘油三酯)或脂质体。含水注射悬浮液可能含有增加悬浮液粘度的物质,如羧甲基纤维素钠、山梨醇或葡聚糖。任选地,悬浮液还可以含有合适的增加化合物的溶解度的稳定剂或药剂,以允许制备高浓度溶液。
替代性地,活性化合物可以是粉末形式,以便在使用前与合适的媒剂(例如无菌无热原水)一起构成。
也可以将这些化合物配制成例如含有常规栓剂基质(如可可脂或其它甘油酯)的直肠或阴道组合物(如栓剂或保留灌肠剂)。
其它递送系统可以包含定时-释放递送系统、延迟释放递送系统或持续释放递送系统。这种系统可以避免化合物的重复施用,增加对受试者和医生的便利性。许多类型的释放传递系统是可获得的,并且是本领域普通技术人员已知的。其包含聚合物基系统,如聚(丙交酯-乙交酯)、共草酸酯、聚己内酯、聚酯酰胺、聚原酸酯、聚羟基丁酸和聚酐。例如美国专利第5,075,109号描述了前述含有药物的聚合物的微胶囊。递送系统还包含非-聚合物系统,即:脂质,包含甾醇(如胆固醇、胆固醇酯和脂肪酸)或中性脂肪(如甘油一-酯、甘油二-酯和甘油三-酯);水凝胶释放系统;硅橡胶系统;基于肽的系统;蜡涂层;使用常规粘合剂和赋形剂的压制片剂;部分融合的植入物;等等。具体实例包含但不限于:(a)其中以基质内的形式包含本公开的药剂的侵蚀系统(例如美国专利第4,452,775号、第4,675,189号和第5,736,152号中描述侵蚀系统);和(b)其中活性组分以受控的速率从聚合物中渗透的扩散系统(例如美国专利第3,854,480号、第5,133,974号和第5,407,686号中描述的扩散系统)。此外,可以使用基于泵-的硬件输送系统,其中一些适于植入。
本公开内容描述的组合物和ADC可以多次施用于受试者(例如,患有癌症的受试者)。在一些实施例中,本公开的抗体或组合物被递送给受试者的次数在2至10次的范围内(例如,2、3、4、5、6、7、8、9或10次)。在一些实施例中,本公开的抗体或组合物被递送给受试者超过10次。
在一些实施例中,向受试者施用一剂本公开的组合物或ADC不超过每个日历日(例如,24小时的时间段)一次。在一些实施例中,向受试者施用一剂本公开的组合物或ADC不超过每2、3、4、5、6或7个日历日一次。在一些实施例中,向受试者施用一剂本公开的组合物或ADC不超过每个日历周(例如,7个日历日)一次。在一些实施例中,向受试者施用一剂本公开的组合物或ADC不超过每两周一次(例如,每两个日历周一次)。在一些实施例中,向受试者施用一剂本公开的组合物或ADC不超过每个日历月一次(例如,每30个日历日一次)。在一些实施例中,向受试者施用一剂本公开的组合物或ADC不超过每六个日历月一次。在一些实施例中,向受试者施用一剂本公开的组合物或ADC不超过每个日历年一次(例如,闰年为365天或366天)。
通过以下实例进一步说明了本公开,但是这些实例决不应被解释为进一步的限制。本申请中引用的所有参考文献(包括文献参考、授权专利、公布的专利申请和共同-未决的专利申请)的全部内容以引用的方式明确并入本文。
实例
细胞测定
使用磺酰罗丹明B(SRB)方案评估PDAC细胞存活率。简单来说,将细胞接种在96孔板中,并在适当的培养基中孵育过夜。第二天,用浓度不断增加的IgG对照、抗plec1或吉西他滨(gem)处理细胞。在处理后的第3天,用SRB对细胞进行染色,并使用设置在吸光度562nm波长(Abs562)的平板读数器进行定量。另外的板专用于确定处理前第0天的细胞数。每种浓度下对照生长百分比被确定为对照细胞生长的%=[均值OD样品-均值OD第0天]/[均值OD阴性对照–均值OD第0天]×100。生长抑制百分比如下计算:生长抑制%=100-[对照细胞生长的%]。
在测定抗plec1、IgG和gem的IC50后,进行相同的细胞测定以确定协同作用,方法是在对每种细胞系特异的同等抗plec1-gem比率(例如IC50)下孵育药物浓度增加的细胞。
协同作用的确定
使用Chou-Talalay方法计算协同作用(例如,如《癌症研究(Cancer Res.)》(2010年1月15日),70(2):440-6中所描述的)以确定协同效应。然后计算每个测试处理浓度的组合指数(CI)。CI<1、CI=1和CI>1分别表示协同作用、相加作用和拮抗作用。下面提供了一个示例输出,其中CI:组合索引;D:剂量;Fa=受影响组分;x=Fa。
Fa CI值 总剂量
0.9 0.10887 599.616
0.95 0.07791 1243.30
0.97 0.06153 2088.90
抗plec1和吉西他滨处理的效果
检测了抗plec1处理对癌细胞存活的影响。观察到克隆PAb1(也称为抗plec1)显示出所测试的抗网蛋白-1抗体的最高亲和力和治疗效果(图1A-1B)。用抗plec1处理癌细胞导致G0和G2生长停滞(图2A)。抗plec1细胞的EC50计算为444.4nM(图2B)。还观察到抗plec1处理通过作用于微管和肌动蛋白丝将细胞形态从同质上皮样细胞改变为星形细胞(图2C)。
将细胞系与浓度增加的抗plec1一起孵育了72小时。通过基于磺酰罗丹明B(SRB)的细胞存活测定对细胞进行了分析。通过逻辑回归(GraphPad Prism)计算了EC50,并以将细胞活力降低50%的单克隆抗体(mAb)浓度(以纳摩尔表示(nM))报告。生长抑制仅限于表达网蛋白-1的癌细胞。具有细胞质网蛋白-1表达的正常细胞(如心脏、肾脏、皮肤和胰腺)都未受抗plec1处理的影响(表3;ND:没有证明;“/”:无数据)。
表3:72小时后抗plec1对细胞存活的影响
癌细胞和正常细胞都未受到对照IgG处理的影响。用带有皮下YAPC(PDAC细胞系)异种移植物的动物进行的体内实验证明了肿瘤体积的剂量依赖性减少。经受处理的动物保持体重并且在其它方面不受影响。
抗plec1疗法已被证明对癌细胞系有效,并且在体内对处理抗性异种移植物有效。由于单一疗法很少长期有效(如利妥昔单抗和曲妥珠单抗),因此研究了抗plec1疗法是否与标准护理癌症疗法协同作用。在1:1的浓度比下,抗plec1与胰腺导管腺癌(PDAC)的标准护理疗法(图3)—吉西他滨(gem)组合协同作用。
序列
>SEQ ID NO:1-网蛋白(半桥粒蛋白1),智人;带下划线的靶蛋白
MVAGMLMPRDQLRAIYEVLFREGVMVAKKDRRPRSLHPHVPGVTNLQVMRAMASLRARGLVRETFAWCHFYWYLTNEGIAHLRQYLHLPPEIVPASLQRVRRPVAMVMPARRTPHVQAVQGPLGSPPKRGPLPTEEQRVYRRKELEEVSPETPVVPATTQRTLARPGPEPAPATDERDRVQKKTFTKWVNKHLIKAQRHISDLYEDLRDGHNLISLLEVLSGDSLPREKGRMRFHKLQNVQIALDYLRHRQVKLVNIRNDDIADGNPKLTLGLIWTIILHFQISDIQVSGQSEDMTAKEKLLLWSQRMVEGYQGLRCDNFTSSWRDGRLFNAIIHRHKPLLIDMNKVYRQTNLENLDQAFSVAERDLGVTRLLDPEDVDVPQPDEKSIITYVSSLYDAMPRVPDVQDGVRANELQLRWQEYRELVLLLLQWMRHHTAAFEERRFPSSFEEIEILWSQFLKFKEMELPAKEADKNRSKGIYQSLEGAVQAGQLKVPPGYHPLDVEKEWGKLHVAILEREKQLRSEFERLECLQRIVTKLQMEAGLCEEQLNQADALLQSDVRLLAAGKVPQRAGEVERDLDKADSMIRLLFNDVQTLKDGRHPQGEQMYRRVYRLHERLVAIRTEYNLRLKAGVAAPATQVAQVTLQSVQRRPELEDSTLRYLQDLLAWVEENQHRVDGAEWGVDLPSVEAQLGSHRGLHQSIEEFRAKIERARSDEGQLSPATRGAYRDCLGRLDLQYAKLLNSSKARLRSLESLHSFVAAATKELMWLNEKEEEEVGFDWSDRNTNMTAKKESYSALMRELELKEKKIKELQNAGDRLLREDHPARPTVESFQAALQTQWSWMLQLCCCIEAHLKENAAYFQFFSDVREAEGQLQKLQEALRRKYSCDRSATVTRLEDLLQDAQDEKEQLNEYKGHLSGLAKRAKAVVQLKPRHPAHPMRGRLPLLAVCDYKQVEVTVHKGDECQLVGPAQPSHWKVLSSSGSEAAVPSVCFLVPPPNQEAQEAVTRLEAQHQALVTLWHQLHVDMKSLLAWQSLRRDVQLIRSWSLATFRTLKPEEQRQALHSLELHYQAFLRDSQDAGGFGPEDRLMAEREYGSCSHHYQQLLQSLEQGAQEESRCQRCISELKDIRLQLEACETRTVHRLRLPLDKEPARECAQRIAEQQKAQAEVEGLGKGVARLSAEAEKVLALPEPSPAAPTLRSELELTLGKLEQVRSLSAIYLEKLKTISLVIRGTQGAEEVLRAHEEQLKEAQAVPATLPELEATKASLKKLRAQAEAQQPTFDALRDELRGAQEVGERLQQRHGERDVEVERWRERVAQLLERWQAVLAQTDVRQRELEQLGRQLRYYRESADPLGAWLQDARRRQEQIQAMPLADSQAVREQLRQEQALLEEIERHGEKVEECQRFAKQYINAIKDYELQLVTYKAQLEPVASPAKKPKVQSGSESVIQEYVDLRTHYSELTTLTSQYIKFISETLRRMEEEERLAEQQRAEERERLAEVEAALEKQRQLAEAHAQAKAQAEREAKELQQRMQEEVVRREEAAVDAQQQKRSIQEELQQLRQSSEAEIQAKARQAEAAERSRLRIEEEIRVVRLQLEATERQRGGAEGELQALRARAEEAEAQKRQAQEEAERLRRQVQDESQRKRQAEVELASRVKAEAEAAREKQRALQALEELRLQAEEAERRLRQAEVERARQVQVALETAQRSAEAELQSKRASFAEKTAQLERSLQEEHVAVAQLREEAERRAQQQAEAERAREEAERELERWQLKANEALRLRLQAEEVAQQKSLAQAEAEKQKEEAEREARRRGKAEEQAVRQRELAEQELEKQRQLAEGTAQQRLAAEQELIRLRAETEQGEQQRQLLEEELARLQREAAAATQKRQELEAELAKVRAEMEVLLASKARAEEESRSTSEKSKQRLEAEAGRFRELAEEAARLRALAEEAKRQRQLAEEDAARQRAEAERVLAEKLAAIGEATRLKTEAEIALKEKEAENERLRRLAEDEAFQRRRLEEQAAQHKADIEERLAQLRKASDSELERQKGLVEDTLRQRRQVEEEILALKASFEKAAAGKAELELELGRIRSNAEDTLRSKEQAELEAARQRQLAAEEERRRREAEERVQKSLAAEEEAARQRKAALEEVERLKAKVEEARRLRERAEQESARQLQLAQEAAQKRLQAEEKAHAFAVQQKEQELQQTLQQEQSVLDQLRGEAEAARRAAEEAEEARVQAEREAAQSRRQVEEAERLKQSAEEQAQARAQAQAAAEKLRKEAEQEAARRAQAEQAALRQKQAADAEMEKHKKFAEQTLRQKAQVEQELTTLRLQLEETDHQKNLLDEELQRLKAEATEAARQRSQVEEELFSVRVQMEELSKLKARIEAENRALILRDKDNTQRFLQEEAEKMKQVAEEAARLSVAAQEAARLRQLAEEDLAQQRALAEKMLKEKMQAVQEATRLKAEAELLQQQKELAQEQARRLQEDKEQMAQQLAEETQGFQRTLEAERQRQLEMSAEAERLKLRVAEMSRAQARAEEDAQRFRKQAEEIGEKLHRTELATQEKVTLVQTLEIQRQQSDHDAERLREAIAELEREKEKLQQEAKLLQLKSEEMQTVQQEQLLQETQALQQSFLSEKDSLLQRERFIEQEKAKLEQLFQDEVAKAQQLREEQQRQQQQMEQERQRLVASMEEARRRQHEAEEGVRRKQEELQQLEQQRRQQEELLAEENQRLREQLQLLEEQHRAALAHSEEVTASQVAATKTLPNGRDALDGPAAEAEPEHSFDGLRRKVSAQRLQEAGILSAEELQRLAQGHTTVDELARREDVRHYLQGRSSIAGLLLKATNEKLSVYAALQRQLLSPGTALILLEAQAASGFLLDPVRNRRLTVNEAVKEGVVGPELHHKLLSAERAVTGYKDPYTGQQISLFQAMQKGLIVREHGIRLLEAQIATGGVIDPVHSHRVPVDVAYRRGYFDEEMNRVLADPSDDTKGFFDPNTHENLTYLQLLERCVEDPETGLCLLPLTDKAAKGGELVYTDSEARDVFEKATVSAPFGKFQGKTVTIWEIINSEYFTAEQRRDLLRQFRTGRITVEKIIKIIITVVEEQEQKGRLCFEGLRSLVPAAELLESRVIDRELYQQLQRGERSVRDVAEVDTVRRALRGANVIAGVWLEEAGQKLSIYNALKKDLLPSDMAVALLEAQAGTGHIIDPATSARLTVDEAVRAGLVGPEFHEKLLSAEKAVTGYRDPYTGQSVSLFQALKKGLIPREQGLRLLDAQLSTGGIVDPSKSHRVPLDVACARGCLDEETSRALSAPRADAKAYSDPSTGEPATYGELQQRCRPDQLTGLSLLPLSEKAARARQEELYSELQARETFEKTPVEVPVGGFKGRTVTVWELISSEYFTAEQRQELLRQFRTGKVTVEKVIKILITIVEEVETLRQERLSFSGLRAPVPASELLASGVLSRAQFEQLKDGKTTVKDLSELGSVRTLLQGSGCLAGIYLEDTKEKVSIYEAMRRGLLRATTAALLLEAQAATGFLVDPVRNQRLYVHEAVKAGVVGPELHEQLLSAEKAVTGYRDPYSGSTISLFQAMQKGLVLRQHGIRLLEAQIATGGIIDPVHSHRVPVDVAYQRGYFSEEMNRVLADPSDDTKGFFDPNTHENLTYRQLLERCVEDPETGLRLLPLKGAEKAEVVETTQVYTEEETRRAFEETQIDIPGGGSHGGSTMSLWEVMQSDLIPEEQRAQLMADFQAGRVTKERMIIIIIEIIEKTEIIRQQGLASYDYVRRRLTAEDLFEARIISLETYNLLREGTRSLREALEAESAWCYLYGTGSVAGVYLPGSRQTLSIYQALKKGLLSAEVARLLLEAQAATGFLLDPVKGERLTVDEAVRKGLVGPELHDRLLSAERAVTGYRDPYTEQTISLFQAMKKELIPTEEALRLLDAQLATGGIVDPRLGFHLPLEVAYQRGYLNKDTHDQLSEPSEVRSYVDPSTDERLSYTQLLRRCRRDDGTGQLLLPLSDARKLTFRGLRKQITMEELVRSQVMDEATALQLREGLTSIEEVTKNLQKFLEGTSCIAGVFVDATKERLSVYQAMKKGIIRPGTAFELLEAQAATGYVIDPIKGLKLTVEEAVRMGIVGPEFKDKLLSAERAVTGYKDPYSGKLISLFQAMKKGLILKDHGIRLLEAQIATGGIIDPEESHRLPVEVAYKRGLFDEEMNEILTDPSDDTKGFFDPNTEENLTYLQLMERCITDPQTGLCLLPLKEKKRERKTSSKSSVRKRRVVIVDPETGKEMSVYEAYRKGLIDHQTYLELSEQECEWEEITISSSDGVVKSMIIDRRSGRQYDIDDAIAKNLIDRSALDQYRAGTLSITEFADMLSGNAGGFR SRSSSVGSSSSYPISPAVSRTQLASWSDPTEETGPVAGILDTETLEKVSITEAMHRNLVDNITGQRLLEAQACTGGI IDPSTGERFPVTDAVNKGLVDKIMVDRINLAQKAFCGFEDPRTKTKMSAAQALKKGWLYYEAGQRFLEVQYLTGGLI EPDTPGRVPLDEALQRGTVDARTAQKLRDVGAYSKYLTCPKTKLKISYKDALDRSMVEEGTGLRLLEAAAQSTKGYY SPYSVSGSGSTAGSRTGSRTGSRAGSRRGSFDATGSGFSMTFSSSSYSSSGYGRRYASGSSASLGGPESAVA
>SEQ ID NO:2-网蛋白(半桥粒蛋白1),智人;带下划线的靶蛋白
SSSDGVVKSMIIDRRSGRQYDIDDAIAKNLIDRSALDQYRAGTLSITEFADMLSGNAGGFRSRSSSVGSSSSYPISPAVSRTQLASWSDPTEETGPVAGILDTETLEKVSITEAMHRNLVDNITGQRLLEAQACTGGIIDPSTGERFPVTDAVNKGLVDKIMVDRINLAQKAFCGFEDPRTKTKMSAAQALKKGWLYYEAGQRFLEVQYLTGGLIEPDTPGRVPLDEALQRGTVDARTAQKLRDVGAYSKYLTCPKTKLKISYKDALDRSMVEEGTGLRLLEAAAQSTKGYYSPYSVSGSGSTAGSRTGSRTGSRAGSRRGSFDATGSGFSMTFSSSSYSSSGYGRRYASGSSASLGGPESAVA
Pab2序列
Pab1序列
序列表
<110> iTi Health, Inc.
<120> 网蛋白-1结合抗体和其用途
<130> I0447.70003WO00
<140> 尚未分配
<141> 2018年10月11日
<150> US 62/571,246
<151> 2017年10月11日
<160> 91
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 4684
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Met Val Ala Gly Met Leu Met Pro Arg Asp Gln Leu Arg Ala Ile Tyr
1 5 10 15
Glu Val Leu Phe Arg Glu Gly Val Met Val Ala Lys Lys Asp Arg Arg
20 25 30
Pro Arg Ser Leu His Pro His Val Pro Gly Val Thr Asn Leu Gln Val
35 40 45
Met Arg Ala Met Ala Ser Leu Arg Ala Arg Gly Leu Val Arg Glu Thr
50 55 60
Phe Ala Trp Cys His Phe Tyr Trp Tyr Leu Thr Asn Glu Gly Ile Ala
65 70 75 80
His Leu Arg Gln Tyr Leu His Leu Pro Pro Glu Ile Val Pro Ala Ser
85 90 95
Leu Gln Arg Val Arg Arg Pro Val Ala Met Val Met Pro Ala Arg Arg
100 105 110
Thr Pro His Val Gln Ala Val Gln Gly Pro Leu Gly Ser Pro Pro Lys
115 120 125
Arg Gly Pro Leu Pro Thr Glu Glu Gln Arg Val Tyr Arg Arg Lys Glu
130 135 140
Leu Glu Glu Val Ser Pro Glu Thr Pro Val Val Pro Ala Thr Thr Gln
145 150 155 160
Arg Thr Leu Ala Arg Pro Gly Pro Glu Pro Ala Pro Ala Thr Asp Glu
165 170 175
Arg Asp Arg Val Gln Lys Lys Thr Phe Thr Lys Trp Val Asn Lys His
180 185 190
Leu Ile Lys Ala Gln Arg His Ile Ser Asp Leu Tyr Glu Asp Leu Arg
195 200 205
Asp Gly His Asn Leu Ile Ser Leu Leu Glu Val Leu Ser Gly Asp Ser
210 215 220
Leu Pro Arg Glu Lys Gly Arg Met Arg Phe His Lys Leu Gln Asn Val
225 230 235 240
Gln Ile Ala Leu Asp Tyr Leu Arg His Arg Gln Val Lys Leu Val Asn
245 250 255
Ile Arg Asn Asp Asp Ile Ala Asp Gly Asn Pro Lys Leu Thr Leu Gly
260 265 270
Leu Ile Trp Thr Ile Ile Leu His Phe Gln Ile Ser Asp Ile Gln Val
275 280 285
Ser Gly Gln Ser Glu Asp Met Thr Ala Lys Glu Lys Leu Leu Leu Trp
290 295 300
Ser Gln Arg Met Val Glu Gly Tyr Gln Gly Leu Arg Cys Asp Asn Phe
305 310 315 320
Thr Ser Ser Trp Arg Asp Gly Arg Leu Phe Asn Ala Ile Ile His Arg
325 330 335
His Lys Pro Leu Leu Ile Asp Met Asn Lys Val Tyr Arg Gln Thr Asn
340 345 350
Leu Glu Asn Leu Asp Gln Ala Phe Ser Val Ala Glu Arg Asp Leu Gly
355 360 365
Val Thr Arg Leu Leu Asp Pro Glu Asp Val Asp Val Pro Gln Pro Asp
370 375 380
Glu Lys Ser Ile Ile Thr Tyr Val Ser Ser Leu Tyr Asp Ala Met Pro
385 390 395 400
Arg Val Pro Asp Val Gln Asp Gly Val Arg Ala Asn Glu Leu Gln Leu
405 410 415
Arg Trp Gln Glu Tyr Arg Glu Leu Val Leu Leu Leu Leu Gln Trp Met
420 425 430
Arg His His Thr Ala Ala Phe Glu Glu Arg Arg Phe Pro Ser Ser Phe
435 440 445
Glu Glu Ile Glu Ile Leu Trp Ser Gln Phe Leu Lys Phe Lys Glu Met
450 455 460
Glu Leu Pro Ala Lys Glu Ala Asp Lys Asn Arg Ser Lys Gly Ile Tyr
465 470 475 480
Gln Ser Leu Glu Gly Ala Val Gln Ala Gly Gln Leu Lys Val Pro Pro
485 490 495
Gly Tyr His Pro Leu Asp Val Glu Lys Glu Trp Gly Lys Leu His Val
500 505 510
Ala Ile Leu Glu Arg Glu Lys Gln Leu Arg Ser Glu Phe Glu Arg Leu
515 520 525
Glu Cys Leu Gln Arg Ile Val Thr Lys Leu Gln Met Glu Ala Gly Leu
530 535 540
Cys Glu Glu Gln Leu Asn Gln Ala Asp Ala Leu Leu Gln Ser Asp Val
545 550 555 560
Arg Leu Leu Ala Ala Gly Lys Val Pro Gln Arg Ala Gly Glu Val Glu
565 570 575
Arg Asp Leu Asp Lys Ala Asp Ser Met Ile Arg Leu Leu Phe Asn Asp
580 585 590
Val Gln Thr Leu Lys Asp Gly Arg His Pro Gln Gly Glu Gln Met Tyr
595 600 605
Arg Arg Val Tyr Arg Leu His Glu Arg Leu Val Ala Ile Arg Thr Glu
610 615 620
Tyr Asn Leu Arg Leu Lys Ala Gly Val Ala Ala Pro Ala Thr Gln Val
625 630 635 640
Ala Gln Val Thr Leu Gln Ser Val Gln Arg Arg Pro Glu Leu Glu Asp
645 650 655
Ser Thr Leu Arg Tyr Leu Gln Asp Leu Leu Ala Trp Val Glu Glu Asn
660 665 670
Gln His Arg Val Asp Gly Ala Glu Trp Gly Val Asp Leu Pro Ser Val
675 680 685
Glu Ala Gln Leu Gly Ser His Arg Gly Leu His Gln Ser Ile Glu Glu
690 695 700
Phe Arg Ala Lys Ile Glu Arg Ala Arg Ser Asp Glu Gly Gln Leu Ser
705 710 715 720
Pro Ala Thr Arg Gly Ala Tyr Arg Asp Cys Leu Gly Arg Leu Asp Leu
725 730 735
Gln Tyr Ala Lys Leu Leu Asn Ser Ser Lys Ala Arg Leu Arg Ser Leu
740 745 750
Glu Ser Leu His Ser Phe Val Ala Ala Ala Thr Lys Glu Leu Met Trp
755 760 765
Leu Asn Glu Lys Glu Glu Glu Glu Val Gly Phe Asp Trp Ser Asp Arg
770 775 780
Asn Thr Asn Met Thr Ala Lys Lys Glu Ser Tyr Ser Ala Leu Met Arg
785 790 795 800
Glu Leu Glu Leu Lys Glu Lys Lys Ile Lys Glu Leu Gln Asn Ala Gly
805 810 815
Asp Arg Leu Leu Arg Glu Asp His Pro Ala Arg Pro Thr Val Glu Ser
820 825 830
Phe Gln Ala Ala Leu Gln Thr Gln Trp Ser Trp Met Leu Gln Leu Cys
835 840 845
Cys Cys Ile Glu Ala His Leu Lys Glu Asn Ala Ala Tyr Phe Gln Phe
850 855 860
Phe Ser Asp Val Arg Glu Ala Glu Gly Gln Leu Gln Lys Leu Gln Glu
865 870 875 880
Ala Leu Arg Arg Lys Tyr Ser Cys Asp Arg Ser Ala Thr Val Thr Arg
885 890 895
Leu Glu Asp Leu Leu Gln Asp Ala Gln Asp Glu Lys Glu Gln Leu Asn
900 905 910
Glu Tyr Lys Gly His Leu Ser Gly Leu Ala Lys Arg Ala Lys Ala Val
915 920 925
Val Gln Leu Lys Pro Arg His Pro Ala His Pro Met Arg Gly Arg Leu
930 935 940
Pro Leu Leu Ala Val Cys Asp Tyr Lys Gln Val Glu Val Thr Val His
945 950 955 960
Lys Gly Asp Glu Cys Gln Leu Val Gly Pro Ala Gln Pro Ser His Trp
965 970 975
Lys Val Leu Ser Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Val Pro Ser Val Cys
980 985 990
Phe Leu Val Pro Pro Pro Asn Gln Glu Ala Gln Glu Ala Val Thr Arg
995 1000 1005
Leu Glu Ala Gln His Gln Ala Leu Val Thr Leu Trp His Gln Leu
1010 1015 1020
His Val Asp Met Lys Ser Leu Leu Ala Trp Gln Ser Leu Arg Arg
1025 1030 1035
Asp Val Gln Leu Ile Arg Ser Trp Ser Leu Ala Thr Phe Arg Thr
1040 1045 1050
Leu Lys Pro Glu Glu Gln Arg Gln Ala Leu His Ser Leu Glu Leu
1055 1060 1065
His Tyr Gln Ala Phe Leu Arg Asp Ser Gln Asp Ala Gly Gly Phe
1070 1075 1080
Gly Pro Glu Asp Arg Leu Met Ala Glu Arg Glu Tyr Gly Ser Cys
1085 1090 1095
Ser His His Tyr Gln Gln Leu Leu Gln Ser Leu Glu Gln Gly Ala
1100 1105 1110
Gln Glu Glu Ser Arg Cys Gln Arg Cys Ile Ser Glu Leu Lys Asp
1115 1120 1125
Ile Arg Leu Gln Leu Glu Ala Cys Glu Thr Arg Thr Val His Arg
1130 1135 1140
Leu Arg Leu Pro Leu Asp Lys Glu Pro Ala Arg Glu Cys Ala Gln
1145 1150 1155
Arg Ile Ala Glu Gln Gln Lys Ala Gln Ala Glu Val Glu Gly Leu
1160 1165 1170
Gly Lys Gly Val Ala Arg Leu Ser Ala Glu Ala Glu Lys Val Leu
1175 1180 1185
Ala Leu Pro Glu Pro Ser Pro Ala Ala Pro Thr Leu Arg Ser Glu
1190 1195 1200
Leu Glu Leu Thr Leu Gly Lys Leu Glu Gln Val Arg Ser Leu Ser
1205 1210 1215
Ala Ile Tyr Leu Glu Lys Leu Lys Thr Ile Ser Leu Val Ile Arg
1220 1225 1230
Gly Thr Gln Gly Ala Glu Glu Val Leu Arg Ala His Glu Glu Gln
1235 1240 1245
Leu Lys Glu Ala Gln Ala Val Pro Ala Thr Leu Pro Glu Leu Glu
1250 1255 1260
Ala Thr Lys Ala Ser Leu Lys Lys Leu Arg Ala Gln Ala Glu Ala
1265 1270 1275
Gln Gln Pro Thr Phe Asp Ala Leu Arg Asp Glu Leu Arg Gly Ala
1280 1285 1290
Gln Glu Val Gly Glu Arg Leu Gln Gln Arg His Gly Glu Arg Asp
1295 1300 1305
Val Glu Val Glu Arg Trp Arg Glu Arg Val Ala Gln Leu Leu Glu
1310 1315 1320
Arg Trp Gln Ala Val Leu Ala Gln Thr Asp Val Arg Gln Arg Glu
1325 1330 1335
Leu Glu Gln Leu Gly Arg Gln Leu Arg Tyr Tyr Arg Glu Ser Ala
1340 1345 1350
Asp Pro Leu Gly Ala Trp Leu Gln Asp Ala Arg Arg Arg Gln Glu
1355 1360 1365
Gln Ile Gln Ala Met Pro Leu Ala Asp Ser Gln Ala Val Arg Glu
1370 1375 1380
Gln Leu Arg Gln Glu Gln Ala Leu Leu Glu Glu Ile Glu Arg His
1385 1390 1395
Gly Glu Lys Val Glu Glu Cys Gln Arg Phe Ala Lys Gln Tyr Ile
1400 1405 1410
Asn Ala Ile Lys Asp Tyr Glu Leu Gln Leu Val Thr Tyr Lys Ala
1415 1420 1425
Gln Leu Glu Pro Val Ala Ser Pro Ala Lys Lys Pro Lys Val Gln
1430 1435 1440
Ser Gly Ser Glu Ser Val Ile Gln Glu Tyr Val Asp Leu Arg Thr
1445 1450 1455
His Tyr Ser Glu Leu Thr Thr Leu Thr Ser Gln Tyr Ile Lys Phe
1460 1465 1470
Ile Ser Glu Thr Leu Arg Arg Met Glu Glu Glu Glu Arg Leu Ala
1475 1480 1485
Glu Gln Gln Arg Ala Glu Glu Arg Glu Arg Leu Ala Glu Val Glu
1490 1495 1500
Ala Ala Leu Glu Lys Gln Arg Gln Leu Ala Glu Ala His Ala Gln
1505 1510 1515
Ala Lys Ala Gln Ala Glu Arg Glu Ala Lys Glu Leu Gln Gln Arg
1520 1525 1530
Met Gln Glu Glu Val Val Arg Arg Glu Glu Ala Ala Val Asp Ala
1535 1540 1545
Gln Gln Gln Lys Arg Ser Ile Gln Glu Glu Leu Gln Gln Leu Arg
1550 1555 1560
Gln Ser Ser Glu Ala Glu Ile Gln Ala Lys Ala Arg Gln Ala Glu
1565 1570 1575
Ala Ala Glu Arg Ser Arg Leu Arg Ile Glu Glu Glu Ile Arg Val
1580 1585 1590
Val Arg Leu Gln Leu Glu Ala Thr Glu Arg Gln Arg Gly Gly Ala
1595 1600 1605
Glu Gly Glu Leu Gln Ala Leu Arg Ala Arg Ala Glu Glu Ala Glu
1610 1615 1620
Ala Gln Lys Arg Gln Ala Gln Glu Glu Ala Glu Arg Leu Arg Arg
1625 1630 1635
Gln Val Gln Asp Glu Ser Gln Arg Lys Arg Gln Ala Glu Val Glu
1640 1645 1650
Leu Ala Ser Arg Val Lys Ala Glu Ala Glu Ala Ala Arg Glu Lys
1655 1660 1665
Gln Arg Ala Leu Gln Ala Leu Glu Glu Leu Arg Leu Gln Ala Glu
1670 1675 1680
Glu Ala Glu Arg Arg Leu Arg Gln Ala Glu Val Glu Arg Ala Arg
1685 1690 1695
Gln Val Gln Val Ala Leu Glu Thr Ala Gln Arg Ser Ala Glu Ala
1700 1705 1710
Glu Leu Gln Ser Lys Arg Ala Ser Phe Ala Glu Lys Thr Ala Gln
1715 1720 1725
Leu Glu Arg Ser Leu Gln Glu Glu His Val Ala Val Ala Gln Leu
1730 1735 1740
Arg Glu Glu Ala Glu Arg Arg Ala Gln Gln Gln Ala Glu Ala Glu
1745 1750 1755
Arg Ala Arg Glu Glu Ala Glu Arg Glu Leu Glu Arg Trp Gln Leu
1760 1765 1770
Lys Ala Asn Glu Ala Leu Arg Leu Arg Leu Gln Ala Glu Glu Val
1775 1780 1785
Ala Gln Gln Lys Ser Leu Ala Gln Ala Glu Ala Glu Lys Gln Lys
1790 1795 1800
Glu Glu Ala Glu Arg Glu Ala Arg Arg Arg Gly Lys Ala Glu Glu
1805 1810 1815
Gln Ala Val Arg Gln Arg Glu Leu Ala Glu Gln Glu Leu Glu Lys
1820 1825 1830
Gln Arg Gln Leu Ala Glu Gly Thr Ala Gln Gln Arg Leu Ala Ala
1835 1840 1845
Glu Gln Glu Leu Ile Arg Leu Arg Ala Glu Thr Glu Gln Gly Glu
1850 1855 1860
Gln Gln Arg Gln Leu Leu Glu Glu Glu Leu Ala Arg Leu Gln Arg
1865 1870 1875
Glu Ala Ala Ala Ala Thr Gln Lys Arg Gln Glu Leu Glu Ala Glu
1880 1885 1890
Leu Ala Lys Val Arg Ala Glu Met Glu Val Leu Leu Ala Ser Lys
1895 1900 1905
Ala Arg Ala Glu Glu Glu Ser Arg Ser Thr Ser Glu Lys Ser Lys
1910 1915 1920
Gln Arg Leu Glu Ala Glu Ala Gly Arg Phe Arg Glu Leu Ala Glu
1925 1930 1935
Glu Ala Ala Arg Leu Arg Ala Leu Ala Glu Glu Ala Lys Arg Gln
1940 1945 1950
Arg Gln Leu Ala Glu Glu Asp Ala Ala Arg Gln Arg Ala Glu Ala
1955 1960 1965
Glu Arg Val Leu Ala Glu Lys Leu Ala Ala Ile Gly Glu Ala Thr
1970 1975 1980
Arg Leu Lys Thr Glu Ala Glu Ile Ala Leu Lys Glu Lys Glu Ala
1985 1990 1995
Glu Asn Glu Arg Leu Arg Arg Leu Ala Glu Asp Glu Ala Phe Gln
2000 2005 2010
Arg Arg Arg Leu Glu Glu Gln Ala Ala Gln His Lys Ala Asp Ile
2015 2020 2025
Glu Glu Arg Leu Ala Gln Leu Arg Lys Ala Ser Asp Ser Glu Leu
2030 2035 2040
Glu Arg Gln Lys Gly Leu Val Glu Asp Thr Leu Arg Gln Arg Arg
2045 2050 2055
Gln Val Glu Glu Glu Ile Leu Ala Leu Lys Ala Ser Phe Glu Lys
2060 2065 2070
Ala Ala Ala Gly Lys Ala Glu Leu Glu Leu Glu Leu Gly Arg Ile
2075 2080 2085
Arg Ser Asn Ala Glu Asp Thr Leu Arg Ser Lys Glu Gln Ala Glu
2090 2095 2100
Leu Glu Ala Ala Arg Gln Arg Gln Leu Ala Ala Glu Glu Glu Arg
2105 2110 2115
Arg Arg Arg Glu Ala Glu Glu Arg Val Gln Lys Ser Leu Ala Ala
2120 2125 2130
Glu Glu Glu Ala Ala Arg Gln Arg Lys Ala Ala Leu Glu Glu Val
2135 2140 2145
Glu Arg Leu Lys Ala Lys Val Glu Glu Ala Arg Arg Leu Arg Glu
2150 2155 2160
Arg Ala Glu Gln Glu Ser Ala Arg Gln Leu Gln Leu Ala Gln Glu
2165 2170 2175
Ala Ala Gln Lys Arg Leu Gln Ala Glu Glu Lys Ala His Ala Phe
2180 2185 2190
Ala Val Gln Gln Lys Glu Gln Glu Leu Gln Gln Thr Leu Gln Gln
2195 2200 2205
Glu Gln Ser Val Leu Asp Gln Leu Arg Gly Glu Ala Glu Ala Ala
2210 2215 2220
Arg Arg Ala Ala Glu Glu Ala Glu Glu Ala Arg Val Gln Ala Glu
2225 2230 2235
Arg Glu Ala Ala Gln Ser Arg Arg Gln Val Glu Glu Ala Glu Arg
2240 2245 2250
Leu Lys Gln Ser Ala Glu Glu Gln Ala Gln Ala Arg Ala Gln Ala
2255 2260 2265
Gln Ala Ala Ala Glu Lys Leu Arg Lys Glu Ala Glu Gln Glu Ala
2270 2275 2280
Ala Arg Arg Ala Gln Ala Glu Gln Ala Ala Leu Arg Gln Lys Gln
2285 2290 2295
Ala Ala Asp Ala Glu Met Glu Lys His Lys Lys Phe Ala Glu Gln
2300 2305 2310
Thr Leu Arg Gln Lys Ala Gln Val Glu Gln Glu Leu Thr Thr Leu
2315 2320 2325
Arg Leu Gln Leu Glu Glu Thr Asp His Gln Lys Asn Leu Leu Asp
2330 2335 2340
Glu Glu Leu Gln Arg Leu Lys Ala Glu Ala Thr Glu Ala Ala Arg
2345 2350 2355
Gln Arg Ser Gln Val Glu Glu Glu Leu Phe Ser Val Arg Val Gln
2360 2365 2370
Met Glu Glu Leu Ser Lys Leu Lys Ala Arg Ile Glu Ala Glu Asn
2375 2380 2385
Arg Ala Leu Ile Leu Arg Asp Lys Asp Asn Thr Gln Arg Phe Leu
2390 2395 2400
Gln Glu Glu Ala Glu Lys Met Lys Gln Val Ala Glu Glu Ala Ala
2405 2410 2415
Arg Leu Ser Val Ala Ala Gln Glu Ala Ala Arg Leu Arg Gln Leu
2420 2425 2430
Ala Glu Glu Asp Leu Ala Gln Gln Arg Ala Leu Ala Glu Lys Met
2435 2440 2445
Leu Lys Glu Lys Met Gln Ala Val Gln Glu Ala Thr Arg Leu Lys
2450 2455 2460
Ala Glu Ala Glu Leu Leu Gln Gln Gln Lys Glu Leu Ala Gln Glu
2465 2470 2475
Gln Ala Arg Arg Leu Gln Glu Asp Lys Glu Gln Met Ala Gln Gln
2480 2485 2490
Leu Ala Glu Glu Thr Gln Gly Phe Gln Arg Thr Leu Glu Ala Glu
2495 2500 2505
Arg Gln Arg Gln Leu Glu Met Ser Ala Glu Ala Glu Arg Leu Lys
2510 2515 2520
Leu Arg Val Ala Glu Met Ser Arg Ala Gln Ala Arg Ala Glu Glu
2525 2530 2535
Asp Ala Gln Arg Phe Arg Lys Gln Ala Glu Glu Ile Gly Glu Lys
2540 2545 2550
Leu His Arg Thr Glu Leu Ala Thr Gln Glu Lys Val Thr Leu Val
2555 2560 2565
Gln Thr Leu Glu Ile Gln Arg Gln Gln Ser Asp His Asp Ala Glu
2570 2575 2580
Arg Leu Arg Glu Ala Ile Ala Glu Leu Glu Arg Glu Lys Glu Lys
2585 2590 2595
Leu Gln Gln Glu Ala Lys Leu Leu Gln Leu Lys Ser Glu Glu Met
2600 2605 2610
Gln Thr Val Gln Gln Glu Gln Leu Leu Gln Glu Thr Gln Ala Leu
2615 2620 2625
Gln Gln Ser Phe Leu Ser Glu Lys Asp Ser Leu Leu Gln Arg Glu
2630 2635 2640
Arg Phe Ile Glu Gln Glu Lys Ala Lys Leu Glu Gln Leu Phe Gln
2645 2650 2655
Asp Glu Val Ala Lys Ala Gln Gln Leu Arg Glu Glu Gln Gln Arg
2660 2665 2670
Gln Gln Gln Gln Met Glu Gln Glu Arg Gln Arg Leu Val Ala Ser
2675 2680 2685
Met Glu Glu Ala Arg Arg Arg Gln His Glu Ala Glu Glu Gly Val
2690 2695 2700
Arg Arg Lys Gln Glu Glu Leu Gln Gln Leu Glu Gln Gln Arg Arg
2705 2710 2715
Gln Gln Glu Glu Leu Leu Ala Glu Glu Asn Gln Arg Leu Arg Glu
2720 2725 2730
Gln Leu Gln Leu Leu Glu Glu Gln His Arg Ala Ala Leu Ala His
2735 2740 2745
Ser Glu Glu Val Thr Ala Ser Gln Val Ala Ala Thr Lys Thr Leu
2750 2755 2760
Pro Asn Gly Arg Asp Ala Leu Asp Gly Pro Ala Ala Glu Ala Glu
2765 2770 2775
Pro Glu His Ser Phe Asp Gly Leu Arg Arg Lys Val Ser Ala Gln
2780 2785 2790
Arg Leu Gln Glu Ala Gly Ile Leu Ser Ala Glu Glu Leu Gln Arg
2795 2800 2805
Leu Ala Gln Gly His Thr Thr Val Asp Glu Leu Ala Arg Arg Glu
2810 2815 2820
Asp Val Arg His Tyr Leu Gln Gly Arg Ser Ser Ile Ala Gly Leu
2825 2830 2835
Leu Leu Lys Ala Thr Asn Glu Lys Leu Ser Val Tyr Ala Ala Leu
2840 2845 2850
Gln Arg Gln Leu Leu Ser Pro Gly Thr Ala Leu Ile Leu Leu Glu
2855 2860 2865
Ala Gln Ala Ala Ser Gly Phe Leu Leu Asp Pro Val Arg Asn Arg
2870 2875 2880
Arg Leu Thr Val Asn Glu Ala Val Lys Glu Gly Val Val Gly Pro
2885 2890 2895
Glu Leu His His Lys Leu Leu Ser Ala Glu Arg Ala Val Thr Gly
2900 2905 2910
Tyr Lys Asp Pro Tyr Thr Gly Gln Gln Ile Ser Leu Phe Gln Ala
2915 2920 2925
Met Gln Lys Gly Leu Ile Val Arg Glu His Gly Ile Arg Leu Leu
2930 2935 2940
Glu Ala Gln Ile Ala Thr Gly Gly Val Ile Asp Pro Val His Ser
2945 2950 2955
His Arg Val Pro Val Asp Val Ala Tyr Arg Arg Gly Tyr Phe Asp
2960 2965 2970
Glu Glu Met Asn Arg Val Leu Ala Asp Pro Ser Asp Asp Thr Lys
2975 2980 2985
Gly Phe Phe Asp Pro Asn Thr His Glu Asn Leu Thr Tyr Leu Gln
2990 2995 3000
Leu Leu Glu Arg Cys Val Glu Asp Pro Glu Thr Gly Leu Cys Leu
3005 3010 3015
Leu Pro Leu Thr Asp Lys Ala Ala Lys Gly Gly Glu Leu Val Tyr
3020 3025 3030
Thr Asp Ser Glu Ala Arg Asp Val Phe Glu Lys Ala Thr Val Ser
3035 3040 3045
Ala Pro Phe Gly Lys Phe Gln Gly Lys Thr Val Thr Ile Trp Glu
3050 3055 3060
Ile Ile Asn Ser Glu Tyr Phe Thr Ala Glu Gln Arg Arg Asp Leu
3065 3070 3075
Leu Arg Gln Phe Arg Thr Gly Arg Ile Thr Val Glu Lys Ile Ile
3080 3085 3090
Lys Ile Ile Ile Thr Val Val Glu Glu Gln Glu Gln Lys Gly Arg
3095 3100 3105
Leu Cys Phe Glu Gly Leu Arg Ser Leu Val Pro Ala Ala Glu Leu
3110 3115 3120
Leu Glu Ser Arg Val Ile Asp Arg Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Gln
3125 3130 3135
Arg Gly Glu Arg Ser Val Arg Asp Val Ala Glu Val Asp Thr Val
3140 3145 3150
Arg Arg Ala Leu Arg Gly Ala Asn Val Ile Ala Gly Val Trp Leu
3155 3160 3165
Glu Glu Ala Gly Gln Lys Leu Ser Ile Tyr Asn Ala Leu Lys Lys
3170 3175 3180
Asp Leu Leu Pro Ser Asp Met Ala Val Ala Leu Leu Glu Ala Gln
3185 3190 3195
Ala Gly Thr Gly His Ile Ile Asp Pro Ala Thr Ser Ala Arg Leu
3200 3205 3210
Thr Val Asp Glu Ala Val Arg Ala Gly Leu Val Gly Pro Glu Phe
3215 3220 3225
His Glu Lys Leu Leu Ser Ala Glu Lys Ala Val Thr Gly Tyr Arg
3230 3235 3240
Asp Pro Tyr Thr Gly Gln Ser Val Ser Leu Phe Gln Ala Leu Lys
3245 3250 3255
Lys Gly Leu Ile Pro Arg Glu Gln Gly Leu Arg Leu Leu Asp Ala
3260 3265 3270
Gln Leu Ser Thr Gly Gly Ile Val Asp Pro Ser Lys Ser His Arg
3275 3280 3285
Val Pro Leu Asp Val Ala Cys Ala Arg Gly Cys Leu Asp Glu Glu
3290 3295 3300
Thr Ser Arg Ala Leu Ser Ala Pro Arg Ala Asp Ala Lys Ala Tyr
3305 3310 3315
Ser Asp Pro Ser Thr Gly Glu Pro Ala Thr Tyr Gly Glu Leu Gln
3320 3325 3330
Gln Arg Cys Arg Pro Asp Gln Leu Thr Gly Leu Ser Leu Leu Pro
3335 3340 3345
Leu Ser Glu Lys Ala Ala Arg Ala Arg Gln Glu Glu Leu Tyr Ser
3350 3355 3360
Glu Leu Gln Ala Arg Glu Thr Phe Glu Lys Thr Pro Val Glu Val
3365 3370 3375
Pro Val Gly Gly Phe Lys Gly Arg Thr Val Thr Val Trp Glu Leu
3380 3385 3390
Ile Ser Ser Glu Tyr Phe Thr Ala Glu Gln Arg Gln Glu Leu Leu
3395 3400 3405
Arg Gln Phe Arg Thr Gly Lys Val Thr Val Glu Lys Val Ile Lys
3410 3415 3420
Ile Leu Ile Thr Ile Val Glu Glu Val Glu Thr Leu Arg Gln Glu
3425 3430 3435
Arg Leu Ser Phe Ser Gly Leu Arg Ala Pro Val Pro Ala Ser Glu
3440 3445 3450
Leu Leu Ala Ser Gly Val Leu Ser Arg Ala Gln Phe Glu Gln Leu
3455 3460 3465
Lys Asp Gly Lys Thr Thr Val Lys Asp Leu Ser Glu Leu Gly Ser
3470 3475 3480
Val Arg Thr Leu Leu Gln Gly Ser Gly Cys Leu Ala Gly Ile Tyr
3485 3490 3495
Leu Glu Asp Thr Lys Glu Lys Val Ser Ile Tyr Glu Ala Met Arg
3500 3505 3510
Arg Gly Leu Leu Arg Ala Thr Thr Ala Ala Leu Leu Leu Glu Ala
3515 3520 3525
Gln Ala Ala Thr Gly Phe Leu Val Asp Pro Val Arg Asn Gln Arg
3530 3535 3540
Leu Tyr Val His Glu Ala Val Lys Ala Gly Val Val Gly Pro Glu
3545 3550 3555
Leu His Glu Gln Leu Leu Ser Ala Glu Lys Ala Val Thr Gly Tyr
3560 3565 3570
Arg Asp Pro Tyr Ser Gly Ser Thr Ile Ser Leu Phe Gln Ala Met
3575 3580 3585
Gln Lys Gly Leu Val Leu Arg Gln His Gly Ile Arg Leu Leu Glu
3590 3595 3600
Ala Gln Ile Ala Thr Gly Gly Ile Ile Asp Pro Val His Ser His
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Arg Val Pro Val Asp Val Ala Tyr Gln Arg Gly Tyr Phe Ser Glu
3620 3625 3630
Glu Met Asn Arg Val Leu Ala Asp Pro Ser Asp Asp Thr Lys Gly
3635 3640 3645
Phe Phe Asp Pro Asn Thr His Glu Asn Leu Thr Tyr Arg Gln Leu
3650 3655 3660
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3665 3670 3675
Pro Leu Lys Gly Ala Glu Lys Ala Glu Val Val Glu Thr Thr Gln
3680 3685 3690
Val Tyr Thr Glu Glu Glu Thr Arg Arg Ala Phe Glu Glu Thr Gln
3695 3700 3705
Ile Asp Ile Pro Gly Gly Gly Ser His Gly Gly Ser Thr Met Ser
3710 3715 3720
Leu Trp Glu Val Met Gln Ser Asp Leu Ile Pro Glu Glu Gln Arg
3725 3730 3735
Ala Gln Leu Met Ala Asp Phe Gln Ala Gly Arg Val Thr Lys Glu
3740 3745 3750
Arg Met Ile Ile Ile Ile Ile Glu Ile Ile Glu Lys Thr Glu Ile
3755 3760 3765
Ile Arg Gln Gln Gly Leu Ala Ser Tyr Asp Tyr Val Arg Arg Arg
3770 3775 3780
Leu Thr Ala Glu Asp Leu Phe Glu Ala Arg Ile Ile Ser Leu Glu
3785 3790 3795
Thr Tyr Asn Leu Leu Arg Glu Gly Thr Arg Ser Leu Arg Glu Ala
3800 3805 3810
Leu Glu Ala Glu Ser Ala Trp Cys Tyr Leu Tyr Gly Thr Gly Ser
3815 3820 3825
Val Ala Gly Val Tyr Leu Pro Gly Ser Arg Gln Thr Leu Ser Ile
3830 3835 3840
Tyr Gln Ala Leu Lys Lys Gly Leu Leu Ser Ala Glu Val Ala Arg
3845 3850 3855
Leu Leu Leu Glu Ala Gln Ala Ala Thr Gly Phe Leu Leu Asp Pro
3860 3865 3870
Val Lys Gly Glu Arg Leu Thr Val Asp Glu Ala Val Arg Lys Gly
3875 3880 3885
Leu Val Gly Pro Glu Leu His Asp Arg Leu Leu Ser Ala Glu Arg
3890 3895 3900
Ala Val Thr Gly Tyr Arg Asp Pro Tyr Thr Glu Gln Thr Ile Ser
3905 3910 3915
Leu Phe Gln Ala Met Lys Lys Glu Leu Ile Pro Thr Glu Glu Ala
3920 3925 3930
Leu Arg Leu Leu Asp Ala Gln Leu Ala Thr Gly Gly Ile Val Asp
3935 3940 3945
Pro Arg Leu Gly Phe His Leu Pro Leu Glu Val Ala Tyr Gln Arg
3950 3955 3960
Gly Tyr Leu Asn Lys Asp Thr His Asp Gln Leu Ser Glu Pro Ser
3965 3970 3975
Glu Val Arg Ser Tyr Val Asp Pro Ser Thr Asp Glu Arg Leu Ser
3980 3985 3990
Tyr Thr Gln Leu Leu Arg Arg Cys Arg Arg Asp Asp Gly Thr Gly
3995 4000 4005
Gln Leu Leu Leu Pro Leu Ser Asp Ala Arg Lys Leu Thr Phe Arg
4010 4015 4020
Gly Leu Arg Lys Gln Ile Thr Met Glu Glu Leu Val Arg Ser Gln
4025 4030 4035
Val Met Asp Glu Ala Thr Ala Leu Gln Leu Arg Glu Gly Leu Thr
4040 4045 4050
Ser Ile Glu Glu Val Thr Lys Asn Leu Gln Lys Phe Leu Glu Gly
4055 4060 4065
Thr Ser Cys Ile Ala Gly Val Phe Val Asp Ala Thr Lys Glu Arg
4070 4075 4080
Leu Ser Val Tyr Gln Ala Met Lys Lys Gly Ile Ile Arg Pro Gly
4085 4090 4095
Thr Ala Phe Glu Leu Leu Glu Ala Gln Ala Ala Thr Gly Tyr Val
4100 4105 4110
Ile Asp Pro Ile Lys Gly Leu Lys Leu Thr Val Glu Glu Ala Val
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Arg Met Gly Ile Val Gly Pro Glu Phe Lys Asp Lys Leu Leu Ser
4130 4135 4140
Ala Glu Arg Ala Val Thr Gly Tyr Lys Asp Pro Tyr Ser Gly Lys
4145 4150 4155
Leu Ile Ser Leu Phe Gln Ala Met Lys Lys Gly Leu Ile Leu Lys
4160 4165 4170
Asp His Gly Ile Arg Leu Leu Glu Ala Gln Ile Ala Thr Gly Gly
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Tyr Lys Arg Gly Leu Phe Asp Glu Glu Met Asn Glu Ile Leu Thr
4205 4210 4215
Asp Pro Ser Asp Asp Thr Lys Gly Phe Phe Asp Pro Asn Thr Glu
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Glu Asn Leu Thr Tyr Leu Gln Leu Met Glu Arg Cys Ile Thr Asp
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Pro Gln Thr Gly Leu Cys Leu Leu Pro Leu Lys Glu Lys Lys Arg
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Ser Glu Gln Glu Cys Glu Trp Glu Glu Ile Thr Ile Ser Ser Ser
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Asp Gly Val Val Lys Ser Met Ile Ile Asp Arg Arg Ser Gly Arg
4325 4330 4335
Gln Tyr Asp Ile Asp Asp Ala Ile Ala Lys Asn Leu Ile Asp Arg
4340 4345 4350
Ser Ala Leu Asp Gln Tyr Arg Ala Gly Thr Leu Ser Ile Thr Glu
4355 4360 4365
Phe Ala Asp Met Leu Ser Gly Asn Ala Gly Gly Phe Arg Ser Arg
4370 4375 4380
Ser Ser Ser Val Gly Ser Ser Ser Ser Tyr Pro Ile Ser Pro Ala
4385 4390 4395
Val Ser Arg Thr Gln Leu Ala Ser Trp Ser Asp Pro Thr Glu Glu
4400 4405 4410
Thr Gly Pro Val Ala Gly Ile Leu Asp Thr Glu Thr Leu Glu Lys
4415 4420 4425
Val Ser Ile Thr Glu Ala Met His Arg Asn Leu Val Asp Asn Ile
4430 4435 4440
Thr Gly Gln Arg Leu Leu Glu Ala Gln Ala Cys Thr Gly Gly Ile
4445 4450 4455
Ile Asp Pro Ser Thr Gly Glu Arg Phe Pro Val Thr Asp Ala Val
4460 4465 4470
Asn Lys Gly Leu Val Asp Lys Ile Met Val Asp Arg Ile Asn Leu
4475 4480 4485
Ala Gln Lys Ala Phe Cys Gly Phe Glu Asp Pro Arg Thr Lys Thr
4490 4495 4500
Lys Met Ser Ala Ala Gln Ala Leu Lys Lys Gly Trp Leu Tyr Tyr
4505 4510 4515
Glu Ala Gly Gln Arg Phe Leu Glu Val Gln Tyr Leu Thr Gly Gly
4520 4525 4530
Leu Ile Glu Pro Asp Thr Pro Gly Arg Val Pro Leu Asp Glu Ala
4535 4540 4545
Leu Gln Arg Gly Thr Val Asp Ala Arg Thr Ala Gln Lys Leu Arg
4550 4555 4560
Asp Val Gly Ala Tyr Ser Lys Tyr Leu Thr Cys Pro Lys Thr Lys
4565 4570 4575
Leu Lys Ile Ser Tyr Lys Asp Ala Leu Asp Arg Ser Met Val Glu
4580 4585 4590
Glu Gly Thr Gly Leu Arg Leu Leu Glu Ala Ala Ala Gln Ser Thr
4595 4600 4605
Lys Gly Tyr Tyr Ser Pro Tyr Ser Val Ser Gly Ser Gly Ser Thr
4610 4615 4620
Ala Gly Ser Arg Thr Gly Ser Arg Thr Gly Ser Arg Ala Gly Ser
4625 4630 4635
Arg Arg Gly Ser Phe Asp Ala Thr Gly Ser Gly Phe Ser Met Thr
4640 4645 4650
Phe Ser Ser Ser Ser Tyr Ser Ser Ser Gly Tyr Gly Arg Arg Tyr
4655 4660 4665
Ala Ser Gly Ser Ser Ala Ser Leu Gly Gly Pro Glu Ser Ala Val
4670 4675 4680
Ala
<210> 2
<211> 364
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2
Ser Ser Ser Asp Gly Val Val Lys Ser Met Ile Ile Asp Arg Arg Ser
1 5 10 15
Gly Arg Gln Tyr Asp Ile Asp Asp Ala Ile Ala Lys Asn Leu Ile Asp
20 25 30
Arg Ser Ala Leu Asp Gln Tyr Arg Ala Gly Thr Leu Ser Ile Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Asp Met Leu Ser Gly Asn Ala Gly Gly Phe Arg Ser Arg Ser
50 55 60
Ser Ser Val Gly Ser Ser Ser Ser Tyr Pro Ile Ser Pro Ala Val Ser
65 70 75 80
Arg Thr Gln Leu Ala Ser Trp Ser Asp Pro Thr Glu Glu Thr Gly Pro
85 90 95
Val Ala Gly Ile Leu Asp Thr Glu Thr Leu Glu Lys Val Ser Ile Thr
100 105 110
Glu Ala Met His Arg Asn Leu Val Asp Asn Ile Thr Gly Gln Arg Leu
115 120 125
Leu Glu Ala Gln Ala Cys Thr Gly Gly Ile Ile Asp Pro Ser Thr Gly
130 135 140
Glu Arg Phe Pro Val Thr Asp Ala Val Asn Lys Gly Leu Val Asp Lys
145 150 155 160
Ile Met Val Asp Arg Ile Asn Leu Ala Gln Lys Ala Phe Cys Gly Phe
165 170 175
Glu Asp Pro Arg Thr Lys Thr Lys Met Ser Ala Ala Gln Ala Leu Lys
180 185 190
Lys Gly Trp Leu Tyr Tyr Glu Ala Gly Gln Arg Phe Leu Glu Val Gln
195 200 205
Tyr Leu Thr Gly Gly Leu Ile Glu Pro Asp Thr Pro Gly Arg Val Pro
210 215 220
Leu Asp Glu Ala Leu Gln Arg Gly Thr Val Asp Ala Arg Thr Ala Gln
225 230 235 240
Lys Leu Arg Asp Val Gly Ala Tyr Ser Lys Tyr Leu Thr Cys Pro Lys
245 250 255
Thr Lys Leu Lys Ile Ser Tyr Lys Asp Ala Leu Asp Arg Ser Met Val
260 265 270
Glu Glu Gly Thr Gly Leu Arg Leu Leu Glu Ala Ala Ala Gln Ser Thr
275 280 285
Lys Gly Tyr Tyr Ser Pro Tyr Ser Val Ser Gly Ser Gly Ser Thr Ala
290 295 300
Gly Ser Arg Thr Gly Ser Arg Thr Gly Ser Arg Ala Gly Ser Arg Arg
305 310 315 320
Gly Ser Phe Asp Ala Thr Gly Ser Gly Phe Ser Met Thr Phe Ser Ser
325 330 335
Ser Ser Tyr Ser Ser Ser Gly Tyr Gly Arg Arg Tyr Ala Ser Gly Ser
340 345 350
Ser Ala Ser Leu Gly Gly Pro Glu Ser Ala Val Ala
355 360
<210> 3
<211> 1398
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 3
atgaacttcg ggctcagctt gattttcctt gccctcattt taaaaggtgt ccagtgtgag 60
gtgcagctgg tggagtctgg gggagacttg gtgaagcctg gagggtccct gaaactctcc 120
tgtgcagcct ctggattcac tttcagtagg tatggcatgt cttgggttcg ccagactcca 180
gacaagaggc tggagtgggt cgcaaccatt agtattggtg gtacttacac ctactatcca 240
gacagtatga aggggcgatt caccatctcc agagacaatg ccaagaacac cctgtacctg 300
caaatgagca gtctgaagtc tgaggacaca gccatgtatt actgtgcaag acgggggtat 360
ggtaactact cttactatgg tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 420
tcagccaaaa cgacaccccc atctgtctat ccactggccc ctggatctgc tgcccaaact 480
aactccatgg tgaccctggg atgcctggtc aagggctatt tccctgagcc agtgacagtg 540
acctggaact ctggatccct gtccagcggt gtgcacacct tcccagctgt cctgcagtct 600
gacctctaca ctctgagcag ctcagtgact gtcccctcca gcacctggcc cagcgagacc 660
gtcacctgca acgttgccca cccggccagc agcaccaagg tggacaagaa aattgtgccc 720
agggattgtg gttgtaagcc ttgcatatgt acagtcccag aagtatcatc tgtcttcatc 780
ttccccccaa agcccaagga tgtgctcacc attactctga ctcctaaggt cacgtgtgtt 840
gtggtagaca tcagcaagga tgatcccgag gtccagttca gctggtttgt agatgatgtg 900
gaggtgcaca cagctcagac gcaaccccgg gaggagcagt tcaacagcac tttccgctca 960
gtcagtgaac ttcccatcat gcaccaggac tggctcaatg gcaaggagtt caaatgcagg 1020
gtcaacagtg cagctttccc tgcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaaggcaga 1080
ccgaaggctc cacaggtgta caccattcca cctcccaagg agcagatggc caaggataaa 1140
gtcagtctga cctgcatgat aacagacttc ttccctgaag acattactgt ggagtggcag 1200
tggaatgggc agccagcgga gaactacaag aacactcagc ccatcatgga cacagatggc 1260
tcttacttcg tctacagcaa gctcaatgtg cagaagagca actgggaggc aggaaatact 1320
ttcacctgct ctgtgttaca tgagggcctg cacaaccacc atactgagaa gagcctctcc 1380
cactctcctg gtaaatga 1398
<210> 4
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 4
atgaacttcg ggctcagctt gattttcctt gccctcattt taaaaggtgt ccagtgt 57
<210> 5
<211> 90
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 5
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ttggtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt 90
<210> 6
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 6
aggtatggca tgtct 15
<210> 7
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 7
tgggttcgcc agactccaga caagaggctg gagtgggtcg ca 42
<210> 8
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 8
accattagta ttggtggtac ttacacctac tatccagaca gtatgaaggg g 51
<210> 9
<211> 96
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 9
cgattcacca tctccagaga caatgccaag aacaccctgt acctgcaaat gagcagtctg 60
aagtctgagg acacagccat gtattactgt gcaaga 96
<210> 10
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 10
cgggggtatg gtaactactc ttactatggt atggactac 39
<210> 11
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 11
tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc tca 33
<210> 12
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 12
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ttggtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aggtatggca tgtcttgggt tcgccagact 120
ccagacaaga ggctggagtg ggtcgcaacc attagtattg gtggtactta cacctactat 180
ccagacagta tgaaggggcg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caccctgtac 240
ctgcaaatga gcagtctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtgc aagacggggg 300
tatggtaact actcttacta tggtatggac tactggggtc aaggaacctc agtcaccgtc 360
tcctca 366
<210> 13
<211> 972
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 13
gccaaaacga cacccccatc tgtctatcca ctggcccctg gatctgctgc ccaaactaac 60
tccatggtga ccctgggatg cctggtcaag ggctatttcc ctgagccagt gacagtgacc 120
tggaactctg gatccctgtc cagcggtgtg cacaccttcc cagctgtcct gcagtctgac 180
ctctacactc tgagcagctc agtgactgtc ccctccagca cctggcccag cgagaccgtc 240
acctgcaacg ttgcccaccc ggccagcagc accaaggtgg acaagaaaat tgtgcccagg 300
gattgtggtt gtaagccttg catatgtaca gtcccagaag tatcatctgt cttcatcttc 360
cccccaaagc ccaaggatgt gctcaccatt actctgactc ctaaggtcac gtgtgttgtg 420
gtagacatca gcaaggatga tcccgaggtc cagttcagct ggtttgtaga tgatgtggag 480
gtgcacacag ctcagacgca accccgggag gagcagttca acagcacttt ccgctcagtc 540
agtgaacttc ccatcatgca ccaggactgg ctcaatggca aggagttcaa atgcagggtc 600
aacagtgcag ctttccctgc ccccatcgag aaaaccatct ccaaaaccaa aggcagaccg 660
aaggctccac aggtgtacac cattccacct cccaaggagc agatggccaa ggataaagtc 720
agtctgacct gcatgataac agacttcttc cctgaagaca ttactgtgga gtggcagtgg 780
aatgggcagc cagcggagaa ctacaagaac actcagccca tcatggacac agatggctct 840
tacttcgtct acagcaagct caatgtgcag aagagcaact gggaggcagg aaatactttc 900
acctgctctg tgttacatga gggcctgcac aaccaccata ctgagaagag cctctcccac 960
tctcctggta aa 972
<210> 14
<211> 201
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 14
Met Asn Phe Gly Leu Ser Leu Ile Phe Leu Ala Leu Ile Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Arg Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser Ile Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro
65 70 75 80
Asp Ser Met Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Tyr Gly Asn Tyr Ser Tyr Tyr Gly Met
115 120 125
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr
130 135 140
Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr
145 150 155 160
Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu
165 170 175
Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His
180 185 190
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp
195 200
<210> 15
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 15
Met Asn Phe Gly Leu Ser Leu Ile Phe Leu Ala Leu Ile Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys
<210> 16
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 16
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 17
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 17
Arg Tyr Gly Met Ser
1 5
<210> 18
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 18
Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 19
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 19
Thr Ile Ser Ile Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Met Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 20
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 20
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 21
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 21
Arg Gly Tyr Gly Asn Tyr Ser Tyr Tyr Gly Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 22
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 22
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 23
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 23
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ile Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Met
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Tyr Gly Asn Tyr Ser Tyr Tyr Gly Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 24
<211> 324
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 24
Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala
1 5 10 15
Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu
50 55 60
Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val
65 70 75 80
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys
85 90 95
Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro
100 105 110
Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
115 120 125
Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser
130 135 140
Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu
145 150 155 160
Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
165 170 175
Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn
180 185 190
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro
195 200 205
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln
210 215 220
Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val
225 230 235 240
Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val
245 250 255
Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln
260 265 270
Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn
275 280 285
Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val
290 295 300
Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His
305 310 315 320
Ser Pro Gly Lys
<210> 25
<211> 720
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 25
atgaggttct ctgctcagct tctggggctg cttgtgctct ggatccctgg atccactgca 60
gatattgtga tgacgcaggc tgcattctcc aatccagtca ctcttggaac atcagcttcc 120
atctcctgca ggtctagtaa gagtctccta catagtaatg gcatcactta tttgtattgg 180
tatctgcaga agccaggcca gtctcctcag ctcctgattt atcagatgtc caaccttgcc 240
tcaggagtcc cagacaggtt cagtagcagt gggtcaggaa ctgatttcac actgagaatc 300
agcagagtgg aggctgagga tgtgggtgtt tattactgtg ctcaaaatct agaacttccg 360
ctcacgttcg gtgctgggac caagctggag ctgaaacggg ctgatgctgc accaactgta 420
tccatcttcc caccatccag tgagcagtta acatctggag gtgcctcagt cgtgtgcttc 480
ttgaacaact tctaccccaa agacatcaat gtcaagtgga agattgatgg cagtgaacga 540
caaaatggcg tcctgaacag ttggactgat caggacagca aagacagcac ctacagcatg 600
agcagcaccc tcacgttgac caaggacgag tatgaacgac ataacagcta tacctgtgag 660
gccactcaca agacatcaac ttcacccatt gtcaagagct tcaacaggaa tgagtgttag 720
<210> 26
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 26
atgaggttct ctgctcagct tctggggctg cttgtgctct ggatccctgg atccactgca 60
<210> 27
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 27
gatattgtga tgacgcaggc tgcattctcc aatccagtca ctcttggaac atcagcttcc 60
atctcctgc 69
<210> 28
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 28
aggtctagta agagtctcct acatagtaat ggcatcactt atttgtat 48
<210> 29
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 29
tggtatctgc agaagccagg ccagtctcct cagctcctga tttat 45
<210> 30
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 30
cagatgtcca accttgcctc a 21
<210> 31
<211> 96
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 31
ggagtcccag acaggttcag tagcagtggg tcaggaactg atttcacact gagaatcagc 60
agagtggagg ctgaggatgt gggtgtttat tactgt 96
<210> 32
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 32
gctcaaaatc tagaacttcc gctcacg 27
<210> 33
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 33
ttcggtgctg ggaccaagct ggagctgaaa 30
<210> 34
<211> 74
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 34
gatattgtga tgacgcaggc tgcattctcc aatccagtca ctcttggaac atcagcttcc 60
atctcctgca ggtc 74
<210> 35
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 35
ctgtgctcaa aatctagaac ttccgctcac gttcggtgct gggaccaagc tggagctgaa 60
acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca tccagtgagc agttaacatc 120
tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caacttctac cccaaagaca tcaatgtcaa 180
gtggaagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg aacagttgga ctgatcagga 240
cagcaaagac agcacctaca gcatgagcag caccctcacg ttgaccaagg acgagtatga 300
acgacataac agctatacct gtgaggccac tcacaagaca tcaacttcac ccattgtcaa 360
gagcttcaac aggaatgagt gt 382
<210> 36
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 36
Met Arg Phe Ser Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Trp Ile Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Phe Ser Asn Pro
20 25 30
Val Thr Leu Gly Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser
35 40 45
Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys
50 55 60
Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala
65 70 75 80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
85 90 95
Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr
100 105 110
Cys Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys
115 120 125
Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro
130 135 140
Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe
145 150 155 160
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp
165 170 175
Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp
180 185 190
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys
195 200 205
Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys
210 215 220
Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
225 230 235
<210> 37
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 37
Met Arg Phe Ser Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Trp Ile Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Ala
20
<210> 38
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 38
Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Phe Ser Asn Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys
20
<210> 39
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 39
Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr
1 5 10 15
<210> 40
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 40
Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 41
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 41
Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 42
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 42
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 43
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 43
Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 44
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 44
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
1 5 10
<210> 45
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 45
Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Phe Ser Asn Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 46
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 46
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu
1 5 10 15
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg
35 40 45
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
65 70 75 80
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
85 90 95
Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
100 105
<210> 47
<211> 1410
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 47
atggcttggg tgtggacctt gctattcctg atggcagctg cccaaagtat ccaagcacag 60
atccagttgg tgcagtctgg acctgagctg aagaagcctg gagagacagt caagatctcc 120
tgcaaggctt ctggttatac cttcacagac tattcaatgc actgggtgaa gcaggctcca 180
ggaaagggtt taaagtggat gggctggata aacactgaga ctggtgagcc aacatatgca 240
gatgacttca agggacggtt tgccttctct ttggaaacct ctgccagcac tgcctatttg 300
cagatcaaca acctcaaaaa tgaggacacg gctacatatt tctgtgcccc cggagggttt 360
gcttactggg gccaagggac tctggtcact gtctctgcag ccaaaacaac acccccatca 420
gtctatccac tggcccctgg gtgtggagat acaactggtt cctccgtgac tctgggatgc 480
ctggtcaagg gctacttccc tgagtcagtg actgtgactt ggaactctgg atccctgtcc 540
agcagtgtgc acaccttccc agctctcctg cagtctggac tctacactat gagcagctca 600
gtgactgtcc cctccagcac ctggccaagt cagaccgtca cctgcagcgt tgctcaccca 660
gccagcagca ccacggtgga caaaaaactt gagcccagcg ggcccatttc aacaatcaac 720
ccctgtcctc catgcaagga gtgtcacaaa tgcccagctc ctaacctcga gggtggacca 780
tccgtcttca tcttccctcc aaatatcaag gatgtactca tgatctccct gacacccaag 840
gtcacgtgtg tggtggtgga tgtgagcgag gatgacccag acgtccagat cagctggttt 900
gtgaacaacg tggaagtaca cacagctcag acacaaaccc atagagagga ttacaacagt 960
actatccggg tggtcagcac cctccccatc cagcaccagg actggatgag tggcaaggag 1020
ttcaaatgca aggtcaacaa caaagacctc ccatcaccca tcgagagaac catctcaaaa 1080
attaaagggc tagtcagagc tccacaagta tacatcttgc cgccaccagc agagcagttg 1140
tccaggaaag atgtcagtct cacttgcctg gtcgtgggct tcaaccctgg agacatcagt 1200
gtggagtgga ccagcaatgg gcatacagag gagaactaca aggacaccgc accagtcctg 1260
gactctgacg gttcttactt catatatagc aagctcaata tgaaaacaag caagtgggag 1320
aaaacagatt ccttctcatg caacgtgaga cacgagggtc tgaaaaatta ctacctgaag 1380
aagaccatct cccggtctcc gggtaaatga 1410
<210> 48
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 48
atggcttggg tgtggacctt gctattcctg atggcagctg cccaaagtat ccaagca 57
<210> 49
<211> 90
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 49
cagatccagt tggtgcagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc 60
tcctgcaagg cttctggtta taccttcaca 90
<210> 50
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 50
gactattcaa tgcac 15
<210> 51
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 51
tgggtgaagc aggctccagg aaagggttta aagtggatgg gc 42
<210> 52
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 52
tggataaaca ctgagactgg tgagccaaca tatgcagatg acttcaaggg a 51
<210> 53
<211> 96
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 53
cggtttgcct tctctttgga aacctctgcc agcactgcct atttgcagat caacaacctc 60
aaaaatgagg acacggctac atatttctgt gccccc 96
<210> 54
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 54
ggagggtttg cttac 15
<210> 55
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 55
tggggccaag ggactctggt cactgtctct gca 33
<210> 56
<211> 342
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 56
cagatccagt tggtgcagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc 60
tcctgcaagg cttctggtta taccttcaca gactattcaa tgcactgggt gaagcaggct 120
ccaggaaagg gtttaaagtg gatgggctgg ataaacactg agactggtga gccaacatat 180
gcagatgact tcaagggacg gtttgccttc tctttggaaa cctctgccag cactgcctat 240
ttgcagatca acaacctcaa aaatgaggac acggctacat atttctgtgc ccccggaggg 300
tttgcttact ggggccaagg gactctggtc actgtctctg ca 342
<210> 57
<211> 1008
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 57
gccaaaacaa cacccccatc agtctatcca ctggcccctg ggtgtggaga tacaactggt 60
tcctccgtga ctctgggatg cctggtcaag ggctacttcc ctgagtcagt gactgtgact 120
tggaactctg gatccctgtc cagcagtgtg cacaccttcc cagctctcct gcagtctgga 180
ctctacacta tgagcagctc agtgactgtc ccctccagca cctggccaag tcagaccgtc 240
acctgcagcg ttgctcaccc agccagcagc accacggtgg acaaaaaact tgagcccagc 300
gggcccattt caacaatcaa cccctgtcct ccatgcaagg agtgtcacaa atgcccagct 360
cctaacctcg agggtggacc atccgtcttc atcttccctc caaatatcaa ggatgtactc 420
atgatctccc tgacacccaa ggtcacgtgt gtggtggtgg atgtgagcga ggatgaccca 480
gacgtccaga tcagctggtt tgtgaacaac gtggaagtac acacagctca gacacaaacc 540
catagagagg attacaacag tactatccgg gtggtcagca ccctccccat ccagcaccag 600
gactggatga gtggcaagga gttcaaatgc aaggtcaaca acaaagacct cccatcaccc 660
atcgagagaa ccatctcaaa aattaaaggg ctagtcagag ctccacaagt atacatcttg 720
ccgccaccag cagagcagtt gtccaggaaa gatgtcagtc tcacttgcct ggtcgtgggc 780
ttcaaccctg gagacatcag tgtggagtgg accagcaatg ggcatacaga ggagaactac 840
aaggacaccg caccagtcct ggactctgac ggttcttact tcatatatag caagctcaat 900
atgaaaacaa gcaagtggga gaaaacagat tccttctcat gcaacgtgag acacgagggt 960
ctgaaaaatt actacctgaa gaagaccatc tcccggtctc cgggtaaa 1008
<210> 58
<211> 469
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 58
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ile Gln Ala Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Asp Tyr Ser Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala
65 70 75 80
Asp Asp Phe Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr
100 105 110
Tyr Phe Cys Ala Pro Gly Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
115 120 125
Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu
130 135 140
Ala Pro Gly Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys
145 150 155 160
Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Ser Val Thr Val Thr Trp Asn Ser
165 170 175
Gly Ser Leu Ser Ser Ser Val His Thr Phe Pro Ala Leu Leu Gln Ser
180 185 190
Gly Leu Tyr Thr Met Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp
195 200 205
Pro Ser Gln Thr Val Thr Cys Ser Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr
210 215 220
Thr Val Asp Lys Lys Leu Glu Pro Ser Gly Pro Ile Ser Thr Ile Asn
225 230 235 240
Pro Cys Pro Pro Cys Lys Glu Cys His Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu
245 250 255
Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Ile Lys Asp Val
260 265 270
Leu Met Ile Ser Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
275 280 285
Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val
290 295 300
Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser
305 310 315 320
Thr Ile Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met
325 330 335
Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ser
340 345 350
Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ile Lys Gly Leu Val Arg Ala Pro
355 360 365
Gln Val Tyr Ile Leu Pro Pro Pro Ala Glu Gln Leu Ser Arg Lys Asp
370 375 380
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Val Gly Phe Asn Pro Gly Asp Ile Ser
385 390 395 400
Val Glu Trp Thr Ser Asn Gly His Thr Glu Glu Asn Tyr Lys Asp Thr
405 410 415
Ala Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Ile Tyr Ser Lys Leu
420 425 430
Asn Met Lys Thr Ser Lys Trp Glu Lys Thr Asp Ser Phe Ser Cys Asn
435 440 445
Val Arg His Glu Gly Leu Lys Asn Tyr Tyr Leu Lys Lys Thr Ile Ser
450 455 460
Arg Ser Pro Gly Lys
465
<210> 59
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 59
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ile Gln Ala
<210> 60
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 60
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 61
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 61
Asp Tyr Ser Met His
1 5
<210> 62
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 62
Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met Gly
1 5 10
<210> 63
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 63
Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 64
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 64
Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Pro
20 25 30
<210> 65
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 65
Gly Gly Phe Ala Tyr
1 5
<210> 66
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 66
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
1 5 10
<210> 67
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 67
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Pro Gly Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ala
<210> 68
<211> 336
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 68
Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Cys Gly
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Ser Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser
35 40 45
Ser Val His Thr Phe Pro Ala Leu Leu Gln Ser Gly Leu Tyr Thr Met
50 55 60
Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Thr Val
65 70 75 80
Thr Cys Ser Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Thr Val Asp Lys Lys
85 90 95
Leu Glu Pro Ser Gly Pro Ile Ser Thr Ile Asn Pro Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Lys Glu Cys His Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Glu Gly Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu
130 135 140
Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro
145 150 155 160
Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala
165 170 175
Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Ile Arg Val Val
180 185 190
Ser Thr Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe
195 200 205
Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr
210 215 220
Ile Ser Lys Ile Lys Gly Leu Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Ile Leu
225 230 235 240
Pro Pro Pro Ala Glu Gln Leu Ser Arg Lys Asp Val Ser Leu Thr Cys
245 250 255
Leu Val Val Gly Phe Asn Pro Gly Asp Ile Ser Val Glu Trp Thr Ser
260 265 270
Asn Gly His Thr Glu Glu Asn Tyr Lys Asp Thr Ala Pro Val Leu Asp
275 280 285
Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Ile Tyr Ser Lys Leu Asn Met Lys Thr Ser
290 295 300
Lys Trp Glu Lys Thr Asp Ser Phe Ser Cys Asn Val Arg His Glu Gly
305 310 315 320
Leu Lys Asn Tyr Tyr Leu Lys Lys Thr Ile Ser Arg Ser Pro Gly Lys
325 330 335
<210> 69
<211> 720
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 69
atgaggtgcc tagctgagtt cctggggctg cttgtgctct ggatccctgg agccattggg 60
gatattgtga tgactcaggc tgcaccctct gtacctgtca ctcctggaga gtcagtatcc 120
atctcctgca ggtctagtaa gagtctcctg catagtaatg gcaacactta cttgtattgg 180
ttcctgcaga ggccaggcca gtctcctcag ctcctgatat atcggatgtc caaccttgcc 240
tcaggagtcc cagacaggtt cagtggcagt gggtcaggaa ctgctttcac actgagaatc 300
agtagagtgg aggctgagga tgtgggtgtt tattactgta tgcaacatct agaatatccg 360
ctcacgttcg gtgctgggac caagctggag ctgaaacggg ctgatgctgc accaactgta 420
tccatcttcc caccatccag tgagcagtta acatctggag gtgcctcagt cgtgtgcttc 480
ttgaacaact tctaccccaa agacatcaat gtcaagtgga agattgatgg cagtgaacga 540
caaaatggcg tcctgaacag ttggactgat caggacagca aagacagcac ctacagcatg 600
agcagcaccc tcacgttgac caaggacgag tatgaacgac ataacagcta tacctgtgag 660
gccactcaca agacatcaac ttcacccatt gtcaagagct tcaacaggaa tgagtgttag 720
<210> 70
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 70
atgaggtgcc tagctgagtt cctggggctg cttgtgctct ggatccctgg agccattggg 60
<210> 71
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 71
gatattgtga tgactcaggc tgcaccctct gtacctgtca ctcctggaga gtcagtatcc 60
atctcctgc 69
<210> 72
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 72
aggtctagta agagtctcct gcatagtaat ggcaacactt acttgtat 48
<210> 73
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 73
tggttcctgc agaggccagg ccagtctcct cagctcctga tatat 45
<210> 74
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 74
cggatgtcca accttgcctc a 21
<210> 75
<211> 96
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 75
ggagtcccag acaggttcag tggcagtggg tcaggaactg ctttcacact gagaatcagt 60
agagtggagg ctgaggatgt gggtgtttat tactgt 96
<210> 76
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 76
atgcaacatc tagaatatcc gctcacg 27
<210> 77
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 77
ttcggtgctg ggaccaagct ggagctgaaa 30
<210> 78
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 78
gatattgtga tgactcaggc tgcaccctct gtacctgtca ctcctggaga gtcagtatcc 60
atctcctgca ggtctagtaa gagtctcctg catagtaatg gcaacactta cttgtattgg 120
ttcctgcaga ggccaggcca gtctcctcag ctcctgatat atcggatgtc caaccttgcc 180
tcaggagtcc cagacaggtt cagtggcagt gggtcaggaa ctgctttcac actgagaatc 240
agtagagtgg aggctgagga tgtgggtgtt tattactgta tgcaacatct agaatatccg 300
ctcacgttcg gtgctgggac caagctggag ctgaaa 336
<210> 79
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 79
cgggctgatg ctgcaccaac tgtatccatc ttcccaccat ccagtgagca gttaacatct 60
ggaggtgcct cagtcgtgtg cttcttgaac aacttctacc ccaaagacat caatgtcaag 120
tggaagattg atggcagtga acgacaaaat ggcgtcctga acagttggac tgatcaggac 180
agcaaagaca gcacctacag catgagcagc accctcacgt tgaccaagga cgagtatgaa 240
cgacataaca gctatacctg tgaggccact cacaagacat caacttcacc cattgtcaag 300
agcttcaaca ggaatgagtg t 321
<210> 80
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 80
Met Arg Cys Leu Ala Glu Phe Leu Gly Leu Leu Val Leu Trp Ile Pro
1 5 10 15
Gly Ala Ile Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Val Pro
20 25 30
Val Thr Pro Gly Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser
35 40 45
Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Arg
50 55 60
Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala
65 70 75 80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe
85 90 95
Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr
100 105 110
Cys Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys
115 120 125
Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro
130 135 140
Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe
145 150 155 160
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp
165 170 175
Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp
180 185 190
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys
195 200 205
Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys
210 215 220
Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
225 230 235
<210> 81
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 81
Met Arg Cys Leu Ala Glu Phe Leu Gly Leu Leu Val Leu Trp Ile Pro
1 5 10 15
Gly Ala Ile Gly
20
<210> 82
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 82
Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Val Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys
20
<210> 83
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 83
Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr
1 5 10 15
<210> 84
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 84
Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 85
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 85
Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 86
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 86
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr
1 5 10 15
Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 87
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 87
Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 88
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 88
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg
1 5 10
<210> 89
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 89
Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Val Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His
85 90 95
Leu Glu Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
Arg
<210> 90
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 90
Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln
1 5 10 15
Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr
20 25 30
Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln
35 40 45
Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
50 55 60
Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg
65 70 75 80
His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro
85 90 95
Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
100 105
<210> 91
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 91
Gly Gly Gly Ser
1
Claims (27)
1.一种组合物,其包括:
(i)抗体,所述抗体与暴露于癌细胞表面上的网蛋白-1特异性结合;以及
(ii)抗癌剂,
其中所述抗体与所述抗癌剂不相连。
2.一种组合物,其包括:
(i)抗体或抗原结合片段,所述抗体或抗原结合片段与和SEQ IDNO:2具有至少85%同一性的氨基酸序列特异性结合;以及
(ii)抗癌剂,
其中所述抗体与所述抗癌剂不相连。
3.根据权利要求2所述的组合物,其中所述抗体或抗原结合片段包括具有如SEQ IDNO:23或SEQ ID NO:67所示的序列的重链可变区。
4.根据权利要求3所述的组合物,其中所述抗体或抗原结合片段进一步包括具有如SEQID NO:45或SEQ ID NO:89所示的序列的轻链可变区。
5.根据权利要求1到4中任一项所述的组合物,其中所述抗体包括具有如SEQ ID NO:23所示的序列的重链可变区和具有如SEQ IDNO:45所示的序列的轻链可变区。
6.根据权利要求1到4中任一项所述的组合物,其中所述抗体包括具有如SEQ ID NO:67所示的序列的重链可变区和具有如SEQ IDNO:89所示的序列的轻链可变区。
7.根据权利要求2到6中任一项所述的组合物,其中所述抗体或抗原结合片段与细胞表面暴露的网蛋白-1结合。
8.根据权利要求1到7中任一项所述的组合物,其中所述抗癌剂选自由以下组成的组:凯素(Abraxane)(白蛋白稳定化紫杉醇纳米颗粒调配物)、Adrucil(氟尿嘧啶)、飞尼妥(Afinitor)(依维莫司)、Efudex(氟尿嘧啶)、埃罗替尼盐酸盐、依维莫司、Fluoroplex(氟尿嘧啶)、氟尿嘧啶、盐酸吉西他滨、健择(Gemzar)(盐酸吉西他滨)、丝裂霉素C、Mitozytrex(丝裂霉素C)、密吐霉素(丝裂霉素C)、白蛋白稳定化紫杉醇纳米颗粒调配物、苹果酸舒尼替尼、索坦(Sutent)(苹果酸舒尼替尼)、以及特罗凯(Tarceva)(埃罗替尼盐酸盐)、六甲蜜胺、爱克兰(Alkeran)(马法兰)、阿瓦斯汀(Avastin)(贝伐单抗(Bevacizumab))、贝伐单抗、卡铂、Clade(环磷酰胺)、顺铂、环磷酰胺、癌得星(Cytoxan)(环磷酰胺)、盐酸多柔比星、Dox-SL(盐酸多柔比星脂质体)、DOXIL(盐酸多柔比星脂质体)、盐酸多柔比星脂质体、Evacet(盐酸多柔比星脂质体)、盐酸吉西他滨、健择(盐酸吉西他滨)、和美新(Hycamtin)(盐酸拓扑替康)、LipoDox(盐酸多柔比星脂质体)、利普卓(Lynparza)(奥拉帕尼)、马法兰、Neosar(环磷酰胺)、尼拉帕尼甲苯磺酸一水合物、奥拉帕尼、紫杉醇、Paraplat(卡铂)、铂尔定(Paraplatin)(卡铂)、Platinol(顺铂)、Platinol-AQ(顺铂)、Rubraca(瑞卡帕布樟脑磺酸盐(Rucaparib Camsylate))、瑞卡帕布樟脑磺酸盐、泰素(Taxol)(紫杉醇)、噻替派、盐酸拓扑替康、则乐(Zejula)(尼拉帕尼甲苯磺酸一水合物)。
9.根据权利要求1到8中任一项所述的组合物,其中所述抗癌剂是吉西他滨或顺铂。
10.根据权利要求1到9中任一项所述的组合物,其中所述抗网蛋白-1抗体和所述抗癌剂协同地作用(例如,如通过Chou-Talalay方法测量的)。
11.一种抗体-药物缀合物(ADC),所述ADC包括与一个或多个抗癌剂分子连接的抗体或抗原结合片段,所述抗体或抗原结合片段与暴露于癌细胞表面上的网蛋白-1特异性结合。
12.一种抗体-药物缀合物(ADC),所述ADC包括与一个或多个抗癌剂分子连接的抗体或抗原结合片段,所述抗体或抗原结合片段与和SEQ ID NO:2具有至少85%同一性的氨基酸序列特异性结合。
13.根据权利要求11或12所述的ADC,其中所述一个或多个抗癌剂分子与所述抗体或抗原结合片段直接连接。
14.根据权利要求11或12所述的ADC,其中所述一个或多个抗癌剂分子通过接头、任选地光连接剂或柔性氨基酸序列接头与所述抗体或抗原结合片段间接连接。
15.根据权利要求11到14中任一项所述的ADC,其中2个、3个、4个或5个抗癌剂分子与所述抗体或抗原结合片段连接。
16.根据权利要求11到15中任一项所述的ADC,其中所述一个或多个抗癌剂分子中的每一个是奥瑞他汀(auristatin)或吡咯并苯并二氮杂卓(PBD),任选地其中每个PBD是PBD二聚体。
17.根据权利要求11到16中任一项所述的ADC,其中所述抗体或抗原结合片段包括具有如SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:67所示的序列的重链可变区。
18.根据权利要求11到16中任一项所述的ADC,其中所述抗体或抗原结合片段进一步包括具有如SEQ ID NO:45或SEQ ID NO:89所示的序列的轻链可变区。
19.根据权利要求11到18中任一项所述的ADC,其中所述抗体包括具有如SEQ ID NO:23所示的序列的重链可变区和具有如SEQ IDNO:45所示的序列的轻链可变区。
20.根据权利要求11到18中任一项所述的ADC,其中所述抗体包括具有如SEQ ID NO:67所示的序列的重链可变区和具有如SEQ IDNO:89所示的序列的轻链可变区。
21.根据权利要求12到20中任一项所述的ADC,其中所述抗体或抗原结合片段与细胞表面暴露的网蛋白-1结合。
22.一种用于治疗癌症的方法,所述方法包括向患有癌症的受试者施用有效量的抗体或抗原结合片段和抗癌剂,所述抗体或抗原结合片段与和SEQ ID NO:2具有至少85%同一性的氨基酸序列特异性结合。
23.根据权利要求22所述的方法,其中所述抗体或抗原结合片段和所述抗癌剂作为根据权利要求1到10中任一项所述的组合物或根据权利要求11到21中任一项所述的ADC一起施用。
24.根据权利要求22所述的方法,其中所述抗体或抗原结合片段和所述抗癌剂分开施用。
25.根据权利要求22到24中任一项所述的方法,其中所述癌症的特征在于在癌细胞的表面上表达网蛋白-1。
26.根据权利要求22到25中任一项所述的方法,其中所述癌症是卵巢癌、食道癌、头颈鳞状细胞癌或胰腺癌,任选地其中所述胰腺癌是胰腺导管腺癌(PDAC)。
27.根据权利要求22到26中任一项所述的方法,其中所述受试者是哺乳动物,任选地人。
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