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CN112074276A - 一种肌醇基免疫疗法 - Google Patents

一种肌醇基免疫疗法 Download PDF

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CN112074276A
CN112074276A CN201980029646.3A CN201980029646A CN112074276A CN 112074276 A CN112074276 A CN 112074276A CN 201980029646 A CN201980029646 A CN 201980029646A CN 112074276 A CN112074276 A CN 112074276A
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CN
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cancer
inositol
ligand
agent
cell
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CN201980029646.3A
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克劳德·尼古拉
克劳丁·基洛
让·玛丽·莱恩
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Original Assignee
NormOxys Inc
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Abstract

本发明尤其提供了一种用于治疗癌症的方法和组合物。

Description

一种肌醇基免疫疗法
优先权
本申请享有2018.05.03提交的申请号为62/666,151的美国临时专利申请的优先权，其全部内容以引用的方式结合于此。
技术领域
本发明部分涉及肌醇基试剂及其在治疗中的用途，例如免疫治疗。
背景技术
免疫疗法为癌症的治疗带来了巨大的希望，但其适用性似乎仅限于小范围的应答人群。因此需要一种用于调节肿瘤微环境以在免疫细胞募集方面以及通过降低PD-L1和PD-L2表达来显著降低免疫检查点活性的有效抗肿瘤免疫应答的方法。
发明内容
在一些方面，本发明涉及一种用于治疗、改善或预防癌症生长、存活、转移、上皮-间质转化、免疫逃逸或复发的方法，其包括施用肌醇基试剂和一种或多种免疫调节剂，其中施用是同时的或顺序的或以共制剂的形式进行的。例如，在一些实施方式中，本发明涉及使用肌醇基试剂和/或免疫调节剂来逆转免疫逃逸机制。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂和/或免疫调节剂刺激患者的免疫系统以攻击肿瘤。
在一些方面，本发明涉及一种治疗癌症的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效剂量的肌醇基试剂和有效剂量的一种或多种免疫调节剂。
在一些方面，本发明涉及一种治疗癌症的方法，包括向有此需要的受试者施用有效剂量的肌醇基试剂，其中所述受试者正在用一种或多种免疫调节剂进行癌症治疗。
在一些方面，本发明涉及一种包含有效剂量的肌醇基试剂和有效剂量的一种或多种免疫调节剂的药物组合物。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂是ITPP(“肌醇三焦磷酸(myo-inositol trispyrophosphate)”或“肌醇三磷酸(inositol-tripyrophosphate)”或“肌醇六磷酸三焦磷酸”或“IHP-三焦磷酸”或“OXY111A”)。
在一些实施方式中，所述免疫调节剂是共刺激或共抑制分子。在一些实施方式中，所述免疫调节剂是免疫检查点抑制剂(CPI)和/或免疫检查点激活剂(CPA)。在一些实施方式中，所述免疫调节剂是靶向一种或多种T细胞共刺激或共抑制分子、B7家族成员、TNF受体或TNF配体超家族成员、TIM家族成员和半乳糖凝集素家族成员的试剂。在多个实施方式中，所述免疫调节剂是靶向PD-1、PD-L1、PD-L2、CD137(4-1BB)、CD137配体(4-1BB配体)、CTLA-4、OX-40、OX-40配体、HVEM、GITR、GITR配体、CD27、CD28、CD30、CD30配体、CD40、CD40配体、LIGHT(CD258)、CD70、B7-1、B7-2、ICOS、ICOS配体、TIM-1、TIM-3、TIM-4、半乳糖凝集素-1、半乳糖凝集素-9、CEACAM-1、CEACAM-4、CEACAM-5、LAG-3、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6、HHLA2、HMGB1、BTLA、CRTAM、CD200、CCR4和CXCR4。在多个实施方式中，所述免疫调节剂是靶向血管内皮生长因子受体(VEGFR)的试剂，包括但不限于VEGFR1、VEGFR2和VEGFR3。
在多个实施方式中，所述免疫调节剂是抗体，包括单克隆抗体以及其他抗体形式。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(例如ITPP)与免疫调节剂组合，所述免疫调节剂阻断、降低和/或抑制PD-1和PD-L1，或PD-L2和/或PD-1与PD-L1或PD-L2的结合(通过非限制性实例，一种或多种纳武利尤单抗(ONO-4538/BMS-936558，MDX1106，OPDIVO，BRISTOLMYERS SQUIBB)，派姆单抗(KEYTRUDA,Merck公司)，联合利妥昔单抗(CT-011,CURE TECH),MK-3475(MERCK),BMS 936559(BRISTOL MYERS SQUIBB),MPDL328OA(ROCHE))。
在一些实施方式中，所述免疫调节剂是恩莫单抗(embrolizumab)，纳武利尤单抗，西米普利单抗，阿特珠单抗，阿维单抗(avelumab)和度伐单抗。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(例如ITPP)与免疫调节剂结合，所述免疫调节剂增加和/或刺激CD 137(4-1 BB)和/或CD 137(4-1 BB)与4-1 BB配体和TRAF2中的一种或多种的结合(通过非限制性实例，乌瑞芦单抗(BMS-663513和抗4-1 BB抗体))。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(例如ITPP)与免疫调节剂组合，所述免疫调节剂阻断、降低和/或抑制CTLA-4、AP2M1、CD80、CD86、SHP-2、和/或PPP2R5A、和/或CTLA-4与AP2M1、CD80、CD86、SHP-2和PPP2R5A中的一种或多种的结合的活性。
在一些实施方式中，本发明治疗的癌症是胰腺癌。在一些实施方式中，本发明治疗的癌症是肝癌。
附图说明
图1：ITPP治疗后黑色素瘤和乳腺癌肿瘤生长的演变。图1-a示出了C57 BL6小鼠接受104个B16F10-Luc细胞，并通过ITPP治疗直到21天达到血管正常化，并在第23天测量。图1-b示出了在C57BL6小鼠中B16 F10 Luc细胞获得的最大和最小肿瘤的示例，没有治疗的情况(上图)和ITPP连续治疗的情况(下图)。图1-c图示出了在NRJ:NMRI裸鼠中B16F 10Luc细胞获得的最大和最小肿瘤的示例，没有治疗的情况(上图)和ITPP连续治疗的情况(下图)。图1-d示出了BALB/c-by小鼠接受105个4T1细胞，并通过ITPP治疗直到21天达到血管正常化，并在第31天测量。
图2：ITPP肿瘤治疗对NK细胞募集和活化的影响。在第23天提取的B16 F10 Luc肿瘤被标记用于CD49b+，CD31+细胞检测(图2-a和图2-b)，以及用于通过DAPI对Luc+表达细胞(图2-c和图2-d)的检测。图2-e示出了ITPP治疗前后免疫CD45+细胞的流式细胞术定量结果。图2-f示出了ITPP治疗后B16F10Luc肿瘤中CD45+CD49+NK细胞的定量结果。图2-g示出了与具有正常免疫活性的C57BI6小鼠相比，ITPP治疗对在NRj:NMRI裸鼠中生长的B16F10Luc肿瘤中的NK细胞募集的影响。图2-h示出了ITPP治疗前后B16F10Luc肿瘤中活化的CD45+CD49+CD226+NK细胞的定量结果。图2-i示出了在4T1乳腺癌中，在ITPP治疗前后通过流式细胞术检测到活化的CD45+CD49+CD226+NK细胞的数量。
图3：ITPP诱导的肿瘤CD45+细胞群中免疫抑制性髓样来源细胞群和巨噬细胞群的减少。图3-a和图3-b示出了ITPP治疗降低了B16F10 Luc黑素瘤中CD45+CD11b+Gr1+MDSCs的比例(图3-a)，并倾向于增加CD45+CD11c+CD206-M1巨噬细胞(图3-b)的比例。图3-c和图3-d图示出了ITPP治疗降低了B16F10Luc黑色素瘤(图3-c)和4T1乳腺癌(图3-d)中的CD45+CD11c+CD206+M2巨噬细胞的比例。N＝6，n>2。
图4：ITPP诱导的肿瘤CD45+细胞群中炎症介质Th2细胞和免疫抑制介质Treg细胞群的减少。图4-a示出了ITPP治疗降低了B16F10Luc黑色素瘤中CD45+CD4+CCR4+Th2细胞的比例。图4-b和图4-c示出了ITPP治疗降低了B16F10Luc黑素瘤(图4-b)和4T1乳腺癌(图4-c)中CD45+CD25+FoxP3+细胞的比例。N＝6，n>2。
图5：在ITPP诱导肿瘤血管正常化时，肿瘤和免疫细胞中的免疫检查点分子PD-L1和PD-L2的调节(图5-a和图5-b)。用抗-PD-L1和抗-PD-L2标记分层(diacerated)的肿瘤细胞，并通过流式细胞术分析总群体和门控CD45-非免疫细胞(图5-c和图5-d)和免疫CD45+细胞(图5-e和图5f)群体的表达。N＝5，n>2。
图6：ITPP治疗对肿瘤中不同细胞类型的免疫检查点的影响。图6-a～图6-c示出了肿瘤内皮细胞上的PD-L1和PD-L2的鉴定以及通过ITPP治疗的调节。根据ITPP治疗后流式细胞术增加的CD31的表达，可以对内皮细胞进行鉴定(图6-a)。ITPP治疗后，CD31+内皮细胞表达的PD-L1较少(图6-b)和表达的PD-L2较少(图6-c)。图6-d～图6-e示出了在B16F10黑素瘤(图6-d)和4T1乳腺癌(图6-e)中，通过流式细胞术鉴定的肿瘤中的CD45+免疫细胞群在经过ITPP治疗后富含了PD-1表达细胞。图6-f示出了通过流式细胞术对B16F10肿瘤中CD47水平表达的流式细胞术检测。N＝6，n>3。
图7：趋化因子受体通过ITPP治疗诱导的血管正常化对肿瘤细胞、免疫细胞和内皮富集细胞表达的调节。图7-a示出了流式细胞术检测肿瘤部位B16F10细胞上趋化因子受体的表达。图7-b示出了与常氧组相比，在低氧条件下趋化因子和受体表达的mRNA的qPCR定量结果。图7-c示出了流式细胞术检测肿瘤部位CD45+免疫细胞上趋化因子受体的表达。图7-d示出了肿瘤部位内皮富集细胞群上趋化因子受体表达的流式细胞检测结果。
具体实施方式
在一些方面，本发明涉及一种治疗癌症的方法，包括向有此需要的受试者施用有效剂量的肌醇基试剂和有效剂量的一种或多种免疫调节剂。
在一些方面，本发明涉及一种治疗癌症的方法，包括向有此需要的受试者施用有效剂量的肌醇基试剂，其中所述受试者正在用一种或多种免疫调节剂进行癌症治疗。
在一些方面，本发明涉及包含有效剂量的肌醇基试剂和有效剂量的一种或多种免疫调节剂的药物组合物。
在多个实施方式中，所述肌醇基试剂和免疫调节剂可以相互作用或协同产生组合效应。在多个实施方式中，所述肌醇基试剂和免疫调节剂可以相互作用或产生组合的附加效果，尽管预期效果可能减弱。在多个实施方式中，所述肌醇基试剂和免疫调节剂可以相互作用或产生联合作用，从而允许治疗剂量和/或时间的减少，并且任选的减少一种或多种肌醇基试剂和免疫调节剂的副作用。因此，在一些实施方式中，所述肌醇基试剂和免疫调节剂的组合增加了一种或多种肌醇基试剂和免疫调节剂的治疗窗。
肌醇基试剂
在一些实施方式中，本发明所述的肌醇基试剂是美国专利第8,178,514号、美国公开专利No.2008/0200437和No.2014/0142052以及国际公开专利No.WO 2012/045009中记载的一种或多种试剂，它们的内容通过引用的方式结合于此。
在一些实施方式中，本发明所述的肌醇基试剂是ITPP。ITPP指的是具有三个内部焦磷酸环的肌醇六磷酸，如美国专利8,178,514中所述，其内容通过整体引用的方式结合于此。在多个实施方式中，所述ITPP酸和盐(和/或其他肌醇基试剂)被使用。在一些实施方式中，所述ITPP(和/或其他肌醇基试剂)是阴离子。ITPP的配对物可以是平衡离子，ITPP和平衡离子的组合是酸或盐。ITPP平衡离子(和/或其他肌醇基试剂)可包括但不限于阳离子氢类，包括质子；单价无机阳离子，包括锂、钠和钾；二价无机阳离子，包括镁、钙、锰、锌、铜和铁；多价无机阳离子，包括铁；季氮类，包括铵、环庚基铵、环辛基铵、N,N-二甲基环己基铵和其他有机铵阳离子；锍类，包括三乙基锍和其他有机锍试剂；有机阳离子包括吡啶盐、哌啶盐、哌嗪盐、奎宁环盐、吡咯盐、三哌嗪盐和其他有机阳离子；聚合阳离子包括低聚物、聚合物、肽、蛋白质、带正电荷的离聚物和在侧基、链端和/或聚合物主链中具有锍、季氮和/或带电荷的有机金属种类的其他大分子物质。肌醇基试剂的示例性盐(例如ITPP)是单钙四钠盐，例如ITPP的单钙四钠盐，或肌醇钠基试剂和肌醇钙基试剂的混合物，其含有约15-25mol％(例如，约15或约20或约25mol％)的钙和约75-85mol％(例如，约75或约80或约85mol％)的钠，例如含有约15-25mol％(例如约15或约20或约25mol％)钙和约75-85mol％(例如约75或约80或约85mol％)钠的ITPP钠和ITPP钙的混合物。
本发明不限于纯离子的配对；事实上，在本领域中公知的是，成对的离子可能在成对的两个组分之间表现出某种程度的共价结合或配位结合的特征。本发明组合物的ITPP(和/或其他肌醇基试剂)酸和盐可以包含单一类型的平衡离子或者可以包含混合平衡离子，且可以任选的包含阴离子的混合物，其中ITPP(和/或其他肌醇基试剂)即是阴离子的一种。所述组合物可以任选的包括冠醚、穴醚和其他能够螯合或络合平衡离子的物质。所述组合物同样可以任选的包括酸性大环化合物或其他能够通过氢键或其他分子吸引物络合ITPP(和/或其他肌醇基试剂)的物质。
在多个实施方式中，所述ITPP(和/或其他肌醇基试剂)可以以各种异构体存在。在一些实施方式中，所述ITPP是肌醇三焦磷酸或肌醇(顺式-1,2,3,5-反式-4,6-环己烷)，而本发明还提供了ITPP的任意肌醇异构体和/或其他肌醇基试剂(例如天然存在的鲨肌醇异构体、手性肌醇异构体、粘质肌醇异构体、和新肌醇异构体，以及所有异肌醇异构体、表肌醇异构体和顺式肌醇异构体的三焦磷酸盐)。美国专利No.7,084,115记载了制造ITPP酸和盐的方法，其全部内容通过引用的方式结合于此。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂可以使用这些方法制备。同样，所述肌醇基试剂(例如ITPP)可以在体内由前体药物形成，例如通过酶促裂解酯(例如烷基酯)或通过置换替换基团(如甲苯磺酰基)。
本发明还提供了通过混合ITPP(和/或其他肌醇基试剂)的钠盐和钙盐及其药学上可接受的佐剂、稀释剂、载体或赋形剂来制备ITPP(和/或其他肌醇基试剂)的药物组合物的方法。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(例如ITPP)的钠盐和钙盐的混合物通过将肌醇三焦磷酸钠盐与CaCl2混合而获得。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂包括由结构表示的化合物：nC+An-；其中：对于每种情况，C+独立的表示碱金属阳离子(例如钠离子、锂离子、钾离子等)，碱土金属阳离子(例如镁离子或钙离子)，或铵阳离子；A代表阴离子部分(例如磷酸化的肌醇；IHP，其中IHP的两个磷酸基团形成内部焦磷酸环；IHP，其中所述IHP的4个磷酸基团形成两个内部焦磷酸环；IHP，其中所述IHP的6个磷酸基团形成三个内部焦磷酸环)；并且n是1～10范围内的整数(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)。在多个实施方式中，所述C+是钠离子，An-是磷酸化的肌醇；或者C+是钠离子，An-是磷酸化的肌醇，其中磷酸化的肌醇有一个内部焦磷酸环；或者C+是钠离子An-是磷酸化的肌醇，其中磷酸化的肌醇有两个内部焦磷酸环；或者C+是钠离子，An-是磷酸化的肌醇，其中磷酸化的肌醇有三个内部焦磷酸环；或者C+是钠离子，An-是IHP；或者C+是钠离子，An-是IHP，其中所述IHP的两个磷酸基团形成内部焦磷酸环；或者C+是钠离子，An-是IHP，其中所述IHP的4个磷酸基团形成两个内部焦磷酸环；或者C+是钠离子，An-是IHP，其中所述IHP的6个磷酸基团形成三个内部焦磷酸环。
在其他实施方式中，所述肌醇基试剂是美国专利No.8,178,514、美国公开专利No.2008/0200437和No.2014/0142052以及国际公开专利No.WO 2012/045009中记载的一种或多种，它们的内容通过引用的方式结合于此。例如，在一些实施方式中，所述肌醇基试剂基于ITPP，其被改变为具有以下中的一个或多个：衍生的磷酸基团羟基(例如选自烷氧基(-OR)或酰氧基(-OCOR)，其中R选自烷基、芳基、酰基、芳烷基、烯基、炔基、杂环基、碳环、氨基、酰氨基、酰氨基、烷硫基、磺酸盐、烷氧基、磺酰基、或亚砜，或盐衍生物)；各种构象的肌醇(例如顺式肌醇、表肌醇、异肌醇、粘质肌醇、新肌醇、鲨肌醇、(+)手性肌醇或(-)手性肌醇)；肌醇对另一部分的取代(例如含有吡喃糖或呋喃糖单元(例如葡萄糖、甘露糖或半乳糖、蔗糖或乳糖)的单糖、二糖或寡糖的多磷酸盐或焦磷酸盐衍生物的化合物)；或其药学上可接受的盐、立体异构体、端基异构体、溶剂化物和水合物。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂是1,6:3,4-双-[O-(2,3-二甲氧基丁烷-2,3-二基)]-2,5-二-O-甲基-肌醇；2,5-二氧甲基肌醇；八苄基1,3,4,6-(2,5-二-O-甲基-肌醇基)四磷酸酯；1,3,4,6-(2,5-二-O-甲基-肌醇基)四磷酸四钠；1,6:3,4-双-[O-(2,3-二甲氧基丁烷-2,3-二基)]-2,5-二-O-乙基-肌醇；2,5-二氧乙基肌醇；八苄基1,3,4,6-(2,5-二-O-乙基-肌醇基)四磷酸酯；1,3,4,6-(2,5-二-O-乙基-肌醇基)四磷酸四钠；1,6:3,4双-[O-(2,3-二甲氧基丁烷23-二基)]-2,5-二-O-丁基-肌醇；2,5-二氧丁基肌醇；八苄基1,3,4,6-(2,5-二-O-丁基-肌醇基)四磷酸酯；1,3,4,6-(2,5-二-O-丁基-肌醇基)四磷酸四钠；2,5-二-O-苄基-1,6:3,4-双-[O-(2,3-二甲氧基丁烷-2,3-二基)]-肌醇；2,5-二-O-苄基-肌醇；八苄基1,3,4,6-(2,5-二-O-苄基-肌醇基)四磷酸酯；1,3,4,6-肌醇基四磷酸四钠；六苄基1,3,5-(2,4,6-三-O-丁酰基-肌醇基)三磷酸；1,3,5-(2,4,6-三-O-丁酰基-肌醇基)六磷酸钠；肌醇2,416-三(二苄基磷酸酯)的原甲酸酯；肌醇六钠2,4,6-三磷酸原甲酸酯；鲨肌醇六(二苄基磷酸酯)；鲨肌醇六磷酸六三乙基铵；六三乙基铵鲨肌醇1,2:3,4:5,6-三焦磷酸；或六钠鲨肌醇1,2:3,4:5,6-三焦磷酸。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂是1-O-甲基-α-葡萄糖2,3,4-三磷酸，1-O-甲基-α-甘露糖2,3,4-三磷酸，α-葡萄糖1,2,3,4-四磷酸，β-葡萄糖1,2,3,4-四磷酸，α-甘露糖1,2,3,4-四磷酸，β-甘露糖1,2,3,4-四磷酸，α-半乳糖1,2,3,4-四磷酸、β-半乳糖1,2,3,4-四磷酸、1-O-甲基-α-葡萄糖四磷酸、1-O-甲基-α-甘露糖四磷酸、α-葡萄糖五磷酸、α-甘露糖五磷酸、α-半乳糖五磷酸，乳糖八磷酸，蔗糖八磷酸或1-O-甲基-α-葡萄糖双焦磷酸)。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂选自二乙基-2,3-二磷-L-酒石酸四钠和二钠盐；二丁基-2,3-二磷-L-酒石酸四钠盐和二丁基-环-2,3-二磷-L-酒石酸二钠盐；2,3-二磷-L-酒石酸六钠盐；二甲基-内消旋(meso)-半乳辛酸四钠-2,3,4,5-四磷酸及其双焦磷酸盐；内消旋-赤藓糖醇-1,2,3,4-四磷酸四钠及其双焦磷酸盐；季戊四醇-2，3，4，5-四磷酸四钠及其双焦磷酸盐；2,5-脱水-D-甘露醇-1,3,4,6-四磷酸四钠及其双焦磷酸盐；2,3-二(二苄基磷酸)-L-酒石酸二乙酯；二乙基-2,3-二磷-L-酒石酸四钠盐；二乙基-2,3-二磷-L-酒石酸二钠盐；二丁基-2,3-双(二苄基磷酸)-L-酒石酸盐；二丁基-2,3-二磷-L-酒石酸四钠盐；二丁基-2,3-二磷-L-酒石酸二三甲基铵盐；二丁基-环-2,3-二磷-L-酒石酸二三甲基铵盐；二丁基-环-2,3-二磷-L-酒石酸二钠盐；二苄基-2,3-二(二苄基磷酸)-L-酒石酸盐；2,3-二磷-L-酒石酸六钠盐；二甲基-2,3,4,5-四(二苄基磷酸)-内消旋半乳糖醛酸盐；二甲基-内消旋-半乳辛酸四钠-2,3,4,5-四磷酸；二甲基-内消旋-半乳辛酸双焦磷酸钠；1,2,3,4-四(二苄基磷酸)-内消旋赤藓糖醇；1,2,3,4-四磷酸-内消旋赤藓糖醇四钠盐；内消旋-赤藓糖醇双焦磷酸钠四钠；1,3,4,5-四(二苄基磷酸)季戊四醇；季戊四醇四钠1,3,4,5-四磷酸酯；季戊四醇四钠(1,3):(4,5)-二焦磷酸盐；1,3,4,6-四(二苄基磷酸)2,5-脱水-D-甘露醇；2,5-脱水-D-甘露醇1,3,4,6-四磷酸四钠；和2,5-脱水-D-甘露醇双焦磷酸钠。
免疫调节剂
如本文所述，肌醇基试剂可与一种或多种免疫调节剂组合。在一些实施方式中，所述免疫调节剂是共刺激或共抑制分子(例如一种或多种免疫细胞，例如但不限于T细胞和NK细胞)。在一些实施方式中，所述免疫调节剂是免疫检查点抑制剂(CPI)和/或免疫检查点激活剂(CPA)。参见例如Nature Reviews Cancer12:252-264(2012)，其内容通过整体引用的方式结合于此。在一些实施方式中，所述免疫调节剂靶向在Semenza Cell 2012 148(3):399-408中描述的一种或多种生物标志物，其内容通过整体引用的方式结合于此。
在一些实施方式中，所述免疫调节剂是靶向T细胞共刺激或共抑制分子、NK细胞共刺激或共抑制分子、B7家族成员、TNF受体或TNF配体超家族成员、TIM家族成员和半乳糖凝集素家族成员中的一种或多种的试剂。因此，在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(包括ITPP)可以与靶向T细胞的共刺激或共抑制分子、B7家族成员、TNF受体或TNF配体超家族成员、TIM家族成员和半乳糖凝集素家族成员中的一种或多种的试剂组合。
在多个实施方式中，所述免疫调节剂是靶向PD-1、PD-L1、PD-L2、CD137(4-1BB)、CD137配体(4-1BB配体)、CTLA-4、OX-40、OX-40配体、HVEM、GITR、GITR配体、CD27、CD28、CD30、CD30配体、CD40、CD40配体、LIGHT(CD258)、CD70、B7-1、B7-2、ICOS、ICOS配体、TIM-1、TIM-3、TIM-4、半乳糖凝集素-1、半乳糖凝集素-9、CEACAM-1、CEACAM-4、CEACAM-5、LAG-3、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6、HHLA2、HMGB1、BTLA、CRTAM、CD200、CCR4和CXCR4中的一种或多种试剂。因此，在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(包括ITPP)可以与靶向PD-1、PD-L1、PD-L2、CD137(4-1 BB)、CD137配体(4-1 BB配体)、CTLA-4、OX-40、OX-40配体、HVEM、GITR、GITR配体、CD27、CD28、CD30、CD30配体、CD40、CD40配体、LIGHT(CD258)、CD70、B7-1、B7-2、ICOS、ICOS配体、TIM-1、TIM-3、TIM-4、半乳糖凝集素-1、半乳糖凝集素-9、CEACAM-1、CEACAM-4、CEACAM-5、LAG-3、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6、HHLA2、HMGB1、BTLA、CRTAM、CD200、CCR4和CXCR4中的一种或多种的试剂进行组合。在多个实施方式中，所述免疫调节剂是靶向VEGFR的试剂，包括但不限于VEGFR1、VEGFR2和VEGFR3。
在多个实施方式中，所述免疫调节剂阻断、降低和/或抑制PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB、4-1 BB配体、CTLA-4、OX-40、OX-40配体、HVEM、GITR、GITR配体、CD27、CD28、CD30、CD30配体、CD40、CD40配体、LIGHT(CD258)、CD70、B7-1、B7-2、ICOS、ICOS配体、TIM-1、TIM-3、TIM-4、半乳糖凝集素-1、半乳糖凝集素-9、CEACAM-1、CEACAM-4、CEACAM-5、LAG-3、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6、HHLA2、HMGB1、BTLA、CRTAM、CD200、CCR4和CXCR4中的一种或多种的结合或其结合配偶体。
在一些实施方式中，所述免疫调节剂调节共刺激配体-受体的相互作用。例如，在一些实施方式中，所述免疫调节剂调节一种或多种下列示例性配体-受体的相互作用：CD80或CD86和CD28；B7RP1和ICOS；CD137L和CD 137；和OXO40L和OX40；CD 137(4-1 BB)和CD 137配体(4-1 BB配体)；和CD70和CD27。在一些实施方式中，所述免疫调节剂调节CTLA-4和一种或多种AP2M1、CD80、CD86、SHP-2和PPP2R5A之间的配体-受体的相互作用。
在一些实施方式中，所述免疫调节剂调节抑制性配体-受体的相互作用。例如，在一些实施方式中，所述免疫调节剂调节一种或多种下列示例性配体-受体相互作用：PDL-1和/或PDL-2和PD-1；CD80或CD86和CTLA-4；B7-H3及其受体；B7-H4及其受体；HVEM和BTLA；Gal9和TIM3以及腺苷和A2aR。
在一些实施方式中，所述免疫调节剂是调节骨髓源抑制细胞(MDSCs)的试剂，包括但不限于Gr1、CD11b、Ly6C和Ly6G。在一些实施方式中，所述肌醇衍生试剂和/或免疫调节剂减少或消除精氨酸酶I的表达、活性氧(ROS)的产生和一氧化氮的产生中的一种或多种，例如在MDSC(包括但不限于Gr1、CD11b、Ly6C和Ly6G)的情况下。
在一些实施方式中，所述免疫调节剂是调节Treg的试剂，包括但不限于CD4、CD25和FoxP3。
在一些实施方式中，所述免疫调节剂是调节CD4和/或CD8T细胞的试剂，包括但不限于CD3、CD4、CD8、PD-1、PDL-1、PDL-2、CTLA-4、CD137、CD69、CD26、TIM3和LAG3。
在一些实施方式中，所述免疫调节剂是调节NK细胞的试剂，包括但不限于CD3、NKp46、CD16、NKG2D、NKp44和NKp30。
在一些实施方式中，所述免疫调节剂是调节肿瘤基质和内皮生物标志物的试剂，包括但不限于CD45、PDL-1、PDL-2、PTEN和CD31。
在一些实施方式中，所述免疫调节剂调节SLAMF4、IL-2Rα、4-1BB/TNFRSF9、IL-2Rβ、ALCAM、B7-1、IL-4 R、B7-H3、BLAME/SLAMFS、CEACAM1、IL-6 R、CCR3、IL-7 Rα、CCR4、CXCRl/IL-S RA、CCR5、CCR6、IL-10Rα、CCR 7、IL-10Rβ、CCRS、IL-12 Rβ1、CCR9、IL-12 Rβ2、CD2、IL-13 Rα1、IL-13、CD3、CD4、ILT2/CDS5j、ILT3/CDS5k、ILT4/CDS5d、ILT5/CDS5a、lutegrinα4/CD49d、CDS、整合素αE/CD103、CD6、整合素αM/CD 11b、CDS、整合素αX/CD11c、整合素β2/CDlS、KIR/CD15S、CD27/TNFRSF7、KIR2DL1、CD2S、KIR2DL3、CD30/TNFRSFS、KIR2DL4/CD15Sd、CD31/PECAM-1、KIR2DS4、CD40配体/TNFSF5、LAG-3、CD43、LAIR1、CD45、LAIR2、CDS3、白三烯B4-R1、CDS4/SLAMF5、NCAM-L1、CD94、NKG2A、CD97、NKG2C、CD229/SLAMF3、NKG2D、CD2F-10/SLAMF9、NT-4、CD69、NTB-A/SLAMF6、共同γ链/IL-2Rγ、骨桥蛋白、CRACC/SLAMF7、PD-1、CRTAM、PSGL-1、CTLA-4、RANK/TNFRSF11A、CX3CR1、CX3CL1、L-选择素、CXCR3、SIRPβ1、CXCR4、SLAM、CXCR6、TCCR/WSX-1、DNAM-1、胸腺生成素、EMMPRIN/CD147、TIM-1、EphB6、TIM-2、Fas/TNFRSF6、TIM-3、Fas配体/TNFSF6、TIM-4、FcγRIII/CD16、TIM-6、TNFR1/TNFRSF1A、颗粒溶素、TNFRIII/TNFRSF1B、TRAILR1/TNFRSF1OA、ICAM-1/CD54、TRAIL R2/TNFRSF10B、ICAM-2/CD102、TRAILR3/TNFRSF10C、IFN-γR1、TRAILR4/TNFRSF10D、IFN-γR2、TSLP、IL-1R1和TSLPR.
在多个实施方式中，所述免疫调节剂是抗体。所述抗体可以是多克隆的或单克隆的，完整的或截短的(如F(ab')2、Fab、Fv)，双特异性或多特异性的，异种的、同种异体的、同基因的或其修饰形式(例如嵌合抗体或人源化抗体)。在一个实施方式中，所述免疫调节剂是单克隆抗体。所述单克隆抗体可以是非人类哺乳动物来源的单克隆抗体、重组嵌合单克隆抗体、重组人源化单克隆抗体或人类单克隆抗体。在某些实施方式中，所述抗体进一步包括免疫球蛋白(例如IgA、IgG、IgE、IgD或IgM)的Fc区，其可与Fc受体相互作用并激活免疫反应，致使免疫细胞或其他细胞的耗竭和/或细胞死亡。
在一些实施方式中，所述抗体是指由两条重链和两条轻链的四条多肽链组成的免疫球蛋白分子，其通过二硫键相互连接，并能结合一种或多种抗原(例如双特异性或多特异性抗体)。每个重链由重链可变区(VH)和重链恒定区组成。重链恒定区由CH1、CH2和CH3三个结构域组成。每个轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个CL结构域组成。VH区和VL区可进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDRs)，其间穿插着更保守的区域，称为框架区(FR)。每个可变区(VH或VL)包含3个CDRs，用CDR1、CDR2和CDR3表示。每个可变区域还包含4个框架细分区，用FR1、FR2、FR3和FR4表示。所述术语抗体包括所有类型的抗体，包括例如IgA、IgG、IgD、IgE和IgM，以及它们各自的亚类(同种型)，例如IgG-1、IgG-2、IgG-3和IGg-4；IgA-1和IgA-2。在一些实施方式中，所述抗体也指抗体片段和抗原结合片段。
适用于实施本文所述方法的抗体可以是多种抗体形式，例如单克隆的、多克隆的、双特异性的、多特异性的，并且可以包括但不限于人的、人源化的或嵌合的抗体，包括单链抗体、Fab片段、F(ab')片段、Fab表达文库产生的片段，和/或上述任一种的结合片段。抗体也指免疫球蛋白分子和其免疫活性部分，即含有针对本文所述的至少两个靶标的抗原或靶向结合位点的分子。如本领域技术人员所理解的，本文所述的免疫球蛋白分子可以是免疫球蛋白分子的任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如，IGg1、lgG2、lgG3、lgG4、lgA1和lgA2)或亚类。此外，适于实施本文所述的本发明方法的抗体(例如，单特异性、双特异性和/或多特异性)可以是例如前体抗体(probodies)(例如，封端或掩蔽的前体药物抗体(例如细胞混合物))；双抗体；“BITEs”；TandAbs；柔性体；驼状抗体；dAbs；免疫体；Triomabs；Troybodies；Pepbodies；真空体；SIgA plAntibodies；SMIPs；NARs；IgNARs；XmABs；合成人源化抗体；微小抗体；RabMAbs；Fcabs；mAb2抗体；Sympress抗体；UniBodies；DuoBodies；或血管靶向抗体，如下述美国专利或美国公开专利记载的内容：US 7,150,872、US 2007/004909、US 5,837,242、US 7,235,641、US 2005/089519、US 2005/079170、US 6,838,254、US 2003/088074、US 2006/280734、US 2004/146505、US 5,273,743、US 6,551,592、US 6,294,654、US 2004/101905、US 2004/253238、US 6,303,341、US 2008/227958、US2005/043519、US 2009/148438、US 2008/0181890、US 2008/095767、US 5,837,821、WO2009/117531、US 2005/033031、US 2009/298195、US 2009/298195，欧洲公开专利EP2152872、WO 2010/063785、US 2010/105874、US 7,087,411和/或US 2010/316602，它们的每一个均通过整体引用的方式包含于此。另请参阅Storz MAbs.2011 May-Jun；3(3):310–317。
PD-1(也称为CD279或程序性细胞死亡蛋白1)是B7受体家族的成员。在一些实施方式中，所述PD-1是指人PD-1序列(参见，例如，NCBI参考序列:NP_005009在此全文引入作为参考)及其任何天然存在的等位基因、剪接变体和加工形式(例如，参见Keir M.E.et al.,2008.Annu Rev Immunol.26:677-704 and UniProt:Q15116，其全部内容通过引用的方式结合于此)。PD-1将PD-L1(也称为CD274或B7-H1)和PD-L2(也称为CD273或B7-DC)进行结合，二者也是B7家族的成员。在一些实施方式中，所述PD-L1指的是人PD-L1(参见，例如GenBank:AF233516，其全部内容通过引用的方式结合于此)及其任何天然存在的等位基因、剪接变体和加工形式(参见，例如UniProt:Q9NZQ7，其全部内容通过引用的方式结合于此)。在一些实施方式中，所述PD-L2指的是人PD-L2(例如NCBI参考序列:NM_025239，其全部内容通过引用的方式结合于此)及其任何天然存在的等位基因、剪接变体和加工形式(参见例如UniProt:Q9BQ51，其全部内容通过引用的方式结合于此)。对于本发明中的PD-1和/或PD-L1和/或PDL-2治疗方法，参见癌症控制(Cancer Control)2014年7月，第21卷，第3号，其全部内容通过引用的方式结合于此。
在多个实施方式中，所述免疫调节剂靶向PD-1、PD-L1和PD-L2中的一种或多种。在多个实施方式中，所述免疫调节剂是PD-1抑制剂。在多个实施方式中，所述免疫调节剂是对PD-1、PD-L1和PD-L2中的一种或多种具有特异性的抗体。例如，在一些实施方式中，所述免疫调节剂是抗体，例如但不限于，纳武利尤单抗(ONO-4538/BMS-936558，MDX1106，OPDIVO，BRISTOL MYERS SQUIBB)，派姆单抗(KEYTRUDA，MERCK)，联合利妥昔单抗(CT-011，CURETECH)，MK-3475(MERCK)，BMS 936559(BRISTOL MYERS SQUIBB)，伊布替尼(PHRMACYCLICS)，MPDL328OA(ROCHE)。在一些实施方式中，所述免疫调节剂是抗体，例如但不限于阿特珠单抗(TECENTREQ)或阿维单抗(avelumab，BAVENCIO)。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂与BMS-936559和MEDI4736中的一种或多种进行组合用于治疗例如晚期实体瘤。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂与MPDL3280A(任选的与威罗菲尼)和MEDI4736(任选的与达拉非尼和曲美替尼中的一种或多种)中的一种或多种进行组合用于治疗黑色素瘤。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂与MPDL3280A(任选的与厄洛替尼)和MEDI4736(任选的与曲美木单抗)中的一种或多种进行组合用于治疗非小细胞肺癌。在一些实施方式中，所述肌醇基药剂与MPDL3280A(任选的与贝伐单抗和舒尼替尼中的一种或多种)进行组合用于治疗肾细胞癌。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂与MPDL3280A进行组合用于治疗实体或血液恶性肿瘤。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂与MPDL3280A(任选的与贝伐单抗、化疗和考比替尼中的一种或多种)、MEDI4736(可选含曲美木单抗)和MSB0010718C中的一种或多种进行组合用于治疗实体瘤。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂与AMP-224进行组合用于晚期癌症的治疗。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂与纳武单抗(任选的与iliolumbar(抗KIR))进行组合用于治疗晚期实体肿瘤。在一些实施方式中，所述肌醇基药物与纳武单抗进行组合用于治疗去势抵抗性前列腺癌、黑色素瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)和肾细胞癌(RCC)。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂与派姆单抗进行组合用于治疗结肠癌。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂与派姆单抗进行组合用于治疗胃癌、头颈癌、TNBC和尿路上皮癌。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂与纳武单抗(任选的与易普利姆玛)进行组合用于治疗胃癌、胰腺癌、小细胞肺癌和TNBC。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂与纳武单抗(任选的与易普利姆玛)进行组合用于治疗胶质母细胞瘤。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂与纳武单抗进行组合用于治疗肝细胞癌。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂与派姆单抗进行组合用于治疗霍奇金淋巴瘤、骨髓瘤、骨髓增生异常综合征和非霍奇金淋巴瘤。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂与联合利妥昔单抗单抗进行组合用于治疗恶性胶质瘤。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂与纳武单抗(任选的与易普利姆玛、多种1类肽和montanide ISA 51 VG中的一种或多种一起使用，并优选采用易普利姆玛)和派姆单抗中的一种或多种进行组合用于治疗黑色素瘤。在一些实施方式中，所述肌醇基药剂与派姆单抗进行组合用于治疗黑色素瘤和非小细胞肺癌。在一些实施方式中，所述将肌醇基药物与纳武单抗(任选的与吉西他滨/顺铂、培美曲塞/顺铂、卡铂/紫杉醇、贝伐单抗、厄洛替尼和易普利姆玛中的一种或多种)和派姆单抗中的一种或多种进行组合用于治疗非小细胞肺癌。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂与联合利妥昔单抗(任选的与吉西他滨)进行组合用于胰腺癌的治疗。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂与联合利妥昔单抗(任选的与sipuleucel-T和环磷酰胺中的一种或多种)进行组合用于治疗前列腺癌。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂与纳武单抗(任选的与舒尼替尼、帕唑帕尼和易普利姆玛中的一种或多种)、派姆单抗(任选的与帕唑帕尼)和联合利妥昔单抗(任选的与树突细胞/肾细胞癌融合细胞疫苗)中的一种或多种进行组合用于肾细胞癌的治疗。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂与抗LAG3(BMS-986016)(任选的与纳武单抗)、纳武单抗(任选的与白介素-21)和AMP-554中的一种或多种进行组合用于治疗实体瘤。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂与派姆单抗进行组合用于治疗实体瘤和非小细胞肺癌。
在多个实施方式中，所述免疫调节剂靶向CD137或CD137L中的一种或两种。在多个实施方式中，所述免疫调节剂是对CD137或CD137L中的一种或两种具有特异性的抗体。例如，在一些实施方式中，所述免疫调节剂是抗体，例如但不限于乌瑞芦单抗(也称为BMS-663513和抗-4-1 BB抗体)。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂与乌瑞芦单抗(任选的与纳武单抗、利瑞鲁单抗和乌瑞芦单抗中的一种或多种)进行组合用于治疗实体瘤和/或B细胞非霍奇金淋巴瘤和/或头颈癌和/或多发性骨髓瘤。
在多个实施方式中，所述免疫调节剂靶向CTLA-4、AP2M1、CD80、CD86、SHP-2和PPP2R5A中的一种或多种。在多个实施方式中，所述免疫调节剂是对CTLA-4、AP2M1、CD80、CD86、SHP-2和PPP2R5A中的一种或多种具有特异性的抗体。例如，在一些实施方式中，所述免疫调节剂是抗体，例如但不限于易普利姆玛(MDX-010、MDX-101、Yervoy、BMS)和/或曲美木单抗(Pfizer)。在一些实施方式中，所述肌醇基药剂与易普利姆玛(任选的与巴维昔单抗)进行组合用于治疗黑色素瘤、前列腺癌和肺癌中的一种或多种。
在多个实施方式中，所述免疫调节剂靶向CD20。在多个实施方式中，所述免疫调节剂是抗体特异性CD20。例如，在一些实施方式中，所述免疫调节剂是抗体，例如但不限于奥法木单抗(GENMAB)、奥滨尤妥珠单抗(GAZYVA)、AME-133v(APPLIED MOLECULAREVOLUTION)、奥瑞珠单抗(GENENTECH)、TRU-015(TRUBION/EMERGENT)、维妥珠单抗(IMMU-106)。在一些实施方式中，所述免疫调节剂是抗体，例如但不限于利妥昔单抗、奥滨尤妥珠单抗、奥法木单抗、奥瑞珠单抗、ocaratuzumab和维妥珠单抗。在一些实施方式中，能够结合CD20的抗体是利妥昔单抗。
治疗方法和患者选择
在一些实施方式中，本发明涉及一种治疗、改善或预防癌症生长、存活、转移、上皮-间质转化、免疫逃逸或复发的方法，包括通过施用肌醇基试剂和一种或多种免疫调节剂来进行。本文还提供了一种减少癌症复发的方法，包括给有此需要的受试者施用肌醇基试剂和一种或多种免疫调节剂。所述方法还可以防止癌症复发。所述癌症可能是一种肿瘤疾病。所述癌症可能是一种休眠肿瘤，可能是由癌症转移引起的。所述休眠肿瘤也可能是手术切除肿瘤后留下的。所述癌症复发可以是例如肿瘤再生、肺转移或肝转移。
在多个实施方式中，所述癌症是基底细胞癌、胆道癌中的一种或多种：膀胱癌、骨癌、脑癌和中枢神经系统癌、乳腺癌、腹膜癌、宫颈癌、绒毛膜癌、结肠癌和直肠癌、结缔组织癌、消化系统癌症、子宫内膜癌、食道癌、眼癌、头颈癌、胃癌(包括胃肠癌)、胶质母细胞瘤、原发性肝癌、肝细胞瘤、上皮内肿瘤、肾癌或肾癌、喉癌、白血病、肝癌、肺癌(例如，小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞癌)、黑色素瘤、骨髓瘤、神经母细胞瘤、口腔癌(唇、舌、口和咽)、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、直肠癌、呼吸系统癌症、唾液腺癌、肉瘤、皮肤癌、鳞状细胞癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌或子宫内膜癌、泌尿系统癌症、外阴癌、淋巴瘤包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤，以及B细胞淋巴瘤(包括低度/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞白血病、中级/滤泡性NHL中级弥漫性非霍奇金淋巴瘤、高级免疫母细胞性非霍奇金淋巴瘤、高级淋巴母细胞性非霍奇金淋巴瘤、高级小非裂解细胞非霍奇金淋巴瘤、大型疾病NHL、套细胞淋巴瘤、艾滋病相关淋巴瘤、和瓦氏巨球蛋白血症、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、慢性成髓细胞白血病、以及其他癌症和肉瘤、和移植后淋巴增生性疾病(PTLD)，以及与瘢痣病(phakomatoses)、水肿(例如与脑瘤相关的水肿)和Meigs综合征相关的异常血管增生。
在多个实施方式中，所述癌症是胆道癌。在一些实施方式中，所述胆道癌选自胰腺癌、胆囊癌、胆管癌和Vater壶腹癌。在多个实施方式中，所述癌症是肝癌。在多个实施方式中，所述癌症是结肠癌。在一些实施方式中，所述胆道癌是胆管癌和/或腺癌。
在多个实施方式中，所述癌症是胰腺癌。在多个实施方式中，所述胰腺癌是外分泌肿瘤。在多个实施方式中，所述胰腺癌是导管腺癌。在多个实施方式中，所述胰腺癌是腺泡腺癌。在多个实施方式中，所述胰腺癌由导管内乳头状粘液性肿瘤发展而来(IPMN)。在多个实施方式中，所述胰腺癌是腺泡细胞癌、腺鳞癌、胶质细胞癌、巨细胞瘤、肝样癌、粘液性囊性肿瘤、胰腺母细胞瘤、浆液性囊腺瘤、印戒细胞癌、实体和假乳头状瘤、鳞状细胞癌或未分化癌。在多个实施方式中，所述胰腺癌是内分泌肿瘤或胰腺神经内分泌肿瘤或胰岛细胞肿瘤。在多个实施方式中，所述胰腺癌是胰岛素瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、生长抑素瘤、美国胰腺癌(VIPomas)和含有纯胰多肽的肿瘤(Ppomas)。
在多个实施方式中，所述胰腺癌是可切除的、可能切除的(borderlineresectable)、局部晚期的或转移性的癌症。
在多个实施方式中，使用TNM分期系统对所述胰腺癌进行分期。在多个实施方式中，所述胰腺癌是I期、II期、或III期、或IV期。在多个实施方式中，所述胰腺癌是Tis期，或T1期，或T2期，或T3期，或T4期。在多个实施方式中，所述胰腺癌是N1期或N2期。在多个实施方式中，所述胰腺癌是M1期。
在多个实施方式中，所述胰腺癌为0期，即原位癌症，其中癌症尚未在其开始的导管外生长(Tis，N0，M0)。
在多个实施方式中，所述胰腺癌为IA期，即胰腺中的肿瘤为2cm或更小。其没有扩散到淋巴结或身体的其他部位(T1，N0，M0)。
在多个实施方式中，所述胰腺癌为IB期，即胰腺中的肿瘤大于2cm。其没有扩散到淋巴结或身体的其他部位(T2，N0，M0)。
在多个实施方式中，所述胰腺癌是IIA期，即肿瘤大于4cm并延伸到胰腺之外。其没有扩散到附近的动脉、静脉、淋巴结或身体的其他部位(T3、N0、M0)。
在多个实施方式中，所述胰腺癌是IIB期，即任何大小的肿瘤都没有扩散到附近的动脉或静脉。其已经扩散到1～3个局部淋巴结，但没有扩散到身体的其他部位(T1、T2或T3；N1；M0)。
在多个实施方式中，所述胰腺癌是III期。在多个实施方式中，所述胰腺癌是任何大小的肿瘤，其已经扩散到4个或更多个局部淋巴结，但没有扩散到附近的动脉、静脉或身体的其他部分(T1，T2，或T3，N2，M0)。在多个实施方式中，所述胰腺癌是已经扩散到附近动脉和静脉并且可能已经扩散到局部淋巴结的肿瘤。其没有扩散到身体的其他部位(T4期，任何N，M0期)。
在多个实施方式中，所述胰腺癌为IV期，即已经扩散到身体其他部位的任何肿瘤(任何T期、任何N期、M1期)。
在多个实施方式中，所述胰腺癌是周期性的。
在多个实施方式中，所述癌症是肝癌。在多个实施方式中，本文所述的肝癌是原发性肝癌。在多个实施方式中，所述原发性肝癌是肝细胞癌(HCC)、胆管癌、血管肉瘤和肝母细胞瘤中的一种。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂用于药物的制造或用于肝硬化患者的原发性肝癌的治疗。在多个实施方式中，本发明包括与一种或多种以下肝癌风险因素相关的原发性肝癌的治疗：肝硬化、过度饮酒(包括酒精中毒)、非酒精性脂肪肝、肝炎病毒感染、吸烟、免疫力低下、家族史、糖尿病、胆囊切除、X光或CT扫描产生的辐射、体重过高、食用槟榔和黄曲霉毒素。
在一些实施方式中，所述肝癌是继发性肝癌。在多个实施方式中，所述继发性肝癌来源于一种或多种经常转移到肝脏的原发性癌症，包括例如结肠癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、乳腺癌、胆道癌、食道癌、卵巢癌、前列腺癌、肾癌和黑色素瘤。在一些实施方式中，本发明涉及一种治疗癌症的方法，其包括给患有如上文列举的可能转移到肝脏的肿瘤的患者施用有效剂量的肌醇基试剂的新佐剂疗法。在一些其他实施方式中，所述继发性肝癌来源于基底细胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脑癌和中枢神经系统癌、乳腺癌、腹膜癌、宫颈癌、绒毛膜癌、结肠癌和直肠癌、结缔组织癌、消化系统癌症、子宫内膜癌、食道癌、眼癌、头颈癌、胃癌(包括胃肠癌)、胶质母细胞瘤、原发性肝癌、肝细胞瘤、上皮内肿瘤、肾癌或肾癌、喉癌、白血病、肝癌、肺癌(例如，小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞癌)、黑色素瘤、骨髓瘤、神经母细胞瘤、口腔癌(唇、舌、口和咽)、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、直肠癌、呼吸系统癌症、唾液腺癌、肉瘤、皮肤癌、鳞状细胞癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌或子宫内膜癌、泌尿系统癌症、外阴癌、淋巴瘤包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤，以及B细胞淋巴瘤(包括低度/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞白血病、中级/滤泡性NHL中级弥漫性非霍奇金淋巴瘤、高级免疫母细胞性非霍奇金淋巴瘤、高级淋巴母细胞性非霍奇金淋巴瘤、高级小非裂解细胞非霍奇金淋巴瘤、大型疾病NHL、套细胞淋巴瘤、艾滋病相关淋巴瘤、和瓦氏巨球蛋白血症、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、慢性成髓细胞白血病、以及其他癌症和肉瘤、和移植后淋巴增生性疾病(PTLD)，以及与瘢痣病(phakomatoses)、水肿(例如与脑瘤相关的水肿)和Meigs综合征相关的异常血管增生。
在多个实施方式中，本文所述的肝癌具有一种或多种肝癌组织标志物，选自例如：GPC3；GPC3+热休克蛋白70+谷氨酰胺合成酶；端粒酶；增殖细胞核抗原标记指数；Ki-67；MIB-1E-钙粘蛋白和β-连环蛋白。在多个实施方式中，本文所述的肝癌具有选自以下的一种或多种选自肝癌血清标志物：AFP；AFP-伴刀豆球蛋白A；AFP-LCA结合物；等电聚焦时HCC特有的AFP谱带(单唾液酸化AFP)；AFP凝集素亲和亚组(LCA反应性LCA-L3；红血球凝集素植物血凝素E4反应性AFP-P4和P5)；循环游离的AFP-IgM复合物；由于缺乏维生素K或产生拮抗作用而产生的DCP/凝血酶原II；GPC-3的可溶性NH2片段；硫酸肝素蛋白聚糖；高尔基蛋白73；Iso-γGTP；铁蛋白；变体碱性磷酸酶；α1-抗胰蛋白酶；α1-酸性糖蛋白；骨桥蛋白；醛缩酶A；5[prime]-核苷酸磷酸二酯酶；CK18、CK19、TPA、TPS；循环性游离鳞状细胞癌抗原–IgM复合物；α-岩藻糖基转移酶；α-L-岩藻糖苷酶；转化生长因子β1；细胞间细胞粘附分子1；抗p53抗体；白介素8；白介素6；胰岛素样生长因子II；端粒酶或端粒酶逆转录酶mRNA；血管内皮生长因子；变体野生型雌激素受体；维生素B12结合蛋白；神经降压素；游离核酸；循环的无细胞血清DNA；表观遗传异常，例如p16高甲基化；和血浆蛋白酶体。
在多个实施方式中，本文所述的肝癌具有一种或多种肝癌肿瘤细胞标记物，所述标记物选自例如：通过AFP mRNA的RTPCR检测的外周血中的循环肿瘤细胞。在多个实施方式中，本文所述的肝癌具有一种或多种肝癌遗传标记，选自，例如:血浆谷氨酸羧基肽酶磷脂酶A2、G13和G7以及其他cDNA微阵列来源的编码蛋白；黑色素瘤抗原基因1，3；X染色体1、2、4、5上的滑膜肉瘤；肌浆钙结合蛋白1；纽约食管鳞状细胞癌1；和循环甲基化DNA(ras关联结构域家族1A)。
在一些实施方式中，所述肝癌表达甲胎蛋白。在一些实施方式中，所述定义本发明的肝癌的标记物的更多细节可在例如Sturgeon等的《肿瘤标记物在肝、膀胱、子宫颈癌和胃癌中的应用》(Use of Tumor Markers in Liver,Bladder,Cervical,and GastricCancers,American Association for Clinical Chemistry,Inc.(2010))中找到，其内容通过引用的方式结合于此。
在多个实施方式中，本文所述的肝癌被分类为局部可切除肝癌、局部不可切除肝癌、晚期肝癌和复发性肝癌中的一种或多种。
局部可切除肝癌(一些T1或T2肿瘤，N0，M0肿瘤)是指早期癌症。通常肿瘤的尺寸很小，附近的血管不受影响。此外，这种类型的癌症通常特征在于肝功能和总体健康状况总体上可接受。在这些实施方式中，肌醇基试剂可用作使小肿瘤缩小并避免手术(尤其是在例如不容易接受手术的患者中，如老年人)需要的特有治疗方法。或者，在这些实施方式中，肌醇基试剂可用作佐剂或新佐剂治疗，以对例如外科手术切除进行补充治疗并改善临床结果。
局部不可切除的肝癌(一些T1-T4、N0、M0期的肿瘤)是指尚未扩散，但由于多种原因无法通过手术切除而安全去除的癌症(例如，肿瘤太大而无法安全去除，肿瘤位于肝脏中难以去除的部分(例如非常靠近大血管)，存在多个肿瘤且肝脏的其余部分不健康(因为肝硬化或其他原因))。如果可能的话，这些病人可以接受肝移植治疗。在这些实施方式中，肌醇基试剂可用作弥合移植治疗(例如，维持患者健康和/或抑制肿瘤生长和/或转移，直到可以移植)缺口的疗法。在某些情况下，肌醇基药物治疗可以使肿瘤充分缩小，从而使手术(手术切除或移植)成为可能。
晚期肝癌(包括所有N1或M1期的肿瘤)是指已经扩散到肝外(扩散到淋巴结或其他器官)的癌症。因为这些癌症分布广泛，所以不能用手术来治疗。如果肝脏功能足够好(如Child-Pugh A级或B级)，单独或联合使用肌醇制剂进行治疗可能有助于在一段时间内控制癌症的生长并延长寿命。
复发性肝癌是指治疗后的癌症。复发可以是局部的(在开始的地方或附近)，也可以是远端的(扩散到肺或骨等器官)。初始治疗后复发的肝癌的治疗取决于许多因素，包括复发的位置、初始治疗的类型以及肝脏功能的好坏。患有肝脏复发的局部可切除疾病的患者可能有资格接受进一步的手术或局部治疗，如消融或栓塞。如果癌症扩散，可选择进行靶向治疗或化疗。在所有这些情况下，肌醇基药物可以用来补充或代替治疗计划。
在多个实施方式中，本文描述的肝癌用AJCC(TNM)分期系统进行分类。疾病期用罗马数字I至IV(1-4)进行标记。有些时期进一步细分为A和B甚至C，绝大部分情况下，数字越低，表示癌症扩散越少。更高的数字(如IV期(4))意味着更晚期的癌症。大多数癌症的分期系统仅取决于癌症的程度，但是大多数患有肝癌的患者会随着癌症的发展而损害其余肝脏。这意味着肝脏可能无法正常工作，这也影响了患者的治疗选择和前景。肌醇基试剂可根据各时期的图谱(例如IA、或IB、或IC、或IIA、或IIB、或IIC、或IIIA、或IIIB、或IIIC、或IVA、或IVB、或IVC，包括TX、T0、Tis、T1、T2、T3、T4、NX、N0、N1、N2、N3、MX、M0、M1和1、2、3、4或5等级中的任意一个或多个)应用于各个时期。例如，肌醇基试剂可用于在较低阶段提供肝癌的治愈或减毒，或者可在较高阶段用作姑息治疗。在所有时期，肌醇基试剂可用作佐剂或新佐剂。
本发明还提供了一种治疗过度增殖性疾病的方法，包括给有此需要的受试者施用本文所述的有效治疗剂量的药剂和/或药物组合物，其中所述过度增殖性疾病不是癌症或其特征在于不希望的血管生成。可通过本发明的方法治疗的过度增殖性疾病包括但不限于：糖尿病性肾病、肾小球硬化、IgA肾病、肝硬化、胆道闭锁、充血性心力衰竭、硬皮病、辐射诱导的纤维化、肺纤维化(特发性肺纤维化、胶原血管疾病、结节病、间质性肺病和外源性肺病)、银屑病、生殖器疣和过度增殖性细胞生长疾病，包括过度增殖性角质细胞疾病如角化过度、鱼鳞病、角化病或扁平苔藓。在一些实施方式中，所述表现出过度增殖状况的组织或器官是低氧的。在另一个实施方式中，用于治疗过度增殖病症的方法还包括施用额外的抗过度增殖剂，例如本文所述的那些。
在一些实施方式中，本发明涉及PTEN错构瘤肿瘤综合征(PHTS)的治疗，其包括几种综合征，例如包括考登综合征(CS)、班纳延-莱利-鲁瓦卡巴综合征(BRRS)、普罗透斯综合征(PS)和自闭症谱系障碍(ASD)。在一些具体实施方式中，本发明涉及经常表现出PTEN基因失活的癌症的治疗，包括但不限于胶质母细胞瘤、子宫内膜癌和前列腺癌；和/或经常显示PTEN表达减少的癌症的治疗，包括但不限于肺癌和乳腺癌。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂和/或免疫调节剂用于治疗患有治疗难以治愈性癌症的受试者。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂用于治疗采用一种或多种免疫调节剂而难以治愈的受试者。例如，在一些实施方式中，所述受试者对PD-1和/或PD-L1和/或PD-L2药物是难以治愈的，包括，例如，纳武单抗(ONO-4538/BMS-936558，MDX1106，OPDIVO，BRISTOL MYERS SQUIBB)，派姆单抗(KEYTRUDA，MERCK)，联合利妥昔单抗(CT-011，CURETECH)，MK-3475(MERCK)，BMS 936559(BRISTOL MYERS SQUIBB)，atezolizumab(TECENTRIQ)，avelumab(BAVENCIO)和/或MPDL328 OA(ROCHE)-难以治愈性患者。例如，在一些实施方式中，所述受试者对抗CTLA-4药物是难以治愈的，例如易普利姆玛(Yervoy)-难以治愈的患者(例如黑素瘤患者)。在一些实施方式中，所述受试者对一种肌醇基试剂是难以治愈的。因此，在多个实施方式中，本发明提供了一种癌症治疗方法，该方法拯救了对各种治疗无反应的患者，包括肌醇基试剂或一种或多种免疫调节剂的单一疗法。在一些实施方式中，所述受试者的特征在于在肿瘤部位和/或具有免疫抑制作用的TME上的PD-L1+MDSC浸润。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂和/或免疫调节剂用于治疗不同时期的癌症(例如I期、II期、III期或IV期)。通过非限制性实例，使用整个时期分组，I期癌症是身体某个部分存在的小范围癌症；II期癌症和三期癌症是局部晚期癌症。癌症被认定为II期还是III期取决于癌症的具体类型。在一个非限制性例子例如霍奇金病中，II期表示仅在横膈膜一侧的淋巴结受到了影响，而III期表示横膈膜上方和下方的淋巴结都受到了影响。因此，II期和III期的具体标准因诊断而异。IV期癌症经常转移或扩散到其他器官或全身。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(和/或免疫调节剂)减少了患者个体经历的治疗过程的副作用。例如，肌醇基试剂和一种或多种免疫调节剂的组合疗法可以允许更低剂量的肌醇基试剂和/或一种或多种免疫调节剂(例如，与单一疗法相比)，从而增大任一试剂的治疗窗。在一些实施方式中，剂量的降低减轻了一种或多种副作用，而不丧失功效(或功效损失最小)。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂使得血管正常化。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(和/或免疫调节剂)可以促进或刺激一种或多种免疫细胞的活性或活化作用，所述免疫细胞包括但不限于细胞毒性T淋巴细胞、辅助性T细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、抗肿瘤巨噬细胞(例如M1巨噬细胞)和树突细胞。
在一些实施方式中，任选的且不希望受到引起血管正常化的理论束缚，所述肌醇基试剂(和/或免疫调节剂)可以促进或刺激一种或多种免疫细胞的活性或活化作用，所述免疫细胞包括但不限于细胞毒性T淋巴细胞、辅助性T细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、抗肿瘤巨噬细胞(例如M1巨噬细胞)和树突细胞。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(和/或免疫调节剂)可以促进或刺激T细胞的活性和/或活化，包括，作为非限制性实例，活化和/或刺激一种或多种信号，包括：促存活信号、自分泌或旁分泌生长信号、p38MAPK-，ERK-，STAT-，JAK-，AKT-或PI3K介导的信号、抗凋亡信号、和/或促进和/或以下一种或多种必要的信号：促炎细胞因子产生或T细胞迁移或T细胞肿瘤浸润。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(和/或免疫调节剂)可以调节免疫系统，有利于通过细胞药物免疫反应对一种或多种肿瘤的免疫反应，包括先天免疫系统和/或适应性免疫系统。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(和/或免疫调节剂)可以抑制或降低对肿瘤细胞的免疫调节或免疫耐受性。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂和一种或多种免疫调节剂的组合疗法抑制或减少了一种或多种细胞的活性或活化作用，所述细胞包括但不限于：骨髓来源的抑制细胞(MDSCs)、调节性T细胞(Tregs)；肿瘤相关中性粒细胞、M2巨噬细胞和肿瘤相关巨噬细胞。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(和/或免疫调节剂)抑制或降低了Th17细胞的活性或活化作用。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(和/或免疫调节剂)可以减少或消除免疫抑制细胞向肿瘤部位和/或TME的浸润。例如，在一些实施方式中，本发明所述的试剂可以防止、减少或消除一种或多种调节性T细胞(Tregs)的浸润；髓样抑制细胞；肿瘤相关中性粒细胞(TANs)、M2巨噬细胞和肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)转移到肿瘤部位和/或TME。在一些实施方式中，本发明所述的药物可以抑制或降低一种或多种调节性T细胞(Tregs)的活性或活化作用；髓样抑制细胞；肿瘤相关中性粒细胞、M2巨噬细胞和肿瘤相关巨噬细胞。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(和/或免疫调节剂)可以与例如共刺激剂协同刺激免疫反应，或者与例如共抑制剂形成对比。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂致使肿瘤或肿瘤微环境中的一种或多种T细胞(包括但不限于细胞毒性T淋巴细胞、辅助性T细胞、自然杀伤T(NKT)细胞)、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、树突细胞、单核细胞和巨噬细胞(例如M1和M2中的一种或多种)的增加。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂致使CD45+细胞浸润或浸润增加到肿瘤或肿瘤微环境中。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂致使一种或多种T细胞(包括但不限于细胞毒性T淋巴细胞、辅助性T细胞、自然杀伤T(NKT)细胞)、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、树突细胞、单核细胞和巨噬细胞(例如M1和M2中的一种或多种)渗透进入肿瘤或肿瘤微环境。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂使得CD45+细胞渗透进入肿瘤或肿瘤微环境。例如，在一些实施方式中，所述肌醇基试剂可以调节CCR5/CCL5和/或CCR10/CCL10和/或CXCR4/CXCL12和/或CCR7/CCL21和/或CXCR3和/或CCR10/CXCL28轴。例如，在一些实施方式中，所述肌醇基试剂任选的在CD45+细胞的情况下上调CCR5和/或CCR10和/或CXCR4的表达。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂使得CD11c+细胞(例如树突状细胞、M1巨噬细胞)渗透进入肿瘤或肿瘤微环境。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂使得CD40+细胞(例如APCs，如B细胞、树突状细胞、M1巨噬细胞)渗透进入肿瘤或肿瘤微环境。在多个实施方式中，所述肌醇基试剂引起发现于例如T细胞(例如NKT细胞)、NK细胞、成纤维细胞和血小板上的CD49b的上调。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂致使CD146+细胞(例如NK细胞和中性粒细胞)的浸润。例如，在一些实施方式中，所述肌醇基试剂可以调节CCR10/CCL10轴，例如，通过任选的在CD146+细胞的情况下上调CCR10的表达。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(和/或免疫调节剂)可以使得肿瘤内NKs的增加和/或TMENKs的增加。在多个实施方式中，本发明提供了通过内皮屏障的NKs渗透的增加。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(和/或免疫调节剂)可以使得肿瘤部位和/或TME中CD8+T细胞和/或B细胞和/或CD40+内皮细胞的增加。
在一些实施方式中，本文所述的肿瘤微环境是以下一种或多种：肿瘤脉管系统；肿瘤浸润淋巴细胞；成纤维细胞网状细胞；内皮祖细胞(EPC)；癌症相关成纤维细胞；周细胞；其他基质细胞；细胞外基质的成分(ECM)；树突细胞；抗原呈递细胞；T细胞；调节性T细胞；巨噬细胞；中性粒细胞；和位于肿瘤附近的其他免疫细胞。在一些实施方式中，本文所述的肿瘤微环境包括癌症相关的成纤维细胞(CAFs)。
在多个实施方式中，本发明所述的疗法提供了持久的免疫治疗效果。例如，在一些实施方式中，本发明所述的疗法消除了微环境的成分，这些成分可恢复致瘤环境并导致肿瘤复发。例如，本发明提供了减少或消除在促进肿瘤生长和转移性扩散中起作用的CAFs。在一些实施方式中，本发明的治疗方法记载于Immunotherapy,Nov 2012；4(11):1129–1138中的任意一种CAF还原剂，其内容通过引用的方式结合于此。另参见Tejchman等，Oncotarget2017年5月9日；8(19):31876–31887和Suchanski等2017 PLoS ONE 12(9):e0184970.doi.org/10.1371/journal.pone.0184970，它们的内容通过引用的方式结合于此。
例如，在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(和/或免疫调节剂)可以减少肿瘤部位中CD25+Fox-P3细胞的浸润。也就是说，在一些实施方式中，所述肌醇基试剂可以减少细胞的浸润，所述细胞为抑制或下调效应T细胞诱导和增殖的细胞。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(和/或免疫调节剂)可以调节癌症干细胞(CSC)样和/或上皮间质转化(EMT)表型。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(和/或免疫调节剂)可以预防或减少转移。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(和/或免疫调节剂)可以靶向和/或减少和/或消除ABG2+细胞，如例如Life Sciences 86(17-18)2010年4月24日,P631–637中所描述的ABG2+细胞，其全部内容通过引用的方式结合于此。另参见Kieda等，JMol Med(2013)91:883.doi.org/10.1007/s00109-013-0992-6，其全部内容通过引用的方式结合于此。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(和/或免疫调节剂)可以减少或消除各种促血管生成分子(如血管内皮生长因子、PDGF等)的作用。例如，各种促血管生成分子可以抑制免疫系统，例如通过吸引免疫抑制细胞渗透进入肿瘤(通过非限制性的方式，M2巨噬细胞)。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(和/或免疫调节剂)可以降低或消除一种或多种促血管生成分子及其同源受体的活性和/或表达，例如通过降低或消除受体/激动剂的结合(例如血管内皮生长因子和/或VEGFR，参见Collet等，2014 Mol Cancer Ther 13,165-178，Collet等，2016 Cancer Lett 370,345-357，和Klimkiewicz等，2017 Cancer Lett.Volume396,2017年6月28日,P10-20，上述全部内容通过引用的方式结合于此；PDGF和/或PDGF受体)。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(和/或免疫调节剂)可以与阻断VEGF和VEGF受体之间和/或PDGF和PDGF受体之间相互作用的试剂组合，包括例如舒尼替尼(SUTENT，PFIZER)、贝伐单抗(AVASTIN，GENENTECH/ROCHE)、兰尼单抗(LUCENTIS，GENENTECH/NOVARTIS)。举例来说，所述肌醇基试剂可以与舒尼替尼、抗CD137抗体和白介素-12中的一种或多种组合用于治疗癌症，包括但不限于结肠腺癌。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂(和/或免疫调节剂)可以使得骨桥蛋白的活性和/或表达降低。Kieda等J Mol Med(2013)91:883.doi.org/10.1007/s00109-013-0992-6，其全部内容通过引用的方式结合于此。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂可以增加肿瘤pO2的含量。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂可以使得血管正常化和/或对微环境进行修饰。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂通过调整PD-1、PD-L1和PD-L2中的一种或多种的表达来下调PD-1/PD-L1(和/或PD-L2)之间的相互作用。在一些实施方式中，所述PD-1/PD-L1(和/或PD-L2)的相互作用的减少通过肌醇基试剂和免疫调节剂的使用得到支撑。
在多个实施方式中，所述术语“患者”和“受试者”可互换使用。在一些实施方式中，所述受试者和/或动物是哺乳动物，例如人、小鼠、大鼠、豚鼠、狗、猫、马、牛、猪、兔、羊或非人灵长类动物，例如猴子、黑猩猩或狒狒。
在多个实施方式中，本发明的方法可用于治疗人类受试者。在一些实施方式中，所述人是儿童。在其他实施方式中，所述人是成年人。在其他实施方式中，所述人是老年人。在其他实施方式中，所述人可以被称为患者或受试者。在一些实施方式中，所述人是女性。在一些实施方式中，所述人是男性。
治疗方案和联合疗法
在一些实施方式中，本发明提供了使用肌醇基试剂和免疫调节剂(和任选的一种或多种其他治疗剂)的特定癌症治疗方案。例如，在一些实施方式中，首先向所述患者施用肌醇基试剂(例如ITPP)以使肿瘤血管化恢复正常，任选的通过减少或去除低氧状态来实现。首次施用肌醇基试剂(例如ITPP)可以刺激和/或增加T淋巴细胞(例如CD4+和CD8+T细胞)和/或NK细胞肿瘤和/或TME浸润和/或抑制和/或减少免疫抑制细胞(例如髓源性抑制细胞、调节性T细胞、肿瘤相关的中性粒细胞(TANs)、M2巨噬细胞和肿瘤相关的巨噬细胞(TAMs))的募集到肿瘤和/或TME。在一些实施方式中，本发明的疗法可以改变肿瘤部位和/或TME上的M1巨噬细胞与M2巨噬细胞的比例，以使其有利于M1巨噬细胞。特别的，与例如抗血管生成分子不同，在一些实施方式中，所述肌醇基试剂可以诱导长期(即，大于瞬时的)的血管正常化过程。例如，所述肌醇基试剂-血管正常化可以持续大于1、或2、或3、或4、或5、或6、或7、或14、或21天。因此，在一些实施方式中，这种持久的肌醇基试剂-血管正常化允许可持续的允许的肿瘤微环境，其更可能对一种或多种免疫调节剂有反应。也就是说，在一些实施方式中，所述肌醇基试剂可以增强免疫调节剂的治疗。
可选的，在用一种或多种免疫调节剂治疗后，给患者施用肌醇基试剂(例如ITPP)。例如，在一些实施方式中，所述免疫调节剂靶向一种或多种共抑制分子并减少或消除免疫抑制。在这种有利的情况下，即在消除抑制后，施用肌醇基试剂(例如ITPP)以刺激免疫系统。或者免疫调节剂首先靶向一种或多种共刺激分子，然后施用肌醇基试剂(例如ITPP)以增强这种效果，例如协同作用。
此外，如本文所述，所述肌醇基试剂和/或免疫调节剂可以在例如共同给药、治疗方案或共同配制的情况下与附加治疗剂组合。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂和/或免疫调节剂(任选的与附加治疗剂一起)可以按照顺序给药。这里使用的术语“顺序的(sequentially)”是指附加治疗剂和肌醇基试剂和/或免疫调节剂以大于约60min的时间间隔给药。例如，所述附加治疗剂和肌醇基试剂和/或免疫调节剂的顺序给药之间的时间间隔可以大于约60min、大于约2h、大于约5h、大于约10h、大于约1天、大于约2天、大于约3天或大于约1周。最佳给药时间可取决于代谢速率、排泄速率和/或额外治疗剂和肌醇基药物和/或免疫调节剂的药效活性。对附加治疗剂或本发明的药剂施用的先后顺序不做限定。
在一些实施方式中，所述肌醇基试剂和/或免疫调节剂(任选的与附加治疗剂一起)可以同时给药。本文使用的术语“同时”是指附加治疗剂和肌醇基试剂和/或免疫调节剂以不超过约60min的时间间隔给药，例如不超过约30min、不超过约20min、不超过约10min、不超过约5min或不超过约1min。所述附加治疗剂和肌醇基试剂和/或免疫调节剂的施用可以通过同时施用单一制剂(例如，包含附加治疗剂和肌醇基试剂和/或免疫调节剂的制剂)或单独的制剂(例如，包含附加治疗剂的第一制剂和包含肌醇基试剂和/或免疫调节剂的第二制剂)来进行。
联合给药也不需要通过相同的给药途径向受试者施用附加治疗剂。相反，每种治疗剂可以通过任何合适的途径给药，例如肠道外给药或非肠道外给药。
这种组合可以在较低剂量的肌醇基试剂和/或免疫调节剂下产生协同效果和/或附加效果和/或有效效果。例如，当肌醇基试剂与一种或多种免疫调节剂组合时，肌醇基试剂的有效剂量可能低于其在单一疗法中的有效剂量。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂与免疫调节剂结合，并且肌醇基试剂的有效剂量是亚治疗剂量。例如，当免疫调节剂与肌醇基试剂组合时，免疫调节剂的有效剂量可能低于其在单一疗法中的有效剂量。在一些实施方式中，所述免疫调节剂与肌醇基试剂组合，并且免疫调节剂的有效剂量是亚治疗剂量。在多个实施方式中，所述免疫调节剂与肌醇基试剂和附加治疗剂组合，并且附加治疗剂的有效剂量是亚治疗剂量。术语“亚治疗剂量或量”是指药理学活性物质的剂量或量低于作为唯一物质施用以实现治疗效果的物质的剂量或量。这种物质的亚治疗剂量可以根据受试者和所治疗的疾病状况、受试者的体重和年龄、疾病状况的严重程度、给药方式等而变化，其可以由本领域普通技术人员容易的确定。在一个实施方式中，所述化疗剂的亚治疗剂量或量小于批准的化疗剂全剂量的90％，例如美国食品和药品监督管理局批准的化疗剂标签信息中提供的剂量。在其他实施方式中，所述化疗剂的亚治疗剂量或量小于批准的全剂量的80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％或甚至10％，例如20％～90％、30％～80％、40％～70％或本文提供的范围内的其他值。
在一些实施方式中，所述免疫调节剂的有效剂量小于用于相同癌症的单一疗法和/或与肌醇基试剂之外的试剂的联合疗法的有效剂量。在一些实施方式中，所述肌醇基试剂的有效剂量小于用于相同癌症的单一疗法和/或与除免疫调节剂之外的试剂的联合疗法的有效剂量。
在多个实施方式中，所述肌醇基试剂与一种或多种免疫调节剂(例如1、2、3、4或5种免疫调节剂)和任选的一种或多种附加治疗剂(例如1、2、3、4或5种附加治疗剂)组合。这种组合可以在较低剂量的肌醇基试剂和/或免疫调节剂和/或一种或多种附加治疗剂下产生协同效果和/或附加效果和/或有效效果。联合给药可以同时进行，也可以依次进行。此外，包含肌醇基试剂和/或免疫调节剂的药物组合物可以包含附加治疗剂(例如，通过共制剂的形式)。也就是说，在一些实施方式中，本文公开的任何试剂中的两种或多种可以被共同配制。此外，在一些实施方式中，所述肌醇基试剂和/或免疫调节剂可以施用给正在用一种或多种附加治疗剂进行治疗的患者。此外，在一些实施方式中，所述肌醇基试剂和/或免疫调节剂可以用一种或多种附加治疗剂替代患者当前的治疗。
辅助治疗(也称为辅助护理)是在初步治疗、主要治疗或初始治疗之外进行的治疗。作为非限制性的例子，辅助治疗可以是通常在手术后给予的附加治疗，其中已经去除了所有可检测的疾病，但是由于隐匿性疾病仍然存在统计学上的复发风险。在一些实施方式中，本文所述的药物可被用作癌症治疗中的辅助疗法。在一些实施方式中，本文所述的治疗剂在切除前作为新辅助疗法进行给药。在某些实施方式中，所述新辅助疗法是指在任何手术之前缩小肿瘤和/或对肿瘤进行降级的疗法。在一些实施方式中，所述新辅助疗法是指在手术前向癌症患者施用本文所述的治疗剂。在一些实施方式中，本文所述的治疗剂在用首要疗法(first-line therapy)进行初始治疗后可用作维持疗法，包括但不限于本公开的任何附加治疗剂。
在多个实施方式中，本发明提供了血管正常化和持久pO2的恢复。在多个实施方式中，本发明提高了放射治疗的功效。在多个实施方式中，本发明提供了血管正常化和持久的pO2恢复，并提高了放射治疗的功效。
在多个实施方式中，本发明提供了一种用于治疗受试者的癌症或肿瘤的治疗方案或方法，其包括同时或依次施用有效治疗剂量的本文所述的肌醇基试剂和/或免疫调节剂以及一种或多种附加治疗剂。在多个实施方式中，本发明提供了一种用于治疗受试者的癌症或肿瘤的治疗方案或方法，其包括同时或依次施用有效治疗剂量的本文所述的肌醇基试剂和/或免疫调节剂以及一种或多种抗癌剂，包括但不限于化疗剂。本发明方法中所用的合适化疗剂可包括本文所述化疗剂。在某些实施方式中，所述化疗剂是5-氟尿嘧啶(5-FU)、阿霉素、吉西他滨、紫杉醇和顺铂中的一种或多种。举例来说，在一些实施方式中，本发明提供了肌醇基试剂和/或免疫调节剂与一种或多种常见的癌症治疗方案相结合(作为非限制性说明，FOLFOX、FOLFIRI、IFL、FL(Mayo)、QUASAR、Machover schedule、CAF、CMF、ECF、和FEC)的方法。
在多个实施方式中，所述附加治疗剂是抗癌剂，其包括但不限于化疗剂。在多个实施方式中，所述抗癌剂选自但不限于烷化剂，例如噻替哌和环磷酰胺(CYTOXAN)；烷基磺酸盐，如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶类，如苯并多巴、卡波醌、美妥替哌和乌瑞替哌；亚乙基亚胺和甲基三胺，包括亚丙基三胺、三乙基二胺、三烯丙基磷酰胺、三烯丙基硫代磷酰胺和三羟甲基三聚氰胺；番荔素(如泡番荔枝辛和布雷他辛酮(bullatacinone))；喜树碱(包括合成的类似物拓扑替康)；苔藓抑素；卡利·他汀类药物；CC-1065(包括其阿多来辛、卡折来辛和比折来辛合成类似物)；隐藻蛋白(例如，隐藻蛋白1和隐藻蛋白8)；多司他丁；多卡霉素(包括合成类似物KW-2189和CB 1-TM1)；刺五加苷；胰腺抑制素；肉毒杆菌素；海绵生长抑制素；氮芥类，如苯丁酸氮芥、氯萘哌齐、氯氟磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、甲氯乙胺、盐酸甲氧乙胺、美法仑、诺维比秦、苯甾胺、普瑞莫司汀、妥福司明、尿嘧啶芥子；亚硝脲类如卡莫司汀、氯佐菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷尼司汀；抗生素，例如烯二炔类抗生素(例如刺孢霉素，尤其是刺孢霉素γ和刺孢霉素ω(参见，例如Agnew,Chem.Intl.Ed.Engl.,33:183-186(1994))；达尼米星，包括达尼米星A；二膦酸盐，如氯膦酸盐；埃司帕米星以及新喹诺酮发色团和相关的色蛋白烯二炔抗生素发色团)、阿克拉霉素、放线菌素、authramycin、氮杂丝氨酸、博莱霉素、放线菌素、卡拉比星、卡米诺霉素、亲癌素、色霉素、达卡霉素、柔红霉素、去阿霉素、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星(包括吗啉代-多柔比星、氰吗啉代-多柔比星、2-吡咯烷-多柔比星和脱氧抗代谢物，如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，如去甲蝶呤、甲氨蝶呤、翼龙蝶呤、曲美曲酸；嘌呤类似物，如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫胺素、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，如安西他滨、氮杂胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、多昔尿苷、依诺西他滨、氟尿苷；雄激素类，如卡普睾酮、丙酸多莫司他酮、环硫雄醇、甲泼尼龙、睾酮；抗肾上腺素药，如米诺鲁米特、米托坦、三叶甾烷；叶酸补充剂，如山楂酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶；氨茶碱；阿莫司汀；比生群；依达曲塞；地美辛；重氮醌；儿茶素；醋酸椭圆胺；埃博霉素；依他净；硝酸镓；羟基脲；伦蒂南；离子代宁(ionidainine)；美登木素生物碱，例如美登素和安托霉素；米托瓜；米托蒽醌；莫潘坦莫尔；硝胺；喷司他丁；菲纳姆；吡柔比星；氯黄酮；鬼臼酸；2-乙基肼；丙嗪；PSK多糖复合物(美国俄勒冈州尤金市的JHS Natural Products)；唑烷；根硫辛；西呋喃；螺旋锗；替那嗪酸；三亚胺醌；2,2',2'-三氯三乙胺；毛孢菌素(例如T-2毒素，维拉库林A，罗丹蛋白A和胍基丁胺)；尿烷；长春地辛；达卡巴嗪；甘露司汀；线粒体糖醇；米索内醇；溴丙哌嗪(pipobroman)；胞嘧啶；阿糖苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；希托帕；紫杉烷类，例如TAXOL紫杉醇(Bristol-Myers Squibb Oncology，新泽西州普林斯顿)，不含氢化蓖麻油的ABRAXANE、白蛋白工程紫杉醇纳米粒制剂(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,111)，以及TAXOTERE多西紫杉醇(Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France)；氯苯甲醚；GEMZAR吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物，如顺铂、奥沙利铂和卡铂；长春碱；白金；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；诺华霉素；替尼泊苷、埃达蝶呤；道诺霉素；氨基蝶呤；希罗达；伊班膦酸盐；伊立替康(Camptosar，CPT-11)(包括伊立替康与5-FU和亚叶酸钙的治疗方案)；拓扑异构酶抑制剂RFS2000二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄醇，如视黄酸；卡培他滨；康布他汀；亚叶酸(LV)；奥沙利铂，包括奥沙利铂治疗方案(FOLFOX)；拉帕替尼；布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)的抑制剂，如伊布鲁替尼、PKC-a、Raf、H-Ras、EGFR(如埃罗替尼(Tarceva))和VEGF-A的抑制剂，可减少细胞增殖以及上述任何一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。在一个实施方式中，所述化疗剂是微管靶向剂，例如紫杉醇。在另一个实施方式中，所述化疗剂是DNA嵌入剂，例如铂类药物(例如顺铂)或阿霉素。在另一个实施方式中，所述化疗剂是核苷代谢抑制剂，如吉西他滨或卡培他滨。
在一些实施方式中，所述附加治疗剂是氨基谷氨酰胺、安吖啶、阿那曲唑、天冬酰胺酶、beg、比卡鲁胺、博莱霉素、布舍瑞林、白消安、喜树碱、卡培他滨、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、氯屈膦酸二钠、秋水仙碱、环磷酰胺、环丙孕酮、阿糖胞苷、达卡巴嗪、达卡巴嗪、达金霉素、柔红霉素、二烯雌酚、己烯雌酚、多西他赛、阿霉素普鲁卡因、雷替曲塞、利妥昔单抗、链脲佐菌素、苏拉明、他莫昔芬、替莫唑胺、替尼泊苷、睾酮、硫鸟嘌呤、噻替哌、二氯二茂钛、拓扑替康、曲妥珠单抗、维甲酸、长春碱、长春新碱、长春地辛和长春瑞滨。
在多个实施方式中，所述附加治疗剂是抗过度增殖剂。抗过度增殖剂包括但不限于阿霉素、柔红霉素、丝裂霉素、放线菌素D、博莱霉素、顺铂、VP16、烯啶、紫杉醇、长春新碱、长春碱、卡莫司汀、美法仑、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、白消安、洛莫司汀、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、BCNU或喜树碱。
此外，所述附加治疗剂可以进一步包括辐射的使用。此外，所述治疗方法可以进一步包括光动力疗法的使用。
盐、药物组合物和剂量
在一些实施方式中，本文所述的试剂包括被修饰的衍生物，即通过任何类型的分子共价连接到试剂上，使得共价连接不会阻碍试剂的活性。例如，但不限于，衍生物包括通过糖基化、脂质化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护/封闭基团的衍生化、蛋白水解裂解、与细胞配体或其他蛋白质的连接等而修饰的试剂。任何一种化学修饰物都可以通过已知的技术进行，包括但不限于特定的化学裂解、乙酰化或甲酰化。此外，衍生物可以包含一种或多种非经典氨基酸。
在其他实施方式中，本文所述的试剂可以被修饰以添加效应基团，例如化学连接物、可检测基团，例如荧光染料、酶、底物、生物发光材料、放射性材料和化学发光基团，或功能基团，例如链霉亲和素、抗生物素蛋白、生物素、细胞毒素、细胞毒剂和靶向剂。
在又一个实施方式中，本发明提供了本文所述的药物及其药学上可接受的酯、前药、盐、溶剂化物、对映异构体、立体异构体、活性代谢物、共晶体和其他生理功能衍生物。
在一个实施方式中，本文所述的药剂是药学上可接受的盐的形式，即适合用于与人和其他动物的组织接触而没有过度毒性、刺激、过敏反应等，并且与合理的益处/风险比相称的那些盐。所述药学上可接受的盐是本领域公知的。所述盐可以在试剂的最终分离和纯化过程中原位制备，或者通过游离碱官能团与合适的酸或游离酸官能团与合适的碱性基团反应来单独制备。代表性的酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、延胡索酸盐、葡萄糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘化物、2-羟基乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等，以及无毒的铵、季铵和胺阳离子，包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等。
一方面，本发明提供了本文所述的药剂，以及药学上可接受的载体或赋形剂。所述药物组合物可以是适合所需用途和给药途径的任何合适的形式。所述药物赋形剂可以是液体，例如水和油，包括以石油、动物、植物为合成来源的油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。药物赋形剂可以是例如盐水、阿拉伯胶、明胶、淀粉糊、滑石、角蛋白、胶态二氧化硅、尿素等。在一个实施方式中，当给受试者施用时，药学上可接受的赋形剂是无菌的。当静脉内施用本文所述的任何药剂时，其中水是有用的赋形剂。盐水溶液、葡萄糖水溶液和甘油溶液也可以用作液体赋形剂，特别是用于注射溶液。合适的药物赋形剂还包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。合适的药物赋形剂的其他例子在Remington’s Pharmaceutical Sciences 1447-1676(Alfonso R.Gennaro eds.,19th ed.1995)中有所描述，其通过引用的方式结合于此。
此外，本发明的药物组合物可以包含佐剂，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂、pH缓冲剂和分散剂。此外，可以包括助剂、稳定剂、增稠剂、润滑剂和着色剂。通过包含在内的各种抗细菌和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯代丁醇、苯酚山梨酸等，可以确保防止微生物的活动。所述药物组合物还可以包括等渗剂，例如糖、氯化钠等。
必要时，所述药物组合物还可以包含增溶剂。此外，可以用本领域已知的合适的载体或输送装置输送药剂。用于给药的组合物可以任选的包括局部麻醉剂，例如利多卡因，以减轻注射部位的疼痛。
本发明的药物组合物可以采用溶液、悬浮液、乳剂、滴剂、片剂、丸剂、微丸、胶囊、含液体的胶囊、粉末、缓释制剂、栓剂、乳剂、气雾剂、喷雾剂、混悬剂或任何其他适合使用的形式。在一个实施方式中，所述药物组合物是胶囊的形式。在另一个实施方式中，所述药物组合物是片剂的形式。
在一些实施方式中，所述任何药物的给药途径是口服、静脉内和胃肠外给药中的任何一种。在多个实施方式中，所述给药途径包括，例如：口服、皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外、舌下、鼻内、脑内、阴道内、经皮、直肠、通过吸入或局部给药(例如对耳朵、鼻子、眼睛或皮肤给药)。在一些实施方式中，所述给药通过口服或肠胃外注射来实现。给药方式可由医师自行决定，并部分取决于当时医疗条件。在多个实施方式中，所述给药使得本文所述的任何药剂释放到血流中。
本文所述的任何药剂和/或药物组合物都可以通过口服给药。所述药剂和/或药物组合物也可以通过任何其他方便的途径给药，例如，通过静脉输注或丸药注射，通过上皮或粘膜皮肤衬里(例如，口腔粘膜、直肠和肠粘膜等)吸收，并且可以与附加治疗剂共同给药。给药可以是全身性的，也可以是局部的。各种递送系统是已知的并且可以使用的技术，例如包封在脂质体、微粒、微胶囊、胶囊等的内部。在特定的实施方式中，可能需要对需要治疗的区域进行局部给药。
在一个实施方式中，本文所述的药剂和/或药物组合物可以根据常规程序配制成适于人类口服的组合物。所述口服给药的固体剂型包括，例如，胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这样的剂型中，活性剂与至少一种惰性的、药学上可接受的赋形剂或载体如柠檬酸钠、磷酸二钙等，和/或a)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、硅酸、微晶纤维素和贝克斯特殊糖(Bakers Special Sugar)等；b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、阿拉伯胶、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、羟丙基纤维素和羟甲基纤维素等；c)湿润剂，如甘油等；d)崩解剂如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐、碳酸钠、交联聚合物如交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羟乙酸钠淀粉等；e)溶液阻滞剂，如石蜡等；f)吸收促进剂，如季铵试剂等；g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯等；h)吸收剂，如高岭土和膨润土等；和i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠、山嵛酸甘油酯等，以及这些赋形剂的混合物进行混合。本领域技术人员将认识到，特定的赋形剂在口服剂型中可以具有两种或多种功能。在口服剂型的情况下，例如胶囊或片剂，剂型也可以包含缓冲剂。
固体剂型如片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂可以用包衣和壳(如肠溶衣)和药物配制领域中公知的其他包衣来制备。所述固体剂型可以任选的含有遮光剂，并且也可以是这样一种组合物，即它们仅仅或优选的在肠道的某个部位释放活性成分，任选的以延迟的方式。可以使用的包埋组合物的非限制性实例包括聚合物质和蜡。
如果合适，所述活性剂也可以是微胶囊形式，且含有一种或多种上述赋形剂。
口服液体剂型包括药学上可接受的乳剂、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了活性剂之外，所述液体剂型可以包含本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨醇的脂肪酸酯，以及它们的混合物。除了惰性稀释剂之外，所述口服组合物还可以包括佐剂，例如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和增香剂。除了活性剂之外，所述悬浮液可以包含悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶，以及它们的混合物。
适于胃肠外给药(例如静脉内、肌内、腹膜内、皮下和关节内注射和输注)的剂型包括例如溶液、悬浮液、分散体、乳剂等。它们也可以以无菌固体组合物(例如冻干组合物)的形式制造，其在使用前可以立即溶解或悬浮在无菌注射介质中。它们可以包含例如本领域已知的悬浮剂或分散剂。本发明的用于胃肠外注射的药物组合物包含药学上可接受的无菌水溶液或非水溶液、分散体、悬浮液或乳剂以及用于在使用前重建成无菌注射溶液或分散体的无菌粉末。合适的水性和非水性载体、稀释剂、溶剂或赋形剂的例子包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物、植物油(如橄榄油)和可注射的有机酯(如油酸乙酯)。例如，合适的流动性可以通过使用包衣材料如卵磷脂，通过在分散体的情况下保持所需的粒度，以及通过使用表面活性剂等方式进行保持。
本文所述的任何药剂和/或药物组合物可通过控释或缓释方式或通过本领域普通技术人员已知的给药装置给药。实例包括但不限于下述美国专利中记载的方式：3,845,770、3,916,899、3,536,809、3,598,123、4,008,719、5,674,533、5,059,595、5,591,767、5,120,548、5,073,543、5,639,476、5,354,556、和5,733,556，这些专利的全部内容通过引用的方式结合于此。所述剂型可用于提供一种或多种活性成分的控释或缓释，使用例如羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸树脂、其他聚合物基质、凝胶、渗透膜、渗透系统、多层包衣、微粒、脂质体、微球或其组合，以提供不同比例下所需的释放曲线。可以容易的选择合适的控释或缓释制剂与本文所述药物的活性成分一起使用。因此，本发明提供了适于口服给药的单剂量剂型，例如但不限于适于控制释放或持续释放的片剂、胶囊、软胶囊和囊片。
包含本文所述药物和/或药物组合物的制剂可方便的以单位剂型存在，并可通过药学领域已知的任何方法制备。这种方法通常包括将治疗剂与载体相结合的步骤，从而构成一种或多种辅助成分。通常，通过将治疗剂与液体载体和/或细分的固体载体均匀且紧密的结合，然后，如果需要的话，将产品制成所需制剂的剂型(例如，湿式或干式制粒、粉末混合物等，随后使用本领域已知的常规方法压片)。
应当理解的是，本文所述药剂和/或药物组合物的实际剂量可以根据特定药剂、特定剂型和给药方式而变化。本领域技术人员可以考虑许多可能改变肌醇基药物作用的因素(例如，体重、性别、饮食、给药时间、给药途径、排泄率、受试者的状况、药物组合、遗传倾向和反应敏感性)。所述给药可以在最大耐受剂量内连续剂量或以一个或多个离散剂量进行。本领域技术人员可以使用常规剂量给药试验来确定给定条件下的最佳给药速率。
本文所述药剂和/或药物组合物的单个剂量可以以单位剂型(例如片剂或胶囊)给药，所述单位剂型包含例如约0.01mg～约1000mg、约0.01mg～约950mg、约0.01mg～约900mg、约0.01mg～约850mg、约0.01mg～约800mg、约0.01mg～约700mg，约0.01mg～约700mg，约0.01mg～约650mg，约0.01mg～约600mg，约0.01mg～约550mg，约0.01mg～约500mg，约0.01mg～约450mg，约0.01mg～约400mg，约0.01mg～约350mg，约0.01mg～约300mg，约0.01mg～约250mg，约0.01mg～约200mg，约0.01mg～约150mg，约0.01mg～约100mg，约0.1mg～约90mg，约0.1mg～约80mg，约0.1mg～约70mg，约0.1mg～约60mg，约0.1mg～约50mg，约0.1mg～约40mg，约0.1mg～约30mg，约0.1mg～约20mg，约0.1mg～约10mg，每单位剂型约0.1mg～约5mg，约0.1mg～约3mg，或约0.1mg～约1mg。例如，所述单位剂型可以是约0.01mg、约0.02mg、约0.03mg、约0.04mg、约0.05mg、约0.06mg、约0.07mg、约0.08mg、约0.09mg、约0.1mg、约0.2mg、约0.3mg、约0.4mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1mg、约2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg、约100mg、约150mg、约200mg、约250mg、约300mg约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg、约900mg、约950mg或约1000mg，包括其范围内的所有值。
在一些实施方式中，本文所述的药剂和/或药物组合物以每天约0.01mg～约1000mg、每天约0.01mg～约950mg、每天约0.01mg～约900mg、每天约0.01mg～约850mg、每天约0.01mg～约800mg、每天约0.01mg～约750mg的量给药，每天约0.01mg～约700mg，每天约0.01mg～约650mg，每天约0.01mg～约600mg，每天约0.01mg～约550mg，每天约0.01mg～约500mg，每天约0.01mg～约450mg，每天约0.01mg～约400mg，每天约0.01mg～约350mg，每天约0.01mg～约300mg，每日约0.01mg～约250mg，每日约0.01mg～约200mg，每日约0.01mg～约150mg，每日约0.1mg～约100mg，每日约0.1mg～约95mg，每日约0.1mg～约90mg，每日约0.1mg～约85mg，每日约0.1mg～约80mg，每日约0.1mg～约75mg，每日约0.1mg～约70mg，每日约0.1mg～约65mg，每日约0.1mg～约60mg，每日约0.1mg～约55mg，每日约0.1mg～约50mg，每日约0.1mg～约45mg，每日约0.1mg～约40mg，每日约0.1mg～约35mg，每日约0.1mg～约30mg，每日约0.1mg～约25mg，每日约0.1mg～约20mg，每日约0.1mg～约15mg，每日约0.1mg～约10mg，每日约0.1mg～约5mg，每日约0.1mg～约3mg，或每日约0.1mg～约1mg的剂量进行给药。
在多个实施方式中，本文所述的药剂和/或药物组合物以约0.01mg、约0.02mg、约0.03mg、约0.04mg、约0.05mg、约0.06mg、约0.07mg、约0.08mg、约0.09mg、约0.1mg、约0.2mg、约0.3mg、约0.4mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1mg、约2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg、约100mg、约150mg、约200mg、约250mg、约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg、约900mg、约950mg或约1000mg的剂量进行给药，包括其范围内的所有值。
在一些实施方式中，本文所述的药剂和/或药物组合物的合适剂量在受试者体重的约0.01mg/kg～约10mg/kg的范围内，例如，以约0.01mg/kg、约0.02mg/kg、约0.03mg/kg、约0.04mg/kg、约0.05mg/kg、约0.06mg/kg、约0.07mg/kg、约0.08mg/kg、约0.09mg/kg、约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1mg/kg、约1.1mg/kg、约1.2mg/kg、约1.3mg/kg、约1.4mg/kg、约1.5mg/kg、约1.6mg/kg、约1.7mg/kg、约1.8mg/kg、1.9mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg的剂量给药，包括其范围内的所有值。在其他实施方式中，所述肌醇基试剂和/或免疫调节剂和/或附加合适剂量在约0.01mg/kg～约10mg/kg，在约0.01mg/kg～约9mg/kg，在约0.01mg/kg～约8mg/kg，在约0.01mg/kg～约7mg/kg，在0.01mg/kg～约6mg/kg，在约0.05mg/kg～约5mg/kg，在约0.05mg/kg～约4mg/kg，在约0.05mg/kg～约3mg/kg，在约0.05mg/kg～约2mg/kg，在约0.05mg/kg～约1.5mg/kg，或在约0.05mg/kg～约1.5mg/kg体重的范围内。
根据本发明的某些实施方式，本文所述的药剂和/或药物组合物可以例如每天给药一次以上、大约每天一次、大约每隔一天一次、大约每三天一次、大约每周一次、大约每两周一次、大约每月一次、大约每两个月一次、大约每三个月一次、大约每六个月一次或大约每年一次。
试剂盒
本发明还提供了一种能够简化本文所述药剂和/或药物组合物给药的试剂盒。所述试剂盒是材料或组分的集合，包括至少一种本文所述的试剂。所述试剂盒中配置的组件的确切性质取决于其预期用途。在一个实施方式中，所述试剂盒被配置用于治疗人类受试者。
试剂盒可以包含使用说明。使用说明通常包括描述在使用试剂盒的组分以影响期望的结果时所采用的技术的有形表达，例如治疗癌症、糖尿病或肥胖症。任选的，所述试剂盒还包含其他有用的组分，例如稀释剂、缓冲剂、药学上可接受的载体、注射器、导管、涂药器、移液或测量工具、包扎材料或本领域技术人员容易认识到的其他有用的设备。
组装在试剂盒中的材料和组件可以以任何方便和合适的方式从相关从业者商店中购得，以保证其可操作性和实用性。例如，组件可以是室温、冷藏或冷冻温度下的。所述组件通常包含在合适的包装材料中。在多个实施方式中，所述包装材料通过公知的方法构造，优选的提供无菌、无污染的环境。所述包装材料可以具有外部标签，该标签指示试剂盒和/或其组件的内容物和/或用途。
本发明通过以下非限制性实施例进一步进行说明。
实施例
通过ITPP程序和pO2状态变化使肿瘤血管正常化。
在使血管正常化25的条件下，用ITPP法处理荷瘤动物，在正常小鼠和裸鼠的B16F10黑素瘤细胞(图1-a，图1-b，图1-c)以及4T1乳腺癌细胞(图1-d)上观察到肿瘤体积的减小(图1)。研究表明，ITPP对动物和单独处理的细胞都没有毒性。因此，pO2变化对肿瘤免疫反应27,28的影响的假设得到了验证，因为我们已经证明了其对肿瘤微环境25的体液成分的深刻影响。
当ITPP治疗的肿瘤只有对照组的一半大时，选择沿着治疗发展的选定步骤来研究免疫反应。
在C57Bl6和Rj:NMRI-nu裸鼠中注射104 B16F10细胞23天后达到上述目标，而在BALb/c-by小鼠中注射105 4T 1细胞31天后才达到上述目标。治疗在第21天停止。尽管在第23天观察到黑色素瘤细胞50％的肿瘤生长，但在第31天停止治疗后，观察到乳腺癌细胞的减少高达50％。
ITPP疗法对肿瘤微环境继而对NK细胞肿瘤应答的影响
分析免疫细胞浸润的第一种方法是在肿瘤细胞植入后第23天对从动物中提取的肿瘤进行免疫细胞化学标记。抗CD49b标记证实了NK细胞的浸润，抗CD31抗体显示了内皮细胞的浸润(图2-a，图2-b)。NK细胞卡在了未进行治疗的肿瘤的血管中(图2-a)，而在ITPP治疗后NK细胞渗透到肿瘤块中(图2-b)。其在图2-c中得到了证实，其显示了CD49b+NK细胞在由荧光素酶基因转染并由抗荧光素酶抗体揭示的B16F10中的分布。图2-c和图2-d显示了NK细胞与肿瘤病灶的共同定位。
这种对NK细胞募集的ITPP效应可以通过对整个微环境的肿瘤细胞和肿瘤基质细胞进行免疫细胞化学标记来量化，并通过流式细胞术进行评估。图2-e示出了在ITPP治疗的小鼠中，肿瘤中免疫细胞(CD45+)的比例高于对照组小鼠。图2-f示出了肿瘤部位的NK细胞数量增加了一倍。NK细胞在低氧调节诱导的反应中的作用通过在裸鼠中观察到的B16F10-Luc植入和ITPP治疗的反应来证实。在这些免疫缺陷小鼠中，T细胞免疫应答减弱，而NK细胞应答增强29。图2-g示出了这种效果，其显示了与正常B57BI6小鼠相比，在裸鼠中培养的肿瘤中具有的更高比例的CD49b阳性细胞(1.5倍)。就ITPP治疗前后肿瘤中NK细胞的比例而言，这种募集在两种类型的小鼠中得到了同样程度的增强(R＝2.25)。
此外，ITPP治疗后瘤内NK细胞的增加对应于ITPP治疗后通过流式细胞术估计的黑色素瘤荷瘤小鼠中活化的(CD45+CD49b+CD226+)NK细胞数量的增加(图2-h)。
这种效应在带有4T1细胞的小鼠乳腺癌模型中得到证实，其中ITPP治疗诱导了活化的NK细胞的更大量的募集(图2-i)。
ITPP治疗后髓源性抑制细胞和浸润性巨噬细胞表型的肿瘤内演变
肿瘤微环境的特征是通过骨髓动员产生免疫抑制细胞(MDSCs)。这些细胞有助于肿瘤的发展和逃逸。在肿瘤中，骨髓间充质干细胞表达CD11b和Gr-130。ITPP治疗降低了肿瘤中骨髓间充质干细胞的比例(图3-a)。
这伴随着表达M1(CD45+CD11c+CD206-)表型的巨噬细胞数量增加的趋势(图3-b)。
在黑素瘤肿瘤部位(图3，图组c)以及在乳腺癌(图3，图组d)的情况下，通过ITPP的治疗，与肿瘤免疫抑制合作，使得巨噬细胞的M2(CD45+CD11c+CD206+)极化表型的比例降低。
ITPP治疗后浸润在肿瘤中的T细胞群的演变
Th2细胞的比例反映了已知参与肿瘤进展的炎症状态。特征为CD45+CD4+CCR4+的Th2细胞在ITPP治疗后显示了其在肿瘤部位的比例降低(图4-a)。协同肿瘤发展和生长的调节性T细胞对ITPP治疗有明显的反应，因为当用ITPP治疗时，B16F10Luc肿瘤中CD45+CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞的比例非常显著的降低(图4-b)。这种ITPP治疗的Treg细胞数量减少效应(图4，c图)在4T1乳腺癌荷BalbC小鼠中得到了证实。
ITPP治疗调节后，肿瘤微环境中免疫检查点分子的表达
降低免疫抑制细胞群(如骨髓间充质干细胞、巨噬细胞和Tregs)比例的效果促使对关键免疫检查点分子(如PD-1及其配体PD-L1和PD-L2)的表达进行分析。
图5示出了肿瘤中细胞的流式细胞术分析(图5-a和图5-b)以及不同免疫和非免疫细胞群CD45+(图5-c，图5-d)和CD45-(图5e，图5-f)之间的流式细胞术分析。ITPP治疗在整个肿瘤细胞群(图5-a，图5-b)以及分离的CD45-细胞(图5-c，图5-d)上诱导了PD-L1表达的明显减少，以及PD-L2表达的较低程度的减少，最明显的是在免疫CD45+细胞群(图5-e，图5-f)上的减少。如图所示，PD-1配体表达的减少在CD45+细胞中显著减少，但在CD45-细胞上也是如此。这可能归因于对CD31+细胞的强烈作用。内皮细胞比例增加，并表达了连接分子CD31，其在常氧条件下增加(与低氧31相反)，因此是功能血管的标准25。
图6示出了当ITPP用于治疗B16F10Luc黑色素瘤荷瘤小鼠时，CD31+内皮细胞的比例高于未治疗的肿瘤(图6-a)。CD31在常氧条件下比在低氧条件下在内皮细胞上的表达更多，其是一种连接分子，可增强血管并降低其通透性31,32。CD31表达表明了血管的正常化。在CD31+内皮细胞中，PD-L1被证明在ITPP治疗之前强烈表达，并在治疗的肿瘤CD31+内皮细胞中显着减少(图6-b)。尽管表达程度低于PD-L1，但是第二个PD-1配体PD-L2也进行了表达，并通过ITPP治疗导致的低氧缓解/血管正常化而被减少(图6-c)。
当PD-1配体减少时，ITPP治疗可能伴随着表达PD-1的免疫活性细胞的增加。如上所述，CD45+细胞比例本身通过ITPP治疗而增加(图2-2)。PD-1配体的减少，特别是在内皮细胞上的减少，表明其对NK细胞进入肿瘤的机制的可能性控制。图6-d和图6-e示出了经ITPP治疗的肿瘤中CD45+细胞数量的增加。如图2-f～图2-i所示，在治疗后，肿瘤内NK细胞的比例增加。这种效应更具体的涉及活化的NK细胞(CD49b+CD226+)33，并且NK细胞能够侵入肿瘤，同时它们停留在未治疗的肿瘤的血管中(图2-a～图2-d)。事实上，未经处理的内皮细胞在低氧时表达PD-L1和PD-L2，如在ITPP治疗时得到证实(图6-b，图6-c)的那样，这种表达因pO2的增加而减少。此外，由于Treg细胞的比例显著降低，因此其不能解释CD45+PD-1+细胞的增加，这种增加在黑色素瘤(图6-d)和乳腺癌(图6-e)的整个肿瘤群体中都有报道。
通过CD45+细胞中CTLA-4的表达来评估ITPP治疗对其他免疫检查点表达的意义。当发现肿瘤B16F10黑色素瘤细胞上CD47表达强度降低时，没有观察到显著变化(图6-f)。这种干细胞标记物是肿瘤保护分子，也是细胞毒性免疫细胞，其促进逃避吞噬作用并维持癌症干细胞。CD47的表达受HIF-1调节34，证实了ITPP治疗的血管正常化效应的作用，并证实了ITPP治疗导致的肿瘤中的干细胞减少效应，如前所述25。
肿瘤微环境的调节：趋化因子受体表达对通过ITPP的血管正常化的反应。
肿瘤部位中免疫和非免疫基质细胞介导的细胞间相互作用是通过趋化因子及其受体确保的基本相互应答(crosstalk)而发生的，该相互作用主要控制了CXCL12及其受体CXCR4和CCL21及其受体CCR7的转移过程。
图7示出了ITPP治疗对肿瘤细胞群上的趋化因子受体表达以及对肿瘤部位中的免疫细胞和内皮细胞的深层影响。
在肿瘤细胞上观察到ITPP治疗对CCR5表达的自由基效应(图7-a)，其证实了ITPP治疗对CD45+群体和M1巨噬细胞复极效应的反效应35。
CCR7/CCL21轴负责黑色素瘤细胞到淋巴结的转移36,37,38，并通过干细胞促进肿瘤的发生39。在肿瘤细胞上观察到了CCR7表达的总体降低(图7-a)，并且在另外两个群体中没有检测到该受体的显著表达(图7-c，图7-d)。
在ITPP治疗后，表达CCR10(CCL27的受体，皮肤T细胞吸引趋化因子)的B16F10细胞减少，而表达它的免疫细胞(R＝10)(图7-c)以及内皮细胞富集群体(R＝2)(图7-d)增加；这决定了免疫活性细胞的募集40。
参与转移过程的表达CXCL12受体(CXCR4)的肿瘤细胞显著减少41(图7-a)，这反映了肿瘤细胞在低氧状态下的修复42，并且这种表达在CD45+(图7-c)或内皮富集细胞群(图-d)中不受影响。
此外，在ITPP治疗后，内皮富集细胞群选择性的显示出fractalkine受体CX3CR1的诱导表达(图7-d)，这对应于复氧效应和血管修复43。
比较了趋化因子和趋化因子受体的肿瘤细胞mRNA的表达(图7，b图)，其表明低氧条件和体液微环境(主要是某些趋化因子如CCL17)之间有密切的联系，其活性显示于癌症及其对低氧依赖性的促进作用44。主要变化出现在CCL12和CCL21b mRNA的诱导中。这证实了低氧在黑色素瘤细胞转移过程中的作用。
材料和方法
小鼠和肿瘤模型
C57BL6小鼠、BALB/c小鼠和裸鼠来自扬维尔实验室(Janvier Laboratory，法国)。动物护理和实验程序，按照政府和机构的指导方针和规定执行。
C57BL6和裸鼠的小鼠黑素瘤模型
通过向100μl基质胶(BD Biosciences)中注射105个细胞的栓塞，将鼠B16F10细胞植入C57BL6或Rj:NMRI-nu裸鼠腿部皮下。
小鼠和肿瘤模型
C57BL6小鼠、BALB/c小鼠和裸鼠来自扬维尔实验室(法国)。动物护理和实验程序是根据政府和机构的指导方针和规定进行的，并得到了伦理委员会的批准。
C57BL6和裸鼠的小鼠黑素瘤模型
如我们之前所述，通过向100μl基质胶(BD Biosciences)中注射105个细胞的栓塞，将鼠B16F10细胞植入C57BL6或Rj:NMRI-nu裸鼠腿部皮下。
小鼠癌症模型：
将4T1小鼠乳腺癌(104细胞作为基质凝胶中的球形栓塞)细胞注射到BALBc/by小鼠的乳腺脂肪垫中。
ITPP治疗
ITPP通过腹膜内(1.5g/kg:生理盐水)进行注射，每周2次，共计3周。从第7天开始，在肿瘤接种后第8天(第0天)重复。在第15天和第16天、第21天和第22天进行下列系列治疗。在指定时间提取肿瘤并称重。
单细胞悬浮液的制备
肿瘤样本立即转移到冰上的PBS中。将活检组织切割成小块，用胶原酶/中性蛋白酶(Gibco)解离后通过细胞过滤器过滤。通过红细胞裂解缓冲液(eBiosciences)将样品中的红细胞去除。
在特定实验中，通过磁分离从CD45+和/或CD31+细胞中去除肿瘤(Easy Sepmagnet，StemCell Technologies Inc)。
流式细胞术的细胞染色
单细胞悬液在4℃下用mAbs染色1h。通过使用FASLSR(Becton Dickinson)通过一到四色流式细胞术进行采集。在散射曲线图中排除死亡细胞。使用CellQuest软件(BectonDickinson)获得至少100,000个事件的数据。当需要比较荧光强度时，数据用点图或直方图表示。
下列直接结合的大鼠抗小鼠单克隆抗体用于流式细胞术染色：CD45-PerCP、CD11b-APC、CCR4-PE、CCR5-PE、CCR7-PE、CCR10-PE和CXCR4-PE来自BD Biosciences。CD49b-APC来自Biolegend。CD226-PE、CD4-FITC、CD25-APC、CD8a-FITC、PD-1-PE、CTLA-4-PE、PDL1-PE-Cy7、PDL2-FITC和CD47-APC来自eBiosciences。CD11c-FITC和GR1-FITC来自Milteny。CD206来自Santa Cruz。我们使用抗小鼠Foxp3染色装置(eBioscience)进行Foxp3染色。
免疫组织化学
将肿瘤组织包埋在组织冷冻培养基中(Tissue-Tek；Sakura)并在液氮中速冻。肿瘤冷冻切片用小鼠抗CD31(大鼠单克隆抗体IgG2a；eBiosciences)、抗CD49b(大鼠IgM；BDPharmingen)或抗萤火虫荧光素酶(Rabbit IgG；Abcam)在添加四甲基异硫氰酸罗丹明或异硫氰酸荧光素二级抗体之前进行固定和染色。细胞核用双苯酰亚胺H 33258(Sigma-Aldrich)染色。
定量PCR
根据制造商的说明，使用RNeasy Plus微型试剂盒(Qiagen)提取细胞mRNA。提取的mRNA在无核糖核酸酶的水中洗脱。在储存于-80℃之前，在ND-1000分光光度计(NanoDropTechnologies，Wilmington，DE)上测量吸收光谱。使用“用于逆转录-定量PCR的最大第一链cDNA合成试剂盒”(Fermentas)将核糖核酸反转录为cDNA。每个样品使用3μg的RNA。获得的cDNA在qPCR反应前储存在-20℃条件下。实时PCR在光循环仪480(Roche)上进行，使用白色96孔光学微量滴定板(Roche)中的“SYBRPremix Ex Taq(Perfect Real Time)”(Takara)和“定量引物分析”(Qiagen)。在最终体积为20μL的孔中使用2μL的cDNA。所有反应一式三份完成，并以平均值进行报告。作为参考，测试了7个看家基因。计算平均值和标准差，选择标准差最小的基因作为参考。对于每个目标基因，计算平均值和标准偏差，然后用参考基因的相应值(PPIA)归一化，以获得ΔCp。
虽然已经结合本发明的具体实施例对本发明进行了描述，但是应当理解的是，本发明能够进一步修改，并且本申请旨在覆盖通常在本发明之后的本发明的任何变式、应用或修改。本发明的原理以及包括在本发明所属技术领域内的已知或惯用实践之内的，与本公开内容的这种偏离，并且可以应用于上文阐述的本质特征，并在所附权利要求的范围内。
本领域技术人员将仅使用常规实验就将认识到或能够确定本文具体描述的具体实施方案的许多等同方案。这样的等同方案旨在包含在所附权利要求的范围内。
本文引用的所有专利和出版物均通过引用以其整体并入本文。本发明中提及的出版物仅为本申请的提交日期之前公开的出版物。本文中的任何内容都不应被解释为承认本发明无权凭借先前的发明先于这种公开。
如本文中所使用的，所有标题仅用于组织作用，并无意以任何方式限制本公开。任何单独部分的内容都可以同样适用于所有部分。
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Claims (41)

1.一种治疗癌症的方法，包括向有此需要的受试者施用有效剂量的肌醇基试剂和有效剂量的一种或多种免疫调节剂，其中所述施用是同时或依次进行的。
2.一种治疗癌症的方法，包括向有此需要的受试者施用有效剂量的肌醇基试剂，其中所述受试者正在接受一种或多种免疫调节剂的治疗。
3.根据权利要求1所述的方法，其中肌醇基试剂是肌醇三焦磷酸(ITPP)。
4.根据权利要求2所述的方法，其中肌醇基试剂是肌醇三焦磷酸(ITPP)。
5.根据权利要求3所述的方法，其中所述免疫调节剂是免疫检查点抑制剂(CPI)和/或免疫检查点激活剂(CPA)。
6.根据权利要求4所述的方法，其中所述免疫调节剂是免疫检查点抑制剂(CPI)和/或免疫检查点激活剂(CPA)。
7.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述免疫调节剂是靶向T细胞共刺激或共抑制分子、NK细胞共刺激或共抑制分子、B7家族成员、TNF受体或TNF配体超家族成员、TIM家族成员和半乳糖凝集素家族成员中的一种或多种的试剂。
8.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述免疫调节剂是靶向PD-1、PD-L1、PD-L2、CD137(4-1BB)、CD137配体(4-1BB配体)、CTLA-4、OX-40、OX-40配体、HVEM、GITR、GITR配体、CD27、CD28、CD30、CD30配体、CD40、CD40配体、LIGHT(CD258)、CD70、B7-1、B7-2、ICOS、ICOS配体、TIM-1、TIM-3、TIM-4、半乳糖凝集素-1、半乳糖凝集素-9、CEACAM-1、CEACAM-4、CEACAM-5、LAG-3、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6、HHLA2、HMGB1、BTLA、CRTAM、CD200、CCR4和CXCR4中的一种或多种的试剂。
9.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述免疫调节剂阻断、降低和/或抑制PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB、4-1BB配体、CTLA-4、OX-40、OX-40配体、HVEM、GITR、GITR配体、CD27、CD28、CD30、CD30配体、CD40、CD40配体、LIGHT(CD258)、CD70、B7-1、B7-2、ICOS、ICOS配体、TIM-1、TIM-3、TIM-4、半乳糖凝集素-1、半乳糖凝集素-9、CEACAM-1、CEACAM-4、CEACAM-5、LAG-3、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6、HHLA2、HMGB1、BTLA、CRTAM、CD200、CCR4和CXCR4中的一种或多种的结合或其结合配偶体。
10.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述免疫调节剂阻断、降低和/或抑制PD-1、PD-L1和/或PD-L2的活性，和/或PD-1与PD-L1和/或PD-L2的结合。
11.根据权利要求5所述的方法，其中所述免疫调节剂阻断、降低和/或抑制PD-1、PD-L1和/或PD-L2的活性，和/或PD-1与PD-L1和/或PD-L2的结合。
12.根据权利要求6所述的方法，其中所述免疫调节剂阻断、降低和/或抑制PD-1、PD-L1和/或PD-L2的活性，和/或PD-1与PD-L1和/或PD-L2的结合。
13.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述免疫调节剂增加、刺激和/或促进CD137的活性，和/或CD137(4-1BB)与CD137配体(4-1BB配体)和/或TRAF2的结合。
14.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述免疫调节剂阻断、降低和/或抑制CTLA-4、AP2M1、CD80、CD86、SHP-2和/或PPP2R5A的活性，和/或CTLA-4与AP2M1、CD80、CD86、SHP-2和PPP2R5A中的一种或多种的结合。
15.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述免疫调节剂为纳武利尤单抗(ONO-4538/BMS-936558，MDX1106，OPDIVO，BRISTOL MYERS SQUIBB)，派姆单抗(KEYTRUDA,MERCK)，联合利妥昔单抗(CT-011,CURE TECH),MK-3475(MERCK),BMS936559(BRISTOLMYERSSQUIBB),MPDL328OA(ROCHE)，乌瑞芦单抗(BMS-663513和抗-4-1BB抗体)，易普利姆玛(YERVOY,BRISTOL MYERS SQUIBB)，阿特珠单抗(TECENTRIQ)，阿维单抗(BAVENCIO)中的一种或多种。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述免疫调节剂是恩莫单抗、纳武利尤单抗、西米普利单抗、阿特珠单抗、阿维单抗和度伐单抗。
17.根据权利要求11所述的方法，其中所述免疫调节剂是恩莫单抗、纳武利尤单抗、西米普利单抗、阿特珠单抗、阿维单抗和度伐单抗。
18.根据权利要求12所述的方法，其中所述免疫调节剂是恩莫单抗、纳武利尤单抗、西米普利单抗、阿特珠单抗、阿维单抗、和度伐单抗、。
19.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述癌症是以下中的一种或多种：基底细胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脑癌和中枢神经系统癌、乳腺癌、腹膜癌、宫颈癌、绒毛膜癌、结肠癌和直肠癌、结缔组织癌、消化系统癌症、子宫内膜癌、食道癌、眼癌、头颈癌、胃癌(包括胃肠癌)、胶质母细胞瘤、原发性肝癌、肝细胞瘤、上皮内肿瘤、肾癌或肾癌、喉癌、白血病、肝癌、肺癌(例如，小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞癌)、黑色素瘤、骨髓瘤、神经母细胞瘤、口腔癌(唇、舌、口和咽)、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、直肠癌、呼吸系统癌症、唾液腺癌、肉瘤、皮肤癌、鳞状细胞癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌或子宫内膜癌、泌尿系统癌症、外阴癌、淋巴瘤包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤，以及B细胞淋巴瘤(包括低度/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞白血病、中级/滤泡性NHL中级弥漫性非霍奇金淋巴瘤、高级免疫母细胞性非霍奇金淋巴瘤、高级淋巴母细胞性非霍奇金淋巴瘤、高级小非裂解细胞非霍奇金淋巴瘤、大型疾病NHL、套细胞淋巴瘤、艾滋病相关淋巴瘤、和瓦氏巨球蛋白血症、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、慢性成髓细胞白血病、以及其他癌症和肉瘤、和移植后淋巴增生性疾病(PTLD)，以及与瘢痣病、水肿(例如与脑瘤相关的水肿)和Meigs综合征相关的异常血管增生。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述癌症是胰腺癌。
21.根据权利要求19所述的方法，其中所述癌症是肝癌。
22.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述受试者用一种或多种免疫调节剂难以治愈。
23.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述免疫调节剂的有效剂量小于用于相同癌症的单一疗法和/或与肌醇基试剂之外的试剂的联合疗法的有效剂量。
24.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述肌醇基试剂的有效剂量小于用于相同癌症的单一疗法和/或与除免疫调节剂之外的试剂的联合疗法的有效剂量。
25.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括施用附加治疗剂。
26.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述给药是依次进行的。
27.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述给药是同时进行的。
28.一种药物组合物，包含有效剂量的肌醇基试剂和有效剂量的一种或多种免疫调节剂。
29.根据权利要求28所述的药物组合物，其中所述肌醇基试剂是肌醇三焦磷酸(ITPP)。
30.根据权利要求29所述的药物组合物，其中所述免疫调节剂是免疫检查点抑制剂(CPI)和/或免疫检查点激活剂(CPA)。
31.根据权利要求28～30中任一项所述的药物组合物，其中所述免疫调节剂是靶向T细胞共刺激或共抑制分子、NK细胞共刺激或共抑制分子、B7家族成员、TNF受体或TNF配体超家族成员、TIM家族成员和半乳糖凝集素家族成员中的一种或多种的试剂。
32.根据权利要求28～31中任一项所述的药物组合物，其中所述免疫调节剂是靶向PD-1、PD-L1、PD-L2、CD137(4-1BB)、CD137配体(4-1BB配体)、CTLA-4、OX-40、OX-40配体、HVEM、GITR、GITR配体、CD27、CD28、CD30、CD30配体、CD40、CD40配体、LIGHT(CD258)、CD70、B7-1、B7-2、ICOS、ICOS配体、TIM-1、TIM-3、TIM-4、半乳糖凝集素-1、半乳糖凝集素-9、CEACAM-1、CEACAM-4、CEACAM-5、LAG-3、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6、HHLA2、HMGB1、BTLA、CRTAM、CD200、CCR4和CXCR4中的一种或多种的试剂。
33.根据权利要求28～32中任一项所述的药物组合物，其中所述免疫调节剂阻断、降低和/或抑制PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB、4-1BB配体、CTLA-4、OX-40、OX-40配体、HVEM、GITR、GITR配体、CD27、CD28、CD30、CD30配体、CD40、CD40配体、LIGHT(CD258)、CD70、B7-1、B7-2、ICOS、ICOS配体、TIM-1、TIM-3、TIM-4、半乳糖凝集素-1、半乳糖凝集素-9、CEACAM-1、CEACAM-4、CEACAM-5、LAG-3、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6、HHLA2、HMGB1、BTLA、CRTAM、CD200、CCR4和CXCR4中的一种或多种的结合或其结合配偶体。
34.根据权利要求28～33中任一项所述的药物组合物，其中所述免疫调节剂阻断、降低和/或抑制PD-1、PD-L1和/或PD-L2的活性，和/或PD-1与PD-L1和/或PD-L2的结合。
35.根据权利要求28～34中任一项所述的药物组合物，其中所述免疫调节剂增加、刺激和/或促进CD137(4-1BB)，CD137配体(4-1BB配体)，和/或TRAF2；和/或CD137(4-1BB)和CD137配体(4-1BB配体)和/或TRAF2的结合。
36.根据权利要求28～35中任一项所述的药物组合物，其中所述免疫调节剂阻断、降低和/或抑制CTLA-4、AP2M1、CD80、CD86、SHP-2和/或PPP2R5A的活性，和/或CTLA-4与AP2M1、CD80、CD86、SHP-2和PPP2R5A中的一种或多种的结合。
37.根据权利要求28～36中任一项所述的药物组合物，所述免疫调节剂为纳武利尤单抗(ONO-4538/BMS-936558，MDX1106，OPDIVO，BRISTOL MYERS SQUIBB)，派姆单抗(KEYTRUDA,MERCK)，联合利妥昔单抗(CT-011,CURE TECH),MK-3475(MERCK),BMS936559(BRISTOLMYERS SQUIBB),MPDL328OA(ROCHE)，乌瑞芦单抗(BMS-663513和抗-4-1BB抗体)，易普利姆玛(YERVOY,BRISTOLMYERS SQUIBB)中的一种或多种。
38.根据权利要求28～37中任一项所述的药物组合物，其中所述免疫调节剂的有效剂量小于用于相同癌症的单一疗法和/或与肌醇基试剂之外的试剂的联合疗法的有效剂量。
39.根据权利要求28～38中任一项所述的药物组合物，其中所述肌醇基试剂的有效剂量小于用于相同癌症的单一疗法和/或与除免疫调节剂之外的试剂的联合疗法的有效剂量。
40.肌醇三焦磷酸(ITPP)在癌症治疗中的应用，其中所述肌醇三焦磷酸与一种或多种免疫调节剂组合使用。
41.肌醇三焦磷酸(ITPP)在用于制备治疗癌症的药物中的用途，其中所述肌醇三焦磷酸与一种或多种免疫调节剂组合使用。
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