CN112067827A - 抗体稀释液和包括该抗体稀释液的血型检测卡 - Google Patents
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Abstract
本文提供了用于血型检测卡的抗体稀释液，其包括：氯化钠5‑15g/L、氯化钾0.1‑1g/L、磷酸氢二钠0.5‑1.5g/L、磷酸二氢钾0.1‑1g/L、牛血清白蛋白10‑30g/L、蔗糖5‑15g/L、β‑环糊精0.1‑1g/L以及叠氮钠0.1‑1g/L。利用该抗体稀释液制备的血型检测卡可在常温保存长达18个月，有益于血型检测卡的储存和运输。
Description
技术领域
本申请涉及血型检测卡，尤其是可常温保存的ABO血型正定型和Rh(D)型血型检测卡。
背景技术
人类红细胞膜上存在很多血型抗原系统，其中以ABO血型抗原系统最重要，Rh血型抗原系统次之。正确鉴定ABO血型是安全输血的保证，如果ABO血型不相容，则输血时很可能发生严重的即发性溶血性输血反应症状。ABO血型最常见的表型有四种：A、B、AB和 O型。ABO血型定型试验包括正定型和反定型，本文提供的检测卡可用于ABO血型的正定型检测。
Rh血型抗原系统中D抗原是最重要的抗原。人红细胞膜上存在D抗原，即为Rh阳性，不存在D抗原，即为Rh阴性。在输血中如果向Rh阴性患者输入含有相应抗原(如D抗原)的血液后，会产生针对该抗原的抗体，再次输血时引起严重的免疫性溶血性输血反应。对于孕妇来说，由于IgG性质的Rh系统抗体通过胎盘能力强，能够破坏胎儿的带有对应抗原的红细胞，引发严重的新生儿溶血病。因此，进行准确的Rh分型对于减少免疫性溶血性输血反应，对新生儿溶血病进行诊断、预防和治疗具有重要的临床意义。
目前国内外已有一些厂家生产人ABO血型正定型和Rh(D)型血型检测卡，一般保存条件是2-8℃保存12个月，但是由于运输、储存都要保持2-8℃，因此在具体使用过程中仍有各种不便。
发明内容
一方面，本文提供了用于血型检测卡的抗体稀释液，其包括：氯化钠5-15g/L、氯化钾0.1-1g/L、磷酸氢二钠0.5-1.5g/L、磷酸二氢钾0.1-1g/L、牛血清白蛋白10-30g/L、蔗糖5-15g/L、β-环糊精0.1-1g/L以及叠氮钠0.1-1g/L。
在一些具体实施方案中，所述抗体稀释液包括：
氯化钠5g/L、氯化钾0.1g/L、磷酸氢二钠0.5g/L、磷酸二氢钾0.1g/L、牛血清白蛋白10g/L、蔗糖5g/L、β-环糊精0.1g/L以及叠氮钠0.1g/L；
氯化钠8.2g/L、氯化钾0.22g/L、磷酸氢二钠0.86g/L、磷酸二氢钾0.24g/L、牛血清白蛋白15g/L、蔗糖8g/L、β-环糊精0.2g/L以及叠氮钠0.2g/L；
氯化钠10.1g/L、氯化钾0.54g/L、磷酸氢二钠0.98g/L、磷酸二氢钾0.52g/L、牛血清白蛋白20g/L、蔗糖10g/L、β-环糊精0.5g/L以及叠氮钠0.5g/L；
氯化钠12.2g/L、氯化钾0.87g/L、磷酸氢二钠1.25g/L、磷酸二氢钾0.88g/L、牛血清白蛋白25g/L、蔗糖12g/L、β-环糊精0.8g/L以及叠氮钠0.8g/L；或者
氯化钠15g/L、氯化钾1g/L、磷酸氢二钠1.5g/L、磷酸二氢钾1g/L、牛血清白蛋白30g/L、蔗糖15g/L、β-环糊精1g/L以及叠氮钠1g/L。
在一些实施方案中，所述抗体稀释液的pH值为7.2-7.4。
另一方面，本文提供了使用上述抗体稀释液制备的抗体工作液。
另一方面，本文提供了血型检测卡，其包括上述抗体稀释液和/或上述抗体工作液。
在一些实施方案中，所述血型检测卡为ABO血型正定型和Rh(D)型血型检测卡。
在一些实施方案中，所述血型检测卡包括至少3个微柱，分别装有针对A抗原的抗体工作液、针对B抗原的抗体工作液和针对D抗原的抗体工作液。
在一些实施方案中，所述血型检测卡包括6个微柱，其中3个微柱分别装有针对A抗原的抗体工作液、针对B抗原的抗体工作液和针对D抗原的抗体工作液，另3个微柱装有上述抗体稀释液作为对照。
在一些实施方案中，所述微柱中填充有玻璃微珠。
在一些实施方案中，所述血型检测卡自身或其包装盒上注明有常温保存字样。
本文提供的抗体稀释液适用于多种血型相关抗体的稀释或保存，简化了血型检测卡的制备过程。本文提供的玻璃微珠血型检测卡可常温保存，保存时间可长达18个月，有益于它们的储存和运输。
附图说明
图1显示了血型检测结果的判读标准。
具体实施方式
除非另有说明，本文使用的所有技术和科学术语具有本领域普通技术人员所通常理解的含义。
本文中“抗体稀释液”指用于抗体工作液的配制的溶液，即用来对血型相关抗体(如抗A抗体、抗B抗体和抗D抗体)浓缩液进行稀释以便用于血型检测卡的溶液，也可称为“抗体保存液”。处于抗体稀释液中的抗体，可保持其对相应抗原的结合活性。
本文中“抗体工作液”指含有适当浓度抗体的溶液，当其处于血型检测卡微柱中时能够与带有相应抗原的血细胞发生凝集反应。
当提及血型检测卡时，所用的“微柱”指检测卡上设置的大体为柱形的凹槽，为进行血型检测所用试剂提供容纳空间。这些微柱可以与检测卡一体成型生成。一个血型检测卡上通常可设置有多个微柱，例如4个，6个，或者更多个微柱。
本文中所用的“常温”指普通实验室温度，例如约20-25℃，22-25℃等。
“常温保存字样”指“常温保存”或类似的表达用语，例如，室温保存，储存温度不高于25℃，保存温度18-20℃、18-25℃或20-25℃等等，用来标示血型检测卡没有必要在低温(例如2-8℃)保存。
本发明的一些实施方案至少部分地基于如下意外发现：采用含有某些成分的抗体稀释液时，能够使得血型卡在常温下长期(18个月)保存。
在一些实施方案中，该抗体稀释液包括氯化钠5-15g/L、氯化钾0.1-1g/L、磷酸氢二钠0.5-1.5g/L、磷酸二氢钾0.1-1g/L、牛血清白蛋白10-30g/L、蔗糖5-15g/L、β-环糊精0.1-1g/L以及叠氮钠0.1-1g/L。优选地，该抗体稀释液的pH值为7.2-7.4。
采用该抗体稀释液稀释针对各种血型抗原的抗体，以获得抗体工作液。将抗体工作液和玻璃微珠加入血型卡的微柱中，制备血型检测卡。
本文提供的玻璃微珠血型检测卡，利用分子筛技术、离心技术和特异性免疫反应技术原理，把血型血清学技术与玻璃微珠分子筛技术有机结合起来，可灵敏地检测出可能存在的微弱血型抗原抗体反应。
以下通过具体实施例来进一步阐述本发明。
实施例1 抗体稀释液和抗体工作液的配制
分别配制5种抗体稀释液，编号分别为1#至5#，它们包括的组分以及各组分浓度如下(调节pH值至7.2-7.4)：
1# ：氯化钠5g/L、氯化钾0.1g/L、磷酸氢二钠0.5g/L、磷酸二氢钾0.1g/L、牛血清白蛋白10g/L、蔗糖5g/L、β-环糊精0.1g/L、叠氮钠0.1g/L；
2# ：氯化钠8.2g/L、氯化钾0.22g/L、磷酸氢二钠0.86g/L、磷酸二氢钾0.24g/L、牛血清白蛋白15g/L、蔗糖8g/L、β-环糊精0.2g/L、叠氮钠0.2g/L；
3#：氯化钠10.1g/L、氯化钾0.54g/L、磷酸氢二钠0.98g/L、磷酸二氢钾0.52g/L、牛血清白蛋白20g/L、蔗糖10g/L、β-环糊精0.5g/L、叠氮钠0.5g/L；
4#：氯化钠12.2g/L、氯化钾0.87g/L、磷酸氢二钠1.25g/L、磷酸二氢钾0.88g/L、牛血清白蛋白25g/L、蔗糖12g/L、β-环糊精0.8g/L、叠氮钠0.8g/L；
5#：氯化钠15g/L、氯化钾1g/L、磷酸氢二钠1.5g/L、磷酸二氢钾1g/L、牛血清白蛋白30g/L、蔗糖15g/L、β-环糊精1g/L、叠氮钠1g/L。
各抗体稀释液同时在血型卡中作为无抗体的对照试剂使用。
制备各抗体工作液：
取抗A单克隆抗体浓缩液(抗-A鼠单克隆(IgM)抗体(克隆BIRMA-1)，来源于MerckMillipore Corporation，货号JH-1L-BK)，分别与各抗体稀释液混合，使得到的抗A单克隆抗体工作液(以下简称抗A工作液)的效价 ≥ 128；
取抗B单克隆抗体浓缩液(抗-B鼠单克隆(IgM)抗体(克隆LB-2)，来源于MerckMillipore Corporation，货号JM-1L-BK)，分别与各抗体稀释液混合，使得到的抗B单克隆抗体工作液(以下简称抗B工作液)的效价 ≥ 128；
取抗D单克隆抗体浓缩液(抗-Rh(D)人单克隆(IgM)抗体(克隆RUM-1)，来源于MerckMillipore Corporation，货号JV-1L-BK)，分别与各抗体稀释液混合，使得到的抗D单克隆抗体工作液(以下简称抗D工作液)的效价 ≥ 64。
实施例2 血型卡灌装
取具有6个微柱的空血型检测卡(杭州佳诚模具制造有限公司)，按毎微柱23uL，向第1、2、3微柱分别装入以实施例1的1#抗体稀释液制备的抗A工作液、抗B工作液和抗D工作液，第4、5、6微柱均装入实施例1的1#抗体稀释液作为对照试剂。接着，向每个微柱内灌玻璃微珠(无锡迈驰生物医药科技有限公司，粒径70-90um)，使固液混合相的总高度在8-10mm，且液相高于固相不低于1mm，最后用铝箔进行封口。完成以上步骤即形成可对ABO血型和Rh(D)血型进行检测的ABO血型正定型和Rh(D)型血型检测卡(以下简称“检测卡”或“血型检测卡”)。
类似地，制备包括实施例1的2# - 5#抗体稀释液的玻璃微珠血型检测卡。
制备的检测卡在实验室温度18-25℃下保存。
实施例3 血型检测卡效期对比测试
用实施例2制备的血型检测卡分别检测A型、B型、RhD型血液样本(每次检测时所用样本均来自天津市血液中心)，每3月检测一次，每次检测时与现制备的检测卡(制备方法同实施例2中的描述)进行对照，观察阳性凝集强度是否有变化。
检测方法：
1. 使用前将检测卡在卡式离心机中进行200g离心1min，其主要目的是为了将挥发到铝箔上的液体离心下来，从而能更准确的检测样本。
2. 将A型、B型、RhD型血液样本以900-1000g离心力离心5min，去除上清液，下层即为浓度约80%的浓缩压积红细胞，A型、B型、RhD型样本的红细胞悬液参考下表用生理盐水进行配制。
表1 红细胞悬液配制
3. 小心撕去检测卡上的封口铝箔，将10 uL A型样本的红细胞悬液加入到第1、4微柱中，将10 uL B型样本的红细胞悬液加入到第2、5微柱中，将10 uL D型样本的红细胞悬液加入到第3、6微柱中。
4. 立即用卡式离心机离心5min (采用两相离心，第一相约为55g×2分钟，第二相约为200g×3分钟)。
5. 参照图1中显示的判读标准判读结果，做好记录，并与现制备的检测卡进行对比。
检测结果显示在表2中。
表2 检测卡保存期测试结果
上述检测结果可简要汇总在如下表3中。
表3 结果汇总
从以上结果来看，采用1#-5#抗体稀释液制备的血型检测卡均可常温保存18个月，检测结果在18个月时依然正常，超过18个月，阳性结果有变弱趋势，到27个月，阳性检测不出来，结果均呈阴性，这说明本发明提供的玻璃微珠血型检测卡在常温保存效期可长至18个月。这种常温保存期已经可以充分满足检测卡的生产、销售、运输以及实验室保存的需要。
本文提供的抗体稀释液适用于玻璃微珠血型检测卡，但同时可预期的是，这种抗体稀释液也可用于凝胶型(例如葡聚糖凝胶)血型检测卡。另外，也可预期的是，在更低温度如2-8℃下保存本文提供的检测卡也是可行的，并且保存时间可进一步延长。
以上所述的仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
Claims (9)
1.用于血型检测卡的抗体稀释液，包括：氯化钠5-15g/L、氯化钾0.1-1g/L、磷酸氢二钠0.5-1.5g/L、磷酸二氢钾0.1-1g/L、牛血清白蛋白10-30g/L、蔗糖5-15g/L、β-环糊精0.1-1g/L以及叠氮钠0.1-1g/L。
2.如权利要求1所述的抗体稀释液，包括：
氯化钠5g/L、氯化钾0.1g/L、磷酸氢二钠0.5g/L、磷酸二氢钾0.1g/L、牛血清白蛋白10g/L、蔗糖5g/L、β-环糊精0.1g/L以及叠氮钠0.1g/L；
氯化钠8.2g/L、氯化钾0.22g/L、磷酸氢二钠0.86g/L、磷酸二氢钾0.24g/L、牛血清白蛋白15g/L、蔗糖8g/L、β-环糊精0.2g/L以及叠氮钠0.2g/L；
氯化钠10.1g/L、氯化钾0.54g/L、磷酸氢二钠0.98g/L、磷酸二氢钾0.52g/L、牛血清白蛋白20g/L、蔗糖10g/L、β-环糊精0.5g/L以及叠氮钠0.5g/L；
氯化钠12.2g/L、氯化钾0.87g/L、磷酸氢二钠1.25g/L、磷酸二氢钾0.88g/L、牛血清白蛋白25g/L、蔗糖12g/L、β-环糊精0.8g/L以及叠氮钠0.8g/L；或者
氯化钠15g/L、氯化钾1g/L、磷酸氢二钠1.5g/L、磷酸二氢钾1g/L、牛血清白蛋白30g/L、蔗糖15g/L、β-环糊精1g/L以及叠氮钠1g/L。
3.如权利要求1或2所述的抗体稀释液，其pH值为7.2-7.4。
4.采用权利要求1-3任一项所述的抗体稀释液制备的抗体工作液。
5.血型检测卡，包括权利要求1-3任一项所述的抗体稀释液和/或权利要求4所述的抗体工作液。
6.如权利要求5所述的血型检测卡，其为ABO血型正定型和Rh(D)型血型检测卡。
7.如权利要求6所述的血型检测卡，其包括至少3个微柱，分别装有针对A抗原的抗体工作液、针对B抗原的抗体工作液和针对D抗原的抗体工作液。
8.如权利要求7所述的血型检测卡，其包括6个微柱，其中3个微柱分别装有针对A抗原的抗体工作液、针对B抗原的抗体工作液和针对D抗原的抗体工作液，另3个微柱装有所述抗体稀释液作为对照。
9.如权利要求7或8所述的血型检测卡，其中所述微柱中填充有玻璃微珠。
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