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CN111836879B - 番茄病原性真菌的检测装置和使用该装置的检测方法 - Google Patents

番茄病原性真菌的检测装置和使用该装置的检测方法 Download PDF

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CN111836879B CN201980018208.7A CN201980018208A CN111836879B CN 111836879 B CN111836879 B CN 111836879B CN 201980018208 A CN201980018208 A CN 201980018208A CN 111836879 B CN111836879 B CN 111836879B
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Abstract

本公开提供简易且确切的番茄病原性真菌的选择性检测装置和检测方法。本公开的番茄病原性真菌的检测装置的特征在于，具有人工细胞壁、在所述人工细胞壁的上部设置的试验试样液投放部、和在所述人工细胞壁的下部设置的培养液存积部，在所述试验试样液投放部，试验试样液包含50～70mM的柠檬酸盐缓冲液，并且所述试验试样液的pH为5～5.5。

Description

番茄病原性真菌的检测装置和使用该装置的检测方法
技术领域
本发明涉及番茄病原性真菌的检测装置和使用该装置的选择性检测方法。
背景技术
关于植物病原性真菌，作为关系到植物侵入性的性质，具有在植物表面形成附着胞而附着之后，寻找气孔组织等细孔，并由这里将菌丝伸入植物体中，或者由菌丝分泌植物细胞壁分解酶(纤维素酶、果胶酶)等特征。
利用这些特征，例如，专利文献1中公开了使用微多孔膜支持体的真菌计量方法。另外，非专利文献1中公开了作为植物病原性卵菌的1种的大豆疫霉(Phytophthora sojae)的假菌丝通过向水平生长而宛如要向下方潜入，以及贯穿具有3μm的孔的PET(聚对苯二甲酸乙二酯)膜。
另外，着眼于该性质，本发明者们已经提出了植物病原性卵菌类的判定方法(专利文献2)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本特开2005-287337号公报
专利文献2:专利第6167309号公报
专利文献3:国际公开第2018/011835号
非专利文献
非专利文献1:Paul F.Morris.et.al.“Chemotropic and Contact Responses ofPhytophthora sojae Hyphae to Soybean Isoflavonoids and ArtificialSubstrates”,Plant Physiol.(1998)117:1171-1178
非专利文献2:Noboru Shirane et al.,”Mineal Salt Medium for the Growthof Botrytis cinerea in vitro”,Ann.Phytopath.Soc.Japan 53:191-197(1987)
发明内容
发明要解决的课题
在作为本发明的对象植物的番茄中，由真菌产生的病害的比率较高，据说成为其原因的病原性真菌中番茄灰霉菌(Botrytis cinerea)、番茄尾孢叶霉病菌(Pseudocercospora fuligena)、番茄叶霉病菌(Passalora fulva)3种占大半。关于这些病原性真菌，灰霉菌(Botrytis cinerea)为多主寄生，也感染其他植物，但尾孢叶霉病菌(Pseudocercospora fuligena)、和叶霉病菌(Passalora fulva)仅有番茄的感染例，是植物特异性高的病原性真菌。本发明者们考虑，对于这些可以说对番茄的病原性真菌，有必要在不知道实际番茄的叶上有怎样的菌的阶段、即发病前阶段检查番茄病原性真菌，从而进行了研究。
另一方面，专利文献2中记载那样的本发明者们所使用的作为选择性真菌检测的基本技术的使用人工细胞壁的病原性真菌的分选技术，有可能只要是植物病原菌就不限于番茄病原性真菌地检测出。即，假设如果其他植物的病原性真菌附着在番茄的叶上，则可能将该真菌作为番茄病原性真菌检测出。番茄栽培大半不是由种子而是由幼苗进行栽培，在苗圃场中，由于与其他植物的混栽、相同设施中多种植物来回使用等，不能否定除番茄病原性真菌以外的植物病原性真菌向番茄苗附着的可能性。另外，实际的栽培现场，在塑料大棚等栽培设施中也与所述苗圃场相同，存在除番茄以外的植物的病原性真菌向番茄苗附着的可能性。如果对此置之不理，则可能除番茄病原性真菌以外的植物病原性真菌在使用人工细胞壁的病原性真菌的分选技术中提示假阳性，有时无用的施药、苗更新等对栽培产生重大不利影响。
对于该假阳性发生可能性进行了研究、调查，结果实际遭遇了作为除番茄病原性真菌以外的真菌，在研究中的使用人工细胞壁的检测方法中提示假阳性的真菌。这是双座炭壳属(Biscogniauxia)真菌、青霉属(Penicillium)真菌、茎点霉属(Phoma)真菌、木霉属(Trichoderma)真菌4种，为了检查不出它们而需要进行研究。
本发明是鉴于这样的事实而做出的，其目的是提供番茄病原性真菌的选择性检测装置和检测方法。
用于解决课题的手段
本发明者们进行了深入研究，结果发现，通过下述构成的检测装置能够解决上述课题，并基于该见解进一步反复研究，从而完成了本发明。
即，涉及本发明的一种局面的番茄病原性真菌的检测装置的特征在于，具有人工细胞壁、在所述人工细胞壁的上部设置的试验试样液投放部、和在所述人工细胞壁的下部设置的培养液存积部，在所述试验试样液投放部，试验试样液包含50～70mM的柠檬酸盐缓冲液，并且所述试验试样液的pH为5～5.5。
发明的效果
根据本发明，能够简易且安全地提供选择性地检测番茄病原性真菌的装置和方法。通过本发明，能够在由番茄病原性真菌引起的发病前阶段检查菌的存在，此时能够避免由除番茄以外的植物病原菌造成的假阳性提示，因此在产业利用上非常有用。
附图说明
图1是显示本实施方式的检测装置的一例的概略剖面图。
图2是显示本实施方式的检测装置所具备的人工细胞壁的一例的概略剖面图。
图3是显示本实施方式的检测装置的一例的概略剖面图。
图4是显示实施例1中番茄灰霉菌(Botrytis cinerea)贯穿人工细胞壁的状态的人工细胞壁背面的显微镜照片。
图5是显示比较例1的结果的图。
图6是显示实施例1的结果的图。
图7是显示比较例2的结果的图。
图8是显示比较例3的结果的图。
图9是显示比较例4的结果的图。
图10是显示比较例5的结果的图。
图11是显示比较例6的结果的图。
具体实施方式
以下，对于本发明所涉及的实施方式进行具体说明，但本发明不限于这些。
本实施方式所涉及的、检测番茄病原性真菌的装置1如图1所示，特征在于，具有人工细胞壁2、在所述人工细胞壁2的上部设置的试验试样液投放部3、和在所述人工细胞壁2的下部设置的培养液存积部4，在所述试验试样液投放部3，试验试样液5包含50～70mM的柠檬酸盐缓冲液，并且所述试验试样液5的pH为5～5.5。
试验试样液投放部3是用于投放试验试样液5的容器，但期望该容器在上端具备凸缘。并且，试验试样液投放部3的底面由人工细胞壁2形成。
人工细胞壁2如图2所示，优选至少具备：具有贯穿孔22的基板21、和在所述基板21的一面设置的纤维素膜23。通过使用这样的人工细胞壁，选择性地检测作为目标的番茄病原性真菌变得更加容易。
所述贯穿孔22从基板21的表侧的面贯穿到背侧的面，该贯穿孔的孔径优选为2～7μm(截面积4.5～38.5μm2)。通过使孔径在所述范围，能够更确切地选择性地检测作为目标的病原性真菌。
另外，为了更确切地选择性地检测作为目标的病原性真菌，优选还调整纤维素膜23的厚度。具体地，纤维素膜23的厚度优选为0.5～2μm。
在本实施方式的人工细胞壁2中，考虑通过将基板21的贯穿孔22的孔径和纤维素膜23的膜厚调整为上述范围，从而番茄非病原性真菌多数不贯穿纤维素膜23，因而能够将番茄非病原性真菌的一部分在该阶段排除。另一方面，本实施方式中作为目标的番茄病原性真菌选择性地在基板的背面出现。
另外，对所述基板21的厚度不特别限定，但作为一例优选为5～150μm左右。
如图1所示，在试验试样液投放部3的内部供应试验试样液5。这样，在试验试样液5含有番茄病原性真菌的情况下，形成番茄病原性真菌在基板21的表侧的面上存在的状态。
本实施方式中，试验试样液5是包含主要附着于番茄的叶的真菌的液体(菌回收液)，只要是可能包含作为目标的病原性真菌的液体就不特别限定。例如是，为了洗涤番茄的叶而使用后的液体、浸泡番茄的叶的液体。
本实施方式中，该试验试样液5的pH为5～5.5，且试验试样液5包含50～70mM的柠檬酸盐缓冲液是重要的。通过这样的构成，能够在病原性真菌的检测中排除显示假阳性的妨碍菌(番茄非病原性真菌)，能够选择性地检测作为目标的番茄病原性真菌。
如果所述试验试样液5的pH小于5、或超过5.5，则可能不能完全排除妨碍番茄病原性真菌的检测的番茄非病原性真菌。另外，如果所述试验试样液包含的柠檬酸盐缓冲液的浓度小于50mM，则可能不能完全排除妨碍番茄病原性真菌的检测的番茄非病原性真菌。另一方面，如果所述柠檬酸盐缓冲液的浓度超过70mM，则可能连作为目标的番茄病原性真菌的一部分也排除。
对所述柠檬酸盐不特别限定，但优选为柠檬酸一价盐，更具体地，优选为柠檬酸钠和柠檬酸钾等。
进而，所述试验试样液5中，EC(电导率)通常优选为7～15mS/cm左右。
作为本实施方式的检测装置的目标的番茄病原性真菌优选为从番茄灰霉菌(Botrytis cinerea)、番茄尾孢叶霉病菌(Pseudocercospora fuligena)、番茄叶霉病菌(Passalora fulva)中选择的至少一种。
另外，本实施方式的检测装置优选不检测出有时存在于番茄叶、但为番茄非病原性真菌的真菌，例如，双座炭壳属(Biscogniauxia)真菌、青霉属(Penicillium)真菌、茎点霉属(Phoma)真菌、和木霉属(Trichoderma)真菌。更具体地，所述番茄非病原性真菌为海双座炭壳菌(Biscogniauxia maritima)、奥尔森青霉(Penicillium olsonii)、多喙茎点霉(Phoma multirostrata)或棘孢木霉(Trichoderma asperellum)。
此外，本说明书中，术语“番茄病原性”是指对番茄具有病原性。术语“番茄非病原性”是指对番茄不具有病原性。即使真菌具有病原性，如果对番茄不具有病原性，那么该真菌也为“番茄非病原性”。换言之，只要真菌不对番茄带来坏影响，该真菌就是“番茄非病原性”。术语“番茄非病原性”中包含的前缀“非”不修饰“番茄”，前缀“非”修饰“病原性”。
本实施方式的检测装置中，在所述人工细胞壁2的下部设置的培养液存积部4中，加入有培养液。作为培养液，只要是能够培养真菌的培养液就不特别限定，可以使用一般的培养基、培养液。例如，可以使用作为一般的真菌培养用培养基的马铃薯葡萄糖培养基、沙氏葡萄糖培养基等。此外，为了加速真菌的培养，不仅培养液存积部4，所述试验试样液5中也可以添加培养液。
本实施方式的检测装置中，经过一定的培养期间之后，通过观察番茄病原性真菌是否在所述人工细胞壁2的纤维素膜23的背面出现，来检测试样中是否存在番茄病原性真菌。对观察的手段不特别限定，例如，如图3所示，可以将显微镜6配置在人工细胞壁2的下部，通过该显微镜6进行光学观察。
对真菌的培养期间不特别限定，优选为72小时以上。另外，关于培养温度，优选为20～28℃左右。
进而，本发明包含番茄病原性真菌的检测方法，该方法包括：使用如上所述的检测装置选择性地检测番茄病原性真菌。
本实施方式的番茄病原性真菌的检测方法只要使用上述的检测装置，对于其他工序不特别限定，例如，包括：在所述检测装置的试验试样液投放部3投放试验试样液的工序；将试验试样液在检测装置内静置的工序(培养的工序)；静置后观察所述检测装置的人工细胞壁2(纤维素膜23)的背面的工序；和在所述纤维素膜23的背面观察到真菌的情况下，判定所述试验试样液包含番茄病原性真菌的工序。
本说明书公开了如上所述各种方式的技术，将其中主要的技术在以下归纳。
本发明的一个局面所涉及的番茄病原性真菌的检测装置的特征在于，具有人工细胞壁、在所述人工细胞壁的上部设置的试验试样液投放部、和在所述人工细胞壁的下部设置的培养液存积部，在所述试验试样液投放部，试验试样液包含50～70mM的柠檬酸盐缓冲液，并且所述试验试样液的pH为5～5.5。
通过这样的构成，能够简易且安全地提供选择性地检测番茄病原性真菌的装置和方法。
进而，在所述检测装置中，优选所述人工细胞壁具有孔径2～7μm的贯穿孔，且至少具备厚度5～150μm的基板、和在该基板的一面设置的厚度0.5～2μm的纤维素膜。认为由此，能够更确切地获得上述的效果。
另外，在所述检测装置中，优选所述柠檬酸盐是从柠檬酸钠和柠檬酸钾中选择的至少一种。认为由此，能够更确切地获得上述的效果。
进而，在所述检测装置中，优选作为检测对象的番茄病原性真菌是从番茄灰霉菌(Botrytis cinerea)、番茄尾孢叶霉病菌(Pseudocercospora fuligena)、番茄叶霉病菌(Passalora fulva)中选择的至少一种。认为在这样的情况下，能够进一步发挥上述的效果。
另外，优选所述检测装置检测不到有时存在于番茄叶、但为番茄非病原性真菌的双座炭壳属(Biscogniauxia)真菌、青霉属(Penicillium)真菌、茎点霉属(Phoma)真菌、和木霉属(Trichoderma)真菌。认为在这样的情况下，能够进一步发挥上述的效果。
更优选所述番茄非病原性真菌是海双座炭壳菌(Biscogniauxia maritima)、奥尔森青霉(Penicillium olsonii)、多喙茎点霉(Phoma multirostrata)或棘孢木霉(Trichoderma asperellum)。
本发明的进一步局面所涉及的番茄病原性真菌的检测方法的特征在于，包括使用上述检测装置选择性地检测番茄病原性真菌的步骤。
以下，通过实施例更具体地说明本发明，但本发明的范围不限于这些。
实施例
[真菌类的制备]
(灰霉菌(Botrytis cinerea)的培养)
将番茄病原菌之一、作为番茄灰霉病的病原性真菌的灰霉菌(Botrytis cinerea)接种在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(DifcoTM Potato Dextrose Agar)中。接着，将培养基在25摄氏度的温度下静置1周。灰霉菌(Botrytis cinerea)由岐阜大学应用生物科学部所属的清水准教授提供。然后，将菌丝充分生长后的灰霉菌(Botrytis cinerea)培养马铃薯葡萄糖琼脂培养基在黑光照射下放置4天以上后，在室温环境放置2周以上，促进孢子形成。对进行了所述处理的灰霉菌(Botrytis cinerea)培养马铃薯葡萄糖琼脂培养基滴加数ml灭菌纯水，用接菌环、笔等擦菌丝表面，获得破碎菌丝-孢子混合悬浮液。
(Pseudocercospora fuligena的培养)
将番茄病原菌之一、作为番茄尾孢叶霉病的病原性真菌的Pseudocercosporafuligena接种在马铃薯葡萄糖琼脂培养基中。接着，将培养基在28摄氏度的温度下静置1周。Pseudocercospora fuligena从国立研究开发法人农业·食品食品产业技术综合研究机构遗传资源中心接受分销(MAFF No.306728)。然后，将Pseudocercospora fuligena菌丝从马铃薯葡萄糖琼脂培养基移植到牛蒡粉末琼脂培养基，进一步在28摄氏度的温度下静置1～2周，菌丝再次充分生长后，对菌丝表面施加用接菌环、笔等擦等的机械胁迫，然后，在黑光照射下放置4天以上后，在室温环境放置2周以上，促进再次孢子形成。在进行了所述处理的Pseudocercospora fuligena培养牛蒡粉末琼脂培养基中滴加数ml灭菌纯水，用接菌环、笔等擦菌丝表面，得到破碎菌丝-孢子混合悬浮液。
(Passalora fulva的培养)
将番茄病原菌之一、作为番茄叶霉病的病原性真菌的Passalora fulva接种在马铃薯葡萄糖琼脂培养基中。接着，将培养基在23摄氏度的温度下静置1～2周。Passalorafulva从国立研究开发法人农业·食品食品产业技术综合研究机构遗传资源中心接受分销(MAFF No.726744)。然后，对菌丝充分生长后的Passalora fulva培养马铃薯葡萄糖琼脂培养基滴加数ml灭菌纯水，用接菌环、笔等擦菌丝表面，得到破碎菌丝-孢子混合悬浮液。
(海双座炭壳菌(Biscogniauxia maritima)、奥尔森青霉(Penicilliumolsonii)、多喙茎点霉(Phoma multirostrata)、和棘孢木霉(Trichoderma asperellum)的培养)
将不是番茄病原菌、但存在于番茄叶的海双座炭壳菌(Biscogniauxiamaritima)、奥尔森青霉(Penicillium olsonii)、多喙茎点霉(Phoma multirostrata)和棘孢木霉(Trichoderma asperellum)从番茄叶采集、分离后，接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基。作为分离源的番茄从多个场所采集。分离方法是，将在清澈的树脂容器或树脂袋中采集的番茄叶数枚与由包含0.1％的表面活性剂Tween80(SIGMA-ALDRICH)的生理盐水组成的菌回收液一起投放，搅拌1分钟，使附着于叶的菌向菌回收液转移，稀释该菌回收液，在包含链霉素硫酸盐(Wako)100mg/L的马铃薯葡萄糖琼脂培养基上通过平板琼脂涂抹法涂布后，在25摄氏度培养数天，由出现的真菌菌落进行分离。鉴定委托(一般财团法人)日本食品分析中心多摩研究所。将所述分离后接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基的海双座炭壳菌(Biscogniauxia maritima)、奥尔森青霉(Penicillium olsonii)、多喙茎点霉(Phomamultirostrata)和棘孢木霉(Trichoderma asperellum)在25摄氏度的温度下静置1周。然后，对菌丝充分生长后的、或者孢子形成充分的这4菌种培养马铃薯葡萄糖琼脂培养基滴加数ml灭菌纯水，用接菌环、笔等擦菌丝表面，得到破碎菌丝-孢子混合悬浮液。
[人工细胞壁的制备]
检测装置中的人工细胞壁如下准备。
首先，将纤维素(SIGMA-ALDRICH、商品名：Avicel PH-101)溶解在离子液体中，制备具有1％的浓度的纤维素溶液。离子液体为1-Butyl-3-methyl imidazolium chloride(1-丁基-3-甲基咪唑氯化物，SIGMA-ALDRICH制)。将该纤维素溶液加热到60摄氏度，接下来将纤维素溶液在底面具有聚对苯二甲酸乙二酯膜的容器(Millipore、商品名：MillicellPISP 12R 48)的背面通过旋涂法以2000rpm的旋转速度涂布30秒。所述聚对苯二甲酸乙二酯膜作为图2的人工细胞壁中的基板21发挥功能，随机地具有直径3μm的多个贯穿孔。这样，在聚对苯二甲酸乙二酯膜的背侧的面形成了具有0.5微米的厚度的纤维素膜。
将该在底面的聚对苯二甲酸乙二酯膜背面形成了纤维素膜的容器，在乙醇中在室温静置12小时。这样，在将1-Butyl-3-methyl imidazolium chloride用乙醇置换、除去之后，最后在真空干燥器内进行干燥。这样，得到了在本实施例、比较例中供试验的人工细胞壁。
[番茄病原性真菌的检测装置的制备]
将所述作为人工细胞壁的、在底面的聚对苯二甲酸乙二酯膜(基板)背面形成了纤维素膜的容器叠放在培养基容器(培养液存积部)中，制成番茄病原性真菌的检测装置。培养基容器是24孔平底培养板(Corning Incorporated、商品名：24Well Cell ClutureCluster Flat Bottom)，在培养基容器与形成人工细胞壁的容器之间，填充液体的培养基(培养液)600μL，使其与形成人工细胞壁的容器的背面接触。该液体的培养基是稀薄马铃薯葡萄糖液体培养基(DifcoTM Potato Dextrose Broth 2.4g/L水溶液)。
[实施例1]
在所述形成人工细胞壁的容器的内部分别添加包含200个灰霉菌(Botrytiscinerea)、Pseudocercospora fuligena、Passalora fulva、海双座炭壳菌(Biscogniauxiamaritima)、奥尔森青霉(Penicillium olsonii)、多喙茎点霉(Phoma multirostrata)和棘孢木霉(Trichoderma asperellum)的菌丝片和孢子的破碎菌丝-孢子混合悬浮液，在实施例中添加柠檬酸钠缓冲液，使其与上述所得的破碎菌丝-孢子混合悬浮液的合计体积为200μL，得到试验试样液。所述试验试样液中的柠檬酸钠缓冲液浓度在与破碎菌丝-孢子混合悬浮液合计为200μL时，制备成60mM而添加。添加后的形成人工细胞壁的容器的内部的柠檬酸钠缓冲液为pH5.5、EC13mS/cm。
然后，将添加了所述7种真菌的试验试样液放置到上述制备的检测装置中，将该检测装置在25摄氏度的温度下静置，以24小时间隔进行观察。每隔24小时，通过介由光学显微镜的目视数出贯穿所述人工细胞壁、在其背面被观察到的菌丝数。将利用光学显微镜的观察照片的一例(番茄灰霉菌(Botrytis cinerea))示于图4。
[比较例1]
除了使用灭菌纯化水代替柠檬酸钠缓冲液以外，与实施例1同样地进行试验。
[考察]
将比较例1的结果示于图5，将实施例1的结果示于图6。
图5中，作为虽然有时存在于番茄叶、但应从检查中排除的番茄非病原性真菌的海双座炭壳菌(Biscogniauxia maritima)、奥尔森青霉(Penicillium olsonii)、多喙茎点霉(Phoma multirostrata)、棘孢木霉(Trichoderma asperellum)4种，比应检查的番茄病原性真菌的Pseudocercospora fuligena、Passalora fulva更早地被观察到贯穿人工细胞壁的菌丝，本比较例中不能进行番茄病原性真菌的选择性检测。
与此相对，在作为实施例结果的图6中，在72小时的时间点，作为番茄病原性真菌的灰霉菌(Botrytis cinerea)、Pseudocercospora fuligena、和Passalora fulva，与作为虽然存在于番茄叶、但应从检查中排除的番茄非病原性真菌的海双座炭壳菌(Biscogniauxia maritima)、奥尔森青霉(Penicillium olsonii)、多喙茎点霉(Phomamultirostrata)、和棘孢木霉(Trichoderma asperellum)4种相比，更早地被观察到贯穿人工细胞壁的菌丝，确证了在实施例1中能够实现番茄病原性真菌的选择性检测。
[比较例2]
除了在检测装置的培养基中也投放与试验试样液相同浓度(60mM)的柠檬酸钠缓冲液、且以培养液的pH也为5.5的方式进行制备以外，以与实施例1相同的方式进行试验。将结果示于图7。
如由图7表明的那样，在比较例2中，任何真菌也不贯穿人工细胞壁、不能生长。
[比较例3]
除了将试验试样液的pH变为4.5以外，以与实施例1相同的方式进行试验。将比较例3中的培养72小时后的侵入菌丝数的结果示于图8。
如由图8表明的那样，比较例3中妨碍菌(番茄非病原性真菌)的一部分贯穿人工细胞壁，不能排除全部的妨碍菌。
[比较例4]
除了将试验试样液的pH变为6以外，以与实施例1相同的方式进行试验。比较例4中的培养72小时后的侵入菌丝数的结果示于图9。
如由图9表明的那样，比较例4中妨碍菌(番茄非病原性真菌)的一部分也贯穿人工细胞壁，不能排除全部的妨碍菌。
由以上比较例3和4的结果显示，试验试样液的pH是对于番茄病原性真菌的选择性检测重要的要素之一。
[比较例5]
除了使试验试样液的pH为5、试验试样液中的柠檬酸钠缓冲液浓度为100mM以外，以与实施例1相同的方式进行试验。比较例5中的培养72小时后的侵入菌丝数的结果示于图10。
由图10的结果得知，比较例4中，不仅妨碍菌(番茄非病原性真菌)，连作为目标的番茄病原性真菌也被一部分排除。
[比较例6]
除了使试验试样液的pH为5、试验试样液中的柠檬酸钠缓冲液浓度为40mM以外，以与实施例1相同的方式进行试验。比较例6中的培养72小时后的侵入菌丝数的结果示于图11。
如由图11表明的那样，比较例6中，妨碍菌(番茄非病原性真菌)的一部分贯穿人工细胞壁，不能排除全部的妨碍菌。
由以上比较例5和6的结果显示，试验试样液中的柠檬酸钠缓冲液浓度是对于番茄病原性真菌的选择性检测重要的要素之一。
产业可利用性
本公开的番茄病原性真菌的检测装置能够排除显示假阳性的番茄非病原性真菌，选择性地检测作为目标的番茄病原性真菌。因此，本公开的检测装置能够适合在给番茄带来坏影响的番茄病原性真菌的排除、其他与番茄相关的农业等技术领域中利用。
符号说明
1 检测装置
2 人工细胞壁
3 试验试样液投放部
4 培养液存积部
5 试验试样液
6 显微镜
21 基板
22 贯穿孔
23 纤维素膜

Claims (1)

1.一种番茄病原性真菌的检测方法，包括：使用具有人工细胞壁、在所述人工细胞壁的上部设置的试验试样液投放部、和在所述人工细胞壁的下部设置的培养液存积部的番茄病原性真菌的检测装置，在所述试验试样液投放部，投放包含60mM的柠檬酸钠缓冲液、pH为5.5、并且EC为13mS/cm的试验试样液，选择性地检测番茄病原性真菌，
所述人工细胞壁至少具备：具有孔径2～7μm的贯穿孔、且厚度5～150μm的基板，和在该基板的一面设置的厚度0.5～2μm的纤维素膜，
作为检测对象的番茄病原性真菌是从作为番茄灰霉病菌的灰葡萄孢(Botrytiscinerea)、作为番茄尾孢叶霉病菌的煤污假尾孢(Pseudocercospora fuligena)和作为番茄叶霉病菌的黄褐钉孢(Passalora fulva)中选择的至少一种，
检测不到作为番茄非病原性真菌的海双座炭壳菌(Biscogniauxia maritima)、奥尔森青霉(Penicillium olsonii)、多喙茎点霉(Phoma multirostrata)或棘孢木霉(Trichoderma asperellum)。
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