CN111676170B - 一株发酵乳杆菌及其在制备共轭脂肪酸中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一株发酵乳杆菌及其在制备共轭脂肪酸中的应用，属于生物技术领域。本发明提供了一株可产共轭亚油酸、共轭亚麻酸的发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116，其发酵上清液转化亚油酸生产共轭亚油酸的转化率可达26.19％，其中c9,t11‑CLA异构体占63.65％；其发酵上清液转化亚麻酸生产共轭亚麻酸的转化率可达41.79％，其中c9,t11,c15‑CLNA占95.01％。

Description

一株发酵乳杆菌及其在制备共轭脂肪酸中的应用

技术领域

本发明涉及一株发酵乳杆菌及其在制备共轭脂肪酸中的应用，属于生物技术领域。

背景技术

共轭亚油酸(Conjugated linoleic acid，CLA)是含有共轭双键的十八碳二烯酸的总称，是亚油酸(Linoleic acid，18:2)的位置异构体和几何异构体。其中最常见的异构体是顺9,反11-CLA(c9,t11-CLA)，亦被称为瘤胃酸(Rumenic acid)。此外，反10,顺12-CLA(t10,c12-CLA)也是自然界含量相对较高的异构体。共轭亚油酸因其生物功能而受到关注，不同的共轭亚油酸异构体具有不同的生理功能，其中c9,t11-CLA(CLA1)和t10,c12-CLA是公认的最具生理活性的共轭亚油酸异构体，c9,t11-CLA最主要的功能在于抗癌、抗炎及免疫调节等方面，而t10,c12-CLA对于减肥和脂质代谢方面有显著的影响。此外，t9,t11-CLA(CLA2)也被报道具有抗炎等活性。

共轭亚麻酸(Conjugated linolenic acid，CLNA)是由亚麻酸(Linolenic acid，LNA)衍生而来的具有共轭双键的十八碳三烯酸的多种位置异构体与几何异构体的总称，它具有多种营养和保健功能，如抗癌、抗糖尿病、抗动脉粥样硬化、降低体脂含量、胰岛素抵抗、调节机体免疫等，已成为医学、化学、营养学等领域的研究热点。在共轭亚麻酸的各种立体异构体中，c9,t11,c15-CLNA(CLNA1)、t9,t11,c15-CLNA(CLNA2)、t10,c12,c15-CLNA和c6,c9,t11-CLNA等是被认为最具生物活性的异构体。

目前，共轭亚油酸主要为来源于天然的共轭亚油酸和人工合成的共轭亚油酸，由于天然的共轭亚油酸主要存在于瘤胃动物牛、羊等的乳脂及肉制品中，每克乳脂中CLA含量为2mg-25mg不等，且CLA含量随奶牛年龄增长而增加，其来源受限，不适合大规模的工业生产。而目前人工合成的CLA的方法中，因其原料和合成方法不同，所得产品中各异构体的含量相差甚远。

由于天然的共轭亚麻酸存在于自然界的一些植物种子中，如石榴籽、油桐籽、苦瓜籽、金盏花籽、栝楼和蓝花楹籽等；然而，众多含有共轭亚麻酸的植物种子中仅栝楼籽可直接食用，且植物种籽中的油脂成分很复杂，以植物籽油脂为原料实现共轭亚麻酸的分离与纯化十分困难。虽然通过碱处理亚麻酸异构化法也可产生共轭亚麻酸，但其产率较低，且有试剂残留，故至今尚未实现共轭亚麻酸的工业化生产。

因此，综上所述，本领域缺乏一种能够安全高效的制备共轭亚麻酸和共轭亚油酸的方法。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一株发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)CCFM1116，所述发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：60955，保藏日期为2020年01月10日，留存于江南大学食品生物技术菌种保藏中心。

所述发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116来源于江苏省南通市如皋市的90岁老人的粪便，该菌株经测序分析，其16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示。将测序得到的序列在NCBI中进行核酸序列比对，结果显示其与发酵乳杆菌的核酸序列相似度为100％，因此，将该菌株命名为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116。

本发明的第二个目的是提供含有上述发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116的微生物制剂。

在本发明的一种实施方式中，所述微生物制剂是液体或固体的制剂。

在本发明的一种实施方式中，所述制剂中的菌浓≥1×10⁹CFU/mL；或者，所述制剂中的菌浓≥1×10⁹CFU/g。

在本发明的一种实施方式中，固体制剂还含有稀释剂、黏合剂、崩解剂和润滑剂。

在本发明的一种实施方式中，液体制剂还含有增溶剂、助溶剂、潜溶剂、防腐剂、矫味剂和着色剂。

本发明的第三个目的是提供上述发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116或上述微生物制剂在制备共轭脂肪酸或制备含共轭脂肪酸的产品中的应用。

在本发明的一种实施方式中，所述共轭脂肪酸为共轭亚油酸或共轭亚麻酸。

本发明还提供了一种共轭亚油酸的制备方法，将发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)CCFM1116接种至发酵培养基中进行发酵，得到发酵液；将发酵液离心取上清，得到发酵上清液；以发酵上清液为催化剂，以亚油酸为底物，催化制备共轭亚油酸。

在本发明的一种实施方式中，所述发酵乳杆菌以种子液的形式接种至发酵培养基中；所述种子液在发酵培养基中的接种量占发酵培养基总体积的至少2％。

在本发明的一种实施方式中，底物亚油酸浓度是30mg/mL。

在本发明的一种实施方式中，所述共轭亚油酸包括c9,t11-CLA和/或t9,t11-CLA。

本发明还提供了一种制备共轭亚麻酸的方法，将发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)CCFM1116接种至发酵培养基中进行发酵，得到发酵液；将发酵液离心取上清，得到发酵上清液；以发酵上清液为催化剂，以亚麻酸为底物，催化制备共轭亚麻酸。

在本发明的一种实施方式中，所述发酵乳杆菌以种子液的形式接种至发酵培养基中；所述种子液在发酵培养基中的接种量占发酵培养基总体积的至少2％。

在本发明的一种实施方式中，底物亚麻酸浓度是30mg/mL。

在本发明的一种实施方式中，所述共轭亚麻酸包括c9,t11,c15-CLNA和/或t9,t11,c15-CLNA。

本发明还提供了上述发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116或微生物制剂在食品、化学或制药领域中的应用。

[有益效果]

本发明提供了一株可产共轭亚油酸、共轭亚麻酸的发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)CCFM1116，其发酵上清液转化亚油酸生产共轭亚油酸的转化率可达26.19％，其中c9,t11-CLA异构体占63.65％；其发酵上清液转化亚麻酸生产共轭亚麻酸的转化率可达41.79％，其中c9,t11,c15-CLNA占95.01％。

生物材料保藏

一株发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)，分类学命名为Lactobacillusfermentum，已于2020年01月10日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCCNo：60955，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。

附图说明

图1：发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116的分离、纯化及保藏操作流程图。

图2：发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116的发酵上清液制备共轭亚油酸的转化率及共轭亚油酸总浓度随培养时间的变化曲线。

图3：发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116经培养72小时后培养液、胞内的共轭亚油酸的分布图。

图4：发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116发酵上清液制备共轭亚麻酸的转化率及共轭亚麻酸总浓度随培养时间的变化曲线。

图5：发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116经培养72小时后培养液、胞内的共轭亚麻酸分布图。

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图对本发明进行进一步的阐述。

下述实施例中涉及的培养基及菌株培养条件如下：

MRS液体培养基：胰蛋白胨10g、牛肉浸膏10g、酵母粉5g、葡萄糖20g、柠檬酸氢二铵2g、醋酸钠5g、磷酸氢二钾2g、七水硫酸镁0.5g、一水合硫酸锰0.25g，吐温80 1mL，加水至1000mL。

MRS固体培养基是在MRS液体培养基的基础上添加以MRS液体培养基总重计1.5％的琼脂得到的。

菌株培养条件：37℃，厌氧培养。

下述实施例中涉及CLA的含量、CLNA的含量的检测方法如下：

GC-MS检测：岛津气相色谱仪(GC 2010plus)，气相柱Rtx-wax(30m×0.25mm×0.25μm)，质谱仪(岛津Ultra QP2010)。程序升温条件：初始150℃，以5℃/min的速率升温至200℃，保持10min，后以4℃/min升温至230℃，保持18min。采用分流进样，进样量1μL，分流比50∶1，氦气为载气，进样器温度和检测器温度均为240℃，离子源220℃，强度为70eV。

实施例1：样品的采集和乳杆菌的分离鉴定

1、样品采集及分离

(1)样品采集于江苏省南通市如皋市的90岁老人的粪便。

(2)取1g粪便样品，将样品经梯度稀释后涂布于MRS固体培养基，置于厌氧环境下，37℃下培养72h，观察记录菌落形态；挑取菌落划线纯化，然后在MRS液体培养基中在37℃下培养48h，将所得菌落进行革兰氏染色并记录菌株形态；弃除菌落中的革兰氏阴性菌株和革兰氏阳性球菌，挑选得到革兰氏阳性杆菌；将得到的革兰氏阳性杆菌经过过氧化氢酶分析后弃除过氧化氢酶阳性菌株，保留过氧化氢酶阴性菌株；所得菌株经过16S rDNA测序鉴定为发酵乳杆菌，命名为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116，留存于江南大学食品生物技术菌种保藏中心。

将发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116进行传代培养，收集菌体置于离心管中3000rpm离心10min洗涤，重复3次，所得菌体加入基体保护剂中进行冻存、保藏。

2、菌落特征及菌体形态

发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116具有下述生物学特性：

菌体特征：呈乳白色；菌落特征：在MRS固体平板上菌落突起，光滑、圆形、乳白色、半透明、直径为1～2mm；生长特性：在37℃恒温厌氧的条件下，在MRS培养基中培养约16h达到对数末期。

3、生理生化特征

发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116的生理生化特征见表1。

表1发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116的生理生化特征

4、分子生物学鉴定过程

16S rDNA扩增条件：95℃5min；35个循环(95℃30s,55℃30s,72℃2min)；72℃10min。

扩增引物：

27F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’(SEQ ID NO.2)；

1492R：5’-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3’(SEQ ID NO.3)。

扩增产物纯化和序列比对过程按文献(Turroni F et al.Exploring thediversity of the bifidobacterial population in the human intestinal tract[J].Appl Environ Microb.2009；75(6):1534-45)记载的方法进行。测序得到的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示，将测序得到的序列在NCBI中进行核酸序列比对，结果显示其与发酵乳杆菌的核酸序列相似度为100％。鉴定结果表明，该菌株为发酵乳杆菌，命名为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116；该发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116的分离、纯化及保藏操作流程如图1所示。

实施例2：含发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116的微生物制剂的制备

从-80℃冰箱取出保有发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116的甘油管，取200～600μL的发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116菌液接种于10～30mL MRS液体培养基中，厌氧环境下37℃下活化2至3代，待发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)CCFM1116达到1×10⁸cfu/mL以上活菌数时，5000～10000rpm下离心10～20min，去除上清液后，在无菌环境下依次加入缓冲液(生理盐水或pH值为7的0.2M磷酸盐缓冲液)和冷冻保护剂(15％～20％(w/v)的蔗糖溶液)，待细胞浓度不低于1×10⁹cfu/mL时，真空冷冻干燥处理得到固体菌剂。

实施例3：发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116在制备共轭亚油酸中的应用

具体步骤如下：

(1)菌株活化

从-80℃冰箱取出保有发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116的甘油管，取菌液划线于MRS固体培养基上，厌氧环境下37℃培养48h；挑取长出的单菌落并接种于MRS液体培养基中，厌氧环境下37℃培养48h，连续活化3代，得到菌液。

(2)亚油酸母液的配制

称取300mg亚油酸(LA)和200mg Tween-80溶于水并定容至10mL，充分搅拌乳化后，经0.45μm无菌滤膜过滤除菌后，得到浓度为0.48mg/mL的亚油酸母液，将亚油酸母液于-20℃避光保存。

(3)与亚油酸共培养

以添加等量亚油酸母液而不添加菌液的培养基为对照，将步骤(1)中活化好的菌液按照2％(v/v)接种量接种至含210μL步骤(2)中的亚油酸母液的10mL MRS液体培养基中，厌氧环境下37℃培养72h，培养过程中，分别取于第0、12、24、48、72h对发酵液进行取样，将样本添加至至干净离心管中，5000rpm离心5min取菌体待用。

(4)脂肪酸提取

发酵液中脂肪酸的提取：向步骤(3)中得到的发酵液中分别添加十七烷酸(C17:0)至终浓度为0.075mg/mL作内标，然后添加2mL异丙醇，充分振荡30s；再添加3mL正己烷，充分振荡30s；5000rpm离心3min，吸取正己烷层至干净提脂瓶中，氮气吹干，得到脂肪酸；检测培养0、12、24、48、72h时得到的发酵液中的脂肪酸含量。

菌体中的脂肪酸提取：步骤3离心所得菌体用2mL盐溶液(0.137mol/L NaCl，7.0mmol/L K₂HPO₄，2.5mmoL/L KH₂PO₄)洗涤，4000rpm离心5min，重复洗涤步骤；再将菌体重悬于2mL前述盐溶液中，添加十七烷酸C17:0至终浓度为0.0575mg/mL，按与发酵液相同的方法进行脂肪酸提取及氮气吹干，到脂肪酸；检测培养0、12、24、48、72h时得到的菌体中的脂肪酸含量。

实验结果表明：CLA的积累过程中，发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116在含有0.48mg/mL LA的MRS中生长，培养12h时开始产CLA，随着菌体生长，在培养12-36h时共轭亚油酸的含量逐渐增加，培养36h后发酵液中共轭亚油酸的浓度趋于饱和(如图2所示)。培养72h左右，CLA的总含量达到了0.1257mg/mL，以底物LA总量计CLA的总转化率为26.19％。

从CLA各异构体含量来看，所得发酵产物含有c9,t11-CLA(CLA1)和t9,t11-CLA(CLA2)两种异构体。培养72h后，c9,t11-CLA的浓度高达为0.08mg/mL，占总CLA产量的63.65％。

(5)脂肪酸甲酯化

将步骤(4)中发酵72h的发酵液脂肪酸、发酵72h的菌体脂肪酸用氮气吹干后，分别加入400μL甲醇，充分振荡混匀后以150μL重氮甲烷试剂直接进行甲酯化，氮气吹干后用1mL正己烷回溶，转移至气相瓶，待进行GC-MS检测。

实验结果表明：如图3所示，从培养72h的发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116发酵液及菌体脂肪酸组成可以发现，该株菌所转化的CLA绝大多数均处于发酵液中，菌体内存留的量也非常少，表明绝大多数的产物均不在胞内积累，而是被转运至胞外，有利于进一步分离与纯化。

实施例4：发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116在制备共轭亚麻酸中的应用

(1)菌株活化

从-80℃冰箱取出保有发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116的甘油管，取菌液划线于MRS固体培养基上，厌氧环境下37℃培养48h；挑取长出的单菌落并接种于MRS液体培养基中，厌氧环境下37℃培养48h，连续活化3代，得到菌液。

(2)亚麻酸母液的配制

称取300mgα-亚麻酸(α-LNA)和200mg Tween-80溶于水并定容至10mL，充分搅拌乳化后，经0.45μm无菌滤膜过滤除菌，得到浓度为0.4mg/mL亚麻酸母液，将亚麻酸母液于-20℃避光保存。

(3)与亚麻酸共培养

以添加等量亚麻酸而不添加菌液的培养基为对照，将步骤(1)中活化好的菌液按照2％(v/v)接种量接种至含步骤(2)中的亚麻酸母液的10mL MRS液体培养基中，厌氧环境下37℃培养72h，得到发酵液，培养过程中，分别于第0、12、24、48、72h时对发酵液进行取样，将样本添加至干净离心管中，5000rpm离心5min取菌体待用。

4、脂肪酸提取

发酵液中脂肪酸的提取：向步骤(3)中得到的发酵液中添加十七烷酸(C17:0)至终浓度为0.0767mg/mL作内标，然后添加2mL异丙醇，充分振荡30s；再添加3mL正己烷，充分振荡30s；5000rpm离心3min，吸收正己烷层至干净提脂瓶中，氮气吹干，得到脂肪酸，检测培养0、12、24、48、72h时得到的发酵液中的脂肪酸含量。

菌体中脂肪酸提取：步骤3离心所得菌体用2mL盐溶液(含0.137mol/L NaCl，7.0mmol/L K₂HPO₄，2.5mmoL/L KH₂PO₄)洗涤，4000rpm离心5min，重复洗涤步骤。所得菌体重悬于2mL上述盐溶液中，添加十七烷酸(C17:0)至终浓度为0.0575mg/mL，按与发酵液相同的处理方法进行脂肪酸提取及氮气吹干，得到脂肪酸，检测培养0、12、24、48、72h时得到的发酵液中的脂肪酸含量。

实验结果表明：发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116在含有0.3992mg/mLα-LNA的MRS培养基中生长12h时开始产CLNA，随着菌体生长共轭亚麻酸的含量逐渐增加(24h、36h)，培养36h后共轭亚麻酸的含量趋于饱和；培养72h左右，CLNA的总含量达到了0.1668mg/mL，以底物α-LNA总量计其转化率为41.79％。

实验结果表明：经过CLNA各异构体含量分析，所得产物中只有CLNA1和CLNA2两种异构体，即共轭亚麻酸中最具有生物活性的c9,t11,c15-CLNA和t9,t11,c15-CLNA。如图4所示，菌株在培养12h后开始转化共轭亚麻酸，随着菌体生长，异构体CLNA1在12h到36h内快速累积，CLNA1的含量在菌株培养36h后趋于饱和，而CLNA2在菌株开始积累CLNA时(24h)含量较低，随着培养时间的延长，该异构体的浓度也进一步增加，最终CLNA1浓度为0.1585mg/mL，占总CLNA的95.01％。

5、脂肪酸甲酯化

将步骤(4)中发酵72h的发酵液脂肪酸、发酵72h的菌体脂肪酸用氮气吹干后，分别加入400μL甲醇，充分振荡混匀后以适量重氮甲烷试剂直接进行甲酯化，氮气吹干后用1mL正己烷回溶，转移至气相瓶，待进行GC-MS检测。

实验结果表明：如图5所示，从培养72h的发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116发酵液及菌体脂肪酸组成可以发现，发酵液中几乎没有底物LNA剩余而且菌体内也仅剩极少量的LNA尚未被转化，所转化的CLNA绝大多数均处于发酵液中，菌体内存留的量也非常少。且CLNA1和CLNA2在发酵液与菌体内的分布情况基本一致，该结果也表明绝大多数的产物均不在胞内积累，而是被转运至胞外，因此有利于后期的进一步分离与纯化。

对比例1

具体实施方式同实施例3，分别采用发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116以及同期筛选的发酵乳杆菌HN2-3、发酵乳杆菌27-2、发酵乳杆菌NT65-2、发酵乳杆菌FGDLZR5-1、发酵乳杆菌HN11-1、发酵乳杆菌NT3-1进行CLA和CLNA的转化率测定结果显示，仅发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116具有良好的高产CLA和CLNA的能力。尽管其他几株菌也可有少量产生c9,t11-CLA、t9,t11-CLA和c9,t11,c15-CLNA、t9,t11,c15-CLNA，但各自的转化率远低于发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116(如表1所示)。

表1不同菌株发酵后的CLA转化率和CLNA转化率对比表

虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

SEQUENCE LISTING

<110> 江南大学

<120> 一株发酵乳杆菌及其在制备共轭脂肪酸中的应用

<130> BAA200437A

<160> 3

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 1290

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

catctgtccc accttaggcg gctggctcct aaaaggttac cccaccgact ttgggtgtta 60

caaactctca tggtgtgacg ggcggtgtgt acaaggcccg ggaacgtatt caccgcggca 120

tgctgatccg cgattactag cgattccgac ttcgtgcagg cgagttgcag cctgcagtcc 180

gaactgagaa cggttttaag agatttgctt gccctcgcga gttcgcgact cgttgtaccg 240

tccattgtag cacgtgtgta gcccaggtca taaggggcat gatgatctga cgtcgtcccc 300

accttcctcc ggtttgtcac cggcagtctc actagagtgc ccaacttaat gctggcaact 360

agtaacaagg gttgcgctcg ttgcgggact taacccaaca tctcacgaca cgagctgacg 420

acgaccatgc accacctgtc attgcgttcc cgaaggaaac gccctatctc tagggttggc 480

gcaagatgtc aagacctggt aaggttcttc gcgtagcttc gaattaaacc acatgctcca 540

ccgcttgtgc gggcccccgt caattccttt gagtttcaac cttgcggtcg tactccccag 600

gcggagtgct taatgcgtta gctccggcac tgaagggcgg aaaccctcca acacctagca 660

ctcatcgttt acggcatgga ctaccagggt atctaatcct gttcgctacc catgctttcg 720

agtctcagcg tcagttgcag accaggtagc cgccttcgcc actggtgttc ttccatatat 780

ctacgcattc caccgctaca catggagttc cactaccctc ttctgcactc aagttatcca 840

gtttccgatg cacttctccg gttaagccga aggctttcac atcagactta gaaaaccgcc 900

tgcactctct ttacgcccaa taaatccgga taacgcttgc cacctacgta ttaccgcggc 960

tgctggcacg tagttagccg tgactttctg gttaaatacc gtcaacgtat gaacagttac 1020

tctcatacgt gttcttcttt aacaacagag ctttacgagc cgaaaccctt cttcactcac 1080

gcggtgttgc tccatcaggc ttgcgcccat tgtggaagat tccctactgc tgcctcccgt 1140

aggagtatgg gccgtgtctc agtcccattg tggccgatca gtctctcaac tcggctatgc 1200

atcatcgcct tggtaggccg ttaccccacc aacaagctaa tgcaccgcag gtccatccag 1260

aagtgatagc gagaagccat cttttaagtt 1290

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

agagtttgat cctggctcag 20

<210> 3

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

tacggctacc ttgttacgac tt 22

Claims (10)

1.一株发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)CCFM1116，其特征在于，所述发酵乳杆菌保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：60955，保藏日期为2020年01月10日。

2.一种含有权利要求1所述的发酵乳杆菌的微生物制剂。

3.如权利要求2所述的微生物制剂，其特征在于，所述微生物制剂是液体或固体的制剂。

4.如权利要求2或3所述的微生物制剂，其特征在于，所述制剂中的菌浓≥1×10⁹CFU/mL；或者，所述制剂中的菌浓≥1×10⁹CFU/g。

5.权利要求1所述发酵乳杆菌或权利要求2-4任一所述的微生物制剂在制备共轭脂肪酸中或制备含共轭脂肪酸的产品中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述共轭脂肪酸为共轭亚油酸或共轭亚麻酸。

7.一种制备共轭亚油酸的方法，其特征在于，将权利要求1所述的发酵乳杆菌接种至发酵培养基中进行发酵，得到发酵液；将发酵液离心取上清，得到发酵上清液；以发酵上清液为催化剂，以亚油酸为底物，催化制备共轭亚油酸。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述发酵乳杆菌以种子液的形式接种至发酵培养基中；所述种子液在发酵培养基中的接种量占发酵培养基总体积的至少2％。

9.一种制备共轭亚麻酸的方法，其特征在于，将权利要求1所述的发酵乳杆菌接种至发酵培养基中进行发酵，得到发酵液；将发酵液离心取上清，得到发酵上清液；以发酵上清液为催化剂，以亚麻酸为底物，催化制备共轭亚麻酸。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述发酵乳杆菌以种子液的形式接种至发酵培养基中；所述种子液在发酵培养基中的接种量占发酵培养基总体积的至少2％。

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