CN111662296A - 一种含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物及其制备方法和应用，所述含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物，其具有式I所示结构：
其中，X选自氧、酰胺基和亚甲基；Y选自次甲基、取代次甲基和氮；Z选自亚甲基、苄基、哌啶基、吡啶基、吡咯烷基、嘧啶基、咪唑基和噁二唑基；哌啶基为
或
哌啶基的碳端与吡唑的氮端相连；R选自氢、卤素、硝基、氨基、取代氨基、氰基、甲基、甲氧基和三氟甲基；n为0‑7的任意整数；当X为氧、Y为次甲基、Z为
Description
技术领域
本发明涉及有机化合物合成及医药应用领域，具体涉及一种含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
B细胞受体(B cell receptor，BCR)信号通路的异常和过度活化是多种B细胞淋巴瘤生长和存活的关键因素。BTK(Bruton’s tyrosine kinase)是BCR信号通路中的关键激酶，在多种B细胞恶性肿瘤中异常表达，是治疗B细胞恶性肿瘤的重要靶标(参见：Lucas,F.；Woyach,J.A.Inhibiting Bruton’s Tyrosine Kinase in CLL and Other B-CellMalignancies.Target Oncol 2019,14,125-138.)。依鲁替尼(Ibrutinib，IBN)是首个进入临床试验的BTK抑制剂，虽然疗效显著，但易产生耐药性。组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylase，HDAC)参与表观遗传修饰。HDAC抑制剂通过调控细胞周期、诱导细胞凋亡、诱导细胞自噬、调节信号分子通路、抗血管生成]等发挥抗肿瘤作用。伏立诺他(Vorinostat，SAHA)是第一个批准上市的HDAC抑制剂，用于治疗皮肤T细胞淋巴瘤。HDAC抑制剂与BTK抑制剂联合应用具有协同抗淋巴瘤作用，同时抑制BTK和HDAC能增强对B细胞恶性肿瘤的抑制作用，避免耐药性产生，为B细胞恶性肿瘤的疗效提供新的治疗策略。
发明内容
因此，本发明的目的是提供一种含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物及其制备方法和应用，所述含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物对BTK和HDAC酶具有较强的抑制活性和抗细胞增殖活性，可抑制套细胞淋巴瘤细胞的生长能够用于抗肿瘤药物的制备。
具体地，本发明的技术方案如下所述：
在本发明的第一方面，提供了一种含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物，其具有式I所示结构：
其中，X选自氧、酰胺基和亚甲基；
Y选自次甲基、取代次甲基和氮；所述取代次甲基为被C1-C5的烷基所取代的次甲基；
Z选自亚甲基、苄基、哌啶基、吡啶基、吡咯烷基、嘧啶基、咪唑基和噁二唑基；
R选自氢、卤素、硝基、氨基、取代氨基、氰基、甲基、甲氧基和三氟甲基；所述取代氨基为被C1-C5的烷基所取代的氨基；
n为0-7的任意整数；进一步地，n选自0、1、2、3、4、5、6。如无特殊说明，本发明中所提及的n值均为整数值。
进一步地，在本发明的实施方式中，Z为哌啶基时，哌啶基为
哌啶基的碳连接端与吡唑的氮连接端相连。
进一步地，在本发明的实施方式中，Z为苄基
时，苄基的亚甲基端(即a连接端)与吡唑的氮端相连。
进一步地，在本发明的实施方式中，Z为吡咯烷基时，吡咯烷基为
吡咯烷基的碳连接端与吡唑的氮连接端相连。
在本发明的进一步地实施方式中，所述含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物可以进一步具有以下结构，以下通式结构也是发挥活性的必要结构：
其中，Z、R和n如上文中所定义；
更进一步，式II、式III化合物中，Z为亚甲基、苄基、哌啶基或吡咯烷基；R为氢、甲基或三氟甲基；n选自0、1、2、3、4、5。
在本发明的实施方式中，所述含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物，以下通式结构也是发挥活性的必要结构：
其中，n选自0、1、2、3、4、5。
根据经验，相似的结构往往具有相似的或相近的药物活性，然而，发明人在研究过程中发现，Z为哌啶基时，哌啶基接入通式中的位置不同会对活性产生难以预料的结果，比如，式II-B和式II-C中，当n均为1时，两者的区别仅在于在哌啶的4位接入还是3位接入，然而其对BTK、HDAC表现出了不同的选择性，两者对HDAC的抑制活性相当，但是对BTK的抑制活性也具有显著的差异，其中式II-B(n＝1)对BTK的抑制活性IC50值为10.0nM，而式II-C(n＝1)对BTK的抑制活性IC50值为19.0nM，两者对BTK的活性相差近2倍，即式II-B(n＝1)对BTK的抑制效果显著优于II-C(n＝1)。以及，n的取值决定了碳链的长度，常规认识中，相同结构中碳链在一定长度范围内，其活性总是接近的，然而，发明人在研究过程中发现，在式II-C结构中，n＝1时与3≤n≤7，尤其，3≤n≤5时，其对BTK、HDAC表现出了不同的选择性，n＝1时，对BTK的抑制活性显著优于3≤n≤7，然而，对于HDAC的抑制作用，n＝1时，其IC50>10000nM，3≤n≤7时，IC50值在37-144nM之间，3≤n≤7时对于HDAC的抑制作用显著优于n＝1时。因此，在本发明的一些实施方式中，在式II-C结构中，n不为1。
进一步地，在本发明的实施方案中，当X为氧、Y为次甲基、Z为
R为H时，n不为1。
因此，在一些优选的实施方式中，在式II-A结构中，n选自0、1、2、3、4；在式II-B结构中，n选自1、3、4、5；在式II-C结构中，n选自3、4、5；在式II-D结构中，n选自1、3、4、5。
在本发明的实施方式中，所述含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物，式III结构可以进一步为以下结构，以下通式结构也是发挥活性的必要结构：
其中，R为氢、甲基或三氟甲基；n选自0、1、2、3、4、5。
在本发明的实施方式中，所述含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物具有以下结构：
2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-羟基乙酰胺(II-1)；
3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-羟基丙酰胺(II-2)；
4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-羟基丁酰胺(II-3)；
5-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-羟基戊酰胺(II-4)；
6-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-羟基己酰胺(II-5)；
2-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基乙酰胺(II-6)；
4-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基丁酰胺(II-7)；
5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基戊酰胺(II-8)；
6-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基己酰胺(II-9)；
4-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基丁酰胺(II-10)；
5-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基戊酰胺(II-11)；
6-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基己酰胺(II-12)；
2-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-基)-N-羟基乙酰胺(II-13)；
4-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-基)-N-羟基丁酰胺(II-14)；
5-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-基)-N-羟基戊酰胺(II-15)；
6-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-基)-N-羟基己酰胺(II-16)；
4-(4-氨基-1-(2-(羟氨基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-1)；
4-(4-氨基-1-(2-(羟氨基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-2)；
4-(4-氨基-1-(4-(羟氨基)-4-氧代丁基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-3)；
4-(4-氨基-1-(4-(羟氨基)-4-氧代丁基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-4)；
4-(4-氨基-1-(5-(羟基氨基)-5-氧代戊基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-5)；
4-(4-氨基-1-(5-(羟基氨基)-5-氧代戊基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-6)；
4-(4-氨基-1-(6-(羟基氨基)-6-氧代己基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-7)；
4-(4-氨基-1-(6-(羟基氨基)-6-氧代己基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-8)；
4-(4-氨基-1-(4-(羟基氨基甲酰基)苄基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-9)；
4-(4-氨基-1-(4-(羟基氨基甲酰基)苄基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-10)；
4-(4-氨基-1-(1-(2-(羟氨基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-11)；
4-(4-氨基-1-(1-(2-(羟氨基)-2-氧代乙基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-12)；
4-(4-氨基-1-(1-(2-(羟氨基)-2-氧代乙基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-13)；
4-(4-氨基-1-(1-(2-(羟氨基)-2-氧代乙基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-14)；
4-(4-氨基-1-(1-(4-(羟基氨基)-4-氧代丁基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-15)；
4-(4-氨基-1-(1-(4-(羟基氨基)-4-氧代丁基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-16)；
4-(4-氨基-1-(1-(5-(羟基氨基)-5-氧代戊基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-17)；
4-(4-氨基-1-(1-(5-(羟基氨基)-5-氧代戊基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-18)；
4-(4-氨基-1-(1-(6-(羟基氨基)-6-氧代己基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-19)；
4-(4-氨基-1-(1-(4-(羟基氨基)-4-氧代丁基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-20)；
4-(4-氨基-1-(1-(4-(羟基氨基)-4-氧代丁基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-21)；
4-(4-氨基-1-(1-(5-(羟基氨基)-5-氧代戊基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-22)；
4-(4-氨基-1-(1-(6-(羟基氨基)-6-氧代己基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-23)。
在本发明的第二方面，提供了一种制备上述第一方面所述的含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物的方法，其包括：以4-氨基吡唑并[3,4-d]嘧啶即化合物1为起始原料，与溴代试剂反应得3-溴-4-氨基吡唑并[3,4-d]嘧啶即中间体2；中间体2与N-Boc-3-羟基Z或N-Boc-4-羟基Z或1-Boc-3-羟基Z经Mitsunobu反应，得到中间体3；中间体3脱去Boc保护基，得到中间体4；中间体2或4与溴取代的羧酸甲酯经亲核取代得中间体5；中间体5与中间体8发生Suzuki反应得到中间体9；中间体9经氨解反应得通式(I)化合物，所述合成路线如下所示：
其中，X、Y、Z、R、n如上述第一方面中所定义，R’为
进一步地，所述方法以化合物1为起始原料，在N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中与N-溴代丁二酰亚胺(NBS)，加热条件下反应得中间体2；中间体2与N-Boc-3-羟基哌啶或N-Boc-4-羟基哌啶或1-Boc-3-羟基吡咯烷经Mitsunobu反应，得到中间体3；中间体3在浓盐酸下脱去Boc保护基，得到中间体4；中间体2或4与不同溴取代的羧酸甲酯经亲核取代得中间体5；中间体5与中间体8在四(三苯基膦)钯催化下发生Suzuki反应得到中间体9；中间体9在碱性条件下经氨解反应得式I化合物。
进一步地，在本发明的实施方式中，式II化合物的制备方法包括：
(1)将化合物1溶于DMF中，加入NBS，80℃油浴，加热回流反应5h，TLC检测基本反应完全，将反应液自然冷却到室温，倒入冰水中，搅拌，析出大量黄色固体，抽滤，滤饼水洗，干燥，得中间体2。
(2)将中间体2、N-Boc-3-羟基哌啶或N-Boc-4-羟基哌啶或1-Boc-3-羟基吡咯烷和三苯基膦溶于四氢呋喃(THF)中，冰浴冷却，缓慢滴加偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)，冰浴搅拌5min，溶液由浑浊变澄清。TLC检测反应完全，加入乙酸乙酯(EA)萃取，合并有机相，加入食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，得中间体3a-3c。
(3)将中间体3a-3c溶于无水THF中，逐滴加入浓盐酸，室温反应5h，析出白色固体，TLC检测反应完全。抽滤，滤饼用EA洗，干燥，得中间体4a-4c。
(4)将中间体2或4溶于DMF中，加入不同溴代羧酸甲酯，K2CO3，室温搅拌5h，反应毕，将反应液倒入冰水中，有固体析出，过滤，冰水洗涤滤饼三次，干燥滤饼，得中间体5a-5r。
(5)将中间体5a-5r，4-苯氧基苯硼酸(8d)，四三苯基膦钯和磷酸钾三水置于微波管中，加入1，4-二氧六环和水(4:1)溶解，超声脱去溶液中的氧气，120℃微波反应15min。TLC检测基本反应完全，反应液加入EA萃取，合并有机相，加入食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析CH2Cl2:CH3OH＝100:1，得中间体9a。
(6)将氢氧化钾置于茄形瓶，加入无水甲醇超声溶解，得溶液a；取盐酸羟胺于茄形瓶，加入无水甲醇超声溶解，得溶液b。将溶液a缓慢滴入溶液b中，室温反应3小时，过滤沉淀(KCl)，保留滤液羟胺钾溶液，滤液用无水硫酸钠干燥6小时。称取中间体9a于茄形瓶中，加入上述得到的滤液，室温搅拌1h，溶液由浑浊变澄清。TLC检测反应完全，减压蒸除溶剂，反应液加入蒸馏水，用1M的盐酸调pH至5-6，析出固体，过滤，滤饼用乙酸乙酯洗三次，后用甲醇重结晶，干燥，得目标化合物II-1至II-16。
具体地，其合成路线如下所示：
上述合成路线的试剂及条件：(a)NBS,DMF,80℃,5h；(b)N-Boc-3-羟基哌啶/N-Boc-4-羟基哌啶/1-Boc-3-羟基吡咯烷,偶氮二甲酸二异丙酯,三苯基磷,无水四氢呋喃,0℃,5min；(c)四氢呋喃:盐酸＝4:1,r.t.,5h；(d)不同溴取代的羧酸甲酯,K2CO3,DMF,r.t.,5h；(h)四(三苯基膦)钯,三水磷酸钾,1,4-二氧六环:水＝4:1,微波,120℃,15min；(i)盐酸羟胺,KOH,无水甲醇,r.t.,3h。
进一步地，在本发明的实施方式中，式III化合物的制备方法包括：
(1)将化合物1溶于DMF中,加入NBS，80℃油浴，加热回流反应5h，TLC检测基本反应完全，将反应液自然冷却到室温，倒入冰水中，搅拌，析出大量黄色固体，抽滤，滤饼水洗，干燥，得中间体2。
(2)将中间体2、N-Boc-3-羟基哌啶或N-Boc-4-羟基哌啶或1-Boc-3-羟基吡咯烷和三苯基膦溶于THF中，冰浴冷却，缓慢滴加偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)，冰浴搅拌5min，溶液由浑浊变澄清。TLC检测反应完全，加入乙酸乙酯萃取，合并有机相，加入食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，得中间体3a-3c。
(3)将中间体3a-3c溶于无水THF中，逐滴加入浓盐酸，室温反应5h，析出白色固体，TLC检测反应完全。抽滤，滤饼用EA洗，干燥，得中间体4a-4c。
(4)将中间体2或4溶于DMF中，加入不同溴代羧酸甲酯，K2CO3，室温搅拌5h，反应毕，将反应液倒入冰水中，有固体析出，过滤，冰水洗涤滤饼三次，干燥滤饼，得中间体5a-5r。
(5)将4-溴苯甲酸溶于DMF中，加入HBTU和三乙胺，室温活化半小时，然后加入2-氨基吡啶类化合物(6a-6b)，室温反应过夜，TLC检测基本反应完全，将反应液倒入冰水中，搅拌，析出淡黄色固体，抽滤，滤饼水洗，干燥，得中间体7a-7b；将2-氨基吡啶类化合物(6c)、4-溴苯甲酸和三氯氧磷置于100mL茄形瓶中，冰浴搅拌下加入吡啶溶解，继续搅拌5min，TLC检测基本反应完全，将反应液倒入冰水中，搅拌，析出淡黄色固体，抽滤，滤饼水洗，干燥，得中间体7c。
(6)将中间体7a-7c，联硼酸频那醇酯，醋酸钾和四三苯基膦钯置于100ml茄形瓶中，加入1，4-二氧六环溶解，氮气保护，超声脱去溶液中的氧气，用氮气置换装置中的空气，120℃油浴加热回流5h。TLC检测基本反应完全，反应液加入EA萃取，合并有机相，加入食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析乙酸乙酯:石油醚＝50:1，得中间体8a-8c。
(7)将中间体5a-5r，中间体8a-8c，四三苯基膦钯和磷酸钾三水置于微波管中，加入1，4-二氧六环和水(4:1)溶解，超声脱去溶液中的氧气，120℃微波反应15min。TLC检测基本反应完全，反应液加入EA萃取，合并有机相，加入食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析CH2Cl2:CH3OH＝100:1，得中间体9b。
(8)将氢氧化钾置于茄形瓶，加入无水甲醇超声溶解，得溶液a；取盐酸羟胺于茄形瓶，加入无水甲醇超声溶解，得溶液b。将溶液a缓慢滴入溶液b中，室温反应3小时，过滤沉淀(KCl)，保留滤液羟胺钾溶液，滤液用无水硫酸钠干燥6小时。称取中间体9b于茄形瓶中，加入上述得到的滤液，室温搅拌1h，溶液由浑浊变澄清。TLC检测反应完全，减压蒸除溶剂，反应液加入蒸馏水，用1M的盐酸调pH至5-6，析出固体，过滤，滤饼用乙酸乙酯洗三次，后用甲醇重结晶，干燥，得目标化合物III-1至III-23。
具体地，其合成路线如下所示：
上述合成路线中的试剂及条件:(a)NBS,DMF,80℃,5h；(b)N-Boc-3-羟基哌啶/N-Boc-4-羟基哌啶/1-Boc-3-羟基吡咯烷,偶氮二甲酸二异丙酯,三苯基磷,无水四氢呋喃,0℃,5min；(c)四氢呋喃:盐酸＝4:1,r.t.,5h；(d)不同的溴代羧酸甲酯,K2CO3,DMF,r.t.,5h；(e)4-溴苯甲酸,HBTU,Et3N,DMF,r.t.,12h；(f)4-溴苯甲酸,三氯氧磷,吡啶,0℃,5min；(g)联硼酸频那醇酯,醋酸钾,四(三苯基膦)钯,1,4-二氧六环,N2,120℃,5h；(h)四(三苯基膦)钯,三水磷酸钾,1,4-二氧六环:水＝4:1,微波,120℃,15min；(i)盐酸羟胺,KOH,无水甲醇,r.t.,3h.
在本发明的第三方面，提供了一种药物组合物，其包含上述第一方面中所述的含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物。
本发明所述“组合物”指包括治疗有效量的规定成分的药物产品，以及直接或间接地由规定量的规定成分的组合产生的任何产品。
在本发明的第四方面，提供了一种药物制剂，其包含上述第一方面中所述的含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物和至少一种药学上可接受的辅料或载体。
本发明的含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物或含有它的药物组合物或药物制剂可以单位剂量形式给药。给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混旋剂型。其他剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂、包合物、填埋剂、贴剂、擦剂等。
本发明的药物组合或药物制剂中还可以含有常用的载体，这些载体包括但不局限于：离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白如人血清蛋白、缓冲物质(如磷酸盐、甘油、山梨酯、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、盐)或电解质、硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶态氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜂蜡、羊毛酯等。载体在药物组合物或药物制剂中的含量可以是1wt％-98wt％，通常大约占到80wt％。为方便起见，局部麻醉剂、防腐剂、缓冲剂等可直接溶于载体中。
所述药学上可接受的辅料，包括但不限于赋形剂，所述赋形剂可以为粘合剂、填充剂、润滑剂、崩解剂、缓冲剂、稳定剂、防腐剂等等。所述辅料指药物组合物或药物制剂中除有效成分之外的成分，其对受试者无毒，且与药物活性成分可稳定共存或采用适当手段后稳定共存。
口服片剂和胶囊可以含有粘合剂，比如糖浆、阿拉伯胶、山梨醇、黄芪胶或聚乙烯吡咯烷酮；可以含有填充剂，比如乳糖、蔗糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨醇、氨基乙酸；可以含有润滑剂，如硬脂酸镁，滑石，聚乙二醇，硅土；可以含有崩解剂，如马铃薯淀粉，或可接受的增润剂，如月桂醇钠硫酸盐。片剂可以用制药学上公知的方法包衣。
口服液可以制成水和油的悬浮液，溶液，乳浊液，糖浆，也可以制成干品，用前补充水或其它合适的媒质。这种液体制剂可以包含常规的添加剂，如悬浮剂、山梨醇、纤维素甲醚、葡萄糖糖浆、凝胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶、氢化的食用油脂、乳化剂、如卵磷脂、山梨聚糖单油酸盐、阿拉伯树胶；或非水载体(可能包含可食用油)，如杏仁油、油脂如甘油、乙二醇、或乙醇；防腐剂，如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯，山梨酸。如需要可添加调味剂或着色剂。
栓剂可包含常规的栓剂基质，如可可黄油或其它甘油酯。
对于胃肠外投药，液态剂型通常由化合物和一种消毒的载体制成。载体首选水。依照所选载体和药物浓度的不同，化合物既可溶于载体中也可制成悬浮溶液，在制成注射用溶液时先将化合物溶于水中，过滤消毒后装入封口瓶或安瓿中。
在本发明的第五方面，提供了上述第一方面中所述的含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物或上述第三方面中所述的药物组合物在制备BTK抑制剂药物和/或HDAC抑制剂药物中的应用。
在本发明的第五方面，提供了上述第一方面中所述的含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物或上述第三方面中所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用；优选地，所述肿瘤为淋巴瘤，优选为套细胞淋巴瘤。
以及，本发明还提供了一种治疗肿瘤的方法，其包括向受试者施用治疗有效剂量的上述第一方面中所述的含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物或上述第三方面中所述的药物组合物或上述第四方面中所述的药物制剂，所述肿瘤尤其指淋巴瘤，特别是套细胞淋巴瘤；所述受试者术语是指已经是治疗、观察或实验的对象的动物，优选指哺乳动物，最优选指人。所述“治疗有效量”是指包括本发明化合物在内的活性化合物或药剂的量，该量可引起研究者、兽医、医生或其他医疗人员所追求的组织系统、动物或人的生物学或医学响应，这包括减轻或部分减轻受治疗的疾病、综合征、病症或障碍的症状。必须认识到，本发明所述活性成分的最佳给药剂量和间隔是由其性质和诸如给药的形式、路径和部位以及所治疗的特定哺乳动物等外部条件决定的，而这一最佳给药剂量可用常规的技术确定。同时也必须认识到，最佳的疗程，即同时化合物在额定的时间内每日的剂量，可用本领域内公知的方法确定。
本发明具有以下有益效果：本发明所述的含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物对BTK和HDAC酶具有较强的抑制活性和抗细胞增殖活性，可抑制套细胞淋巴瘤细胞的生长能够用于抗肿瘤药物的制备。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。本发明所使用的试剂或原料均可通过常规途径购买获得，如无特殊说明，本发明所使用的试剂或原料均按照本领域常规方式使用或者按照产品说明书使用。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
实施例
实施例1、中间体2的制备
取4-氨基吡唑并[3,4-d]嘧啶(10.00g,74.00mmol)和N-溴代丁二酰亚胺(NBS,15.81g,88.80mmol)于250ml茄形瓶中，加入N,N-二甲基甲酰胺(DMF,40ml)溶解，80℃油浴，加热回流反应5h，溶液由黄色浑浊液体变为红色透明液体。TLC检测基本反应完全，将反应液自然冷却到室温，倒入冰水(300ml)中，搅拌，析出大量黄色固体，抽滤，滤饼水洗，干燥，得中间体2；黄色固体14.63g，产率92％，Mp：270-273℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.77(s,1H),8.18(s,1H),7.95(s,1H),6.86(s,1H)。
实施例2、中间体3的制备
取3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(9.34mmol)和三苯基膦(PPh3,28.03mol)于100ml茄形瓶中，分别加入N-Boc-3-羟基哌啶、N-Boc-4-羟基哌啶或1-Boc-3-羟基吡咯烷(14.02mol)，加入无水四氢呋喃(THF,20ml)搅拌溶解，冰浴冷却，缓慢滴加偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD,28.03mol)，冰浴搅拌5min，溶液由浑浊变澄清。TLC检测反应完全，加入乙酸乙酯(EA,30ml×3)萃取，合并有机相，加入食盐水(20ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析乙酸乙酯:石油醚＝4:1，得中间体3a-3c。
实施例3、中间体4的制备
取中间体3a-3c投于250ml茄形瓶，加入无水THF(20ml)搅拌溶解，将浓盐酸(5ml)逐滴加入茄形瓶中，室温反应5h，析出白色固体，TLC检测反应完全。抽滤，滤饼用EA洗，干燥，得中间体4a-4c。
实施例4、中间体5的制备
取中间体2(5.99mmol)，分别加入溴甲基苯甲酸甲酯/4-溴丁酸甲酯/5-溴戊酸甲酯/6-溴己酸甲酯(7.19mmol)，或中间体4，分别加入4-溴丁酸甲酯/5-溴戊酸甲酯/6-溴己酸甲酯(7.19mmol)，再加入K2CO3粉末(14.99mmol)于100ml茄形瓶中，加入DMF(20ml)搅拌溶解，室温下反应5h。TLC检测反应完全，反应液倒入冷水(50ml)，加入EA(30ml×3)萃取，合并有机相，加入食盐水(20ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析CH2Cl2:CH3OH＝120:1，得中间体5a-5r。
实施例5、中间体7的制备
1.中间体7a的制备
取4-溴苯甲酸(4.70g,23.38mmol)于250ml茄形瓶中，加入DMF(30ml)溶解，加入HBTU(8.86g,23.38mmol)和三乙胺(6.45g,63.75mmol)，室温活化半小时，然后加入2-氨基吡啶(6a,2.00g,21.25mmol)，室温反应过夜。TLC检测基本反应完全，将反应液倒入冰水(250ml)中，搅拌，析出淡黄色固体，抽滤，滤饼水洗，干燥，得中间体7a；白色固体4.12g，产率70％。
2.中间体7b的制备
取4-溴苯甲酸(5.11g,25.43mmol)于250ml茄形瓶中，加入DMF(30ml)溶解，加入HBTU(9.80g,25.43mmol)和三乙胺(10.00g,69.35mmol)，室温活化半小时，然后加入2-氨基-4-甲基吡啶(6b,2.50g,23.12mmol)，室温反应过夜。TLC检测基本反应完全，将反应液倒入冰水(250ml)中，搅拌，析出淡黄色固体，抽滤，滤饼水洗，干燥，得中间体7b；白色固体4.44g，产率66％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.82(s,1H),8.25(d,J＝4.9Hz,1H),8.04(s,1H),7.96(d,J＝7.7Hz,2H),7.73(d,J＝7.7Hz,2H),7.03(d,J＝4.9Hz,1H),2.36(s,3H)。
3.中间体7c的制备
取2-氨基-4-三氟甲基吡啶(6c,2.00g,12.34mol)，4-溴苯甲酸(2.48g,12.34mmol)和三氯氧磷(POCl3,3.78g,24.67mol)于100ml茄形瓶中，冰浴搅拌下加入吡啶(25ml)溶解，有大量白烟生成，冰浴搅拌5min。TLC检测基本反应完全，将反应液倒入冰水(250ml)中，搅拌，析出淡黄色固体，抽滤，滤饼水洗，干燥，得中间体7c；白色固体2.54g，产率60％；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.40(s,1H),8.69(d,J＝5.0Hz,1H),8.53(s,1H),7.98(d,J＝7.8Hz,2H),7.75(d,J＝7.9Hz,2H),7.55(d,J＝5.0Hz,1H)。
实施例6、中间体8的制备
称取中间体7a-7c(14.55mol)，联硼酸频那醇酯(18.94mmol)，醋酸钾(KOAc,43.71mmol)和四三苯基膦钯(Pd(PPh3)4,0.58mol)于100ml茄形瓶中，加入1，4-二氧六环(40ml)溶解，氮气保护，超声脱去溶液中的氧气，用氮气置换装置中的空气，120℃油浴加热回流5h。TLC检测基本反应完全，反应液加入EA(30ml×3)萃取，合并有机相，加入食盐水(20ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析EA:PE＝50:1，得中间体8a-8c。
实施例7、中间体9的制备
1.中间体9a的制备
取中间体5(729.39μmol)，中间体8d(1.46mmol)，四三苯基膦钯(Pd(PPh3)4,36.47μmol)和磷酸钾三水(K3PO4·3H2O,1.46mmol)于35ml微波管中，加入1，4-二氧六环和水(10ml,4:1)溶解，超声脱去溶液中的氧气，120℃微波反应15min。TLC检测基本反应完全，反应液加入EA(30ml×3)萃取，合并有机相，加入食盐水(20ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析CH2Cl2:CH3OH＝100:1，得中间体9a。
2.中间体9b的制备
取中间体5(729.39μmol)，中间体8a-8c(1.46mmol)，四三苯基膦钯(Pd(PPh3)4,36.47μmol)和磷酸钾三水(K3PO4·3H2O,1.46mmol)于35ml微波管中，加入1，4-二氧六环和水(10ml,4:1)溶解，超声脱去溶液中的氧气，120℃微波反应15min。TLC检测基本反应完全，反应液加入EA(30ml×3)萃取，合并有机相，加入食盐水(20ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析CH2Cl2:CH3OH＝100:1，得中间体9b。
实施例8、目标化合物Ⅱ-1至Ⅱ-16、Ⅲ-1至Ⅲ-23的制备
取氢氧化钾(KOH,2.83g,50.40mmol)于25ml茄形瓶，加入7ml无水甲醇超声溶解，得溶液a；称取盐酸羟胺(2.33g,33.5mmol)于25ml茄形瓶，加入12ml无水甲醇超声溶解，得溶液b。将溶液a缓慢滴入溶液b中，室温反应3小时，过滤沉淀(KCl)，保留滤液羟胺钾溶液，滤液用无水硫酸钠干燥6小时。称取中间体9(0.50mmol)于25ml茄形瓶中，加入上述得到的滤液，室温搅拌1h，溶液由浑浊变澄清。TLC检测反应完全，减压蒸除溶剂，反应液加入蒸馏水(10ml)，用1M的盐酸调pH至5-6，析出固体，过滤，滤饼用乙酸乙酯洗三次，后用甲醇重结晶，干燥，得目标化合物Ⅱ-1至Ⅱ-16、化合物Y5、Ⅲ-1至Ⅲ-23。
2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-羟基乙酰胺(化合物Ⅱ-1)
白色固体，产率70％，Mp:178-180℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.83(s,1H),9.01(s,1H),8.21(s,1H),7.59(d,J＝7.9Hz,2H),7.37(t,J＝7.6Hz,3H),7.18-6.90(m,7H),4.84(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ163.76(s),158.08(s),157.73(s),156.69(s),155.57(s),155.32(s),144.39(s),130.63(s,2C),130.47(s,2C),128.06(s),124.34(s),119.55(s,2C),119.41(s,2C),97.71(s),47.56(s).MS(ESI)m/z calcd for C19H16N6O3[M+H]+377.13,found 377.16。
3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-羟基丙酰胺(化合物Ⅱ-2)
白色固体，产率61％，Mp:209-210℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(s,1H),8.81(s,1H),8.27(s,1H),7.67(d,J＝8.5Hz,2H),7.44(t,J＝7.9Hz,2H),7.22–7.11(m,6H),7.04-6.74(m,1H)4.54(t,J＝7.2Hz,2H),2.63(t,J＝7.2Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ166.69(s),158.50(s),157.59(s),156.75(s),156.03(s),154.53(s),143.71(s),130.62(s,2C),130.53(s,2C),128.38(s),124.28(s),119.48(s,2C),119.42(s,2C),97.76(s),43.11(s),32.64(s).MS(ESI)m/z calcd for C20H18N6O3[M+H]+391.14,found 391.14。
4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-羟基丁酰胺(化合物Ⅱ-3)
白色固体，产率56％，Mp:196-198℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.41(s,1H),8.80(s,1H),8.26(s,1H),7.68(d,J＝8.0Hz,2H),7.44(t,J＝7.6Hz,2H),7.27–6.58(m,7H),4.35(t,J＝5.8Hz,2H),2.18–1.95(m,4H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ168.71(s),158.65(s),157.57(s),156.75(s),156.18(s),154.64(s),143.60(s),130.60(s,2C),130.52(s,2C),128.45(s),124.28(s),119.48(s,2C),119.41(s,2C),97.71(s),46.37(s),29.96(s),25.79(s).MS(ESI)m/z calcd for C21H20N6O3[M+H]+405.16,found 405.29。
5-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-羟基戊酰胺(化合物Ⅱ-4)
白色固体，产率72％，Mp:179-180℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.34(s,1H),8.66(s,1H),8.25(s,1H),7.67(d,J＝7.8Hz,2H),7.44(t,J＝7.4Hz,2H),7.25–6.78(m,7H),4.33(t,J＝6.2Hz,2H),1.98(t,J＝7.0Hz,2H),1.88–1.76(m,2H),1.53–1.43(m,2H).13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.30(s),158.65(s),157.55(s),156.77(s),156.16(s),154.61(s),143.51(s),130.60(s,2C),130.50(s,2C),128.49(s),124.26(s),119.47(s,2C),119.43(s,2C),97.63(s),46.42(s),32.24(s),29.19(s),22.91(s).HRMS(ESI)m/z calcdfor C22H22N6O3[M+H]+419.1826,found 419.1828。
6-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-羟基己酰胺(化合物Ⅱ-5)
类白色固体，产率66％，Mp:98-101℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.30(s,1H),8.64(s,1H),8.25(s,1H),7.66(d,J＝8.4Hz,2H),7.45(t,J＝7.6Hz,2H),7.22–7.13(m,5H),4.32(t,J＝6.4Hz,2H),1.93(t,J＝7.2Hz,2H),1.89–1.81(m,2H),1.57–1.49(m,2H),1.29–1.22(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.37(s),158.63(s),157.54(s),156.77(s),156.15(s),154.59(s),143.46(s),130.61(s,2C),130.51(s,2C),128.50(s),124.27(s),119.47(s,2C),119.43(s,2C),97.63(s),46.56(s),32.53(s),29.27(s),26.17(s),25.13(s).HRMS(ESI)m/z calcd for C23H24N6O3[M+H]+433.1983,found 433.1983。
2-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基乙酰胺(化合物Ⅱ-6)
浅黄色固体，产率44％，Mp:142-144℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.49(s,1H),8.80(s,1H),8.24(s,1H),7.67(d,J＝8.0Hz,2H),7.44(t,J＝7.5Hz,2H),7.25-7.08(m,5H),7.06-6.04(m,2H),4.66(s,1H),2.96(s,4H),2.41-2.19(m,4H),1.89(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ166.39(s),158.63(s),157.54(s),156.77(s),155.93(s),154.12(s),143.30(s),130.61(s,2C),130.50(s,2C),128.58(s),124.27(s),119.48(s,2C),119.42(s,2C),97.92(s),59.69(s),54.07(s),52.94(s,2C),31.32(s,2C).MS(ESI)m/z calcdfor C24H25N7O3[M+H]+460.20,found 460.29。
4-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基丁酰胺(化合物Ⅱ-7)
白色固体143mg，产率71％，Mp:116-120℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.39(s,1H),8.69(s,1H),8.24(s,1H),7.67(d,J＝7.9Hz,2H),7.44(t,J＝7.4Hz,2H),7.25–7.10(m,5H),4.72–4.61(m,1H),2.98(d,J＝9.7Hz,2H),2.31(t,J＝6.8Hz,2H),2.24–2.16(m,2H),2.14–2.04(m,2H),2.04–1.97(m,2H),1.89(d,J＝10.9Hz,2H),1.73–1.63(m,2H).13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ171.80(s),160.82(s),159.73(s),158.97(s),158.12(s),156.28(s),145.48(s),132.81(s,2C),132.70(s,2C),130.78(s),126.47(s),121.66(s,2C),121.64(s,2C),100.11(s),59.63(s),56.73(s),54.95(s,2C),33.72(s,2C),32.88(s),25.47(s).HRMS(ESI):calcd for C26H29N7O3[M+H]+488.2405,found488.2407。
5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基戊酰胺(化合物Ⅱ-8)
白色固体139mg，产率69％，Mp:109-111℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.42(s,1H),8.72(s,1H),8.25(s,1H),7.67(d,J＝8.1Hz,2H),7.44(t,J＝7.6Hz,2H),7.21–7.12(m,5H),4.83(s,1H),3.26–3.20(m,2H),2.66(s,4H),2.38–2..30(m,2H),2.04–2.00(m,4H),1.54(s,4H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.38(s),158.65(s),157.61(s),156.74(s),156.03(s),154.22(s),143.54(s),130.62(s,2C),130.52(s,2C),128.44(s),124.30(s),119.49(s,2C),119.43(s,2C),97.94(s),56.82(s),52.95(s),51.95(s,2C),32.35(s,2C),30.17(s),30.07(s),23.17(s).HRMS(ESI):calcd for C27H31N7O3[M+H]+502.2561,found 502.2534。
6-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基己酰胺(化合物Ⅱ-9)
白色固体142mg，产率71％，Mp:63-65℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.36(s,1H),8.24(s,1H),7.67(d,J＝8.1Hz,2H),7.44(t,J＝7.5Hz,2H),7.24–6.87(m,6H),4.73–4.61(m,1H),3.01(d,J＝10.0Hz,2H),2.32(t,J＝6.2Hz,2H),2.26–2.06(m,4H),1.99–1.88(m,4H),1.56–1.41(m,4H),1.29–1.24(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.56(s),158.63(s),157.54(s),156.78(s),155.92(s),154.11(s),143.28(s),130.60(s,2C),130.50(s,2C)128.60(s),124.27(s),119.47(s,2C),119.43(s,2C),97.93(s),58.01(s),54.47(s),52.79(s,2C),32.74(s,2C),31.44(s),26.99(s),26.79(s),25.56(s).HRMS(ESI):calcdfor C28H33N7O3[M+H]+516.2718,found 516.2716。
4-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基丁酰胺(化合物Ⅱ-10)
浅黄色固体，产率62％，Mp:135-137℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.34(s,1H),8.65(s,1H),8.25(s,1H),7.65(d,J＝7.8Hz,2H),7.44(t,J＝7.4Hz,2H),7.28–6.63(m,7H),4.82–4.72(m,1H),3.00(d,J＝8.9Hz,1H),2.87(d,J＝10.4Hz,1H),2.44–2.28(m,3H),2.10–1.89(m,5H),1.81(d,J＝13.5Hz,1H),1.74–1.57(m,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.55(s),158.63(s),157.51(s),156.81(s),156.05(s),154.24(s),143.45(s),130.59(s,2C),130.54(s,2C),128.53(s),124.23(s),119.47(s,2C),119.41(s,2C),97.81(s),58.20(s),57.59(s),53.75(s),53.05(s),30.65(s),30.06(s),24.69(s),22.88(s).HRMS(ESI)m/z calcd for C26H29N7O3[M+H]+488.2405,found 488.2416。
5-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基戊酰胺(化合物Ⅱ-11)
类白色固体，产率48％，Mp:156-158℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.35(s,1H),8.66(s,1H),8.24(d,J＝6.6Hz,1H),7.68–7.59(m,2H),7.48–7.39(m,2H),7.22–7.07(m,5H),4.79-4.71(m,1H),2.99(d,J＝5.6Hz,1H),2.87(d,J＝10.8Hz,1H),2.41–2.28(m,3H),2.01-1.92(m,5H),1.83–1.75(m,1H),1.69–1.58(m,1H),1.52–1.32(m,4H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.47(s),158.63(s),157.51(s),156.82(s),156.06(s),154.24(s),143.44(s),130.60(s,2C),130.54(s,2C),128.53(s),124.24(s),119.48(s,2C),119.41(s,2C),97.79(s),58.26(s),57.89(s),53.77(s),53.13(s),32.56(s),30.06(s),26.29(s),24.73(s),23.54(s).HRMS(ESI)m/z calcd for C27H31N7O3[M+H]+502.2561,found502.2571。
6-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基己酰胺(化合物Ⅱ-12)
类白色固体，产率51％，Mp:137-140℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.31(s,1H),8.64(s,1H),8.25(s,1H),7.65(d,J＝8.0Hz,2H),7.44(t,J＝7.5Hz,2H),7.28–7.05(m,5H),4.83–4.71(m,1H),3.01(d,J＝10.7Hz,1H),2.89(d,J＝10.3Hz,1H),2.43–2.24(m,3H),2.03–1.89(m,4H),1.81(d,J＝12.6Hz,1H),1.70-1.62(m,1H),1.55–1.35(m,4H),1.34–1.18(m,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.54(s),158.63(s),157.51(s),156.82(s),156.05(s),154.24(s),143.43(s),130.60(s,2C),130.53(s,2C),128.54(s),124.24(s),119.47(s,2C),119.41(s,2C),97.80(s),58.31(s),58.25(s),53.76(s),53.17(s),32.71(s),30.04(s),26.99(s),26.51(s),25.55(s),24.72(s).HRMS(ESI)m/z calcd forC28H33N7O3[M+H]+516.2718,found 516.2713.纯度96.8％，保留时间3.184min，25％甲醇/75％水洗脱。
2-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-基)-N-羟基乙酰胺(化合物Ⅱ-13)
黄色固体，产率49％，Mp:120-123℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(s,1H),8.80(s,1H),8.25(s,1H),7.67(d,J＝7.9Hz,2H),7.44(t,J＝7.5Hz,2H),7.27–6.72(m,7H),5.45–5.34(m,1H),3.18-3.05(m,3H),2.95–2.88(m,1H),2.84(s,2H),2.40–2.21(m,2H).13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ166.52(s),158.63(s),157.56(s),156.81(s),156.11(s),154.51(s),143.66(s),130.60(s,2C),130.58(s,2C),128.48(s),124.24(s),119.49(s,2C),119.41(s,2C),98.03(s),58.83(s),56.38(s),55.39(s),53.34(s),30.87(s).MS(ESI)m/zcalcd for C23H23N7O3[M+H]+446.19,found 446.27。
4-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-基)-N-羟基丁酰胺(化合物Ⅱ-14)
白色固体201mg，产率80％，Mp:145-147℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.38(s,1H),8.73(s,1H),8.25(s,1H),7.67(d,J＝7.7Hz,2H),7.44(t,J＝7.1Hz,2H),7.20–7.11(m,5H),5.42–5.35(m,1H),3.14(t,J＝8.0Hz,1H),2.86–2.77(m,1H),2.77–2.65(m,2H),2.44(s,2H),2.35–2.25(m,2H),2.07–2.00(m,2H),1.73–1.64(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.52(s),158.60(s),157.54(s),156.83(s),156.08(s),154.62(s),143.62(s),130.59(s,4C),128.56(s),124.23(s),119.51(s,2C),119.40(s,2C),97.99(s),58.97(s),55.26(s),54.94(s),53.29(s),30.73(s),30.59(s),24.63(s).HRMS(ESI):calcd forC25H27N7O3[M+H]+474.2248,found 474.2233。
5-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-基)-N-羟基戊酰胺(化合物Ⅱ-15)
白色固体230mg，产率86％，Mp:159-161℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),8.69(s,1H),8.25(s,1H),7.67(d,J＝8.3Hz,2H),7.44(t,J＝7.7Hz,2H),7.22–7.10(m,5H),5.45–5.35(m,1H),3.17(s,1H),2.95–2.69(m,3H),2.50–2.48(m,2H),2.41–2.27(m,2H),1.99–1.93(m,2H),1.59–1.38(m,4H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.45(s),158.60(s),157.56(s),156.81(s),156.13(s),154.63(s),143.72(s),130.60(s,4C),128.49(s),124.24(s),119.51(s,2C),119.940(s,2C),97.99(s),58.63(s),55.33(s),54.79(s),53.29(s),32.47(s),30.48(s),27.57(s),23.49(s).HRMS(ESI):calcd forC26H29N7O3[M+H]+488.2405,found 488.2394。
6-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-基)-N-羟基己酰胺(化合物Ⅱ-16)
白色固体166mg，产率83％，Mp:85-87℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.34(s,1H),8.68(s,1H),8.24(s,1H),7.66(d,J＝8.3Hz,2H),7.43(t,J＝7.7Hz,2H),7.21–7.10(m,5H),5.46–5.32(m,1H),3.16(t,J＝8.3Hz,1H),2.88–2.79(m,1H),2.79–2.67(m,2H),2.49–2.42(m,2H),2.37–2.23(m,2H),1.94(t,J＝7.2Hz,2H),1.56–1.40(m,4H),1.35–1.21(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ171.76(s),160.81(s),159.76(s),159.04(s),158.31(s),156.83(s),145.85(s),132.81(s,2C),132.79(s,2C)130.75(s),126.45(s),121.73(s,2C),121.60(s,2C),100.20(s),61.20(s),57.99(s),57.11(s),55.61(s),34.91(s),32.72(s),30.30(s),29.19(s),27.71(s).HRMS(ESI):calcd for C22H22N8O3[M+H]+502.2561,found 502.2551。
2-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基乙酰胺(化合物Y5)
白色固体，产率59.5％。Mp：150-152℃。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.51(s,1H),8.79(s,1H),8.26(s,1H),7.66(d,J＝7.6Hz,2H),7.43(d,J＝7.0Hz,2H),7.24–7.08(m,5H),4.86(s,1H),2.98(s,2H),2.84(d,J＝9.4Hz,1H),2.62(t,J＝10.1Hz,1H),2.24–2.12(m,1H),1.99(s,3H),1.77-1.71(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.16(s),158.64(s),157.53(s),156.81(s),156.07(s),154.25(s),143.53(s),130.57(d,J＝7.1Hz),128.48(s),124.24(s),119.45(d,J＝5.6Hz),97.77(s),59.56(s),57.92(s),53.31(d,J＝27.7Hz),29.57(s),24.49(s).
4-(4-氨基-1-(2-(羟氨基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-1)
白色固体，产率45％，Mp:204-206℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.91(s,1H),10.90(s,1H),9.09(s,1H),8.42(d,J＝4.0Hz,1H),8.29(s,1H),8.29-8.21(m,3H),7.87(t,J＝7.5Hz,1H),7.80(d,J＝8.0Hz,2H),7.40-6.70(m,3H),4.94(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ166.04(s),163.77(s),158.64(s),156.4(s),155.72(s),152.63(s),148.48(s),143.79(s),138.64(s),136.45(s),134.27(s),129.32(s,2C),128.51(s,2C),120.39(s),115.28(s),97.97(s),47.62(s).MS(ESI)m/z calcd for C19H16N8O3[M+H]+405.39,found 405.02。
4-(4-氨基-1-(2-(羟氨基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-2)
白色固体，产率46％，Mp:211-213℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.91(s,1H),10.80(s,1H),9.09(s,1H),8.31-8.24(m,2H),8.21(d,J＝8.1Hz,2H),8.09(s,1H),7.79(d,J＝8.0Hz,2H),7.39-6.57(m,3H),4.94(s,2H),2.38(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ165.94(s),163.77(s),158.64(s),156.41(s),155.72(s),152.67(s),149.32(s),148.09(s),143.80(s),136.41(s),134.35(s),129.27(s,2C),128.51(s,2C),121.40(s),115.65(s),97.92(s),47.70(s),21.43(s).MS(ESI)m/z calcd for C20H18N8O3[M+H]+419.15,found 419.02。
4-(4-氨基-1-(4-(羟氨基)-4-氧代丁基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-3)
白色固体210mg，产率84％，Mp:195-197℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.80(s,1H),10.42(s,1H),8.75(s,1H),8.29(s,1H),8.26(d,J＝4.9Hz,1H),8.20(d,J＝7.9Hz,2H),8.09(s,1H),7.81(d,J＝7.8Hz,2H),7.03(d,J＝4.8Hz,1H),4.38(t,J＝6.3Hz,2H),2.51(s,3H),2.15–1.98(m,4H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ168.80(s),165.95(s),158.65(s),156.27(s),154.83(s),152.67(s),149.32(s),148.08(s),143.27(s),136.60(s),134.28(s),129.24(s,2C),128.59(s,2C),121.39(s),115.65(s),97.88(s),46.53(s),29.97(s),25.75(s),21.43(s).HRMS(ESI):calcd for C22H22N8O3[M+H]+447.1888,found447.1859。
4-(4-氨基-1-(4-(羟氨基)-4-氧代丁基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-4)
白色固体187mg，产率75％，Mp:166-168℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.39(s,1H),10.43(s,1H),8.71(d,J＝5.0Hz,2H),8.58(s,1H),8.29(s,1H),8.23(d,J＝7.9Hz,2H),7.84(d,J＝7.9Hz,2H),7.57(d,J＝4.9Hz,1H),7.01(s,2H),4.38(t,J＝6.5Hz,2H),2.14–1.98(m,4H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ168.77(s),166.72(s),158.66(s),156.29(s),154.85(s),153.74(s),150.43(s),143.19(s),139.31–138.32(q,J＝33.0Hz,1C),136.99(s),133.68(s),129.45(s,2C),128.65(s,2C),127.51–119.36(q,J＝271.0Hz,1C),115.68(s),110.37–110.25(q,J＝4.0Hz,1C),97.89(s),46.53(s),29.96(s),25.74(s).HRMS(ESI):calcd for C22H19F3N8O3[M+H]+501.1605,found501.1581。
4-(4-氨基-1-(5-(羟基氨基)-5-氧代戊基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-5)
白色固体137mg，产率76％，Mp:107-109℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.79(s,1H),10.36(s,1H),8.68(s,1H),8.28(s,1H),8.26(d,J＝5.0Hz,1H),8.20(d,J＝7.9Hz,2H),8.09(s,1H),7.80(d,J＝7.9Hz,2H),7.03(d,J＝4.8Hz,1H),4.37(t,J＝6.5Hz,2H),2.38(s,3H),2.00(t,J＝7.1Hz,2H),1.86–1.81(m,2H),1.53–1.46(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.27(s),165.96(s),158.65(s),156.26(s),154.80(s),152.67(s),149.33(s),148.08(s),143.18(s),136.62(s),134.27(s),129.25(s,2C),128.57(s,2C),121.40(s),115.64(s),97.79(s),46.58(s),32.22(s),29.19(s),22.90(s),21.43(s).HRMS(ESI):calcd for C23H24N8O3[M+H]+461.2044,found 461.2040。
4-(4-氨基-1-(5-(羟基氨基)-5-氧代戊基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-6)
白色固体84mg，产率42％，Mp:178-180℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.40(s,1H),10.37(s,1H),8.71(d,J＝5.1Hz,1H),8.68(s,1H),8.58(s,1H),8.29(s,1H),8.23(d,J＝7.9Hz,2H),7.83(d,J＝8.0Hz,2H),7.57(d,J＝4.9Hz,1H),7.05(s,2H),4.37(t,J＝7.0Hz,2H),2.04–1.98(m,2H),1.86–1.81(m,2H),1.54–1.49(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.27(s),166.72(s),158.62(s),156.22(s),154.81(s),153.73(s),150.42(s),143.12(s),139.30–138.31(q,J＝33.0Hz,1C),137.00(s),133.67(s),129.46(s,2C),128.63(s,2C),127.48-119.36(q,J＝271.0Hz,1C),115.65(s),110.35–11.24(q,J＝4.0Hz,1C),97.81(s),46.60(s),32.22(s),29.18(s),22.90(s).HRMS(ESI):calcd for C23H21F3N8O3[M+H]+515.1762,found 515.1759。
4-(4-氨基-1-(6-(羟基氨基)-6-氧代己基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-7)
白色固体79mg，产率66％，Mp:140-142℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.79(s,1H),10.36(s,1H),8.68(s,1H),8.28(s,1H),8.27(d,J＝4.6Hz,1H),8.20(d,J＝7.9Hz,2H),8.09(s,1H),7.80(d,J＝7.9Hz,2H),7.03(d,J＝4.7Hz,1H),4.36(t,J＝6.6Hz,2H),2.38(s,3H),1.94(t,J＝7.1Hz,2H),1.90–1.82(m,2H),1.57–1.52(m,2H),1.29–1.24(m,2H).13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.44(s),165.96(s),158.63(s),156.24(s),154.78(s),152.66(s),149.33(s),148.08(s),143.14(s),136.63(s),134.26(s),129.24(s,2C),128.58(s,2C),121.40(s),115.65(s),97.79(s),46.73(s),32.54(s),29.27(s),26.17(s),25.12(s),21.43(s).HRMS(ESI):calcd for C24H26N8O3[M+H]+475.2201,found 475.2186。
4-(4-氨基-1-(6-(羟基氨基)-6-氧代己基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-8)
白色固体183mg，产率73％，Mp:148-150℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.40(s,1H),10.33(s,1H),8.71(d,J＝5.1Hz,1H),8.68(s,1H),8.59(s,1H),8.29(s,1H),8.23(d,J＝7.9Hz,2H),7.83(d,J＝7.9Hz,2H),7.57(d,J＝4.9Hz,1H),7.02(s,2H),4.36(t,J＝6.9Hz,2H),1.93(t,J＝7.1Hz,2H),1.89–1.84(m,2H),1.56–1.52(m,2H),1.30–1.24m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.43(s),166.73(s),158.63(s),156.24(s),154.80(s),153.74(s),150.43(s),143.07(s),139.30–138.31(q,J＝33.0Hz,1C),137.03(s),133.66(s),129.46(s,2C),128.64(s,2C),127.51-119.38(q,J＝271.0Hz,1C),115.65(s),110.36–110.24(q,J＝4.0Hz,1C),97.82(s),46.74(s),32.54(s),29.27(s),26.17(s),25.11(s).HRMS(ESI):calcd for C24H23F3N8O3[M+H]+529.1918,found 529.1933。
4-(4-氨基-1-(4-(羟基氨基甲酰基)苄基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-9)
白色固体，产率51％，Mp:226-228℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.19(s,1H),10.90(s,1H),9.05(s,1H),8.41(d,J＝3.9Hz,1H),8.32(s,1H),8.22(t,J＝8.1Hz,3H),7.87(t,J＝7.5Hz,1H),7.80(d,J＝8.0Hz,2H),7.71(d,J＝8.0Hz,2H),7.58-6.57(m,5H),5.65(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ166.02(s),164.42(s),158.71(s),156.64(s),155.09(s),152.62(s),148.46(s),143.93(s),140.56(s),138.64(s),136.40(s),134.32(s),132.66(s),129.31(s,2C),128.61(s,2C),128.02(s,2C),127.72(s,2C),120.38(s),115.27(s),97.95(s),50.08(s).MS(ESI)m/z calcd for C25H20N8O3[M+H]+481.17,found481.08。
4-(4-氨基-1-(4-(羟基氨基甲酰基)苄基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-10)
白色固体，产率39％，Mp:214-216℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.19(s,1H),10.80(s,1H),9.05(s,1H),8.32(s,1H),8.26(d,J＝4.8Hz,1H),8.19(d,J＝8.1Hz,2H),8.09(s,1H),7.80(d,J＝8.1Hz,2H),7.71(d,J＝8.0Hz,2H),7.36(d,J＝8.0Hz,2H),7.03(d,J＝4.5Hz,1H),5.65(s,2H),2.37(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ165.92(s),164.40(s),158.71(s),156.64(s),155.09(s),152.66(s),149.32(s),148.07(s),143.94(s),140.55(s),136.36(s),134.38(s),132.75(s),129.26(s,2C),128.61(s,2C),128.04(s,2C),127.71(s,2C),121.40(s),115.65(s),97.94(s),49.07(s),21.42(s).MS(ESI)m/zcalcd for C26H22N8O3[M+H]+495.18,found 495.09。
4-(4-氨基-1-(1-(2-(羟氨基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-11)
白色固体，产率43％，Mp:211-213℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.79(s,1H),10.54(s,1H),8.84(s,1H),8.27(d,J＝5.3Hz,2H),8.20(d,J＝7.8Hz,2H),8.09(s,1H),7.80(d,J＝7.8Hz,2H),7.03(d,J＝4.7Hz,1H),4.69(s,1H),2.98(s,4H),2.38(s,3H),2.31(d,J＝8.3Hz,4H),1.91(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ166.36(s),165.95(s),158.63(s),156.02(s),154.32(s),152.66(s),149.32(s),148.08(s),142.98(s),136.72(s),134.25(s),129.23(s,2C),128.56(s,2C),121.39(s),115.65(s),98.08(s),59.62(s),54.22(s),52.90(s,2C),31.34(s,2C),21.43(s).MS(ESI)m/z calcd for C25H27N9O3[M+H]+502.22,found 502.32。
4-(4-氨基-1-(1-(2-(羟氨基)-2-氧代乙基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-12)
类白色固体，产率48％，Mp:182-184℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.82(s,1H),10.44(s,1H),8.73(s,1H),8.35(s,1H),8.22(s,1H),8.15(t,J＝7.7Hz,3H),7.89-7.68(m,3H),7.42-6.33(m,3H),4.84(s,1H),2.95-2.92(m,3H),2.78(d,J＝9.8Hz,1H),2.57(t,J＝10.5Hz,1H),2.12(t,J＝10.6Hz,1H),1.93(s,2H),1.72-1.66(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ166.19(s),166.04(s),158.64(s),156.16(s),154.46(s),152.63(s),148.46(s),143.20(s),138.64(s),136.65(s),134.22(s),129.29(s,2C),128.60(s,2C),120.39(s),115.27(s),97.94(s),59.57(s),57.93(s),53.61(s),53.16(s),29.59(s),24.49(s).MS(ESI)m/z calcd for C24H25N9O3[M+H]+488.21,found 488.10。
4-(4-氨基-1-(1-(2-(羟氨基)-2-氧代乙基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-13)
白色固体，产率52％，Mp:189-192℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.79(s,1H),10.53(s,1H),8.82(s,1H),8.30(s,1H),8.26(d,J＝4.7Hz,1H),8.21(d,J＝7.8Hz,2H),8.09(s,1H),7.80(d,J＝7.9Hz,2H),7.03(d,J＝4.4Hz,1H),4.98-4.85(m,1H),3.12-2.93(m,3H),2.86(d,J＝10.1Hz,1H),2.65(t,J＝10.5Hz,1H),2.37(s,3H),2.20(t,J＝10.5Hz,1H),2.01(s,2H),1.86-1.67(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ166.20(s),165.93(s),158.64(s),156.15(s),154.46(s),152.65(s),149.32(s),148.06(s),143.21(s),136.60(s),134.28(s),129.24(s,2C),128.59(s,2C),121.38(s),115.64(s),97.94(s),59.58(s),57.93(s),53.61(s),53.17(s),29.58(s),24.50(s),21.42(s).MS(ESI)m/z calcdfor C25H27N9O3[M+H]+502.22,found 502.11。
4-(4-氨基-1-(1-(2-(羟氨基)-2-氧代乙基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-14)
白色固体，产率47％，Mp:189-202℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.41(s,1H),10.52(s,1H),8.80(s,1H),8.71(s,1H),8.58(s,1H),8.29(s,1H),8.23(d,J＝7.5Hz,2H),7.82(d,J＝7.4Hz,2H),7.58(s,1H),7.43-6.76(m,2H),4.90(s,1H),3.00(s,3H),2.86(s,1H),2.68(s,1H),2.20(s,1H),2.00(s,2H),1.82-1.73(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ166.71,158.64,156.19,156.16,154.48,153.71,150.43,143.21,138.81(q,J＝33Hz,1C),136.95,133.70,129.45,128.66,123.43(q,J＝272Hz,1C),115.69(q,J＝4Hz,1C),110.30(q,J＝5Hz,1C),97.95,59.22,57.65,53.38,53.09,29.45,24.28.MS(ESI)m/z calcd forC25H24FN9O3[M+H]+556.20,found 556.26。
4-(4-氨基-1-(1-(4-(羟基氨基)-4-氧代丁基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-15)
白色固体197mg，产率79％，Mp:175-177℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.76(s,1H),10.61(s,1H),8.86(s,1H),8.30(s,1H),8.25(d,J＝4.9Hz,1H),8.19(d,J＝7.8Hz,2H),8.06(s,1H),7.80(d,J＝7.8Hz,2H),7.02(d,J＝4.7Hz,1H),5.24(s,1H),3.45–3.33(m,4H),3.02(s,2H),2.90(s,1H),2.35(s,3H),2.18–2.04(m,4H),2.02–1.88(m,3H).13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ168.72(s),165.95(s),158.63(s),156.37(s),154.62(s),152.54(s),149.41(s),148.08(s),143.93(s),136.26(s),134.47(s),129.22(s,2C),128.68(s,2C),121.46(s),115.65(s),98.02(s),56.45(s),54.35(s),51.85(s),51.13(s),29.93(s),28.62(s),21.84(s),21.41(s),20.44(s).HRMS(ESI):calcd for C27H31N9O3[M+H]+530.2623,found 530.2609。
4-(4-氨基-1-(1-(4-(羟基氨基)-4-氧代丁基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-16)
白色固体134mg，产率54％，Mp:139-141℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.33(s,1H),10.31(s,1H),8.64(s,2H),8.52(s,1H),8.22(s,1H),8.16(d,J＝4.9Hz,2H),7.76(s,2H),7.49(s,1H),6.95(s,2H),4.76(s,1H),2.97(d,J＝4.2Hz,1H),2.82(d,J＝5.7Hz,1H),2.40–2.22(m,3H),1.93(s,5H),1.74(s,1H),1.60(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.58(s),166.71(s),158.63(s),156.15(s),154.46(s),153.72(s),150.40(s),143.06(s),139.30–138.33(q,J＝33.0Hz,1C),137.02(s),133.66(s),129.44(s,2C),128.65(s,2C),127.50-119.36(q,J＝271.0Hz,1C),115.66(s),110.46–120.20(q,J＝4Hz,1C),97.99(s),58.15(s),57.57(s),53.89(s),53.03(s),30.65(s),30.03(s),24.65(s),22.86(s).HRMS(ESI):calcd for C27H28F3N9O3[M+H]+584.2340,found 584.2328。
4-(4-氨基-1-(1-(5-(羟基氨基)-5-氧代戊基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-17)
白色固体190mg，产率76％，Mp:68-70℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.80(s,1H),10.36(s,1H),8.68(s,1H),8.29(s,1H),8.27(d,J＝5.0Hz,1H),8.20(d,J＝7.8Hz,2H),8.09(s,1H),7.80(d,J＝7.9Hz,2H),7.04(d,J＝4.8Hz,1H),4.89(s,1H),3.34–3.28(m,3H),3.16(s,1H),3.01(s,1H),2.38(s,3H),2.09–2.00(m,2H),1.96(t,J＝5.9Hz,2H),1.87(d,J＝11.8Hz,1H),1.74(s,1H),1.49(s,4H),1.24(s,1H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.45(s),165.94(s),158.65(s),156.22(s),154.49(s),152.66(s),149.34(s),148.08(s),143.31(s),136.55(s),134.31(s),129.23(s,2C),128.61(s,2C),121.41(s),115.64(s),97.96(s),57.58(s),57.35(s),53.52(s),52.84(s),32.47(s),29.68(s),29.49(s),25.86(s),23.37(s),21.44(s).HRMS(ESI):calcd for C28H33N9O3[M+H]+544.2779,found544.2753。
4-(4-氨基-1-(1-(5-(羟基氨基)-5-氧代戊基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-18)
白色固体130mg，产率65％，Mp:158-160℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.40(s,1H),10.34(s,1H),8.71(d,J＝4.1Hz,2H),8.58(s,1H),8.29(s,1H),8.23(d,J＝7.7Hz,2H),7.82(d,J＝7.8Hz,2H),7.57(d,J＝3.9Hz,1H),7.00(s,2H),4.81(s,1H),3.03(d,J＝7.9Hz,1H),2.89(d,J＝8.6Hz,1H),2.46–2.28(m,3H),2.09–1.88(m,5H),1.82(d,J＝12.9Hz,1H),1.68(s,1H),1.56–1.33(m,4H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.53(s),166.72(s),158.64(s),156.17(s),154.47(s),153.74(s),150.42(s),143.05(s),139.30–138.32(q,J＝34.0Hz,1C),137.04(s),133.66(s),129.45(s,2C),128.65(s,2C),127.51-119.36(q,J＝271.0Hz,1C),115.67(s),110.57–110.24(q,J＝4.0Hz,1C),97.98(s),58,24(s),57.88(s),53.94(s),53.12(s),32.58(s),30.05(s),26.29(s),24.72(s),23.53(s).HRMS(ESI):calcd for C28H30F3N9O3[M+H]+598.2497,found 598.2452。
4-(4-氨基-1-(1-(6-(羟基氨基)-6-氧代己基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-19)
白色固体167mg，产率67％，Mp:133-137℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.79(s,1H),10.34(s,1H),8.68(s,1H),8.29(s,1H),8.27(d,J＝4.7Hz,1H),8.20(d,J＝7.8Hz,2H),8.09(s,1H),7.79(d,J＝7.8Hz,2H),7.03(d,J＝4.3Hz,1H),4.87–4.76(m,1H),3.05(d,J＝8.1Hz,1H),2.91(d,J＝9.7Hz,1H),2.48–2.29(m,6H),2.04–1.92(m,4H),1.83(d,J＝12.2Hz,1H),1.68(s,1H),1.57–1.36(m,4H),1.23(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.56(s),165.94(s),158.64(s),156.15(s),154.45(s),152.67(s),149.32(s),148.06(s),143.14(s),136.64(s),134.28(s),129.23(s,2C),128.59(s,2C),121.39(s),115.64(s),97.97(s),58.30(s),58.21(s),53.85(s),53.13(s),32.70(s),30.00(s),26.97(s),26.46(s),25.54(s),24.64(s),21.43(s).HRMS(ESI):calcd for C29H35N9O3[M+H]+558.2936,found 558.2925。
4-(4-氨基-1-(1-(4-(羟基氨基)-4-氧代丁基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-20)
白色固体189mg，产率73％，Mp:170-172℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.79(s,1H),10.58(s,1H),8.88(s,1H),8.31(s,1H),8.27(d,J＝4.3Hz,1H),8.21(d,J＝7.6Hz,2H),8.09(s,1H),7.85(d,J＝7.6Hz,2H),7.04(d,J＝3.7Hz,1H),5.63(s,1H),3.85–3.66(m,2H),3.47(s,2H),3.07(s,3H),2.45–2.35(m,4H),2.10(s,2H),1.90(s,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ168.77(s),165.95(s),158.67(s),156.41(s),154.87(s),152.63(s),149.34(s),148.08(s),143.88(s),136.35(s),134.48(s),129.26(s,2C),128.71(s,2C),121.42(s),115.65(s),98.23(s),57.12(s),54.70(s),54.45(s),53.13(s),30.51(s),30.03(s),22.57(s),21.43(s).HRMS(ESI):calcd for C26H29N9O3[M+H]+516.2466,found516.2491。
4-(4-氨基-1-(1-(4-(羟基氨基)-4-氧代丁基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-21)
白色固体49mg，产率49％，Mp:144-146℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.41(s,1H),10.42(s,1H),8.72(d,J＝4.8Hz,2H),8.59(s,1H),8.30(s,1H),8.24(d,J＝8.0Hz,2H),7.85(d,J＝8.0Hz,2H),7.58(d,J＝4.6Hz,1H),7.05(s,2H),5.53(s,1H),3.54–3.38(m,2H),3.07(s,2H),2.75(s,2H),2.45–2.30(m,2H),2.05(t,J＝7.1Hz,2H),1.85–1.69(m,2H).HRMS(ESI):calcd for C26H26F3N9O3[M+H]+570.2184,found 570.2140。
4-(4-氨基-1-(1-(5-(羟基氨基)-5-氧代戊基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-22)
白色固体82mg，产率54％，Mp:152-154℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.79(s,1H),10.43(s,1H),8.78(s,1H),8.30(s,1H),8.27(d,J＝4.6Hz,1H),8.21(d,J＝7.9Hz,2H),8.09(s,1H),7.82(d,J＝8.0Hz,2H),7.03(d,J＝3.8Hz,1H),5.54(s,1H),3.42–3.33(m,1H),3.12(s,3H),2.81(s,2H),2.45–2.33(m,5H),2.00(s,2H),1.56(s,4H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.36(s),165.94(s),158.64(s),156.30(s),154.84(s),152.65(s),149.35(s),148.06(s),143.61(s),136.48(s),134.41(s),129.24(s,2C),128.67(s,2C),121.41(s),115.64(s),98.19(s),58.06(s),55.14(s),54.73(s),53.31(s),32.37(s),30.49(s),26.83(s),23.22(s),21.43(s).HRMS(ESI):calcd for C27H31N9O3[M+H]+530.2623,found 530.2607。
4-(4-氨基-1-(1-(6-(羟基氨基)-6-氧代己基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(化合物Ⅲ-23)
白色固体196mg，产率74％，Mp:150-152℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.79(s,1H),10.35(s,1H),8.70(s,1H),8.29–8.24(m,2H),8.20(d,J＝7.8Hz,2H),8.09(s,1H),7.80(d,J＝7.9Hz,2H),7.04(d,J＝4.5Hz,1H),5.49–5.37(m,1H),3.23–3.15(m,2H),2.92–2.72(m,3H),2.41–2.29(m,6H),1.95(t,J＝7.2Hz,2H),1.55–1.42(m,4H),1.34–1.23(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.55(s),165.96(s),158.60(s),156.19(s),154.81(s),152.66(s),149.35(s),148.08(s),143.31(s),136.64(s),134.34(s),129.23(s,2C),128.64(s,2C),121.41(s),115.65(s),98.14(s),59.01(s),55.77(s),55.07(s),53.41(s),32.70(s),30.55(s),28.05(s),26.98(s),25.50(s),21.43(s).HRMS(ESI):calcd forC28H33N9O3[M+H]+544.2779,found 544.2773。
实验例
化合物对BTK和HDAC的抑制活性测定及对套细胞淋巴瘤细胞的生长抑制活性测定实验
1、化合物对BTK激酶抑制活性实验：
将测试化合物使用DMSO配制成最终测试浓度50倍的工作液。首先将化合物工作液作为第一组分加入到测试孔中，然后加入用激酶buffer稀释的BTK激酶溶液。加入Mg/ATP。室温下孵育40分钟，加入0.5％的磷酸溶液终止反应。取10μL反应液点到滤纸垫上，使用0.425％磷酸洗涤4次，然后用甲醇洗涤，干燥和闪烁计数。
使用GraphPad Prism6.0软件，以浓度对数为横坐标，抑制率为纵坐标，拟合曲线，计算IC50值，如表1所示。
表1.化合物对BTK的抑制活性
NA＝Not Active；ND＝Not Detected；IBN：依鲁替尼(Ibrutinib)
Y5：2-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基乙酰胺由表1可知，大部分化合物表现出较强的BTK抑制活性，其中，化合物Ⅱ-6、Ⅱ-13和Ⅲ-14对BTK激酶的抑制活性优于Y5；化合物Ⅱ-13对BTK激酶的抑制活性优于IBN；化合物Ⅱ-13对BTK激酶的抑制活性比Y5高2.7倍。
2、化合物对HDAC的抑制活性实验：
取50μL HDAC Buffer加入96空板，随后每孔加入10μL HDACs酶溶液，37℃下孵育5min，接着每孔加入40μL底物溶液，37℃下继续孵育30min，每孔加入100μL终止液终止反应，然后37℃下孵育20min,使用酶标仪测定390/460nm下反应液的荧光强度，数值为阳性对照组荧光度。
将60μL HDAC Buffer和40μL底物溶液混合，37℃下孵育30min，随后加入100μL终止液，37℃下继续孵育20min,使用酶标仪测定390/460nm波长下反应液的荧光强度，数值为空白组的荧光度。
取50μLHDAC Buffer稀释的待测化合物溶液加入96空板，随后每孔加入10μLHDACs酶溶液，37℃下孵育5min，接着每孔加入40μL底物溶液，37℃下继续孵育30min，每孔加入100μL终止液终止反应，然后37℃下孵育20min,使用酶标仪测定390/460nm下反应液的荧光强度，数值为待测化合物该浓度的荧光度。
根据公式计算不同浓度下的抑制率，用GraphPad Prism 6.0软件计算IC50值，如表2所示。
表2.化合物对HDAC的抑制活性
ND＝Not Detected；IBN：依鲁替尼(Ibrutinib)；SAHA：伏立诺他(Vorinostat)
Y5：2-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基乙酰胺
由表2可知，与Y5比较，化合物Ⅱ-4、Ⅱ-5、Ⅱ-10、Ⅱ-11、Ⅱ-12、Ⅱ-13、Ⅱ-14、Ⅱ-16、Ⅲ-7、Ⅲ-8、Ⅲ-9、Ⅲ-10、Ⅲ-17、Ⅲ-18、Ⅲ-19和Ⅲ-23对HDAC抑制活性明显增强；其中化合物Ⅱ-5、Ⅱ-12和Ⅲ-19对HDAC的抑制活性与SAHA相当或稍有提高。
3、化合物对套细胞淋巴瘤细胞生长抑制活性实验
将对数生长期套细胞淋巴瘤细胞株，接种于96孔培养板，加入含不同浓度待测化合物的细胞培养液(终浓度为0.93-60μM)，同时设立阳性对照组和DMSO空白对照组，调整DMSO浓度≤1‰，每个浓度设立3个复孔。将培养板置于37℃，5％CO2恒温培养箱中孵育72h。随后每孔加入30μL
试剂，用多功能检测仪检测其在570nm波长下的发光度值。所测数值与空白对照组进行归一化处理，应用GraphPad Prism 6.0软件计算IC50值，如表3所示。
表3.化合物对MCL细胞株的生长抑制活性
IBN：依鲁替尼(Ibrutinib)
Y5：2-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基乙酰胺
由表3可知，与IBN和Y5比较，大部分化合物对MCL细胞的生长抑制活性有所提高，其中化合物Ⅱ-1、Ⅱ-4、Ⅱ-5、Ⅱ-10、Ⅱ-11、Ⅱ-12、Ⅱ-13、Ⅱ-14、Ⅱ-16、Ⅲ-9、Ⅲ-10和Ⅲ-19对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株的生长抑制活性比Y5和IBN高1.6倍～11倍；化合物Ⅱ-4、Ⅱ-5、Ⅱ-10、Ⅱ-11、Ⅱ-12、Ⅱ-14、Ⅱ-16、Ⅲ-9、Ⅲ-10和Ⅲ-19对套细胞淋巴瘤Mino细胞株的生长抑制活性比Y5高2倍～12倍；化合物Ⅱ-1、Ⅱ-4、Ⅱ-5、Ⅱ-9、Ⅱ-10、Ⅱ-11、Ⅱ-12、Ⅱ-14、Ⅱ-15、Ⅱ-16、Ⅲ-6、Ⅲ-7、Ⅲ-8、Ⅲ-9、Ⅲ-10、Ⅲ-17、Ⅲ-18、Ⅲ-19和Ⅲ-23对套细胞淋巴瘤Z138细胞株的生长抑制活性比Y5高1.5倍～18倍。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物，其具有式I所示结构：
其中，X选自氧、酰胺基和亚甲基；
Y选自次甲基、取代次甲基和氮；所述取代次甲基为被C1-C5的烷基所取代的次甲基；
Z选自亚甲基、苄基、哌啶基、吡啶基、吡咯烷基、嘧啶基、咪唑基和噁二唑基；其中，Z为哌啶基时，哌啶基为
哌啶基的碳连接端与吡唑的氮连接端相连；
R选自氢、卤素、硝基、氨基、取代氨基、氰基、甲基、甲氧基和三氟甲基；所述取代氨基为被C1-C5的烷基所取代的氨基；
n为0-7的任意整数；
并且，当X为氧、Y为次甲基、Z为
R为H时，n不为1。
2.根据权利要求1所述的含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物，其特征在于，Z为苄基时，苄基的亚甲基端与吡唑的氮端相连；
优选地，Z为吡咯烷基时，吡咯烷基为
吡咯烷基的碳连接端与吡唑的氮连接端相连；
优选地，n为0-5的任意整数。
3.根据权利要求1或2所述的含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物，其特征在于，其具有以下结构：
其中，Z、R和n的定义如权利要求1或2中所述；
优选地，Z为亚甲基、苄基、哌啶基或吡咯烷基；
R为氢、甲基或三氟甲基；n选自0、1、2、3、4、5。
4.根据权利要求3所述的含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物，其特征在于，其具有以下结构：
其中，n选自0、1、2、3、4、5。
5.根据权利要求3所述的含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物，其特征在于，其具有以下结构：
其中，R为氢、甲基或三氟甲基；n选自0、1、2、3、4、5。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物，其特征在于，其具有以下结构：
2-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-羟基乙酰胺(II-1)；
3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-羟基丙酰胺(II-2)；
4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-羟基丁酰胺(II-3)；
5-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-羟基戊酰胺(II-4)；
6-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-N-羟基己酰胺(II-5)；
2-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基乙酰胺(II-6)；
4-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基丁酰胺(II-7)；
5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基戊酰胺(II-8)；
6-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基己酰胺(II-9)；
4-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基丁酰胺(II-10)；
5-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基戊酰胺(II-11)；
6-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-N-羟基己酰胺(II-12)；
2-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-基)-N-羟基乙酰胺(II-13)；
4-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-基)-N-羟基丁酰胺(II-14)；
5-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-基)-N-羟基戊酰胺(II-15)；
6-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-基)-N-羟基己酰胺(II-16)；
4-(4-氨基-1-(2-(羟氨基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-1)；
4-(4-氨基-1-(2-(羟氨基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-2)；
4-(4-氨基-1-(4-(羟氨基)-4-氧代丁基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-3)；
4-(4-氨基-1-(4-(羟氨基)-4-氧代丁基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-4)；
4-(4-氨基-1-(5-(羟基氨基)-5-氧代戊基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-5)；
4-(4-氨基-1-(5-(羟基氨基)-5-氧代戊基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-6)；
4-(4-氨基-1-(6-(羟基氨基)-6-氧代己基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-7)；
4-(4-氨基-1-(6-(羟基氨基)-6-氧代己基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-8)；
4-(4-氨基-1-(4-(羟基氨基甲酰基)苄基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-9)；
4-(4-氨基-1-(4-(羟基氨基甲酰基)苄基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-10)；
4-(4-氨基-1-(1-(2-(羟氨基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-11)；
4-(4-氨基-1-(1-(2-(羟氨基)-2-氧代乙基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-12)；
4-(4-氨基-1-(1-(2-(羟氨基)-2-氧代乙基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-13)；
4-(4-氨基-1-(1-(2-(羟氨基)-2-氧代乙基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-14)；
4-(4-氨基-1-(1-(4-(羟基氨基)-4-氧代丁基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-15)；
4-(4-氨基-1-(1-(4-(羟基氨基)-4-氧代丁基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-16)；
4-(4-氨基-1-(1-(5-(羟基氨基)-5-氧代戊基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-17)；
4-(4-氨基-1-(1-(5-(羟基氨基)-5-氧代戊基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-18)；
4-(4-氨基-1-(1-(6-(羟基氨基)-6-氧代己基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-19)；
4-(4-氨基-1-(1-(4-(羟基氨基)-4-氧代丁基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-20)；
4-(4-氨基-1-(1-(4-(羟基氨基)-4-氧代丁基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-21)；
4-(4-氨基-1-(1-(5-(羟基氨基)-5-氧代戊基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-22)；
4-(4-氨基-1-(1-(6-(羟基氨基)-6-氧代己基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-(4-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(III-23)。
7.一种制备权利要求1至6中任一项所述的含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物的方法，其包括：以4-氨基吡唑并[3,4-d]嘧啶即化合物1为起始原料，与溴代试剂反应得3-溴-4-氨基吡唑并[3,4-d]嘧啶即中间体2；中间体2与N-Boc-3-羟基Z或N-Boc-4-羟基Z或1-Boc-3-羟基Z经Mitsunobu反应，得到中间体3；中间体3脱去Boc保护基，得到中间体4；中间体2或4与溴取代的羧酸甲酯经亲核取代得中间体5；中间体5与中间体8发生Suzuki反应得到中间体9；中间体9经氨解反应得通式(I)化合物，所述反应路线如下所示：
其中，X、Y、Z、R、n如权利要求1中所定义，R’为
8.药物组合物，其包含权利要求1至6中任一项所述的含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物。
9.药物制剂，其包含权利要求1至6中任一项所述的含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物和至少一种药学上可接受的辅料或载体。
10.权利要求1至6中任一项所述的含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物或权利要求8所述的药物组合物在制备BTK抑制剂药物和/或HDAC抑制剂药物中的应用；
和/或，权利要求1至6中任一项所述的含吡唑并嘧啶的异羟肟酸衍生物或权利要求8所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用；
优选地，所述肿瘤为淋巴瘤，优选为套细胞淋巴瘤。
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