CN111658594A - 一种具有抗衰老功效的化妆品及其制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有抗衰老功效的化妆品，集成现代生物分离技术、生物酶解技术、混菌微生物发酵技术，研制开发出具有显著抗皮肤衰老功效的护肤化妆品，其原料组成为花卉植物提取液30～60份、玉竹提取液20～40份、水解透明质酸0.4份、聚乙二醇‑400 3份、乳化剂2份、增稠剂1.5份、甘油5份、葡萄籽精油5份、角鲨烷4份、生育酚乙酸酯0.5份、抗坏血酸四异棕榈酸酯0.2份、三乙醇胺0.2份、凝血酸2份、卡波姆0.2份。该产品可以显著增加皮肤透明质酸、羟脯氨酸、总胶原蛋白和弹性蛋白的含量，增加皮肤含水量，提高皮肤组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH‑Px)、丙二醛(MDA)及羟脯氨酸(Hyp)等的含量，显著提高皮肤的抗衰老功效。
Description
技术领域
本发明涉及一种具有抗衰老功效的化妆品，尤其是一种利用花卉类植物和中草药为原料通过微生物协同发酵制备具有显著抗衰老功效的化妆品的制备工艺，具有化妆品生物技术领域。
背景技术
衰老是生命过程的必然规律，是涉及内外多种因素影响及多器官参与的综合过程。皮肤作为人体最大的器官，担负保护、感觉、分泌、排泄、体温调节、免疫调节等作用，伴随年龄增长，皮肤也和其他器官一样逐渐衰老。皮肤衰老主要影响因素分为内因(如年龄、基因突变、细胞新陈代谢、激素环境)和外因(如化学物质、毒素、环境污染、紫外线及离子射线)，其中，外因引起皮肤衰老多是因为日光照射。皮肤衰老的表现为皱纹和色素沉淀增多、皮肤松弛粗糙、无弹性。衰老皮肤的外露，成为人体衰老的外部表现，在机体衰老过程中最容易察觉，且以面部最为明显，加重人们的心理负担，因此，如何延缓皮肤衰老，永葆青春容颜是古今中外各行各业都广泛关注的话题，抗衰老产品具有广阔的市场。
化妆品作为对皮肤具有修饰作用的产品，从古至今一直被人类不断追求。在我国，珍贵的敦煌文献中就曾有大量的关于中草药作为美化、修饰肌肤原料的文献；在西方，传记中也留下了关于牛奶沐浴，鱼胶遮纹的记载。化妆品随着各个时期社会进步发展的变迁，不断地发展蜕变，直至今日已成为全球人人必备的快速消费品。随着科技的迅速发展，一系列的创新型体系的推出，也加速了抗衰老化妆品的持续增长，以满足希望能够通过使用各种抗衰老产品来永葆青春、阻止岁月痕迹的消费者的需求,如专利201811102064.7公开了一种抗衰老面膜，包含以下组分：丁二醇、甘油、1,2-戊二醇、胎盘活性物质、番茄红素发酵提取物、葡萄籽精油、抗坏血酸四异棕榈酸酯、水解透明质酸、乙酰化透明质酸钠、聚季铵盐、甘草酸二钾、生育酚乙酸酯、氢化卵磷脂、山梨醇、卡波姆等；专利CN201910342514.8公开了一种抗衰老面膜，包括以下组分：水解小核菌胶、甘油葡糖苷、α-熊果苷、寡肽-1和大麻二酚；专利201911089922.3公开了一种抗衰老护肤组合物，主要含有西班牙藓苔提取物、精氨酸阿魏酸盐。
综上可以发现目前关于抗衰老护肤品的研究较多，但对于高抗氧化性的化妆品，尤其是利用花卉类植物为主原料的化妆品的研究相对较少，并且现存的抗衰老产品质量参差不齐，不良反应屡见不鲜，使得具有来源天然、不良反应小并且具有悠久历史的花卉类植物和中草药成了美容抗衰老领域的新宠。利用现代生物技术制备抗皮肤衰老的护肤化妆品具有十分重要的意义。
发明内容
为了克服上述现有技术的不足，满足消费者对抗皮肤衰老、美颜护肤的护肤液的需求，本申请提供一种具有抗衰老功效的化妆品，集成现代生物分离技术、生物酶解技术、混菌微生物发酵技术，研制开发出具有显著抗皮肤衰老功效的护肤化妆品。该产品可以显著增加皮肤透明质酸、羟脯氨酸、总胶原蛋白和弹性蛋白的含量，增加皮肤含水量，提高皮肤组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)及羟脯氨酸(Hyp)等的含量。
本发明通过下述技术方案实现上述技术效果：
一种具有抗衰老功效的化妆品，其特征在于原料配伍质量比为花卉植物提取液30～60份、玉竹提取液20～40份、水解透明质酸0.4份、聚乙二醇-4003份、乳化剂2份、增稠剂1.5份、甘油5份、葡萄籽精油5份、角鲨烷4份、生育酚乙酸酯0.5份、抗坏血酸四异棕榈酸酯0.2份、三乙醇胺0.2份、凝血酸2份、卡波姆0.2份。
优选的，一种具有抗衰老功效的化妆品，其特征在于原料配伍质量比为花卉植物提取液35～48份、玉竹提取液30～35份、水解透明质酸0.4份、聚乙二醇-4003份、乳化剂2份、增稠剂1.5份、甘油5份、葡萄籽精油5份、角鲨烷4份、生育酚乙酸酯0.5份、抗坏血酸四异棕榈酸酯0.2份、三乙醇胺0.2份、凝血酸2份、卡波姆0.2份。
最优的，一种具有抗衰老功效的化妆品，其特征在于原料配伍质量比为花卉植物提取液45份、玉竹提取液32份、水解透明质酸0.4份、聚乙二醇-4003份、乳化剂2份、增稠剂1.5份、甘油5份、葡萄籽精油5份、角鲨烷4份、生育酚乙酸酯0.5份、抗坏血酸四异棕榈酸酯0.2份、三乙醇胺0.2份、凝血酸2份、卡波姆0.2份。
上述花卉植物为金银花、月季花和茉莉花中的一种或几种的混合物。
优选的，上述花卉植物为月季花和金银花的混合物，其质量比为3:1。
上述花卉植物提取液的制备方法为：将花卉植物去蒂后洗净晒干后粉碎成植物花粉后过20目筛，将植物花粉与夹带剂95％乙醇混合制备成提取溶液；将提取溶液置于萃取釜中，向萃取釜内输入超临界二氧化碳流体，设置萃取釜压力为24-28MPa，温度为35-55℃，萃取时间为2-4h；溶解有萃出物的超临界二氧化碳流体经减压阀先后进入分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ，设置分离釜Ⅰ压力为6-8MPa，温度为44-48℃，收集萃取液Ⅰ；设置分离釜Ⅱ压力为4-5MPa，温度为32-34℃，收集萃取液Ⅱ；合并萃取液Ⅰ和萃取液Ⅱ得到花卉植物提取液。
优选的，上述花卉植物粉与夹带剂的质量比为1：4-6。
上述乳化剂指的是甘油聚甲基丙烯酸酯、丙二醇、PVM/MA共聚物中的一种或几种的混合物。
上述增稠剂指的是月桂醇聚醚、C13-14异链烷烃、聚丙烯酸钠中的一种或几种的混合物。
上述玉竹提取液通过以下步骤制备：将玉竹原料清除杂质后粉碎，过80-150目筛，然后加入原料质量比5倍的纯净水，在40～60℃条件下浸泡40～60min；加入原料质量比2～3％的纤维素酶、1～2％的非淀粉多糖酶，在微波辅助提取10min，微波功率为250～400W，然后静置30min以上；向酶解后的玉竹酶解液中继续加入3倍纯净水，然后加入发酵液质量比3～5％葡萄糖、0.3～0.5％硫酸铵、0.1～0.2％磷酸二氢钾、0.01％硫酸镁，搅拌均匀；向发酵液中接种芽孢杆菌，接种量分别为发酵液体积比的2～3％；控温28～35℃进行好氧发酵，摇床转速100～150r/min,发酵时间12～24h；发酵结束后固液分离得到玉竹提取液。
优选的，上述芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌中的一种或两种的混合菌，所述地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌均包藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌种保藏编号分别为CGMCC NO.6544、CGMCC NO.8955。
优选的，地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的接种量之比为3:2。
上述枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌种子液制备方法为：在无菌条件下，采用LB培养基在28～32℃条件下培养24h，制得液体枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌种子液，要求种子液的有效活菌数≥109cfu/mL。
本发明提供一种具有抗衰老功效的化妆品，通过如下步骤制备：
(1)原料配伍：按上述比例准确配伍原料；
(2)混合：将花卉植物提取液、玉竹提取液、水解透明质酸、甘油、葡萄籽精油、角鲨烷、生育酚乙酸酯、抗坏血酸四异棕榈酸酯、三乙醇胺、凝血酸混合均匀；
(3)增稠：向混合均匀的原料中加入增稠剂和卡波姆；
(4)乳化：加入聚乙二醇-400和乳化剂，在30～40℃条件下保温30min进行乳化；
(5)均质：在均质机上均质10～20min；
(6)分装：将均质后的均质液分装即得护肤化妆品。
本发明提供一种具有抗衰老功效的化妆品，产品可以显著增加皮肤透明质酸、羟脯氨酸、总胶原蛋白和弹性蛋白的含量，增加皮肤含水量，提高皮肤组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)及羟脯氨酸(Hyp)等的含量，实验结果表明本发明产品可以显著提高皮肤的抗衰老功效，是一种基于花卉植物和玉竹资源化再利用的新型护肤品。以本发明产品对SD大鼠皮肤急性毒性、新西兰兔皮肤刺激性和豚鼠皮肤变态反应性进行了安全性评价。实验结果显示，本发明产品对完整皮肤无毒性反应，对完整皮肤无刺激作用，对豚鼠皮肤变态反应无明显作用，证明本产品安全无毒性，符合我国化妆品的相关规定。
本发明提供一种具有抗衰老功效的化妆品，与现有技术相比，具有以下显著优势：
(1)本申请以花卉植物(金银花、月季花和茉莉花)为主原料，利用超临界二氧化碳萃取法制备花卉植物提取液，显著提升了花卉植物抗皮肤衰老能力，为护肤品的产业发展拓展了新的途径；实验结果表明金银花、月季花和茉莉花醇提取物对DPPH·都有显著的清除作用，其中月季花醇提取物的清除作用高于金银花和茉莉花，这与于佳等人的研究结果是一致的；
(2)本申请集成现代生物分离技术、生物酶解技术、混菌微生物发酵技术，利用好氧菌(枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌)共同发酵玉竹制备玉竹提取液，显著提升玉竹提取液的抗氧化能力，并通过玉竹提取液与花卉植物提取液的协同作用显著提升化妆品的抗皮肤衰老能力；
(3)科学配伍花卉植物提取液和玉竹提取液(护肤、抗衰老)、水解透明质酸钠(保湿)、甘油、葡萄籽精油(保湿)、聚乙二醇-400(乳化)、甘油聚甲基丙烯酸酯/丙二醇/PVM/MA共聚物(乳化)、角鲨烷(护肤)、生育酚乙酸酯(抗氧化)、三乙醇胺(调节酸碱度)、凝血酸(美白)、卡波姆(增稠)等原料，通过原料之间的协同作用，起到嫩肤、护肤、养颜、美白等的功效。
具体实施方式
在本申请中，枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的活化方法如下：在无菌条件下，采用LB培养基在28～32℃条件下培养24h，制得液体枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌种子液，要求种子液的有效活菌数≥109cfu/mL。所述地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌均包藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌种保藏编号分别为CGMCC NO.6544、CGMCC NO.8955。
实施例1
一种具有抗衰老功效的化妆品，具体工艺步骤包括：
(1)花卉植物提取液的制备：将花卉植物去蒂后洗净晒干后粉碎成植物花粉后过20目筛，将植物花粉与夹带剂95％乙醇混合制备成提取溶液；将提取溶液置于萃取釜中，向萃取釜内输入超临界二氧化碳流体，设置萃取釜压力为26MPa，温度为45℃，萃取时间为3h；溶解有萃出物的超临界二氧化碳流体经减压阀先后进入分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ，设置分离釜Ⅰ压力为7MPa，温度为46℃，收集萃取液Ⅰ；设置分离釜Ⅱ压力为4.5MPa，温度为33℃，收集萃取液Ⅱ；合并萃取液Ⅰ和萃取液Ⅱ得到花卉植物提取液；所述花卉植物粉与夹带剂的质量比为1：5；所述花卉植物为月季花和金银花的混合物，其质量比为3:1；
(2)玉竹提取液制备：将玉竹原料清除杂质后粉碎，过80-150目筛，然后加入原料质量比5倍的纯净水，在40～60℃条件下浸泡50min；加入原料质量比2.5％的纤维素酶、1.5％的非淀粉多糖酶，在微波辅助提取10min，微波功率为300W，然后静置30min以上；向酶解后的玉竹酶解液中继续加入3倍纯净水，然后加入发酵液质量比4％葡萄糖、0.4％硫酸铵、0.15％磷酸二氢钾、0.01％硫酸镁，搅拌均匀；向发酵液中接种芽孢杆菌，接种量分别为发酵液体积比的3％；控温28～35℃进行好氧发酵，摇床转速100～150r/min,发酵时间18h；发酵结束后固液分离得到玉竹提取液；上述芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌中的混合菌，所述地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌均包藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌种保藏编号分别为CGMCC NO.6544、CGMCC NO.8955；地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的接种量之比为3:2；
(3)原料配伍：按花卉植物提取液45份、玉竹提取液32份、水解透明质酸0.4份、聚乙二醇-4003份、乳化剂2份、增稠剂1.5份、甘油5份、葡萄籽精油5份、角鲨烷4份、生育酚乙酸酯0.5份、抗坏血酸四异棕榈酸酯0.2份、三乙醇胺0.2份、凝血酸2份、卡波姆0.2份比例准确配伍原料；
(4)混合：将花卉植物提取液、玉竹提取液、水解透明质酸、甘油、葡萄籽精油、角鲨烷、生育酚乙酸酯、抗坏血酸四异棕榈酸酯、三乙醇胺、凝血酸混合均匀；
(5)增稠：向混合均匀的原料中加入增稠剂和卡波姆；
(6)乳化：加入聚乙二醇-400和乳化剂，在30～40℃条件下保温30min进行乳化；
(7)均质：在均质机上均质10～20min；
(8)分装：将均质后的均质液分装即得护肤化妆品。
实施例2
一种具有抗衰老功效的化妆品，具体工艺步骤包括：
(1)花卉植物提取液的制备：将花卉植物去蒂后洗净晒干后粉碎成植物花粉后过20目筛，将植物花粉与夹带剂95％乙醇混合制备成提取溶液；将提取溶液置于萃取釜中，向萃取釜内输入超临界二氧化碳流体，设置萃取釜压力为26MPa，温度为45℃，萃取时间为3h；溶解有萃出物的超临界二氧化碳流体经减压阀先后进入分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ，设置分离釜Ⅰ压力为7MPa，温度为46℃，收集萃取液Ⅰ；设置分离釜Ⅱ压力为4.5MPa，温度为33℃，收集萃取液Ⅱ；合并萃取液Ⅰ和萃取液Ⅱ得到花卉植物提取液；所述花卉植物粉与夹带剂的质量比为1：5；所述花卉植物为月季花；
(2)玉竹提取液制备：将玉竹原料清除杂质后粉碎，过80-150目筛，然后加入原料质量比5倍的纯净水，在40～60℃条件下浸泡50min；加入原料质量比2.5％的纤维素酶、1.5％的非淀粉多糖酶，在微波辅助提取10min，微波功率为300W，然后静置30min以上；向酶解后的玉竹酶解液中继续加入3倍纯净水，然后加入发酵液质量比4％葡萄糖、0.4％硫酸铵、0.15％磷酸二氢钾、0.01％硫酸镁，搅拌均匀；向发酵液中接种芽孢杆菌，接种量分别为发酵液体积比的3％；控温28～35℃进行好氧发酵，摇床转速100～150r/min,发酵时间18h；发酵结束后固液分离得到玉竹提取液；上述芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌中的混合菌，所述地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌均包藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌种保藏编号分别为CGMCC NO.6544、CGMCC NO.8955；地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的接种量之比为3:2；
(3)原料配伍：按花卉植物提取液45份、玉竹提取液32份、水解透明质酸0.4份、聚乙二醇-4003份、乳化剂2份、增稠剂1.5份、甘油5份、葡萄籽精油5份、角鲨烷4份、生育酚乙酸酯0.5份、抗坏血酸四异棕榈酸酯0.2份、三乙醇胺0.2份、凝血酸2份、卡波姆0.2份比例准确配伍原料；
(4)混合：将花卉植物提取液、玉竹提取液、水解透明质酸、甘油、葡萄籽精油、角鲨烷、生育酚乙酸酯、抗坏血酸四异棕榈酸酯、三乙醇胺、凝血酸混合均匀；
(5)增稠：向混合均匀的原料中加入增稠剂和卡波姆；
(6)乳化：加入聚乙二醇-400和乳化剂，在30～40℃条件下保温30min进行乳化；
(7)均质：在均质机上均质10～20min；
(8)分装：将均质后的均质液分装即得护肤化妆品。
实施例3
一种具有抗衰老功效的化妆品，具体工艺步骤包括：
(1)花卉植物提取液的制备：将花卉植物去蒂后洗净晒干后粉碎成植物花粉后过20目筛，将植物花粉与夹带剂95％乙醇混合制备成提取溶液；将提取溶液置于萃取釜中，向萃取釜内输入超临界二氧化碳流体，设置萃取釜压力为26MPa，温度为45℃，萃取时间为3h；溶解有萃出物的超临界二氧化碳流体经减压阀先后进入分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ，设置分离釜Ⅰ压力为7MPa，温度为46℃，收集萃取液Ⅰ；设置分离釜Ⅱ压力为4.5MPa，温度为33℃，收集萃取液Ⅱ；合并萃取液Ⅰ和萃取液Ⅱ得到花卉植物提取液；所述花卉植物粉与夹带剂的质量比为1：5；所述花卉植物为金银花；
(2)玉竹提取液制备：将玉竹原料清除杂质后粉碎，过80-150目筛，然后加入原料质量比5倍的纯净水，在40～60℃条件下浸泡50min；加入原料质量比2.5％的纤维素酶、1.5％的非淀粉多糖酶，在微波辅助提取10min，微波功率为300W，然后静置30min以上；向酶解后的玉竹酶解液中继续加入3倍纯净水，然后加入发酵液质量比4％葡萄糖、0.4％硫酸铵、0.15％磷酸二氢钾、0.01％硫酸镁，搅拌均匀；向发酵液中接种芽孢杆菌，接种量分别为发酵液体积比的3％；控温28～35℃进行好氧发酵，摇床转速100～150r/min,发酵时间18h；发酵结束后固液分离得到玉竹提取液；上述芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌中的混合菌，所述地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌均包藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌种保藏编号分别为CGMCC NO.6544、CGMCC NO.8955；地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的接种量之比为3:2；
(3)原料配伍：按花卉植物提取液45份、玉竹提取液32份、水解透明质酸0.4份、聚乙二醇-4003份、乳化剂2份、增稠剂1.5份、甘油5份、葡萄籽精油5份、角鲨烷4份、生育酚乙酸酯0.5份、抗坏血酸四异棕榈酸酯0.2份、三乙醇胺0.2份、凝血酸2份、卡波姆0.2份比例准确配伍原料；
(4)混合：将花卉植物提取液、玉竹提取液、水解透明质酸、甘油、葡萄籽精油、角鲨烷、生育酚乙酸酯、抗坏血酸四异棕榈酸酯、三乙醇胺、凝血酸混合均匀；
(5)增稠：向混合均匀的原料中加入增稠剂和卡波姆；
(6)乳化：加入聚乙二醇-400和乳化剂，在30～40℃条件下保温30min进行乳化；
(7)均质：在均质机上均质10～20min；
(8)分装：将均质后的均质液分装即得护肤化妆品。
实施例4
一种具有抗衰老功效的化妆品，具体工艺步骤包括：
(1)花卉植物提取液的制备：将花卉植物去蒂后洗净晒干后粉碎成植物花粉后过20目筛，将植物花粉与夹带剂95％乙醇混合制备成提取溶液；将提取溶液置于萃取釜中，向萃取釜内输入超临界二氧化碳流体，设置萃取釜压力为26MPa，温度为45℃，萃取时间为3h；溶解有萃出物的超临界二氧化碳流体经减压阀先后进入分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ，设置分离釜Ⅰ压力为7MPa，温度为46℃，收集萃取液Ⅰ；设置分离釜Ⅱ压力为4.5MPa，温度为33℃，收集萃取液Ⅱ；合并萃取液Ⅰ和萃取液Ⅱ得到花卉植物提取液；所述花卉植物粉与夹带剂的质量比为1：5；所述花卉植物为月季花和金银花的混合物，其质量比为3:1；
(2)玉竹提取液制备：将玉竹原料清除杂质后粉碎，过80-150目筛，然后加入原料质量比5倍的纯净水，在40～60℃条件下浸泡50min；加入原料质量比2.5％的纤维素酶、1.5％的非淀粉多糖酶，在微波辅助提取10min，微波功率为300W，然后静置30min以上；向酶解后的玉竹酶解液中继续加入3倍纯净水，然后加入发酵液质量比4％葡萄糖、0.4％硫酸铵、0.15％磷酸二氢钾、0.01％硫酸镁，搅拌均匀；向发酵液中接种芽孢杆菌，接种量分别为发酵液体积比的3％；控温28～35℃进行好氧发酵，摇床转速100～150r/min,发酵时间18h；发酵结束后固液分离得到玉竹提取液；上述芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌，包藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌种保藏编号分别为CGMCC NO.6544；
(3)原料配伍：按花卉植物提取液45份、玉竹提取液32份、水解透明质酸0.4份、聚乙二醇-4003份、乳化剂2份、增稠剂1.5份、甘油5份、葡萄籽精油5份、角鲨烷4份、生育酚乙酸酯0.5份、抗坏血酸四异棕榈酸酯0.2份、三乙醇胺0.2份、凝血酸2份、卡波姆0.2份比例准确配伍原料；
(4)混合：将花卉植物提取液、玉竹提取液、水解透明质酸、甘油、葡萄籽精油、角鲨烷、生育酚乙酸酯、抗坏血酸四异棕榈酸酯、三乙醇胺、凝血酸混合均匀；
(5)增稠：向混合均匀的原料中加入增稠剂和卡波姆；
(6)乳化：加入聚乙二醇-400和乳化剂，在30～40℃条件下保温30min进行乳化；
(7)均质：在均质机上均质10～20min；
(8)分装：将均质后的均质液分装即得护肤化妆品。
实施例5
一种具有抗衰老功效的化妆品，具体工艺步骤包括：
(1)花卉植物提取液的制备：将花卉植物去蒂后洗净晒干后粉碎成植物花粉后过20目筛，将植物花粉与夹带剂95％乙醇混合制备成提取溶液；将提取溶液置于萃取釜中，向萃取釜内输入超临界二氧化碳流体，设置萃取釜压力为26MPa，温度为45℃，萃取时间为3h；溶解有萃出物的超临界二氧化碳流体经减压阀先后进入分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ，设置分离釜Ⅰ压力为7MPa，温度为46℃，收集萃取液Ⅰ；设置分离釜Ⅱ压力为4.5MPa，温度为33℃，收集萃取液Ⅱ；合并萃取液Ⅰ和萃取液Ⅱ得到花卉植物提取液；所述花卉植物粉与夹带剂的质量比为1：5；所述花卉植物为月季花和金银花的混合物，其质量比为3:1；
(2)玉竹提取液制备：将玉竹原料清除杂质后粉碎，过80-150目筛，然后加入原料质量比5倍的纯净水，在40～60℃条件下浸泡50min；加入原料质量比2.5％的纤维素酶、1.5％的非淀粉多糖酶，在微波辅助提取10min，微波功率为300W，然后静置30min以上；向酶解后的玉竹酶解液中继续加入3倍纯净水，然后加入发酵液质量比4％葡萄糖、0.4％硫酸铵、0.15％磷酸二氢钾、0.01％硫酸镁，搅拌均匀；向发酵液中接种芽孢杆菌，接种量分别为发酵液体积比的3％；控温28～35℃进行好氧发酵，摇床转速100～150r/min,发酵时间18h；发酵结束后固液分离得到玉竹提取液；上述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌，包藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌种保藏编号分别为CGMCC NO.8955；
(3)原料配伍：按花卉植物提取液45份、玉竹提取液32份、水解透明质酸0.4份、聚乙二醇-4003份、乳化剂2份、增稠剂1.5份、甘油5份、葡萄籽精油5份、角鲨烷4份、生育酚乙酸酯0.5份、抗坏血酸四异棕榈酸酯0.2份、三乙醇胺0.2份、凝血酸2份、卡波姆0.2份比例准确配伍原料；
(4)混合：将花卉植物提取液、玉竹提取液、水解透明质酸、甘油、葡萄籽精油、角鲨烷、生育酚乙酸酯、抗坏血酸四异棕榈酸酯、三乙醇胺、凝血酸混合均匀；
(5)增稠：向混合均匀的原料中加入增稠剂和卡波姆；
(6)乳化：加入聚乙二醇-400和乳化剂，在30～40℃条件下保温30min进行乳化；
(7)均质：在均质机上均质10～20min；
(8)分装：将均质后的均质液分装即得护肤化妆品。
实施例6
一种具有抗衰老功效的化妆品，具体工艺步骤包括：
(1)花卉植物提取液的制备：将花卉植物去蒂后洗净晒干后粉碎成植物花粉后过20目筛，将植物花粉与夹带剂95％乙醇混合制备成提取溶液；将提取溶液置于萃取釜中，向萃取釜内输入超临界二氧化碳流体，设置萃取釜压力为26MPa，温度为45℃，萃取时间为3h；溶解有萃出物的超临界二氧化碳流体经减压阀先后进入分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ，设置分离釜Ⅰ压力为7MPa，温度为46℃，收集萃取液Ⅰ；设置分离釜Ⅱ压力为4.5MPa，温度为33℃，收集萃取液Ⅱ；合并萃取液Ⅰ和萃取液Ⅱ得到花卉植物提取液；所述花卉植物粉与夹带剂的质量比为1：5；所述花卉植物为月季花和金银花的混合物，其质量比为3:2；
(2)玉竹提取液制备：将玉竹原料清除杂质后粉碎，过80-150目筛，然后加入原料质量比5倍的纯净水，在40～60℃条件下浸泡50min；加入原料质量比2.5％的纤维素酶、1.5％的非淀粉多糖酶，在微波辅助提取10min，微波功率为300W，然后静置30min以上；向酶解后的玉竹酶解液中继续加入3倍纯净水，然后加入发酵液质量比4％葡萄糖、0.4％硫酸铵、0.15％磷酸二氢钾、0.01％硫酸镁，搅拌均匀；向发酵液中接种芽孢杆菌，接种量分别为发酵液体积比的3％；控温28～35℃进行好氧发酵，摇床转速100～150r/min,发酵时间18h；发酵结束后固液分离得到玉竹提取液；上述芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌中的混合菌，所述地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌均包藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌种保藏编号分别为CGMCC NO.6544、CGMCC NO.8955；地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的接种量之比为3:2；
(3)原料配伍：按花卉植物提取液45份、玉竹提取液32份、水解透明质酸0.4份、聚乙二醇-4003份、乳化剂2份、增稠剂1.5份、甘油5份、葡萄籽精油5份、角鲨烷4份、生育酚乙酸酯0.5份、抗坏血酸四异棕榈酸酯0.2份、三乙醇胺0.2份、凝血酸2份、卡波姆0.2份比例准确配伍原料；
(4)混合：将花卉植物提取液、玉竹提取液、水解透明质酸、甘油、葡萄籽精油、角鲨烷、生育酚乙酸酯、抗坏血酸四异棕榈酸酯、三乙醇胺、凝血酸混合均匀；
(5)增稠：向混合均匀的原料中加入增稠剂和卡波姆；
(6)乳化：加入聚乙二醇-400和乳化剂，在30～40℃条件下保温30min进行乳化；
(7)均质：在均质机上均质10～20min；
(8)分装：将均质后的均质液分装即得护肤化妆品。
实施例7
一种具有抗衰老功效的化妆品，具体工艺步骤包括：
(1)花卉植物提取液的制备：将花卉植物去蒂后洗净晒干后粉碎成植物花粉后过20目筛，将植物花粉与夹带剂95％乙醇混合制备成提取溶液；将提取溶液置于萃取釜中，向萃取釜内输入超临界二氧化碳流体，设置萃取釜压力为26MPa，温度为45℃，萃取时间为3h；溶解有萃出物的超临界二氧化碳流体经减压阀先后进入分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ，设置分离釜Ⅰ压力为7MPa，温度为46℃，收集萃取液Ⅰ；设置分离釜Ⅱ压力为4.5MPa，温度为33℃，收集萃取液Ⅱ；合并萃取液Ⅰ和萃取液Ⅱ得到花卉植物提取液；所述花卉植物粉与夹带剂的质量比为1：5；所述花卉植物为月季花和金银花的混合物，其质量比为3:1；
(2)玉竹提取液制备：将玉竹原料清除杂质后粉碎，过80-150目筛，然后加入原料质量比5倍的纯净水，在40～60℃条件下浸泡50min；加入原料质量比2.5％的纤维素酶、1.5％的非淀粉多糖酶，在微波辅助提取10min，微波功率为300W，然后静置30min以上；向酶解后的玉竹酶解液中继续加入3倍纯净水，然后加入发酵液质量比4％葡萄糖、0.4％硫酸铵、0.15％磷酸二氢钾、0.01％硫酸镁，搅拌均匀；向发酵液中接种芽孢杆菌，接种量分别为发酵液体积比的3％；控温28～35℃进行好氧发酵，摇床转速100～150r/min,发酵时间18h；发酵结束后固液分离得到玉竹提取液；上述芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌中的混合菌，所述地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌均包藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌种保藏编号分别为CGMCC NO.6544、CGMCC NO.8955；地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的接种量之比为1:1；
(3)原料配伍：按花卉植物提取液45份、玉竹提取液32份、水解透明质酸0.4份、聚乙二醇-4003份、乳化剂2份、增稠剂1.5份、甘油5份、葡萄籽精油5份、角鲨烷4份、生育酚乙酸酯0.5份、抗坏血酸四异棕榈酸酯0.2份、三乙醇胺0.2份、凝血酸2份、卡波姆0.2份比例准确配伍原料；
(4)混合：将花卉植物提取液、玉竹提取液、水解透明质酸、甘油、葡萄籽精油、角鲨烷、生育酚乙酸酯、抗坏血酸四异棕榈酸酯、三乙醇胺、凝血酸混合均匀；
(5)增稠：向混合均匀的原料中加入增稠剂和卡波姆；
(6)乳化：加入聚乙二醇-400和乳化剂，在30～40℃条件下保温30min进行乳化；
(7)均质：在均质机上均质10～20min；
(8)分装：将均质后的均质液分装即得护肤化妆品。
实施例8测定实施例化护肤化妆品抗氧化能力
试验分组：试验分为实施例1-5试验组、对照1组(原料仅不含花卉植物提取液，以纯净水替代，其余同实施例1)、对照2组(玉竹提取液制备工艺中不含发酵步骤，其余同实施例1)；
测定指标：
(1)DPPH清除能力测定：取不同的样品溶液于96微孔板中，分别加入0.4mmol/LDPPH溶液15μL，再加入100μL水，混匀后避光保存30min，置于酶标仪517nm波长处测定吸光度值。清除率(％)＝(1-(A1-A2)/A0)×100。式中：A0为只加DPPH溶液的吸光度；A1为加样品和DPPH溶液的吸光度；A2为无水乙醇代替DPPH溶液吸光度；
(2)·O2 -清除能力测定：取不同浓度的样品溶液于96微孔板中，分别加入0.15mmol/L NBT溶液50μL、0.46mmol/L还原型辅酶Ι溶液50μL和0.06mmol/L PMS溶液50μL。混匀后于25℃水浴5min，置于酶标仪560nm波长处测定吸光度。清除率(％)＝(1-(A1-A2)/A0)×100。式中：A0为空白对照实验(水代替多糖溶液)的吸光度；A1为样品实验的吸光度；A2为0.2mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH7.0)代替NBT溶液的吸光度；
(3)·OH清除能力的测定：取不同的样品溶液于96微孔板中，分别加入0.75mmol/L邻二氮菲50μL、pH7.4的0.2mol/L PBS缓冲液100μL、0.75mmol/L FeSO4溶液50μL以及体积分数0.01％H2O2溶液50μL。混匀后于37℃水浴下放置30min，在536nm波长处检测吸光度。清除率(％)＝(1-(A1-A2)/A0)×100。式中：A0为蒸馏水代替样品的吸光度；A1为样品反应后的吸光度；A2为样品和蒸馏水替代H2O2的吸光度；
表1 不同工艺条件对抗衰老化妆品抗氧化能力的影响
上述实验结果表明本申请化妆品具有较强的抗氧化能力，其中花卉植物原料的选择及玉竹发酵菌种的组成对产品的抗氧化能力具有较显著的影响。综合比较，实施例1为本发明最佳实施例。
实施例9
测定实施例中抗衰老化妆品对裸鼠皮肤衰老的影响，动物分组及模型制作方法为：雄性裸鼠按体质量分层，随机分为正常对照组、模型组、实施例1-7试验组，每组10只。模型组及各样品组每天颈背皮下注射10％D-半乳糖1.0g.kg-1，并以波长350～400nm的紫外灯于40cm垂直高处照射40min，持续造模40d；正常对照组注射等体积生理盐水及给予正常光照。于造模第11d开始，各组在裸鼠皮肤涂抹相应样品，正常对照组和模型组给予等体积生理盐水涂抹，每天2次，连续30d；
生化指标测定：末次给药后处死动物取背部皮肤1cm×1cm，剪碎后加入9倍生理盐水制成10％(m/v)皮肤匀浆，900×g离心10min后取上清液备用。按试剂盒说明书方法测定皮肤中透明质酸、羟脯氨酸、总胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白和弹性蛋白的含量；
皮肤中含水量测定：于实验结束时取部分背部皮肤1cm×1cm，去除表皮与皮下组织，精密称定，为皮肤湿质量；于80℃温箱中烘干48h，精密称定，为皮肤干质量。按下列公式计算皮肤含水量:皮肤含水量(％)＝(皮肤湿质量－皮肤干质量)/皮肤湿质量×100％；
试验结果如下：
表2 化妆品对裸鼠皮肤衰老的影响
上述实验结构表明实施例1对裸鼠的抗皮肤效果与正常组差异不显著，与模型组差异极显著。改变化妆品原料组成及发酵菌种会显著降低产品的抗皮肤衰老效果。
以上实施例仅用于说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对被发明进行了详细的说明，但对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而对这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。
Claims (10)
1.一种具有抗衰老功效的化妆品，其特征在于原料配伍质量比为花卉植物提取液30～60份、玉竹提取液20～40份、水解透明质酸0.4份、聚乙二醇-400 3份、乳化剂2份、增稠剂1.5份、甘油5份、葡萄籽精油5份、角鲨烷4份、生育酚乙酸酯0.5份、抗坏血酸四异棕榈酸酯0.2份、三乙醇胺0.2份、凝血酸2份、卡波姆0.2份。
2.根据权利要求1所述的一种具有抗衰老功效的化妆品，其特征在于原料配伍质量比为花卉植物提取液35～48份、玉竹提取液30～35份、水解透明质酸0.4份、聚乙二醇-400 3份、乳化剂2份、增稠剂1.5份、甘油5份、葡萄籽精油5份、角鲨烷4份、生育酚乙酸酯0.5份、抗坏血酸四异棕榈酸酯0.2份、三乙醇胺0.2份、凝血酸2份、卡波姆0.2份。
3.根据权利要求1所述的一种具有抗衰老功效的化妆品，其特征在于原料配伍质量比为花卉植物提取液45份、玉竹提取液32份、水解透明质酸0.4份、聚乙二醇-400 3份、乳化剂2份、增稠剂1.5份、甘油5份、葡萄籽精油5份、角鲨烷4份、生育酚乙酸酯0.5份、抗坏血酸四异棕榈酸酯0.2份、三乙醇胺0.2份、凝血酸2份、卡波姆0.2份。
4.根据权利要求1所述的一种具有抗衰老功效的化妆品，其特征在于所述花卉植物提物液为金银花、月季花和茉莉花中的一种或几种的混合物。
5.根据权利要求4所述的一种具有抗衰老功效的化妆品，其特征在于所述花卉植物提取液的制备方法为：将花卉植物去蒂后洗净晒干后粉碎成植物花粉后过20目筛，将植物花粉与夹带剂95％乙醇混合制备成提取溶液；将提取溶液置于萃取釜中，向萃取釜内输入超临界二氧化碳流体，设置萃取釜压力为24-28MPa，温度为35-55℃，萃取时间为2-4h；溶解有萃出物的超临界二氧化碳流体经减压阀先后进入分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ，设置分离釜Ⅰ压力为6-8MPa，温度为44-48℃，收集萃取液Ⅰ；设置分离釜Ⅱ压力为4-5MPa，温度为32-34℃，收集萃取液Ⅱ；合并萃取液Ⅰ和萃取液Ⅱ得到花卉植物提取液；所述花卉植物粉与夹带剂的质量比为1：4-6。
6.根据权利要求1所述的一种具有抗衰老功效的化妆品，其特征在于所述乳化剂指的是甘油聚甲基丙烯酸酯、丙二醇、PVM/MA共聚物中的一种或几种的混合物。
7.根据权利要求1所述的一种具有抗衰老功效的化妆品，其特征在于所述增稠剂指的是月桂醇聚醚、C13-14异链烷烃、聚丙烯酸钠中的一种或几种的混合物。
8.根据权利要求1所述的一种具有抗衰老功效的化妆品，其特征在于所述玉竹提取液通过以下步骤制备：将玉竹原料清除杂质后粉碎，过80-150目筛，然后加入原料质量比5倍的纯净水，在40～60℃条件下浸泡40～60min；加入原料质量比2～3％的纤维素酶、1～2％的非淀粉多糖酶，在微波辅助提取10min，微波功率为250～400W，然后静置30min以上；向酶解后的玉竹酶解液中继续加入3倍纯净水，然后加入发酵液质量比3～5％葡萄糖、0.3～0.5％硫酸铵、0.1～0.2％磷酸二氢钾、0.01％硫酸镁，搅拌均匀；向发酵液中接种芽孢杆菌，接种量分别为发酵液体积比的2～3％；控温28～35℃进行好氧发酵，摇床转速100～150r/min,发酵时间12～24h；发酵结束后固液分离得到玉竹提取液。
9.根据权利要求8所述的一种具有抗衰老功效的化妆品，其特征在于所述芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌中的一种或两种的混合菌，所述地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌均包藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌种保藏编号分别为CGMCC NO.6544、CGMCCNO.8955。
10.根据权利要求1所述的一种具有抗衰老功效的化妆品，其特征在于所述具有抗衰老功效的化妆品通过如下步骤制备：
(1)原料配伍：按上述比例准确配伍原料；
(2)混合：将花卉植物提取液、玉竹提取液、水解透明质酸、甘油、葡萄籽精油、角鲨烷、生育酚乙酸酯、抗坏血酸四异棕榈酸酯、三乙醇胺、凝血酸混合均匀；
(3)增稠：向混合均匀的原料中加入增稠剂和卡波姆；
(4)乳化：加入聚乙二醇-400和乳化剂，在30～40℃条件下保温30min进行乳化；
(5)均质：在均质机上均质10～20min；
(6)分装：将均质后的均质液分装即得护肤化妆品。
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