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CN111560335B - 一株用于缓解哮喘的乳双歧杆菌及其应用 - Google Patents

一株用于缓解哮喘的乳双歧杆菌及其应用 Download PDF

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Abstract

本申请提供了一株用于缓解哮喘的乳双歧杆菌Probio‑M8及其应用，所述乳双歧杆菌Probio‑M8具有缓解哮喘的作用，所述乳双歧杆菌Probio‑M8在缓解哮喘中的应用包括制备直投式发酵剂和功能性药物辅助材料，在所述缓解哮喘的应用中，所述乳双歧杆菌Probio‑M8的活菌数量≥1×106CFU/g。

Description

一株用于缓解哮喘的乳双歧杆菌及其应用
技术领域
本申请涉及微生物技术领域，尤其涉及一株用于缓解哮喘的乳双歧杆菌及其应用。
背景技术
哮喘是一种常见的呼吸道疾病，具有反复性发作的特点，发病时较为急剧，表现为咳嗽、胸闷和呼吸困难，治疗不及时则会危及生命安全。我国成人哮喘患病率为1.24%，该病好发于有哮喘家族史、有合并症、肥胖、吸烟和变应原暴露等人群。由于城市化和生活方式的改变，哮喘患病率呈逐年上升趋势。根据WHO在线死亡数据库分析，5-34岁年龄组哮喘死亡数据显示，哮喘全球死亡率为0.19/10万人。
哮喘不易根治，一般采取药物进行治疗，传统上常用激素类药物治疗哮喘，能缓解患者病情，但会带来一定的副作用。例如可能会导致心律失常，引发心血管不良反应，也可引起骨质疏松症，高血压，白内障、青光眼等。
因此，需要一种不带有副作用的产品来缓解和治疗哮喘。
发明内容
本申请的目的在于提供一株用于缓解哮喘的乳双歧杆菌Probio-M8，所述乳双歧杆菌Probio-M8是从中国健康妇女母乳中分离得到的。
本申请提供的乳双歧杆菌Probio-M8已于2019年9月20日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏编号为CGMCC No.18610，分类命名为乳双歧杆菌Bifidobacterium lactis，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
本申请提供的一株用于缓解哮喘的乳双歧杆菌Probio-M8，所述乳双歧杆菌Probio-M8能够缓解哮喘。
本申请的另一目的在于提供一种乳双歧杆菌Probio-M8在制备缓解哮喘产品中的应用。
可选的，乳双歧杆菌Probio-M8制备的缓解哮喘产品中所述乳双歧杆菌Probio-M8的活菌数活菌数量≥1×106CFU/g。
可选的，所述的用于缓解哮喘的产品中所述的乳双歧杆菌Probio-M8的活菌数量≥1×106CFU/g。
在一种可实现的方式中，所述功能性药用辅助材料包含溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂以及释放阻滞剂。
在一种可实现的方式中，缓解哮喘的产品还包括附加剂，所述附加剂包含微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素以及精制卵磷脂。
在一种可实现的方式中，缓解哮喘的产品还包括药品，所述药品的剂型包含颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。
本申请提供了一株用于缓解哮喘的乳双歧杆菌Probio-M8及其应用，所述乳双歧杆菌Probio-M8具有缓解哮喘的作用，具体体现在：显著改善哮喘患者的临床症状；显著降低患者克雷伯氏肺炎菌的丰富度；显著增加患者肠道动物双歧杆菌的丰富度；显著降低患者醛固酮合成和分泌的代谢途径。因此，乳双歧杆菌Probio-M8可通过调节肠道菌群改善机体内细胞因子，达到良好的免疫功能，有效缓解哮喘症状，在制备缓解 哮喘的产品中具有很大的前景。
附图说明
为了更清楚地说明本申请的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1 为乳双歧杆菌Probio-M8缓解哮喘的影响实验设计流程图；
图2 为乳双歧杆菌Probio-M8对哮喘患者ACT的影响；
图3 为乳双歧杆菌Probio-M8对哮喘患者FeNO的影响；
图4为乳双歧杆菌Probio-M8对哮喘患者克雷伯氏肺炎菌的影响；
图5为乳双歧杆菌Probio-M8对哮喘患者肠道动物双岐杆菌的影响；
图6 为服用乳双歧杆菌Probio-M8后哮喘患者的代谢功能差异分析。
具体实施方式
下面将详细地对实施例进行说明，其示例表示在附图中。下面的描述涉及附图时，除非另有表示，不同附图中的相同数字表示相同或相似的要素。以下实施例中描述的实施方式并不代表与本申请相一致的所有实施方式。仅是与权利要求书中所详述的、本申请的一些方面相一致的系统和方法的示例。
益生菌能够平衡人体菌群结构，具有促进抗原降解，调节促炎和抗炎因子等免疫功能。肠道菌群是人体内数量最多、结构组成最复杂的菌群，与免疫稳态的建立、稳定及免疫系统功能的正常发挥密切相关。益生菌可以竞争性抑制肠道潜在病原菌的定植，稳定肠道黏膜屏障，阻止病原体进入肠上皮细胞。口服益生菌到达肠道后，可定植于肠道并调节宿主肠道菌群结构。肠道微生物通过随着血液循环流动的免疫细胞及微生物代谢产物直接影响肺部的微生物菌群，促进机体释放细胞因子并增强免疫细胞活性，参与机体代谢，防止肺部炎症恶化，起到缓解哮喘的作用。
一方面，本申请提供一株用于缓解哮喘的乳双歧杆菌Probio-M8，所述乳双歧杆菌Probio-M8能够有效缓解哮喘，所述乳双歧杆菌Probio-M8是从100份中国健康妇女母乳样品中分离得到的540株乳酸菌和双岐杆菌中筛选出的一株具有潜在益生特性的益生菌，是一株具有良好的胃肠液和胆盐耐受性的益生菌菌株。
本申请提供的乳双歧杆菌Probio-M8已于2019年9月20日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏编号为CGMCC No.18610，分类命名为乳双歧杆菌Bifidobacterium lactis，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；所述菌株的检测结果为存活。
另一方面，本申请提供乳双歧杆菌Probio-M8在制备缓解哮喘产品中的应用。
所述的乳双歧杆菌Probio-M8制备的缓解哮喘产品中所述乳双歧杆菌Probio-M8的活菌数活菌数量≥1×106CFU/g。
所述的用于缓解哮喘的产品中所述的乳双歧杆菌Probio-M8的活菌数量≥1×106CFU/g。
在一种可实现的方式中，所述功能性药用辅助材料包含溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂以及释放阻滞剂。
在一种可实现的方式中，缓解哮喘的产品还包括附加剂，所述附加剂包含微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素以及精制卵磷脂。
在一种可实现的方式中，缓解哮喘的产品还包括药品，所述药品的剂型包含颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。
本申请提供了一株用于缓解哮喘的乳双歧杆菌Probio-M8及其应用，所述乳双歧杆菌Probio-M8具有缓解哮喘的作用，具体体现在：显著改善哮喘患者的临床症状；显著降低患者克雷伯氏肺炎菌的丰富度；显著增加患者肠道动物双歧杆菌的丰富度；显著降低患者醛固酮合成和分泌的代谢。因此，乳双歧杆菌Probio-M8可通过调节肠道菌群改善机体内细胞因子，达到良好的免疫功能，有效缓解哮喘症状，在制备缓解 哮喘的产品中具有很大的前景。
本发明实施例中试验方法和条件如无特别说明均为常规方法。
实施例： 乳双歧杆菌Probio-M8哮喘人群临床试验
1试验方法
乳双歧杆菌Probio-M8为革兰氏阳性菌，琼脂平板生成直径为1-2 mm的凸圆形乳白色菌落，边缘完整，表面光滑。细胞形态呈哑铃状杆菌，两端规则，有许多明显节点，所述双歧杆菌Probio-M8为异型发酵。
招募36名志愿者，包括18名男性和18名女性，年龄为28-61岁之间。将36名志愿者随机分为安慰剂组（20名）和益生菌组（16名），进行90天干预。在第0天、30天、60天和90天分别检测了16项与呼吸系统疾病密切相关的指标并采集粪便样品和血液样品。结合临床指标、代谢组学和宏基因组学等分析结果，综合评估乳双歧杆菌Probio-M8对成人哮喘症的影响。具体实验方案参见图1。
2.乳双歧杆菌Probio-M8改善哮喘临床症状
在食用乳双歧杆菌Probio-M8固体饮料的第0天、30天、60天和90天，分别检测了与呼吸系统疾病密切相关的指标。其中，ACT表示哮喘控制测试评分，FeNO表示呼出气一氧化氮浓度值（正常值成人小于25ppb，儿童小于20ppb），CaNO表示肺泡一氧化氮浓度值（正常值一般低于5ppb）。
根据图2可知，ACT指标随着乳双歧杆菌Probio-M8干预治疗的进行持续升高，在治疗90天时，该指标显著高于0天（P=0.019），说明乳双歧杆菌Probio-M8可有效控制哮喘症状；根据图3可知，FeNO在治疗30天时均显著下降，其浓度与炎症高度相关联，FeNO浓度的显著下降表明患者的气道炎症显著改善； CaNO与小气道炎症相关联，乳双歧杆菌Probio-M8治疗90天后，CaNO浓度明显降低，这说明乳双歧杆菌Probio-M8治疗后患者气道炎症程度显著低于安慰剂组。其中图2和图3的横坐标为组，纵坐标为天数。
综上所述，乳双歧杆菌Probio-M8可改善哮喘患者的临床症状。
3.乳双歧杆菌Probio-M8对哮喘患者菌群结构的影响
提取粪便样品DNA，将符合测序要求的DNA依次进行随机片段化、末端修复、连接接头盒构建文库，之后利用Illumina GAIIx和HiSeq 2000对样品进行测序，以分析益生菌对菌群功能基因及代谢通路的影响。
克雷伯氏肺炎菌是导致肺炎和哮喘的重要致病菌之一，根据图4可知，食用乳双歧杆菌Probio-M8固体饮料后，患者的克雷伯氏肺炎菌（Klebsiella pneumoniae）丰富度降低，由此推断乳双歧杆菌Probio-M8可能通过降低克雷伯氏肺炎菌缓解哮喘症状。
与安慰剂组相比，乳双歧杆菌Probio-M8干预治疗后，肠道菌群与临床指标的关联网络发生改变。根据图5可知，益生菌组患者的动物双岐杆菌在不同服用阶段检测丰度均增加，且该菌种与多个临床指标呈现出相关性，这表明临床症状的改善可能与双歧杆菌有关。
综上所述，乳双歧杆菌Probio-M8可以与有害菌竞争性定植，减少有害菌含量，增加有益菌丰度，影响肺部菌群结构，从而改善肺功能，缓解哮喘症状。
4.乳双歧杆菌Probio-M8对哮喘患者代谢功能的影响
将血清和粪便样品进行前处理，通过LC-MS技术非靶向测定血清和粪便样品全谱，以确定不同治疗组间代谢差异物质。
与安慰剂组相比，乳双歧杆菌Probio-M8干预治疗后，哮喘患者代谢功能存在差异。在益生菌组，哮喘患者醛固酮合成和分泌代谢途径降低，说明乳双歧杆菌Probio-M8可能通过影响醛固酮代谢，参与哮喘气道重塑，减轻肺纤维化的发生，从而缓解哮喘症状，见图6。
经过人体试验表明，乳双歧杆菌Probio-M8对于哮喘症状有显著的缓解功效。
本领域技术人员在考虑说明书及实践这里公开的申请后，将容易想到本申请的其它实施方案。应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照本发明的实施例已经对本发明进行了描述，但本领域的普通技术人员应当理解可以在其形式上和细节上做出其他改变，而不偏离所附权力要求书所限定的本发明的精神和范围。
本申请提供的实施例之间的相似部分相互参见即可，以上提供的具体实施方式只是本申请总的构思下的几个示例，并不构成本申请保护范围的限定。对于本领域的技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下依据本申请方案所扩展出的任何其他实施方式都属于本申请的保护范围。

Claims (2)

1.一株用于缓解哮喘的乳双歧杆菌Probio-M8，其特征在于，其微生物保藏编号为CGMCC No.18610。
2.权利要求1所述的乳双歧杆菌Probio-M8在制备缓解哮喘产品中的应用。
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